JP4205943B2 - 天然および合成ｈｃａのバイオアベイラブルな組成物 - Google Patents
天然および合成ｈｃａのバイオアベイラブルな組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4205943B2 JP4205943B2 JP2002519605A JP2002519605A JP4205943B2 JP 4205943 B2 JP4205943 B2 JP 4205943B2 JP 2002519605 A JP2002519605 A JP 2002519605A JP 2002519605 A JP2002519605 A JP 2002519605A JP 4205943 B2 JP4205943 B2 JP 4205943B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hca
- garcinol
- anthocyanin
- weight
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Description
【０００１】
本出願は、２０００年８月１７日出願の仮出願第６０／２２５８２１号に対して、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１．１１９（ｅ）により優先権を主張するものである。
【０００２】
【発明の背景】
ヒドロキシクエン酸は、２つの不斉中心を有するα−ヒドロキシ三塩基酸（１，２−ジヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボン酸）であり、したがって２対のジアステレオ異性体または４つの異なる異性体を形成する：（−）ヒドロキシクエン酸（Ｉ）、（＋）ヒドロキシクエン酸（ＩＩ）、（−）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＩＩ）、および（＋）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＶ）（１〜２）。
【０００３】
この（−）ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）異性体は、ガルシニアカンボジア果実（Ｃｌｕｓｉａｃｅａｅ科）の皮に見出される（１〜２）。この異性体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、その天然基質クエン酸塩ならびにヒドロキシクエン酸の他の立体異性体に比べて精製酵素に対してはるかに高い親和性を示し、ＡＴＰクエン酸リアーゼの強力な線状競合阻害剤であることが示されている（１〜２）。
【０００４】
ＡＴＰクエン酸リアーゼは、クエン酸のアセチルＣｏＡおよびオキサロ酢酸へのミトコンドリア外開裂を触媒し、脂肪酸の生合成を促進するクエン酸開裂酵素として生物学的に重要である。（−）ＨＣＡによるクエン酸リアーゼの可逆的阻害は、脂肪酸合成および脂質生成の減少につながる可能性がある。これらの作用は、実験動物に（−）ヒドロキシクエン酸を経口、静脈内、または腹腔内投与することによって、ｉｎ ｖｉｖｏで測定および実証されている（３）。
【０００５】
給食時間前に（−）ＨＣＡを経口で与えたとき、（−）ＨＣＡを与えられた動物は未処理の対照に比べて、より少ない食物を消費し、脂肪酸およびコレステロールの肝合成は著しく減少した（３〜４）。（−）ＨＣＡを与えたラットの実験では、累積食物摂取量の減少なしに体重減少を示したので、観察された食物摂取量の減少は、（−）ＨＣＡが促進する体重減少の要因の１つに過ぎない可能性がある（５）。可能な（−）ＨＣＡによる体重減少の機構には、その性質が依然として定かではないエネルギー消費要素が含まれる可能性があると思われる（５）。
【０００６】
（−）ＨＣＡ処理動物におけるこのエネルギー消費、脂質生成減少、および食物摂取量の減少の機構が、体重および全体脂肪量の減少をもたらす可能性がある（６）。
【０００７】
（−）ＨＣＡの体重低減化合物としての可能性は１９７０年代から認識されていたが、この化合物を用いた臨床研究はわずかしか行われていない（７〜１２）。ＨＣＡ介在の過剰体脂肪の防止を検討するこれらの少数の研究は、おそらく標的細胞のサイトゾルにおいてＨＣＡが十分にバイオアベイラブルでないために、矛盾する結果となっている。
【０００８】
ＨＣＡの臨床研究の１つでは、議論の余地のある高繊維食が用いられた。高繊維食は多くの栄養素および微量栄養素の吸収を減じることが知られているので、ＨＣＡと組み合わせて高繊維食を使用することによって、ＨＣＡの胃腸吸収が減じる可能性がある。細胞内酵素、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）クエン酸リアーゼの阻害におけるＨＣＡの報告されている有効性は、標的細胞内部のＨＣＡの存在に完全に依存しているので、この問題はＨＣＡにとって重大なものとなる。
【０００９】
発明者等は、米国特許において、ＨＣＡ化合物のバイオアベイラビリティに関する重要な問題を検討している。第５７８３６０３号特許は、ＡＴＰクエン酸リアーゼの競合阻害のために、ＨＣＡの生体膜を越える移送を促進し、より多くのＨＣＡをサイトゾルに有効に送達するＨＣＡカリウム塩の独特な構造を生じる製造方法を記載した。
【００１０】
また、‘６０３号特許は著しく改善されたバイオアベイラビリティを有するＨＣＡ化合物に関するが、そのバイオアベイラビリティは依然として比較的効率が不足であった。たとえば、肝細胞で行われたｉｎ ｖｉｔｒｏの研究は、５ｍＭの細胞外カリウムＨＣＡがＡＴＰクエン酸リアーゼを阻害できたことを示している。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ＡＴＰクエン酸リアーゼを有効に阻害するためには、わずか０．５ｍＭのカリウムＨＣＡが実際にサイトゾル内で必要とされる。したがって、サイトゾル内で１／１０濃度の量を得るために、標的細胞の外側では１０倍過剰量のカリウムＨＣＡが必要となる。ＨＣＡのバイオアベイラビリティが比較的に不良であるというこの発見は、前臨床実験において確認されており（１４）、ＨＣＡのバイオアベイラビリティおよび有効性をさらに改善させる必要があることを示している。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
ガルシノールは、ＨＣＡと同様にガルシニア種の果皮から単離され、抗酸化性、および化学的保護性を示す（１５）。１つの実験において、ガルシノール食（０．０１％および０．０５％）を与えたラットは、対照動物に比べて、アゾキシメタン（ＡＯＭ）誘発結腸異常腺窩巣（ＡＣＦ）の発生が著しく減じることを示した。ガルシノールを与えることによって、肝臓グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、キノンレダクターゼの活性が著しく上昇し、Ｏ２およびＮＯ発生、ならびにｉＮＯＳおよびＣＯＸ−２タンパク質の発現が抑制された。これらの発見は、ガルシノールの可能な化学的予防機構を示している。
【００１３】
ガルシノールおよびイソガルシノールは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に対する抗菌活性について評価された（１６）。これらの化合物は、３．１〜１２．５マイクログラム／ｍｌで最小阻止濃度、すなわち抗生物質、バンコマイシンとほぼ等しい最小阻止濃度を示した。
【００１４】
１９８１年にＫｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ等（１７）は、ガルシニアインディカからの、ガルシノール、およびその無色異性体、イソガルシノールの単離を報告した。それらの構造は、化学的データおよびスペクトルデータに基づいて提示された。ガルシノール、Ｃ３８Ｈ５０Ｏ６、ｍ．ｐ．１２２（ｏ）は、ガルシニアインディカの果皮のヘキサン抽出物から黄色針晶として晶出された（１．５パーセント）。ガルシノールのＵＶスペクトルは、１，３−ジケトン系が３，４−ジヒドロキシベンゾイル部分に共役していることを示した。このトリメチルエーテルのＩＲスペクトルは、飽和カルボニル基（１７２７ｃｍ−１）、および２つのｏｅ，β−不飽和カルボニル基（１６６８、および１６４２ｃｍ−１）の存在を示した。
【００１５】
イソガルシノールは、抽出物のカラムクロマトグラフィによって単離された。その同一性は、混融点、ならびにＵＶ、ＩＲ、およびＰＭＲスペクトルの比較によって確かめられた。イソガルシノールのＩＲスペクトルは、飽和カルボニル基（１７１５ｃｍ−１）、アロイル基（１６７０ｃｍ−１）、およびｏｅ，β−不飽和カルボニル基（１６３５ｃｍ−１）の存在を示した。
【００１６】
Ｒａｏ等（１８）は、ガルシニアカンボジアの木のラテックスから、カンボジン（３３Ｈ５５０６）、ｍ．ｐ．２４２〜２４４を単離することを報告した。その構造は、ＵＶ、ＩＲ、およびＮＭＰ研究によって確認された。ＵＶ：２３１〜２３４、２７５〜２７８、および３０５〜３１３、ＩＲ（Ｋｂｒ法）：１７２０（飽和カルボニル）、１６８０、および１６４２ｃｍ−１（不飽和カルボニルおよび二重結合）。カンボジンに加えて、Ｒａｏ等はさらにカンボジノールの単離を報告し、その構造をカンボジンに関連づけた。
【００１７】
１９８２年に、Ｎ．Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ等（１９）は、Ｋｏｋａｍ（ガルシニアインディカ）の新鮮な赤く熟した果実から、アントシアニン色素を単離した。皮部分を果実の残部から分離し、１パーセントのＨＣｌを含有するメタノールを用いて、ブレンダ内で３回浸解した。抽出物を合わせ、濾過し、真空中３０℃で濃縮した。Ｋｏｋａｍ色素抽出物のペーパークロマトグラフィは、２本の帯を示した。遅く移動する帯をＢ１、もう一方をＢ２と称した。全アントシアニン濃度は、乾燥重量ベースで２．４パーセントであると推定され、Ｂ１とＢ２に比は１：４であった。
【００１８】
