DE60205376T2

DE60205376T2 - 2,6,9-substituierte purinderivate und ihre verwendung bei der behandlung proliferativer krankheiten

Info

Publication number: DE60205376T2
Application number: DE60205376T
Authority: DE
Inventors: M. Peter Arbroath FISCHER; Mike Jarman; Edward Batts Hill MCDONALD; Bernard Sutton NUTLEY; Florence Raynaud; Stuart Sutton WILSON; Paul Abinger Common WORKMAN
Original assignee: Cyclacel Ltd; Cancer Research Technology Ltd
Current assignee: Cyclacel Ltd; Cancer Research Technology Ltd
Priority date: 2001-06-27
Filing date: 2002-06-27
Publication date: 2006-04-06
Anticipated expiration: 2022-06-28
Also published as: JP2004521148A; GB2378180B; US7612079B2; WO2003002565A1; EP1399446B1; US20050009846A1; DE60205376D1; GB2378180A8; EP1399446A1; GB2378180A; JP4381804B2; GB0214909D0; ATE301123T1; GB2378180B8

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue 2,6,9-substituierte Purinderivate und deren biologische Anwendungen. Insbesondere betrifft die Erfindung Purinderivate mit antiproliferativen Eigenschaften, die bei der Behandlung von proliferativen Störungen, wie Krebs, Leukämie, Psoriasis und ähnlichem, nützlich sind.
Einleitung, Voranschreiten und Abschluß des Säugerzellzyklus werden durch verschiedene Komplexe von cyclinabhängiger Kinase (CDK), welche für das Zeltwachstum entscheidend sind, reguliert. Diese Komplexe umfassen wenigstens eine katalytische Untereinheit (die CDK selbst) und eine regulatorische Untereinheit (Cyclin). Einige der wichtigeren Komplexe für die Zellzyklusregulierung umfassen Cyclin A (CDK1 – auch bekannt als cdc2, und CDK2), Cyclin B1–B3 (CDK1), Cyclin C (CDK8), Cyclin D1–D3 (CDK2, CDK4, CDK5, CDK6), Cyclin E (CDK2), Cycline K und T (CDK9) und Cyclin H (CDK7). Jeder dieser Komplexe ist an einer bestimmten Phase des Zellzyklus beteiligt.
Die Aktivität von CDK wird posttranslational durch vorübergehende Verbindungen mit anderen Proteinen und durch Veränderungen ihrer intrazellulären Lokalisierung reguliert. Tumorentwicklung ist eng mit einer genetischen Veränderung und Deregulierung von CDK und deren Regulatoren verknüpft, was nahelegt, daß Inhibitoren von CDK nützliche Antikrebstherapeutika sein können. Tatsächlich legen frühe Ergebnisse nahe, daß sich transformierte und normale Zellen in ihren Erfordernissen für z.B. Cyclin A/CDK2 unterscheiden und daß es möglich sein kann, neue antineoplastische Mittel ohne die allgemeine Wirtstoxizität, die man bei herkömmlichen zytotoxischen und zytostatischen Arzneimitteln beobachtet, zu entwickeln.
Die Funktion von CDK besteht darin, bestimmte Proteine, einschließlich z.B. Retinoblastomproteine, Lamine, Histon H1 und Bestandteile der mitotischen Spindel, zu phosphorylieren und damit zu aktivieren oder zu deaktivieren. Die durch CDK vermittelte katalytische Stufe umfaßt eine Phosphorübertragungsreaktion von ATP auf das makromolekulare Enzymsubstrat. Von mehreren Gruppen von Verbindungen (besprochen z.B. in N. Gray, L. Détivaud, C. Doerig, L. Meijer, Curr. Med. Chem. 1999, 6, 859) wurde gefunden, daß sie antiproliferative Eigenschaften aufgrund von CDK-spezifischem ATP-Antagonismus aufweisen.
Die WO 98/05335 (CV Therapeutics Inc.) offenbart 2,6,9-trisubstituierte Purinderivate, welche selektive Inhibitoren für Zellzykluskinasen sind. Diese Verbindungen sind nützlich bei der Behandlung von Autoimmunkrankheiten, z.B. rheumatoider Arthritis, Lupus, Typ I-Diabetes, Multipler Sklerose, bei der Behandlung von Krebs, kardiovaskulärer Krankheit, wie Restenose, Empfänger-gegen-Transplantat-Reaktion, Gicht, polyzystischer Nierenerkrankung und anderen proliferativen Erkrankungen, deren Pathogenese eine abnormale Zellproliferation umfaßt.
Die WO 99/07705 (The Regents of the University of California) offenbart Purinanaloge, welche unter anderem Proteinkinasen, G-Proteine und Polymerasen hemmen. Spezieller betrifft die Erfindung Verfahren zur Verwendung dieser Purinanalogen zur Behandlung zellulärer proliferativer Erkrankungen und neurodegenerativer Erkrankungen.
Die WO 97/20842 (CNRS) offenbart ebenfalls Purinderivate, die antiproliferative Eigenschaften zeigen und welche bei der Behandlung von Krebs, Psoriasis und neurodegenerativen Störungen nützlich sind.
Die vorliegende Erfindung will neue 2,6,9-substituierte Purinderivate, insbesondere solche mit antiproliferativen Eigenschaften, bereitstellen.
In einem ersten Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, worin
R₂ 3-Hydroxypiperidin-1-yl oder NHCH(R₄)CH(R₃)OH ist, worin R₃ Wasserstoff oder Methyl ist und R₄ Methyl, Ethyl oder Isopropyl ist,
R₆ 3-Nitrophenylamino, 3,4-Dimethoxybenzylamino, Pyrid-2-yl-methylamino, Pyrid-4-yl-methylamino oder Indan-5-amino ist und
R₉ Isopropylcyclopentanyl ist.
In einer bevorzugten Ausführungsform ist R₂ NHCH(CHMe₂)CH₂OH oder NHCH(CH₂Me)CH₂OH.
In einer bevorzugteren Ausführungsform der Erfindung ist die Verbindung der Formel I unter den folgenden ausgewählt:
In einem weiteren Aspekt betrifft die Erfindung eine Verbindung, ausgewählt unter den folgenden:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein optisches Isomer einer Verbindung, wie sie hierin zuvor beschrieben wurde.
Wie er hierin verwendet wird, ist der Begriff "optisches Isomer" synonym zu dem Begriff "Enantiomer" und bezeichnet ein Molekül mit einem chiralen Zentrum, welches in zwei verschiedenen isomeren (sogenannten "enantiomeren") Formen vorliegen kann, wobei jedes Enantiomer ein Spiegelbild des anderen ist. Die zwei möglichen Formen sind als dextrorotatorisch (+) und lävorotatorisch (–) bekannt, wobei jede Form die Ebene von polarisiertem Licht in entgegengesetzten Richtungen um ein gleiches Maß dreht.
Somit kann, wenn R₂NHCH(R₄)CH(R₃) ist, R₂ in einer oder mehreren der folgenden Konformationen oder in Gemischen davon vorliegen:
In gleicher Weise kann, wenn R₂ 3-Hydroxypiperidin-1-yl ist, R₂ in einer oder mehreren der folgenden Konformationen oder in Gemischen davon vorliegen:
In einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform liegt die Verbindung der Erfindung in der Form eines Razemats vor.
Wie er hierin verwendet wird, bezeichnet der Begriff "Razemat" ein Gemisch aus gleichen Mengen der (+)- und (–)-Enantiomere einer optisch aktiven Verbindung. Solch ein Gemisch weist keine optische Aktivität auf, d.h. es dreht nicht die Ebene von polarisiertem Licht. Dem Fachmann wird klar sein, daß Verbindungen der Erfindung, die mehr als ein chirales Zentrum enthalten, als zwei verschiedene Stereoisomere vorliegen können, von denen jedes in zwei enantiomeren Formen vorhanden sein kann.
Ein zweiter Aspekt liefert eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung der vorliegenden Erfindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel, Bindemittel oder Träger oder einem Gemisch davon umfaßt.
Ein dritter Aspekt betrifft die Verwendung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer proliferativen Störung.
Wie er hierin verwendet wird, umfaßt der Ausdruck "Herstellung eines Medikaments" die Verwendung einer Verbindung der Erfindung direkt als das Medikament zusätzlich zu dessen Verwendung in einem Durchmusterungsprogramm für die Identifizierung weiterer Mittel oder in jedem Stadium der Herstellung solch eines Medikaments.
Ganz besonders bevorzugt ist die proliferative Störung Krebs oder Leukämie.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist die proliferative Störung Psoriasis.
In einer noch bevorzugteren Ausführungsform der Erfindung wird die Verbindung in einer Menge verabreicht, die ausreicht, um wenigstens ein CDK-Enzym zu hemmen.
Noch bevorzugter ist das CDK-Enzym CDK2.
In einem vierten Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Erfindung als ein antimitotisches Mittel.
Mitose ist der Vorgang, durch welchen der Körper wächst und Zellen ersetzt. Mitose bezeichnet die indirekte Teilung einer Zelle und besteht aus einem Komplex von verschiedenen Vorgängen, wodurch die zwei Tochterkerne normalerweise identische Gegenstücke der Anzahl an Chromosomen erhalten, die für die somatischen Zellen der Spezies charakteristisch sind. Mitose wird in vier Phasen eingeteilt: Prophase, Metaphase, Anaphase und Telophase.
Der Begriff "Mitose" wird im allgemeinen austauschbar mit Zellteilung verwendet, aber strenggenommen bezeichnet er die Kernteilung, wogegen Cytokinese die Teilung des Cytoplasmas bezeichnet.
Wie er hierin verwendet wird, bezeichnet der Begriff "antimitotisches Mittel" ein Mittel, welches Mitose und/oder Cytokinese hemmt oder verhindert.
In einem fünften Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer neurodegenerativen Störung. Typischerweise umfassen neurodegenerative Störungen Störungen des zentralen Nervensystems, die durch einen schrittweisen oder progressiven Verlust an Nervengewebe gekennzeichnet sind. Beispiele umfassen Alzheimer'sche Krankheit und Parkinsonsche Krankheit.
Besonders bevorzugt wird die Verbindung der Erfindung zur Behandlung von Neuronenapoptose verwendet.
Ein sechster Aspekt betrifft die Verwendung einer Verbindung der Erfindung bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer viralen Erkrankung.
Für diesen Aspekt wird die Verbindung der Erfindung vorzugsweise in einer Menge verabreicht, die ausreicht, um wenigstens eine oder mehrere der Wirtszell-CDK zu hemmen, die an der viralen Replikation beteiligt sind, d.h. CDK2, CDK7, CDK8 und CDK9 [Wang, D., De la Fuente, C., Deng, L., Wang, L., Zilberman, I., Eadie, C., Healey, M., Stein, M., Denny, T., Harrison, L. E., Meijer, L., Kashanchi, F. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 transcription by chemical cyclindependent kinase inhibitors. J. Virol. 2001; 75: 7266–7279].
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform kann die Verbindung der Erfindung zur Behandlung einer oder mehrerer mit Virus in Verbindung stehender Krankheiten verwendet werden, wie humanem Cytomegalovirus (HCMV), Herpes simplex-Virus Typ 1 (HSV-1), humanem Immunschwächevirus Typ 1 (HIV-1) und Varicella zoster-Virus (VZV).
Ein achter Aspekt betrifft die Verwendung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung zum Hemmen einer Proteinkinase.
In einer bevorzugten Ausführungsform ist die Proteinkinase eine cyclinabhängige Kinase, besonders bevorzugt CDK2.
Es sollte klar sein, daß alle Bezugnahmen hierin auf eine Behandlung eine oder mehrere, ausgewählt unter heilender, lindernder und prophylaktischer Behandlung, umfassen. Vorzugsweise umfaßt der Begriff Behandlung wenigstens eine heilende Behandlung und/oder eine lindernde Behandlung.
Besonders bevorzugt wird die Verbindung der Erfindung oral verabreicht.
STEREO- UND GEOMETRISCHE ISOMERE
Einige der Verbindungen können als Stereoisomere und/oder geometrische Isomere vorliegen, z.B. können sie ein oder mehrere asymmetrische und/oder geometrische Zentren aufweisen und können somit in zwei oder mehr Stereoisomeren und/oder geometrischen Formen vorliegen. Die vorliegende Erfindung umfaßt die Verwendung sämtlicher der individuellen Stereoisomere und geometrischen Isomere dieser Verbindungen und von Gemischen davon. Die in den Patentansprüchen verwendeten Begriffe umfassen diese Formen, vorausgesetzt, daß diese Formen die geeignete funktionale Aktivität behalten (obwohl nicht notwendigerweise in gleichem Ausmaß).
SOLVATE
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch die Verwendung von Solvatformen der Verbindung der vorliegenden Erfindung, einschließlich Hydraten. Die in den Patentansprüchen verwendeten Begriffe umfassen diese Formen.
POLYMORPHE
Die Erfindung betrifft weiterhin die Verbindungen der vorliegenden Erfindung oder deren Verwendung (erste und zweite Aspekte) in ihren verschiedenen kristallinen Formen, polymorphen Formen und (An)Hydratformen. Es ist gut bekannt in der pharmazeutischen Industrie, daß chemische Ver bindungen in jeder dieser Formen durch geringfügiges Variieren des Verfahrens der Reinigung und/oder Isolierung aus den bei der synthetischen Herstellung dieser Verbindungen verwendeten Lösungsmitteln isoliert werden können.
MIMETIKUM
In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung kann die Verbindung eine mimetische Verbindung sein. Wie er hierin verwendet wird, bezeichnet der Begriff "Mimetikum" jeden chemischen Stoff, welcher ein Peptid, ein Polypeptid, einen Antikörper oder einen anderen organischen chemischen Stoff, welcher die gleiche qualitative Aktivität oder Wirkung wie ein Referenzmittel aufweist, umfaßt, ist aber nicht darauf beschränkt.
PHARMAZEUTISCHE SALZE
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in der Form von pharmazeutisch verträglichen Salzen verabreicht werden. Typischerweise kann ein pharmazeutisch verträgliches Salz unter Verwendung einer gewünschten Säure oder Base, soweit erforderlich, einfach hergestellt werden. Das Salz kann aus einer Lösung präzipitieren und durch Filtration gesammelt werden oder es kann durch Verdampfen des Lösungsmittels gewonnen werden.
Pharmazeutisch verträgliche Salze sind dem Fachmann auf dem Gebiet gut bekannt und umfassen z.B. solche, die von Berge et al. in J. Pharm. Sci., 66, 1–19 (1977) genannt werden. Geeignete Säureadditionssalze werden aus Säuren gebildet, welche nicht-toxische Salze ausbilden, und umfassen die Hydrochlorid-, Hydrobromid-, Hydroiodid-, Nitrat-, Sulfat-, Bisulfat-, Phosphat-, Hydrogenphosphat-, Acetat-, Trifluoracetat-, Gluconat-, Lactat-, Salicylat-, Citrat-, Tartrat-, Ascorbat-, Succinat-, Maleat-, Fumarat-, Gluconat-, Formiat-, Benzoat-, Methansulfonat-, Ethansulfonat-, Benzensulfonat- und p-Toluensulfonat-Salze.
