CN101686963A - 具有脂解活性的组合物，其生产方法及组合物的用途 - Google Patents

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Abstract

发明涉及具有脂解活性的组合物，所述组合物至少包含多酚(尤其是黄酮类化合物(特别是黄烷酮和花色素苷)以及酚酸的形式)、和咖啡碱。发明还涉及获得此类组合物的方法，和组合物的用途，其施用是为了促进脂肪燃烧或促进体重减轻。

Description

具有脂解活性的组合物，其生产方法及组合物的用途
发明涉及具有脂解活性的组合物，即获得自柑桔属水果。
发明还涉及获得此类组合物的方法，以及此类组合物的用途。
发明涉及食品补充物和粉末在其食品应用的领域，即，其与食品的掺和。
脂解是与生物体降解脂肪相应的生物学现象。
此类降解可以允许脂肪组织中以脂肪形式积累的能量的释放。在生理学水平，该降解发生在脂肪细胞的水平，其反应形式包括通过水解所述脂肪细胞中积累的甘油三酯，释放脂肪酸和甘油。
因此，通过肌肉力量训练的辅助，增加脂解现象是诱导体重减轻和机体强化的有效解决方式，因为脂解作用导致脂肪燃烧，从而可以允许增加身体性能。
一些食品补充物在这方面的作用是已知的，但是它们掺有对羟福林，一种与麻黄素结构类似的生物碱。当使用含有这些分子的组合物时，报道了对心血管和脑血管水平的不良效应。
还已知其它分子的潜在但不专一的脂解活性。它们是例如茶碱、咖啡碱或异丙基肾上腺素。虽然普遍已知茶碱和咖啡碱天然的存在于植物中，例如茶或咖啡，但它们也是兴奋性物质，过量不适合健康和标准化的饮食。异丙基肾上腺素是医学物质。
本发明自认为能够满足消费者就其具有脂解活性的食品用途来寻找食品补充物或粉末的期望，所述食品补充物或粉末是天然起源的、有效的，同时保留了不含任何不理想的副作用。
对水果(即柑橘属水果)进行的研究，允许提出根据本发明的组合物的独特脂解作用。
为此，发明涉及具有脂解活性的组合物，其中其至少包含多酚(即黄酮类化合物(特别是黄烷酮和花色素苷)和酚酸的形式)，和咖啡碱。
此外，根据发明的组合物还可以包含维生素C。
根据发明的另一个特征，根据发明的组合物包含至少30％多酚，优选的60-90％。
根据发明的另一个特征，根据发明的组合物包含0.1-4％咖啡碱。
根据发明的另一个特征，根据发明的组合物包含0.1-3％维生素C。
根据发明的另一个特征，根据发明的组合物包含至少0.1-30％黄烷酮、0.01-10％花色素苷以及0.01-5％酚酸，百分比是相对于总组合物的。
有利的，根据发明的组合物获得自下述植物物种中的一种或多种植物物种的混合物：红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、甜橙(Citrus aurantiumL.var.sinensis L.)、苦橙(代代花(Citrus aurantium L.var.amara))、葡萄柚(Citrus paradisi)、瓜拉那(Paulinia cupanna)、巴拉圭茶(IllexParaguariensis)和可乐果(Cola Nitida)。
根据发明的另一个特征，根据发明的组合物获得自植物物种的混合物，其包括至少5-30wt％红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、5-30wt％葡萄柚(Citrus paradisi)、5-25wt％甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)、1-10wt％苦橙(Citrus aurantium L.var.amara)，和5-20wt％瓜拉那(Paulinia cupanna)。
有利的，根据发明的组合物是单独的或具有其它添加剂，以水溶性或水不可溶性粉末的形式。该粉末可以掺和到多种植物制剂形式中，或在食品中单独使用。
本发明还涉及获得根据发明的此类组合物的方法，其中方法包括至少：
-从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)和甜橙果汁(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)中提取多酚的步骤；
-从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、葡萄柚(Citrus paradisi)、甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)和苦橙(Citrus aurantium L.var.amara)的副产物中提取多酚的步骤；
-混合上述提取步骤获得的提取物的步骤；
-在混合步骤后，通过在麦芽糖糊精载体上雾化，干燥混合物的步骤；