アントシアニンＢ１は、化学的および分光器的研究によって、シアニジン（ｃｙｎｉｄｉｎｅ）−３−グルコシドと同定された。この化合物は加水分解で、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）、およびグルコースを生じた。このグルコシドのＵＶスペクトルの極大（５２７ｎｍ）は、塩化アンモニウムによって５６７ｎｍにシフトし、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）の３’−および４’−ヒドロキシル基がフリーであることを示した。この構造は、クワの実から得られたシアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−グルコシドの試料との直接比較によって確認された。
【００１９】
アントシアニンＢ２は、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−サンブビオシドと同定された。このアントシアニンは、完全加水分解で、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）、グルコース、およびキシロースを生じた。スペクトルデータは、Ｂ２がシアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）の３置換グルコシドであることを示した。過酸化水素加水分解はこの色素から二糖を除き、さらなる酸加水分解でグルコース、およびキシロースを生じた。この構造は、ローゼリソウから単離されたシアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−サンブビオシドの試料との直接比較によって確認された。
【００２０】
本発明は、ＨＣＡと、ガルシノール（ポリイソプレニル化ベンゾフェノン）および／またはアントシアニン化合物を含むガルシニア種植物から得られた天然化合物とを組み合わせることによって、ＨＣＡだけでなく、ガルシノールおよび／またはアントシアニンの生物活性が増強されるという予期しない発見に基づいている。
【００２１】
本発明は、ガルシノールおよびアントシアニンのいずれか１つ、または両方と組み合わせたヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）を含み、細胞のサイトゾルコンパートメントにおいてＨＣＡのバイオアベイラビリティを高める効果を有する組成物に関する。
【００２２】
本発明の他の目的は、動物対象、好ましくはヒトにおける体重減少治療として、ガルシノールおよびアントシアニンのいずれか１つ、または両方と組み合わせたＨＣＡを含む本発明の組成物を使用することを含む。ネズミおよびヒトの研究で観察されたこの組成物に関する治療効果には、全体重およびボディマス指数の減少、体脂肪の減少、除脂肪体重および体水分量の増加、および知覚食欲レベルの低下が含まれる。この化合物の組み合わせは、いずれか単独の化合物に比べて、高いクエン酸リアーゼ阻害特性を発揮することが示される。
【００２３】
ガルシノールはさらに、単独で、動物腫瘍モデルにおいて化学的予防特性を有することが示される。生物活性には、これに限定されるものではないが、食欲抑制、細胞質クエン酸リアーゼの阻害、脂肪異化の増強、および抗酸化活性の上昇に関する活性が含まれる。
【００２４】
ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）は、（−）ヒドロキシクエン酸（Ｉ）、（＋）ヒドロキシクエン酸（ＩＩ）、（−）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＩＩ）、および（＋）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＶ）を含む、α−ヒドロキシ三塩基酸（１，２−ジヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボン酸）である。
【００２５】
ガルシノールは、ガルシニア種由来のポリイソプレニル化ベンゾフェノン（ＰＰＢ）である。ガルシノールはよく知られた抗酸化剤（すなわち、乳化ガルシノールはＤＬα−トコフェロールと同程度にスーパーオキシドアニオンを抑制した）、抗発癌物質であり、さらに抗微生物特性を有する。
【００２６】
アントシアニンは、フラベノイド（ｆｌａｖｅｎｏｉｄ）化合物の一種であり、植物ポリフェノールに広く分布している。食事性アントシアニン色素が、いくつかのヒトの疾患において予防的および治療的役割を有するという考慮すべき証拠がある。アントシアニンのこれらの望ましい特性に関する化学的根拠は、アントシアニンの抗酸化能、生体分子を損なうフリーラジカルを捕捉およびトラップする能力に関連すると考えられる。
【００２７】
ガルシノールとＨＣＡとの組み合わせは、サイトゾルにおけるＨＣＡのバイオアベイラビリティを高め、さらに同じ組み合わせが、ガルシノールの抗酸化特性を高める。本発明の化合物に関するこの生物学的特性の相互増強は、「生物作用増幅」または「アンプリバイオ（Ａｍｐｌｉｂｉｏ）」と呼ばれる。
【００２８】
アンプリバイオは、いずれか１つの化合物が他の化合物の生物作用を促進するのに役立ち、その結果として両方の生物活性が増強される機構を指す。
【００２９】
多くの生物系においては、２種以上の成分の相互作用は、相互作用、拮抗作用、相乗作用、またはアンプリバイオと呼ばれる相乗作用の明白な形態をもたらさない可能性がある。相乗作用を示すすべての化合物が、アンプリバイオ作用を示すわけではない。たとえば、リポ酸はビタミンＥ、Ｃ両方を再循環させ、それらを体に対してよりバイオアベイラブルにするので、αリポ酸をビタミンＥおよび／またはＣと組み合わせることには利点がある。しかしながら、両方のビタミンは、リポ酸の作用を増強、あるいは改善することがない。これに反して、ポリ不飽和脂肪酸を脂溶性ビタミンと組み合わせることによって得られた結果は、アンプリバイオ効果を実証する。ビタミンＥは酸化を防ぐことによって脂肪酸を保存し、同時に脂肪酸はビタミンＥの吸収を高める。アンプリバイオ効果の他の例は、補助栄養素を、生体によって内因的に生産される化合物と組み合わせるときに観察される。クルクミノイドは、体内のグルタチオンレベルを高めることが知られており、これはグルタチオン−フリーラジカル反応においてグルタチオン使用の速度を調節することによって起こる。上昇したグルタチオンは、その結果として体内でのクルクミノイドのアベイラビリティを高める。
【００３０】
本発明のアンプリバイオ作用は、以下の機構を含むことができる。
【００３１】
・ガルシノール／アントシアニンの抗酸化作用（ＨＣＡにより増強）が細胞を囲む負の電荷を中和して、細胞へのＨＣＡの移送および取込みを促進すること。
・ガルシノール／アントシアニンが細胞膜の流動性に影響を及ぼして、細胞へのＨＣＡの移送および取込みを促進すること。
・ガルシノール／アントシアニンがＨＣＡと相乗作用を示して、クエン酸リアーゼを阻害し、それによりＨＣＡのそのような阻害に対する閾値を低下させること。
【００３２】
したがって、ＨＣＡのガルシノール／アントシアニンとの相互作用によってＨＣＡ活性の増強がもたらされることが示され、同様にＨＣＡによってガルシノールおよびアントシアニンの生物学的ポテンシャルが高められることが認められる。本発明の３種化合物間の質的および量的相互作用は、これまで述べられていない。
【００３３】
ＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニン化合物を抽出および精製する方法は、当技術分野でよく知られている。
【００３４】
本発明はさらに、ガルシニア種の果実から抽出されたＰＰＢ、アントシアニン、およびＨＣＡを含む組成物を調製する方法を含み、その方法は以下を含む。
【００３５】
（ａ）ガルシニアの新鮮な果実を、８から１５部のＣ１からＣ６アルコール（たとえば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール）を用いて、密閉反応器内で、抽出が完了するまで還流および循環させることによって抽出すること。
（ｂ）抽出物を消費された材料から濾過すること。
（ｃ）抽出物を、５４０から６００ｍｍ／Ｈｇの減圧下で、１／４〜１／６の容量に濃縮すること。
（ｄ）濃縮物を、−５から５℃で、約２０から３０時間冷却し、沈殿物をＮｕｔｓｃｈｅフィルタで濾過すること。
（ｅ）粗ガルシノール（アッセイ１６〜２０％）を含む固体残留物（収率２．５から４％）を得ること。
（ｆ）粗ガルシノール抽出物を、石油エーテル、ヘキサン、またはトルエンなどの炭化水素溶媒（３から８部）に溶解し、アセトニトリルなどの高極性、非混和性溶媒（２から４部、３から５回）を用いて抽出／分配すること。
（ｇ）極性溶媒層を１／４〜１／６の容量に分離、濃縮し、−５から８℃で、１２から１６時間冷却すること。
（ｈ）残留物を、極性溶媒を用いて濾過、洗浄して、黄色ガルシノールを得ること（収率＝０．８から１．５％、アッセイ５５から７０％）。
（ｉ）ステップｃ）の抽出物に、ＨＣＡ含量（約２０から２５％）を基に算出したモル当量の量のアルカリ（水酸化ナトリウム、または水酸化カリウム）を添加すること。
（ｊ）混合物を攪拌しながら、８０から９５℃で、２．５から５時間加熱して、黄色ＰＰＢ（ガルシノール）を得ること。
（ｋ）沈殿物（ＨＣＡのナトリウムまたはカリウム塩）を、Ｎｕｔｓｃｈｅフィルタを用いて濾過し、冷アルコールで洗浄すること。
（ｌ）沈殿物を、３から５部の水に溶解すること。
（ｍ）この水溶液にモル当量の量の塩化カルシウムを添加し、攪拌しながら、８０から９５℃で、４から６時間加熱すること。
（ｎ）沈殿物を減圧下、５０から７５℃で、濾過、乾燥し、白色ＨＣＡカルシウムを得ること（収率＝２５から３５％）。
（ｏ）ステップ（ｊ）で得た黄色ＰＰＢ（ガルシノール）粉末とステップ（ｎ）で得たＨＣＡカルシウムとを、１：１０の比で混合し、最低で５５％のＨＣＡカルシウム、および最低で５％のＰＰＢ（ガルシノール）を含有する組成物を生じること。
（ｐ）任意選択で、ＨＣＡカルシウムまたは他の任意のＨＣＡ塩を、プロアントシアニジンが最低０．５％の有効な比率で、ＰＰＢおよびプロアントシアニジンと混合すること。
【００３６】
本発明のＰＰＢ組成物は、以下のように得ることもできる。
【００３７】
（ａ）トルエンおよび５％メタノールを用いて、懸濁液からガルシニア消費果実を抽出し、２０％ＰＰＢ（ガルシノール１５％、カンボジン５％）を有するペーストを得る。
（ｂ）ペーストをアップグレードし、５０％のガルシノール、母液に入る約１０〜１５％のカンボジンを含む組成物を得て、５０％ガルシノールをさらに１度の結晶化によってさらにアップグレードして、収率９０％のガルシノール、および３５％のカンボジンを生じる。
