DD296082A5 - Verfahren zur herstellung von zwischenprodukten fuer epipodophyllotoxinglucosid-4'-acylderivate - Google Patents

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Zwischenprodukten fuer 4-Ester, 4-Carbonate und 4-Carbamate von 4-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden. Diese Verbindungen besitzen eine Antitumorwirkung in Saeugetieren.{Verfahren; Herstellung; Zwischenprodukte; Epipodophyllotoxinglucosid-4-acylderivate; Antitumormittel; therapeutische Verwendung; Chlorformiat-Zwischenstufe}

Description

»1

(XIV)

mit Phosgen oderTrichlormethylchlorformiat umsetzt.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der Formel (XIII) erhalt, worin R¹ fur ein Wasserstoffatom und R² fur eine Methylgruppe steht.

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Zwischenprodukten fur 4'-Acyldenvate von ^-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden, welche als Antitumormittel verwendet werden Insbesondere betrifft die Erfindung Verfahren zur Herstellung der Zwischenprodukte fur 4'-Ester, 4'-Carbonate und 4'-Carbamate von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden

Charakteristik des bekannten Standes der Technik

Etoposid (I a) und Teniposid (I b) sind klinisch anwendbare Antitumormittel, welche von natürlich vorkommendem Lignan, Podophyllotoxin, abgeleitet sind. Die allgemeine Verbindungsklasse, zu der Etoposid und Teniposid gehören, wird auch als 4'-Demethylepipodyphyllotoxinglucoside bezeichnet, die 4'-Position ist in folgender Formel (I) angegeben

(I)

OCH₁

Ib R = 2-Thienyl

4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosid-Denvate und Verfahren zu deren Herstellung sind im US-Patent 3408441 sowie im US-Patent 3524844 beschrieben Diese Verbindungen, insbesondere Etoposid und Teniposid, dienen als Ausgangsmaterial zur Herstellung der 4'-Acyldenvate von Epipodophyllotoxinglucosiden der vorliegenden Erfindung Einige 4'-Ester und 4'-Benzylcarbonate von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden werden in der Literatur als Zwischenprodukte zur Herstellung der entsprechenden 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucoside beschrieben Hierbei sind jedoch die Hydroxylgruppen des Zuckerrestes dieser Verbindungen ebenso geschützt und außerdem sind keine biologischen Aktivitäten angegeben Es ist lediglich ein 4'-Acyldenvat mit freien Zuckerhydroxylgruppen beschrieben Das kanadische Patent 956939 beschreibt Verbindungen der Formel (II)

(N)

O-C-OCH₈-R³

IS

R¹ fur Ci-s-Alkyl steht,

R² fur Acetyl oder Formyl steht, und

R³ fur Phenyl oder substituiertes Phenyl steht

Als mögliche substituierte Phenyle werden p-Nitrophenyl und p-Methoxyphenyl erwähnt, sind aber nicht durch Beispiele belegt Weiterhin wird ein Verfahren zur selektiven Entfernung der R²-Qruppen aus Verbindungen der Formel (III) beschrieben, worin R¹ und R² der oben gegebenen Definition entsprechen, und die entsprechenden 4'-Benzyloxycarbonyl-4'-demethylepipodophyllotoxinglucoside (IV) gebildet werden Insbesondere durch Beispiele ist die Herstellung von 4'-Benzyloxycarbonyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-ethylidenglucosid (IV, R¹ = CH₃) belegt

Das US-Patent 4564675 beschreibt Verbindungen der allgemeinen Formel (V)

OCH₃

0—

R fur-C(O)CH₂X und X fur ein Halogenatom steht Die europaische Patentanmeldung 162701 beschreibt Verbindungen der allgemeinen Formel (Vl)

CCW

R¹ und R² gleich oder verschieden sind und jeweils-C(O)CHXj oder-C(O)CX3 bedeuten, worin X fur ein Halogenatom steht Die japanischen Offenlegungsschriften 58/225096 und 58/219196 beschreiben Verbindungen der allgemeinen Formel (VII) und (VIII)

(VII)

(VIII)

A fur-COr-CHr-CMmlXln steht, m fur O bis 2 steht, η fur 1 bis 3 steht, m + n =3 ist und Ac fur Acetyl steht.

Die europaische Patentanmeldung 226202 beschreibt ein Zwischenprodukt fur die Etoposidsynthese mit der allgemeinen Formel (IX)

H,CC

(IX)

A eine Acetylgruppe bedeutet

Ester von Podophyllotoxin an der C-4-Position (X) wurden hergestellt und bei P388-Leukamie verwendet Obwohl einige Ester antileukamische Aktivität zeigen, sind sie trotz allem weniger aktiv als die Podophyllotoxin-Stammverbindung (J Pharm Sei, 1983,72 1158-1161)

(X)

H₃C

OCH₃

R steht ζ B fur eine Methyl-, Ethylen-, Phenyl-, Phenethyl-, Phenoxy- und Ethoxycarbonylbutyl-Gruppe Außerdem wurden C-4-Ester von 4'-Demethylepipodophyllotoxin (Xl) hergestellt und in vitro getestet Sie zeigten ein ahnliches Verhalten wie Podophyllotoxin als Mikrotubuli, Inhibitoren und wiesen keine Etoposid/Temposid-ahnliche Aktivität auf (Anti-CancerDrug Design, 1987, 2 13-23)

(Xl)

H₃CO

OCH,

R² steht fur Wasserstoff und R¹ steht ζ B fur eine Methyl-, Phenyl- und Furylgruppe oder R² steht fur eine

Benzyloxycarbonylgruppe und R¹ steht fur eine 2-Thienyl-oder 2,2-Dimethylethylengruppe

Nunmehr wurde überraschenderweise gefunden, daß4'-Acyl-4'-demethylepipodophyllotoxinglucoside selbst wirksame

Antitumormittel sind, wobei mehrere 4'-Acyldenvate bessere Aktivitäten im Vergleich zu Etoposid im P388-Leukamie-Modell zeigten

Ziel der Erfindung

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von Zwischenprodukten fur die Herstellung von Epipodophyllotoxinglucosid-4'-acylderivaten, welche als Antitumorrrnttel therpeutisch anwendbar sind

Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung von Zwischenprodukten zur Verfugung zu stellen, aus denen Epipodophyllotoxinglucosid^'-acyldenvate hergestellt weden konnen

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Zwischenstufen fur Verbindungen der allgemeinen Formel (XII)

(XII)

H,CO'

Ö-Y

R¹ und R² jeweils eine Cvio-Alkylgruppe bedeuten, oder R¹, R² und das Kohlenstoffatom, an welches sie gebunden eine C5-e-Cycloalky!gruppe bedeuten, oder

R¹ fur ein Wasserstoffatom steht und

R²untereinem C_1-10-AIlCyI-,Cz-uj-Alkenyl-, Ca-e-Cycloalkyl-, Furyl-, Thienyl-, C₆_,₀-Aryl- und C₇_₁₄-Aralkyl-Rest ausgewählt ist, und Y fur-(C(O)-R³,-C(O)-X-R⁴ oder-C(0)-NR^sR^e steht, worin X ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom bedeutet, R³ ausgewählt ist unter einem Wasserstoffatom, einer C,_₁₀-Alkyl-, C₂.₂₀-Alkenyl-, Ca^-Cycloalkyl-, C₆.₁₀-Aryl-, C₇_₁₄-Aralkyl- und einer Heteroarylgruppe, wobei jede der oben angegebenen Gruppen gegebenenfals mit einem oder mehreren Resten, ausgewählt untereinem Hydroxy-, C₁^-AIkOXy-, C^-Alkanoyloxy-, Cyano-, Amino-, Ci^-Alkylamino-, Di(Ci.₆)-alkylamino-, quaternarem Ammonium-, Carboxy-, C^-Alkylthio-, DilC^J-alkylammolC^lalkylthio-, Mercapto-, Mercaptothio-, Ci-e-Alkanoylamino-, Nitro-, C^-Alkanoyl-, Carbamoyl-, Azido-, Halogen-, Ci-e-Alkylsulfoxid- und Sulfon-Rest substituiert ist, wobei die Substituenten der Aryl-, Aralkyl- und Heteroarylgruppen zusätzlich eine Ci_e-Alkylgruppe umfassen tonnen, R⁴ gemäß R³ definiert ist, mit der Maßgabe, daß R⁴ nicht fur Benzyl steht, wenn X ein Sauerstoffatom bedeutet, und mit der Maßgabe, daß R⁴ kein Wasserstoffatom bedeutet, oder R⁴ eine Anthrachinonyl-2-methylengruppe bedeutet, R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig voneinander unter den Gruppen gemäß der Definition fur R³ ausgewählt sind, oder R⁵ein Wasserstoffatom bedeutet und R⁵ untereinem Amino-, C_1-6-Alkylamino- und einem Di(C|_6)alkylamino-Rest ausgewählt ist, oder R⁵ und R⁶zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 3- bis 6gliedngen Ring bedeuten, oder ein pharmazeutisch vertragliches Salz davon

Gemäß einer bevorzugten Ausfuhrungsform werden Verbindungen der allgemeinen Formel (XII) bereitgestellt, worin R¹ fur ein Wasserstoffatom und R² fur eine Methyl- oder 2-Thienylgruppe steht

Die erfindungsgemaß erhältlichen Zwischenprodukte sind f-Demethylepipodophyllotoxinglucosid-^-chlorformiat-Verbindungen der allgemeinen Formel (XIII)

(XII!)

f OC(O)Cl

worin R¹ und R² der oben gegebenen Definition entsprechen

Die erfindungsgemaßen Verbindungen sind zur Inhibition maligner Saugertumore brauchbar, wobei man eine Verbindung der allgemeinen Formel (XII) an den betroffenen Patienten verabreicht

Durch die vorliegende Erfindung werden außerdem pharmazeutische Mittel, welche eine Antitumor-wirksame Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel (XII) zusammen mit einem pharmazeutisch vertraglichen Trager oder Verdünnungsmittel umfassen, zur Verfugung gestellt

Der in der Beschreibung verwendete Ausdruck „Alkyl" umfaßt geradkettige und verzweigte Kohlenstoffketten, „Alkenyl" umfaßt geradkettige oder verzweigte Kohlenstoffketten mit mindestens einer Doppelbindung, „Halo" oder „Halogen" bezeichnen Fluor-, Brom-, Chlor- und lodatome; „Heteroaryl" bezeichnet einen aromatischen Ring mit wenigstens einem Nicht-Kohlenstoffatom im Ring, wiez B Pyridin, Furan, Thiophen, Pyrrol, Pyrimidin, Chinoxalin und ähnliche, der Ausdruck „Z" bezeichnet die cis-Konfiguration einer Doppelbindung.