-在干燥步骤后，咖啡碱归一化(normalizing)的步骤，即通过向干燥步骤获得的产物中添加瓜拉那(Paulinia cupanna)和/或巴拉圭茶(IllexParaguariensis)，和/或可乐果(Cola Nitida)的提取物；
-最后，获得的产品过筛的步骤，从而获得粉末。
根据发明的另一个特征，方法的特征是在于进行从红橙(Citrus sinensisL.Osbeck)和甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)果汁中提取花色素苷和酚酸，以及从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、葡萄柚(Citrusparadisi)、甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)和苦橙(Citrusaurantium L.var.amara)的副产物中提取黄烷酮。
发明还涉及根据发明的组合物的用途，作为食品补充物或用于丰富食物，即饮料例如水果和/或蔬菜汁，以及乳产品。
有利的，使用根据发明的组合物，其施用是为了增加脂肪的降解或增加体重的减轻。
根据下文对一些示例性实施方案的详细说明，本发明的目标和优势是显而易见的。参考附图可以更好的理解该说明，其中图1-3显示了实验结果，证实根据发明的组合物的功效，图4是示意图，显示了用于获得根据发明的组合物的方法的实施方案。
本发明涉及食品补充物和粉末用于其食品应用的领域，即，它们与食品的掺和，特别涉及具有脂解活性的组合物，即获得自柑橘属水果。
选择用于获得上述物质的植物物种，从而获得提供协同作用中等剂量活性物质的组合物。
特别地，根据发明的组合物利用了其所包含的多酚(即以黄酮类化合物的形式)、和酚酸和咖啡碱的效果之间的协同作用。
有利的，通过额外存在维生素C增加协同作用。
发现多酚更准确地是黄酮类化合物和酚酸的形式。特别地，根据发明的组合物具有特定的黄烷酮和花色素苷含量(其都是黄酮类化合物的亚类)，以及特定的酚酸含量。
表1显示了在根据发明的组合物的优选实施方案中，这些各种关键活性物质的剂量。
特别地，根据发明的具有脂解活性的组合物包括至少30％多酚，优选的60和90％之间，以及0.1-4％咖啡碱。
黄烷酮、花色素苷和酚酸特别代表了多酚。有利的，组合物特别包含0.1-30％黄烷酮、0.01-10％花色素苷和0.01-5％酚酸，百分比针对总组合物，且存在的总多酚达到总组合物的至少30％
黄烷酮可以既不是排他的，也不是穷举的，而主要是例如橙皮苷、柚皮苷、异柚皮苷、柚皮素-7-芸香糖苷、新橙皮苷和柚皮素的形式。
花色素苷可以既不是排他的，也不是穷举的，而主要是例如花青素-3-葡糖苷、锦葵色素-3-葡糖苷、芍药花青素-3-葡糖苷和矮牵牛苷配基-3-葡糖苷的形式。
酚酸可以既不是排他的，也不是穷举的，而主要是例如咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、肉桂酸和芥子酸的形式。
维生素C有利的存在水平为总组合物的0.1-3％。
通过多种方法分析根据发明的组合物的样品，来计算百分比。通过280nm的紫外分光光度法测量总多酚，在550nm以相同的技术测量花色素苷。通过高性能液相色谱(HPLC)依次测量黄烷酮、酚酸以及花色素苷、咖啡碱和维生素C。
下文将描述的优化的方法允许获得根据发明的、具有脂解活性的组合物，最终形式是水溶性或水不溶性的粉末。
令人惊讶的，实验发现上述活性物质的剂量特别有效的满足了寻找的目标，即，对脂肪降解的影响，和因此对增加身体机能。
特别地，根据发明的组合物作用于脂解作用。
为了更好的理解这些实验，必需先提出脂解作用中涉及的生物学因子。
脂解作用是包括通过脂类水解释放脂肪酸和甘油的反应。其可以在消化食物脂的水平发生，也可以发生在脂肪组织的水平，或者，外周脂解作用反应包括通过水解生物体的脂肪细胞中积累的甘油三酯，释放脂肪酸和甘油。与降解积累脂肪的预期影响相应，这是我们特别感兴趣的反应。
脂解作用是激素敏感的反应，即对激素《儿茶酚胺》(例如肾上腺素或去甲肾上腺素)敏感。其由这些激素与脂肪细胞的β-3受体连接触发，导致腺苷酸环化酶(即环状AMP(cAMP)合成的酶)活化，从而引起胞内环状AMP(cAMP)的增加。环状AMP(cAMP)是活化甘油三酯脂肪酶的分子，其依次负责脂肪细胞中以甘油三酯形式积累的储存脂肪的释放。储存脂肪的释放通过甘油三酯的水解作用发生，其根据反应：
1甘油三酯→3游离脂肪酸(FFA)+1甘油
然后，释放的FFA作为生物体细胞的能量底物发挥作用。
通常通过两种酶的作用产生脂解作用的抑制，其导致与预期相反的效果，所述酶是：儿茶酚-o-甲基转移酶和磷酸二酯酶。儿茶酚-o-甲基转移酶干涉与β-3受体连接的激素的分解代谢，导致限制了产生FFA释放的循环的刺激。磷酸二酯酶干涉了环状AMP(cAMP)向非活性的非环状形式的降解，这也导致限制了产生FFA释放的循环的刺激。