（ｃ）９０％ガルシノール組成物を１００℃に加熱して、約８０％ｐｒｏｏｆのカンボジンに転化し、残部はガルシノールとなる。
（ｄ）ステップ（ｃ）の生成物を、等しい比率で９０％ガルシノールの一部と混合し、４２〜４５％ｐｒｏｏｆの８５％〜９０％ＰＰＢ組成物を得る。
（ｅ）カンボジンおよびガルシノールがほぼ等しい比率の９０％ＰＰＢを含む最終組成物を得て、残部はポリイソプレニル化キサントンと呼ばれる環化生成物となる。
【００３８】
「バイオアベイラビリティ」という用語は、体重減少化合物の有効な機構を増強する任意の手段として定義される。類推によって、体内でのカルシウムのバイオアベイラビリティは最終的に骨量の増加によって測定され、つまり骨において補助カルシウムの取込みに役立つ任意の機構はカルシウムのバイオアベイラビリティを高めることになる。
【００３９】
「有効量」という用語は、たとえば適切なレベルのサイトゾルクエン酸リアーゼを生成するために送達されたＨＣＡ、ガルシノール、またはアントシアニンに相当する、化合物の十分な量を意味する。
【００４０】
本発明の第１の目的は、サイトゾル内で治療的に有効量のＨＣＡを得て、それによってクエン酸リアーゼを減少または阻害する必要のある対象を治療するために、ＨＣＡのバイオアベイラビリティが劇的に高められる治療方法を提供することである。このＨＣＡ活性の増強は、これに限定されるものではないが、ガルシノール、およびアントシアニンを含む化合物の共投与によって達成される。
【００４１】
本発明の他の目的は、フォルスコリンの効果（米国特許第５８０４５９６号）が、ガルシノール、および任意選択でアントシアニンの存在によって劇的に高められる体重減少治療の方法を提供することである。フォルスコリンの量は‘５９６号特許に教示されているものと同じであり、ガルシノールおよびアントシアニンの量は、本明細書においてＨＣＡと共に使用するために教示したものと同じである。
【００４２】
より詳細には、体重減少および食欲抑制に有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。体重減少に有効な量のＨＣＡ、およびアントシアニンは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、１０ｍｇであり、より好ましくは、アントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。体重減少および食欲抑制に有効な量のＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニンは、それぞれ５００ｍｇ、２５ｍｇ、および１０ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノール、およびアントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。
【００４３】
クエン酸リアーゼを阻害する有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。クエン酸リアーゼを阻害する有効な量のＨＣＡ、およびアントシアニンは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、１０ｍｇであり、より好ましくは、アントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。クエン酸リアーゼを阻害する有効な量のＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニンは、それぞれ５００ｍｇ、２５ｍｇ、および１０ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノール、およびアントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。
【００４４】
脂肪異化および除脂肪体重を増加する有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。脂肪異化および除脂肪体重を増加する有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。脂肪異化および除脂肪体重を増加する有効な量のＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニンは、それぞれ５００ｍｇ、２５ｍｇ、および１０ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノール、およびアントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。
【００４５】
【発明の実施の形態】
ＨＣＡおよびガルシノールの組み合わせによる治療的体重減少効果、および化学的予防剤としてのガルシノールの役割を、以下の実施例によって説明する。
【００４６】
実施例１
ガルシノールおよびＨＣＡを、２系統のマウス、ＳＫＨ−１およびＣＦ−１それぞれに投与することによって、対照の食事を与えられている動物、およびガルシノールまたはＨＣＡを単独で与えられている動物グループに比べて、全体重および腹部脂肪増量が著しく減少した。さらに、ガルシノールの食事による投与によって、対照の食事、あるいはＨＣＡまたはガルシノールを単独で含有する食事を与えられた動物に比べて、ＣＦ−１マウスにおいて、結腸異常腺窩形成（ＡＣは前癌性状態と考えられる）が著しく減少した。興味深いことに、ガルシノールに加えてＨＣＡを与えた動物は、対照、ガルシノール、およびＨＣＡグループに比べて、食物および水の消費量が高かったにもかかわらず、ガルシノールおよびＨＣＡの組み合わせによる体重増加防止効果が得られた。
【００４７】
表１は、ＳＫＨ−１マウスにおいて、ガルシノール（ＧＡＲ）、ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）、ガルシノールおよびヒドロキシクエン酸の組み合わせを経口投与したときの体重、食物消費量、液体消費量に対する効果をしめすものである。
【００４８】
【表１】
【００４９】
表２は、ＣＦ−１マウスにおいて、ガルシノール（ＧＡＲ）、ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）を１０週経口投与したときの、アゾキシメタン（ＡＯＭ）誘発結腸異常腺窩（ＡＣ）形成、および腹部の脂肪蓄積に対する効果を示すものである。
【００５０】
【表２】
【００５１】
これらのデータは、体重、体組成、および体代謝速度の調節を含む、ガルシノールのＨＣＡ補助剤としての幅広い生物機構を示している。
【００５２】
実施例２
化学的予防剤としてのガルシノールの役割は、ＣＦ−１マウスを局所的に炎症および腫瘍促進剤ＴＰＡで処理した実験において確認された。
【００５３】
表３は、ＴＰＡ誘発耳水腫に関するガルシノール（ＧＡＲ）の効果を示すものである。この実施例は、雌のＣＦ−１マウスを、ガルシノールを含む、または含まないＴＰＡを耳の皮膚に塗布して局所的に処理した。５時間後、マウスを殺し、耳のパンチを秤量した。データは平均±標準誤差で表す。これらのデータは、化学的予防剤としてのガルシノールの生物機構を示している。
【００５４】
【表３】
【００５５】
実施例３（ガルシノールおよびＨＣＡの体重減少ポテンシャルに関する臨床研究）
ＨＣＡのカルシウム塩５００ｍｇ、およびガルシノール２５ｍｇからなる組み合わせ（ＮＣ）を、ＨＣＡカルシウム塩５００ｍｇを含有する処方（Ｃ）と比較して、二重盲検、１２週の臨床試験で評価した。この試験は、４６人の体重超過女性の志願者に対して行なった（ＢＭＩ２５超）。参加者は、活性含有処方、またはプラシーボ処方のカプセル１つを、１日３回、食事の半時間前に摂取するように指示された。各参加者には、それまでの毎日の運動および食習慣を維持することを求めた。さらに、試験前および試験中に、質問票に基づいて身体活性をモニターした。参加者を、基準、および２、４、６、８、１０、１２週で評価した。診察ごとに以下の臨床上の要素を評価した。全体重、生体電気インピーダンス法による体組成、自己評価による食欲およびエネルギーレベル、脈拍数、および血圧である。１２週の試験中、ＮＣグループでは、基準値およびＣグループの値に比べて、体重、および脂肪量の平均値が著しく減少したが、一方で除脂肪体重、および全体水分は著しく増加した。食欲レベルは、Ｃグループに比べてＮＣグループで著しく低く、エネルギーレベルは、基準に比べて両方の試験グループで等しく上昇した。この試験の経過中に、自覚的または他覚的副作用は報告されなかった。脈拍数、収縮期血圧、および拡張期血圧は、試験の間を通じて同じレベルに維持された。
【００５６】
ＮＣは統計的に、全体重およびボディマス指数の減少、体脂肪の減少、除脂肪体重および体水分含量の増加、ならびに食欲知覚レベルの低下において、Ｃに比べてより有効である。対象のエネルギーレベルは、両グループにおいて療法によって増強されず、ＮＣおよびＣは自覚的副作用、および他覚的副作用を生じなかった。
【００５７】
【発明の効果】
動物研究および臨床研究を合わせたデータから、本発明がＨＣＡ単独の体重減少治療に比べてより有効であり、さらに本発明の組成物は脂肪減少に加えて、除脂肪体重を改善し、体組成の改善をもたらすことが示される。過剰な脂肪組織を落としながら、除脂肪体重を維持または向上させることは、疾病管理センターによって提唱されてきたが、除脂肪体重は最近、心血管の健康および総体的な健康の独立した決定的な予測因子として認知されているので重要である。動物実験モデルにおけるガルシノールの化学予防的作用もまた、その化合物が有する体組成を改善する役割に関連している可能性がある。
【００５８】
参考文献
1. Sullivan AC, Singth M, Srere PA, Glusker JP. Reactivity and Inhibitor Potential of Hydroxycitrate Isomers with Citrate Synthase, Citrate Lyase, and ATP Citrate Lyase. J Biol Chem. 1977; 252(21): 7583-7590.
