KR101824217B1 - 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물을 포함하는 비만 또는 고지혈증 개선용 식품 조성물 - Google Patents
모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물을 포함하는 비만 또는 고지혈증 개선용 식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물을 포함하는 비만 개선용 또는 고지혈증 개선용 식품 조성물에 관한 것으로, SREBP-1c 발현 저해 효과, 지방합성효소(FAS) 억제 효과를 통한 지방세포 분화 억제 효과와 지방 축적 억제 효과를 가지며, 열 생성 단백질 조절유전자(UCP-2) 발현 증가 효과가 우수하고, 혈중 지질개선 효과를 나타낸다.
Description
본 발명은 비만 또는 고지혈증 개선용 식품 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물을 포함하는 비만 개선용 또는 고지혈증 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
최근 풍부하고 다양한 식생활 및 생활양식의 변화로 인해, 영양섭취는 불균형 상태로 되기 쉬우며, 기계화된 현대 생활은 운동 부족을 초래하게 되었다. 이와 같은 음식물의 다량 섭취와 에너지 사용의 불균형으로 말미암아 비만이라는 질병이 야기된다.
비만은 신체에 지방이 과잉되게 축적된 상태이며, 각 개인의 표준체중보다 20% 이상 증가가 있을 때 비만이라고 정의할 수 있다. 구체적으로 지방의 무게가 체중에서 차지하는 체지방 비율이 남자의 경우는 25% 이상, 여자의 경우는 30% 이상일 때를 비만이라 말한다 (Curr Opin Chem Biol. 2004. 4(4):452-460).
비만은 각종 성인병의 원인이 되는데, 체중이 정상체중보다 20% 증가하면 혈당처리 능력이 떨어져 당뇨병 발병 가능성이 정상인보다 10배 넘게 증가한다. 비만은 에너지 섭취와 소비의 불균형으로 인해 여분의 에너지가 지방으로 전환되므로, 당뇨병, 고혈압, 심혈관계질환, 관절질환, 폐질환 및 일부 암 등 다양한 퇴행성 질환들의 유병률과 밀접한 관계가 있다. 여성의 경우는 여기에 더해 자궁내막암의 발병률이 높아지며, 담석증이 생길 가능성도 높아진다. 남성에게는 대장암과 전립선암의 발병확률이 높아진다.
또한, 체중이 증가하면 남들이 자신을 바라보는 시선을 의식하지 않을 수 없고, 이에 대한 강박관념이 심해지면 사람들을 기피하고 혼자만 지내려는 증상이 생긴다. 신체에서 오는 열등감은 자신의 삶에 대한 자신감을 잃게 하여 자아에까지 부정적 영향을 미친다. 이와 같이 비만으로 야기되는 재정적 부담과 인명적 손실은 막대하다 (J Food Sci Nutr. 2000. 5(1):58-64).
비만이나 술, 당뇨병, 유전적 요인 등으로 인해 혈액 내에 특정 지질이 증가하면, 고지혈증(hyperlipidemia)이 발생할 수 있다. 고지혈증은 혈액 중 콜레스테롤, 중성지질, 인지질 및 유리지방산 등의 농도가 비정상적으로 증가한 상태로써 가장 직접적으로 영향을 미치는 인자는 혈중 콜레스테롤과 LDL(low density lipoprotein)-콜레스테롤을 들 수 있다. 특히, 고콜레스테롤혈증(hypercholesterolemia)은 죽상동맥경화증(atherosclerosis)을 유발하는 것으로 알려져 있다.
죽상동맥경화증은 혈관벽을 따라 지질이 두껍게 쌓여 혈류를 감소시켜 허혈성 심장질환과 협심증, 심근경색의 원인이 되는 질환인데, 임상적으로 중요한 문제가 되고 있다 (Korean J. Food Sci. Technol. 2003. 35:720-725). 따라서, 혈액 내 이들 지질 수준을 저하시키기 위한 치료 및 예방책의 일환으로 건강기능식품에 대한 관심이 모아지고 있다.