为了测试根据发明的组合物的功效而进行实验，实验由两方面组成，一方面是在人脂肪细胞上进行的离体实验，为了评估根据发明的组合物对FFA释放的影响，与其它物质相比，也称为非酯化脂肪酸(NEFA)；另一方面是体内实验，即对超重个体进行的临床研究，向其施用根据发明的组合物(与施用安慰剂相比)。
以下两个实验特别揭示了施用根据发明的组合物的生理学效应。
实验1：
表2和图1中显示了第一个实验的结果，该实验的目标是检测施用根据发明的组合物对维持在悬浮液中的人脂肪细胞释放非酯化脂肪酸(NEFA)的影响。该测量确实揭示了根据发明的组合物对脂肪细胞甘油三酯的水解的影响。
该实验在人脂肪细胞上进行，所述脂肪细胞分离自35岁的女性供体的腹部整形手术。在收到后，立即在存在胶原酶的条件下，在37℃孵育脂肪组织碎片30分钟。分离和洗净的脂肪细胞与4倍体积的测试培养基(碳酸氢盐1.87mg/mL，青霉素/链霉素25UI/mL/25μg/mL，谷氨酰胺2mM，加不含酚红的MEM至100％(v/v)，其中添加脱脂的牛血清白蛋白0.5％(w/v))混合。
为了获得可比较的结果，在测量NEFA之前，对悬浮液中的脂肪细胞平行测试了多种化合物，即，茶碱、异丙基肾上腺素、咖啡碱、滴定12％咖啡碱的瓜拉那的溶液，最终是根据发明的组合物的溶液。
向540μL测试培养基环境中的脂肪细胞悬浮液添加60μL的测试化合物，37℃孵育混合物，搅拌2小时。
在测试混合物中，维持茶碱的终浓度1mM，起始的储液是在测试培养基中10-2M。
类似的，在测试混合物中，维持异丙基肾上腺素的终浓度1μM，起始的储液是在测试培养基中10-2M。
在测试混合物中，维持咖啡碱的终浓度0.5mM，起始的储液是在测试培养基中5mM。
由于以粉末形式提供滴定咖啡碱12％的瓜拉那，在测试培养基中制备20mg/mL的储液，即，2％(w/v)。从该储液出发，进行三种储液在测试混合物中的最终稀释的测试：1％、0.2％和0.04％。
由于根据发明的组合物是粉末，一方面在DMSO中稀释，另一方面在测试培养基中稀释。用DMSO制备的储液制备为10mg/mL，即，1％(w/v)，在测试混合物中，DMSO溶液中根据发明的组合物的终浓度是0.01％。
在测试培养基中制备的储液制备为20mg/mL，即，2％(w/v)，在测试混合物中，测试培养基溶液中根据发明的组合物的终浓度是1％和0.2％。
还制备了对照，其只包含测试培养基中的脂肪细胞。
从10种不同的级分中制备了总计10种剂量，其添加或未添加化合物。
在孵育时间结束时，在倾析5分钟后，测量NEFA在30μL培养基的级分中。通过NEFA-C测量试剂盒常规的制备剂量。
统计学处理测量的数据。以Dunnet多重比较测试的方法，通过方差分析(ANOVA)进行组间比较。
表2和图1中给出该研究的结果，后者由表2所示结果的图示组成。
对照显示的基础脂解作用是2小时释放了36μM NEFA。
1mM茶碱和1μM异丙基肾上腺素显著的刺激脂解作用(相对于对照，系数分别是10，p＜0.01)。在0.5mM测试的咖啡碱明显刺激NEFA的释放(相对于对照，系数约为9.5，p＜0.01)。因此，用作为具有已知效应的参照化合物的这些化合物获得的脂解作用刺激作用证实了非酯化脂肪酸(NEFA)释放的实验。
添加根据发明的组合物，所述组合物溶于水性的测试培养基，在1％和0.2％时测试，这导致明显刺激NEFA释放(相对于对照，系数分别是约7和6)。证实了这些刺激对剂量的依赖。溶于DMSO并以0.01％测试的根据发明的组合物刺激脂解作用的活性与测试培养基中1％所获得的结果相似。
最终，滴定12％咖啡碱的瓜拉那的稀释液(以1％、0.2％和0.04％测试)显著且剂量依赖性的刺激脂解活性(相对于对照，系数分别是5、3和2.5)。
此外，用NEFA的剂量系统性的实施了缺少产物干扰的对照。通过测量使用的终浓度的化合物级分的光密度(OD)实施阴性对照(相同培养基，但没有脂肪细胞)。化合物的存在不应该显著增加信号，即化合物的存在不应该显著改变样品的OD，所述改变可以是由于所使用的终稀释的化合物的高OD，或者在测试化合物中存在不可忽视量的脂肪酸。在存在或缺少测试化合物的条件下，通过测量已知量的NEFA(0.5mM)，实施阳性对照。产物的存在不应该显著降低信号。
在所述实验条件下，对于任何对照，化合物没有表现出对NEFA剂量的任何干扰。仅在DMSO稀释的发明的组合物中观察到轻微的相互作用，阳性对照表现出轻微的相互作用(低估NEFA的剂量)，但所述干扰不妨碍对结果的解读。
作为实验的结论，看起来在实验条件下，等剂量的根据发明的组合物比瓜拉那(guarana)具有更高的脂解活性，明确的表示所述组合物包含的组分对刺激人脂肪细胞的离体脂解作用的协同作用。
实验2
第2个实验由临床研究组成，表3和6以及图2和3中给出了所述研究的结果。该研究的目标是与施用安慰剂相比，检测施用根据发明的组合物对超重个体的影响。已检查了2个变量，即体重和脂肪量的百分比。
