DE60118019T2

DE60118019T2 - Zusammensetzung enthaltend hydroxyzitronensäure und garcinol zur gewichtsreduzierung

Info

Publication number: DE60118019T2
Application number: DE60118019T
Authority: DE
Inventors: Muhammed Piscataway MAJEED; Vladimir Piscataway BADMAEV
Original assignee: Sabinsa Corp
Current assignee: Sabinsa Corp
Priority date: 2000-08-17
Filing date: 2001-08-17
Publication date: 2006-11-02
Anticipated expiration: 2021-08-18
Also published as: JP2008110996A; WO2002014477A2; AU9685101A; US20020187943A1; DK1254209T3; ATE320248T1; JP2004506657A; CA2387548A1; US7063861B2; JP4205943B2; DE60118019D1; EP1254209B1; EP1254209A4; ES2260293T3; WO2002014477A3; NZ518116A; EP1254209A2; PT1254209E; AU773081B2

Description

Die Anmeldung nimmt nach 35 U.S.C. §1.119(e) Priorität aus der vorläufigen Anmeldung mit der Serien-Nr. 601225,821 in Anspruch, welche am 17. August 2000 eingereicht wurde.
Hintergrund der Erfindung
Hydroxyzitronensäure ist eine alpha-hydroxy tribasische Säure (1,2-Dihydroxypropan-1,2,3-tricarbonsäure) mit zwei asymmetrischen Zentren, infolge dessen sich die Bildung von zwei Paaren an Diasteroisomeren oder vier verschiedenen Isomeren ergibt: (–) Hydroxyzitronensäure (I), (+) Hydroxyzitronensäure (II), (–) Allo-Hydroxyzitronensäure (III) und (+) Allo-Hydroxyzitronensäure (IV). (1–2) Das (–) Hydroxyzitronensäure (HCA)-Isomer kommt in der Schale der Garcinia cambogia-Frucht (Familie Clusiaceae) vor. (1–2) Es ist für dieses Isomer gezeigt worden, dass es in vitro ein potenter linear kompetitiver Hemmstoff des Enzyms ATP-Zitratlyase ist, wobei nachgewiesen wurde, dass es eine sehr viel größere Affinität für das gereinigte Enzym aufweist, als sowohl sein natürliches Substrat Zitrat als auch die anderen Stereoisomere von Hydroxyzitronensäure. (1–2) Die biologische Bedeutung von ATP-Zitratlyase liegt darin, dass es sich um ein zitratspaltendes Enzym handelt, welches die extramitochondriale Spaltung von Zitrat zu Acetyl CoA und Oxalacetat katalysiert und die Biosynthese von Fettsäuren ermöglicht. Die reversible Hemmung von Zitratlyase durch (–) HCA kann zur Verringerung von Fettsäuresynthese und Lipogenese führen. Diese Effekte wurden in vivo im Anschluss an die orale, intravenöse oder intraperetoneale Verabreichung von (–) Hydroxyzitrat an Versuchstiere gemessen und gezeigt. (3) Wenn (–) HCA vor der Fütterungszeit oral verabreicht wurde, konsumierten die mit (–) HCA gefütterten Tiere weniger Futter und ihre hepatische Fettsäure- und Cholesterinsynthese war im Vergleich zu den unbehandelten Kontrollen deutlich verringert. (3–4) Die beobachtete Abnahme hinsichtlich der Futteraufnahme kann nur einer der Faktoren sein, welche für die durch (–) HCA geförderte Gewichtsabnahme verantwortlich sind, da Versuche mit Ratten, welche mit (–) HCA gefüttert wurden, eine Gewichtsabnahme ohne Abnahme der Gesamtnahrungsaufnahme zeigten. (5) Es scheint, dass der mögliche Mechanismus einer Gewichtsabnahme mit (–) HCA eine Komponente bezüglich des Energieaufwands umfasst, wobei deren Natur unbestimmt bleibt. (5) Dieser Mechanismus zum Energieaufwand, verringerter Lipogenese und der Verringerung der Nahrungsaufnahme in (–) HCA behandelten Tieren kann zu Gewichtsabnahme und verringertem Gesamtkörperfettgehalt führen. (6)
Obwohl das Potenzial von (–) HCA als gewichtsverringernde Verbindung bereits seit den 1970er Jahren erkannt worden ist, wurden nur wenige klinische Studien hinsichtlich dieser Verbindung durchgeführt. (7–12). Diese wenigen Studien, welche eine HCA vermittelte Vorbeugung von überschüssigem Körperfett untersuchten, führten zu widersprüchlichen Ergebnissen, höchstwahrscheinlich aufgrund der Tatsache, dass HCA im Cytosol der Zielzelle nur in geringem Maß bioverfügbar ist. In einer klinischen Studie wurde eine kontroverse, ballaststoffreiche Diät verwendet. Die Verwendung einer ballaststoffreichen Diät in Kombination mit HCA kann die gastrointestinale Absorption von HCA verringern, da ballaststoffreiche Diäten dafür bekannt sind, die Absorption vieler Nährstoffe und Mikronährstoffe zu verringern. Hinsichtlich HCA ist dieser Sachverhalt relevant, da beschrieben worden ist, dass dessen Wirksamkeit beim Hemmen des intrazellulären Enzyms, Adenosintriphosphat (ATP)-Zitratlyase gänzlich von einem Vorliegen von HCA im Inneren der Zielzelle abhängig ist.