2. Majeed M, Rosen R, McCarthy M, Conte AA, Patil D, Butrym E. Citrin A Revolutionary Herbal Approach to Weight Management. New Editions Publishing. Burlingame, CA. 1994.
3. Sullivan AC, Hamilton JG, Miller ON, Wheatley. Inhibition of lipogenesis in rat liver by (-)-hydroxycitrate. Arch Biochem Biophys. 1972; 150: 183-190.
4. Sullivan AC, Triscari J, Hamilton JG, Miller ON. Effect of (-)-Hydroxycitrate upon the Accumulation of Lipid in the Rat: I. Lipogenesis. Lipids. 1973; 9(2): 121-128.
5. Vasselli JR, Shane E, Boozer CN, Heymsfield SB. Garcinia Cambogia Extract Inhibits Body Weight Gain Via Increased Energy Expenditure (EE) In rats. FASEB J. 998; 12 (part1): A506.
6. Sullivan AC, Triscari J, Hamilton JG, Miller ON. Effect of (-)-Hydroxycitrate upon the Accumulation of Lipid in the Rat: II. Appetite. Lipids. 1973; 9(2): 121-128.
7. Conte A.A. A Non-Prescription Alternative in Weight Reduction Therapy. The Bariatrician. 1993: 17-19.
8. Conte A.A. The effects of (-)-Hydroxycitrate And Chromium (GTF) On Obesity. J Amer Coll Nutr. 1994 (October); 13(5): 535 [Abstract 60].
9. Katts GR, Pullin D, Parker LK, Keith PL, Keith S. Reduction Of Body Fat As A Function Of Taking A Dietary Supplement Containing Garcinia Cambodia Extract, Chromium Picolinate And L-Carnitine - A Double Blind Placebo Controlled Study. Abstract/Poster presented at a symposium on obesity organized by the Mexican Sociedad Medical del Sureste para el Estudio de la Obesidad, March 4, 1995, Merida, Yucatan, Mexico.
10. Badmaev V, Majeed M. Open Field, Physician Controlled, Clinical Evaluation Of Botanical Weight Loss Formula Citrin(r). Nutracon 1995: Nutraceuticals, Dietary Supplements And Functional Foods. Day One (Sponsored by Global Business Research LTD). Published in the symposium book.
11. Thom E. (-)Hydroxycitrate (HCA) In The Treatment Of Obesity, Int J Obesity. 20(4): 75 [Abstract/Poster 08-193-WP1 at 7th European Congress on Obesity in Barcelona, Spain 14-17 May, 1996].
12. Heymsfield SB, Allison DB, Vasselli JR, Pietrobelli A, Greenfield D, Nunez C. Garcinia cambogia (hydroxycitric acid) as a potential antiobesity agent: a randomized controlled trial. JAMA. 1998; 280: 1596-1600.
13. Majeed M., Badmaev V., Rajendran R. Potassium Hydroxycitrate For The Suppression Of Appetite And Induction Of Weight Loss. US Patent 5,783,603. July 21, 1998.
14. Puttaparthi K, Rogers T, Elshourbagy NA, Levi M, Melnick JZ. Renal ATP citrate lyase (ATP CL) protein localizes throughout the nephron and increases only in the proximal tubule with chronic metabolic acidosis (CMA). Abstract presented at Pediatric Academic Societies' 1999 Annual Meeting. May 2, 1999; San Francisco, Calif.
15. Tanaka, T. et al. Prevention of colonic aberrant crypt foci by dietary feeding of garcinol in male F3444 rats. Carcinogenesis 2000 Jun: 21(6): 1183-9.
16. Iinuma M et al. Antibacterial activity of some Garcinia benzophenone derivatives against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Biol Pharm Bull 1996 Feb; 19(2): 311-4.
17. Krishnamurthy, N. et al. Tetrahedron Lett. 1981; 793.
18. Rao Rama, AV. et al. Chem Ind. 1979; 92.
19. Krishnamurthy, N. et al. J Food Sci and Tech. 1982; 97: 19.
【図面の簡単な説明】
【図１】 体重減少を経験した対象のパーセントの傾向線を示す図である。
【図２】 体重減少を経験した試験対象の平均パーセントを示す図である。
【図３】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの体重減少パーセントを示す図である。
【図４】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの体重減少パーセントを示す図である。
【図５】 連続試験間隔でのＣおよびＮＣグループの体重減少平均（ポンド）を示す図である。
【図６】 ２度の試験時間間隔での、ＣおよびＮＣグループのボディマス指数（ＢＭＩ）変化の平均パーセントを示す図である。
【図７】 ２度の試験時間間隔での、ＣおよびＮＣグループのボディマス指数（ＢＭＩ）変化のパーセントを示す図である。
【図８】 Ｃグループ対象の体重変化パーセントを示す図である。
【図９】 ＮＣグループ対象の体重変化パーセントを示す図である。
【図１０】 ＮＣグループ対象の除脂肪体重（ＬＢＭ）変化パーセントを示す図である。
【図１１】 Ｃグループ対象の除脂肪体重（ＬＢＭ）変化パーセントを示す図である。
【図１２】 ＮＣグループ対象の脂肪減少パーセントを示す図である。
【図１３】 Ｃグループ対象の水分変化パーセントを示す図である。
【図１４】 ＮＣグループ対象の水分変化パーセントを示す図である。
【図１５】 連続時間間隔でのＣおよびＮＣグループの自己評価食欲レベルを示す図である。
【図１６】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの自己評価エネルギーレベルを示す図である。
【図１７】 連続時間間隔でのＣおよびＮＣグループの脈拍数を示す図である。
【図１８】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの収縮期血圧を示す図である。
【図１９】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの拡張期血圧を示す図である。
本出願は、２０００年８月１７日出願の仮出願第６０／２２５８２１号に対して、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１．１１９（ｅ）により優先権を主張するものである。
【０００２】
【発明の背景】
ヒドロキシクエン酸は、２つの不斉中心を有するα−ヒドロキシ三塩基酸（１，２−ジヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボン酸）であり、したがって２対のジアステレオ異性体または４つの異なる異性体を形成する：（−）ヒドロキシクエン酸（Ｉ）、（＋）ヒドロキシクエン酸（ＩＩ）、（−）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＩＩ）、および（＋）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＶ）（１〜２）。
【０００３】
この（−）ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）異性体は、ガルシニアカンボジア果実（Ｃｌｕｓｉａｃｅａｅ科）の皮に見出される（１〜２）。この異性体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、その天然基質クエン酸塩ならびにヒドロキシクエン酸の他の立体異性体に比べて精製酵素に対してはるかに高い親和性を示し、ＡＴＰクエン酸リアーゼの強力な線状競合阻害剤であることが示されている（１〜２）。
