DE60220524T2

DE60220524T2 - C-2'-methylierte paclitaxel-derivate zur verwendung als antitumorale mittel

Info

Publication number: DE60220524T2
Application number: DE60220524T
Authority: DE
Inventors: Ezio Bombardelli; Gabriele Fontana; Arturo Via Gobetti 101 BATTAGLIA; Samanta Cimitan
Original assignee: Indena SpA
Current assignee: Indena SpA
Priority date: 2001-08-07
Filing date: 2002-07-23
Publication date: 2008-02-07
Anticipated expiration: 2022-07-24
Also published as: HK1066483A1; EP1423108B1; DE60220524D1; NO20040535L; EP1423108A1; BR0211770A; CA2456523A1; ES2287310T3; HUP0401275A3; RU2287528C2; PL367868A1; PT1423108E; HUP0401275A2; RU2004103481A; IL160233A0; US20040242674A1; CN100370980C; DK1423108T3; KR20040030926A; WO2003013503A1

Description

C-2'-METHYLIERTE PACLITAXEL-DERIVATE ZUR VERWENDUNG ALS ANTITU-MORALE MITTEL
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Taxanderivate mit Antitumorwirksamkeit und Verfahren für die Herstellung davon.
Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung Verbindungen der Formel (I):
worin:
R Trifluormethyl, Phenyl, 2-Furyl, 2-Thienyl darstellt;
R¹ t-Butoxycarbonyl oder Benzoyl darstellt;
R₂ Hydroxy darstellt;
R₃ Wasserstoff darstellt oder zusammen mit R₂ den Rest eines cyclischen Carbonats der Formel:
bildet, mit der Maßgabe, dass wenn R₃ Wasserstoff darstellt, R von Phenyl verschieden ist.
Verbindungen der Formel (I) sind Derivate von Paclitaxel oder von Docetaxel, welche bekannte Arzneistoffe mit Antitumorwirksamkeit sind.
Verbindungen der Formel (I), worin R₃ Wasserstoff darstellt und R Phenyl darstellt, werden von Greene et al. in J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1995, Seiten 1811–1815, beschrieben. Paclitaxelderivate, die eine C-2'-methylierte (2R,3S)-Seitenkette tragen, werden von Kant et al. in Tetrahedron, Band 37, Nr. 36, Seiten 6495–6498, 1996, offenbart. Kant hat gezeigt, dass diese Strukturmodifizierung im Vergleich mit der Stammverbindung Paclitaxel bei bestimmten Tests (Inhibierung von Mikrotubulus-Depolymerisation) aufgrund besserer Bindungsaffinität an Mikrotubuli und bessere Cytotoxizität gegen KBVI eine wesentliche Reaktionserhöhung induziert. Zudem hatten einige von diesen Taxanen, die aus 14β-Hydroxybaccatin-1,14-carbonat synthetisiert wurden, verbesserte Löslichkeit in Wasser. Schließlich enthält eines von diesen Taxanen einen Trifluormethylsubstituenten an der C-3-Position, um die metabolischen Wege, die mit der Enzymklasse von Cytochrom P-450 verbunden sind, zu blockieren. Die verbesserten pharmakologischen Eigenschaften von diesen neuen Verbindungen können zu der Modifizierung des Wirkspektrums gegen verschiedene Krebstypen deutlich in Beziehung stehen.
Bevorzugte Verbindungen der Erfindung sind die Nachstehenden:
(2'R,3'R)-13-[N-Benzoyl-3-(2-furyl)-2-methyl-isoserinoyl]-baccatin III;
(2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-(2-furyl)-2-methyl-isoserinoyl]-baccatin III;
(2'R,3'S)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-phenyl-2-methyl-isoserinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat;
(2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-trifluormethyl-2-methyl-isoserinoyl]-14β-hydroxybaccatin III 1, 14-carbonat;
(2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-(2-furyl)-2-methyl-isoserinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat;
(2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-(2-thienyl)-2-methyl-isoserinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat.
Die Verbindungen der Formel (I) werden durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (II)
worin R₂ und R₃ wie vorstehend definiert sind und R₄ eine Schutzgruppe, vorzugsweise Triethylsilyl, darstellt, mit einer Verbindung der Formel (III)
worin R und R₁ wie vorstehend definiert sind, hergestellt.
Die Verbindung der Formel (III) kann aus den entsprechenden Alkylestern, insbesondere aus dem Methylester, bekannt aus Tetrahedron Asymm. 2001, 12, 1015–1027, und J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1995, 1811–1816, durch Hydrolyse in alkoholischen Lösungsmitteln hergestellt werden. Die erhaltene Säure kann, ohne isoliert zu werden, direkt mit dem Baccatin-III-Derivat der Formel (II), in Gegenwart eines geeigneten Kondensationsmittels, z. B. Di-2-pyridylthionocarbonat und Dimethylaminopyridin, in einem geeigneten Lösungsmittel kondensiert werden. Die Hydroxy-Schutzgruppe an der 7-Position wird entfernt, um die gewünschten Verbindungen der Formel (I) bereitzustellen.
Alternativ können die Verbindungen der Formel (II) mit Verbindungen der Formel (IV)
worin R wie vorstehend definiert ist, umgesetzt werden.