In ihrem US-Patent sprachen die Erfinder einen wichtigen Sachverhalt hinsichtlich der Bioverfügbarkeit der HCA-Verbindungen an. Das 5,783,603-Patent beschrieb ein Herstellungsverfahren, welches zu einer einzigartigen Struktur für ein Kaliumsalz von HCA führte, wobei dieses Salz dessen Transport über biologische Membranen hinweg ermöglichte, wodurch für eine kompetitive Hemmung von ATP-Zitratlyase mehr HCA wirksam in das Cytosol abgegeben wurde. Obwohl das '603-Patent eine HCA-Verbindung mit merklich verbesserter Bioverfügbarkeit betraf, war dessen Bioverfügbarkeit noch immer relativ ineffizient. Beispielsweise zeigt eine an hepatischen Zellen durchgeführte in vitro-Studie, dass 5 mM extrazelluläres Kalium-HCA ATP-Zitratlyase hemmen konnte. Es werden jedoch aber nur 0,5 mM Kalium-HCA für eine effektive Hemmung von ATP-Zitratlyase im Cytosol benötigt. Deshalb bedarf es einer im 10fachen Überschuss vorliegenden Menge an Kalium-HCA außerhalb der Zielzelle, um eine Konzentration zu erreichen, welche 1/10 der Menge im Cytosol beträgt. Diese Erkenntnisse bezüglich einer relativ schlechten HCA-Bioverfügbarkeit wurden in präklinischen Experimenten bestätigt (14) und zeigen die Notwendigkeit, die Bioverfügbarkeit und Wirksamkeit von HCA weiter zu verbessern.
Garcinol wird wie HCA aus der Schale der Garcinia sp. Frucht isoliert und zeigt antioxidative und chemoprotektive Eigenschaften (15). In einem Experiment zeigten Ratten, welchen eine Garcinoldiät verabreicht wurde (0,01 % und 0,05 %), eine signifikant verringerte Entwicklung von Azoxymethan (AOM)-induzierten aberranten Krypten (aberrant crypt foci) (ACF) des Dickdarms im Vergleich zu Kontrolltieren. Füttern mit Garcinol erhöhte signifikant die Aktivität von Glutathion-S-Transferase und Quinon-Reduktase aus Leber und supprimierte O₂- und NO-Erzeugung sowie sie Expression von iNOS- und COX-2-Proteinen. Diese Befunde legen einen möglichen chemopräventiven Mechanismus von Garcinol nahe.
Garcinol und Isogarcinol wurden hinsichtlich ihrer antibakteriellen Aktivität gegenüber Methicillin-resistentem Staphylococcus aureus bewertet (16). Diese Verbindungen zeigten eine Minimumhemmkonzentration bei 3,1–12,5 Mikrogramm/ml oder eine Minimumhemmkonzentration, welche nahezu gleich der des Antibiotikums Vancomycin war.
1981 beschrieben Krishnamurthy et al. (17) die Isolierung von Garcinol und seinem farblosen Isomer Isogarcinol aus Garcinia indica. Ihre Strukturen wurden auf der Grundlage chemischer Daten sowie von Spektraldaten vorgeschlagen. Garcinol, C38H5006 Smp. 122(o), kristallisierte aus Hexanextrakt der Fruchtschalen von G. indica als gelbe Nadeln (1,5 %) aus. Das UV-Spektrum von Garcinol legte nahe, dass das 1,3-Diketonsystem mit der 3,4- Dihydroxybenzoylgruppe konjugiert ist. Das IR-Spektrum des Trimethylethers zeigte das Vorliegen einer gesättigten Carbonylgruppe (1727 cm^–1) und von zwei oe,beta-ungesättigten Carbonylgruppen (1668 und 1642 cm^–1).
Isogarcinol wurde durch Säulenchromatografie aus dem Extrakt isoliert. Seine Identität wurde durch Mischschmelzpunkt und durch Vergleich von UV-, IR- und PMR-Spektren ermittelt. Das IR-Spektrum von Isogarcinol zeigte das Vorliegen einer gesättigten Carbonylgruppe (1715 cm^–1), einer Aroylgruppe (1670 cm^–1) sowie einer oe,beta-ungesättigten Carbonylgruppe (1635 cm^–1).