Gemäß einer bevorzugten Ausfuhrungsform der vorliegenden Erfindung werden Verbindungen der allgemeinen Formel (XII) zur Verfugung gestellt, worin R¹ fur ein Wasserstoffatom steht, R² unter einem Cno-Alkyl-, Phenyl- oder Thienyl-Rest ausgewählt ist, und Y fur -C(O)R^a, -C(O)XR⁴ oder-C(O)NR⁵R⁶ steht, worin X ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom bedeutet,

R³ ausgewählt ist unter einem C^-Cycloalkyl-, Ca-jo-Alkenyl-, C^o-Alkyl-Rest, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogenatomen, Azido-, Cyano-, C,_e-Alkylthio-, Di(Ci^)alkylamino-, DilC^-alkylamino-ICa-eialkylthio-, quaternarem Ammonium-, C|_e-Alkylsulfoxidresten, einem Phenylrest, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren C^-Alkyl-, Halogen-, Hydroxy-, Ci-6-Alkoxy-, Mercapto-, C,_6-Alkylthio-, Cyano- und Nitro-Resten, einem Phenyl-fC^-alkyl-Rest, worin der Phenylrmg gegebenenfalls mit einem oder mehreren oder oben genannten Phenylsubstituenten substituiert ist, und einem Pyridyl rest,

R⁴ der fur R³ gegebenen Definition entspricht, mit der Maßgabe, daß R⁴ kein Wasserstoffatom bedeutet und daß R" nicht fur einen Benzylrest steht, wenn X ein Sauerstoffatom bedeutet, oder R⁴ fur eine Anthrachinonyl-2-methylengruppe steht, und R⁵ und R^e jeweils unabhängig voneinander unter einem Wasserstoffatom oder einem Cvio-Alkylrest ausgewählt sind, der gegebenenfalls mit einem oder mehreren Halogenatomen, Hydroxy-, C₁-B-AIkOXy-, Mercapto-, Ci-s-Alkylthio-, Cyano-, Ammo-, Ci_e-Alkylamino-, Di(C,_₆)alkylamino- und Azidogruppen substituiert ist, oder worin R⁶ fur ein Wasserstoffatom steht und R⁶ ausgewählt ist unter einem Ca^-Cycloalkyl-, C2.₂o-Alkenyl-Rest, einem Phenylrest, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Phenylsubstituenten gemäß der Definition fur R³, einem Phenyl-(Ci^)alkylrest, worin der Phenylrmg gegebenenfalls mit einem oder mehreren Phenylsubstituenten gemäß der Definition fur R³ substituiert ist, einem Amino-, Ci-e-Alkylamino-, Di(C,^)alkylamino- und einem Pyridyl-Rest, oder ein pharmazeutisch vertragliches Salz davon Gemäß einer besonders bevorzugten Ausfuhrungsform werden Verbindungen der allgemeinen Formel (XII) bereitgestellt, worin Y fur -C(O)-R³ steht und R³ unter einem Ci-10-Alkylrest, gegebenenfalls substituiert mit einem oder mehreren Halogenatomen, Azido-, quaternaren Ammonium-, C^s-Alkylthio-, D^G^alkylamino-, Di(C,-₆)alkylamino(C₂^)alkylthio- und Alkylsulfoxid-Gruppen, einem C2-2o*Alkenyl-, Phenyl- und Pyridyl-Rest ausgewählt ist Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausfuhrungsform werden Verbindungen der allgemeinen Formel (XII) bereitgestellt, worin Y fur -C(O)-XR⁴ steht und worm X fur ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht und R⁴ aus einem Ci_i_O-Alkylrest, gegebenenfalls substituiert mit einer Di(Ci-6)-alkylaminogruppe oder einem oder mehreren Halogenatomen, einem p-Nitrobenzylrest und einem Anthrachinonyl-2-methylen-Rest ausgewählt ist Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausfuhrungsform werden Verbindungen der allgemeinen Formel (XII) zur Verfugung gestellt, worin Y fur—C(O)-NR⁵R⁶ steht und R⁵ und R⁶ jeweils unabhängig voneinander unter einem Wasserstoffatom oder einer C)-IO-AIkylgruppe ausgewählt ist, gegebenenfalls substituiert ist mit einem Di(Ci_6)-alkylaminorest oder einem oder mehreren Halogenatomen, oder worin R⁵ ein Wasserstoff atom und R^e eine Aminogruppe bedeuten Die Phenolgruppe von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden kann mit Hilfe von aus dem Stand der Technik bekannten Methoden acyliert werden Doch sind hierbei aufgrund der Saurelabilitat der glykosidischen Bindung und der Tendenz zur Basen-katalysierten Epimerisierung des α-Kohlenstoffes des Lactone stark saure oder basische Reaktionsbedingungen zu vermeiden

Die Veresterung kann durch Verwendung der Carbonsaure R³CO₂H oder einem davon abgeleiteten acylierenden Äquivalent durchgeführt werden Beispiele hierfür sind gemischte Saureanhydride, aktive Ester, aktive Amide und Saurehalogenide Bei Verwendung der Carbonsaure wird die Reaktion vorzugsweise in Gegenwart eines Kondensationsmittels wie Dicyclohexylcarbodiimid durchgeführt Bevorzugtes Acylierungsmittel ist das Saurehalogenid und die Reaktion wird hierbei in einem geeigneten wasserfreien organischen Losungsmittel wie Acetonitril, Tetrahydrofuran und Aceton in Gegenwart einer geeigneten Base zur Neutrahsierung der wahrend des Reaktionsverlaufs gebildeten Saure, durchgeführt Geeignete Basen sind ζ B tertiäre Amine, wie Triethylamin, Pyridin und Diisopropylethylamin und anorganische Basen, wie Kaliumcarbonat und Natriumcarbonat

4'-Carbonate konnen durch Umsetzung von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden mit einem Haloformiat CIC(O)XR⁴ in Gegenwart einer Base hergestellt werden Außerdem kann zunächst die4'-Phenolgruppe von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosid zuerst in das 4'-Chlorformiat Zwischenprodukt (XIII) unter Verwendung von Phosgen odei Trichlormethylchlorformiat umgesetzt werden, wobei anschließend das 4'-Phenolchlorformiat in situ mit einem Alkohol oder einem Thiol in Gegenwart einer Base unter Bildung des gewünschten Produktes gekuppelt wird Beispiele fur geeignete Basen wurden bereits angegeben

In analoger Weise erhalt man 4'-Carbamate, wenn das 4'-Phenolchlorformiat mit einem geeigneten Amin HNR⁵R⁶ entweder in Gegenwart einer Base oder in überschüssigem Amin zur Neutrahsierung der erzeugten Saure kondensiert wird Zur Durchfuhrung der Acylierungsreaktion wird als Losungsmittel Acetonitril und als Base Diisopropylethylamin bevorzugt Die oben beschriebenen Umsetzungen sind im Schema !zusammengefaßt

Schema I

XII a

CH.

Acylierungsmittel

XII d

ClCO(CCl,

CH₁

XII b

worm R¹ bis R⁶ der oben gegebenen Definition entsprechen

Der Reaktionsverlauf kann mit Hilfe der Dunnschichtchromatographie verfolgt werden, wobei die optimale Reaktionszeit durch die Entstehung des Produktes und/oder Abreagieren des Ausgangsmaterials abgeschätzt werden kann Die Reaktionszeit kann etwa 30Mm bis mehrere Tage bei Temperaturen im Bereich von etwa —20⁰C bis etwa Zimmertemperatur betragen Optimale Reaktionszeit und Reaktionsbedingungen sind abhangig von der Natur und der Reaktivität der einzelnen Reaktanten Das Endprodukt kann aus dem Reaktionsgemisch mit Hilfe von Standardverfahren wie Abdampfen des Losungsmittels, Partitionierung mit Wasser, Fallung, Fittration und Trocknung des Produktes isoliert werden Die Substanz kann mit Hilfe herkömmlicher Verfahren, wie ζ B Umkristallisation aus geeigneten Losungsmitteln oder Saulenchromatographie oder

Flashchromatographie weiter gereinigt werden

Einige der erhaltenen Produkte können weiter modifiziert werden, wobei Verbindungen gebildet werden, die ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Beispielsweise kann ein Haloalkylester mit einem Nukleophil (Nu) unter Bildung des entsprechenden Nu-Alkylesters umgesetzt werden Spezielle Beispiele hierzu sind im experimentellen Teil aufgeführt

Biologische Aktivität

Repräsentative Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden auf ihre Wirkung auf transplantierbare Mause-P 388-Leukamie getestet

Weiblichen CDFi-Mausen wird intraperrtoneal ein Tumonnokulum von 10^e-P388-Leukamie-Asciteszellen implantiert Anschließend erfolgt eine Behandlung mit unterschiedlichen Dosen der Testverbindung Eine Gruppe von vier Mausen wird fur jeden Dosisweg verwendet 10 mit Salme behandelte Mause sind als negative Kontrolle in jeder Versuchsserie vorhanden, ebenso wie sechs Etoposid behandelte Mause als positive Kontrolle. Die Wirkstoffe werden intraperrtoneal am Tag 5 und 8 oder am Tag 1 und 5 verabreicht (Tag 1 istderTagderTumonmplantation) Die Versuchsdauer betragt 30 bis 64 Tage Mehrere wasserlösliche Analoga werden in einem iv/iv-System getestet, d h. die P388-Leukamiezellen werden intravenös implantiert und die Testverbindungen werden intravenös verabreicht; Etoposid als positive Kontrolle wird intraperrtoneal verabreicht Am Ende eines jedes Experiments wird die Anzahl der überlebenden Tiere jeder einzelnen Gruppe notiert Die mittlere Uberlebensdauer jeder Gruppe von Mausen wird bestimmt und die Antitumoraktivitat in % T/C-Werten ausgedruckt,

welche das Verhältnis der mittleren Uberlebensdauer (MST) der Wirkstoff-behandeltenGruppezur MST der Saline-behandelten Kontrollgruppe darstellt Eine Verbindung mit einem % T/C-Wert von 125 oder großer wird im allgemeinen als Verbindung mit signifikanter Tumoraktivitat im P388-Test eingestuft Tabelle 1 zeigt die Ergebnisse der oben beschriebenen Versuche, die Tabelle beinhaltet die maximalen % T/C-Werte sowie die einen maximalen Effekt bewirkende Dosis und weitere Dosiswerte, bei denen überlebende Tiere am Ende des Versuchszeitraumes vorhanden waren

Tabelle 1

Antitumoraktivitat gegen transplantierbare P388-Leukamie in Mausen

H₃CO

	Z Z	Dosis11	Max	Überlebende
R1	-CH2(CH2)6CH=CHCH2CH=CH(CH2)4CH3	(mg/kg/Dosis)	%T/C	(Nr./Tag)
in CMC4
in DMSO
	200	290
-(CH2)JS(CH2J2N(CHa)2 HCI	200	>395	(2/d 46)
in Sahne	50	>345	(2/d 46)
Etoposid
-CH2(CH2I2N(CH3J2 HCI	200	215
in Sahne	60	250
-CH2(CH2I2N(CH3J2
	180	>355	(2/d 47>31
4-Pyridyl HCI (in Sahne)	90	245
4-Pyridyl	180	210	(1/d47)
Etoposid	160	180
-CH2(CH2J2Br	45	165
-CH2(CH2J2I	80	260
-CH2(CH2J2N3	45	205
p-Nitrobenzyloxy	160	230
Anthrachinon-2-methyloxy	160	335
Etoposid	180	335
-CH2-Br	80	165
Etoposid	80	295
-CH=CH2	40	205
-CH2(CH2J5CH3	80	>370	(3/d 38)
-OCH3	50	225
Etoposid	100	235
-OCH2CCI3	70	235
Etoposid	40	365
Phenyl	8021	290	(Vd 57)
Benzyloxy	602>	>570	(4/d 57)
Etoposid	6021	330	(Vd 45)
-N(CH2CH2CI)2	12021	355	(2/d 45)
in CMC	6021	260	(2/d 45)
in DMSO + H2O
Etoposid	200	145
in CMC	100	210
in DMSO+ H2O
100	270
60	260