上述变量确实是根据发明的组合物对脂解作用后脂肪降解的活性以及对所获得的体重减轻的作用的宏观指标。
在分成2组的20名个体上实施临床研究：
-称为“安慰剂”组的10人(9女1男)，人体质量指数(BMI)在27和30之间，平均BMI为28.5。该组个体的年龄在22和55岁之间，在研究开始时观察的平均体重是73kg。
-称为“根据发明的组合物”组的10人(7女3男)，平均BMI为28.1。特别地，区分为2个亚组，第一亚组A(4女)由被认为肥胖的个体组成，BMI在29和33之间，第二亚组B(3女，3男)由被认为超重的个体组成，BMI在27和30之间。个体的年龄在25和55岁之间，在研究开始时观察的平均体重是70.5kg。
BMI是在肥胖研究中经常使用的指标，对应个体体重kg，除以个体大小平方米(BMI＝Kg/m2)。
除了超重以外，选择的研究的个体没有任何健康问题(完全排除肝脏、心血管或肾功能障碍)、未怀孕、不吸烟和不是药品或任何其它食品补充物的消费者。
随访个体12周，期间，向“根据发明的组合物”组以4个胶囊的形式施用根据发明的组合物，每个胶囊含有350mg根据发明的组合物的粉末，2个胶囊在清晨，2个胶囊在主食的过程中。“安慰剂”组接受相同形式的安慰剂。
个体维持他们在研究前通常的体育锻炼的量和饮食习惯(1500和2000之间卡路里/天)。
在上述12周的过程中通过生物电阻抗分析周期性的测量个体的脂肪量百分比，并通过称重周期性测量他们的体重。
表3和4显示了对应于体重测量的数据，分别是针对“安慰剂”和“根据发明的组合物”组的个体。
很明显，虽然对于“安慰剂”组的个体而言，单个或平均值的体重减轻是不明显的，但是“根据发明的组合物”组的个体观察到其体重在第4周降低了平均3Kg，在第12周降低了平均5.6Kg。
图2显示了以图的形式显示的上述结果，即第4和12周时两组中的平均体重发展。
特别地，亚组A的个体(在开始时具有重要的BMI在29和33之间)，在研究的第12周末，表现出最大的体重减轻。
表5和6显示了对应于脂肪量测量的数据，分别是针对“安慰剂”组和“根据发明的组合物”组的个体。
很明显，尽管对于“安慰剂”组的个体而言，单个或作为平均值的脂肪量的减轻是不明显的，但是“根据发明的组合物”组的个体观察到其脂肪量在第4周降低了平均5.9％，在第12周降低了平均15.6％。
图3显示了以图的形式显示的上述结果，即第4和12周时两组中的平均脂肪量的发展。
特别地，亚组A的个体(在开始时具有重要的BMI在29和33之间)，在研究的第12周末，表现出最大的脂肪量减轻。
在用1.4g/天的根据发明的组合物治疗的12周过程中，没有在任何个体中观察到明显的副作用，例如心动过速或血压降低。
从该临床研究可见，根据发明的组合物证实了对脂肪降解和体重减轻相关的影响确切且有效。
为了获得根据发明的组合物，进行植物的选择，所述植物即柑橘属水果，其组合特别适合获得所述组合物。表7显示了必需的关键植物物种，根据优选的实施方案，其中组合物获得自红橙、甜橙、苦橙、葡萄柚和优选的瓜拉那的混合物。有利地保有这样的重量百分比，所述百分比固定了每种植物物种的表现。
根据其它实施方案，可以从植物物种例如巴拉圭茶(IllexParaguariensis)或可乐果(Cola Nitida)中获得咖啡碱的归一化(根据这些物种与瓜拉那之间的任意组合)。
选择的红橙变种有利的来自下表：红橙变种‘Sanguinelli’、红橙变种‘Tarocco’、红橙变种‘Melitense′’和红橙变种‘St Michael’。
根据发明的组合物及其组分的天然起源解释了双重作用机制，所述机制允许加强脂肪细胞的脂解的作用。需要注意到根据发明的组合物是完全不含对羟福林的。
大部分组分的多酚结构允许抑制儿茶酚-o-甲基转移酶的作用，而其独特的多酚与黄原碱(xanthic base)的联系，也允许抑制磷酸二酯酶的作用。
通过比较，已知茶碱的作用是专一的施加于儿茶酚-o-甲基转移酶上，咖啡碱是施加于磷酸二酯酶上。
最后，由于优选的方法才获得了根据发明的组合物，所述方法的步骤描述如下。图4通过示意图显示了所述方法的实施方案的其它详细的子步骤。
该方法完全适合于获得根据发明的组合物。所述方法基于两个基础点：一方面，允许选择性的提取一组多酚(属于上述详细提出的一些不同亚组)，其具有协同的脂解活性；另一方面，由于柱上的选择性纯化步骤，确保了终组合物中缺少对羟福林。
特别地，对于选择性提取进入根据发明的组合物中的多酚而言，需要使用植物物种(即柑橘属水果)的混合物，来获得根据发明的组合物，因为在单个植物物种中不存在所有需求的多酚，而是在一些物种中存在。此外，不同的多酚主要存在于根据前述规则选择的植物物种的果汁中或果皮和/或种子中，因此需要进行双重提取(即从果汁和果皮中)。
有利地，根据发明的组合物还可以以水溶性或水不溶性粉末的形式获得。
为了更好的公开用于获得根据发明的组合物的方法，解释四个不同的步骤：