Rao et al. (18) beschrieben die Isolierung von Cambogin (33H5506), Smp. 242–244, aus dem Latex des Garcinia cambogia-Baums. Die Struktur wurde durch UV-, IR- und NMR-Untersuchungen bestätigt. UV: 231–234, 275–278 und 305–313; IR (KBr): 1720 (gesättigtes Carbonyl), 1680 und 1642 cm^–1 (ungesättigtes Carbonyl und Doppelbindung). Neben Cambogin beschrieben sie auch die Isolierung von Camboginol und setzten seine Struktur in Beziehung zu Cambogin.
1982 isolierten N. Krishnamurthy et al. (19) Anthocyaninpigmente aus den frischen Red ripe-Früchten von Kokam (Garcinia indica). Der Schalenanteil wurde vom Rest der Frucht abgetrennt und unter Verwendung von Methanol, welches 1 % HCl enthielt, dreimal in einem Mischer aufgeweicht. Die Extrakte wurden kombiniert, filtriert und im Vakuum bei 30 °C konzentriert. Papierchromatografie des Kokam-Pigmentextrakts zeigte zwei Anthocyaninbanden. Die langsame wandernde Bande wurde als B1 bezeichnet und die andere Bande wurde als B2 bezeichnet. Die Gesamtanthocyaninkonzentration wurde bezogen auf ein Trockengewicht auf 2,4 % geschätzt; das Verhältnis von B1 zu B2 beträgt 1:4.
Anthocyanin B1 wurde durch chemische Untersuchungen sowie spektroskopische Untersuchungen als Cyanidin-drei-Glukosid identifiziert. Infolge von Hydrolyse ergab diese Verbindung Cyanidin und Glukose. Das Maximum des UV-Spektrums (527 nm) der Glykoside verschob sich mit Aluminiumchlorid zu 567 nm, wobei dies zeigt, dass die 3'- und 4'-Hydroxylgruppen des Cyanidins frei vorliegen. Die Struktur wurde durch direkten Vergleich mit einer Probe eines Cyanidin-drei-Glukosids, welche aus Maulbeere erhalten wurde, bestätigt.
Anthocyanin B2 wurde als Cyanidin-drei-Sambubiosid identifiziert. Dieses Anthocyanin ergab infolge vollständiger Hydrolyse Cyanidin, Glucose und Xylose. Die Spektraldaten legten nahe, dass B2 ein drei-substituiertes Glykosid von Cyanidin ist. Wasserstoffperoxidhydrolyse entfernte das Disaccharid aus dem Pigment, welches infolge weiterer saurer Hydrolyse Glukose und Xylose ergab. Die Struktur wurde durch direkten Vergleich mit einer Probe von Cyanidin-drei-Sambubiosid, welche aus Roselle isoliert wurde, identifiziert.
Die vorliegende Erfindung basiert auf der unerwarteten Feststellung, dass ein Kombinieren von HCA mit natürlichen Verbindungen, welche aus der Garcinia sp.-Pflanze erhalten werden, nämlich Garcinol (polyisoprenyliertes Benzophenon) und gegebenenfalls Anthocyaninverbindungen, nicht nur zu einer Erhöhung der biologischen Aktivität von HCA führt, sondern auch zu einer Erhöhung der Aktivität von Garcinol und gegebenenfalls Anthocyanin.
Kurze Beschreibung der Figuren
1: Trendlinien des Prozentanteils an Subjekten, welche Gewichtsabnahme erfuhren.
2: Durchschnittlicher Prozentsatz an Studiensubjekten, welche Gewichtsabnahme erfuhren.
3: Prozentanteil an Gewichtsabnahme in C- und NC-Gruppen bei aufeinander folgenden Untersuchungszeitabständen.
4: Prozentanteil an Gewichtsabnahme in C- und NC-Gruppen bei aufeinander folgenden Untersuchungszeitabständen.
5: Durchschnittliche Gewichtsabnahme (Ibs) in C- und NC-Gruppen bei aufeinander folgenden Untersuchungszeitabständen.
6: Durchschnittlicher Prozentsatz der Körpermassenzahl- (body mass index) (BMI) Änderung in C- und NC-Gruppen bei zwei Untersuchungszeitabständen.
7: Prozentsatz der Körpermassenzahl- (BMI) Änderung in C- und NC- Gruppen bei zwei Untersuchungszeitabständen.
8: Prozentuale Änderung des Körpergewichts in Gruppe C-Subjekten.
9: Prozentuale Änderung des Körpergewichts in Gruppe NC-Subjekten.
10: Änderung des Prozentsatzes der fettfreien Körpermasse (lean body mass) (LBM) in Gruppe NC-Subjekten.
11: Änderung des Prozentsatzes der fettfreien Körpermasse (LBM) in Gruppe C-Subjekten.
12: Prozentsatz der Fettabnahme in Gruppe NC-Subjekten.