비만을 해소하기 위한 방법으로, 식욕억제제, 지방흡수억제제, 에너지대사촉진제, 호르몬제제 등의 약물요법과 위절제술, 지방흡입술 등의 외과적 수술법이 사용되고 있다. 하지만, 치료효과의 지속적 유지 여부 및 약물중단시 체중이 증가하는 현상 등의 문제점이 발생하고 있다 (Curr Opin Chem Biol. 2004. 4(4):452-460).
비만 치료를 위한 대표적인 약물로는 미국 FDA에서 승인을 받고 국내외에서 판매되고 있는 지방흡수억제제 올리스태트를 주성분으로 하는 비만치료제,‘제니칼’(한국로슈)과 식욕억제제인 시부트라민을 주성분으로 하는 ‘리덕틸’(일성신약) 등이 있다. 그 외에도 프랑스에서 개발된 비처방 의약품으로 녹차 카테콜 성분을 주원료로 하는 ‘엑소리제’(구주제약)이 있다.
그러나, 제니칼의 경우, 지방변, 가스생성, 지용성 비타민 흡수저하 등의 위장계 부작용을 일으키며, 리덕틸의 경우에는 교감신경계의 세로토닌과 노르아드레날린 농도를 증가시킴으로써 두통, 식욕부진, 불면증 또는 변비 등의 부작용을 일으킴이 보고되어 있다. 그 외, 지방분해 효과가 알려진 아미노필린은 신경계, 순환계, 소화계에 걸친 폭넓은 부작용이 나타나는 것으로 알려져 있으며, 펜프루라민, 덱스펜플루라민, 토피라메이, 에페드린 및 이소프로테레놀 등도 비만치료 부적합 약물로 판정되어 식품의약품안전처에 의해 현재 판매가 금지된 상태이다.
이러한 문제점 때문에 식품형태로 섭취하여 부작용이 없으면서도 체지방을 감소시키는 효과가 우수한 새로운 체지방 생성 및 축적 저해효과, 혈중 지질 개선 효과를 갖는 항비만용 식품조성물을 찾고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다.
본 발명에서는 천연물 유래의 소재로부터 체지방 생성 및 축적 저해 효과, 혈중 지질 개선 효과가 우수한 식품 조성물을 개발하여 제공하고자 한다.
본 발명은 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 비만 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 고지혈증 개선용 식품 조성물을 제공한다. 이때, 상기 고지혈증은, 일 예로 혈중 LDL (Low Density Lipoprotein)의 증가로 말미암은 것일 수 있다.
본 발명의 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물은 우수한 지방세포 분화억제 효과, 지방 축적 억제 효과, 지방합성효소 억제 효과, 열 생성 단백질 조절유전자 발현 증가 효과, 혈중 지질(총 콜레스테롤, 중성지질, LDL/HDL) 감소 효과를 발휘하는데, 단일 추출물인 모로오렌지주스, 와일드망고 종자 추출물 각각 보다 본 발명과 같이 조성된 복합물이 더욱 우수한 활성을 나타낸다.
지방전구세포(preadipocyte)가 증식 및 분화되는 과정을 거쳐 성숙한 지방세포(adipocyte)로 변화되는 과정인 지방세포분화(Adipogenesis)에 관여하는 일련의 유전자 발현을 조절하는 역할을 하는 PPARγ(peroxisome proliferator activatted receptor γ), C/EBP(CCAAT enhancer binding protein), SREBP1c (sterol regulatory element binding protein 1c)와 같은 전사인자들은 지방세포분화가 유도되는 과정에서 중요하게 작용하며, 지방세포로 분화된 상태를 유지하는데 필수적이다. PPARγ와 SREBP1c는 지방 전구세포의 초기 부화과정에서 중요한 역할을 하는데, 지방전구세포의 말기 분화과정을 촉진하는 역할을 한다. 이와 같은 전사인자들을 억제하는 것으로부터 체지방 분화 억제 및 체지방 축적 저해 효과를 확인할 수 있다. 또한, 지방산합성효소인 FAS(fatty acid synthase)는 당 대사과정 중 아세틸 CoA로부터 지방산을 합성하는 효소이므로, FAS를 억제하는 것을 통해, 체내 지방합성을 억제할 수 있다.