Die Verbindung der Formel (IV), worin R Phenyl darstellt, wird in J. Org. Chem. 1991, 56, 1681–1684; Tetrahedron, 1992, 48, 6585–7012, EP 400971 , US-Pat. Nr. 5 175 315 , beschrieben.
Die Verbindung der Formel (IV), worin R Trifluormethyl darstellt, kann gemäß dem nachstehenden Schema
hergestellt werden.
Die Verbindung der Formel (IV), worin R₁ 2-Furyl darstellt, kann, ausgehend von (3R,4R)-4-(Furan-2-yl)-3-hydroxy-3-methyl-azetidin-2-on, bekannt aus J. Org. Chem. 1999, 64, 4643, +4651, gemäß dem nachstehenden Schema:

i): TesCl/DMF/25°C; ii) Boc₂O/Et₃N/DMAP/0°C bis 25°C

Verbindungen der Formel (II) sind aus J. Med. Chem. 1997, 40, 267–278, bekannt.
Die Reaktion zwischen Verbindung (II) und Verbindung (IV) wird in aprotischen Lösungsmitteln unter Inertatmosphäre ausgeführt.
Typischerweise wird die Reaktion bei einer Temperatur von etwa –40°C–5°C in Gegenwart von Natriumhexamethyldisilazan ausgeführt. Die Hydroxyschutzgruppe an 7 wird dann zur Bereitstellung von Verbindungen (I) entfernt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben starke Antitumorwirksamkeit gegen Krebszellen der Brust, Lunge, des Eierstocks, Colon, der Prostata, Niere, Pankreas, sowie gegen Zellen, die gegen Antikrebsarzneistoffe, wie Adriamycin, Vinblastin und Platinumderivate, beständig sind, gezeigt.
Deshalb ist die Erfindung auf pharmazeutische Formulierungen gerichtet, die eine wirksame Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung zusammen mit pharmakologisch verträglichen Trägern und Exzipienten enthalten. Insbesondere können die Verbindungen in Form von Tablette, Pulver, Granulat, Kapsel, injizierbarer Lösung, Suppositorium, Emulsion, Dispersion und dergleichen formuliert werden. Für die intravenöse Verabreichung werden Gemische von Chremophor L und Ethanol, Polysorbat und Ethanol, oder Liposomenzubereitungen, hergestellt mit natürlichem oder synthetischem Phosphatidylcholin, oder Gemischen von natürlichen Phospholipiden, in Gegenwart von Cholesterin, vorzugsweise angewendet; für die orale Verabreichung werden vorzugsweise Weichgelatinekapseln hergestellt, wobei das Produkt in Polysorbaten, PEG oder Gemischen davon, gegebenenfalls in Gegenwart von Phospholipiden, solubilisiert wird. Verbindungen (I) können an Menschen mit Konzentrationen im Bereich von 50 bis 500 mg/m² verabreicht werden.
Die nachstehenden Beispiele erläutern die Erfindung genauer.
Die verwendeten Abkürzungen sind wie nachstehend:
TES = Triethylsilyl; DMF = Dimethylformamid; DMAP = (N,N-Dimethylamino)pyridin; NaHMDS = Natriumhexamethyldisilazid; LiHMDS = Lithiumhexamethyldisilazid; THF = Tetrahydrofuran; HMPA = Hexamethylphosphorsäuretriamid.
BEISPIEL 1
(4S,5R)-3-Benzoyl-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-(furan-2-yl)-5-methyl-oxazolidin-5-carbonsäuremethylester (0,128 g, 0,285 mMol) in Methanol wurde mit K₂CO₃ (2 Äquiv.) bei 25°C für 24 h in wasserfreiem Medium gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum aufkonzentriert, mit einer gesättigten NH₄Cl-Lösung verdünnt und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit 5%iger NaHSO₄ auf pH 4 angesäuert und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wurde getrocknet und das Lösungsmittel wurde verdampft. Der Rückstand (1 Äquiv.) wurde zu einer Toluollösung von 7-TES-Baccatin III (0,04 g, 0,057 mMol), in Gegenwart von Di-2-pyridylthionocarbonat (1 Äquiv.) und Dimethylaminopyridin (0,5 Äquiv.), bei 20°C unter Argonatmosphäre gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 80 Stunden unter Rühren auf 60°C erhitzt. Nach Zugabe von Essigsäureethylester wurde das Reaktionsgemisch mit Salzlösung extrahiert. Die organische Phase wurde mit Salzlösung gewaschen, dann getrocknet und eingedampft. Chromatographie (SiO₂, Essigsäureethylester/n-Hexan, 1:1) lieferte (2'R,3'R)-13-[N-Benzoyl-N,O-(2,4-dimethoxybenzyliden)-3-(2-furanyl)-2-methylisoserinoyl]-7-TES-baccatin III (0,023 g, 2,28 mMol, 40%). Die Verbindung hat die nachstehenden Eigenschaften:
¹H NMR(CDCl₃): δ = 0,61 (m, 6H, 3 CH₂), 0,95 (t, 9H, 3 Me), 1,22 (s, 3H, Me), 1,27 (s, 3H, Me), 1,68 (s, 3H, Me), 1,89 (m, 1H von C₆-H), 2,10–2,25 (m, 2H von C₁₄-H), 2,21 (s, 3H, Me), 2,24 (s, 3H, Me), 2,33 (s, 3H, Me), 2,50 (m, 1 H von C₆-H), 2,65 (s, 3H, Me, OAc von C-4), 3,90–4,0 (m, 8H, 6 H von 2 Me, 1H von C₃-H und 1H von OH), 4,12 (d, 1H, von C₂₀-H, J = 8,0 Hz), 4,32 (d, 1H, C₂₀-H), 4,58 (m, 1H von C₇-H, J₁ = 5,8 Hz, J₂ = 10,2 Hz), 4,95 (dd, 1H von C₅-H, J₁ = 1,5 Hz, J₂ = 9,6 Hz), 5,55 (b, 1H von C₃'-H), 5,70 (d, 1H von C₂-H, J = 5,7 Hz), 6,30–6,40 (m, 2H), 6,40–6,50 (m, 3H), 6,54 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,20–7,40 (m, 5H, arom.), 7,40–7,50 (m, 3H, arom.), 7,54–7,60 (m, 1H, arom.), 8,04–8,07 (m, 2H, arom.)