13: Prozentsatz der Wasserveränderung in Gruppe C-Subjekten.
14: Prozentsatz der Wasserveränderung in Gruppe NC-Subjekten.
15: Selbstbewertete Appetitniveaus in Gruppen C und NC in aufeinander folgenden Zeitabständen.
16: Selbstbewertete Energieniveaus in Gruppen C und NC in aufeinander folgenden Untersuchungszeitabständen.
17: Pulsrate in Gruppen C und NC in aufeinander folgenden Zeitabständen.
18: Systolischer Blutdruck in Gruppen C und NC in aufeinander folgenden Untersuchungszeitabständen.
19: Diastolischer Blutdruck in Gruppen C und NC in aufeinander folgenden Untersuchungszeitabständen.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Die Erfindung betrifft eine Zusammensetzung umfassend Hydroxyzitronensäure (HCA) in Kombination mit Garcinol, gegebenenfalls enthaltend Anthocyanin, wobei die Zusammensetzung die Wirkung aufweist, die Bioverfügbarkeit von HCA im cytosolischen Kompartment einer Zelle zu erhöhen.
Ein anderer Gegenstand der vorliegenden Erfindung umfasst die Verwendung der erfinderischen Zusammensetzung umfassend HCA in Kombination mit Garcinol, gegebenenfalls enthaltend Anthocyanin, als Therapie zur Gewichtsabnahme in Tiersubjekten, vorzugsweise Menschen. Die therapeutischen Effekte für die Zusammensetzung, welche in Studien an Maus und Mensch beobachtet wurden, umfassen eine Verringerung des Gesamtkörpergewichts und der Körpermassenzahl, eine Verringerung von Körperfett, eine Erhöhung fettfreier Körpermasse und des Gehalts von Körperwasser und eine Verringerung des wahrgenommenen Appetitniveaus. Für die Kombination der Verbindungen wurde auch gezeigt, dass sie größere Zitratlyase hemmende Eigenschaften aufweisen als jede Verbindung für sich alleine.
Für Garcinol allein wird auch gezeigt, dass es in einem Tiertumormodell chemopräventive Eigenschaften aufweist.
Biologische Aktivität umfasst, ist aber nicht beschränkt auf die Aktivität zur Appetitunterdrückung, zur Hemmung von cytoplasmatischer Zitratlyase, für erhöhten Fettabbau und erhöhte anti-oxidativer Aktivität.
Hydroxyzitronensäure (HCA) ist eine alpha-hydroxy-tribasische Säure (1,2-Dihydroxypropan-1,2,3-tricarbonsäure), umfassend (–) Hydroxyzitronensäure (I), (+) Hydroxyzitronensäure (II), (–) Allo-Hydroxyzitronensäure (III) und (+) Allo-Hydroxyzitronensäure (IV).
Garcinol ist ein polyisoprenyliertes Benzophenon (PPB), welches aus Garcinia sp. abgeleitet ist. Garcinol ist ein wohl bekanntes Antioxidationsmittel (d.h. emulgiertes Garcinol unterdrückt Superoxidanion vergleichbar zu DL-alphatocopherol), ist antikarzinogen und weist auch antimikrobielle Eigenschaften auf.
Anthocyanine sind eine Klasse von Flavenoidverbindungen, bei welchen es sich um weit verbreitete pflanzliche Polyphenole handelt. Es gibt bemerkenswerte Hinweise, dass die diätischen Anthocyaninpigmente in einer Reihe von menschlichen Erkrankungen präventive und therapeutische Rollen spielen. Es wird angenommen, dass die chemische Grundlage für diese wünschenswerten Eigenschaften von Anthocyaninen mit ihrer antioxidativen Kapazität in Zusammenhang steht – ihrer Fähigkeit, freie Radikale, welche Biomoleküle beschädigen, zu beseitigen und einzufangen.
Die Kombination von Garcinol und HCA erhöht die Bioverfügbarkeit von HCA im Cytosol und die gleiche Kombination erhöht auch die antioxidativen Eigenschaften von Garcinol. Diese wechselseitige Erhöhung der biologischen Eigenschaften für die Verbindungen der Erfindung wird auch als „eine biologische Wirkungsamplifizierung" oder als „Amplibio" bezeichnet.
Amplibio betrifft einen Mechanismus, wobei eine der Verbindungen dazu dient, die biologische Wirkung der anderen Verbindung zu fördern und im Ergebnis beide biologischen Aktivitäten erhöht werden.