따라서, 체지방 생성 및 축적 저해 효과를 나타내기 위해서, 지방세포분화와 관련된 전사인자 및 지방산합성효소 등의 유전자 발현 억제 효과가 우수하며, 독성이 없는 천연 식물성 원료의 개발이 요구되고 있다. 이에, 본 발명은 독성 및 부작용이 없는 천연물질로부터 SREBP1c 및 FAS 억제 효과를 갖는 새로운 건강기능식품 원료에 대해 연구한 결과, 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물의 복합물을 발굴하였고, 이 복합물이 체지방 생성 및 축적 저해 효과, 혈중 지질 개선 효과가 우수함을 확인하였다.
본 발명에서 사용한, 모로오렌지(Citrus sinensis L. Osbeck)는 블러드오렌지(blood orange)의 한 종류로, 블러드 오렌지는 일반오렌지(Citrus sinensis L. Osbeck)의 자연적 변형 종이다. 블러드 오렌지는 붉은색 과육을 가지고 있는 스위트 오렌지의 한 종류로서, 다른 오렌지와 비슷한 크기로 향은 매우 강하며, 안토시아닌 색소에 의한 붉은색 반점이 있는 껍질과 과육을 가진다. 일반 오렌지에 비해 비타민C 함량이 높고, 신맛이 덜하며, 쌉쌀한 맛이 강하여, 유럽에서는 오래전부터 디저트로 많이 섭취하고 있다. 타로코(Tarocco, 이탈리아), 상귀넬로(Sanguinello, 스페인), 모로(Moro, 시실리) 세 가지 주 품종을 가지는데, 이중 모로오렌지는 이탈리아 시실리섬에서만 생산되며, 원산지명칭보호(Protected Geographical Status)를 받는다. 모로오렌지는 세 품종 중에 가장 진한 붉은색을 띠며 향이 매우 강하다. 안토시아닌을 비롯한 항산화 성분이 일반오렌지와 비교했을 때 월등히 많다.
본 발명에서 사용한, 와일드 망고(Irvingia gabonensis)는 우간다 남서쪽, 나이지리아, 콩고, 카메룬 등을 포함한 앙골라 북쪽 등지의 습한 숲 속 지역에서 발견되는 아프리카 토착 식물로, 일반 망고(Mangifera indica L.)와는 다른 종으로 부시망고 또는 아프리카 망고로 불린다. 와일드망고의 과실과 씨앗은 나이지리아와 카메룬 등 서아프리카 지역에서 오랫동안 섭취해온 주식으로 단백질 및 탄수화물이 풍부하며, 약용으로도 사용되었다. 와일드망고의 종자는 'ogbono nuts'란 이름으로 날것이나 로스팅한 상태에서 식용으로 사용되고, 최근에는 젤리, 잼, 주스 또는 와인의 원료로 사용된다.
한편, 본 발명의 식품 조성물에 있어서, 상기 모로오렌지주스는, 바람직하게 모로오렌지를 압착 및 여과하여 여과액을 수득한 후, 여과액을 농축 및 건조하여 제조한 분말일 수 있다. 건조는 일 예로, 동결 건조, 열풍 건조 또는 분무 건조 등이 있다.
한편, 본 발명의 식품 조성물에 있어서, 상기 와일드망고 종자 추출물은, 바람직하게 물, 탄소수가 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이의 혼합물을 추출 용매로 사용하여 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 와일드망고 종자 추출물은 추출방법으로써 열수 추출, 냉침 추출, 환류냉각 추출 또는 초음파 추출을 이용하여 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 추출물은 바람직하게 추출 후, 여과하여 감압 농축 또는 진공 농축하여 수득된 농축물을 포함하며, 동결 건조 또는 열풍 건조하여 수득한 분말 형태일 수도 있다.