Wenn ein oder mehrere Säurereste vorhanden sind, können geeignete pharmazeutisch verträgliche Basenadditionssalze aus Basen gebildet werden, welche nicht-toxische Salze bilden, und umfassen die Aluminium-, Calcium-, Lithium-, Magnesium-, Kalium-, Natrium-, Zink-Salze und pharmazeutisch aktive Amine, wie Diethanolaminsalze.
Darüber hinaus können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung ein oder mehrere asymmetrische Kohlenstoffatome enthalten und daher in zwei oder mehr stereoisomeren Formen vorliegen. Die vorliegende Erfindung umfaßt die einzelnen Stereoisomere der Verbindung und, soweit geeignet, die einzelnen tautomeren Formen davon zusammen mit Gemischen davon.
Eine Trennung von Diastereomeren kann durch herkömmliche Techniken erreicht werden, z.B. durch fraktionierte Kristallisation, Chromatographie oder HPLC eines stereoisomeren Gemischs von dem Mittel oder geeigneten Salz oder Derivat davon. Ein individuelles Enantiomer der Verbindung kann aus einem entsprechenden optisch reinen Zwischenprodukt hergestellt werden oder durch Auflösung, wie beispielsweise durch HPLC, des entsprechenden Razemats unter Verwendung eines geeigneten chiralen Trägers oder durch fraktionierte Kristallisation des diastereoisomeren Salzes, das durch Umsetzung des entsprechenden Razemats mit einer geeigneten optisch aktiven Säure oder Base, soweit erforderlich, gebildet wurde.
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch sämtliche geeigneten Isotopenvariationen der Verbindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon. Eine Isotopenvariation einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon ist als eine solche definiert, in welcher wenigstens ein Atom durch ein Atom mit der gleichen Atomzahl, aber einem Atomgewicht, das sich von dem Atomgewicht unterscheidet, welches man üblicherweise in der Natur findet, ersetzt ist. Beispiele für Isotope, die in die Verbindung und die pharmazeutisch verträglichen Salze davon aufgenommen werden können, umfassen Isotope von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff und Sauerstoff, wie ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O bzw. ¹⁸O. Bestimmte Isotopenvariationen der Verbindung und der pharmazeutisch verträglichen Salze davon, z.B. solche, in denen ein radioaktives Isotop, wie ³H oder ¹⁴C, enthalten ist, sind in Arzneimittel- und/oder Substrat-Gewebeverteilungsstudien nützlich. Tritierte, d.h. ³H-, und Kohlenstoff-14-, d.h. ¹⁴C-, Isotope sind wegen ihrer einfachen Herstellung und Detektierbarkeit besonders bevorzugt. Darüber hinaus kann eine Substitution mit Isotopen, wie Deuterium, d.h. ²H, bestimmte therapeutische Vorteile bieten, die aus größerer Stoffwechselstabilität resultieren, z.B. erhöhter Halbwertszeit in vivo oder geringeren Dosierungsanforderungen, und daher können sie in einigen Fällen bevorzugt sein. Isotopenvariationen der Verbindung der vorliegenden Erfindung und der pharmazeutisch verträglichen Salze davon gemäß dieser Erfindung können im allgemeinen durch herkömmliche Verfahren unter Verwendung geeigneter Isotopenvariationen geeigneter Reagenzien hergestellt werden.
Die vorliegende Erfindung umfaßt auch (soweit geeignet) die Verwendung von zwitterionischen Formen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung.
Die in den Patentansprüchen verwendeten Begriffe umfassen eine oder mehrere der soeben erwähnten Formen.
FORMULIERUNG
Die Verbindung(en) der vorliegenden Erfindung kann/können in einer pharmazeutischen Zusammensetzung formuliert sein, wie z.B. durch Mischen mit einem oder mehreren, ausgewählt unter einem geeigneten Träger, Verdünnungsmittel oder Bindemittel, unter Anwendung von Techniken, die auf dem Gebiet bekannt sind.
PHARMAZEUTISCHE ZUSAMMENSETZUNGEN
Die vorliegende Erfindung liefert eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge einer oder mehrerer Verbindungen und einen pharmazeutisch verträglichen Träger, ein Verdünnungsmittel oder ein Bindemittel (einschließlich Kombinationen davon) umfaßt.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können für die Anwendung am Menschen oder am Tier in der Human- und Veterinärmedizin sein und werden typischerweise eines oder mehrere, ausgewählt unter einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel, Träger oder Bindemittel enthalten. Verträgliche Träger und Verdünnungsmittel für die therapeutische Anwendung sind auf dem pharmazeutischen Gebiet gut bekannt und z.B. in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro Hrsg., 1985) beschrieben. Die Wahl des pharmazeutischen Trägers, Bindemittels oder Verdünnungsmittels kann unter Berücksichtigung des beabsichtigten Verabreichungswegs und von pharmazeutischer Standardpraxis ausgewählt werden. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können als oder zusätzlich zu dem Träger, Bindemittel oder Verdünnungsmittel jede(s) geeignete(n) Bindemittel, Gleitmittel, Suspendiermittel, Beschichtungsmittel oder Solubilisierungsmittel enthalten.
Beispiele für geeignete Träger umfassen Lactose, Stärke, Glucose, Methylzellulose, Magnesiumstearat, Mannitol, Sorbitol und ähnliche. Beispiele für geeignete Verdünnungsmittel umfassen Ethanol, Glycerin und Wasser.
Beispiele für geeignete Bindemittel umfassen Stärke, Gelatine, natürliche Zucker, wie Glucose, wasserfreie Lactose, frei fließende Lactose, Beta-Lactose, Getreidesüßungsmittel, natürliche und synthetische Gummis, wie Akaziengummi, Tragant oder Natriumalginat, Carboxymethylzellulose und Polyethylenglycol.
Beispiele für geeignete Gleitmittel umfassen Natriumoleat, Natriumstearat, Magnesiumstearat, Natriumbenzoat, Natriumacetat, Natriumchlorid und ähnliche.
Konservierungsmittel, Stabilisierer, Farbstoffe und sogar Aromastoffe können ebenfalls in der pharmazeutischen Zusammensetzung vorgesehen sein. Beispiele für Konservierungsmittel umfassen Natriumbenzoat, Sorbinsäure und Ester von p-Hydroxybenzoesäure. Antioxidantien und Suspendiermittel können ebenfalls verwendet werden.
In Abhängigkeit von den verschiedenen Auslieferungssystemen kann es verschiedene Zusammensetzungs-/Formulierungsanforderungen geben. Beispielhaft kann die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung für eine Verabreichung unter Verwendung einer Minipumpe formuliert sein oder über einen Schleimhautweg, z.B. als ein Nasenspray oder ein Aerosol für die Inhalation oder eine Lösung zum Einnehmen, oder parenteral, wobei die Zusammensetzung in einer injizierbaren Form formuliert wird für eine Verabreichung über z.B. einen intravenösen, intramuskulä ren oder subkutanen Weg. Alternativ kann die Formulierung so ausgelegt sein, daß sie über eine Anzahl von Wegen verabreicht werden kann.
VERABREICHUNG
Die Bestandteile der vorliegenden Erfindung können alleine verabreicht werden, aber sie werden im allgemeinen als eine pharmazeutische Zusammensetzung verabreicht werden – z.B. wenn die Bestandteile im Gemisch mit einem geeigneten pharmazeutischen Bindemittel, Verdünnungsmittel oder Träger, die unter Berücksichtigung des beabsichtigten Verabreichungswegs und von pharmazeutischer Standardpraxis ausgewählt sind, vorliegen.
Zum Beispiel kann die Zusammensetzung (z.B. oral oder topisch) in der Form von Tabletten, Kapseln, Globuli, Elixieren, Lösungen und Suspensionen, welche Geschmacks- oder Färbemittel enthalten können, für Anwendungen mit sofortiger, verzögerter, modifizierter, anhaltender, gepulster oder kontrollierter Freisetzung verabreicht werden.
Wenn die pharmazeutische Zusammensetzung eine Tablette ist, dann kann die Tablette Bindemittel enthalten, wie mikrokristalline Zellulose, Lactose, Natriumcitrat, Calciumcarbonat, zweibasisches Calciumphosphat und Glycin, Sprengmittel, wie Stärke (vorzugsweise Mais-, Kartoffel- oder Tapiokastärke), Natrium-Stärkeglycolat, Croscarmelose-Natrium und bestimmte komplexe Silikate, und Granulierungsbindemittel, wie Polyvinylpyrrolidon, Hydroxypropylmethylzellulose (HPMC), Hydroxypropylzellulose (HPC), Sucrose, Gelatine und Akaziengummi. Zusätzlich können Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, Stearinsäure, Glycerylbehenat und Talkum enthalten sein.
Feste Zusammensetzungen von einer ähnlichen Art können auch als Füllungen in Gelatinekapseln verwendet werden. Bevorzugte Bindemittel umfassen in diesem Zusammenhang Lactose, Stärke, Zellulose, Milchzucker oder Polyethylenglycole mit hohem Molekulargewicht. Für wäßrige Suspensionen und/oder Elixiere kann die Verbindung mit verschiedenen Süßungsmitteln oder Aromastoffen, Färbemitteln oder Farbstoffen, mit Emulgier- und/oder Suspendiermitteln und mit Verdünnungsmitteln, wie Wasser, Ethanol, Propylenglycol und Glycerin, und Kombinationen davon kombiniert sein.
Die Wege für die Verabreichung (Auslieferung) umfassen, sind aber nicht beschränkt auf einen oder mehrere der folgenden: oral (z.B. als eine Tablette, Kapsel oder als eine Lösung zum Einnehmen), topisch, mukosal (z.B. als ein Nasenspray oder ein Aerosol für die Inhalation), nasal, parenteral (z.B. in einer injizierbaren Form), gastrointestinal, intraspinal, intraperitoneal, intramuskulär, intravenös, intrauterin, intraokular, intradermal, intracraneal, intratracheal, intravaginal, intrazerebroventrikulär, intrazerebral, subkutan, ophthalmisch (einschließlich intravitreal oder intracameral), transdermal, rektal, bukkal, vaginal, epidural, sublingual.
Wenn die Zusammensetzung mehr als eine Verbindung umfaßt, so soll klar sein, daß nicht sämtliche der Bestandteile des Arzneimitttels über den gleichen Weg verabreicht werden müssen. In gleicher Weise gilt, wenn die Zusammensetzung mehr als einen aktiven Bestandteil umfaßt, dann können diese Bestandteile über verschiedene Wege verabreicht werden.
Wenn eine Verbindung der vorliegenden Erfindung parenteral verabreicht wird, dann umfassen Beispiele für solch eine Verabreichung eine oder mehrere der folgenden: intravenöse, intraarterielle, intraperitoneale, intrathekale, intraventrikuläre, intraaurethrale, intrasternale, intracraneale, intramuskuläre oder subkutane Verabreichung der Komponente; und/oder über die Anwendung von Infusionstechniken.
Für eine parenterale Verabreichung wird die Verbindung am besten in der Form einer sterilen wäßrigen Lösung verwendet, welche auch andere Substanzen enthalten kann, z.B. genügend Salze oder Glucose, um die Lösung isotonisch mit Blut zu machen. Die wäßrigen Lösungen sollten, falls erforderlich, in geeigneter Weise gepuffert sein (vorzugsweise auf einen pH-Wert von 3–9). Die Herstellung von geeigneten parenteralen Formulierungen unter sterilen Bedingungen ist einfach mittels pharmazeutischen Standardtechniken, die dem Fachmann auf dem Gebiet gut bekannt sind, durchzuführen.
Wie angegeben, kann/können die Komponente(n) der vorliegenden Erfindung intranasal oder durch Inhalation verabreicht werden und wird/werden in geeigneter Weise in der Form eines Trockenpulverinhalators oder einer Aerosolspraydarreichung aus einem unter Druck stehenden Behälter, einer Pumpe, einem Spray oder einem Zerstäuber unter Verwendung eines geeigneten Treibmittels, z.B. Dichlordifluormethan, Trichlorfluormethan, Dichlortetrafluorethan, Hydrofluoralkan, wie 1,1,1,2-Tetrafluorethan (HFA 134A^TM) oder 1,1,1,2,3,3,3-Heptafluorpropan (HFA 227EA^TM), Kohlendioxid oder einem anderen geeigneten Gas, ausgeliefert. Im Falle eines unter Druck stehenden Aerosols kann die Dosierungseinheit durch Bereitstellung eines Ventils zur Verabreichung einer bemessenen Menge bestimmt werden. Der unter Druck stehende Behälter, die Pumpe, das Spray oder der Zerstäuber können eine Lösung oder Suspension der aktiven Verbindung enthalten, z.B. unter Verwendung eines Gemischs von Ethanol und dem Treibmittel als das Lösungsmittel, welches zusätzlich ein Gleitmittel, z.B. Sorbitantrioleat, enthalten kann. Kapseln und Kartuschen (die z.B. aus Gelatine hergestellt sind) für die Verwendung in einem Inhalator oder Insufflator können so formuliert sein, daß sie ein Pulvergemisch aus dem Mittel und einer geeigneten Pulvergrundlage, wie Lactose oder Stärke, enthalten.
Alternativ kann/können die Komponente(n) der vorliegenden Erfindung in der Form eines Suppositoriums oder eines Pessars verabreicht werden, oder sie kann/können topisch in der Form eines Gels, eines Hydrogels, einer Lotion, einer Lösung, einer Creme, einer Salbe oder eines Streupuders aufgebracht werden. Die Komponente(n) der vorliegenden Erfindung kann/können auch dermal oder transdermal verabreicht werden, z.B. unter Verwendung eines Hautpflasters. Sie können auch über die pulmonaren oder rektalen Wege verabreicht werden. Sie können auch über den Okularen Weg verabreicht werden. Für eine ophthalmische Verwendung können die Verbindungen als feinstzerkleinerte Suspensionen in isotonischer, hinsichtlich des pH-Werts eingestellter, steriler Kochsalzlösung oder vorzugsweise als Lösungen in isotonischer, hinsichtlich des pH-Werts eingestellter, steriler Kochsalzlösung, wahlweise in Kombination mit einem Konservierungsmittel, wie Benzylalkoniumchlorid, formuliert sein. Alternativ können sie in einer Salbe, wie beispielsweise Petrolatum, formuliert sein.