In vielen biologischen Systemen kann die Wechselwirkung von zwei oder mehr Komponenten zu keiner Wechselwirkung, keinem Antagonismus, keinem Synergismus oder einer anderen Form von Synergismus, welche als Amplibio bezeichnet wird, führen. Nicht alle Verbindungen, die Synergismus zeigen, zeigen Amplibio-Wirkung. Beispielsweise gibt es einen Vorteil beim Kombinieren von alpha-Liponsäure mit Vitaminen E und/oder C, da Liponsäure beide Vitamine regeneriert, wobei es sie für den Körper besser bioverfügbar macht. Beide Vitamine steigern jedoch nicht die Wirkung der Liponsäure oder verbessern diese auf andere Weise. Andererseits zeigen die Ergebnisse, welche durch Kombination mehrfach ungesättigter Fettsäuren mit Fettsäure-löslichen Vitaminen erhalten werden, beispielhaft einen Amplibio-Effekt: Vitamin E konserviert Fettsäuren durch Verhinderung von Oxidation, während Fettsäuren die Absorption von Vitamin E erhöhen. Ein anderes Beispiel für einen Amplibio-Effekt wird beobachtet, wenn ergänzende Nährstoffe mit Verbindungen kombiniert werden, welche durch den lebenden Körper endogen hergestellt werden: Curcuminoide sind dafür bekannt, Glutathionmengen im Körper zu erhöhen, wobei dies dadurch geschieht, dass sie die Rate an Glutathionverwendung in einer glutathionfreien Radikalreaktion regulieren. Erhöhtes Glutathion erhöht wiederum die Verfügbarkeit von Curcuminoiden im Körper.
Die Amplibio-Wirkung der vorliegenden Erfindung kann die folgenden Mechanismen umfassen:

– die anti-oxidative Wirkung von Garcinol/Anthocyanin (gesteigert durch HCA), wobei negative Ladungen, welche die Zelle umgeben, neutralisiert werden, um den Transport und die Aufnahme von HCA in die Zelle zu erleichtern;
– Garcinol/Anthocyanin, welche die Fluidität von Zellmembranen beeinflussen, um den Transport und die Aufnahme von HCA in die Zelle zu erleichtern;
– Garcinol/Anthocyanin, weiche mit HCA synergistisch wirken, um Zitratlyase zu hemmen, wodurch der Grenzwert für eine derartige Hemmung mit HCA abgesenkt wird.

Deshalb wird gezeigt, dass eine Steigerung der HCA-Aktivität durch dessen Wechselwirkung mit Garcinol/Anthocyanin beeinflusst wird, in ähnlicher Weise wie beobachtet wird, dass HCA das biologische Potenzial von Garcinol und Anthocyanin steigert. Die qualitative und quantitative Wechselwirkung zwischen den drei Verbindungen der Erfindung ist zuvor nicht beschrieben worden.
Verfahren zur Extraktion und Reinigung von HCA, Garcinol und Anthocyaninverbindungen sind im Fachbereich wohl bekannt.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch ein Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung, umfassend PPB, Anthocyanin und HCA, extrahiert aus den Früchten Garcinia sp., wobei das Verfahren umfasst:

(a) Extraktion der frischen Früchte von Garcinia mit 8 bis 15 Teilen eines C₁ bis C₆-Alkohols (z.B. Methanol, Ethanol, Isopropylalkohol) durch Rückfluss und Zirkulieren in einem geschlossenen Reaktor, bis die Extraktion vervollständigt ist;
(b) Abfiltrieren des extrahierten Materials aus dem verbrauchten Material;
(c) Konzentrieren des extrahierten Materials auf ¼-1/6 seines Volumens unter Vakuum bei 540 bis 600 mm/Hg;
(d) Abkühlen des Konzentrats für etwa 20 bis 30 Stunden bei –5 bis 5 °C und Abfiltrieren des präzipitierten Materials in einen Nutschefilter;
(e) Erhalten eines festen Rückstands (Ausbeute 2,5 bis 4 %), umfassend rohes Garcinol (Assay 16–20 %).