한편, 본 발명의 식품 조성물에 있어서, 상기 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물은 바람직하게 식품 조성물 중 0.01~50 중량% 첨가되는 것이 좋다. 0.01 중량% 미만 첨가시에는 비만 개선 또는 고지혈증 개선 효과가 미미하며, 50 중량%를 초과하면 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 경제적이지 못하다. 또한, 상기 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물은, 바람직하게 모로오렌지주스 1 중량부에 대해 와일드망고 종자 추출물이 0.5~1.5 중량부의 비율로 첨가되는 것이 좋은데, 모로오렌지주스 1 중량부에 대해 와일드망고 종자 추출물이 0.5~1.5 중량부의 비율로 첨가될 때, 비만 개선 효능 및 고지혈증 개선 효과가 극대화될 수 있기 때문이다.
한편, 본 발명의 식품 조성물은, 바람직하게 육류, 곡류, 카페인 음료, 일반음료, 젤리, 면류, 껌류, 비타민 복합제 및 그 밖의 건강보조식품류 중 선택되는 어느 하나인 것인 것이 좋으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은, 바람직하게 식품 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 담체, 부형체 및 희석제는 예를 들면, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케니트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 톨리돈, 물, 꿀, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유일 수 있다. 제제화할 경우 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜렛 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에도 천연 과일 쥬스 및 과일 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물로 조성된 복합물을 함유하는 식품조성물은 체지방 생성 및 축적 저해 효과, 혈중 지질 개선 효과가 우수한 특징이 있다. 더욱 구체적으로, 본 발명의 모로오렌지주스 및 와일드망고 종자 추출물로 조성된 복합물을 함유하는 식품조성물은 SREBP-1c 발현 저해 효과, 지방합성효소(FAS) 억제 효과를 통한 지방세포 분화 억제 효과와 지방 축적 억제 효과를 가지며, 열 생성 단백질 조절유전자(UCP-2) 발현 증가 효과가 우수하고, 혈중 지질 개선 효과를 나타내어, 비만이 고민되는 전 연령층의 건강한 삶에 도움을 줄 수 있다.
도 1은 본 발명 복합물이 유전적 비만 동물모델의 체중에 미치는 영향을 확인하고자, 실험동물의 체중을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명 복합물의 지방합성 억제 효과를 확인하고자, 실험동물로부터 지방합성효소(FAS)의 발현량을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명 복합물의 지방세포 분화억제 효과와 지방 축적억제 효과를 확인하고자, 실험동물로부터 SREBP-1c 발현량을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 4는 본 발명 복합물의 체지방 감소 효과를 확인하고자, 실험동물로부터 열 생성 단백질 조절유전자(UCP-2)의 발현량을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 5는 본 발명 복합물이 혈중 지질 개선에 미치는 영향을 확인하기 위해, 혈중 총 콜레스테롤을 확인한 실험 결과 그래프이다.
도 6은 본 발명 복합물이 혈중 지질 개선에 미치는 영향을 확인하기 위해, 혈중 중성지질을 확인한 실험 결과 그래프이다.
도 7은 본 발명 복합물이 혈중 지질 개선에 미치는 영향을 확인하기 위해, 혈중 LDL-콜레스테롤과 HDL콜레스테롤 비율을 확인한 실험 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명 복합물의 지방합성 억제 효과를 확인하고자, 실험동물로부터 지방합성효소(FAS)의 발현량을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명 복합물의 지방세포 분화억제 효과와 지방 축적억제 효과를 확인하고자, 실험동물로부터 SREBP-1c 발현량을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 4는 본 발명 복합물의 체지방 감소 효과를 확인하고자, 실험동물로부터 열 생성 단백질 조절유전자(UCP-2)의 발현량을 측정한 실험 결과 그래프이다.
도 5는 본 발명 복합물이 혈중 지질 개선에 미치는 영향을 확인하기 위해, 혈중 총 콜레스테롤을 확인한 실험 결과 그래프이다.
도 6은 본 발명 복합물이 혈중 지질 개선에 미치는 영향을 확인하기 위해, 혈중 중성지질을 확인한 실험 결과 그래프이다.
도 7은 본 발명 복합물이 혈중 지질 개선에 미치는 영향을 확인하기 위해, 혈중 LDL-콜레스테롤과 HDL콜레스테롤 비율을 확인한 실험 결과 그래프이다.