Diese Verbindung (0,023 g, 2,28 mMol) wurde in CH₂Cl₂ (3,0 ml) gelöst und mit einer Lösung (100 μl) von Acetylchlorid in Methanol (70 μl von Acylchlorid in 10 ml MeOH) bei 25°C gelöst. Nach 7 h wurde das Reaktionsgemisch mit H₂O extrahiert. Das organische Lösungsmittel wurde getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde chromatographiert (SiO₂, n-Hexan (Essigsäureethylester, 1:1), um 0,019 g (0,022 mMol, 98%) (2'R,3'R)-3'-Dephenyl-3'-(2-furyl)-2'-methyl-paclitaxel bereitzustellen.
Die Verbindung hatte die nachstehenden Eigenschaften:
¹H NMR(CDCl₃): δ = 1,13 (s, 3H, Me), 1,23 (s, 3H, Me), 1,55 (s, 3H, Me), 1,70 (s, 3H, Me), 1,81 (s, 3H, Me), 1,89 (m, 1H, H-6ß), 2,07 (m, 1H von C₁₄-H), 2,24 (s, 3H, Me), 2,40 (m, 1H von C₁₄-H), 2,49 (d, 1H, OH von C₇-H), 2,55 (m, 1 H von C₆-H), 2,65 (s, 3H, Me), 3,75 (s, 1H, OH), 3,82 (d, 1H von C₃-H, J = 7,2 Hz), 4,21 (d, 1H von C₂₀-H J = 8,4 Hz), 4,31 (d, 1H von C₂₀-H), 4,40 (m, 1H von C₇-H), 4,95 (dd, 1H von C₅-H, J₁ = 1,5 Hz, J₂ = 9,6 Hz), 5,66 (d, 1H von C₂-H), 5,79 (d, 1 H von C₃'-H, J = 9,5 Hz), 6,26 (s, 1H von C₁₀-H), 6,30 (m, 1H von C₁₃-H), 6,41 (m, 2H, 2-Furyl), 7,12 (d, 1H, NH), 7,33 (m, 2H, arom.), 7,44 (m, 1H, 2-Furyl), 7,46 (m, 1H, arom.), 7,52 (m, 2H, arom.), 7,60 (m, 1H, arom.), 7,67 (m, 2H, arom.), 8,19 (m, 2H, arom.).
BEISPIEL 2
Das Kuppeln von (4S,5R)-N-Boc-N,O-(2,4-dimethoxybenzyliden)-3-phenyl-2-methylisoserinmethylester (J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1995, 1811–1816) (0,154 g, 0,336 mMol) mit 7-TES-Bacca tin III 1,14-Carbonat¹ (0,05 g, 0,067 mMol) gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren lieferte 0,021 g (0,023 mMol, 34%) (2'R,3'S)-13-(N-Boc-2-methyl-3-phenylisoserinoyl)-14β-hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat.
Die Verbindung hatte die nachstehenden Eigenschaften:
¹H NMR(CDCl₃): δ = 1,28 (s, 9H, 3 Me von t-Boc), 1,30 (s, 3H, Me von C-15), 1,38 (s, 3H, Me von C-15), 1,41 (s, 3 H, Me von C₂'), 1,73 (s, 3H, Me von C-8), 1,84 (s, 3H, Me von C-12), 1,92 (m, 1H von C₆-H), 2,26 (s, 3H, Me, OAc von C-10), 2,36 (b, 1H, OH), 2,56 (m, 1H von C₆-H), 2,69 (s, 3H, Me, OAc von C-4), 3,52–3,55 (b, 1H, OH), 3,73 (d, 1H von C₃-H, J = 7,3 Hz), 4,25 (d, 1H von C₂₀-H, J = 8,5 Hz), 4,31 (d, 1H von C₂₀-H), 4,38 (m, 1H von C₇-H), 4,85 (d, 1H von C₁₄-H, J = 7,1 Hz), 4,95 (dd, 1H von C₅-H, J₁ = 2,4 Hz, J₂ = 9,6 Hz), 5,09 (d, 1H von C₃'-H), 5,57 (d, 1H, NH, J = 10,0 Hz), 6,13 (d, 1H von C₂-H), 6,27 (s, 1H von C₁₀-H), 6,36 (m, 1H von C₁₃-H), 7,30–7,40 (m, 5H, arom.), 7,48 (m, 2H, arom.), 7,59 (m, 1H, arom.), 8,04 (m, 2H, arom.).