Für eine topische Anwendung auf die Haut kann/können die Komponente(n) der vorliegenden Erfindung als eine geeignete Salbe formuliert sein, welche die aktive Verbindung suspendiert oder gelöst in beispielsweise einem Gemisch mit einem oder mehreren der folgenden enthält: Mineralöl, flüssiges Petrolatum, weißes Petrolatum, Propylenglycol, Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Verbindung, emulgierendes Wachs und Wasser. Alternativ kann sie in einer geeigneten Lotion oder Creme, suspendiert oder gelöst in beispielsweise einem Gemisch aus einem oder mehreren der folgenden formuliert sein: Mineralöl, Sorbitanmonostearat, einem Polyethylenglycol, flüssigem Paraffin, Polysorbat 60, Cetylesterwachs, Cetearylalkohol, 2-Octyldodecanol, Benzylalkohol und Wasser.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die pharmazeutische Zusammensetzung oral verabreicht.
DOSIERUNGSMENGEN
Typischerweise wird ein Arzt die tatsächliche Dosierung, die für ein individuelles Subjekt am geeignetsten sein wird, bestimmen. Die spezielle Dosierungsmenge und die Häufigkeit der Dosierung für einen bestimmten Patienten kann variiert werden und wird von einer Vielzahl von Faktoren abhängen, einschließlich der Aktivität der jeweiligen verwendeten Verbindung, der Stoffwechselstabilität und Wirkungsdauer dieser Verbindung, dem Alter, Körpergewicht, der allgemeinen Gesundheit, dem Geschlecht, der Ernähung, dem Modus und der Zeit der Verabreichung, der Ausscheidungsrate, der Werkstoffkombination, der Schwere des jeweiligen Zustands und der individuell durchgeführten Therapie.
Abhängig von dem Bedarf kann das Mittel in einer Dosierung von 0,01 bis 30 mg/kg Körpergewicht, wie beispielsweise von 0,1 bis 10 mg/kg, bevorzugt von 0,1 bis 1 mg/kg Körpergewicht, verabreicht werden.
THERAPIE
Die nach irgendeinem dieser Testverfahren identifizierten Mittel können als therapeutische Mittel verwendet werden, d.h. in Therapieanwendungen.
Wie auch der Begriff "Behandlung" umfaßt der Begriff "Therapie" heilende Wirkungen, lindernde Wirkungen und prophylaktische Wirkungen.
Die Therapie kann an Menschen oder Tieren erfolgen.
Wenn die Zusammensetzung mukosal durch die Schleimhaut des Magen-Darm-Trakts verabreicht werden soll, sollte sie in der Lage sein, während des Durchtritts durch den Magen-Darm-Trakt stabil zu bleiben; z.B. sollte sie gegen proteolytischen Abbau beständig, bei saurem pH-Wert stabil und gegen die detergenten Wirkungen von Galle beständig sein.
Wenn es geeignet ist, können die pharmazeutischen Zusammensetzungen durch Inhalation, in der Form eines Suppositoriums oder Pessars, topisch in der Form einer Lotion, einer Lösung, einer Creme, einer Salbe oder eines Streupuders, durch Verwendung eines Hautpflasters, oral in der Form von Tabletten, die Bindemittel, wie Stärke oder Lactose, enthalten, oder in Kapseln oder Globuli entweder alleine oder im Gemisch mit Bindemitteln, oder in der Form von Elixieren, Lösungen oder Suspensionen, die Aromastoffe oder Färbemittel enthalten, verabreicht werden oder sie können parenteral injiziert werden, z.B. intravenös, intramuskulär oder subkutan. Für eine parenterale Verabreichung können die Zusammensetzungen am besten in der Form einer sterilen wäßrigen Lösung verwendet werden, welche auch andere Substanzen, z.B. genügend Salze oder Monosaccharide, enthalten kann, um die Lösung isotonisch mit Blut zu machen. Für eine bukkale oder sublinguale Verabreichung können die Zusammensetzungen in der Form von Tabletten oder Pillen, welche in einer herkömmlichen Art und Weise formuliert sein können, verabreicht werden.
Für einige Ausführungsformen kann eine oder können mehrere Verbindungen auch in Kombination mit einem Cyclodextrin verwendet werden. Cyclodextrine sind dafür bekannt, daß sie Einschluß- und Nicht-Einschlußkomplexe mit Arzneimittelmolekülen ausbilden. Die Ausbildung eines Arzneimittel-Cyclodextrin-Komplexes kann die Löslichkeit, die Lösungsgeschwindigkeit, die Bioverfügbarkeit und/oder die Stabilitätseigenschaft eines Arzneimittelmoleküls verändern. Arzneimittel-Cyclodextrin-Komplexe sind im allgemeinen für die meisten Dosierungsformen und Verabreichungswege einsetzbar. Als eine Alternative zur direkten Komplexierung mit dem Arzneimittel kann das Cyclodextrin als ein Hilfszusatz verwendet werden, z.B. als ein Träger, Verdünnungsmittel oder Solubilisierungsmittel. Alpha-, Beta- und Gamma-Cyclodextrine werden am häufigsten verwendet, und geeignete Beispiele sind in der WO-A-91/11172, der WO-A-94/02518 und der WO-A-98/55148 beschrieben.
ALLGEMEINE ASSAY-TECHNIKEN
Ein weiterer Aspekt der Erfindung betrifft die Verwendung einer Verbindung, wie sie hierin zuvor definiert wurde, in einem Assay zur Identifizierung weiterer Kandidatenverbindungen, welche die Aktivität von einem oder mehreren CDK-Enzymen beeinflussen.
Vorzugsweise ist der Assay in der Lage, Kandidatenverbindungen zu identifizieren, die in der Lage sind, ein oder mehrere CDK-Enzyme zu hemmen.
Besonders bevorzugt ist der Assay ein kompetitiver Bindungsassay.
Vorzugsweise wird die Kandidatenverbindung durch herkömmliche SAR-Modifikation einer Verbindung der Erfindung erzeugt.
Wie er hierin verwendet wird, bezeichnet der Begriff "herkömmliche SAR-Modifikation" Standardverfahren, die auf dem Gebiet zur Veränderung einer vorgegebenen Verbindung durch chemische Derivatisierung bekannt sind.
Somit kann die identifizierte Verbindung in einem Aspekt als ein Modell (z.B. eine Vorlage) für die Entwicklung anderer Verbindungen dienen. Die in solch einem Test verwendeten Verbindungen können frei in Lösung, fixiert an einem festen Träger, getragen auf einer Zelloberfläche oder intrazellulär lokalisiert vorliegen. Die Aufhebung von Aktivität oder die Bildung von Bindungskomplexen zwischen der Verbindung und dem getesteten Mittel kann gemessen werden.
Der Assay der vorliegenden Erfindung kann eine Durchmusterung sein, wobei eine Anzahl von Mitteln getestet wird. In einem Aspekt ist das Assayverfahren der vorliegenden Erfindung eine Durchmusterung mit hohem Durchsatz.
Techniken zur Arzneimitteldurchmusterung können auf dem Verfahren basieren, das bei Geysen, europäische Patentanmeldung 84/03564, veröffentlicht am 13. September 1984, beschrieben ist. Zusammengefaßt werden große Anzahlen verschiedener kleiner Peptidtestverbindungen an einem festen Substrat, wie Kunststoffnadeln oder irgendeiner anderen Oberfläche, synthetisiert. Die Peptidtestverbindungen werden mit einer geeigneten Verbindung oder einem Fragment davon umgesetzt und gewaschen. Gebundene Reste werden dann detektiert, wie beispielsweise durch geeignetes Anpassen von Verfahren, die auf dem Gebiet gut bekannt sind. Eine gereinigte Verbindung kann auch direkt auf Platten für eine Verwendung in einer Arzneimitteldurchmusterungstechnik aufgebracht werden. Alternativ können nicht-neutralisierende Antikörper dazu verwendet werden, das Peptid einzufangen und es an einem festen Träger zu immobilisieren.
Diese Erfindung umfaßt auch die Verwendung von kompetitiven Arzneimitteldurchmusterungsassays, in welchen neutralisierende Antikörper, die in der Lage sind, eine Verbindung zu binden, spezifisch mit einer Testverbindung um eine Bindung an eine Verbindung konkurrieren.
Eine weitere Technik zur Durchmusterung liefert eine Durchmusterung mit hohem Durchsatz (HTS) von Mitteln, die geeignete Bindungsaffinität zu den Substanzen aufweisen, und basiert auf dem Verfahren, das ausführlich in der WO 84/03564 beschrieben ist.
Es wird erwartet, daß die Assayverfahren der vorliegenden Erfindung für eine Durchmusterung von Testverbindungen sowohl in kleinem als auch in großem Maßstab sowie in quantitativen Assays geeignet sind.
SYNTHESE
Die erste Reaktion in dem Verfahren, das für die Synthese der Verbindungen der Erfindung eingesetzt wurde, umfaßte Tritylschutz von (R)- und (S)-2-Aminobutan-1-ol (1 und 2) unter Verwendung von Tritylchlorid (Evans, P. A., Holmes, A. B., Russel, K., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1994, (23), 3397–3409) unter Erhalt der geschützten Amine 3 bzw. 4, welche dann einer Swern-Oxidation zu ihren entsprechenden Aldehyden (Takayama, H., Ichikawa, T., Kuwajimi, T., Kitajima, M., Seki, H., Aimi, N., Nonato, M. G., J. Am. Chem. Soc., 2000, 122 (36), 8635–8639) (5 und 6) unterzogen wurden. Einführung der 3'-Alkyl-Funktionalitäten bei den (R)- und (S)-Aldehydstereoisomeren (5 und 6) zur Herstellung der 3'-Methyl- (7 und 8), -Isopropyl- (11 und 12) und -tert-Butyl-Zwischenprodukten (13 und 14) wurde über bezüglich Chelatbildung kontrollierte Alkylierung durchgeführt (Reetz, M. T., Rolfing, K., Griebenow, N., Tetrahedron Lett., 1994, 35 (13), 1969–1972). Dies umfaßte eine Umsetzung mit Kupferbromid-/Dimethylsulfid-Komplex in Ether zusammen mit dem geeigneten Alkyllithiumreagens (d.h. Methyllithium, Isopropyllithium bzw. tert-Butyllithium).
Für die Methyl-substituierten Zwischenprodukte lieferte dies die N-geschützten 2'R/3'S- und 2'S/3'R-Diastereoisomere (7 und 8) in ungefähr 80% de, während für die Isopropyl- (11 und 12) und tert-Butyl-substituierten Zwischenprodukte (13 und 14) die Alkylierung bezüglich sowohl der 2'R- als auch 2'S-Stereoisomere nicht stereospezifisch war unter Erhalt von einem ungefähr 1:1-Gemisch von 3'R:3'S. Da Ethyllithium handelsüblich nicht erhältlich war, wurde für das Einbringen des 3'-Ethyl-Substituenten ein alternatives Verfahren verfolgt, welches die Behandlung der Aminoaldehyde (5 und 6) mit Ethylmagnesiumbromid in Ether umfaßte, welches wiederum zu einer nicht-stereospezifischen Addition des Ethyl-Substituenten an die 3'-Position führte unter Erhalt eines ungefähr 1:1-Gemischs von 3'R:3'S für beide Diastereoisomere (9 und 10).
Für die Herstellung der Trityl-geschützten 3'-Dimethylaminoalkoholzwischenprodukte (25 und 26) wurden die 3'-Methyl-substituierten Diastereoisomere (7 und 8) anfänglich einer Swern-Oxidation zu ihren entsprechenden Ketonen (23 und 24) unterzogen, gefolgt von Einbringen des zweiten 3'-Methyl unter Verwendung von Methylmagnesiumiodid in unter Rückfluß kochendem Ether.
Die letzte Stufe in der Synthese für sämtliche der Aminoalkohole umfaßte das Entfernen der Trityl-Gruppen unter Verwendung von TFA in DCM unter Erhalt ihrer äquivalenten N-entschützten Zwischenprodukte (15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 27 und 28).
Für die Synthese der 6-Benzylamino-, 6-(Pyridin-2-ylmethyl)-, 6-(Pyridin-3-ylmethyl)- und 6-(Pyridin-2-ylmethyl)-Zwischenprodukte umfaßte die erste Stufe die Umsetzung von 6-Chlor-2-fluor-purin 29 [Gray, N. S., Kwon, S., Schultz, P. G. Tetrahedron Lett, 1997, 38 (7), 1161–1164] mit entweder Benzylamin, 2-(Aminomethyl)-pyridin, 3-(Aminomethyl)-pyridin oder 4-(Aminomethyl)-pyridin in n-BuOH in der Gegenwart von DIPEA unter Erhalt der entsprechenden 6-substituierten Zwischenprodukte 30. Diese Verbindungen wurden dann einer Umsetzung mit 2-Brompropan und K₂CO₃ in DMA unterzogen [Havlicek, L., Hunus, J., Vesely, J., Leclerc, S., Meijer, L., Shaw, G., Strnad, M., J. Med. Chem., 1997, 40 (4), 408–412] unter Erhalt ihrer entsprechenden N9-Isopropyl-substituierten Zwi schenprodukte 31. Diese Purin-Zwischenprodukte wurden schließlich mit den Aminoalkoholen (1–2, 15–22 und 27–28) in DMSO/n-BuOH/DIEA bei 140°C über 72 h unter Erhalt ihrer entsprechenden C2-substituierten Aminoalkylanalogen 32 umgesetzt.
Die vorliegende Erfindung wird nun anhand von Beispielen beschrieben.
BEISPIELE
Die folgenden Abkürzungen werden in dem experimentellen Abschnitt verwendet:

DE-MALDI-TOF MS: Matrix-assistierte Laserdesorptions-/Ionisations-Flugzeit-Massenspektrometrie mit verzögerter Extraktion
DBU: 1,8-Diazabicyclo-[5.4.0]-undec-7-en
DMA: Dimethylacetamid
DMSO: Dimethylsulfoxid
FAB-MS: Fast-Atom-Bombardment-Massenspektrometrie
NMP: 1-Methyl-2-pyrrolidinon
NMR: Kernresonanzspektroskopie
RP-HPLC: Umkehrphasenhochleistungsflüssigchromatographie
RT: RT
TLC: Dünnschichtchromatographie
DCM: Dichlormethan
de: Diastereomerenüberschuß
DIEA: Diisopropylethylamin

Beispiel 1: 1-[9-Cyclopentyl-6-(indan-5-ylamino)-9H-purin-2-yl]-piperidin-3-ol
(2-Chloro-9H-purin-6-yl)-indan-5-yl-amin
2,6-Dichloro-9H-purin (1,89 g, 10 mmol), 5-Aminoindan (1,33 g, 10 mmol) und Et₃N (2,79 ml, 20 mmol) wurden in BuⁿOH (15 ml) gelöst. Die Lösung wurde für 2 h bei 90°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde PrⁱOH (90 ml) langsam unter Rühren hinzugefügt. Nach 1 h wurde das Präzipitat filtriert, nacheinander mit geringen Mengen an PrⁱOH und Prⁱ ₂O gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein zitronenfarbiges Pulver (1,54 g, 54,1%). TLC (80:15:5 CHCl₃/MeOH/AcOH): R_F = 0,61.