이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[
제조예
1:
모로오렌지주스
분말의 제조]
모로오렌지 3 kg을 압착하고 여과지(whatman No.1, Englan)로 감압여과하였다. 그 후, 진공회전 농축기로 40℃에서 감압농축한 다음, 분무 건조하여 모로오렌지주스 분말을 제조하였다.
[
제조예
2:
와일드망고
종자 추출물의 제조]
와일드망고 종자 1 kg을 건조하고 마쇄하여 얻은 분말 300 g을 집기병에 담은 후 물 3ℓ를 넣고 30℃에서 저온 추출하여 와일드망고 종자 추출물을 수득하였다. 그 후, 여과지(whatman No.1, England)로 감압 여과한 후, 진공회전농축기로 30℃에서 감압농축한 다음, 분무 건조하여 와일드망고 종자 추출물을 제조하였다.
[
실시예
1: 본 발명 복합물의 제조]
상기 제조예 1 내지 2에서 제조한 모로오렌지주스 분말 및 와일드망고 종자 추출물을 무게비로 하기 표 1과 같이 배합하여 복합물을 제조하였다.
모로오렌지주스 분말 (중량%) |
와일드망고 종자 추출물 (중량%) |
|
실시예 1 | 57 | 43 |
[
실험예
1: 본 발명의 복합물이 유전적 비만 마우스의 체중 변화에 미치는 영향 확인]
본 실험예에서는 제조예 1 내지 2에서 제조한 단일추출물과 실시예 1에서 제조한 복합물이 유전적 비만 마우스의 체중 변화에 미치는 영향을 확인하고자 하였다.
생후 5주령의 수컷 C57BL/6J db/db mice, C57BL/6J mice를 구입하여 일주일 동안 설치류 사육실에서, 일반식이(AIN93G)를 공급하며 적응시킨 후, 적응기간에 일반상태를 관찰하여 건강한 개체를 무작위법으로 군 분리하였다.
실험군의 분류는 정상대조군(정상군), 비만대조군(비만군), 모로오렌지주스 분말 500 mg/kg 투여군(제조예 1), 와일드망고 종자 추출물 500 mg/kg 투여군(제조예 2), 복합물 500 mg/kg 투여군(실시예 1)으로 분류하여 9주간 사육이 진행되었다.
사육환경은 온도 23℃, 습도 50%에서 'light cycle'이 12시간 유지되었다. 실험물질은 AIN93G 식이에 첨가하여 시료로 제조하여 사용하였고, 실험 기간 식이와 음용수는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 실험기간 중 개체별 체중을 측정하였고, 실험 종료 후 부검시 체중을 측정하였다. 측정한 체중 결과는 도 1에 나타내었으며, 실험군 간의 유의차는 ANOVA 분석을 사용하였고, 유의성 평가는 p<0.05로 하였다.
실험결과, 유전적 비만유도에 의해 비만군은 정상군보다 높은 체중을 보였다. 비만군과 비교하여 제조예 1 내지 2 및 실시예 1 군에서는 더 낮은 체중을 보였다. 이때, 모로오렌지주스 분말 또는 와일드망고 종자 추출물을 단일로 섭취한 군보다 복합물(실시예 1)을 섭취한 군이 더 낮은 체중을 나타내었다.
이상의 결과로부터 복합물이 비만군보다 뛰어난 체중 감소 효과를 보이며, 단일물보다 훨씬 높은 효과를 보이고 있음을 확인할 수 있었다.
[
실험예
2: 본 발명 복합물이 유전적 비만 마우스의 지방조직에서 지방합성효소, 전사인자 및 UCP-2 유전자의 발현 측정]
본 실험예에서는 지방조직에서 지방합성효소 및 전사인자 (FAS, SREBP-1c)와 UCP-2(uncouling protein 2) 유전자의 발현을 측정하기 위해 RNA를 분리하여 RT-PCR(Real-time PCR)로 분석하였다.