BEISPIEL 3
a) (3R,4S)-3-Triethylsilyloxy-4-(furan-2-yl)-3-methyl-azetidinon
Triethylsilylchlorid (0,316 g, 2,1 mMol) und Imidazol (0,100 g, 1,5 mMol) wurden zu einer gerührten Lösung von (3R,4R)-4-(Furan-2-yl)-3-hydroxy-3-methyl-azetidin-2-on (0,167 g, 1,0 mMol) in DMF (6,0 ml) bei 25°C unter Argonatmosphäre gegeben. Die Reaktionslösung wurde nach 4 h mit einer wässrigen, gesättigten NH₄Cl-Lösung gestoppt und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wurde getrocknet und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Chromatographie des Rückstands (SiO₂, Essigsäureethylester/n-Pentan, 1:2) lieferte 0,190 g (0,67 mMol, 67%) (3R,4S)-4-(Furan-2-yl)-3-triethylsilyloxy-3-methyl-azetidin-2-on: [α]D²⁰ = +42,8 (c 1,04, CHCl₃); IR (CDCl₃, cm^–1): 3600–3000, 3413, 2957, 1768, 1458, 1377, 1012; ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,65 (m, 6H, 3 CH₂), 0,95 (t, 9H, 3 Me), 1,19 (s, 3H, Me), 4,54 (s, 1H), 6,27 (d, 1H, 2-Furyl), 6,28 (m, 1H, 2-Furyl), 6,72 (b, 1H, NH), 7,40 (m, 1H, 2-Furyl); 13C NMR(CDCl₃): δ = 5,71 (CH₂), 6,73 (Me), 19,3 (Me), 61,0 (CH), 89,1 (C), 108,1 (CH), 110,5 (CH), 142,7 (CH), 150,9 (C), 171,5 (C).
b) (3R,4S)-1-tert-Butoxycarbonyl-3-triethylsilyloxy-4-(furan-2-yl)-3-methyl-azetidinon
Eine Lösung des Derivats aus dem vorangehenden Schritt (0,060 g, 0,21 mMol), DMAP (0,010 g) und Triethylamin (88 μl, 0,63 mMol) in CH₂Cl₂ (3,0 ml) bei 0°C wurde mit einer Lösung von Di-tert-butyl-dicarbonat (121 ml, 0,52 mMol) in CH₂Cl₂ (1,0 ml) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h bei 25°C gerührt, dann mit gesättigter NH₄Cl gestoppt. Das Gemisch wurde mit Essigsäureethylester extrahiert und die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Chromatographie (SiO₂, n-Pentan/Essigsäureethylester, 8:2) lieferte 0,077 g (0,020 mMol, 97 %) (3R,4S)-1-tert-Butoxycarbonyl-3-triethylsilyloxy-4-(furan-2-yl)-3-methyl-azetidinon:
[α]D²⁰ = +26,6 (c 0,98, CHCl₃); IR (CDCl₃, cm^–1): 2958, 1813, 1726, 1327, 1152; ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,54 (m, 6H, 3 CH₂), 0,80 (t, 9H, 3 Me), 1,41 (s, 9H, 3 Me), 1,61 (s, 3H, Me), 4,73 (s, 1H), 6,27 (d, 1H, 2-Furyl), 6,34 (m, 1H, 2-Furyl), 7,37 (m, 1H, 2-Furyl); ¹³C NMR (CDCl₃): δ = 5,6 (CH₂), 6,5 (Me), 23,0 (Me), 27,8 (3 Me), 62,7 (CH), 83,3 (C), 85,4 (C), 108,9 (CH), 110,3 (CH), 142,4 (CH), 147,9 (C), 148,7 (C), 167,7 (C).
c) (2'R,3'R)-13-[N-Boc-2-methyl-3-(2-furanyl)-isoserinoyl]-baccatin III
Das β-Lactam von Schritt b) (0,082 g, 0,214 mMol) und 7-TES-Baccatin III (0,060 g, 0,086 mMol) wurden in THF unter Argonatmosphäre gelöst. Die Lösung wurde auf –45°C gekühlt. NaHMDS (Lösung 1,0 M in n-Hexan, 2,5 Äquiv.) wurde Tropfen für Tropfen unter Rühren zugegeben. Die Temperatur wurde innerhalb vier Stunden auf –20°C erhöht. Die Reaktion wurde mit gesättigter NH₄Cl gestoppt; das Gemisch wurde mit Essigsäureethylester extrahiert und getrocknet. Nach Verdampfung des Lösungsmittels wurde der Rohstoff durch Chromatographie gereinigt. Das Reaktionsprodukt wurde bei 0°C in 1:1 MeCN/Pyridin-Lösungsmittel gelöst. Eine Lösung von HF/Pyridin (70:30) wurde Tropfen für Tropfen (0,1 ml/10 mg Reagenz) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h bei 0°C, dann 6 Stunden bei 25°C gerührt, dann mit Essigsäureethylester extrahiert. Die Extrakte wurden dreimal mit gesättigter CuSO₄ und Wasser gewaschen und über wasserfreiem MgSO₄ getrocknet, um 0,035 g (0,041 mMol, 48 %) des Titelprodukts zu ergeben:
¹H MNR(CDCl₃): δ = 1,15 (s, 3H, Me von C-₁₅), 1,23 (s, 9H, 3 Me von t-Boc), 1,30 (s, 3H, Me von C-₁₅), 1,42 (s, 3H, Me von C₂'), 1,69 (s, 3H, Me von C-₈), 1,84 (s, 3H, Me von C-₁₂), 1,89 (m, 1H, H-6β), 2,15 (m, 1H, H-₁₄), 2,25 (s, 3H, Me, OAc von C-₁₀), 2,37 (m, 1H, H-₁₄), 2,55 (m, 1H von C₆-H), 2,61 (s, 3H, Me, OAc von C-₄), 3,58–3,65 (b, 1H, OH), 3,82 (d, 1H von C₃-H, J = 7,0 Hz), 4,18 (d, 1H von C₂₀-H J = 8,4 Hz), 4,31 (d, 1H von C₂₀-H), 4,42 (dd, 1H von C₇-H, J₁ = 6,4 Hz, J₂ = 10,8 Hz), 4,95 (dd, 1H von C₅-H, J₁ = 2,4 Hz, J₂ = 9,6 Hz), 5,23 (d, 1H, J = 9,6 Hz, NH), 5,39 (d, 1H von C₃'-H), 5,66 (d, 1H von C₂-H), 6,28 (s, 1H von C₁₀-H), 6,34 (m, 1H, 2-Furyl), 6,36 (m, 1H, H-13), 6,38 (m, 1H, 2-Furyl), 7,42 (m, 1 H, 2-Furyl), 7,49 (m, 2H, arom.), 7,59 (m, 1H, arom.), 8,14 (m, 2H, arom.).