-第一个步骤，称步骤1，主要包括从选定的柑橘属水果的果汁中提取多酚，即花色素苷和酚酸；
-第二个步骤，称步骤2，主要包括从选定的柑橘属水果的果皮和/或种子中提取多酚，即黄烷酮；
-第三个步骤，称步骤3，在混合步骤1和2末尾分别获得的产物后，允许获得根据发明的组合物的粉末，所述粉末是水不溶性的；
-第四个步骤，称步骤4，在混合步骤1和2末尾分别获得的产物后，允许获得根据发明的组合物的粉末，所述粉末是水溶性的；
因此，很明显步骤1和2在步骤3和4之前进行，而步骤1和2则可以平行进行。步骤3和4是两个用于获得根据发明的组合物的粉末的替代性实施方案，步骤4与步骤3的不同在于向方法添加了额外的步骤，用于获得根据步骤3的粉末。
下文描述了根据发明的所述方法的实施方案，其中构成所述方法的亚步骤是更特别详细的。图4通过示意图的方式显示了这些亚步骤的排列顺序，同时指示了它们的参考号(参考号在本说明书的括号中)。
步骤1
第一个步骤主要包括从选定的柑橘属水果的果汁中提取多酚。特别地，使用的柑橘属水果是红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)和甜橙(Citrusaurantium L.var.sinensis L.)。可以优选的使用新鲜的柑橘属水果。还可以使用干燥的或深度冷冻的柑橘属水果。
花色素苷属于多酚的家族，特征是存在围绕吡环的2个苯环，具有碳C3-C6-C3的链状排列。在红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)中，花色素苷的形式是糖(单糖例如葡萄糖)。糖基化发生在花色素苷的位置3(糖苷配基形式)。红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)中的主要花色素苷是花青素-3-葡糖苷。在柑橘属水果的果汁中也存在酚酸。
因此，步骤1特别允许从这些柑橘属水果中提取花色素苷和酚酸。
在柑橘属水果中也存在维生素C，且同时提取出来。
选定的柑橘属水果在低温下压缩(1a)，单个的或组合成不同的组。
通过添加盐酸(HCl)0.1％12M或甲酸10％，使通过压缩获得的果汁的pH立即成为1.5和2之间的值(1b)。为了维持花色素苷基本是黄
Figure G2007800536252D00121
盐阳离子(最稳定的形式)的形式，低pH值是必需的。以前的研究已表明，97％的花色素苷在pH1.5和2之间时，是黄盐阳离子的形式，当pH值高于2.5时仅55％。
然后，在4000rev/min离心果汁30分钟至3小时(1e)，为了在柱上分离纯化(1d)而收集液相。
通常为了排除对羟福林(因为根据发明的组合物的构造中完全排除了对羟福林)，常规的用不同的溶剂进行双重洗脱。花色素苷和酚酸能够可逆的固定在多种吸附柱上，从而允许消除对羟福林。使用的柱可以有利的包括聚乙烯吡咯烷酮(pvp)和凝胶(Sephadex G25)的混合物，各自比例从70∶30至95∶5。明显的，也可以选择其它类型的柱，即使已经证实该载体混合物是良好分离最有效的，原因是当果汁过柱时，它良好的截留了花色素苷和酚酸。
根据使用的洗脱溶剂，获得了两部分的级分。第一级分是在用水洗脱柱后获得的，后者携带了第一级分中的糖、酸和可溶性多糖。第二级分是在用溶剂乙醇/水/甲酸(分别的比例是30∶68∶2至83∶15∶2)的混合物洗脱后获得的，允许主要获得第二级分中的花色素-3-单糖苷和酚酸。
通过HPLC分析显示上述两种级分对照缺少干扰物质，例如对羟福林或章鱼胺。
混合获得的级分(1e)，并在真空下浓缩混合物(1f)，这允许消除所有使用的溶剂和大部分的水，从而获得称为浓缩物1的浓缩物。
虽然50％质量的柑橘属水果由其果汁构成，仅这一开发就获得大量的副产物(主要来自果皮和种子)。从而在步骤2中可以使用这些副产物。
步骤2
第二个步骤主要包括从选定的柑橘属水果的副产物中提取多酚。特别地，所用的柑橘属水果是红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、葡萄柚(Citrusparadisi)、甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)和苦橙(Citrusaurantium L.var.amara)。
可以优选的选择新鲜柑橘属水果的副产物，但是这些也可以被干燥或深度冷冻。
因此，步骤2特别允许从这些柑橘属水果中提取黄烷酮。
将红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、葡萄柚(Citrus paradisi)、甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)和苦橙(Citrus aurantium L.var.amara)的副产物的混合物置于提取器中(2a)，在存在溶剂的条件下40-70摄氏度1至12小时，所述溶剂例如各自比例为40∶10∶50的乙醇/甲醇/水的混合物。