(2-Chloro-9-cyclopentyl-9H-purin-6-yl)-indan-5-yl-amin
(2-Chloro-9H-purin-6-yl)-indan-5-yl-amin (857 mg, 3 mmol) wurde in trockenem DMF (10 ml) gelöst. NaH (94 mg, 3,9 mmol) wurde in Portionen hinzugefügt, und das resultierende Gemisch wurde für 1 h gerührt. Cyclopentylbromid (760 mg, 5,1 mmol) wurde dann hinzugefügt, und die Reaktion wurde über Nacht bei 80°C unter N₂ gerührt. Nach dem Abkühlen wurde H₂O (50 ml) hinzugefügt, und das Gemisch wurde mit CH₂Cl₂ (3 × 25 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Salzlösung (2 × 25 ml) gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (95:5 CH₂Cl₂/Et₂O) gereinigt unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißes Pulver (738 mg, 69,5%). TLC (95:5 CH₂Cl₂/Et₂O): R_F = 0,38.
1-[9-Cyclopentyl-6-(indan-5-ylamino)-9H-purin-2-yl]-piperidin-3-ol
(2-Chloro-9-cyclopentyl-9H-purin-6-yl)-indan-5-yl-amin (283 mg, 0,8 mmol), 3-Hydroxypiperidinhydrochlorid (550 mg, 4 mmol) und K₂CO₃ (829 mg, 6 mmol) wurden in 2,5-Lutidin (10 ml) suspendiert, und das Gemisch wurde bei 180°C für 4 h erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde CH₂Cl₂ (50 ml) hinzugefügt, und die Lösung wurde mit Salzlösung (2 × 15 ml) extrahiert. Die organische Fraktion wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie gereinigt (95:5 CH₂Cl₂/MeOH) unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelber Schaum (320 mg, 95,6%). Anal. RP-HPLC (Phenomenex Jupiter, 5 μ, C18, 300 Å, 4,6 × 250 mm; 1 ml/min): t_R = 19,6 min (10–70% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH über 20 min); t_R = 15,4 min (40– 50% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH über 20 min); Reinheit > 92% (λ = 214 nm). DE-MALDI-TOF MS: [M + H]⁺ = 419,5 (C₂₄H₃₀N₆O = 418,5).
Beispiel 2: 1-[9-Cyclopentyl-6-(3,4-dimethoxy-benzylamino)-9H-purin-2-yl]-piperidin-3-ol
(2-Chloro-9H-purin-6-yl)-(3,4-dimethoxy-benzyl)-amin
2,6-Dichloro-9H-purin (1,7 g, 9 mmol), Veratrylamin (1,5 g, 9 mmol) und Et₃N (2,51 ml, 18 mmol) wurden in BuⁿOH (10 ml) gelöst. Die Lösung wurde für 2 h bei 90°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde PrⁱOH (90 ml) langsam unter Rühren hinzugefügt. Nach 1 h wurde das Präzipitat filtriert, nacheinander mit geringen Mengen an PrⁱOH und Prⁱ ₂O gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißes Pulver (2,69 g, 93,4%). TLC (9:1 CH₂Cl₃/MeOH/AcOH): R_F = 0,33.
(2-Chloro-9-cyclopentyl-9H-purin-6-yl)-(3,4-dimethoxy-benzyl)-amin
(2-Chloro-9H-purin-6-yl)-(3,4-dimethoxy-benzyl)-amin (799 mg, 2,5 mmol) wurde in trockenem DMF (10 ml) gelöst. NaH (78 mg, 3,25 mmol) wurde in Portionen hinzugefügt, und das resultierende Gemisch wurde für 1 h gerührt. Cyclopentylbromid (633 mg, 4,25 mmol) wurde anschließend hinzugefügt, und die Reaktion wurde über Nacht bei 80°C unter N₂ gerührt. Nach dem Abkühlen wurde H₂O (50 ml) hinzugefügt, und das Gemisch wurde mit CH₂Cl₂ (3 × 25 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Salzlösung (2 × 25 ml) gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie gereinigt (95:5 CH₂Cl₂/Et₂O) unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißes Pulver (451 mg, 46,5%). TLC (95:5 CH₂Cl₂/Et₂O): R_F = 0,27.
1-[9-Cyclopentyl-6-(3,4-dimethoxy-benzylamino)-9H-purin-2-yl]-piperidin-3-ol
(2-Chloro-9-cyclopentyl-9H-purin-6-yl)-(3,4-dimethoxy-benzyl)-amin (446 mg, 1,15 mmol), 3-Hydroxypiperidin-hydrochlorid (791 mg, 5,75 mmol) und K₂CO₃ (1,19 mg, 8,63 mmol) wurden in 2,5-Lutidin (10 ml) suspendiert, und das Gemisch wurde bei 180°C für 4 h erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde CH₂Cl₂ (50 ml) hinzugefügt, und die Lösung wurde mit Salzlösung (2 × 15 ml) extrahiert. Die organische Fraktion wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie gereinigt (95:5 CH₂Cl₂/MeOH) unter Erhalt der Titelverbindung als ein cremefarbener Schaum (427 mg, %). Anal. RP-HPLC (Phenomenex Jupiter, 5 μ, C18, 300 Å, 4,6 × 250 mm; 1 ml/min): t_R = 18,4 min (10–70% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH über 20 min); t_R = 16,0 min (35–45% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH über 20 min); Reinheit > 95% (λ = 214 nm). DE-MALDI-TOF MS: [M + H]⁺ = 453,9 (C₂₄H₃₂N₆O₃ = 452,6).
Beispiel 3 (R)-2-[9-Isopropyl-6-(3-nitro-phenylamino)-9H-purin-2-ylamino]-3-methyl-butan-1-ol
(2-Chloro-9H-purin-6-yl)-(3-nitro-phenyl)-amin
2,6-Dichloro-9H-purin (650 mg, 3,44 mmol) und 3-Nitroanilin (1,9 g, 13,76 mmol) wurden in 1-Pentanol (5 ml) bei 100°C für 2 h unter N₂ gerührt. Das Gemisch wurde abgekühlt und mit Et₂O (40 ml) verdünnt. Das Präzipitat wurde filtriert und nacheinander auf einem Sinterkörper mit Et₂O, PrⁱOH, H₂O, 10% wäßriger Na₂CO₃, H₂O, PrⁱOH und Et₂O (jeweils 2 × 20 ml) gewaschen. Es wurde dann unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein zitronengelbes Pulver (1,01 g, quant.). TLC (9:1 CH₂Cl₂/MeOH): R_F = 0,35.
(2-Chloro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-(3-nitro-phenyl)-amin
(2-Chloro-9H-purin-6-yl)-(3-nitrophenyl)-amin (872 mg, 3 mmol) wurde in trockenem DMF (10 ml) gelöst. NaH (122 mg, 5,1 mmol) wurde in Portionen hinzugefügt, und das resultierende Gemisch wurde für 1 h gerührt. 2-Brompropan (480 mg, 3,9 mmol) wurde dann hinzugefügt, und die Reaktion wurde über Nacht bei 80°C unter N₂ gerührt. Nach dem Abkühlen wurde H₂O (50 ml) langsam unter Rühren und Abkühlen hinzugefügt. Nach 1 h wurde präzipitiertes Produkt filtriert, mit mehr kaltem H₂O gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein zitronengelbes Pulver (905 mg, 90,7%). TLC (95:5 CH₂Cl₂/MeOH): R_F = 0,46.
2-[9-Isopropyl-6-(3-nitro-phenylamino)-9H-purin-2-ylamino]-3-methyl-butan-1-ol
(2-Chloro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-(3-nitrophenyl)-amin (333 mg, 1 mmol), D-Valinol (310 mg, 3,0 mmol) und DBU (457 mg, 3,0 mmol) wurden in NMP (5 ml) über Nacht bei 150°C unter N₂ gerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Gemisch mit H₂O (40 ml) verdünnt und mit CH₂Cl₂ (3 × 25 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit Salzlösung gewaschen, mit entfärbender Aktivkohle und MgSO₄ behandelt, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde erneut in DMSO/H₂O gelöst und
Chromatographie unterzogen (Vydac 218TP1022; 9 ml/min, 27,5–37,5% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH für 40 min). Geeignete Peakfraktionen wurden vereinigt und lyophilisiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein oranger Feststoff (12,3 mg). Anal. RP-HPLC (Vydac 218TP54; 1 ml/min): t_R = 15,8 min (27,5–37,5% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH für 20 min); Reinheit > 95% (λ = 214 nm). DE-MALDI-TOF MS: [M + H]⁺ = 398,5 (C₁₉H₂₅N₇O₃ = 399,5).
Beispiel 4 (R)-2-[9-Isopropyl-6-(3-nitro-phenylamino)-9H-purin-2-ylamino]-butan-1-ol
Ein Gemisch aus (2-Chloro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-(3-nitrophenyl)-amin (333 mg, 1 mmol) und (R)-(–)-2-Amino-1-butanol (1,78 g, 20 mmol) wurde bei 160°C für 3 h unter N₂ gerührt. Nach dem Abkühlen wurde CHCl₃ (50 ml) hinzugefügt, und die Lösung wurde mit Salzlösung (2 × 25 ml) extrahiert. Die organische Fraktion wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie gereinigt (95:5 CH₂Cl₂/MeOH) unter Erhalt der Titelverbindung als ein gelber, glasiger Feststoff (104 mg, 27,0%). Anal. RP-HPLC (Vydac 218TP54; 1 ml/min): t_R = 16,8 min (0–60% MeCN in 0,1% wäßriger CF₃COOH für 20 min); Reinheit > 95% (λ = 214 nm). DE-MALDI-TOF MS: [M + H]⁺ = 384,7 (C₁₈H₂₃N₇O₃ = 385,4).
Beispiel 5 (R)-2-{9-Isopropyl-6-[(pyridin-2-ylmethyl)-amino]-9H-purin-2-ylamino}-butan-1-ol
(2-Fluoro-9H-purin-6-yl)-pyridin-2-ylmethyl-amin
Zu einer gerührten Lösung von 6-Chloro-2-fluoro-9H-purin (hergestellt nach Gray, N. S.; Kwon, S.; Schultz, P. G. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 1161–1164; 0,4 g, 2,31 mmol) in BuⁿOH (25 ml) unter Ar, gekühlt auf 0°C, wurde Prⁱ ₂NEt (1,13 ml, 6,49 mmol), gefolgt von 2-(Aminomethyl)-pyridin (0,48 ml, 4,66 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei 0°C für 3 h gerührt und dann über 30 min auf RT zurückkehren gelassen und bei dieser Temperatur für 1 h gerührt, wenn TLC (9:1 CHCl₃/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft und der Rückstand zwischen Zitronensäurelösung (200 ml, 10% wäßrig) und EtOAc (200 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde abgetrennt und mit mehr EtOAc (2 × 100 ml) extrahiert. Der pH-Wert der wäßrigen Phase wurde auf 7,0 mit NaOH-Lösung (50% w/v, wäßrig) eingestellt, mit EtOAc (4 × 100 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde durch Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CHCl₃/MeOH (95:5→85:15) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelber Feststoff (0,40 g, 71%). Smp. 217–220°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 4,58 (d, 2H, J = 5,68 Hz, HNCH ₂-Pyr), 7,29, 7,71, 8,49 (3 × m, 4H, Pyr), 8,10 (s, 1H, -N=CH-NH-), 8,69 (bs, 1H, -HNCH₂-Pyr), 13,07 (bs, 1H, N=CH-NH-). FAB-MS m/z (relative Intensität): 245 ([M + H]⁺, 55), 176 (30), 154 (100), 136 (85). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 245,0951, Gemessen: 245,0942. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₁₁H₉N₆F·0.4H₂O: C; 52,55: 52,91, H; 3,93: 3,49, N; 33,42: 33,26.
(2-Fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-pyridin-2-yl-amin
Zu einer gerührten Lösung von (2-Fluoro-9H-purin-6-yl)-pyridin-2-ylmethylamin (0,4 g, 1,64 mmol) in DMA (5 ml) unter Ar bei RT wurde K₂CO₃ (pulverisiert, wasserfrei; 1,1 g, 7,96 mmol), gefolgt von 2-Brompropan (1,5 ml, 15,98 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei 40°C für 48 h gerührt, wenn TLC (9:1 CHCl₃/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft und der Rückstand zwischen H₂O (200 ml) und EtOAc (100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde abgetrennt und mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft, und the Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CHCl₃/MeOH (100:0→95:5) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,27 g, 58%). Smp. 150–152°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 1,49 (2 × s, 6H, CH(CH ₃)₂), 4,63 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,71 (d, 2H, J = 5,76 Hz, -HNCH ₂-Pyr), 7,26, 7,71, 8,49 (3 × m, 4H, Pyr), 8,26 (s, 1H, -N=CH-N-), 8,78 (bs, 1H, -HNCH₂-Pyr). FAB-MS m/z (relative Intensität): 287 ([M + H]⁺, 100), 245 (10), 154 (22), 136 (17). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 287.1420, Gemessen: 287.1412. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₁₄H₁₅N₆F: C; 58,73: 58,38, H; 5,28: 5,13, N; 29,35: 29,36.
(R)-2-[9-Isopropyl-6-(pyridin-2-ylamino)-9H-purin-2-ylamino]-butan-1-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2-Fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-pyridin-2-yl-amin (0,25 g, 0,87 mmol) in BuⁿOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei RT unter Ar wurde Prⁱ ₂NEt (1,5 ml, 8,61 mmol), gefolgt von (R)-(–)-2-Aminobutan-1-ol (0,82 ml, 8,71 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt, wenn TLC (9:1 CHCl₃/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (100 ml) und H₂O (150 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CHCl₃/MeOH (100:0→97:3) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,29 g, 95%). Smp. 30–35°C. ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,77 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH₂OH), 1,24–1,48 (m, 8H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH₂OH + CH(CH ₃)₂), 3,38 (m, 2H, -NHCH(CH₂CH₃)CH ₂OH), 3.70 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 4,52 (m, 2H, -NHCH ₂-Pyr), 4,75 (m, 2H, OH + CH(CH₃)₂), 5,81 (d, 2H, J = 8,33 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 7,24, 7,67, 8,48 (3 × m, 4H, Pyr), 7,79 (bs, 2H, -N=CH-N + -HNCH₂-Pyr). FAB-MS m/z (relative Intensität): 356 ([M + H]⁺, 100), 324 (28), 154 (26), 136 (22). Genaue Masse (M + H: Tatsächlich: 356.2199, Gemessen: 356.2208. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₁₈H₂₅N₇O: C; 60,83: 61,81, H; 7,09: 7,29, N; 27,58: 27,09.