Fortsetzung Tabelle 1

	Z Z	-NHNH2	Dosis"	Max	Überlebende
R1	-0(CHj)2N(CHs)2	(mg/kg/Dosis)	%T/C	(Nr/Tag)
-NH(CH2)2N(CH3)2
-S(CH2)2N(CH3)2	280	225
Etoposid	280	215
-N(CH3)2	140	190
-NH2	280	230
Etoposid	100	295	(1/d49)
-NHCH3	300	170
Etoposid	300	285	(1/d64)
	120	7 510	(3/d 64)
-O(CH2)jN(CH3)2 HCI	300	165
(in H2O)	150	>480	(5/d 48)
-NH(CHj)2N(CHa)2 HCI	P388-Leukamiezellen intravenös implantiert
OnH2O)	755>	263
-S(CH2)2N(CH3)2 HCI
ImH2O)	3551	175
Etoposid
705'	256
100	338

1 Wenn keine gegenteiligen Angaben gemacht werden, wurde der Wirkstoff am Tag 5 und 8 intraperitoneal verabreicht

2 Wirkstoff am Tag 1 und 5 intraperitoneal verabreicht

3 Überlebende Mause ohne Tumor

4 Wenn keine gegenteiligen Angaben gemacht werden, wurden alle Verbindungen als Suspension in Wasser + Carboxymethylcellulose (CMC), mit oder ohne Tween 80 verabreicht

5 Wirkstoff am Tag 5 und 8 intravenös verabreicht

Die oben angegebenen Mause-Tumordaten weisen darauf hm, daß die erftndungsgemaßen Verbindungen wirksame Antitumormittel zur Inhibierung maligner Saugertumore wie der p388-Leukamie darstellen Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind pharmazeutische Mittel, welche eine wirksame Tumor-inhibierende Menge einer erftndungsgemaßen Verbindung in Kombination mit einem inerten pharmazeutisch vertraglichen Trager oder Verdünnungsmittel enthalten Derartige Mittel können zusätzlich andere aktive Antitumormittel enthalten und tonnen in einer, dem gewünschten Verabreichungsweg angepaßten pharmazeutischen Form vorliegen Beispiele solcher Mittel umfassen feste Mittel zur oralen Verabreichung, wie Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulver und Granulat, flussige Mittel zur oralen Verabreichung, wie Losungen, Suspensionen, Sirupe oder Elixiere und Praparationen zur parenteralen Verabreichung, wie sterile Losungen, Suspensionen oder Emulsionen Diese Mittel tonnen auch in Form steriler fester Mittel hergestellt werden, welche in sterilem Wasser, physiologischer Saline oder in einem beliebigen anderen sterilen injizierbaren Medium unmittelbar vor ihrer Anwendung gelost werden tonnen.

Zur Verwendung als Antitumormittel kann die optimale Dosierung und Verabreichungsform fur einen bestimmten Patienten (Sauger) von jedem Fachmann eingestellt werden Hierbei ist zu berücksichtigen, daß die tatsachlich verwendete Dosis von der jeweils ausgewählten Komponente, von der Formulierung des Mittels, von der Art der Verabreichung sowie vom jeweiligen Zustand, Patienten und Art der behandelten Erkrankungen abhangt Viele Faktoren, welche die Funktionen des Wirkstoffs beeinflussen, wie ζ B Alter, Gewicht, Geschlecht, Ernährung, Zeit der Verabreichung, Verabreichungsweg, Excretionsrate, Zustand des Patienten, Wirkstoffkombinationen, Reaktionsempfindlichkeiten und Schwere der Erkrankung, sind zu berücksichtigen

In den folgenden Beispielen wurden Protonen kernmagnetischer Resonanzspektren (NMR) unter Verwendung von CDCI₃ oder D₂O als interner Standard auf einem Bruker-WM 360-Spektrometer aufgenommen Infrarotspektren (IR) wurden auf einem Perkin-Elmer 1800 Fourier Transform Infrarotspektrophotometer aufgezeichnet „Flashchromatographie" bezeichnet die Methode von Still (W C Still, M Kahan,A Mitra, J Org Chem 1978,43,2923) und wurde unter Verwendung von E Merck Silikagel (230-400mesh) durchgeführt Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der vorliegenden Erfindung

Ausfuhrungsbeispiele Beispiel 1 Etoposid-4'-bromacetat

CH₃^\'

H₃C

Eine magnetisch gerührte Suspension von Etoposid (2,05g, 3,48 mMol) in trockenem Acetonitril (210 ml) wird unter fast vollständiger Losung kurz erwärmt und dann auf Zimmertemperatur abgekühlt Zu diesem Gemisch gibt man N,N-Diisopropylethylamin (0,91 ml, 5,2 mMol) und fugt dann innerhalb einer Minute mit einer Spritze Bromacetylchlorid (0,63g, 3,92mMol)zu Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 30 Minuten gerührt und dann mit Bromacetylchlorid (0,246g, 1,56mMol) versetzt Das Gemisch wird weitere 30 Minuten gerührt und dann mit0,05M Phosphatpuffer pH 7 (250 ml) und Ethylacetat (300 ml) partitioniert Die organische Phase wird mit Kochsalzlosung (2x 200 ml) gewaschen und über Na₂SO₄/ MgSO₄ getrocknet

Nach Abziehen des Losungsmittels im Rotationsverdampfer erhalt man einen dunklen Feststoff, der durch Flashchromatographie unter Verwendung eines Elutionsgradienten von Methylenchlorid zu 3-4% Methanol in Methylenchlorid gereinigt wird Man erhalt 1,89g (76,5%) der reinen Titelverbindung in Form eines hellgelben Feststoffs Praparative Dunnschichtchromatographie einer kleinen Probe unter Verwendung von 5% Methanol in Methylenchlorid ergibt die analytische Probe als farblosen Feststoff, Schmelzpunkt 192-196°C

IR (KBr) 1775,1605,1515,1490,1340,1238,1130,1 040,1 010,935,700cm"¹ 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,26 (s, 2H), 5,98 (d, 2H), 4,89 (d, 1H, J = 3,4Hz), 4,73 (q, 1 H, J = 5,0Hz), 4,65-4,61 (m, 2 H), 4,41 (dd, 1 H), 4,32 (s, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H), 4,07 (s, 1 H), 3,73 (m, 1 H), 3,66 (s, 6 H), 3,56 (m, 1 H), 3,43 (m,1H),3,34-3,31(m,2HL3,27(dd,1H,J = 5,2and14,1Hz),2,90-2,78(m,1H),2,68(d,1H,J = 2,1 Hz, OH), 2,40 (d,1 H, J = 2,6Hz, OH), 1,38 (d, 3 H, J = 5,0Hz)

Analyse fur C3iH33BrOi₄

ber C 52,48 H 4,69

gef C 52,72 H 4,77

Beispiel 2. Etoposid-4'-(4-brombutyrat)

Eine fast vollständige Losung von Etoposid (3,20g, 5,44 mMol, hergestellt gemäß Beispiel 1) in trockenem Acetonitril (300 ml) wird bei Zimmertemperatur mit Ν,Ν-Diisopropylethylamin (1,14 ml, 6,54 mMol) behandelt, gefolgt von einer Zugabe von 4-Brombutyrylchlorid (1,16g, 6,0OmMoI) innerhalb von 1 Minute Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 1 Stunde gerührt, auf -10⁰C abgekühlt und anschließend mit 0,05M Phosphatpuffer, pH7, (400ml) und Ethylacetat (500ml) partitioniert Die organische Phase wird mit Wasser (150ml) und Kochsalzlosung (350 ml) gewaschen und über Na₂SO₄/MgSO₄ getrocknet Nach Rotationsverdampfung erhalt man 4,1 g (100%) der reinen Titelverbindung in Form eines farblosen Feststoffs Umkristallisation aus Ethanol/Hexan ergibt die analytische Probe in Form eines weißen Feststoffs IR (KBr) 1769,1602,1506,1486,1465,1421,1386,1362,1338,1237,1159,1131,1099,1078,1039,1004,933 cm"¹

360MHz ¹HNMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,26 (brs, 2H), 5,98 (d, 2 H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,3Hz), 4,74 (q, 1 H, J = 5,1 Hz), 4,66-4,62 (m, 2 H), 4,41 (dd, 1 H), 4,24-^4,13 (m, 2H), 3,72 (m, 1 H), 3,65 (s, 6H), 3,58 (m, 1 H), 3,55 (t, 2 H), 3,43 (m, 1 H), 3,34-3,23 (m, 3 H), 2,90-2,80 (m, 1 H), 2,75 (t, 2 H), 2,63 (d, 1 H, J - 2,1 Hz, OH), 2,33 (d, 1H, J = 2,4Hz, OH), 2,27 (t, 2 H), 1,38 (d, 3 H, J = 5,1 Hz) Analyse fur C₃₃H₃₇BrO₁₄

ber C 53,74 H 5,06 Br 10,83

gef C 54,03 H 5,13 Br 10,80

Beispiel 3 Etoposid-4'-(4-jodburyrat)

H₃CO

Eine magnetisch gerührte Losung von Etoposid-4'-(4-brombutyrat) (3,55g, 4,81 mMol) in Aceton (reagent grade, 175ml) wird mit Natriumiodid (12,8g, 85,4mMol) umgesetzt Anschließend erhitzt man das Gemisch unter einer Stickstoffatmosphare 22 Stunden auf 48^CC und anschließend 1 Stunde auf Ruckflußtemperatur Das Gemisch wird auf Zimmertemperatur abgekühlt, über ein Celit-Bett filtriert (3x mit Aceton gewaschen) und das Filtrat im Vakuum eingedampft Der Ruckstand wird in Methylenchlorid (300 ml) und Wasser (250ml) partitioniert und die wäßrige Phase wird weiter mit Methylenchlond (2x 50ml) extrahiert Die vereinigten organischen Extrakte werden mit Wasser (150 ml) und Kochsalzlosung (150ml) gewaschen und über Na₂SO₄ZMgSO₄ getrocknet Nach Einengen im Rotationsverdampfer und weiterem Trocknen bei 0,1 Torr erhalt man die reine Titelverbindung in quantitativer Ausbeute als hellgelben Feststoff