9주간 대조식이 또는 복합물을 섭취한 실험군의 부검 후, 지방조직을 분리하여 'RNeasy Lipid Tissue Mini Kit(Qigen, Valencia, CA, USA)'로 제조사의 방법을 따라, 총 RNA를 분리한 후, 'iScriptTM Select cDNA Sythesis Kit(BIO-Rad, Hercules, CA, USA)'를 이용하여 5 μg의 총 RNA에 '5×iScript select reaction mix' 4 μl, 올리고(dT) 프라이머 세트 2 μl, 뉴클레아제 프리 워터 (nuclease free water) 8 μl를 각각 넣고, 마지막에 'iScript Reverse Transcriptase' 1 μl를 넣어, 피펫으로 업 & 다운하면서 골고루 섞어 주었다. 42℃에서 60분, 85℃에서 5분간 반응시킨 후, 합성된 cDNA를 PCR 반응에 사용하였다.
RT-PCR 실험시 사용한 기계는 'Step One Real-Time PCR system(Applied Biosystems, USA)'이며, 'iQ SYBR Green Supermix(BIO-RAD, USA)'의 방법을 따라 수행하였다. PCR을 위한 혼합액 최종 농도는 cDNA 2 μl(10~100 ng), '2×iQ SYBR Green Supermix' 10 μl, 정방향 및 역방향 프라이머 각 1 μl(250 nM), 정제수 7 μl가 되도록 하였다. 95℃에서 10분간 'hot start' 한 후, 95℃에서 15초간, 55℃에서 15초, 72℃에서 30초간 40 사이클(cycle)로 PCR을 수행한 후, 마지막으로 95℃에서 15초, 60℃에서 1분, 95℃에서 15초간 마무리 과정을 거쳐 PCR 분석을 시행하였다.
유전자 발현 분석의 대조군으로 GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehyderogenase)를 사용하였으며, 반응에 사용한 프라이머는 하기 표 2와 같았다.
측정한 유전자발현 결과는 도 2~4에 나타내었으며, 실험군 간의 유의차는 ANOVA 분석을 사용하였고, 유의성 평가는 p<0.05로 하였다.
GAPDH | 정방향 | 5'-GGC CTT CCG TAT TCC TA-3' |
역방향 | 5'-GCG GCA CGT CAG ATC CA-3' | |
FAS | 정방향 | 5'-GAA GTG TCT GGA CTG TGT CAT TTT TAC-3' |
역방향 | 5'-TTA ATT GTG GGA TCA GGA GAG CAT-3' | |
SREBP-1c | 정방향 | 5'-CCA GAG GGT GAG CCT GAC AA-3' |
역방향 | 5'-AGC CTC TGC AAT TTC CAG ATC T-3' | |
UCP-2 | 정방향 | 5'-CCT CTC AAG AGC CAC AAA TGC-3' |
역방향 | 5'-TCC AGC AGC CAA GAT TCA GA-3' |
도 2에 나타난 FAS 발현량 측정 결과, 유전적 비만 유도에 의해, 비만군은 FAS 발현량이 높아졌으며, 모로오렌지주스 분말군 (제조예 1) 및 와일드망고 종자 추출물 섭취군 (제조예 2)과 복합물 섭취군 (실시예 1)은 비만군보다 낮은 FAS 발현량을 나타내었다. 이와 같은 결과로부터, 복합물의 섭취에 의해 FAS 발현량이 낮아져 체내 지방합성 억제 효과를 나타내고 있음을 확인할 수 있었으며, 복합물(실시예 1)이 단일추출물 (제조예 1, 제조예 2)보다 훨씬 높은 효과를 보이고 있음을 알 수 있었다.
도 3에서 확인된 SREBP-1c의 발현량 측정 결과, 유전적 비만 유도에 의해 비만군의 SREBP-1c의 발현량이 높아졌으며, 모로오렌지주스 분말군 (제조예 1) 및 와일드망고 종자 추출물 (제조예 2)과 복합물 섭취군 (실시예 1)은 비만군보다 낮은 SREBP-1c의 발현량을 나타내었다. 이와 같은 결과로부터, 복합물의 섭취가 지방세포 분화 억제 및 지방생성 억제 효과를 나타내고 있음을 확인할 수 있었다. 또한, 단일추출물(제조예 1, 제조예 2)보다 복합물(실시예 1)이 더 높은 효과를 나타내고 있음이 확인되었다.