【０００４】
ＡＴＰクエン酸リアーゼは、クエン酸のアセチルＣｏＡおよびオキサロ酢酸へのミトコンドリア外開裂を触媒し、脂肪酸の生合成を促進するクエン酸開裂酵素として生物学的に重要である。（−）ＨＣＡによるクエン酸リアーゼの可逆的阻害は、脂肪酸合成および脂質生成の減少につながる可能性がある。これらの作用は、実験動物に（−）ヒドロキシクエン酸を経口、静脈内、または腹腔内投与することによって、ｉｎ ｖｉｖｏで測定および実証されている（３）。
【０００５】
給食時間前に（−）ＨＣＡを経口で与えたとき、（−）ＨＣＡを与えられた動物は未処理の対照に比べて、より少ない食物を消費し、脂肪酸およびコレステロールの肝合成は著しく減少した（３〜４）。（−）ＨＣＡを与えたラットの実験では、累積食物摂取量の減少なしに体重減少を示したので、観察された食物摂取量の減少は、（−）ＨＣＡが促進する体重減少の要因の１つに過ぎない可能性がある（５）。可能な（−）ＨＣＡによる体重減少の機構には、その性質が依然として定かではないエネルギー消費要素が含まれる可能性があると思われる（５）。
【０００６】
（−）ＨＣＡ処理動物におけるこのエネルギー消費、脂質生成減少、および食物摂取量の減少の機構が、体重および全体脂肪量の減少をもたらす可能性がある（６）。
【０００７】
（−）ＨＣＡの体重低減化合物としての可能性は１９７０年代から認識されていたが、この化合物を用いた臨床研究はわずかしか行われていない（７〜１２）。ＨＣＡ介在の過剰体脂肪の防止を検討するこれらの少数の研究は、おそらく標的細胞のサイトゾルにおいてＨＣＡが十分にバイオアベイラブルでないために、矛盾する結果となっている。
【０００８】
ＨＣＡの臨床研究の１つでは、議論の余地のある高繊維食が用いられた。高繊維食は多くの栄養素および微量栄養素の吸収を減じることが知られているので、ＨＣＡと組み合わせて高繊維食を使用することによって、ＨＣＡの胃腸吸収が減じる可能性がある。細胞内酵素、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）クエン酸リアーゼの阻害におけるＨＣＡの報告されている有効性は、標的細胞内部のＨＣＡの存在に完全に依存しているので、この問題はＨＣＡにとって重大なものとなる。
【０００９】
発明者等は、米国特許において、ＨＣＡ化合物のバイオアベイラビリティに関する重要な問題を検討している。第５７８３６０３号特許は、ＡＴＰクエン酸リアーゼの競合阻害のために、ＨＣＡの生体膜を越える移送を促進し、より多くのＨＣＡをサイトゾルに有効に送達するＨＣＡカリウム塩の独特な構造を生じる製造方法を記載した。
【００１０】
また、‘６０３号特許は著しく改善されたバイオアベイラビリティを有するＨＣＡ化合物に関するが、そのバイオアベイラビリティは依然として比較的効率が不足であった。たとえば、肝細胞で行われたｉｎ ｖｉｔｒｏの研究は、５ｍＭの細胞外カリウムＨＣＡがＡＴＰクエン酸リアーゼを阻害できたことを示している。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ＡＴＰクエン酸リアーゼを有効に阻害するためには、わずか０．５ｍＭのカリウムＨＣＡが実際にサイトゾル内で必要とされる。したがって、サイトゾル内で１／１０濃度の量を得るために、標的細胞の外側では１０倍過剰量のカリウムＨＣＡが必要となる。ＨＣＡのバイオアベイラビリティが比較的に不良であるというこの発見は、前臨床実験において確認されており（１４）、ＨＣＡのバイオアベイラビリティおよび有効性をさらに改善させる必要があることを示している。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
ガルシノールは、ＨＣＡと同様にガルシニア種の果皮から単離され、抗酸化性、および化学的保護性を示す（１５）。１つの実験において、ガルシノール食（０．０１％および０．０５％）を与えたラットは、対照動物に比べて、アゾキシメタン（ＡＯＭ）誘発結腸異常腺窩巣（ＡＣＦ）の発生が著しく減じることを示した。ガルシノールを与えることによって、肝臓グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、キノンレダクターゼの活性が著しく上昇し、Ｏ２およびＮＯ発生、ならびにｉＮＯＳおよびＣＯＸ−２タンパク質の発現が抑制された。これらの発見は、ガルシノールの可能な化学的予防機構を示している。
【００１３】
ガルシノールおよびイソガルシノールは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に対する抗菌活性について評価された（１６）。これらの化合物は、３．１〜１２．５マイクログラム／ｍｌで最小阻止濃度、すなわち抗生物質、バンコマイシンとほぼ等しい最小阻止濃度を示した。
【００１４】
１９８１年にＫｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ等（１７）は、ガルシニアインディカからの、ガルシノール、およびその無色異性体、イソガルシノールの単離を報告した。それらの構造は、化学的データおよびスペクトルデータに基づいて提示された。ガルシノール、Ｃ３８Ｈ５０Ｏ６、ｍ．ｐ．１２２（ｏ）は、ガルシニアインディカの果皮のヘキサン抽出物から黄色針晶として晶出された（１．５パーセント）。ガルシノールのＵＶスペクトルは、１，３−ジケトン系が３，４−ジヒドロキシベンゾイル部分に共役していることを示した。このトリメチルエーテルのＩＲスペクトルは、飽和カルボニル基（１７２７ｃｍ−１）、および２つのｏｅ，β−不飽和カルボニル基（１６６８、および１６４２ｃｍ−１）の存在を示した。
【００１５】
イソガルシノールは、抽出物のカラムクロマトグラフィによって単離された。その同一性は、混融点、ならびにＵＶ、ＩＲ、およびＰＭＲスペクトルの比較によって確かめられた。イソガルシノールのＩＲスペクトルは、飽和カルボニル基（１７１５ｃｍ−１）、アロイル基（１６７０ｃｍ−１）、およびｏｅ，β−不飽和カルボニル基（１６３５ｃｍ−１）の存在を示した。
【００１６】
Ｒａｏ等（１８）は、ガルシニアカンボジアの木のラテックスから、カンボジン（３３Ｈ５５０６）、ｍ．ｐ．２４２〜２４４を単離することを報告した。その構造は、ＵＶ、ＩＲ、およびＮＭＰ研究によって確認された。ＵＶ：２３１〜２３４、２７５〜２７８、および３０５〜３１３、ＩＲ（Ｋｂｒ法）：１７２０（飽和カルボニル）、１６８０、および１６４２ｃｍ−１（不飽和カルボニルおよび二重結合）。カンボジンに加えて、Ｒａｏ等はさらにカンボジノールの単離を報告し、その構造をカンボジンに関連づけた。
【００１７】
１９８２年に、Ｎ．Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ等（１９）は、Ｋｏｋａｍ（ガルシニアインディカ）の新鮮な赤く熟した果実から、アントシアニン色素を単離した。皮部分を果実の残部から分離し、１パーセントのＨＣｌを含有するメタノールを用いて、ブレンダ内で３回浸解した。抽出物を合わせ、濾過し、真空中３０℃で濃縮した。Ｋｏｋａｍ色素抽出物のペーパークロマトグラフィは、２本の帯を示した。遅く移動する帯をＢ１、もう一方をＢ２と称した。全アントシアニン濃度は、乾燥重量ベースで２．４パーセントであると推定され、Ｂ１とＢ２に比は１：４であった。
【００１８】
アントシアニンＢ１は、化学的および分光器的研究によって、シアニジン（ｃｙｎｉｄｉｎｅ）−３−グルコシドと同定された。この化合物は加水分解で、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）、およびグルコースを生じた。このグルコシドのＵＶスペクトルの極大（５２７ｎｍ）は、塩化アンモニウムによって５６７ｎｍにシフトし、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）の３’−および４’−ヒドロキシル基がフリーであることを示した。この構造は、クワの実から得られたシアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−グルコシドの試料との直接比較によって確認された。
【００１９】
アントシアニンＢ２は、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−サンブビオシドと同定された。このアントシアニンは、完全加水分解で、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）、グルコース、およびキシロースを生じた。スペクトルデータは、Ｂ２がシアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）の３置換グルコシドであることを示した。過酸化水素加水分解はこの色素から二糖を除き、さらなる酸加水分解でグルコース、およびキシロースを生じた。この構造は、ローゼリソウから単離されたシアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−サンブビオシドの試料との直接比較によって確認された。
【００２０】
本発明は、ＨＣＡと、ガルシノール（ポリイソプレニル化ベンゾフェノン）および／またはアントシアニン化合物を含むガルシニア種植物から得られた天然化合物とを組み合わせることによって、ＨＣＡだけでなく、ガルシノールおよび／またはアントシアニンの生物活性が増強されるという予期しない発見に基づいている。
【００２１】
本発明は、ガルシノールおよびアントシアニンのいずれか１つ、または両方と組み合わせたヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）を含み、細胞のサイトゾルコンパートメントにおいてＨＣＡのバイオアベイラビリティを高める効果を有する組成物に関する。
【００２２】
本発明の他の目的は、動物対象、好ましくはヒトにおける体重減少治療として、ガルシノールおよびアントシアニンのいずれか１つ、または両方と組み合わせたＨＣＡを含む本発明の組成物を使用することを含む。ネズミおよびヒトの研究で観察されたこの組成物に関する治療効果には、全体重およびボディマス指数の減少、体脂肪の減少、除脂肪体重および体水分量の増加、および知覚食欲レベルの低下が含まれる。この化合物の組み合わせは、いずれか単独の化合物に比べて、高いクエン酸リアーゼ阻害特性を発揮することが示される。