Beispiel 6 (R)-2-{9-Isopropyl-6-[(pyridin-4-ylmethyl)-amino]-9H-purin-2-ylamino}-butan-1-ol
(2-Fluoro-9H-purin-6-yl)-pyridin-4-ylmethyl-amin
Zu einer gerührten Lösung von 6-Chloro-2-fluoro-9H-purin (0,9 g, 5,22 mmol) in BuⁿOH (60 ml) unter Ar, gekühlt auf –20°C, wurde Prⁱ ₂NEt (2,5 ml, 14,35 mmol), gefolgt von 4-(Aminomethyl)-pyridin (0,58 ml, 5,69 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei –20°C für 3 h gerührt und anschließend über 2 h auf RT zurückkehren gelassen und bei RT für weitere 48 h gerührt, wenn TLC (9:1 CHCl₃/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CHCl₃/MeOH (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,69 g, 54%). Smp. > 340°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 ME): δ 4,67 (d, 2H, J = 6,35 Hz, -HNCH ₂-Pyr), 7,34, 8,50 (2 × m, 4H, Pyr), 8,14 (s, 1H, -N=CH-NH-), 8,84 (bs, 1H, -HNCH₂-Pyr), 13,13 (bs, 1H, -N=CH-NH-). FAB-MS m/z (relative Intensität): 245 ([M + H]⁺, 27), 176 (15), 154 (100), 136 (77). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 245.0951, Gemessen: 245.0942. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₁₁H₉N₆F·0.6H₂O: C; 51,80: 52,08, H; 4,03: 3,84, N; 32,95: 31,29.
(2-Fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-pyridin-4-yl-amin
Zu einer gerührten Lösung von (2-Fluoro-9H-purin-6-yl)-pyridin-4-yl-methylamin (0,6 g, 2,46 mmol) in DMA (10 ml) unter Ar bei RT wurde K₂CO₃ (pulverisiert, wasserfrei; 1,65 g, 11,93 mmol), gefolgt von 2-Brompropan (2,25 ml, 23,96 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT für 48 h gerührt, wenn TLC (9:1 CHCl₃/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft und der Rückstand zwischen H₂O (200 ml) und EtO-Ac (100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde abgetrennt und mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CHCl₃/MeOH (100:0→95:5) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,40 g, 57%). Smp. 270–273°C. ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 1,49 (2 × s, 6H, -CH(CH ₃)₂), 4,63 (m, 3H, -CH(CH₃)₂ + -HNCH ₂-Pyr) 7,30, 8,47 (2 × m, 4H, Pyr), 8,28 (s, 1H, -N=CH-N-), 8,97 (bs, 1H, -HNCH₂-Pyr). FAB-MS m/z (relative Intensität): 287 ([M + H)]⁺, 100), 245 (8), 154 (23), 136 (18). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 287,1420, Gemessen: 287,1412. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₁₄H₁₅N₆F: C; 58,73: 58,57, H; 5,28: 5,21, N; 29,35: 29,27.
(R)-2-[9-Isopropyl-6-pyridin-4-ylamino)-9H-purin-2-ylamino]-butan-1-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2-Fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-pyridin-4-yl-amin (0,27 g, 0,94 mmol) in BuⁿOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei RT unter Ar wurde Prⁱ ₂NEt (1,63 nm, 9,36 mmol), gefolgt von (R)-(–)-2-Aminobutan-1-ol (0,89 ml, 9,45 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 48 h gerührt, wenn TLC (9:1 CHCl₃/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (100 ml) und H₂O (150 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit NaCl gesättigt und mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CHCl₃/MeOH (100:0→97:3) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,30 g, 89%). Smp. 105–106°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz: δ 0,78 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH₂OH), 1,39–1,55 (m, 8H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH₂OH + -CH(CH ₃)₂), 3,32, 3,40 (2 × m, 2H, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 3,70 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 4,50–4,64 (m, 4H, -NHCH ₂-Pyr + CH(CH₃)₂ + OH), 5,83 (d, 2H, J = 8,15 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 7,30, 8,45 (2 × m, 4H, Pyr), 7,80 (s, 1H, -N=CH-N-), 7,88 (bs, 1H, -HNCH₂-Pyr). FAB-MS m/z (relative Intensität): 356 ([M + H]⁺, 100), 324 (28), 154 (47), 136 (38). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 356,2199, Gemessen: 356,2208. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₁₈H₂₅N₇O: C; 60,83: 60,99, H; 7,09: 7,25, N; 27,58: 26,94.
Beispiel 7 3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino-pentan-2-ol
(R)-2-(Tritylamino)-butan-1-ol
Zu einer gerührten Lösung von (R)-(–)-2-Aminobutan-1-ol (10 g, 112,18 mmol) in CH₂Cl₂ (500 ml) unter Ar bei RT wurde Prⁱ ₂NEt (30 ml, 172,22 mmol), gefolgt von Tritylchlorid (35,4 ml, 126,98 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT für 48 h gerührt, wenn TLC (55:40:5 Hexan/Et₂O/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft und der Rückstand aus Me₂CO (50 ml) mit Hexan (900 ml) unter Rühren präzipitiert, das Präzipitat wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Hexan (1 l) gelöst, filtriert, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (32 g, 86%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,56 (t, 3H, J = 7,41, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH₂OH), 1,10 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH₂OH), 2,21 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 2,72 + 3,00 (2 × m, 2H, -NHCH(CH₂CH₃)CH ₂OH), 4,28 (t, 1H, J = 5,26 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 7,14–7,49 (m, 15H, 3 × Bz).
(S)-2-(Tritylamino)-butan-1-ol
Zu einer gerührten Lösung von (S)-(+)-2-Aminobutan-1-ol (10 g, 112,18 mmol) in CH₂Cl₂ (500 ml) unter Ar bei RT wurde Prⁱ ₂NEt (30 ml, 172,22 mmol), gefolgt von Tritylchlorid (35,4 ml, 126,98 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 48 h gerührt, wenn TLC (55:40:5 Hexan/Et₂O/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft und der Rückstand aus Me₂CO (50 ml) mit Hexan (900 ml) unter Rühren präzipitiert, das Präzipitat wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Hexan (1 l) gelöst, filtriert, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (33 g, 89%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,58 (t, 3H, J = 7,26, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH₂OH), 1,10 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH₂OH), 2,24 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 2,76 + 3,03 (2 × m, 2H, -NHCH(CH₂CH₃)CH ₂OH), 4,32 (t, 1H, J = 4,97 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH₂OH), 7,15–7,52 (m, 15H, 3 × Bz).
(R)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd
Zu einer gerührten Lösung von DMSO (3,0 ml, 42,28 mmol) in CH₂Cl₂ (30 ml) unter Ar bei –45°C wurde Oxalylchlorid (2 M in CH₂Cl₂, 10,56 ml, 21,12 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei –45°C für 1 h gerührt, woraufhin eine Lösung von (R)-2-(Tritylamino)-butan-1-ol (5 g, 15,08 mmol) in CH₂Cl₂ (30 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 3 h gerührt, wenn TLC (8:2 Hexan/Et₂O) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Et₃N (10,5 ml, 75,33 mmol) in CH₂Cl₂ (30 ml) wurde hinzugefügt und die Lösung wurde für 16 h auf RT erwärmen gelassen. Sie wurde mit mehr CH₂Cl₂ (200 ml) verdünnt und mit H₂O (250 ml) gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit CH₂Cl₂ (3 × 50 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Et₂O (30 ml) gelöst, das feste Präzipitat wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Hexan (50 ml) gelöst, das feste Präzipitat wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (2,59 g, 52%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,77 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CHO), 1,34–1,61 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CHO), 2,92 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CHO), 3,62 (d, 1H, J = 8,21 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CHO), 7,16–7,46 (m, 15H, 3 × Bz), 8,77 (d, 1H, J = 3,00 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CHO).
(S)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd
Zu einer gerührten Lösung von DMSO (2,4 ml, 33,82 mmol) in CH₂Cl₂ (30 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –45°C, wurde Oxalylchlorid (2 M in CH₂Cl₂, 8,45 ml, 16,9 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei –45°C für 1 h gerührt, woraufhin eine Lösung von (S)-2-(Tritylamino)-butan-1-ol (4 g, 12,07 mmol) in CH₂Cl₂ (30 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt wurde. Das Rühren wurde bei dieser Temperatur für 3 h fortgesetzt, bis TLC (8:2 Hexan/Et₂O) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Et₃N (8,4 ml, 60,27 mmol) in CH₂Cl₂ (30 ml) wurde hinzugefügt, und die Lösung wurde über 16 h auf RT erwärmen gelassen. Sie wurde mit mehr CH₂Cl₂ (100 ml) verdünnt und mit H₂O (250 ml) gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit CH₂Cl₂ (3 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigten organischen Phasen wurden mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Et₂O (30 ml) gelöst, das feste Präzipitat wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Hexan (50 ml) gelöst, das feste Präzipitat wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (3,64 g, 91%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 M): δ 0,77 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CHO), 1,37–1,59 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CHO), 2,93 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CHO), 3,62 (d, 1H, J = 5,84 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CHO), 7,16–7,46 (m, 15H, 3 × Bz), 8,77 (d, 1H, J = 3,00 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CHO).
(2S,3R)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Suspension von CuBr·SMe₂ (2,74 g, 13,33 mmol) in Et₂O (100 ml) unter Ar bei –70°C wurde Methyllithium (1,6 M in Et₂O; 16,6 ml, 26,56 mmol) tropfenweise hinzugefügt und die Lösung auf RT erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf –70°C gekühlt und dazu eine Lösung von (R)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (2 g, 6,05 mmol) in Et₂O (25 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 2 h gerührt, bis TLC (8:2 Hexan:Et₂O) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Zu dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte wäßrige Lösung von NH₄Cl (100 ml) hinzugefügt und über 16 h auf RT erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit Et₂O (2 × 200 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt, mit Hexan/Et₂O (8:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (1,91 g, 91%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,44–0,58 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 0,99–1,12 (m, 5H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH + -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH), 2,03 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 3,32–3,51 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 4,40 (d, 1H, J = 3,79 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,14–7,51 (m, 15H, 3 × Bz).
(2R,3S)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Suspension von CuBr·SMe₂ (2,74 g, 13,33 mmol) in Et₂O (100 ml) unter Ar bei –70°C wurde Methyllithium (1:6 M in Et₂O; 15,13 ml, 24,21 mmol) tropfenweise hinzugefügt und die Lösung auf RT erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf –70°C gekühlt und dazu eine Lösung von (S)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (2 g, 6,05 mmol) in Et₂O (25 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 2 h gerührt und anschließend bei –55°C für 4 h, bis TLC (8:2 Hexan/Et₂O) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Zu dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte wäßrige Lösung von NH₄Cl (100 ml) hinzugefügt und über 16 h auf RT erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit Et₂O (2 × 200 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und mit Hexan/Et₂O (8:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (1,37 g, 66%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,44–0,58 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 0,99–1,12 (m, 5H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH + -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH), 2,01 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 3,22–3,43 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 4,41 (d, 1H, J = 3,31 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,14–7,56 (m, 15H, 3 × Bz).
(2RS,3R)-3-(Tntylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (R)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (0,59 g, 1,79 mmol) in Et₂O (25 ml) unter Ar bei –70°C wurde Methyllithium (1,4 M in Et₂O; 1,88 ml, 2,63 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 30 min gerührt und anschließend über 15 min auf RT erwärmen gelassen und bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Gemisch wurde auf 0°C gekühlt und dazu langsam H₂O (25 ml) hinzugefügt, und die Lösung wurde zwischen Et₂O (100 ml) und H₂O (100 ml) extrahiert. Die wäßrige Phase wurde mit mehr Et₂O (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (0,58 g, 94%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,42–0,57 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 0,97–1,15 (m, 5H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH + -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH), 2,01 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 3,26 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 4,39 (d, 1H, J = 4,10 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,13–7,50 (m, 15H, 3 × Bz).
(2S,3R)-3-Amino-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2S,3R)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol (1,32 g, 3,83 mmol) in CH₂Cl₂ (50 ml) unter Ar bei RT wurde Trifluoressigsäure (10 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Et₂O (15 ml) mit Hexan (300 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (0,30 g, 99%; 80% de). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,915 + 0,924 (2 × t [1:5, 2R/3R:2R/3S], 3H, J = 7,50 + 7,58 Hz, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 1,06 + 1,13 (2 × d [5:1, 2'R/3'S:2'R/3'R], J = 6,48 + 6,32 Hz), NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH), 1,41–1,59 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH), 2,77 + 2,93 (2 × m, 1H, [1:5, 2'R/3'R:2'R/3'S], NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH)OH), 3,62–3,72 + 3,80–3,90 (2 × m, 1H, [1:5, 2'R/3'R:2'R/3'S] NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,75 (bs, 2H, NH ₂).
(2R,3S)-3-Amino-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2R,3S)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol (1,64 g, 4,75 mmol) in CH₂Cl₂ (50 ml) unter Ar bei RT wurde Trifluoressigsäure (10 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Et₂O (15 ml) mit Hexan (300 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl (0,30 g, 98%; 80% de). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,913 + 0,923 (2 × t [1:5, 2'S/3'S:2'S/3'R], 3H, J = 7,50 + 7,50 Hz, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 1,11 + 1,18 (2 × d [5:1, 2'S/3'R:2'S/3'S], J = 6,48 + 6,48 Hz), NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH), 1,41–1,65 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH), 2,76 + 2,93 (2 × m, 1H, [1:5, 2'S/3'S:2'S/3'R], NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 3,61–3,69 + 3,80–3,90 (2 × m, 1H, [1:5, 2'S/3'S:2'S/3'R], NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,73 (bs, 2H, NH ₂).
(2RS,3R)-3-Amino-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2RS,3R)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol (0,55 g, 1,59 mmol) in CH₂Cl₂ (25 ml) unter Ar bei RT wurde Trifluoressigsäure (12 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 2 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Et₂O (15 ml) mit Hexan (300 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde mit Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein braunes Öl (0,16 g, 99%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,86–0,96 (m, 3H, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 1,02–1,20 (m, 3H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH), 1,35–1,68 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH), 2,75 + 2,91 (2 × m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 3,60–3,70 + 3,78–3,88 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,68 (bs, 2H, NH ₂).