360 MHzⁿH NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H),6,26 (brs, 2H), 5,98 (d, 2H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,2Hz), 4,74 (q, 1H, J = 5,0Hz), 4,65-4,61 (m, 2H),4,41 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H),4,15 (dd, 1 H, J = 3,5 and 10,6Hz), 3,74 (m, 1 H), 3,66 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,42 (m, 1H), 3,35-3,24 (m, 3 H), 3,31 (t, 2 H), 2,90-2,79 (m,1 H), 2,69 (t, 2 H), 2,23 (t, 2 H), 1,38 (d, 3 H, J = 5,0Hz)

Beispiel 4 Etoposid-4'-(4-azidobutyrat)

H_nCO

CH₂<CH₂)₈N₃ Π

Eine Losung von Etoposid-4'-(4-jodbutyrat) (115mg, 0,147mMol) in trockenem Dimethylformamid (2ml) wird mit trockenem Lithiumazid (16,5mg, 0,337 mMol) versetzt und unter einer Stickstoffatmosphare 28 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt Das Gemisch wird mit Ethylacetat (65ml) verdünnt und mit 0,05M Phosphatpuffer, pH7 (50ml), partitioniert Die organische Phase wird mit Wasser (4x 25ml) und Kochsalzlosung (2x 40 ml) gewaschen und über Na₂SO₄/MgSO₄ getrocknet Nach dem Einengen im Rotationsverdampfer und weiterem Trocknen bei 0,1 Torr erhalt man 100 mg (98%) der reinen Titelverbindung in Form eines farblosen Feststoffes

IR (KBr) 2102,1768,1736,1602,1486,1337,1 237,1158,1133,1096,1078,1038,932,699cm"¹ 360MHz ¹HNMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H),6,54 (s, 1 H), 6,26 (brs, 2H),5,98 (d, 2H),4,89 (d, 1 H, J = 3,3Hz),4,73 (q, 1H, J = 5,1 Hz), 4,65-4,62 (m, 2H), 4,41 (dd, 1 H, J = 9,2 and 10,5Hz), 4,24-4,13 (m, 2H), 3,74 (m, 1 H), 3,65 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,43 (m, 1 H), 3,42 (t, 2 H), 3,34-3,30 (m, 2 H), 3,26 (dd, 1H, J = 5,2 and 14,1 Hz), 2,90-2,80 (m, 1 H), 2,67 (t, 2 H), 1,99 (t, 2 H), 1,38 (d, 3 H, J = 5,1 Hz)

-12- 296 082 Beispiel 5 Etoposid-4'-(4-aminobutyrat)-essigsauresalz

₃ ♦ -

CH₂(CHg)₈NH₃OOc

Eine Losung von Etoposid-4'-(4-azidobutyrat) (300mg, 0,42SmMoI) in Ethylacetat (30ml) wird mit 460 mg Lindlar-Katalysator (5% Pd auf mit Blei vergiftetem Calciumcarbonat) und Eisessig (10 ml) versetzt Das Gemisch wird anschließend bei 35psi 2,5 Stunden hydriert Es wird dann über ein Celit-Bett filtriert und das Filtrat wird langsam zu einem Gemisch aus Ether und n-Pentan (100ml) im Verhältnis von 2-1 gegeben Der entstandene weiße Niederschlag wird abfiltriert, mit Ether gewaschen und bei 0,1 Torr getrocknet Man erhalt 38,1 mg (12,1 %) der reinen Titelverbindung Teilweise 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,80 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,24 (brs, 2H), 5,98 (d, 2H), 4,89 (d, 1 H), 4,73 (q, 1 H), 4,65 (d, 1 H), 4,59 (d, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,22-4,11 (m, 2H), 3,74 (s, 6H),3,73 (m, 1 H), 3,65 (s, 2H), 3,56(m, 1 H), 3,47-3,21 (m, 6H), 2,92-2,82 (m, 1H), 2,31 (t, 2 H), 2,08 (s, 3 H), 1,38 (d, 3H)

Beispiel 6 Etoposid-4'-methylthioacetat

Etoposid (3,10g, 5,27mMol), Dicyclohexylcarbodiimid (DCC 1,76g, 8,53mMol) und Methylthioessigsaure (792mg, 7,46mMol) werden unter einer Stickstoffatmosphare mit trockenem Tetrahydrofuran (125 ml) versetzt, die entstandene farblose Losung wird 100 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und zusätzlich mitMethylthioessigsaure (180mg) versetzt Nach 17stundigem Ruhren bei Zimmertemperatur wird zusatzlich DCC (250mg) zugegeben und das Reaktionsgemisch wird 48 Stunden auf Zimmertemperatur gehalten und dann unter Vakuum konzentriert Der entstandene weiße Feststoff wird mit Ethylacetat (175 ml) versetzt, 5 Minuten gerührt und über ein Celit-Bett filtriert Die Feststoffe werden mit Ethylacetat (4x 75 ml) gewaschen und das vereinigte Filtrat wild mit 0,25M Phosphatpuffer, pH7 (300ml), partitioniert, dann mit Wasser (250ml) und Kochsalzlosung (2x 200ml) gewaschen und über NaaSCVMgSC^ getrocknet Nach dem Einengen im Rotationsverdampfer und anschließender Flash-Chromatographie auf Silicagel unter Verwendung eines Methylenchlorid/Methanol-Gradienten von 100 0 bis 98 2 erhalt man 1,85g (52%) der reinen Titelverbindung als weißen Feststoff

360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,27 (brs, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,4Hz), 4,74 (q, 1 H, J = 5Hz), 4,65-4,62 <m, 2H), 4,41 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,17 (dd, 1 H), 3,72 (m, 1 H), 3,66 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,44 (m, 1 H), 3,43 (s, 2H), 3,34-3,31 <m, 1 H), 3,26 (dd, 1 H, J = 14,1 und 5,2Hz), 2,90-2,80 (m, 1 H), 2,64 (d, 1 H, J = 2,2Hz, OH), 2,38 (d, 1H, J = 2,5Hz, OH), 2,27 (s, 3 H), 1,38 (d, 3 H, J = 5 Hz)

-13- 296 082 Beispiel 7 Etoposid-4'-([4-dimethylamino]butyrat)

Eine Losung von Etoposid (2,60g, 4,41 mMol) in trockenem Acetonitril (220ml) wird bei Zimmertemperatur mit Ν,Ν-Diisopropylethylamin (2,20ml, 12,06mMol) versetzt, diese Losung wird dann schnell zu 4-Dimethylammobutyrylchloridhydrochlorid (hergestellt aus 0,82g [4,89mMol] des entsprechenden sauren Hydrochlorids und Thionylchlorid) gegeben Das Gemisch wird 1,5 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und in kaltes, gesättigtes, wäßriges Natriumbicarbonat (400ml), Ethylacetat (400ml) und Kochsalzlosung (60 ml) gegeben Die organische Schicht wird mit Wasser (3x 50ml) und Kochsalzlosung (2x 150ml) gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet Nach Rotationsverdampfung und anschließender Flashchromatographie auf Silicagel unter Verwendung von 5-10% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 1,28g (41 %) der reinenTitelverbindung als einen gelbbraunen Feststoff IR (KBr) 1770,1 602,1 507,1486,1466,1421,1337,1236,1160,1130,1078,1 038,1003,932 cm "' 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,26 (brs, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,4Hz), 4,74 (q, 1 H, J = 5Hz), 4,65-4,61 (m, 2 H), 4,41 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H, J = 3,9 and 10,4 Hz), 3,74 (m, 1 H), 3,65 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,42 (m, 1 H), 3,35-3,31 (m, 2H), 3,27 (dd, 1 H, J = 5,2 and 14,1 Hz), 2,90-2,80 (m, 1 H), 2,63 (t, 2H), 2,40-2,36 (m, 2H), 2,40 (s, 6H), 2,01 (m, 2H), 1,38(d,3H,J = 5Hz)

Massenspektrum (FAB), m/e, 702 (M⁺ + H) M⁺ von C₃₅H₄₃NO₁₄', 701

Beispiel 8 Etoposid-4'-([4-dimethylamino]butyrat)-hydrochlorid

Eine magnetisch gerührte Losung von Etoposid-4'-(4-dimethylaminobutyrat) (155 mg, 0,221 mMol) in trockenem Methylenchlorid (7 ml) wird auf OX gekühlt und 2 Minuten langsam mit einer Losung aus Chlorwasserstoff (1,0M in Et₂0,250μΙ, 0,25OmMoI) versetzt Nach 10 Minuten bei 0°C wird die Losung unter N₂ auf 2 ml konzentriert Diese Losung wird dann langsam zu 60 ml kraftig gerührtem trockenem Et₂O gegeben Der entstandene weiße Niederschlag wird abfiltriert, mit Ether gewaschen und bei 0,1 Torr getrocknet, wobei man 146mg (89%) der reinen Titelverbindung als weißlichen Feststoff erhalt, der sowohl in Wasser als auch in organischen Losungsmitteln löslich ist

360 MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 12,65 (brs, 1 H), 6,82 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,27 (brs, 2 H), 5,98 (d, 2 H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,6Hz), 4,73 (q, 1 H, J = 4,9Hz), 4,65-^,62 (m, 2H), 4,42 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1H, J = 3,9 and 10,4Hz), 3,74 (m, 1 H), 3,66 (s, 6H), 3,56 (m, 1H),3,42(m,1H),3,34-3,24(m,3H),3,10(m,2H),2,90-2,80(m,1H),2,76(s,6H),2,72(t,2H),2,25(m,2H),1,38(d,3H,J =

Beispiel 9 Etoposide-4'-(isonicotinoat)

H,C

Zu einer magnetisch gerührten Losung von Etoposid (2,15g,3,65mMol) in trockenem Acetonitril (210ml) gibt man Ν,Ν-Diisopropylethylamin (1,65ml,9,47mMol) und anschließend Isonicotinoylchloridhydrochlorid (0,75g, 4,21 mMol) Nach Zugabe von weiterem N,N-Dnsopropylethy!amin (0,70ml) wird die Mischung 9Tage bei Zimmertemperatur gerührt und dann mit einem Phosphatpuffer pH7(300ml),Ethylacetat (400ml) und Kochsalzlosung (75ml) partitioniert Die organische Schicht wird mit Wasser (2x 50ml) und Kochsalzlosung (2x 100ml) gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und über ein Celit-Bett filtriert Das Filtrat wird auf ein Volumen von 225 ml konzentriert und Methylenchlorid (20ml) wird dazugegeben Dann wird Hexan zur Losung gegeben, bis diese leicht trübe erscheint DasGemisch wird 1,5 Stunden bei 0"C aufbewahrt Das Produkt wird abfiltriert und unter Vakuum getrocknet, wobei man 885mg (35%) der reinen Titelverbindung als weißen Feststoff erhalt Durch Konzentration der Mutterlauge erhalt man zusätzliches Material, welches durch nur eine kleine Menge Etoposid kontaminiert ist 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 8,83 (brs, 2H), 8,07 (brs, 2H), 6,82 (s, 1 H), 6,57 (s, 1 H), 6,32 (brs, 2H), 5,98 (ABq, 2H), 4,91 (d, 1H, J = 3,5 Hz), 4,74 (q,1 H, J = 4,9 Hz), 4,67-4,65 (m, 2 H), 4,43 (dd,1 H), 4,24 (dd,1 H),4,15(dd,1H),3,73(m,1 H), 3,65 (s, 6 H), 3,54 (m, 1 H), 3,44 (dd, 1 H), 3,36-3,26 (m, 3H), 2,95-2,85 (m, 1 H), 1,38 (d, 3 H, J = 4,9Hz)