BEISPIEL 4
(2'R,3'R)-13-[N-Boc-2-methyl-3-(2-furanyl)isoserinoyl]-14β-hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat
7-TES-14β-Hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat (0,080 g, 0,125 mMol) wurde mit (3R,4S)-1-tert-Butoxycarbonyl-3-triethylsilyloxy-4-(furan-2-yl)-3-methyl-azetidinon (0,12 g, 0,312 mMol) unter den in Beispiel 3c beschriebenen Bedingungen gekuppelt, unter Bereitstellung von (2'R,3'S)-13-[N-Boc-2-methyl-3-(2-furanyl)isoserinoyl]-3',7-diTES-14β-hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat (0,087 g, 0,0775 mMol, 62%) wurde erhalten: ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,5–0,6 (m, 12H, 6 CH₂), 0,85–0,95 (m, 18H, 6 Me), 1,25 (s, 3H, Me), 1,29 (s, 9H, 3 Me), 1,31 (s, 3H, Me), 1,56 (s, 3 H, Me), 1,75 (s, 3H, Me), 1,92 (m, 1H von C₆-H, J_6-6' = 14,3 Hz), 2,02 (s, 3H, Me), 2,20 (s, 3H, Me), 2,51 (m, 1H von C₆-H), 2,71 (s, 3H, Me), 3,76 (d, 1H von C₃-H, J = 8,1 Hz), 4,26 (q, 2H von C₂₀, J = 8,5 Hz), 4,44 (m, 1H von C₇-H, J₁ = 10,8 Hz, J₂ = 7,0 Hz), 4,85 (d, 1H von C₁₄-H, J = 7,0 Hz), 4,89 (m, 1H von C₅-H, J₁ = 1,8 Hz, J₂ = 9,8 Hz), 5,24 (d, 1H, 1H von C₃'-H, J = 10,0 Hz), 5,28 (d, 1H von NH), 6,10 (d, 1H von C₂-H), 6,26 (d, 1H von 2-Furyl), 6,38 (m, 1H von 2-Furyl), 6,42 (s, 1H von C₁₀-H), 6,47 (d, 1H von C₁₃-H), 7,38 (m, 1H von 2-Furyl), 7,42–7,50 (m, 2H, arom.), 7,54–7,60 (m, 1H, arom.), 8,02–8,08 (m, 2H, arom.).
Ein solches Derivat wurde mit der HF/Pyridinlösung behandelt, um die Titelverbindung (0,063 g, 0,70 mMol, 91%) bereitzustellen: ¹H NMR (CDCl₂): δ 1,25 (s, 9H, 3 Me), 1,28 (s, 3H, Me), 1,43 (s, 3H, Me), 1,75 (s, 3H, Me), 1,86 (s, 3 H, Me), 1,92 (m, 1H von C₆'-H, J_6-6' = 14,3 Hz), 2,24 (s, 3H, Me), 2,55 (m, 1H von C₆-H), 2,63 (s, 3H, Me), 3,73 (d, 1H von C₃-H, J = 8,0 Hz), 4,26 (q, 2H von C₂₀, J = 8,5 Hz), 4,38 (m, 1H von C₇-H, J₁ = 10,8 Hz, J₂ = 7,0 Hz), 4,86 (d, 1H von C₁₄-H, J = 7,0 Hz), 4,93 (m, 1H von C₅-H, J₁ = 1,8 Hz, J₂ = 9,8 Hz), 5,26 (d, 1H, 1H von C₃'-H, J = 9,5 Hz), 5,44 (d, 1H von NH), 6,12 (d, 1H von C₂-H), 6,28 (s, 1H von C₁₀-H), 6,36 (d, 1 H von 2-Furyl), 6,40 (m, 1H von 2-Furyl), 6,47 (d, 1H von C₁₃-H), 7,42 (m, 1H von 2-Furyl), 7,44–7,50 (m, 2H, arom.), 7,58-7,62 (m, 1H, arom.) 8,02–8,08 (m, 2H, arom.).