도 4에 나타난 열생성 단백질 조절 유전자인 UCP-2 발현량 측정 결과, 정상군과 비만군은 비슷한 UCP-2 발현량을 나타내었으며, 모로오렌지주스 분말 (제조예 1) 및 와일드망고 종자 추출분말 (제조예 2)과 복합물 섭취군 (실시예 1)은, UCP-2 발현량이 높아져 열 생성 단백질이 증가하여 체지방 분해효과를 보이고 있음을 알 수 있었다. 또한, 단일추출물 (제조예 1, 제조예 2)보다 복합물(실시예 1)이 더 높은 효과를 나타내고 있음을 알 수 있었다.
상기와 같은 결과들로부터, 본 발명 복합물 (실시예 1)은 우수한 체지방 생성 및 축적저해효과를 갖고 있음을 확인할 수 있었다.
[
실험예
3: 본 발명 복합물이 유전적 비만 유도 마우스의 혈중 지질 변화에 미치는 영향 확인]
본 실험예에서는, 본 발명의 복합물 섭취가 혈중 지질에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 혈중 총 콜레스테롤, 중성지질, LDL/HDL 콜레스테롤 비율을 측정하였다.
상기 실험쥐의 부검 후 혈액을 수집하여 16,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상층액 5 μl를 취하였다. 96 웰 플레이트에 5 μl 상층액을 분주하고, 어세이 버퍼 45 μl를 분주하였다. 추가로 'reaction mix'를 50 μl 분주하여, 30분간 실온에서 반응하였다. 2 M H2SO4 50 μl를 넣어 반응을 정지시키고, 마이크로플레이트 리더(VERSAmax, Molecular Devices)로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하였다. 측정 결과는 도 5~7에 나타내었으며, 실험군 간의 유의차는 ANOVA 분석을 통해 확인하였고, 유의성 평가는 p<0.05로 하였다.
도 5에서 확인된 혈중 총 콜레스테롤 측정 결과, 정상군보다 비만군에서 높은 혈중 총 콜레스테롤을 나타내었다. 비만군과 비교하여, 모로오렌지주스 분말 (제조예 1), 와일드망고 종자 추출물 (제조예 2) 및 복합물 (실시예 1)에서 낮은 혈중 총 콜레스테롤을 확인할 수 있었다. 또한, 단일추출물 (제조예 1, 제조예 2)보다 복합물(실시예 1)에서 훨씬 낮은 혈중 총 콜레스테롤을 나타내어, 복합물이 단일물에 비해 훨씬 높은 혈중 지질 개선 효과를 나타내고 있음을 알 수 있었다.
도 6에서 확인된 혈중 중성지질 측정 결과, 정상군보다 비만군에서 높은 혈중 중성지질 함량을 나타내었으며, 비만군과 비교하여 모로오렌지주스 분말 (제조예 1), 와일드망고 종자 추출물 (제조예 2) 및 복합물 (실시예 1)에서 낮은 혈중 중성지질 함량을 확인할 수 있었다. 또한, 복합물 (실시예 1)이 단일물 (제조예 1, 제조예 2)에 비해 훨씬 높은 혈중 지질 개선 효과를 나타내고 있음을 알 수 있었다.
혈중 지방은 리포단백이라는 형태로 존재하고 그 종류는 카이로마이크론(Chyromicron), VLDL(Very Low, Density Lipoprotein), LDL(Low Density Lipoprotein), HDL(High Desity Lipoprotein) 4종류가 있다. 그 중, VLDL은 간에서 만들어져 많은 양의 중성지방과 콜레스테롤을 운반하는 역할을 하며 심혈관계질환을 유발하는 것으로 알려져 있다. 또한, VLDL에서 전환되는 LDL은 콜레스테롤을 운반하는 단백질로 혈관벽에 축적되어 동맥경화를 유발하는 것으로 알려져 있다. HDL은 LDL과는 반대로, 세포에 옮겨진 콜레스테롤을 간으로 운반하는 청소부 역할을 하여 동맥경화 예방 효과가 있다. 그러므로, 동맥경화 지표로써 LDL/HDL비율을 확인하여 과도한 지방축적 정도를 판단할 수 있다.