Beispiel 10 Etoposid^'-fisonicotinoatjhydrochlond

H,CC

1 Γ 'V

•HC1

Eine magnetisch gerührte Losung von Etoposid-4'-(isonicitinoat) (Verbindung von Beispiel 9,215mg, 0,31OmMoI) in trockenem Methylenchlorid (3ml) wird unter einer Stickstoffatmosphare auf 0⁰C gekühlt und langsam 5 Minuten lang mit einer Chlorwasserstoff-Losung (1,0M in Ether, 300μΙ, 0,30OmMoI) versetzt Das Losungsmittel wird abdekantiert und der verbleibende gelbe Feststoff mit Methylenchlorid (2x 2ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet, wobei man 175mg (80%) der reinen Titelverbindung erhalt 360 MHz' H NMR (d6-DMSO) δ 8,88 (d, 2H, J = 5,7Hz), 7,96 (d, 2H, J = 5,7 Hz), 7,03 (s, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 6,35 (brs, 2 H), 6,16 (brs, 2 H), 4,95 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 4,72 (q, 1H, J = 4,9 Hz), 4,64 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 4,59 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 4,07 (dd, 1 H, J = 10,1 and 4,7 Hz), 3,61 (s, 6 H), 3,50 (dd, 1 H), 3,39-2,89 (m, 6 H), 1,23 (d, 3 H, J = 4,9 Hz)

Beispiel 11 Etoposid-4'-(linoleat)

Zu einer Losung von Etoposid (2,29g, 3,89 Mol) und Ν,Ν-Diisopropylethylamin (1,60ml, 9,19 mMol) in trockenem Acetontitril (210ml) gibt man bei Zimmertemperatur schnell eine Losung aus Linolsaurechlorid in 20ml trockenem Acetonitril (Linolsaurechlorid wird hergestellt aus 1,17g [4,17 mMol] Lonolsaure und 1,10ml Oxalylchlorid in Methylenchlond, nach Eindampfen unter Vakuum und Trocknen bei 0,1 Torr wird das rohe Saurechlond in trockenem Acetonitril gelost und sofort verwendet) Das Gemisch wird bei Zimmertemperatur 45 Minuten gerührt und mit einem Phosphatpuffer pH 7 (250ml) und Ethylacetat 300ml partitioniert Die organische Schicht wird mit Wasser (100ml) und Kochsalzlosung (150ml) gewaschen und über Na2SO,t/MgSO4 getrocknet Durch Rotationsverdampfung erhalt man einen farblosen Feststoff, der bei 0,1 Torr noch weiter getrocknet wird Eine Losung des Feststoffes in Methylenchlond (15ml) wird langsam unter Ruhren zu 145ml Hexan gegeben Der entstandene weiße Niederschlag wird abfiltriert, mit Hexan gewaschen und bei 0,1 Torr getrocknet, wobei man3,25g (98%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff erhalt

IR (KBr) 2929,1 770,1601,1 506,1486,1466,1421,1337,1236,1159,1132,1098,1078,1038,1003,933cm~' 360 MHz¹H N MR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,25 (brs, 2 H), 5,97 (d, 2 H), 5,37-5,28 (m, 4 H), 4,88 (d,1H, J = 3,4Hz),4,73 (q, 1 H, J = 5,0 Hz), 4,66-4,61 (m, 2 H), 4,41 (dd, 1 H), 4,21 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1H, J = 4,2 and 10,4 Hz), 3,74 (m, 1 H), 3,64 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,42 (dd, 1 H), 3,34-3,31 (m, 2 H), 3,25 (dd, 1H, J = 5,2 and 14,1 Hz), 2,92-2,82 (m, 1 H), 2,76-2,72 (m, 2 H), 2,67 (brs, 1 H, OH), 2,55 (t, 2H, J = 7,4Hz), 2,39 (brs, 1 H, OH), 2,07-1,97 (m, 4H), 1,75-1,27 (m, 14H), 1,37 (d, 3H, J = 5,0Hz), 0,86 (t, 3H, J = 6,7Hz) Massenspektrum (FAB), m/e, 850 (M⁺), 645 (M⁺-Zucker) M⁺ von C₄₇H₆₂O₁₄,850 Analyse fur C₄₇H₆ZU₁₄

ber C 66,34 H 7,34

gef C 65,67 H 7,39

Beispiel 12. Etoposid-4'-acrylat

H,C(

Gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenem Verfahren ergeben Etoposid (1,86g, 3,16 mMol), N,N-Diisopropylethylamin (0,81 ml, 4,65 mMol) und Acryloylchlorid (0,35ml, 4,3 mMol) in trockenem Acetonitril (200 ml) 1,73 g (85%) der reinen Titelverbindung nach der Kristallisation des reinen Materials aus Methylenchlorid/Petrolether 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,80 (s, 1 H), 6,55 (m, 2H), 6,34 (m, 1 H), 6,27 (s, 2H), 5,96 (m, 3H), 4,88(d, 1 H), 4,73 (q, 1 H), 4,61 (m, 2 H), 4,43 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H), 3,70 (m, 1 H), 3,64 (s, 6 H), 3,55 (m, 1 H), 3,41 (m, 1 H), 3,29 (m, 3 H), 2,85 (m, 1 H), 1,36 (d,

Beispiel 13 Etoposid-4'-[3-[(2-dimethylamino)ethylthio]propionat]hydrochlond

N(CH₃)₂-HC1

Eine Losung von Etoposid-4'-acrylat (Verbindung von Beispiel 12,625mg, 0,97 mMol) in Ethanol (25ml) wird mit 2-Dimethylaminoethanthiolhydrochlorid (305mg, 2,14 mMol) versetzt, das Gemisch wird 64 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt Das Losungsmittel wird unter Vakuum verdampft und das auf diese Weise erhaltene Rohprodukt wird durch Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 10% Methanol in Methylenchlorid als Eluierungsmittel gereinigt, wobei man 610mg (84%) der reinen Titelverbmdung nach dem Ausfallen des chromatographierten Matenales aus Petrolether erhalt IR (KBr) 1775,1 607,1510,1495,1240,1135cm"¹

360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,52 (s, 1 H),6,24 (s, 2H), 5,96(dd,2H),4,89 (d, 1 H),4,72 (q, 1 H),4,60 (m, 2H), 4,40 (dd, 1 H), 4,21 (dd, 1 H), 4,16 (dd, 1 H), 3,68 (m, 1 H), 3,64 (s, 6H), 3,55 (m, 1 H), 3,39 (m, 1 H), 3,29 (m, 3 H), 2,87 (s, 6H), 2,66 (m, 2 H), 2,51 (m, 2H), 1,36 (d, 3H) Massenspektrum (FAB), m/e, 748 (M" + H) M⁺ von C₃₆H₄₅NO₁₄S, 747

Beispiel 14: Etoposid-4'-octanoat

OCH₃

CH₂<CH₂>5^CH3

Nach dem in Beispiel 1 angewandten Verfahren ergeben Etoposid (1,80 g, 3,06 mMol), Ν,Ν-Diisopropylethalamin (0,063 ml, 3,62 mMol) und Octanoylchlorid (0,63ml,3,69 mMol) in trockenem Acetonitril (250ml) 2,03g (93%) der reinen Titelverbmdung nach Flash-Chromatographie und Ausfallung in Ether/Petrolether

360 MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,80 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,24 (brs, 2 H), 5,96 (d, 2 H), 4,88 (d, 1 H, J = 3,5 Hz), 4,72 (q, 1 H, J = 5 Hz), 4,60 (m, 2 H), 4,40 (dd, 1 H), 4,21 (dd, 1 H), 4,13 (dd, 1 H), 3,69 (m, 1 H), 3,58 (s, 6 H), 3,57 (m, 1 H), 3,40 (dd, 1 H), 3,31 (m, 2 H), 3,28 (dd, 1 H), 2,86 (m, 1 H), 2,56 (t, 2 H), 1,73 (m, 2 H), 1,37 (m, 5 H), 1,29 (m, 6 H), 0,85 (t, 3 H)

Beispiel 15 Etoposid-4'-benzoat

Eine magnetisch gerührte Mischung von Etoposid (133,5mg, 0,227 mMol) und wasserfreiem Kaliumcarbonat (379mg, 2,74 mMol) in Aceton (reagent grade, 12 ml) wird auf 0⁰C unter einer Stickstoffatmosphare gekühlt und mit Benzoylchlorid (88μΙ, 0,758 mMol) versetzt Die Mischung wird bei 0-5 °C 4,5 Stunden gerührt, filtriert und das Filtrat wird unter Vakuum konzentriert Nach Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 5% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 94,1 mg (60mg) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff

360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 8,19 (d, 2H), 7,59 |t, 1 H),7,47 (m,2H),6,82 (s, 1 H),6,54 (s, 1 H), 6,32 (brs, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,88 (d, 1 H), 4,72 (q, 1 H), 4,63 (m, 2 H), 4,43 (dd, 1 H), 4,24 (dd, 1 H),4,17 (dd, 1 H), 3,69 (m, 1 H), 3,59 (s, 6H), 3,58 (m, 1 H), 3,41 (dd, 1 H), 3,31 (m, 2 H), 3,28 (dd, 1 H), 2,85 (m, 1 H), 1,38 (d, 3 H)

Beispiel 16. Etoposid^'-benzylcarbonat

H₃CO

Eine magnetisch gerührte Mischung von Etoposid (343,5mg, 0,584 mMol) und wasserfreiem Kaliumcarbonat (903mg, 6,53 mMol) in Aceton (reagent grade) wird unter einer Stickstoffatmosphare auf O⁰C gekühlt und mit Benzylchlorformiat (261 μΙ, 312 mg, 1,83 mMol) versetzt Die Mischung wird 25 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert Das Filtrat wird im Vakuum konzentriert und an Silicagel unter Verwendung von 4% Methanol in Methylenchlorid chromatographiert, wobei man 244mg (58%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff erhalt

360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 7,43-7,32 (m, 5H), 6,81 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,26(s, 2H), 5,97 (d, 2H), 5,24 (s, 2H), 4,88 (d, 1 H),4,73 (q, 1 H),4,65-4,59 (m, 2H),4,41 (dd, 1 H),4,22 (dd, 1 H),4,15 (dd, 1 H),3,71 (m, 1 H), 3,64 (s, 6 H), 3,56 (m, 1 H),3,41 (m, 1 H),3,31 (m,2H), 3,27 (dd, 1 H), 2,85 (m, 1 H), 2,73 (d, 1 H, OH), 2,55 (d, 1 H, OH), 1,37 (d,3H)