(2S,3R)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (0,20 g, 0,70 mmol) in BuⁿOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei RT unter Ar wurde Prⁱ ₂NEt (1,2 ml, 6,88 mmol), gefolgt von (2S,3R)-3-Aminopentan-2-ol (0,18 g, 1,74 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h geführt, bis TLC (55:40:5, CH₂Cl₂/Et₂O/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT abkühlen gelassen und das Lösungsmittel unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen CH₂Cl₂ (100 ml) und H₂O (200 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr CH₂Cl₂ (3 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt, mit CH₂Cl₂/Et₂O/MeOH (60:40:0→60:40:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,11 g, 43%, 80% de). Smp. 42–44°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,81 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 1,02 (d, 3H, J = 6,16 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH) 1,45 (m, 8H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH + -CH(CH ₃)₂), 3,62 + 3,73 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 4,49–4,63 (m, 4H, -HNCH ₂-Bz + -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH + -CH(CH₃)₂), 5,59 + 5,90 ([1.8, 2'R/3'S:2'R/3'S], 2 × d, 1H, J = 9,00 + 8,85 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,19–7,37 (m, 5H, Bz), 7,77 (bs, 2H, -N=CH-N- + -HNCH₂-Bz). FAB-MS m/z (relative Intensität): 369 ([M + H]⁺, 100), 323 (70), 134 (15). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 369,2403, Gemessen: 369,2418.
(2R,3S)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (0,20 g, 0,70 mmol) in BuⁿOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei RT unter Ar wurde Prⁱ ₂NEt (1,2 ml, 6,88 mmol), gefolgt von (2R,3S)-3-Aminopentan-2-ol (0,20 g, 1,94 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 48 h gerührt, bis TLC (55:40:5 CH₂Cl₂/Et₂O/MeOH) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT abkühlen gelassen und das Lösungsmittel unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen CH₂Cl₂ (100 ml) und H₂O (200 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr CH₂Cl₂ (3 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CH₂Cl₂/Et₂O/MeOH (60:40:0→60:40:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,11 g, 43%, 88% de). Smp. 48–50°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,78–0,87 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 1,02 (d, 3H, J = 6,16 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH) 1,43–1,75 (m, 8H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH + -CH(CH ₃)₂), 3,62 + 3,76 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 4,48–4,64 (m, 4H, -HNCH ₂-Bz + -NHCH(CN₂CH₃)CH(CH₃)OH + CH(CH₃)₂), 5,59 + 5,88 ([1:8, 2'S/3'S:2'S/3'R], 2 × d, 1H, J = 9,48 + 8,69 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,19–7,37 (m, 5H, Bz), 7,77 (bs, 2H, -N=CH-N- + -HNCH₂-Bz). FAB-MS m/z (relative Intensität): 369 ([M + H]⁺, 100), 323 (68), 154 (30), 136 (30). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 369,2403, Gemessen: 369,2418. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₂₀H₂N₆O·0.4H₂O: C; 63,94: 64,56, H; 7,73: 7,73, N; 22,37: 21,92.
(2RS,3R)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (0,34 g, 1,19 mmol) in BuⁿOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei RT unter Ar wurde Prⁱ ₂NEt (2,0 ml, 11,48 mmol), gefolgt von (2RS,3R)-3-Aminopentan-2-ol (0,16 g, 1,55 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 48 h gerührt, bis TLC (55:40:5 CH₂Cl₂/Et₂O/MeOH) das Erscheinen eines niedriger laufenden Produkts zusammen mit einigem gewünschtem Produkt anzeigte. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT abkühlen gelassen und das Lösungsmittel unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde zwischen CH₂Cl₂ (100 ml) und H₂O (200 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr CH₂Cl₂ (3 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit CH₂Cl₂/Et₂O/MeOH (60:40:0→60:40:4) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff (0,03 g, 7%). Smp. 43–46°C ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,75–0,85 (m, 3H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 0,95–1,03 (m, 3H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH ₃)OH) 1,19–1,77 (m, 8H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₃)OH + CH(CH ₃)₂), 3,60 + 3,73 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 4,44–4,78 (m, 4H, -HNCH ₂-Bz + -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH + -CH(CH₃)₂), 5,57 + 5,87 (2 × d, 1H, J = 9,958 + 7,74 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₃)OH), 7,18–7,36 (m, 5H, Bz), 7,77 (bs, 2H, -N=CH-N- + -HNCH₂-Bz). FAB-MS m/z (relative Intensität): 369 ([M + H]⁺, 100), 323 (96), 233 (30). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 369,2403, Gemessen: 369,2393. Mikroanalyse (Erwartet: Gemessen) C₂₀H₂₈N₆O·0.5H₂O: C; 63,64: 64,17, H; 7,74: 7,56, N; 22,26: 21,38.
Beispiel 8 (R)-2-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-buttersäure
Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (151 mg, 0,5 mmol) wurde in NMP (5 ml) und DBU (1,5 ml, 10 mmol) gelöst. (R)-(–)-2-Aminobuttersäure (99% ee/GLC; 1,03 g, 10 mmol) wurde dann hinzugefügt, und das Gemisch wurde unter N₂ bei 160°C für 1 h gerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Gemisch mit Zitronensäure (10% wäßrige Lösung) und CH₂Cl₂ (jeweils 25 ml) verdünnt. Die Phasen wurden getrennt, und die organische Fraktion wurde mit Salzlösung (2 × 10 ml) extrahier, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde in MeCN erneut gelöst und mittels präparativer RP-HPLC fraktioniert (Vydac 218TP1022, 9 ml/min, 22,5–32,5% MeCN in H₂O mit 0,1% CF₃COOH für 40 min). Geeignete Fraktionen wurden vereinigt und lyophilisiert unter Erhalt der reinen Titelverbindung (137 mg, 74,4%) als ein amorpher cremefarbener Feststoff. Analytische RP-HPLC (Vydac 218TP54, 1 ml/min): t_R = 16,04 min (0–60% MeCN), 15,95 min (22,5–32,5% MeCN in H₂O mit 0,1% CF₃COOH über 20 min), Reinheit: > 98% (λ = 214 nm). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 300 MHz) δ: 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH₂ CH ₃); 1,51 (d, J = 6,7 Hz, 6H, CH(CH ₃)₂); 1,78 (m, J = 7,3 Hz, 2H, CH ₂CH₃); 4,27 (m, 1H, CHCH₂); 4,64 (hept., J = 6,7 Hz, 1H, CH(CH₃)₂); 4,69 (m, 2H, CH ₂Ph); 7,25–7,41 (m, 6H, ArH). DE-MALDI-TOF MS (α-Cyano-hydroxy-Zimtsäure-Matrix): [M + H]⁺ = 369,41. FAB-MS: [M + H]⁺ = 369,2033 (C₁₉H₂₅N₆O₂ erfordert 369,2039).
Beispiel 9 (3RS,4R)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-hexan-3-ol
(3RS,4R)4-(Tritylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (R)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (1,5 g, 1 Äq., 4,53 mmol) in Ether (150 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –78°C wurde Ethylmagnesiumbromid (3 M in Ether, 1,51 ml, 1 Äq., 4,53 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Die Lösung wurde bei –78°C für 2 h gerührt und anschließend über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf 0°C gekühlt, H₂O (150 ml) hinzugefügt, und die organische Phase wurde abgetrennt. Die wäßrige Phase wurde mit mehr Ether (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt, mit Hexan:Ether (90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes (Öl; Ausbeute: 1,13 g (69%): (57% de 3S,4R: 43% de 3R,4R). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,45 + 0,69 (t + m, 6H, J = 7,43 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₂CH₃)OH), 1,12–1,29 (m, 4H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 2,16 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 2,54 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 3,21–3,40 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 4,29 + 4,39 (2 × d, 1H, J = 4,42 + 5,37 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 7,15–7,52 (m, 15H, 3 × Bz).
(3RS,4R)-4-Amino-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (3RS,4R)-4-(Tritylamino)-hexan-3-ol (1,13 g, 1 Äq., 3,14 mmol) in DCM (15 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (7 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 4 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, EtOH (20 ml) wurde hinzugefügt und unter Vakuum entfernt, und dieser Vorgang wurde zwei weitere Male wiederholt. Der Rückstand wurde aus Ether (5 ml) mit Hexan (40 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,37 g (100%). (57% de 3S,4R: 43% de 3R,4R). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,79 + 0,92 (t + m, 6H, J = 7,42 Hz, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH₂CH₃)OH), 1,30–1,67 (m, 4H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH ₂CH₃)OH), 2,70 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CN₂CH₃)OH), 2,84 + 2,96 (2 × m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 3,41 + 3,56 (2 × m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 7,71 (bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH).
(3RS,4R)4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (40 mg, 1 Äq., 0,14 mmol) in n-BuOH/DMSO (3,75 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,24 ml, 9,8 Äq., 1,38 mmol), gefolgt von (3RS,4R)-4-Aminohexan-3-ol (110 mg, 6,7 Äq., 0,93 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt, bis TLC DCM:Ether:MeOH (55:40:5) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 31 mg (58%). (57% de 4R,3S: 43% de 4R,3R). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 0,92–1,08 (m, 6H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₂CH₃)OH), 1,56 (d, 6H, J = 6,79 Hz, + -CH(CH ₃)₂), 1,44–1,69 (m, 4H, -NHCH(CH ₂CH₃) CH(CH ₂CH₃)OH), 3,45 (d, 1H, J = 6,32 Hz, OH), 3,56–3,70 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 3,91–4,06 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 4,58–4,69 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,73–5,01 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 5,16–5,32 + 6,01–6,22 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 7,22–7,43 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH₂-Bz), 7,52 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 383 ([M + H]⁺, 100), 323 (55), 296 (21). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 383,2559, Gemessen: 383,2542.
Beispiel 10 (3RS,4S)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino-hexan-3-ol
(3RS,4S)-4-(Tritylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (S)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (1,5 g, 1 Äq., 4,53 mmol) in Ether (150 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –78°C wurde Ethylmagnesiumbromid (3 M in Ether, 1,51 ml, 1 Äq., 4,53 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Die Lösung wurde bei –78°C für 2 h gerührt und anschließend auf Raumtemperatur über 16 h erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf 0°C gekühlt, H₂O (150 ml) hinzugefügt, und die organische Phase wurde abgetrennt. Die wäßrige Phase wurde mit mehr Ether (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 1,19 g (73%). (65% de 3R,4S: 35% de 3S,4S) ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,46 + 0,69 (t + m, 6H, J = 7,34 Hz, NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 1,13–1,29 (m, 4H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 2,17 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 2,55 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 3,20–3,39 (m, 1H, -NHCH (CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 4,29 + 4,39 (2 × d, 1H, J = 4,74 + 5,53 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 7,15–7,52 (m, 15H, 3 × Bz).
(3RS,4S)4-Amino-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (3RS,4S)-4-(Tritylamino)-hexan-3-ol (1,19 g, 1 Äq., 3,31 mmol) in DCM (15 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (7 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 4 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, EtOH (20 ml) wurde hinzugefügt und unter Vakuum entfernt und dieser Vorgang zwei weitere Male wiederholt. Der Rückstand wurde aus Ether (5 ml) mit Hexan (40 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,39 g (99%). (65% de 3R,4S: 35% de 3S,4S). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,79 + 0,92 (t + m, 6H, J = 7,50 Hz, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH₂CH₃)OH), 1,22–1,68 (m, 4H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 2,71 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 2,83 + 2,95 (2 × m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 3,39 + 3,54 (2 × m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 7,77 (bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH).
(3RS,4S)4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (40 mg, 1 Äq., 0,14 mmol) in n-BuOH/DMSO (3,75 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,24 ml, 9,8 Äq., 1,38 mmol), gefolgt von (3RS,4S)-4-Aminohexan-3-ol (110 mg, 6,7 Äq., 0,93 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt, bis TLC DCM:Ether:MeOH (55:40:5) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 32,5 mg (61%). (57% de 4S,3R: 43% de 4S,3S). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 0,85–1,08 (m, 6H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₂CH₃)OH), 1,56 (d, 6H, J = 6,79 Hz, + -CH(CH ₃)₂), 1,44–1,66 (m, 4H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH ₂CH₃)OH), 3,45 (d, 1H, J = 6,32 Hz, OH), 3,54–3,71 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 3,91–4,05 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 4,58–4,70 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,73–4,89 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 5,16–5,32 + 6,01–6,25 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH₂CH₃)OH), 7,24–7,43 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH₂-Bz), 7,54 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 383 ([M + H]⁺, 100), 323 (60), 295 (15). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 383,2559, Gemessen: 383,2542.
Beispiel 11 (3RS,4R)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2-methyl-hexan-3-ol
(3RS,4R)-2-Methyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Suspension von CuBr·SMe₂ (1,37 g, 2,2 Äq., 6,66 mmol) in Ether (100 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –78°C wurde Isopropyllithium (0,7 M in Pentan, 17,29 ml, 4 Äq., 12,1 mmol) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde auf –70°C erneut gekühlt und es wurde dazu eine Lösung von (R)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (1 g, 1 Äq., 3,03 mmol) in Ether (25 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt, anschließend auf –55°C erwärmen gelassen und bei dieser Temperatur für 3 h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte wäßrige Lösung von NH₄Cl (100 ml) hinzugefügt und über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ether (2 × 200 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Gradientensäulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein farbloses Öl; Ausbeute: 0,53 g (47%). (50% de 3S,4R: 50% de 3R,4R) ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,44 (t, 3H, J = 7,03 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 0,52 + 0,77 (2 × d, 6H, J = 6,48 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH ₃)₂)OH), 0,79–1,13 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 1,72 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,11 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,77 (m, 1H, -NHCN(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,99 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 4,55 (d, 1H, J = 5,21 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 7,15–7,46 (m, 15H, 3 × Bz).
(3RS,4R)-4-Amino-2-methyl-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (3RS,4R)-2-Methyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol (0,53 g, 1 Äq., 1,41 mmol) in DCM (2 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (5 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Ether (10 ml) mit Hexan (90 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (20 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Er halt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,18 g (100%). (50% de 3S,4R: 50% de 3R,4R). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,85–0,99 (m, 9H, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 1,42–1,79 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,95 (m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,18 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,37 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 7,58 (bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH).
(3RS,4R)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2-methylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (40 mg, 1 Äq., 0,14 mmol) in n-BuOH/DMSO (2,5 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,12 ml, 4,9 Äq., 0,69 mmol), gefolgt von (3RS,4R)-4-Amino-2-methylhexan-3-ol (54 mg, 2,9 Äq., 0,41 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff, Ausbeute: 8,8 mg (16%). (50% de 4R,3S: 50% de 4R,3R). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 0,96–1,04 (m, 9H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,63 Hz, -CH(CH ₃)₂), 1,68–2,19 (m, 4H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,24–3,32 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,86–4,01 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 4,57–4,70 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,76–4,93 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 5,33–5,60 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 7,24–7,44 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNNCH₂-Bz), 7,52 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 397 ([M + H]⁺, 100), 323 (70). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 397,2716, Gemessen: 393,2724.