(f) Lösen von rohem Garcinolextrakt in einem Kohlenwasserstofflösungsmittel, wie beispielsweise Petrolether, Hexan oder Toluol (3 bis 8 Teile) und Extrahieren/Partitionieren mit einem hochpolarem, nicht löslichen Lösungsmittel, wie beispielsweise Acetonitril (2 bis 4 Teile, 3 bis 5 mal);
(g) Trennen und Konzentrieren der polaren Lösungsmittelschicht auf ¼-1/6 ihres Volumens und Abkühlen bei –5 bis 8 °C für 12 bis 16 Stunden;
(h) Filtrieren und Waschen des Rückstands mit dem polaren Lösungsmittel, um gelbes Garcinol zu erhalten (Ausbeute = 0,8 bis 1,5 %, Assay 55 bis 70 %);
(i) Zugabe von molaräquivalenten Mengen an Alkali (Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid) zum extrahierten Material aus Schritt c), berechnet auf Grundlage des Gehalts an HCA (etwa 20 bis 25 %);
(j) Erhitzen des Gemischs unter Rühren bei 80 bis 95 °C für 2,5 bis 5 Stunden, um gelbes PPB (Garcinol) zu erhalten;
(k) Abfiltrieren des präzipitierten Materials (HCA-Salz von Natrium oder Kalium) unter Verwendung eines Nutschefilters und Waschen mit kaltem Alkohol;
(l) Auflösen des präzipitierten Materials in 3 bis 5 Teilen Wasser;
(m) Zugeben einer molaräquivalenten Menge an Calciumchlorid zu dieser wässrigen Lösung und Erwärmen unter Rühren bei 80 bis 95 °C für 4 bis 6 Stunden;
(n) Abfiltrieren und Trocknen des präzipitierten Materials bei 50 bis 75 °C unter Vakuum, um weißes HCA-Calcium (Ausbeute = 25 bis 35 %) zu erhalten;
(o) Vermischen des gelben PPB (Garcinol)-Pulvers, welches in Schritt (j) erhalten wurde, und des HCA-Calciums, welches in Schritt (n) erhalten wurde, in einem Verhältnis von 1:10, um eine Zusammensetzung zu ergeben, welche HCA-Calcium mit einem Minimum von 55 % und PPB (Garcinol) mit einem Minimum von 5 % enthält; und
(p) gegebenenfalls Vermischen von HCA-Calcium oder einem anderen Salz von HCA mit PPB und Proantho-Cyanidinen in wirksamen Verhältnissen mit einem Minimum von 0,5 % Proantho-Cyanidinen.

Die PPB-Zusammensetzung der Erfindung kann auch wie im Folgenden beschrieben erhalten werden:

(a) Extrahieren von verbrauchter Garcinia-Frucht aus einer Suspension mit Toluol und 5 % Methanol, um eine Paste zu erhalten, welche 20 % PPBs aufweist (Garcinol – 15 %; Cambogin – 5 %);
(b) Verbesserung der Paste, um eine Zusammensetzung zu erhalten, umfassend 50 % Garcinol und etwa 10–15 % Cambogin, welches in die Mutterlauge kommt, und 50 % Garcinol wird durch eine weitere Kristallisierung weiter verbessert, um 90 % Garcinol plus 35 % Cambogin zu ergeben;
(c) Erhitzen einer 90 %igen Garcinolzusammensetzung auf 100 °C zur Umwandlung zu Cambogin mit etwa 80 % Zielverbindung (proof), wobei der Rest Garcinol ist;
(d) Mischen des Produkts aus Schritt (c) zu gleichen Teilen mit einem Teil einer 90 %igen Garcinolzusammensetzung, um 85 %–90 % PPB-Zusammensetzung mit 42–45 % Zielverbindung zu erhalten;
(e) Erhalten einer Endzusammensetzung mit 90 % PPB in nahezu gleichen Teilen von Cambogin und Garcinol, wobei cyclisierte Produkte, welche als polyisoprenylierte Xanthone bezeichnet werden, den Rest bilden.

Der Begriff „Bioverfügbarkeit" ist definiert als ein beliebiges Mittel, um den Wirkmechanismus einer Verbindung zur Gewichtsabnahme zu erhöhen. Entsprechend wird die Bioverfügbarkeit von Calcium im Körper im Grunde durch eine erhöhte Knochenmasse gemessen, wobei dies bedeutet, dass ein beliebiger Mechanismus, welcher dem Zweck dient, zusätzliches Calcium in den Knochen einzubauen, die Bioverfügbarkeit von Calcium erhöht.
Der Begriff „wirksame Menge" beschreibt eine ausreichende Menge einer Verbindung, z.B. entsprechend HCA, Garcinol oder Anthocyanin, welche abgegeben wird, um ein entsprechendes Niveau an cytosolischer Zitratlyase zu erzeugen.
Eine erste Aufgabe dieser Erfindung ist es, ein Therapieverfahren bereitzustellen, wobei die Bioverfügbarkeit von HCA drastisch erhöht wird, um im Cytosol therapeutisch wirksame Mengen an HCA zu erhalten, wodurch das Subjekt, welches einer Verringerung oder Hemmung von Zitratlyase bedarf, behandelt wird. Die erhöhte Aktivität für HCA wird durch Coverabreichung mit Verbindungen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Garcinol und Anthocyanin erreicht.
Eine andere Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Gewichtsabnahmetherapie bereitzustellen, wobei die Wirkungen von Forskolin (USPN 5,804,596) durch das Vorliegen von Garcinol und gegebenenfalls Anthocyanin drastisch erhöht werden. Die Menge an Forskolin ist die gleiche, welche im '596-Patent beschrieben wird, und die Mengen an Garcinol und Anthocyanin sind die gleichen Mengen, die hierin zur Verwendung mit HCA beschrieben werden.