Beispiel 17 Etoposid-4'-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat

Nach dem in Beispiel 16 beschriebenen Verfahren mit Etoposid (374mg,0,635 mMol), wasserfreiem Kaliumcarbonat (1,00g, 7,25 mMol) und Aceton (reagent grade, 25 ml), wobei jedoch 2,2,2-Tnchlorethyl-chlorformiat (98,5 μΙ, 0,715 mMol) anstelle von Benzylchlorformiat verwendet wird, erhalt man 245mg (50%) der gewünschten Titelverbindung als farblosen Feststoff 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,28 (s, 2H), 5,97 (d, 2H),4,88(d, 1 H),4,83 (s, 2H),4,74 (q, 1 H), 4,63 (m, 2H), 4,42 (dd, 1 H), 4,24 (dd, 1 H), 4,16 (dd, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 3,67 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,41 (m, 1 H), 3,32 (m, 2 H), 3,27 (dd, 1 H), 2,85 (m, 1 H), 2,67 (d, 1 H, OH), 2,43 (d, 1 H, OH), 1,37 (d, 3H)

Beispiel 18 Etzoposid-^-methylcai bonat

Eine magnetisch gerührte Mischung von Etoposid (340mg, 0,578 mMol) in Methylenchlorid (10ml) wird mit wasserfreiem Pyndin (1,0 ml) und dann mit Methylchlorformiat (190 μΙ, 2,46 mMol) versetzt Die Mischung wird 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Wasser und Methylenchlorid partitioniert Der organische Extrakt wird mit Kochsalzlosung gewaschen und über MgSO₄ getrocknet Nach Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 5% Methanol in Methylenchlorid und anschließendem Ausfallen in Methylenchlorid/Petrolether erhalt man 95mg (28%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff

360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,26 (s, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,88 (d, 1 H, J = 3,5Hz), 4,74 (q, 1 H), 4,63 (m, 2H),4,41 (dd, 1 H), 4,24 (dd, 1 H), 4,14 (dd, 1 H), 3,86 (s, 3 H), 3,71 (m, 1 H), 3,68 (s, 6 H), 3,53 (m, 1 H), 3,45 (m, 1 H), 3,32 (m, 2 H), 3,27 (dd, 1 H), 2,85 (m, 1 H), 2,65 (d, 1H, OH), 2,37 (d, 1H, OH), 1,37 (d, 3H) Massenspektrum (FAB), m/e, 647 (M⁺+ H) M⁺ von C₃₁H₃₄O₁₅,646

Beispiel 19 Etoposid-4'-[2-(methyl)anthrachinon]carbonat

CH₃

Zu einer magnetisch gerührten Losung von Diphosgen (145μΙ, 1,12 mMol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (3 ml) gibt man unter einer Stickstoffatmosphare langsam wahrend 3 Minuten eine Losung von 2-(Hydroxymethyl)-anthrachinon (505 mg, 2,12 mMol) in trockenem Tetrahydrofuran (21 ml), welche wasserfreies Pyndin (180μΙ, 2,23 mMol) enthalt Die Mischung wird 5 Minuten beiOXund 15 Minuten bei Zimmertemperatur gerührt, dann gibt man zu dieser Losung (die einen weißen Niederschlag enthalt) bei 0⁰C mit einer Kanüle schnell eine kalte Losung von Etoposid (1,17g, 1,99 mMol) in trockenem Tetrahydrofuran (24 ml), die Ν,Ν-Diisopropylethylamin (420μΙ, 2,41 mMol) enthalt Die Mischung wird 65 Stunden unter einer Stickstoffatmosphare im Dunklen gerührt, auf40°C erwärmt, 6 Stunden und langer gerührt und mit dem Phosphatpuffer mit pH 7 (25 ml). Wasser (150 ml) und Ethylacetat (350 ml) partitioniert Die organische Schicht wird mit Wasser (100 ml) und Kochsalzlosung (150ml) gewaschen und über Na₂SO₄/MgSO₄ getrocknet Nach dem Rotationsverdampfen und anschließender Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung eines Elutionsgradienten von 0-2% MeOH in Methylenchlorid erhalt man 97,2mg (6%) der reinen Titelverbindung als gelben Feststoff

IR (KBr) 1774 (Lacton), 1733 (Carbonat), 1678 (Chinon), 1602,1506,1486,1464,1454,1435,1422,1386,1327,1 294, 1237,1160, 1131,1096,1078,933 cm"¹

360MHz ¹HNMR (CDCI₃) δ 8,33-8,28 (m, 4H), 7,84-7,78 (m, 3H), 6,81 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,28 (s, 2H) 5,97 (dd, 2 H), 5,40 (s, 2H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,5 Hz), 4,73 (q, 1H, J = 4,9 Hz), 4,66-4,62 (m, 2 H), 4,41 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H, J = 10,4 and 4,2 Hz), 3,71 (m, 1 H), 3,69 (s, 6 H), 3,56 (m, 1 H), 3,41 (m, 1 H), 3,34-3,31 (m, 2 H), 3,26 (dd, 1 H), J = 14,0 und 5,2 Hz), 2,89-2,83 (m, 1 H), 2,61 (d, 1 H, OH, J = 2,2 Hz), 2,30 (d, 1 H, OH, J = 2,4 Hz), 1,38 (d, 3 H, J = 4,9 Hz) Massenspektrum (FAB), m/e, 853 (M⁺ + H), 808,723,646,587, M⁺ von C₄₆H₄₀O₁₇,852

Beispiel 20 Etoposid-4'-(4-nitrobenzyl)carbonat

Eine magnetisch gerührte Suspension von Etoposid (5,19g, 8,82 mMol) in trockenem Acetonitril (700ml) wird bei Zimmertemperatur unter einer Stickstoffatmosphare mit N,N-Dnsopropylethylamin (2,15 ml, 12,3 mMol) versetzt, anschließend wird 4-Nitrobenzylchlorformiat (2,20g, 10,2 mMol) zugegeben Wenn nach 30 Minuten das ganze Material gelost ist, erhalt man eine blaßgelbe Losung, welche man bei Zimmertemperatur 16 Stunden rührt Das Losungsmittel wird unter Vakuum entfernt, der Ruckstand wird in Ethylacetat (500ml) gelost und mit dem Phosphatpuffer pH 7(20OmI) partitioniert und über Na₂SO₄/MgSO₄ getrocknet Nach Rotationsverdampfung erhalt man einen Feststoff, der in Ethylacetat (50ml) gelost und über ein Celit-Bett filtriert wird Das Celit wird mit frischem Ethylacetat (2 χ 25 ml) gewaschen und das vereinigte Filtrat wird langsam zu 600ml heftig gerührten Hexanen gegeben Der entstandene Niederschlag wird abfiltriert, mit Hexanen gewaschen und bei 50°C und 0,5 torr getrocknet, wobei man 6,73g (99%) der reinen Titelverbindung als sehr hellgelben Feststoff erhalt 360 MHz¹H NMR (CDCI₃) δ 8,22 (d, 2 H, J = 8,6 Hz), 7,56 (d, 2 H, J = 8,6 Hz), 6,81 (s, 1 H), 6,52 (s, 1 H), 6,27 (s, 2 H), 5,98 (d, 2 H), 5,32 (s, 2 H), 4,89 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 4,73 (q, 1 H, J = 5,0Hz), 4,65-4,61 (m, 2 H), 4,42 (dd, 1 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H, J = 10,5 and 4,0Hz), 3,74 (m, 1H), 3,66 (s, 6 H), 3,56 (m,1 H), 3,43 (m,1H), 3,36-3,31 (m, 2H), 3,27 (dd,1 H, J = 14,1 and 5,2 Hz), 2,89-2,78 (m, 1 H), 2,64 (brs, 1 H, OH), 2,37 (brs, 1 H, OH), 1,38 (d, 3H, J = 5,0Hz)

Beispiel 21 Etoposid-4'-[N,N-bis(2-chlorehtyl)]carbamat

H,CO

Eine magnetisch gerührte Losung von Etoposid (2,10g, 3,57 mMol) in trockenem Acetonitril (215ml) wird bei Zimmertemperatur unter einer Stickstoffatmosphare mit N,N-Dnsopropylethylamin (0,85ml,4,88 mMol) versetzt und auf O⁰C gekühlt Zu dieser Losung gibt man innerhalb 1 Minute mit einerSpritze Diphosgen (361,5 mg, 215 μΙ, 18,3 mMol) Nach5 Minuten bei 0⁰C wird das Reaktionsgemisch durch Zugabe von festem Bis(2-chlorethyl)aminhydrochlorid (750 mg, 4,20 mMol) gequencht, anschließend wird sofort N,N-Dnsopropylethylamin (1,60ml, 9,19 mMol) zugegeben Man rührt das Reaktionsgemisch bei 0°C 1,5 Stunden und dann bei Zimmertemperatur 1 Stunde und partitioniert mit dem Phosphatpuffer pH 5,0 (300 ml), Ethylacetat (400 ml) und Kochsalzlosung (100ml) Die organische Phase wird mit Kochsalzlosung (3 x 150ml) gewaschen und über Na₂SO₄ZMgSO₄ getrocknet Nach Rotationsverdampfung und anschließender Flash-Chromatographie an Sihcagel unter Verwendung eines Elutionsgradienten von 0 bis 4% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 1,71 g (63%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff

IR (KBr) 1773,1728,1602,1506,1486,1468,1420,1338,1236,1191,1160,1130,1097,1077,1038,1 003,933,890,864cm"¹ 360MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,80 (s, 1 H), 6,52 (s, 1 H), 6,26 (brs, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,89 (d, 1H, J = 3,3Hz),4,73 (q, 1 H, J = 4,8Hz), 4,64-4,61 (m, 2H),4,41 (dd, 1 H), 4,23-4,14 (m, 2H),3,81-3,67 (m, 9H), 3,67 (s, 6H), 3,57 (m, 1 H), 3,42 (m, 1 H),3,34-3,31 (m, 2H), 3,27 (dd, 1 H, J = 14,1 and 5,2 Hz), 2,90-2,80 (m, 1 H), 2,75(brs, 1 H, OH), 2,55 (brs, 1 H, OH), 1,38 (d, 3H, J = 4,8Hz) Massespektrum (FAB), m/e, 756 (M⁺ + H), 550 (M-Zucker) M⁺ von C₃₄H₃₉CI₂NO₁₄,755 hoch auflosendes Massespektrum (FAB), m/e, 7551725 (M⁺), M⁺ von C₃₄H₃₉CI₂NO₁₄,755 1747

Beispiel 22 EtoposicW-methylcarbamat

OCH₃

•^C-NHCH.