Beispiel 12 (3RS,4S)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino-2-methyl-hexan-3-ol
(3RS,4S)-2-Methyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Suspension von CuBr·SMe₂ (1,37 g, 2,2 Äq., 6,66 mmol) in Ether (100 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –78°C wurde Isopropyllithium (0,7 M in Pentan, 17,29 ml, 4 Äq., 12,1 mmol) tropfenweise hinzugefügt und die Lösung auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf –70°C gekühlt und dazu eine Lösung von (S)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (1 g, 1 Äq., 3,03 mmol) in Ether (25 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt, anschließend auf –55°C erwärmen gelassen und bei dieser Temperatur für 3 h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte wäßrige Lösung von NH₄Cl (100 ml) hinzugefügt und über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ether (2 × 200 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein farbloses Öl; Ausbeute: 0,36 g (32%). (50% de 3R,4S, 50% de 3S,4S). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,44 (t, 3H, J = 6,79 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 0,52 + 0,76 (2 × d, 6H, J = 6,63 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH ₃)₂)OH), 0,80–1,15 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 1,70 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,10 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,76 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,99 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 4,55 (d, 1H, J = 5,84 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 7,17–7,46 (m, 15H, 3 × Bz).
(3RS,4S)4-Amino-2-methylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (3RS,4S)-2-Methyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol (0,36 g, 1 Äq., 0,97 mmol) in DCM (20 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (5 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Ether (10 ml) mit Hexan (90 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (20 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,13 g (100%). (50% de 3R,4S: 50% de 3S,4S), ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,85–1,01 (m, 9H, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 1,44–1,76 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 2,94 (m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,17 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,40 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 7,54 (bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH).
(3RS,4S)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2-methylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (40 mg, 1 Äq., 0,14 mmol) in n-BuOH/DMSO (2,5 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,24 ml, 4,9 Äq., 1,38 mmol), gefolgt von (3RS,4S)-4-Amino-2-methylhexan-3-ol (39 mg, 2,12 Äq., 0,30 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 6,7 mg (12%). (50% de 4S,3S: 50% de 4S,3R). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 0,95–1,04 (m, 9H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CH(CH ₃)₂), 1,62–1,88 (m, 4H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,26–3,32 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 3,87–4,00 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 4,57–4,70 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,76–4,90 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 5,25–5,55 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH), 7,26–7,45 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH₂-Bz), 7,53 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 397 ([M + H]⁺, 95), 385 (20), 323 (100). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 397,2716, Gemessen: 393,2724.
Beispiel 13 (3RS,4R)-4-(6-Benzylamino-9-isogropyl-9H-purin-2-ylamino)-2,2-dimethyl-hexan-3-ol
(3RS,4R)-2,2-Dimethyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Suspension von CuBr·SMe₂ (1,37 g, 2,2 Äq., 6,66 mmol) in Ether (100 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –78°C wurde tert-Butyllithium (1,5 M in Pentan, 8,0 ml, 4 Äq., 12,0 mmol) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf –55°C gekühlt und dazu eine Lösung von (R)-2-(Tritylamino)butyraldehyd (1 g, 1 Äq., 3,03 mmol) in Ether (25 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt, und bei dieser Temperatur für 3 h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte wäßrige Lösung von NH₄Cl (100 ml) hinzugefügt und über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ether (2 × 200 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Gradientensäulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,57 g (49%). (55% de 3S,4R: 45% de 3R,4R) ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,36 + 0,86 (2 × t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 0,57 + 0,71 (2 × s, 9H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH ₃)₃)OH), 1,38– 1,52 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 1,99 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 2.27 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 2,95 (m, 1H, -NHCN(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 4,22 + 4,77 (2 × d, 1H, J = 4,42 + 5,21 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)OH), 7,14–7,52 (m, 15H, 3 × Bz).
(3RS,4R)-4-Amino-2,2-dimethylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (3RS,4R)-2,2-Dimethyl-4(tritylamino)-hexan-3-ol (0,57 g, 1 Äq., 1,47 mmol) in DCM (10 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (5 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Ether (3 ml) mit Hexan (20 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (20 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,21 g (100%). (55% de 3S,4R: 45% de 3R,4R) ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,84–0,99 (m, 3H, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 1,25–1,29 (m, 9H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(C(CH ₃)₃)OH), 1,20–1,72 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,14 (m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,39 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,65 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 7,43, 7,77 + 8,54 (3 × bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH).
(3RS,4R)-4(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2,2-dimethylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (40 mg, 1 Äq., 0,14 mmol) in n-BuOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,12 ml, 4,9 Äq., 0,69 mmol), gefolgt von (3RS,4R)-4-Amino-2,2-dimethylhexan-3-ol (69 mg, 3,4 Äq., 0,48 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 13 mg (23%). (55% de 4R,3S: 45% de 4R,3R). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 1,00–1,04 (m, 12H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 1,56 + 1,58 (2 × d, 6H, J = 6,63 + 6,79 Hz, -CH(CH ₃)₂), 1,63–1,87 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,57 (d, 1H, J = 1,42 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,73–3,87 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 4,57–4,70 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,77–4,86 (m, 21, -HNCH ₂-Bz), 5,22–5,36 + 5,93–6,09 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 7,25–7,44 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH₂-Bz), 7,53 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 411 ([M + H]⁺, 90), 323 (100). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 411,2872, Gemessen: 411,2860.
Beispiel 14 (3RS,4S)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2,2-dimethylhexan-3-ol
(3RS,4S)-2,2-Dimethyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol
Zu einer gerührten Suspension von CuBr·SMe₂ (1,37 g, 2,2 Äq., 6,66 mmol) in Ether (100 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –78°C wurde tert-Butyllithium (1,5 M in Pentan, 8,0 ml, 4 Äq., 12,0 mmol) tropfenweise hinzugefügt und die Lösung auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf –55°C gekühlt und dazu eine Lösung von (S)-2-(Tritylamino)-butyraldehyd (1 g, 1 Äq., 3,03 mmol) in Ether (25 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt und bei dieser Temperatur für 3 h gerührt. Zu dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte wäßrige Lösung von NH₄Cl (100 ml) hinzugefügt und über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ether (2 × 200 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,47 g (40%). (53% de 3R,4S: 47% de 3S,4S) ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,37 + 0,87 (2 × t, 3H, J = 7,46 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 0,58 + 0,71 (2 × s, 9H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH ₃)₃)OH), 1,38–1,52 (m, 2H, -NHCH (CH ₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 2,00 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 2,28 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 2,95 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 4,24 + 4,79 (2 × d, 1H, J = 5,21 + 6,16 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 7,15–7,53 (m, 15H, 3 × Bz).
(3RS,4S)-4-Amino-2,2-dimethylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von (3RS,4S)-2,2-Dimethyl-4-(tritylamino)-hexan-3-ol (0,47 g, 1 Äq., 1,21 mmol) in DCM (10 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (5 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Ether (3 ml) mit Hexan (20 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (20 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,18 g (99%). (53% de 3R,4S: 47% de 3S,4S). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,86–0,99 (m, 3H, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 1,25–1,30 (m, 9H, NH₂CH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH₃)OH), 1,20–1,67 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,14 (m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,38 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,64 (m, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 7,41, 7,73 + 8,44 (3 × bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)CH(CH(CH₃)₂)OH).
(3RS,4S)-4-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2,2-dimethylhexan-3-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (40 mg, 1 Äq., 0,14 mmol) in n-BuOH/DMSO (5 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,12 ml, 4,9 Äq., 0,69 mmol), gefolgt von (3RS,4S)-4-Amino-2,2-dimethylhexan-3-ol (57 mg, 2,8 Äq., 0,39 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 7,2 mg (13%). (53% de 4S,3R: 47% de 4S,3S). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 0,99–1,04 (m, 12H, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(C(CH ₃)₃)OH), 1,56 + 1,58 (2 × d, 6H, J = 6,63 + 6,79 Hz, -CH(CH ₃)₂), 1,64–1,87 (m, 2H, -NHCN(CH ₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,57 (d, 1H, J = 1,42 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 3,73–3,86 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 4,57–4,69 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,78–4,86 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 5,22–5,34 + 5,95–6,08 (2 × m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)CH(C(CH₃)₃)OH), 7,26–7,44 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH₂-Bz), 7,53 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 411 ([M + H]⁺, 85), 323 (100). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 411,2872, Gemessen: 411,2860.
Beispiel 15 (R)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino-2-methyl-pentan-2-ol
(2S,3R)-3-(Tritylamino)-pentan-2-on
Zu einer gerührten Lösung von DMSO (2,19 ml, 2,8 Äq., 30,86 mmol) in DCM (30 ml) unter einer Argonatmosphäre bei 45°C wurde Oxalylchlorid (2 M in DCM, 7,69 ml, 1,4 Äq., 15,38 mmol) trop fenweise hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei –45°C für 1 h gerührt, woraufhin eine Lösung von (2S,3R)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol (3,81 g, 1 Äq., 11,04 mmol) in DCM (20 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 4 h gerührt, bis TLC (Hexan:Ether; 80:20) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Zu dem Reaktionsgemisch wurde N-Ethylpiperidin (7,54 ml, 5 Äq., 54,88 mmol) hinzugefügt, und die Lösung wurde über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit mehr DCM (50 ml) verdünnt und mit Wasser (200 ml) gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit DCM (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Ether (100 ml) gelöst, das feste Präzipitat durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Hexan (50 ml) gelöst, das feste Präzipitat durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 3,78 g (100%). (80% de 2S,3R: 20% de 2R,3R). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,73 (t, 3H, J = 7,35 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)C(CH₃)O), 1,47–1,60 (m, 5H, -NHCH(CH ₂CH₃)C(CH₃)O), 3,12 (d, 1H, J = 8,38 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)O), 3,32 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)O), 7,16–7,49 (m, 15H, 3 × Bz).
(R)-2-Methyl-3-(tritylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2S,3R)-3-(Tritylamino)-pentan-2-on (0,87 g, 1 Äq., 2,54 mmol) in Ether (100 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Methylmagnesiumiodid (3 M in Ether, 2,54 ml, 3 Äq., 7,62 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Die Lösung wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 45°C gestellt und bei dieser Temperatur für 16 h unter Rückfluß gekocht. Das Gemisch wurde erneut auf 0°C gekühlt, H₂O (100 ml) wurde hinzugefügt, die Lösung wurde durch Celite filtriert, und die Celite wurde mit mehr Ether (50 ml) gewaschen. Die vereinigte organische Phase wurde getrennt, die wäßrige Phase wurde mit Ether (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,21 g (23%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,26 (t, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 1,00 + 1,25 (2 × s, 6H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH ₃)₂OH), 0,72–1,43 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 1,84 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂ OH), 2,90 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 4,32 (s, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 7,17–7,46 (m, 15H, 3 × Bz).
(R)-3-Amino-2-methyl-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (R)-2-Methyl-3-(tritylamino)-pentan-2-ol (0,21 g, 1 Äq., 0,60 mmol) in DCM (5 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (2,5 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Ether (15 ml) mit Hexan (300 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,07 g (100%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz); δ 0,97 (t, 3H, J = 7,42 Hz, NH₂CH(CH₂ CH ₃)C(CH₃)₂OH), 1,06 + 1,19 (2 × s, 6H, NH₂CH(CH₂CH₃)C(CH ₃)₂OH), 1,28–1,71 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 2,72 (m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 5,21 (s, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂ OH), 7,63 (bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH).
(R)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2-methylpentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-(2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (20 mg, 1 Äq., 0,07 mmol) in n-BuOH/DMSO (1,25 ml, 4:1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,25 ml, 20,4 Äq., 1,43 mmol), gefolgt von (R)-3-Amino-2-methylpentan-2-ol (22 mg, 2,68 Äq., 0,19 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 4,2 mg (16%). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 1,01 (t, 3H, J = 7,50 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)C(CH₃)₂OH), 1,23 + 1,30 (2 × s, 6H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH ₃)₂OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CH(CH ₃)₂), 1,68–1,89 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 3,69–3,86 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 4,58–4,74 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,75–4,94 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 7,22–7,45 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH ₂-Bz), 7,57 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 383 ([M + H]⁺, 75), 323 (60), 308 (20), 246 (20), 192 (60), 176 (100), 165 (40). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 383,2559, Gemessen: 383,2544.
Beispiel 16 (S)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2-methyl-pentan-2-ol
(2R,3S)-3-(Tritylamino)-pentan-2-on
Zu einer gerührten Lösung von DMSO (1,95 ml, 2,8 Äq., 27,48 mmol) in DCM (30 ml) unter einer Argonatmosphäre bei –45°C wurde Oxalylchlorid (2 M in DCM, 6,85 ml, 1,4 Äq., 13,70 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei –45°C für 1 h gerührt, woraufhin eine Lösung von (2R,3S)-3-(Tritylamino)-pentan-2-ol (3,39 g, 1 Äq., 9,83 mmol) in DCM (20 ml) tropfenweise unter Rühren hinzugefügt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bei dieser Temperatur für 4 h gerührt, bis TLC (Hexan:Ether; 80:20) anzeigte, daß die Reaktion vollständig verlaufen war. Zu dem Reaktionsgemisch wurde N-Ethylpiperidin (6,71 ml, 5 Äq., 48,84 mmol) hinzugefügt, und die Lösung wurde über 16 h auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde mit mehr DCM (50 ml) verdünnt und mit Wasser (200 ml) gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit DCM (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Ether (100 ml) gelöst, das feste Präzipitat durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Hexan (50 ml) gelöst, das feste Präzipitat durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 3,15 g (93%). (80% de 2R,3S: 20% de 2S,3S). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,73 (t, 3H, J = 7,50 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)C(CH₃)O), 1,45–1,62 (m, 5H, -NHCH(CH ₂CH₃)C(CH₃)O), 3,12 (d, 1H, J = 8,53 Hz, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)O), 3,31 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)O), 7,13–7,45 (m, 15H, 3 × Bz).
(S)-2-Methyl-3-(tritylamino)-pentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (2R,3S)-3-(tritylamino)-pentan-2-on (0,59 g, 1 Äq., 1,72 mmol) in Ether (100 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Methylmagnesiumiodid (3 M in Ether, 1,72 ml, 3 Äq., 5,16 mmol) tropfenweise hinzugefügt. Die Lösung wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 45°C gestellt und bei dieser Temperatur für 16 h unter Rückfluß kochen gelassen. Das Gemisch wurde erneut auf 0°C gekühlt, H₂O (100 ml) wurde hinzugefügt, die Lösung wurde durch Celite filtriert, und die Celite wurde mit mehr Ether (50 ml) gewaschen. Die vereinigte organische Phase wurde abgetrennt, die wäßrige Phase wurde mit Ether (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und mit Hexan:Ether (100:0→90:10) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,10 g (16%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,27 (t, J = 7,10 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)CH(CH₃)OH), 0,99 + 1,25 (2 × s, 6H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH ₃)₂OH), 0,75–1,42 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 1,88 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂ OH), 2,92 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 4,32 (s, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 7,18–7,46 (m, 15H, 3 × Bz).