然后，混合物可以留置(2b)提取器中4至6小时。
在4000rev/min离心(2c)提取器的内容物30分钟至3小时。分离固相，并将液相引入纯化柱中(2d)。后者有利而非排外地是树脂柱。在用各自比例为65∶5∶30的溶剂乙醇/甲醇/水的混合物洗脱柱后，获得黄烷酮。
将获得的最终提取物(如果需要，在混合来自前述步骤的不同提取物(任选的第2步骤)后)，再真空离心(2f)，获得称为浓缩物2的浓缩物。
步骤3
第三个步骤主要包括混合浓缩物1和2(3a)，所述步骤是为了获得粉末。因此，在麦芽糖糊精载体上通过喷雾干燥(3b)混合的提取物1和2。获得的产物以咖啡碱归一化(3c)，这是通过与以天然咖啡碱滴定为12％的瓜拉那提取物(Paulinia cupanna)混合，比例是根据发明的组合物/瓜拉那提取物为80∶20至95∶5。最终总咖啡碱含量在占根据发明的组合物的0.1和4％之间变动。可以使用其它常规的咖啡碱来源实现该目标，例如使用巴拉圭茶或可乐果。为了获得水不溶性的根据发明的组合物的粉末，将终产物过筛(3d)，颗粒大小在40和100目之间。
步骤4
第四个步骤主要包括混合两种浓缩物1和2(4a)，所述步骤是为了获得水溶性粉末。因此，将混合的提取物1和2放入具有水的溶液中(4b)(比例是1单位两种浓缩物的混合物比10单位水)，在惰性环境中搅拌，20℃1-5小时(4c)。
然后，通过倾析1-3小时，进行非可溶性颗粒的分离(4d)。然后选用表面级分。与上述相同，在新的分离中用水再次处理非可溶性沉淀(4b至4d)。
然后，在滤纸上过滤回收的液体级分(4e)。两种不可溶/可溶性级分的终比例分别为在15和30％之间的不可溶级分对85至70％的可溶性级分。
然后，水溶性级分经历步骤3中描述的相同的处理，即，真空离心(4f)和在麦芽糖糊精上喷雾干燥(4g)。
获得的产物以咖啡碱归一化(4h)，这是通过通过与以天然咖啡碱滴定为12％的瓜拉那提取物(Paulinia cupanna)混合，比例是根据发明的组合物/瓜拉那提取物为80∶20至95∶5。最终总咖啡碱含量在占根据发明的组合物的0.1和4％之间变动。可以使用其它常规的咖啡碱来源实现该目标，例如使用巴拉圭茶或可乐果。为了获得水溶性的根据发明的组合物的粉末，将终产物过筛(4i)，颗粒大小在40和100目之间。
通过根据发明的方法，能够获得有利于解决所述问题的组合物，即，具有脂解活性的组合物，其允许激励体重减轻和通过肌肉力量训练帮助身体强化，这是因为脂解作用导致脂肪的降解，可以允许增加身体性能。获得的组合物还是完全不含对羟福林的。
在根据发明的方法末尾获得的粉末可以是水溶性的。
发明还涉及所获得的组合物作为食品补充物或丰富食物的用途。
它的水不溶性粉末的形式可有利于其作为食品补充物的用途。在上下文中且非穷举的，可以单独使用或与其它添加剂一起使用所获得的水不溶性粉末，以胶囊化的粉末(例如在胶囊中)、压缩成任何形状的片剂或颗粒剂的粉末的植物制剂的形式。
它的水溶性粉末的形式可有利于其丰富食物的用途。水溶性粉末可以确实有利的单独使用或与其它添加剂一起使用，例如溶解在食物液体中(从而与饮料掺和)，或溶解在乳产品例如酸奶中。还可以非穷举的与饼干或糕点糖果掺和，或以水溶性袋的形式存在。
非穷举的，饮料可以是例如果汁和/或蔬菜汁。
发明还涉及所获得的组合物作为饮食性施用的用途。
最终，应该提醒根据发明的组合物的施用有利的允许了增加脂肪降解或体重减轻。在具有肥胖类型的BMI(即，高于30)的个体中是特别有效的。
研究的剂量学对应于优选的剂量学，其是每天约1.4克的组合物。该剂量学当然可以根据治疗的生理学应答而调整，在每天每人1.0和2.0g之间变动。
表1：关键的活性物质
表2：实验1——释放的NEFA的剂量
  处理   浓度 NEFA(μM)   sd n   对照的％   P
  未处理对照   - 36   10 3   100   -
  茶碱   1.0mM 381   9 3   1057   p＜0.01
  异丙基肾上腺素   1.0μM 377   11 3   1048   p＜0.01
  咖啡碱   0.5mM 339   4 3   941   p＜0.01
  在测试培养基中的根据发明的组合物   1.0％ 244   17 3   677   p＜0.01
  0.2％ 213   13 3 592   p＜0.01
  在DMSO中的根据发明的组合物   0.01％ 231   6 3 643   p＜0.01
瓜拉那12％   1.0％0.2％0.4％ 17810190   151117 333 494281249   p＜0.01p＜0.01p＜0.01
Sd：标准差
N：观察数
P：方差分析的结果
表3：实验2——施用安慰剂后体重的发展
年龄 性别 BMI   体重t0(Kg)   体重减轻t4(Kg)   体重减轻t12(Kg)