Insbesondere beträgt eine zur Gewichtsabnahme und Appetitunterdrückung wirksame HCA- und Garcinolmenge 500 mg tid bzw. 25 mg, stärker bevorzugt kann die Garcinoldosierung in einem Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596), liegen. Eine zur Gewichtsabnahme wirksame Menge an HCA und Anthocyanin beträgt 500 mg tid bzw. 10 mg, stärker bevorzugt kann die Anthocyanindosierung im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen. Eine zur Gewichtsabnahme und Appetitunterdrückung wirksame an HCA, Garcinol und Anthocyanin beträgt 500 mg, 25 mg bzw. 10 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Garcinol und Anthocyanin im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen.
Eine zur Zitratlyasehemmung wirksame Menge an HCA und Garcinol beträgt 500 mg tid bzw. 25 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Garcinol von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen. Eine zur Zitratlyasehemmung wirksame Menge an HCA und Anthocyanin beträgt 500 mg tid bzw. 10 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Anthocyanin im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen. Eine zur Zitratlyasehemmung wirksame an HCA, Garcinol und Anthocyanin beträgt 500 mg, 25 mg bzw. 10 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Garcinol und Anthocyanin im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen.
Eine zur Erhöhung des Fettstoffwechsels und zur Erhöhung der fettfreien Körpermasse wirksame Menge an HCA und Garcinol beträgt 500 mg tid bzw. 25 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Garcinol im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen. Eine wirksame Menge zur Erhöhung des Fettstoffwechsels und zur Erhöhung der fettfreien Körpermasse an HCA und Garcinol beträgt 500 mg tid bzw. 25 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Garcinol im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen. Eine zur Erhöhung des Fettstoffwechsels und zur Erhöhung der fettfreien Körpermasse wirksame an HCA, Garcinol und Anthocyanin beträgt 500 mg, 25 mg bzw. 10 mg, stärker bevorzugt kann die Dosierung an Garcinol und Anthocyanin im Bereich von 0,01 % bis 10 % HCA oder anderen Verbindungen zur Gewichtsabnahme, wie beispielsweise dem Diterpen Forskolin (USPN 5,804,596) liegen.
Die therapeutischen Wirkungen von HCA und Garcinol zur Gewichtsabnahme in Kombination mit der Rolle von Garcinol als chemopräventives Mittel werden mittels der folgenden, nicht beschränkend wirkenden Beispiele beschrieben.
Beispiel 1
Eine Verabreichung von Garcinol und HCA an zwei Mausstämme, SKH-1 und CF-1, führte zu signifikant verringertem Gesamtkörpergewicht und Unterleibsfettzunahme im Vergleich zu Kontrollen, Futter erhaltenden Tieren und der Tiergruppe, welche entweder nur Garcinol oder HCA erhielten. Darüber hinaus führte die diätische Verabreichung von Garcinol zu einer signifikanten Verringerung hinsichtlich einer aberranten Dickdarm-Kryptenbildung (AC wird als vorbösartiger Zustand angesehen) in CF-1-Mäusen im Vergleich zu den Tieren, welche mit einer Kontrolldiät gefüttert wurden oder welche mit einer Diät gefüttert wurden, welche nur HCA oder Garcinol enthielt. Interessanterweise wurde die einer Gewichtszunahme vorbeugende Wirkung der Garcinol- und HCA-Kombination erreicht, obwohl die Garcinol- plus HCA-Tiere einen höheren Futter- und Wasserverbrauch aufwiesen als die Kontroll-, Garcinol- und HCA-Gruppen.
Tabelle 1. Wirkung oraler Verabreichung von Garcinol (GAR), Hydroxyzitronensäure (HCA) und einer Kombination aus Garcinol und Hydroxyzitronensäure auf das Körpergewicht sowie den Futter- und Flüssigkeitsverbrauch in SKH-1-Mäusen
Tabelle 2. Wirkung einer 10wöchigen oralen Verabreichung von Garcinol (GAR) und Hydroxyzitronensäure (HCA) auf Azoxymethan (AOM)-induzierte Bildung von aberranten Dickdarmkrypten (AC) und Anreicherung von Fett im Unterleib von CF-1-Mäusen
Diese Daten legen einen umfassenden biologischen Mechanismus für Garcinol als Hilfsmittel für HCA nahe, welcher die Regulierung von Körpergewicht, Körperzusammensetzung und Körperstoffwechselrate umfasst.
Beispiel 2
Die Rolle von Garcinol als chemopräventives Mittel wurde in einem Experiment bestätigt, in welchem CF-1-Mäuse topisch mit dem entzündungs- und tumorfördernden Mittel TPA behandelt wurden.
Tabelle 3. Wirkung von Garcinol (GAR) auf TPA-induzierte Ohrödeme*

*Weibliche CF-1-Mäuse wurden topisch mit TPA behandelt, welches mit oder ohne Garcinol auf die Ohrenhaut aufgetragen wurde. Fünf Stunden später wurden die Mäuse getötet und Ohrstanzen wurden gewogen. Die Daten sind als Mittelwert±SE ausgedrückt.