(S)-3-Amino-2-methylpentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von (S)-2-Methyl-3-tritylamino)-pentan-2-ol (0,38 g, 1 Äq., 1,06 mmol) in DCM (5 ml) unter einer Argonatmosphäre bei Raumtemperatur wurde Trifluoressigsäure (2,5 ml) tropfenweise hinzugefügt, und die Lösung wurde bei dieser Temperatur für 1 h gerührt. Das Lö sungsmittel wurde unter Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde aus Ether (15 ml) mit Hexan (300 ml) unter Rühren unter Erhalt eines gelben Öls präzipitiert. Das Lösungsmittel wurde von dem Öl dekantiert, und das Öl wurde mit Hexan (30 ml) gewaschen und unter Vakuum getrocknet unter Erhalt der Titelverbindung als ein hellgelbes Öl; Ausbeute: 0,12 g (99%). ¹H-NMR (d₆-DMSO, 250 MHz): δ 0,97 (t, 3H, J = 7,42 Hz, NH₂CH(CH₂ CH ₃)C(CH₃)₂OH), 1,07 + 1,19 (2 × s, 6H, NH₂CH(CH₂CH₃)C(CH ₃)₂OH), 1,28–1,61 (m, 2H, NH₂CH(CH ₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 2,72 (m, 1H, NH₂ CH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 5,21 (s, 1H, NH₂CH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂ OH), 7,63 (bs, 2H, NH ₂CH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH).
(S)-3-(6-Benzylamino-9-isopropyl-9H-purin-2-ylamino)-2-methylpentan-2-ol
Zu einer gerührten Lösung von Benzyl-2-fluoro-9-isopropyl-9H-purin-6-yl)-amin (30 mg, 1 Äq., 0,11 mmol) in n-BuOH/DMSO (1,25 ml, 4: 1) bei Raumtemperatur unter einer Argonatmosphäre wurde DIEA (0,25 ml, 13,65 Äq., 1,43 mmol), gefolgt von (S)-3-Amino-2-methylpentan-2-ol (40 mg, 3,25 Äq., 0,34 mmol) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein vorgeheiztes Ölbad bei 140°C gestellt und bei dieser Temperatur für 72 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, und die Lösung wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc (50 ml) und Salzlösung/Wasser (1:1, 100 ml) aufgeteilt, die wäßrige Phase wurde mit mehr EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert, und die vereinigte organische Phase wurde mit Salzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Gradientensäulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit Hexan:Ether:MeOH (50:50:0→50:50:2) eluiert unter Erhalt der Titelverbindung als ein weißer Feststoff; Ausbeute: 7,3 mg (18%). ¹H-NMR (d-CDCl₃, 250 MHz): δ 1,01 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH₂ CH ₃)C(CH₃)₂OH), 1,23 + 1,31 (2 × s, 6H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH ₃)₂OH), 1,58 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CH(CH ₃)₂), 1,69–2,00 (m, 2H, -NHCH(CH ₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 3.70–3.87 (m, 1H, -NHCH(CH₂CH₃)C(CH₃)₂OH), 4,59–4,73 (m, 1H, -CH(CH₃)₂), 4,74–4,97 (m, 2H, -HNCH ₂-Bz), 7,23–7,45 (m, 6H, 5 × Bz-H + HNCH₂-Bz), 7,56 (s, 1H, -N=CH-N). FABMS m/z (relative Intensität): 383 ([M + H]⁺, 85), 323 (100). Genaue Masse (M + H): Tatsächlich: 383,2559, Gemessen: 383,2544.
Die biologische Aktivität der Verbindungen der Erfindung wurde durch Messen der CDK-Hemmung mittels einer auf einem Test basierenden Durchmusterung und/oder durch einen Zytotoxizitätsassay unter Verwendung von einer oder mehreren Zellinien gezeigt. Die Ergebnisse sind unten in den Tabellen 1 und 2 gezeigt.
Beispiel 17
Kinasespezifität von ausgewählten Verbindungen
Ausgewählte Verbindungen aus den oben genannten Beispielen wurden hinsichtlich ihrer CDK2/Cyclin E-, CDK1/Cyclin B-, CDK4/Cyclin D1- und CDK7/Cyclin H-Aktivität untersucht.
Assays auf CDK2/Cyclin E-Kinase, CDK1/Cyclin B und CDK4/Cyclin D1 können durchgeführt werden, indem man die Phosphorylierung von GST-Rb in einem geeigneten System überwacht. Somit wird GST-Rb-Phosphorylierung, die durch CDK2/Cyclin E, CDK1/Cyclin B oder CDK4/Cyclin D1 induziert wird, durch Aufnahme von radioaktiv markiertem Phosphat in GST-Rb(772–928) unter Verwendung von radioaktiv markiertem ATP in einem in vitro-Kinaseassay im 96-Well-Format bestimmt. Das Phosphorylierungsreaktionsgemisch (Gesamtvolumen: 40 μl) bestand aus 50 mM HEPES, pH 7,4, 20 mM MgCl₂, 5 mM EGTA, 2 mM DTT, 20 mM β-Glycerophosphat, 2 mM NaF, 1 mM Na₃VO₄, einem Proteaseinhibitorcocktail (Sigma, siehe oben), BSA 0,5 mg/ml, 1 μg gereinigter Enzymkomplex, 10 μl GST-Rb-Sepharoseperlen, 100 μM ATP, 0,2 μCi ³²P-ATP. Die Reaktion wird für 30 min bei 30°C unter konstantem Schütteln durchgeführt. Am Ende dieses Zeitraums werden 100 μl 50 mM HEPES, pH 7,4, und 1 mM ATP zu jedem Napf hinzugefügt und das Gesamtvolumen auf eine GFC-gefilterte Platte überführt. Die Platte wird fünfmal mit 200 μl 50 mM HEPES, pH 7,4, und 1 mM ATP gewaschen. Zu jedem Napf werden 50 μl Szintillationsflüssigkeit hinzugefügt, und die Radioaktivität der Proben wird auf einem Szintillationszähler (Topcount, HP) gemessen. Die IC50-Werte von verschiedenen Peptiden wurden unter Verwendung der GraFit-Software berechnet.
Für eine Verwendung in diesem Assay kann CDK2 von verfügbaren Quellen erhalten oder durch rekombinante Verfahren, wie sie beschrieben sind, hergestellt werden. His-markiertes CDK2/Cyclin E und CDK1/Cyclin B können in Sf9-Insektenzellen, die mit den geeigneten Bakulovirus-Konstrukten infiziert sind, coexprimiert werden. Die Zellen werden zwei Tage nach der Infektion durch Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit geerntet, und die Proteine werden aus den Insektenzellenpellets durch Metallchelatchromatographie gereinigt. Kurz gesagt wird das Insektenzellenpellet in Puffer A (10 mM Tris-HCl, pH 8,0, 150 mM NaCl, 0,02% NP40 und 5 mM β-Mercaptoethanol, 1 mM NaF, 1 mM Na₃VO₄ und Proteaseinhibitorcocktail (Sigma), der AEBSF, Pepstatin A, E 64, Bestatin und Leupeptin enthält) durch Ultraschallbehandlung lysiert. Die lösliche Fraktion wird durch Zentrifugation geklärt und auf Ni-NTA-Agarose (Quiagen) geladen. Ungebundene Proteine werden mit 300 mM NaCl, 5–15 mM Imidazol in Puffer A weggewaschen, und die gebundenen Proteine werden mit 250 mM Imidazol in Puffer A eluiert. Die gereinigten Proteine werden ausgiebig gegen Lagerungspuffer (20 mM HEPES, pH 7,4, 50 mM NaCl, 2 mM DTT, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0,02% NP40, 10% v/v Glycerin) dialysiert, in aliquote Teile aufgeteilt und bei –70°C gelagert. PKC-α-6xHis kann auf die gleiche Weise gereinigt werden, aber unter Verwendung anderer Puffer – 50 mM NaH₂PO₄, pH 8,0, 0,05% Triton X-100 anstelle von Tris bzw. NP40.
ERK-2-Kinase-Aktivität wurde durch den Einbau von radioaktivem Phosphat in basisches Myelinprotein (MBP), was durch gereinigtes Maus-ERK-2 (Upstate Biotechnologies) katalysiert wird, gemessen. Das Reaktionsgemisch (Gesamtvolumen: 50 μl) bestand aus 20 mM MOPS, pH 7,0, 25 mM β-Glycerophosphat, 5 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 100 μM ATP, 0,2 μCi [γ-³²P]-ATP.
PKA-Kinase-Aktivität wurde durch den Einbau von radioaktivem Phosphat in das Peptid Kemptide (Fluka Biochemica Kat. Nr. 60645), was durch die katalytische Untereinheit der von zyklischem Amylopektin abhängigen Kinase (PKA) (Calbiochem Kat. Nr. 539487) katalysiert wird, gemessen. Das Reaktionsgemisch (Gesamtvolumen: 50 μl) bestand aus 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-Glycerophosphat, 5 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 100 μM ATP, 0,2 μCi [γ-³²P]-ATP.
Beispiel 18
Antiproliferative Wirkung von ausgewählten Verbindungen
Ausgewählte Verbindungen aus den oben genannten Beispielen wurden einem Standardassay hinsichtlich Zellproliferation unterzogen, wobei sieben verschiedene humane Tumorzellinien verwendet wurden: A2780, A278CisF, CH1, CH1DoxR, HCT116, HT29 und KM12. Standard-72 h-MTT- (Thiazolylblau; 3-[4,5-Dimethyldiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazoliumbromid) Assays wurden durchgeführt (Haselsberger, K., Peterson, D. C., Thomas, D. G., Darling, J. L. Anti Cancer Drugs 1996, 7, 331–8; Loveland, B. E., Johns, T. G., Mackay, I. R., Vaillant, F., Wang, Z. X., Hertzog, P. J. Biochemistry International 1992, 27, 501–10). Humane Tumorzellinien wurden von der ATCC (American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manessas, VA 20110-2209, USA) erhalten. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammen mit dem durchschnittlichen IC₅₀ für sieben anderen Zellinien gezeigt.
Es wurde gezeigt, daß der Hauptstoffwechseldeaktivierungsweg in vivo des experimentellen antiproliferativen CDK-Inhibitionsmittels Roscovitin (siehe internationale PCT-Patentanmeldung WO 97/20842) eine Oxidation der Carbinolgruppe zu einer Carboxylgruppe und anschließende Ausscheidung dieses Metaboliten umfaßt [Nutley, B. P., Raynaud, F. I., Wilson, S. C., Fischer, P., McClue, S., Goddard, P. M., Jarman, M., Lane, D. und Workman, P. Clin. Cancer Res. 2000, 6 Suppl. (Proc. 11th AACR-NCI-EORTC Intl. Conf. #318)]. Authentisches synthetisches Material (siehe Beispiel 10), das mit diesem Metaboliten identisch ist, zeigt verminderte biologische Aktivität in vitro. Somit hemmen Roscovitin und das Carboxylderivat CDK2/Cyclin E-Aktivität mit IC₅₀-Werten von 0,08 bzw. 0,24 μM. In ähnlicher Weise waren die durchschnittlichen antiproliferativen IC₅₀-Werte in einem repräsentativen Feld humaner transformierter Tumorzellinien für Roscovitin und das Carboxylderivat ca. 10 bzw. > 50 μM.
In einem Versuch, die Stoffwechseldeaktivierung zu verhindern, wurden daher Analoge von Roscovitin, die modifizierte Purin-C-2-Substituenten enthielten, ins Auge gefaßt. Somit sollte ein Austausch der primären Alkoholfunktion gegen sekundäre Alkohole in 2,6,9-trisubstituierten Purinen, wie Roscovitin, eine metabolische Alkohol-Carboxyl-Umwandlung verhindern. Pharmakokinetische Analyse von z.B. den Titelverbindungen in den Beispielen 1 und 2 zeigte, daß ähnliche Blutmengen (AUC: Fläche unter der Kurve) und verbesserte Halbwertszeiten (t_1/2) tatsächlich erreicht werden konnten, wenn diese Verbindungen unter ähnlichen Bedingungen wie Roscovitin an Mäuse verabreicht wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben. Vergleichswerte für Roscovitin waren: AUC = 75454 nh-h/ml, t_1/2 = 2,7 h. Pharmakokinetische Analyse wurde durchgeführt, wie es zuvor beschrieben wurde [Raynaud, F. I., Nutley, B. P., Goddard, P., Fischer, P. M., Marriage, H., Lane, D. und Workman, P. Clin. Cancer Res. 1999, 5 Suppl. (Proc. 10th AACR-NCI-EORTC Intl. Conf. #541)]. Zusätzliche Beispiele von Verbindungen, die Modifikationen aufweisen, welche eine Carbinyol-Carboxyl-Oxidation verhindern, während die biologische Aktivität auf einem ähnlichen Niveau wie von Roscovitin aufrechterhalten bleibt, sind in Tabelle 1 gezeigt.
Ein weiteres Ziel bestand darin, biologisch aktive Analoge von Roscovitin, welche verbesserte Wasserlöslichkeit aufweisen würden, zu Zwecken der parenteralen Verabreichung bereitzustellen. Es wurde gefunden, daß ein Austausch der Benzylgruppe gegen Pyridylmethylgruppen, insbesondere die Pyrid-2-ylmethylgruppe, dieses Kriterium erfüllte (siehe Tabelle 1). Die Pyridylmethylverbindungen besitzen erheblich niedrigere berechnete n-Octanol/Wasser-Aufteilungskoeffizienten (ClogP 2,22 im Vergleich zu 3,7 für Roscovitin).
Tabelle 1
Tabelle 2

Claims

Verbindung der Formel I
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, worin R₂ 3-Hydroxypiperidin-1-yl oder NHCH(R₄)CH(R₃)OH ist, worin R₃ Wasserstoff oder Methyl ist und R₄ Methyl, Ethyl oder Isopropyl ist, R₆ 3-Nitrophenylamino, 3,4-Dimethoxybenzylamino, Pyrid-2-yl-methylamino, Pyrid-4-yl-methylamino oder Indan-5-amino ist und R₉ Isopropylcyclopentanyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R₂ NHCH(CHMe₂)CH₂OH oder NHCH(CH₂Me)CH₂OH ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, ausgewählt unter den folgenden:
Verbindung, ausgewählt unter den folgenden:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Optisches Isomer einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, welche in der Form eines Racemats vorliegt.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 im Gemisch mit einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel, Bindemittel oder Träger oder einem Gemisch davon umfaßt.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer proliferativen Störung.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die proliferative Störung Krebs oder Leukämie ist.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die proliferative Störung Psoriasis ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 8 bis 10, wobei die Verbindung in einer Menge verabreicht wird, die ausreicht, um wenigstens ein CDK-Enzym zu hemmen.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei das CDK-Enzym CDK2 ist.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer neurodegenerativen Störung.
Verwendung nach Anspruch 13, wobei die neurodegenerative Störung Neuronenapoptose ist.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer viralen Erkrankung.
Verwendung nach Anspruch 15, wobei die Verbindung in einer Menge verabreicht wird, die ausreicht, um wenigstens eines von CDK2, CDK7, CDK8 oder CDK9 zu hemmen.