【００２３】
ガルシノールはさらに、単独で、動物腫瘍モデルにおいて化学的予防特性を有することが示される。生物活性には、これに限定されるものではないが、食欲抑制、細胞質クエン酸リアーゼの阻害、脂肪異化の増強、および抗酸化活性の上昇に関する活性が含まれる。
【００２４】
ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）は、（−）ヒドロキシクエン酸（Ｉ）、（＋）ヒドロキシクエン酸（ＩＩ）、（−）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＩＩ）、および（＋）アロ−ヒドロキシクエン酸（ＩＶ）を含む、α−ヒドロキシ三塩基酸（１，２−ジヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボン酸）である。
【００２５】
ガルシノールは、ガルシニア種由来のポリイソプレニル化ベンゾフェノン（ＰＰＢ）である。ガルシノールはよく知られた抗酸化剤（すなわち、乳化ガルシノールはＤＬα−トコフェロールと同程度にスーパーオキシドアニオンを抑制した）、抗発癌物質であり、さらに抗微生物特性を有する。
【００２６】
アントシアニンは、フラベノイド（ｆｌａｖｅｎｏｉｄ）化合物の一種であり、植物ポリフェノールに広く分布している。食事性アントシアニン色素が、いくつかのヒトの疾患において予防的および治療的役割を有するという考慮すべき証拠がある。アントシアニンのこれらの望ましい特性に関する化学的根拠は、アントシアニンの抗酸化能、生体分子を損なうフリーラジカルを捕捉およびトラップする能力に関連すると考えられる。
【００２７】
ガルシノールとＨＣＡとの組み合わせは、サイトゾルにおけるＨＣＡのバイオアベイラビリティを高め、さらに同じ組み合わせが、ガルシノールの抗酸化特性を高める。本発明の化合物に関するこの生物学的特性の相互増強は、「生物作用増幅」または「アンプリバイオ（Ａｍｐｌｉｂｉｏ）」と呼ばれる。
【００２８】
アンプリバイオは、いずれか１つの化合物が他の化合物の生物作用を促進するのに役立ち、その結果として両方の生物活性が増強される機構を指す。
【００２９】
多くの生物系においては、２種以上の成分の相互作用は、相互作用、拮抗作用、相乗作用、またはアンプリバイオと呼ばれる相乗作用の明白な形態をもたらさない可能性がある。相乗作用を示すすべての化合物が、アンプリバイオ作用を示すわけではない。たとえば、リポ酸はビタミンＥ、Ｃ両方を再循環させ、それらを体に対してよりバイオアベイラブルにするので、αリポ酸をビタミンＥおよび／またはＣと組み合わせることには利点がある。しかしながら、両方のビタミンは、リポ酸の作用を増強、あるいは改善することがない。これに反して、ポリ不飽和脂肪酸を脂溶性ビタミンと組み合わせることによって得られた結果は、アンプリバイオ効果を実証する。ビタミンＥは酸化を防ぐことによって脂肪酸を保存し、同時に脂肪酸はビタミンＥの吸収を高める。アンプリバイオ効果の他の例は、補助栄養素を、生体によって内因的に生産される化合物と組み合わせるときに観察される。クルクミノイドは、体内のグルタチオンレベルを高めることが知られており、これはグルタチオン−フリーラジカル反応においてグルタチオン使用の速度を調節することによって起こる。上昇したグルタチオンは、その結果として体内でのクルクミノイドのアベイラビリティを高める。
【００３０】
本発明のアンプリバイオ作用は、以下の機構を含むことができる。
【００３１】
・ガルシノール／アントシアニンの抗酸化作用（ＨＣＡにより増強）が細胞を囲む負の電荷を中和して、細胞へのＨＣＡの移送および取込みを促進すること。
・ガルシノール／アントシアニンが細胞膜の流動性に影響を及ぼして、細胞へのＨＣＡの移送および取込みを促進すること。
・ガルシノール／アントシアニンがＨＣＡと相乗作用を示して、クエン酸リアーゼを阻害し、それによりＨＣＡのそのような阻害に対する閾値を低下させること。
【００３２】
したがって、ＨＣＡのガルシノール／アントシアニンとの相互作用によってＨＣＡ活性の増強がもたらされることが示され、同様にＨＣＡによってガルシノールおよびアントシアニンの生物学的ポテンシャルが高められることが認められる。本発明の３種化合物間の質的および量的相互作用は、これまで述べられていない。
【００３３】
ＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニン化合物を抽出および精製する方法は、当技術分野でよく知られている。
【００３４】
本発明はさらに、ガルシニア種の果実から抽出されたＰＰＢ、アントシアニン、およびＨＣＡを含む組成物を調製する方法を含み、その方法は以下を含む。
【００３５】
（ａ）ガルシニアの新鮮な果実を、８から１５部のＣ１からＣ６アルコール（たとえば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール）を用いて、密閉反応器内で、抽出が完了するまで還流および循環させることによって抽出すること。
（ｂ）抽出物を消費された材料から濾過すること。
（ｃ）抽出物を、５４０から６００ｍｍ／Ｈｇの減圧下で、１／４〜１／６の容量に濃縮すること。
（ｄ）濃縮物を、−５から５℃で、約２０から３０時間冷却し、沈殿物をＮｕｔｓｃｈｅフィルタで濾過すること。
（ｅ）粗ガルシノール（アッセイ１６〜２０％）を含む固体残留物（収率２．５から４％）を得ること。
（ｆ）粗ガルシノール抽出物を、石油エーテル、ヘキサン、またはトルエンなどの炭化水素溶媒（３から８部）に溶解し、アセトニトリルなどの高極性、非混和性溶媒（２から４部、３から５回）を用いて抽出／分配すること。
（ｇ）極性溶媒層を１／４〜１／６の容量に分離、濃縮し、−５から８℃で、１２から１６時間冷却すること。
（ｈ）残留物を、極性溶媒を用いて濾過、洗浄して、黄色ガルシノールを得ること（収率＝０．８から１．５％、アッセイ５５から７０％）。
（ｉ）ステップｃ）の抽出物に、ＨＣＡ含量（約２０から２５％）を基に算出したモル当量の量のアルカリ（水酸化ナトリウム、または水酸化カリウム）を添加すること。
（ｊ）混合物を攪拌しながら、８０から９５℃で、２．５から５時間加熱して、黄色ＰＰＢ（ガルシノール）を得ること。
（ｋ）沈殿物（ＨＣＡのナトリウムまたはカリウム塩）を、Ｎｕｔｓｃｈｅフィルタを用いて濾過し、冷アルコールで洗浄すること。
（ｌ）沈殿物を、３から５部の水に溶解すること。
（ｍ）この水溶液にモル当量の量の塩化カルシウムを添加し、攪拌しながら、８０から９５℃で、４から６時間加熱すること。
（ｎ）沈殿物を減圧下、５０から７５℃で、濾過、乾燥し、白色ＨＣＡカルシウムを得ること（収率＝２５から３５％）。
（ｏ）ステップ（ｊ）で得た黄色ＰＰＢ（ガルシノール）粉末とステップ（ｎ）で得たＨＣＡカルシウムとを、１：１０の比で混合し、最低で５５％のＨＣＡカルシウム、および最低で５％のＰＰＢ（ガルシノール）を含有する組成物を生じること。
（ｐ）任意選択で、ＨＣＡカルシウムまたは他の任意のＨＣＡ塩を、プロアントシアニジンが最低０．５％の有効な比率で、ＰＰＢおよびプロアントシアニジンと混合すること。
【００３６】
本発明のＰＰＢ組成物は、以下のように得ることもできる。
【００３７】
（ａ）トルエンおよび５％メタノールを用いて、懸濁液からガルシニア消費果実を抽出し、２０％ＰＰＢ（ガルシノール１５％、カンボジン５％）を有するペーストを得る。
（ｂ）ペーストをアップグレードし、５０％のガルシノール、母液に入る約１０〜１５％のカンボジンを含む組成物を得て、５０％ガルシノールをさらに１度の結晶化によってさらにアップグレードして、収率９０％のガルシノール、および３５％のカンボジンを生じる。
（ｃ）９０％ガルシノール組成物を１００℃に加熱して、約８０％ｐｒｏｏｆのカンボジンに転化し、残部はガルシノールとなる。
（ｄ）ステップ（ｃ）の生成物を、等しい比率で９０％ガルシノールの一部と混合し、４２〜４５％ｐｒｏｏｆの８５％〜９０％ＰＰＢ組成物を得る。
（ｅ）カンボジンおよびガルシノールがほぼ等しい比率の９０％ＰＰＢを含む最終組成物を得て、残部はポリイソプレニル化キサントンと呼ばれる環化生成物となる。
【００３８】
「バイオアベイラビリティ」という用語は、体重減少化合物の有効な機構を増強する任意の手段として定義される。類推によって、体内でのカルシウムのバイオアベイラビリティは最終的に骨量の増加によって測定され、つまり骨において補助カルシウムの取込みに役立つ任意の機構はカルシウムのバイオアベイラビリティを高めることになる。
【００３９】
「有効量」という用語は、たとえば適切なレベルのサイトゾルクエン酸リアーゼを生成するために送達されたＨＣＡ、ガルシノール、またはアントシアニンに相当する、化合物の十分な量を意味する。
【００４０】
本発明の第１の目的は、サイトゾル内で治療的に有効量のＨＣＡを得て、それによってクエン酸リアーゼを減少または阻害する必要のある対象を治療するために、ＨＣＡのバイオアベイラビリティが劇的に高められる治療方法を提供することである。このＨＣＡ活性の増強は、これに限定されるものではないが、ガルシノール、およびアントシアニンを含む化合物の共投与によって達成される。
【００４１】
本発明の他の目的は、フォルスコリンの効果（米国特許第５８０４５９６号）が、ガルシノール、および任意選択でアントシアニンの存在によって劇的に高められる体重減少治療の方法を提供することである。フォルスコリンの量は‘５９６号特許に教示されているものと同じであり、ガルシノールおよびアントシアニンの量は、本明細書においてＨＣＡと共に使用するために教示したものと同じである。
【００４２】
より詳細には、体重減少および食欲抑制に有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。体重減少に有効な量のＨＣＡ、およびアントシアニンは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、１０ｍｇであり、より好ましくは、アントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。体重減少および食欲抑制に有効な量のＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニンは、それぞれ５００ｍｇ、２５ｍｇ、および１０ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノール、およびアントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。
【００４３】