BEISPIEL 5
a) (3R,4R)-3-Hydroxy-1-(4-methoxyphenyl)-3-methyl-4-trifluormethylazetidin-2-on
Eine Lösung von (2S,5S)-2-tert-Butyl-2,5-dimethyl-[1,3]-dioxolan-4-on (beschrieben in J. Org. Chem., 1999, 64, 4643-4651) (0,344 g, 2,03 mMol) in THF wurde mit einer 1 M-Lösung von LiHMDS (2,4 ml, 2,4 mMol) in THF bei –78°C versetzt. Nach 30 min wurden die Lösungen von HMPA und N-(4-Methoxyphenyl)-trifluoracetaldimin (0,81 g, 4,00 mMol) nacheinander (THF : HMPA = 85:15) zugegeben. Nach 4 h wurde das Reaktionsgemisch mit 5 ml einer 1 M wässrigen Lösung von CH₃CO₂H bei –78°C behandelt, mit 1 N HCl, dann mit NH₄Cl, schließlich mit Salzlösung extrahiert. Die organische Phase wurde getrocknet (Na₂SO₄) und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck abgedampft. Chromatographie des Rückstands (SiO₂, EtOAc/n-Pentan, 1:2) lieferte 0,25 g (0,91 mMol, 45%) des Titel-β-Lactams (3R,4R): [α]D²⁰ = +28,4 (c 1,01, CHCl₃); ¹H NMR (CDCl₃): δ = 1,70 (d, 3H, Me, J = 1,2 Hz), 3,02–3,10 (b, 1H, OH), 3,78 (s, 3H, OMe), 4,33 (q, 1H, J_H-F = 5,7 Hz), 6,85–7,40 (m, 4H, arom.); ¹³C NMR (CDCl₃): δ = 22,2 (Me), 55,5 (OMe), 63,9 (q, CH, J = 31 Hz), 82,8 (C), 114,4 (2 CH), 119,7 (2 CH), 123,7 (CF₃, J = 279 Hz), 129,3 (C), 157,3 (C), 167,9 (C).
b) (3R,4R)-3-Triethylsilyloxy-1-(4-methoxy-phenyl)-3-methyl-4-trifluormethyl-azetidin-2-on
Eine Lösung der Verbindung von a) (0,25 g, 0,91 mMol) in DMF (3,0 ml) wurde mit Et₃SiCl (0,31 g, 2,0 mMol) und N-Methylimidazol (0,28 g, 4 mMol) bei 25°C versetzt. Nach 2 h Rühren wurde das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen, mit Essigsäureethylester extrahiert und getrocknet. Das Lösungs mittel wurde abgedampft und der Rückstand wurde chromatographiert unter Bereitstellung von 0,32 g (0,82 mMol, 90%) des Titelprodukts: IR (CDCl₃, cm^–1): 2957, 2878, 1778, 1514, 1298, 1251; ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,75 (m, 6H, 3 CH₂), 0,98 (t, 9H, 3 Me), 1,65 (s, 3H, Me), 3,79 (s, 3H, OMe), 4,22 (q, 1H, J_H-F = 5,9 Hz), 6,85–7,40 (m, 4H, arom.); ¹³C NMR (CDCl₃): δ = 5,7 (CH₂), 6,6 (Me), 23,4 (Me), 55,5 (OMe), 64,3 (q, CH, J = 32 Hz), 84,0 (C), 114,4 (2 CH), 119,5 (2 CH), 123,6 (CF₃, J = 283 Hz), 129,8 (C), 157,1 (C), 167,1 (C).
c) (3R,4R)-3-Triethylsilyloxy-3-methyl-4-trifluormethylazetidin-2-on
Eine Lösung der Verbindung von b) (0,30 g, 0,77 mMol) in Acetonitril (13,0 ml) wurde Tropfen für Tropfen mit Ammonium- und Cer(IV)nitrat (1,5 g, 2,74 mMol) in Wasser (20,0 ml) und weiterem Wasser (30 ml) in 2 Stunden bei –50°C versetzt. Das Gemisch wurde mit Wasser (30 ml) verdünnt und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wurde mit gesättigter NaHCO₃, gesättigter NaHSO₃ und erneut mit gesättigter NaHCO₃ gewaschen. Die organische Schicht wurde getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert. Der Rückstand wurde Säulenchromatographie (SiO₂, CH₂Cl₂/Essigsäureethylester, 3:1) unterzogen, um das Titelprodukt (0,168 g, 0,59 mMol, 77%) bereitzustellen: ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,69 (m, 6H, 3 CH₂), 0,94 (t, 9H, 3 Me), 1,60 (s, 3H, Me), 3,77 (q, 1H, J_H-F = 6,2 Hz), 6,20-6,45 (b, 1H, NH); ¹³C NMR (CDCl₃): δ= 5,8 (CH₂), 6,8 (Me), 23,7 (Me), 61,0 (q, CH, J = 32 Hz), 86,3 (C), 123,8 (CF₃, J = 280 Hz), 170,8 (C).