  个体1   22   F   28.8   71.9   -1.4   -1.4
  个体2   33   F   28.5   70.2   -0.8   -1.3
  个体3   29   F   28.2   71.4   -0.5   -0.4
  个体4   25   F   29.3   67.7   -0.9   +2.9
  个体5   55   F   28.2   74.1   -0.2   -0.2
  个体6   45   F   26.9   68.8   -0.7   -0.8
  个体7   28   F   29.1   78.4   -1.2   -1.0
  个体8   47   M   28.2   84.6   -0.9   -0.7
  个体9   25   F   28.4   72.8   -0.8   -0.8
  个体10   29   F   29.4   70.7   -0.5   -0.7
  平均   33.1   28.5   73   -0.8   -0.4
表4：实验2——施用根据发明的组合物后体重的发展
  年龄   性别   BMI   体重t0(Kg)   体重减轻t4(Kg)   体重减轻t12(Kg)
个体1   27   F   26.6   63.8   -2.4   -3.6
个体2   33   M   27.0   69.1   -1.4   -3.0
个体3   35   F   25.1   60.2   -1.7   -3.2
个体4＊   25   F   28.9   73.9   -3.5   -7.5
个体5   55   M   26.8   73.0   -3.0   -4.1
个体6＊   47   F   31.8   80.5   -5.3   -8.9
个体7＊   22   F   32.7   78.6   -3.2   -8.8
个体8   39   M   25.3   72.2   -4.1   -5.1
个体9＊   41   F   29.3   68.7   -3.7   -8.5
个体10   37   F   27.5   65.3   -2.0   -3.4
平均   36,1   28.1   70.5   -3.0   -5.6
＊个体属于具有在29和33之间的MBI的组
表5：实验2——施用安慰剂后脂肪量的发展
Figure G2007800536252D00181
Figure G2007800536252D00191
表6：实验2——施用根据发明的组合物后脂肪量的发展
Figure G2007800536252D00192
＊个体属于具有在29和33之间的MBI的组
表7：关键的植物物种
  组合物的植物物种   植物学名称   组合物的％
  柑橘属水果红橙葡萄柚甜橙苦橙 Citrus sinensis L.OsbeckCitrus paradisiCitrus aurantium L.var.sinensis L.Citru saurantium L.var.amara 5-30％5-30％5-25％1-10％
  其它植物瓜拉那   Paulinia cupana   5-20％

Claims (22)

1、具有脂解活性组合物，其中组合物至少包含多酚和咖啡碱，所述多酚即以黄酮类化合物和酚酸的形式，所述黄酮类化合物特别是黄烷酮和花色素苷。
2、根据权利要求1的具有脂解活性组合物，其中组合物还包含维生素C。
3、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中组合物包含至少30％多酚，优选的在60和90％之间。
4、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中组合物包含0.1至4％咖啡碱。
5、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中组合物包含0.1至3％维生素C。
6、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中多酚由至少0.1至30％黄烷酮，0.01至10％花色素苷和0.01至5％酚酸代表，所述百分比相对于总组合物，且存在的总多酚达到至少40％的总组合物。
7、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中组合物获得自下述中一种或多种植物物种的混合物：红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)、苦橙(Citrus aurantiumL.var.amara)、葡萄柚(Citrus paradisi)、瓜拉那(Paulinia cupanna)、巴拉圭茶(Illex Paraguariensis)、可乐果(Cola Nitida)。