Il

Eine magnetisch gerührte Losung von Etoposid (2,00g, 3,40 mMol) in trockenem Acetonitril (200ml) wird mit N,N-Dnsopropylethylamin (1,66ml, 9,53 mMol) versetzt und unter einer Stickstoffatmosphare auf 0⁰C gekühlt Zu dieser Losung gibt man schnell mit einer Spritze Phosgen (1,93M in Toluol, 2,20ml, 4,42 mMol) Das Reaktionsgemisch wird 10 Minuten bei O⁰C gerührt und dann schnell zu 40% wäßrigem Methylamin (5,86ml, 6,80 mMol) gegeben Das Gemisch wird 30 Minuten bei 0⁰C gerührt und dann mit Ethylacetat (350 ml) und 0,1 N Salzsaure (150ml) partitioniert Die organische Schicht wird mit Wasser (200 ml) und Kochsalzlosung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet Nach Rotationsverdampfung und anschließender Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 2% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 673 mg (31 %) der reinen Titelverbindung

IR (KBr) 1775 (sh), 1740,1604,1517,1490,1425,1335,1 238,1168,1134,1104,1 080,1040,1010,936cm~¹ 300MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,79 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,24 (s, 2H), 5,96 (d, 2H), 5,01 (t, 1 H),4,87 (d, 1 H),4,72 (q, 1 H), 4,64-4,60 (m, 2H), 4,40 (m, 1 H),4,23-4,12 (m, 2H), 3,76-3,70 (m, 1 H), 3,66 (s, 6H), 3,54 (m, 1 H), 3,42 (m, 1 H), 3,37-3,20 (m, 3H), 2,90-2,82 (m, 1 H), 2,83 (d, 3H), 2,70 (br s, 1 H, OH), 2,47 (brs, 1 H, OH), 1,36 (d, 3H) Massespektrum (FAB), m/e, 646 2111 (M⁺ + H), fur C₃₁H₃₅NO₁₄ 646 2136

Beispiel 23 Etoposid-4'-carbamat

vuc<

Der4'-Chlorameisensaureester von Etoposid wird in situ aus 2,00g Etoposid gemäß dem Verfahren von Beispiel 22 hergestellt, erwird mit wäßrigem Ammoniumhydroxid (29,8% NH₃,237 μΙ, 3,74 mMoDgequencht, das entstandene Reaktionsgemisch wird aufgearbeitet und nach dem in Beispiel 22 beschriebenem Verfahren gereinigt, wobei man 0,99g (46%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff erhalt

IR (KBr) 1776,1742 (sh), 1608,1510,1490,1425,1350,1238,1165,1133,1100,1 080,1038,1 010,935cm"¹ 300MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,80 (s, 1 H), 6,53 (s, 1 H), 6,24 (s, 2H), 5,95 (d, 2H), 5,94 (br s, 2H),4,88 (d, 1 H),4,73 (q, 1 H),4,63-4,59 (m, 2 H), 4,39 (m, 1 H), 4,20 (m, 1 H),4,17 (dd, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 3,67 (s, 6 H), 3,54 (m, I H), 3,38 (m, 1 H), 3,33-3,23 (m, 3 H), 2,90-2,82 (m, 1 H), 2,77 (br s, 1H, OH), 2,58 (brs, 1H, OH), 1,36 (d, 3H)

Massespektrum (FAB), m/e 632 1973 (M⁺ + H), fur C₃₀H₃₃NO₁₄ 632 1979

Beispiel 24 Etoposid-^-dimethylcarbamat

Der^-Chlorameisensaureester von Etoposid wird in situ aus 2,00g Etoposid gemäß dem in Beispiel 22 beschriebenen Verfahren hergestellt und wird mit reinem Dimethylamin (0,60 ml, 8,9 mMol) gequencht Das entstandene Reaktionsgemisch wird wie in Beispiel 22 aufgearbeitet und das Produkt einer Flash-Chromatographie an Silicagel unterzogen, wobei Ethylacetat/Hexan im Verhältnis von 3 1 verwendet wird Man erhalt 1,12g (50%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff IR (KBr) 1775,1 733,1605,1 514,1492,1395,1340,1 239,1165,1132,1100,1080,1040,1007,935cm"¹ 300 MHz' H NMR (CDCI₃) δ 6,79 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,24 (brs, 2 H), 5,96 (d, 2 H),4,88 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 4,73 (q, 1 H, J = 5 Hz), 4,62 (dd, 1 H), 4,43-4,06 (m, 2 H), 3,68 (m, 1 H), 3,66 (s, 6 H), 3,56 (m, 1 H), 3,39 (m, 1 H), 3,33-3,23 (m, 3 H), 3,08 (br s, 3 H), 2,96 (br s, 3 H), 2,91-2,82 (m,1 H), 2,76 (d,1 H, J = 2,2 Hz, OH), 2,54 (d,1 H, J = 2,6 Hz, OH), 1,37 (d, 3 H, J = 5Hz) Massespektrum (FAB), m/e, 660 (M⁺ + H)JUrC₃₂H₃₇NO₁₄ = 659

Beispiel 25 Etoposid-4'-hydrazid

H,C(

Der4'-Chlorameisensaureester von Etoposid wird in situ aus 2,00g Etoposid nach dem in Beispiel 22 beschriebenen Verfahren hergestellt und wird mit wasserfreiem Hydrazin (0,86 ml, 27,2 mMol) gequencht Das Reaktionsgemisch wird 1,5 Stunden bei 0°C gerührt und dann mit Ethylacetat (250 ml) und Phosphatpuffer (pH 7,0,100 ml) partrtioniert Die organische Schicht wird mit Kochsalzlosung gewaschen und über K₂SO₃ getrocknet Nach Rotationsverdampfung und anschließender Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 4% Methanol in Ethylacetat erhalt man 1,52g der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff.

IR (KBr) 1774,1 604,1507,1488,1424,1390,1339,1 238,1163,1132,1100,1078,1038,1004,932 cm"' 300 MHz ¹H NMR (CDCI₃/drop d 6-DMSO) δ 6,72 (s, 1 H), 6,37 (s, 1 H), 6,11 (s, 2 H), 5,83 (d, 2 H), 4,81 (d, 1 H, J = 3,0 Hz), 4,60 (q, 1 H, J = 4,9Hz), 4,44 (d, 1H, J = 4,9Hz), 3,39-3,30 (m, 2H), 4,12-4,00 (m, 2H), 3,59-3,12 (m, 6H), 3,52 (s, 6H), 2,76-2,66 (m, 1 H), 1,23 (d,3H,J = 4,9Hz)

Massespektrum (FAB), m/e, 647 (M⁺ + H), M⁺ von C₃₀H₃₄N₂O₁₄ ist 646

Beispiel 26

a) Etoposid-4'-(2-dimethylaminoethyl)carbonat

Eine magnetisch gerührte Losung von Etoposid (2,00g, 3,40 mMol) in trockenem Acetonitril (250ml) wird mit N,N-Dnsopropylethylamin (1,30ml, 7,48 mMol) versetzt und unter einer Stickstoffatmosphare auf 0°C gekühlt Zu dieser Losung wird mit einer Spritze schnell Phosgen (1,93M in Toluol, 1,94ml) gegeben und das Gemisch 5 Minuten bei 0⁰C gerührt 2-Dimethylaminoethanol (0,51 ml, 5,10 mMol) wird zugegeben und das Reaktionsgemisch 1 Stunde gerührt, danach wird das Losungsmittel unter Vakuum entfernt und der feste Ruckstand wird in Methylenchlorid (300ml) gelost Die Losung wird mit gesättigtem wäßrigem Natnumbicarbonat (150ml) und Kochsalzlosung (150ml) partitioniert und über MgSO₄ getrocknet Nach Rotationsverdampfung und anschhedender Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 5% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 1,88g (79%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff IR (KBr) 1775,1 606,1511,1490,1470,1424,1340,1238,1167,1136,1100,1 080,1040,1 005,936cm"¹ 300MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,52 (s, 1 H), 6,25 (s, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,88 (d, 1 H, J = 3,4Hz), 4,73 (q, 1 H, J = 5,0Hz), 4,65-4,60 (m, 2H),4,41 (m,1 H),4,29 (t,2H, J = 6,0Hz),4,22 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1H, J = 6,1 and 10,6Hz), 3,74 (m, 1 H), 3,67 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,42 (m, 1 H), 3,34-3,23 (m, 3H), 2,91 = 2,79 (m, 1 H), 2,64 (t, 2H, J = 6,0Hz), 2,28 (s, 6H>, 1,38 (d, 3H), J = 5,0Hz) Massespektrum (FAB), m/e, 704 (M⁺ + H), M⁺ von C₃₄H₄₁NO₁₆ = 703

b) Etoposid-4'-(2-dimethylaminoethyl)carbonathydrochlondsalz

Eine Losung der in a) erhaltenen Verbindung (510mg, 0,725mMol) in trockenem Methylenchlorid (50ml) wird unter einer Stickstoffatmosphare auf OTgekuhlt und es wird eine Losung von wasserfreier Salzsaure (1,0 M in Ethylether, 870μΙ, 0,87 mMol) unter Ruhren zugegeben Das Losungsmittel wird von dem entstandenen öligen Produkt abdekantiert, der Ruckstand wird dann mit Ethylether (25ml) verrieben, wobei man einen kristallinen Stoff enthalt Das dekantierte Losungsmittel wird mit Ethylether (100 ml) verdünnt, wobei man zusatzliches Produkt enthalt Nach dem Filtrieren und Trocknen unter Vakuum erhalt man 50mg (95%) der reinen Titelverbindung

IR (KBr) 1775,1606,1 512,1487,1467,1422,1340,1238,1161,1132,1098,1 079,1038,1 004,935cm"¹ 300MHz¹HNMR(CDCI₃)Oe^O(S, IH), 6,33 (s, 1H),6,11 (s,2H),5,81 (dd, 2H),4,80(d, 1 H, J = 3,2Hz),4,58-4,51 (m,3H),4,42 (d, 1 H, J = 5,4 Hz), 4,34 (d, 1 H, J = 7,5 Hz), 4,31 (m, 1 H), J = 7,5 Hz), 4,31 (m, 1 H), 4,08 (m, 1 H), 4,00 (dd, 1 H, J = 4,3 and 10,1 Hz), 3,52 (s, 6H), 3,53-3,07 (m, 8H), 2,91-2,79 (m, 1 H), 2,50 (br s, 6H), 1,20 (d, 3H, J = 4,9Hz) Massespektrum (FAB), m/e 704 M⁺ + H von C₃₄H₄INO₁₆ HCI = 704

Beispiel 27

a) Etoposid-4'-(2-dimethylaminoethyl)carbamat

H,C(

-^CNHCH-CH-NiCH )

Il i * *"