クエン酸リアーゼを阻害する有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。クエン酸リアーゼを阻害する有効な量のＨＣＡ、およびアントシアニンは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、１０ｍｇであり、より好ましくは、アントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。クエン酸リアーゼを阻害する有効な量のＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニンは、それぞれ５００ｍｇ、２５ｍｇ、および１０ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノール、およびアントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。
【００４４】
脂肪異化および除脂肪体重を増加する有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。脂肪異化および除脂肪体重を増加する有効な量のＨＣＡ、およびガルシノールは、それぞれ１日３回５００ｍｇ、２５ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノールの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。脂肪異化および除脂肪体重を増加する有効な量のＨＣＡ、ガルシノール、およびアントシアニンは、それぞれ５００ｍｇ、２５ｍｇ、および１０ｍｇであり、より好ましくは、ガルシノール、およびアントシアニンの投与量は、ＨＣＡ、またはジテルペンフォルスコリン（米国特許第５８０４５９６号）のような他の体重減少化合物の０．０１％から１０％の範囲であることができる。
【００４５】
【発明の実施の形態】
ＨＣＡおよびガルシノールの組み合わせによる治療的体重減少効果、および化学的予防剤としてのガルシノールの役割を、以下の実施例によって説明する。
【００４６】
実施例１
ガルシノールおよびＨＣＡを、２系統のマウス、ＳＫＨ−１およびＣＦ−１それぞれに投与することによって、対照の食事を与えられている動物、およびガルシノールまたはＨＣＡを単独で与えられている動物グループに比べて、全体重および腹部脂肪増量が著しく減少した。さらに、ガルシノールの食事による投与によって、対照の食事、あるいはＨＣＡまたはガルシノールを単独で含有する食事を与えられた動物に比べて、ＣＦ−１マウスにおいて、結腸異常腺窩形成（ＡＣは前癌性状態と考えられる）が著しく減少した。興味深いことに、ガルシノールに加えてＨＣＡを与えた動物は、対照、ガルシノール、およびＨＣＡグループに比べて、食物および水の消費量が高かったにもかかわらず、ガルシノールおよびＨＣＡの組み合わせによる体重増加防止効果が得られた。
【００４７】
表１は、ＳＫＨ−１マウスにおいて、ガルシノール（ＧＡＲ）、ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）、ガルシノールおよびヒドロキシクエン酸の組み合わせを経口投与したときの体重、食物消費量、液体消費量に対する効果をしめすものである。
【００４８】
【表１】
表２は、ＣＦ−１マウスにおいて、ガルシノール（ＧＡＲ）、ヒドロキシクエン酸（ＨＣＡ）を１０週経口投与したときの、アゾキシメタン（ＡＯＭ）誘発結腸異常腺窩（ＡＣ）形成、および腹部の脂肪蓄積に対する効果を示すものである。
【００５０】
【表２】
これらのデータは、体重、体組成、および体代謝速度の調節を含む、ガルシノールのＨＣＡ補助剤としての幅広い生物機構を示している。
【００５２】
実施例２
化学的予防剤としてのガルシノールの役割は、ＣＦ−１マウスを局所的に炎症および腫瘍促進剤ＴＰＡで処理した実験において確認された。
【００５３】
表３は、ＴＰＡ誘発耳水腫に関するガルシノール（ＧＡＲ）の効果を示すものである。この実施例は、雌のＣＦ−１マウスを、ガルシノールを含む、または含まないＴＰＡを耳の皮膚に塗布して局所的に処理した。５時間後、マウスを殺し、耳のパンチを秤量した。データは平均±標準誤差で表す。これらのデータは、化学的予防剤としてのガルシノールの生物機構を示している。
【００５４】
【表３】
実施例３（ガルシノールおよびＨＣＡの体重減少ポテンシャルに関する臨床研究）
ＨＣＡのカルシウム塩５００ｍｇ、およびガルシノール２５ｍｇからなる組み合わせ（ＮＣ）を、ＨＣＡカルシウム塩５００ｍｇを含有する処方（Ｃ）と比較して、二重盲検、１２週の臨床試験で評価した。この試験は、４６人の体重超過女性の志願者に対して行なった（ＢＭＩ２５超）。参加者は、活性含有処方、またはプラシーボ処方のカプセル１つを、１日３回、食事の半時間前に摂取するように指示された。各参加者には、それまでの毎日の運動および食習慣を維持することを求めた。さらに、試験前および試験中に、質問票に基づいて身体活性をモニターした。参加者を、基準、および２、４、６、８、１０、１２週で評価した。診察ごとに以下の臨床上の要素を評価した。全体重、生体電気インピーダンス法による体組成、自己評価による食欲およびエネルギーレベル、脈拍数、および血圧である。１２週の試験中、ＮＣグループでは、基準値およびＣグループの値に比べて、体重、および脂肪量の平均値が著しく減少したが、一方で除脂肪体重、および全体水分は著しく増加した。食欲レベルは、Ｃグループに比べてＮＣグループで著しく低く、エネルギーレベルは、基準に比べて両方の試験グループで等しく上昇した。この試験の経過中に、自覚的または他覚的副作用は報告されなかった。脈拍数、収縮期血圧、および拡張期血圧は、試験の間を通じて同じレベルに維持された。
【００５６】
ＮＣは統計的に、全体重およびボディマス指数の減少、体脂肪の減少、除脂肪体重および体水分含量の増加、ならびに食欲知覚レベルの低下において、Ｃに比べてより有効である。対象のエネルギーレベルは、両グループにおいて療法によって増強されず、ＮＣおよびＣは自覚的副作用、および他覚的副作用を生じなかった。
【００５７】
【発明の効果】
動物研究および臨床研究を合わせたデータから、本発明がＨＣＡ単独の体重減少治療に比べてより有効であり、さらに本発明の組成物は脂肪減少に加えて、除脂肪体重を改善し、体組成の改善をもたらすことが示される。過剰な脂肪組織を落としながら、除脂肪体重を維持または向上させることは、疾病管理センターによって提唱されてきたが、除脂肪体重は最近、心血管の健康および総体的な健康の独立した決定的な予測因子として認知されているので重要である。動物実験モデルにおけるガルシノールの化学予防的作用もまた、その化合物が有する体組成を改善する役割に関連している可能性がある。
【００５８】
参考文献
1. Sullivan AC, Singth M, Srere PA, Glusker JP. Reactivity and Inhibitor Potential of Hydroxycitrate Isomers with Citrate Synthase, Citrate Lyase, and ATP Citrate Lyase. J Biol Chem. 1977; 252(21): 7583-7590.
2. Majeed M, Rosen R, McCarthy M, Conte AA, Patil D, Butrym E. Citrin A Revolutionary Herbal Approach to Weight Management. New Editions Publishing. Burlingame, CA. 1994.
3. Sullivan AC, Hamilton JG, Miller ON, Wheatley. Inhibition of lipogenesis in rat liver by (-)-hydroxycitrate. Arch Biochem Biophys. 1972; 150: 183-190.
4. Sullivan AC, Triscari J, Hamilton JG, Miller ON. Effect of (-)-Hydroxycitrate upon the Accumulation of Lipid in the Rat: I. Lipogenesis. Lipids. 1973; 9(2): 121-128.
5. Vasselli JR, Shane E, Boozer CN, Heymsfield SB. Garcinia Cambogia Extract Inhibits Body Weight Gain Via Increased Energy Expenditure (EE) In rats. FASEB J. 998; 12 (part1): A506.
6. Sullivan AC, Triscari J, Hamilton JG, Miller ON. Effect of (-)-Hydroxycitrate upon the Accumulation of Lipid in the Rat: II. Appetite. Lipids. 1973; 9(2): 121-128.
7. Conte A.A. A Non-Prescription Alternative in Weight Reduction Therapy. The Bariatrician. 1993: 17-19.
8. Conte A.A. The effects of (-)-Hydroxycitrate And Chromium (GTF) On Obesity. J Amer Coll Nutr. 1994 (October); 13(5): 535 [Abstract 60].
9. Katts GR, Pullin D, Parker LK, Keith PL, Keith S. Reduction Of Body Fat As A Function Of Taking A Dietary Supplement Containing Garcinia Cambodia Extract, Chromium Picolinate And L-Carnitine - A Double Blind Placebo Controlled Study. Abstract/Poster presented at a symposium on obesity organized by the Mexican Sociedad Medical del Sureste para el Estudio de la Obesidad, March 4, 1995, Merida, Yucatan, Mexico.