8、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中组合物获得自植物物种的混合物，其包括至少5至30wt％红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、5至30wt％葡萄柚(Citrus paradisi)、5至25wt％甜橙(Citrusaurantium L.var.sinensis L.)、1至10wt％苦橙(Citrus aurantium L.var.amara)，和5至20wt％瓜拉那(Paulinia cupanna)。
9、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中单独的或具有其他添加剂的组合物是粉末的形式。
10、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中单独的或具有其他添加剂的组合物是水溶性粉末的形式。
11、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中单独的或具有其他添加剂的组合物是被包封的粉末的形式，即胶囊的形式。
12、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中单独的或具有其他添加剂的组合物是压缩的粉末的形式，即任何形状的片剂或颗粒剂的形式。
13、根据前述权利要求的任一项的具有脂解活性组合物，其中单独的或具有其他添加剂的组合物是在袋中的粉末的形式。
14、获得根据权利要求1-13的具有脂解活性的组合物的方法，其中方法至少包括：
-从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)和甜橙(Citrusaurantium L.var.sinensis L.)果汁中提取(1a、1b、1c、1d、1e、1f)多酚的步骤，
-从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、葡萄柚(Citrusparadisi)、甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)和苦橙(Citrusaurantium L.var.amara)的副产物中提取(2a、2b、2c、2d、2e、2f)多酚的步骤，
-混合(3a；4a)从前述提取步骤中获得的提取物的步骤，
-在混合步骤(3a；4a)后，通过在麦芽糖糊精载体上喷雾干燥(3b；4g)混合物的步骤；
-在干燥(3b；4g)步骤后，以咖啡碱归一化(3c；4h)的步骤，即通过向干燥步骤获得的产品中添加瓜拉那(Pauliniacupanna)，和/或巴拉圭茶(Illex Paraguariensis)，和/或可乐果(Cola Nitida)的提取物，
-然后，最终，为了获得粉末，将获得的产品过筛(3d；4i)的步骤。
15、根据权利要求14的获得具有脂解活性的组合物的方法，其中通过向干燥步骤(3b；4g)获得的产品中添加瓜拉那(Paulinia cupanna)提取物来实施以咖啡碱归一化(3c；4h)的步骤。
16、根据权利要求14或15用于获得具有脂解活性的组合物的方法，其中进行从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)和甜橙(Citrus aurantium L.var.sinensis L.)果汁中提取(1a、1b、1c、1d、1e、1f)花色素苷和酚酸，以及从红橙(Citrus sinensis L.Osbeck)、葡萄柚(Citrus paradisi)、甜橙(Citrusaurantium L.var.sinensis L.)和苦橙(Citrus aurantium L.var.amara)的副产物中提取(2a、2b、2c、2d、2f)黄烷酮。
17、根据权利要求14至16的任一项用于获得具有脂解活性的组合物的方法，其中，在干燥步骤(3b；4g)之前，进行从混合物中消除水不溶性颗粒的步骤(4b、4c、4d、4e、4f)。
18、根据权利要求1至13的具有脂解活性的组合物作为食品补充物的用途。
19、根据权利要求1至13的具有脂解活性的组合物用于丰富食品的用途，所述食品即饮料例如果汁和/或蔬菜汁，以及乳产品。
20、根据权利要求1至13的具有脂解活性的组合物的用途，其施用是为了增强脂肪降解。
21、根据权利要求1至13的具有脂解活性的组合物的用途，其施用是为了增加体重减轻。
22、根据权利要求1至13的具有脂解活性的组合物的用途，它的施用具有脂解活性，剂量在每天1.0和2.0克组合物之间，优选的1.4克组合物。
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