Diese Daten legen einen biologischen Mechanismus für Garcinol als chemopräventives Mittel nahe.
Beispiel 3
Klinische Studien zum Gewichtsabnahmepotenzial von Garcinol und HCA
Die Kombination, bestehend aus 500 mg HCA-Calciumsalz und 25 mg Garcinol (NC), wurde in einer doppelblinden, 12wöchigen klinischen Studie gegenüber der Formulierung, enthaltend 500 mg HCA-Calciumsalz (C), bewertet. Die Studie wurde mit 46 übergewichtigen weiblichen Freiwilligen (BMI größer als 25) durchgeführt. Die Teilnehmer wurden angewiesen, eine Kapsel einer entweder einen Wirkstoff enthaltenden Formulierung oder einer Placebo enthaltenden Formulierung dreimal täglich einzunehmen, eine halbe Stunde vor jeder Mahlzeit. Jede Teilnehmende wurde gebeten, ihre vorherigen Leibesübungen und Essgewohnheiten beizubehalten. Darüber hinaus wurde die körperliche Aktivität, basierend auf einem Fragebogen vor und nach dem Test, überwacht. Die Teilnehmenden wurden hinsichtlich der Basislinie, den Wochen 2, 4, 6, 8, 10 und 12 bewertet. Die folgenden klinischen Parameter wurden bei jedem Besuch bewertet: Gesamtkörpergewicht, Körperzusammensetzung durch das bioelektrische Impedanzverfahren, selbst eingeschätztes Appetit- und Energieniveau, Pulsrate und Blutdruck. Während des 12wöchigen Versuchs nahmen die durchschnittlichen Werte in Gruppe NC hinsichtlich Körpergewicht und Fettgehalt signifikant ab, wohingegen die fettfreie Körpermasse und das Gesamtkörperwasser im Vergleich zu den Basiswerten und zu C-Gruppe-Werten signifikant anstiegen. Die Appetitniveaus waren in der NC-Gruppe signifikant geringer als in der C-Gruppe, wohingegen die Energieniveaus in beiden Studiengruppen im Vergleich zur Basislinie anstiegen. Im Verlauf dieser Studie wurden keine subjektiven oder objektiven negativen Wirkungen beschrieben. Die Pulsrate, der systolische und der diastolische Blutdruck blieben während der Studie auf gleichem Niveau.
NC ist bei der Verringerung von Gesamtkörpergewicht und Body Mass Index; beim Reduzieren von Körperfett; beim Erhöhen fettfreier Körpermasse und dem Gehalt an Körperwasser sowie bei der Verringerung des Appetitempfindungsniveaus statistisch wirksamer als C. Die Energieniveaus von Subjekten wurden durch die Kuren in beiden Gruppen nicht erhöht und NC und C erzeugten keine subjektiven oder objektiven Nebeneffekte.
Industrielle Anwendbarkeit
Die zusammengefassten Daten aus Tierversuchen und klinischen Studien zeigen, dass die Erfindung in einer Gewichtsabnahmetherapie wirksamer ist als HCA für sich alleine und dass zusätzlich zum Fettverlust die erfinderische Zusammensetzung auch die fettfreie Körpermasse verringert, wobei dies zu einer verbesserten Körperzusammensetzung führt. Das Erhalten oder Verbessern der fettfreien Körpermasse während Extrapfunde von fetthaltigem Gewebe abgebaut werden, wurde vom Center for Disease Control befürwortet. Die fettfreie Körpermasse ist wichtig, da kürzlich erkannt wurde, dass sie ein wichtiges, positives Vorhersageelement über die kardiovaskuläre Gesundheit und die Gesamtgesundheit darstellt. Die chemopräventive Wirkung von Garcinol im Tierversuchsmodell kann auch auf komplizierte Weise mit der Rolle in Verbindung stehen, welche die Verbindung beim Verbessern der Körperzusammensetzung einnimmt.
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Claims

Zusammensetzung umfassend Hydroxyzitronensäure in Kombination mit Garcinol und gegebenenfalls Anthocyanin.
Zusammensetzung nach Anspruch 1 umfassend Hydroxyzitronensäure in Kombination mit Garcinol.
Zusammensetzung nach Anspruch 1 umfassend Hydroxyzitronensäure in Kombination mit Garcinol und Anthocyanin.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1–3 zur Herstellung eines Medikaments zur Appetitunterdrückung.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1–3 zur Herstellung eines Medikaments zur Steigerung des Fettabbaustoffwechsels und Steigerung der fettfreien Körpermasse.
Verwendung nach einem der Ansprüche 4 oder 5, wobei zytoplasmatische Zitratlyase inhibiert wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 4 oder 5, wobei die anti-oxidative Aktivität von Garcinol gesteigert wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 4 oder 5, wobei die anti-oxidative Aktivität von Anthocyanin gesteigert wird.