Das in Beispiel 26 a) beschriebene Verfahren wird wiederholt, wobei jedoch 2-Dimethylaminoethylamin (0,56 ml, 5,10 mMol) anstelle von 2-Dimethylaminoethanol verwendet; nach dem Entfernen von Acetonitril erhalt man den rohen Feststoff Dieser Feststoff wird in Methylenchlorid gelost und nach Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 1-10% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 1,71 g (71,5%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff IR (KBr) 1776,1736,1603,1507,1486,1465,1422,1383,1338,1236,1165,1134,1102,1080,1042,1 006cm~¹ 300MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,24 (s, 2H), 5,97 (d, 2H), 5,79 (br t, 1H, NH), 4,88 (d, 1 H, J = 3,4Hz), 4,73 (q, 1H,J = 4,9Hz), 4,58-4,50 (m, 2H), 4,41 (m, 1H),4,24-^t,13(m, 2H), 3,71 (m, 1 H), 3,67 (s,6 H), 3,57 (m, 1 H), 3,44-3,20 (m, 6H), 2,91-2,79 (m, 1H), 2,52 (br t, 2 H), 2,28 (s,6H),1,37 (d,3H, J =4,9Hz) Massespektrum (FAB), m/e, 703 (M⁺ + H), M⁺von C₃₄H₄₂N₂O₁₄ = 702

b) Etoposid-4'-(2-dimethylaminoethyl)carbamathydrochlondsalz

Eine Losung derma) erhaltenen Verbindung (503,7 mg, 0,717 mMol) in trockenem Methylenchlorid (125 ml) wird unter einer Stickstoffatmosphare auf 0⁰C gekühlt Zu dieser Losung tropft man unter magnetischem Ruhren eine Losung von wasserfreier Salzsaure (1,OM in Ethylether, 0,72ml, 0,72 mMol). Das Reaktionsgemisch wird bei Zimmertemperatur 30 Minuten gerührt, mit Ethylether (350ml) versetzt und der entstandene Niederschlag wird abfiltriert und unter Vakuum getrocknet, wobei man 395 mg (75%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff erhalt

IR (KBr) 1776,1739,1604,1 510,1485,1466,1422,1390,1338,1237,1164,1133,1099,1080,1039,1005cm"' 300MHz¹H NMR (CDCI₃/drop d6-DMSO) δ 7,32 (brt, 1 H), 6,44 (s, 1 H), 6,02 (s, 1 H), 5,78 (s, 2 H), 5,51 (s, 2H), 4,56 (d, 1 H, J = 4,2Hz), 4,50 (d, 1 H, J = 3,3 Hz), 3,46 (d, 1 H, J = 3,9 Hz), 4,26 (q, 1H, J = 4,9Hz), 4,10 (d, 1 H, J = 5,3 Hz), 4,04 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 3,98 (m, 1 H), 3,76 (m, 1 H), 3,70 (dd, 1 H), 3,18 (s, 6H), 3,20-2,70 (m,8H), 2,39 (s, 6H), 0,88 (d,3H, J = 4,9Hz) Massespektrum (FAB), m/e, 703 M⁺ + H von C₃₄H₄₂N₂O₁₄ HCI = 703

Beispiel 28

a) Etoposid-4'-(2-dimethy!aminoethyl)thiocarbonat

SCH₀CH-N(CH₇)-

Il ^{Δ Z J Z}

Das in Beispiel 26 a) beschriebene Verfahren wird wiederholt, wobei anstelle von 2-Dimethylaminoethanol 2-Dimethylaminoethanthiolhydrochlorid (719mg, 5,10 mMol) verwendet wird Nach 3 Stunden ist die Reaktion beendet Das Losungsmittel wird unter Vakuum entfernt und der Ruckstand wird in Methylenchlorid gelost Nach Flash-Chromatographie an Silicagel unter Verwendung von 5% Methanol in Methylenchlorid erhalt man 821 mg (33,6%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff IR (KBr) 1775,1732,1604,1 510,1490,1465,1424,1340,1237,1162,1133,1 098,1078,1040,1005,933,863,765cm"¹ 300MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,51 (s, 1 H), 6,25 (s, 2H), 5,97 (dd,2H), 4,89 (d, 1 H, J = 3,4Hz), 4,73 (q, 1H, J = 5Hz), 4,64-4,60 (m, 2 H), 4,41 (m, 1 H), 4,24-4,13 (m, 2 H), 3,73 (m, 1 H), 3,67 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,41 (m, 1 H), 3,38-3,23 (m, 3 H), 3,02 (t, 2 H), 2,89-2,79 (m, 1 H), 2,59 (t, 2 H), 2,26 (s, 6 H), 1,37 (d, 3 H, J = 5Hz)

b) Etoposid-4'-(2-dimethylaminoethyl)thiocarbamathydrochloridsalz

Das in Beispiel 26 (b) beschriebene Verfahren wird wiederholt, wobei die in fa) erhaltene Verbindung (459 mg, 0,639 mMol) verwendet wird Nach Zugabe von Salzsaure wird das Volumen des Reaktionsgemisches unter Vakuum auf 20ml reduziert, dann wird Ethylether (150 ml) zugegeben Der entstandene Niederschlag wird abfiltriert und unter Vakuum getrocknet, wobei man 373 mg (81 %) der reinen Titelverbindung erhalt

IR (KBr) 1775,1733,1604,1 510,1487,1465,1422,1340,1237,1160,1133,1103,1078,1 038,1005cm"¹.

300MHz ¹HNMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,50 (s, 1 H), 6,27 (s, 2H), 5,99 (dd, 2H), 4,90 (d, 1 H, J = 3,4Hz), 4,73 (q, 1H, J = 5Hz), 4,63-4,59 (m, 2H), 4,43 (m, 1 H), 4,25^,13 (m, 2H),3,73 (m, 1 H), 3,68 (s, 6H), 3,56 (m, 1 H), 3,45-3,22 (m, 8H), 2,90-2,80 (m, 1 H), 2,79 (s, 6H), 1,37 (d, 3H, J = 5Hz)

Massespektrum (FAB), m/e 720 (M⁺ + H), M⁺ von C₃₄H₄₁NO₁₄S = 719

Beispiel Etoposid^'-methylsulfinylacetat

Zu einer magnetisch gerührten Losung der Verbindung von Beispiel 6(1,0Og, 1,48 mMol) in Methylenchlorid (50ml) gibt man bei -78°C unter einer Stickstoffatmosphare m-Chlorperbenzoesaure (m-CPBA, 325mg, 1,51 mMol, 80% von Aldrich) und rührt das Reaktionsgemisch 1 Stunde bei -78°C Zusätzliche m-CPBA (33 mg) wird zugegeben und das Reaktionsgemisch bei -78°C 1 Stunde gerührt, dann wird es mit gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat (100ml) partitioniert und mit Methylenchlorid (5 x 50ml) extrahiert Die vereinigten organischen Extrakte werden mit Kochsalzlosung (100ml) gewaschen und über MgSO₄ getrocknet Nach dem Verdampfen unter Vakuum erhalt man 900mg (86%) der Titelverbindung mit einem Reinheitsgrad von

mehr als 95%, der durch NMR- und HPLC-Analysen ermittelt wird

IR (KBr) 1769,1603,1506,1486,1466,1422,1337,1 237,1160,1131,1100,1 078,1038,1 005,961 cm"¹ 300MHz ¹H NMR (CDCI₃) δ 6,81 (s, 1 H), 6,51 (s, 1 H), 6,25 (br s, 2H), 5,95 (d, 2H), 4,87 (d, 1 H), 4,72 (q, 1 H), 4,61-4,58 (m, 2H), 4,40 (m, 1 H), 4,26-4,08 (m, 3H), 3,82 (d, 1H, J = 13,2Hz), 3,70 (m, 1 H), 3,64 (s, 6H), 3,55 (m, 1 H), 3,40 (m, 1 H), 3,33-3,25 (m, 3H),

2,90-2,80 (m, 1 H), 2,83 (s, 3H), 1,36 (d, 3H, J -4,8Hz)

Massespektrum (FAB), m/e, 693 1869 (M" + H), fur C₃₂H₃₆O₁₈S 693 1853

Beispiel

Das in Beispiel 1 beschriebene allgemeine Verfahren wird wiederholt, wobei die Saurechlonde und 4'-Dimethylepipodophyllothoxinglucoside (Formel I), die im folgenden aufgeführt werden, die entsprechenden 4'-Ester ergeben

Verbindung der Formel (I)

Saurechlond

Produkt

R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R^CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = CH₃ R¹ = Thienyl R¹ = Thienyl R¹ = Thienyl R¹ = Thienyl R¹ = 2-Thienyl R¹ = 2-Thienyl R¹ = 2-Thienyl

Cyclohexancarbonsaurechlorid

Cyclopropancarbonsaurechlorid

5-Fluor-4-methylbenzoylchlorid

Phenylacetylchlorid

4-Cyanbenzoylchlorid

Metholxyacetylchlorid

4-(4-Methoxyphenyl)butyroylchlond

4-N itrobenzoy Ich lorid

2-Mercaptobenzoylchlond

6-Acetamidohexanoylchlorid

2-Chinoxalincarbonylchlond

Bromacetylchlond

Methylthioacetylchlorid

4-Dimethylaminobutyrylchlorid

Isonicotinoylchlorid

Acryloylchlond

Octanoylchlorid

Benzoylchlorid

Etoposid-4'-cyclohexanoat Etoposid-4'-cyclopropanoat Etoposid-4'-(5-fluor-4-methyl)benzoat Etoposid-4'-phenylacetat Etoposid-4'-(4-cyano)benzoat Etoposid-4'-methoxyacetat Etoposid-4'-(4-methoxy-phenyl)butyrat Etoposid-4'-(4-nitro)benzoat Etoposid-4'-(2-mercapto)benzoat Etoposid-4'-(6-acetamido)hexanoat Etoposid-4'-(2-chinoxahncarboxyloat) Teniposid-4'-bromacetat Ten iposi d-4'-methylthioacetat Teniposid-4'-(4-dimethylamino)butyrat Teniposid-4'-isonicotinoat Teniposid-4'-acrylat Teniposid-4'-octanoat Teniposid-4'-benzoat

Beispiel 31

Das allgemeine in Beispiel 26 beschriebene Verfahren wird wiederholt, wobei die unten aufgeführten Alkohole verwendet werden und man die entsprechenden 4'-Carbonate erhalt

Alkohol Produkt

Allylalkohol Etoposid-4'-allylcarbonat

Phenol Etoposid-4'-phenylcarbonat

4-Nitrophenol Etoposid-4'-(4-nitro)phenylcarbonat

2-Bromethanol Etoposid-4'-(2-brom)ethylcarbonat

i-Propanol Etoposid-4'-i-propylcarbonat

Beispiel 32

Das allgemeine Verfahren von Beispiel 21 wird wiederholt, wobei die unten aufgeführten Amine verwendet werden und man die entsprechenden 4'-Carbamate erhalt

Amin Produkt

Phenylamin Etoposid-4'-(N-phenyl)carbamat

Piperidin 4'-PipendyIcarbonyl-etoposid

Allylamin Etoposid-4'-allylcarbamat

Benzylamin Etoposid-4'-benzylcarbamat

1,1-Dimethylhydrazine Etoposid-4'-(1,1-dimethyl)hydrazid

Ethylendiamin Etoposid-4'-(2-aminoethyl)carbamat

Claims (1)

1. Patentansprüche:

   1. Verfahren zur Herstellung eines Zwischenproduktes der allgemeinen Formel R¹

   (XIII)

   CH.

   -OCH₃ IC(O)Cl

   worin R¹ und R² wie in Anspruch 1 definiert sind, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel (XIV)