d) (3R,4R)-1-(tert-Butoxycarbonyl)-3-triethylsilyloxy-3-methyl-4-trifluormethyl-azetidin-2-on
Eine Lösung der Verbindung von c) (0,168 g, 0,59 mMol), DMAP (10 mg) und Triethylamin (0,25 ml, 1,77 mMol) in Dichlormethan (2,0 ml) wurde bei 0°C mit einer Lösung von Di-tert- butyldicarbonat (0,32 g, 1,47 mMol) in Dichlormethan (1,0 ml) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h bei 25°C gerührt, dann mit gesättigter NH₄Cl gestoppt. Das Gemisch wurde mit Essigsäureethylester extrahiert und die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Chromatographie (SiO₂, n-Pentan/Essigsäureethylester, 4:1) lieferte 0,210 g (0,56 mMol, 95%) des Titelprodukts: ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,69 (m, 6H, 3 CH₂), 0,95 (t, 9H, 3 Me), 1,52 (s, 9H, 3 Me), 1,63 (s, 3H, Me), 4,10 (q, 1H, J_H-F = 6,2 Hz); ¹³C NMR (CDCl₃): δ = 5,6 (CH₂), 6,5 (Me), 23,5 (Me), 27,8 (3 Me), 63,2 (q, CH, J = 32 Hz), 84,7 (C), 122,8 (CF₃, J = 281 Hz), 147,2 (C), 167,4 (C).
e) (2'R,3'R)-13-[N-Boc-2-methyl-3-trifluormethylisoserinoyl]-14β-hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat
Die Reaktion von 7-TES-14β-Hydroxybaccatin III (0,080 g, 0,11 mMol) mit der Verbindung von d) (0,103 g, 0,27 mMol) gemäß dem Verfahren von Beispiel 4 lieferte das 7,3'-Di-TES-Derivat der Titelverbindung (0,071 g, 0,063 mMol, 57%): ¹H NMR (CDCl₃): δ = 0,62–0,72 (m, 12H, 6 CH₂), 0,88–0,95 (m, 18H, 6 Me), 1,25 (s, 9H, 3 Me), 1,31 (s, 3H, Me), 1,52 (s, 6H, 2 Me), 1,63 (s, 3H, Me), 1,90 (m, 1H von C₆'-H), 2,00 (s, 3H, Me), 2,19 (s, 3H, Me), 2,48 (m, 1H von C₆-H), 2,58 (s, 3H, Me), 3,74 (d, 1H von C₃-H, J = 7,5 Hz), 4,24 (q, 2H von C₂₀, J = 8,8 Hz), 4,41 (m, 1H von C₇-H, J₁ = 10,6 Hz, J₂ = 6,4 Hz), 4,74 (m, 1H, C₃'-H), 4,83 (d, 1H von C₁₄-H, J = 6,9 Hz), 4,86 (m, 1H von C₅-H, J₁ = 1,90 Hz, J₂ = 9,8 Hz), 5,10 (d, 1H von NH), 6,10 (d, 1H von C₂-H), 6,40 (s, 1H von C₁₀-H), 6,42 (m, 1 H von C₁₃-H), 7,44–7,50 (m, 2H, arom.), 7,58–7,60 (m, 1H, arom.), 8,06–8,10 (m, 2H, arom.). Dieses Derivat wurde mit HF/Pyridinlösung behandelt, um die Titelverbindung (0,048 g, 0,54 mMol, 85%) bereitzustellen: ¹H NMR (CDCl₃): δ 1,28 (s, 9 H, 3 Me), 1,31 (s, 3H, Me), 1,33 (s, 3H, Me), 1,73 (s, 3H, Me), 1,90 (s, 3H, Me), 1,90 (m, 1H von C₆'-H), 2,25 (s, 3H, Me), 2, 55 (m, 1H von C₆-H), 2,57 (s, 3H, Me), 3,736 (d, 1H von C₃-H, J = 7,6 Hz), 4,26 (q, 2H von C₂₀, J = 8,8 Hz), 4,38 (m, 1H von C₇-H, J₁ = 10,8 Hz, J₂ = 6,4 Hz), 4,82 (m, 1H, C₃'-H), 4,86 (d, 1H von C₁₄-H, J = 6,8 Hz), 4,90 (m, 1H von C₅-H, J₁ = 2,3 Hz, J₂ = 9,9 Hz), 5,24 (d, 1H von NH), 6,10 (d, 1H von C₂-H), 6,26 (s, 1H von C₁₀-H), 6,47 (d, 1H von C₁₃-H), 7,48–7,54 (m, 2H, arom.), 7,58–7,64 (m, 1H, arom.), 8,08–8,12 (m, 2H, arom.).
BEISPIEL 6
(2'R,3'R)-13-[N-Boc-2-methyl-3-(2-thienyl)isoserinoyl]-14β-hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat
7-TES-14β-Hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat (0,24 g, 0,375 mMol) wurde mit (3R,4S)-1-tert-Butoxycarbonyl-3-triethylsilyloxy-4-(thien-2-yl)-3-methyl-azetidinon (0,36 g, 0,936 mMol) unter den in Beispiel 3c beschriebenen Bedingungen gekuppelt.