도 7에서 확인된 혈중 LDL/HDL 비율을 측정한 결과, 정상군보다 비만군에서 높은 비율을 나타내었다. 또한, 비만군과 비교했을 때, 모로오렌지주스 분말 (제조예 1), 와일드망고 종자 추출물 (제조예 2) 및 복합물 (실시예 1)에서, 낮은 비율을 확인할 수 있었다. 이때, 복합물 (실시예 1)이 단일물 (제조예 1, 제조예 2)에 비해 훨씬 낮은 LDL/HDL비율을 나타내고 있어, 복합물이 훨씬 높은 혈중 지질개선 효과를 나타내고 있음을 알 수 있었다.
상기와 같은 결과들로부터, 본 발명의 모로오렌지주스 분말, 와일드망고 종자 추출물로 조성된 본 발명의 복합물은 모로오렌지주스 분말, 와일드망고 종자 추출물 각각의 단일물보다 체지방 생성 및 축적 저해 효과, 혈중 지질 개선 효과가 훨씬 높아진 것을 확인할 수 있었다.
[
실시예
2: 체지방 생성 및 축적 저해 효과, 혈중 지질 개선 효과를 갖는 식품 조성물의 제조]
본 실시예에서는 하기와 같이 체지방 생성 및 축적 저해 효과, 혈중 지질 개선 효과를 갖는 식품 조성물을 제조하였다.
(1) 선식 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 준비하였다. 검정콩, 검정깨 및 들깨 각각을 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 후 배전 및 분쇄하여 입도 60메쉬의 분말로 준비하였다. 이후, 현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%, 찹쌀 9중량%, 들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%, 복합물 (실시예1) 10중량%, 영지 0.5중량% 및 지황 0.5중량%를 혼합하여 선식을 제조하였다.
(2) 건강음료 제조
꿀 0.26중량%, 치옥토산아미드 0.0002중량%, 니코틴산아미드 0.0004중량%, 염산리보플라빈나트륨 0.0001중량%, 염산피리독신 0.0001중량%, 이노시톨 0.001중량%, 오르트산 0.002중량%, 물 98.7362중량% 및 복합물 (실시예1) 1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 건강음료를 제조하였다.
(3) 건강보조식품 제조
복합물 (실시예1) 50중량%, 구아검효소 분해물 16중량%, 비타민 B1 염산염 0.01중량%, 비타민 B6 염산염 0.01중량%, DL-메티오닌 0.23중량%, 스테아린산 마그네슘 0.7중량%, 유당 31.2중량% 및 옥수수전분 1.85중량%를 배합하여 통상의 방법으로 정제형 건강보조식품을 제조하였다.
Claims (7)
- 모로오렌지주스 57중량% 및 와일드망고 종자 추출물 43중량%로 조성된 복합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 비만 개선용 식품 조성물.
- 모로오렌지주스 57중량% 및 와일드망고 종자 추출물 43중량%로 조성된 복합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 고지혈증 개선용 식품 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 고지혈증은,
혈중 LDL (Low Density Lipoprotein)의 증가로 말미암은 것임을 특징으로 하는 고지혈증 개선용 식품 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 모로오렌지주스는,
모로오렌지주스를 압착 및 여과하여 여과액을 수득한 후, 여과액을 농축 및 건조하여 제조한 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 와일드망고 종자 추출물은,
물 또는 탄소수가 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이의 혼합물을 추출 용매로 사용하여 추출된 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 복합물은,
식품 조성물 중 0.01~50 중량% 첨가되는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
- 삭제
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US11903988B2 (en) * | 2022-02-11 | 2024-02-20 | Karallief Inc | Natural product compositions for management of cholesterol levels |
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KR101444875B1 (ko) | 2012-12-21 | 2014-09-26 | 주식회사 삼양사 | 히비스커스 및 l-카르니틴을 포함하는 관능성 및 안정성이 개선된 다이어트 음료 조성물 |
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- 2016-09-06 KR KR1020160114199A patent/KR101824217B1/ko active IP Right Grant
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