Nach dem Schutz mit HF/Pyridinlösung wurde die Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,189 g, 2,1 mMol, 55%) erhalten: ¹H NMR (CDCl₂): δ 1,25 (s, 9H, 3 Me), 1,28 (s, 3H, Me), 1,43 (s, 3H, Me), 1,75 (s, 3H, Me), 1,86 (s, 3H, Me), 1,92 (m, 1H von C₆'-H, J_6-6' = 14,3 Hz)_' 2,24 (s, 3H, Me), 2,55 (m, 1H von C₆-H), 2,63 (s, 3H, Me), 3,73 (d, 1H von C₃-H, J = 8,0 Hz), 4,26 (q, 2H von C₂₀, J = 8,5 Hz), 4,38 (m, 1H von C₇-H, J₁ = 10,8 Hz, J₂ = 7,0 Hz), 4,86 (d, 1H von C₁₄-H, J = 7,0 Hz), 4,93 (m, 1H von C₅-H, J₁ = 1,8 Hz, J₂ = 9,8 Hz), 5,26 (d, 1H, 1H von C₃'-H, J = 9,5 Hz), 5,44 (d, 1H von NH), 6,12 (d, 1H von C₂-H), 6,28 (s, 1H von C₁₀-H), 7,07 (dd, 5, 0, 3,6 Hz, H-3 Thienyl), 7,16 (dd, 3,6, 1,0, H-4 Thienyl), 6,47 (d, 1 H von C₁₃-H), 7,35 (dd, 5,0, 1,0, H-5 Thienyl), 7,44–7,50 (m, 2 H, arom.), 7,58–7,62 (m, 1H, arom.), 8,02–8,08 (m, 2H, arom.).
Pharmakologische Versuche

Pharmakologische Versuche wurden an den Verbindungen der Erfindung bei einer Konzentration von 0,1% in Dimethylsulfoxid ausgeführt. A2780wt-, A2780cis-, A2780adr- und A2780tax-Zelllinien wurden verwendet. Die Zellen wurden auf 96-Vertiefungs-Flachbodenplatten (Viewplates, Packard) plattiert. Nach 24 Stunden wurde das Kulturmedium ersetzt und nach Waschen wurden die die getesteten Verbindungen enthaltenden Medien zugegeben. Das Erstellen einer logarithmischen Dosisreaktionskurve erfolgte für jede Platte in vierfacher Ausführung, beginnend bei 0,01 bis 100 000 000 nM. Jedes Assay wurde dreimal als Duplikat ausgeführt. Nach 72 Stunden Züchtung in Gegenwart der getesteten Verbindungen wurden die Zellen gesammelt und die Anzahl an sichtbaren Zellen wurde durch ATP-Dosierung unter Verwendung des ATPlite Kits (Packard, Meridien, Mo., USA) und des automatisierten Luminometers Topcount (Packard) bewertet. Die Dosisreaktionskurve wurde für jede Arzneistoff/Zelllinie aufgetragen und die IC₅₀-Werte wurden aus der Konzentrationswirkungskurve berechnet, die in drei Tests mit dem sigmoiden E_max-Modell unter Verwendung von nichtlinearer Regression, gewichtet durch das Reziproke des Quadrats der vorhergesagten Wirkung, erhalten wurde. Die erhaltenen IC₅₀-Werte nach kontinuierlicher Exposition der getesteten Verbindungen für 72 Stunden werden in der nachstehenden Tabelle angeführt: TABELLE

Verbindung	A2780wt	A2780cis	A2780tax	A2780adr
Paclitaxel	5,3 ± 1,3	4,6 ± 0,7	4498 ± 123	2688 ± 454
Bsp. 1	3,1 ± 0,2	2,9 ± 0,1	420 ± 93	61,4 ± 3,9
Bsp. 3	2,9 ± 0,1	3,3 ± 0,2	312 ± 61	41,3 ± 7,4
Bsp. 2	2,53 ± 1,47	1,7 ± 0,4	299 ± 77	52,9 ± 16,2
Bsp. 5	4,64 ± 2,58	2,8 ± 0,6	285 ± 60	79,3 ± 19,9
Bsp. 4	5,9 ± 0,7	2,5 ± 0,3	30,9 ± 3,7	27,1 ± 10,1
Bsp. 6	3,7 ± 0,4	2,9 ± 0,2	160,4 ± 32	93,2 ± 20,4

Claims

Verbindungen der Formel (I):
worin: R Trifluormethyl, Phenyl, 2–Furyl, 2–Thienyl darstellt; R¹ t–Butoxycarbonyl oder Benzoyl darstellt; R₂ Hydroxy darstellt; R₃ Wasserstoff darstellt oder zusammen mit R₂ den Rest eines cyclischen Carbonats der Formel:
bildet, mit der Maßgabe, dass wenn R₃ Wasserstoff darstellt, R von Phenyl verschieden ist.
Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1: (2'R,3'R)-13-[N–Benzoyl-3-(2–furyl)-2–methyl-isoserinoyl]-baccatin III; (2'R,3'R)-13-[N-t–Butoxycarbonyl-3-(2–furyl)-2-methyl-isoserinoyl]-baccatin III; (2'R,3'S)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3–phenyl-2–methyl-isoserinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat; (2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-trifluormethyl-2-methyl-isoserinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat; (2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-(2-furyl)-2-methyl-iso-serinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat; (2'R,3'R)-13-[N-t-Butoxycarbonyl-3-(2-thienyl)-2-methylisoserinoyl]-14-hydroxybaccatin III 1,14-carbonat.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, enthaltend eine der Verbindungen nach Anspruch 1, zusammen mit pharmazeutisch verträglichen Trägern und Exzipienten.
Verwendung der Verbindungen nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments mit Antitumorwirkung.