10. Badmaev V, Majeed M. Open Field, Physician Controlled, Clinical Evaluation Of Botanical Weight Loss Formula Citrin(r). Nutracon 1995: Nutraceuticals, Dietary Supplements And Functional Foods. Day One (Sponsored by Global Business Research LTD). Published in the symposium book.
11. Thom E. (-)Hydroxycitrate (HCA) In The Treatment Of Obesity, Int J Obesity. 20(4): 75 [Abstract/Poster 08-193-WP1 at 7th European Congress on Obesity in Barcelona, Spain 14-17 May, 1996].
12. Heymsfield SB, Allison DB, Vasselli JR, Pietrobelli A, Greenfield D, Nunez C. Garcinia cambogia (hydroxycitric acid) as a potential antiobesity agent: a randomized controlled trial. JAMA. 1998; 280: 1596-1600.
13. Majeed M., Badmaev V., Rajendran R. Potassium Hydroxycitrate For The Suppression Of Appetite And Induction Of Weight Loss. US Patent 5,783,603. July 21, 1998.
14. Puttaparthi K, Rogers T, Elshourbagy NA, Levi M, Melnick JZ. Renal ATP citrate lyase (ATP CL) protein localizes throughout the nephron and increases only in the proximal tubule with chronic metabolic acidosis (CMA). Abstract presented at Pediatric Academic Societies' 1999 Annual Meeting. May 2, 1999; San Francisco, Calif.
15. Tanaka, T. et al. Prevention of colonic aberrant crypt foci by dietary feeding of garcinol in male F3444 rats. Carcinogenesis 2000 Jun: 21(6): 1183-9.
16. Iinuma M et al. Antibacterial activity of some Garcinia benzophenone derivatives against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Biol Pharm Bull 1996 Feb; 19(2): 311-4.
17. Krishnamurthy, N. et al. Tetrahedron Lett. 1981; 793.
18. Rao Rama, AV. et al. Chem Ind. 1979; 92.
19. Krishnamurthy, N. et al. J Food Sci and Tech. 1982; 97: 19.
【図面の簡単な説明】
【図１】 体重減少を経験した対象のパーセントの傾向線を示す図である。
【図２】 体重減少を経験した試験対象の平均パーセントを示す図である。
【図３】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの体重減少パーセントを示す図である。
【図４】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの体重減少パーセントを示す図である。
【図５】 連続試験間隔でのＣおよびＮＣグループの体重減少平均（ポンド）を示す図である。
【図６】 ２度の試験時間間隔での、ＣおよびＮＣグループのボディマス指数（ＢＭＩ）変化の平均パーセントを示す図である。
【図７】 ２度の試験時間間隔での、ＣおよびＮＣグループのボディマス指数（ＢＭＩ）変化のパーセントを示す図である。
【図８】 Ｃグループ対象の体重変化パーセントを示す図である。
【図９】 ＮＣグループ対象の体重変化パーセントを示す図である。
【図１０】 ＮＣグループ対象の除脂肪体重（ＬＢＭ）変化パーセントを示す図である。
【図１１】 Ｃグループ対象の除脂肪体重（ＬＢＭ）変化パーセントを示す図である。
【図１２】 ＮＣグループ対象の脂肪減少パーセントを示す図である。
【図１３】 Ｃグループ対象の水分変化パーセントを示す図である。
【図１４】 ＮＣグループ対象の水分変化パーセントを示す図である。
【図１５】 連続時間間隔でのＣおよびＮＣグループの自己評価食欲レベルを示す図である。
【図１６】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの自己評価エネルギーレベルを示す図である。
【図１７】 連続時間間隔でのＣおよびＮＣグループの脈拍数を示す図である。
【図１８】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの収縮期血圧を示す図である。
【図１９】 連続試験時間間隔でのＣおよびＮＣグループの拡張期血圧を示す図である。
Claims (1)
- ヒドロキシクエン酸又はその塩およびガルシノールを含有する食欲抑制用組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US22582100P | 2000-08-17 | 2000-08-17 | |
| PCT/US2001/041748 WO2002014477A2 (en) | 2000-08-17 | 2001-08-17 | Bioavailable composition of natural and synthetic hca |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008018756A Division JP2008110996A (ja) | 2000-08-17 | 2008-01-30 | 体脂肪低減用組成物 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004506657A JP2004506657A (ja) | 2004-03-04 |
| JP2004506657A5 JP2004506657A5 (ja) | 2005-06-02 |
| JP4205943B2 true JP4205943B2 (ja) | 2009-01-07 |
Family
ID=22846386
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002519605A Expired - Lifetime JP4205943B2 (ja) | 2000-08-17 | 2001-08-17 | 天然および合成ｈｃａのバイオアベイラブルな組成物 |
| JP2008018756A Pending JP2008110996A (ja) | 2000-08-17 | 2008-01-30 | 体脂肪低減用組成物 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008018756A Pending JP2008110996A (ja) | 2000-08-17 | 2008-01-30 | 体脂肪低減用組成物 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7063861B2 (ja) |
| EP (1) | EP1254209B1 (ja) |
| JP (2) | JP4205943B2 (ja) |
| AT (1) | ATE320248T1 (ja) |
| AU (1) | AU773081B2 (ja) |
| CA (1) | CA2387548A1 (ja) |
| DE (1) | DE60118019T2 (ja) |
| DK (1) | DK1254209T3 (ja) |
| ES (1) | ES2260293T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ518116A (ja) |
| PT (1) | PT1254209E (ja) |
| WO (1) | WO2002014477A2 (ja) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE320248T1 (de) * | 2000-08-17 | 2006-04-15 | Sabinsa Corp | Zusammensetzung enthaltend hydroxyzitronensäure und garcinol zur gewichtsreduzierung |
| US20030187055A1 (en) * | 2002-02-25 | 2003-10-02 | Riker Donald K. | Synergistic pharmaceutical combinations for treating obesity |
| AU2003225196A1 (en) * | 2002-04-30 | 2003-11-17 | Unibar Corporation | Hydroxycitric acid salt composition and method of making |
| US8394856B2 (en) * | 2002-07-02 | 2013-03-12 | Glykon Technologies Group, Llc | (-)-Hydroxycitric acid for controlling inflammation |
| JP2007502331A (ja) * | 2003-05-29 | 2007-02-08 | グリュコン テクノロジーズ グループ エルエルシー | （−）−ヒドロキシクエン酸を安定して制御送達するための方法および組成物 |
| US7261769B2 (en) | 2003-07-03 | 2007-08-28 | Unibar Corporation | Stabilized anthocyanin extract from Garcinia indica |
| US20050009919A1 (en) * | 2003-07-07 | 2005-01-13 | Clouatre Dallas L. | Treating cachexia and excessive catabolism with (-)-hydroxycitric acid |
| US20080207952A1 (en) * | 2003-10-09 | 2008-08-28 | Muhammed Majeed | Novel therapeutic applications of natural poly isoprenylated benzophenone derivatives as drugs/medicaments |
| US7386111B2 (en) * | 2004-02-10 | 2008-06-10 | Vonage Network Inc. | Method and apparatus for placing a long distance call based on a virtual phone number |
| WO2005117608A1 (en) | 2004-06-04 | 2005-12-15 | Horizon Science Pty Ltd | Natural sweetener |
| MX2007014586A (es) * | 2005-06-03 | 2008-02-05 | Horizon Science Pty Ltd | Sustancias que tienen propiedades de redistribucion de masa corporal. |
| MX2009002413A (es) | 2006-09-19 | 2009-03-20 | Horizon Science Pty Ltd | Extractos derivados de la caña de azucar y un proceso para su manufactura. |
| WO2008049121A2 (en) * | 2006-10-19 | 2008-04-24 | Renaissance Herbs, Inc. | Hydroxycitric acid compositions, methods of making, and therapeutic uses of same |
| EP2146708B1 (fr) * | 2007-05-04 | 2014-10-15 | Fytexia | Composition a activité lipolytique, son procédé d'obtention et utilisation de la composition. |
| JP5117762B2 (ja) * | 2007-05-18 | 2013-01-16 | 株式会社半導体エネルギー研究所 | 液晶表示装置 |
| US20090062231A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | O'mara Ann Marie | Appetite Suppressant Composition and Method of Appetite Suppression |
| US20100233306A1 (en) * | 2009-03-16 | 2010-09-16 | Sevanti Mehta | Methods and compositions for weight loss using garcinia indica fruit puree |
| RU2585245C2 (ru) * | 2010-12-30 | 2016-05-27 | Мухаммед Маджид | Гепатозащитное действие гарцинола |
| US8329743B2 (en) * | 2011-01-10 | 2012-12-11 | Sami Labs Limited | Compositions and its use in treating obesity or inducing weight loss |
| AU2012214104C1 (en) | 2011-02-08 | 2017-08-03 | Poly Gain Pte Ltd | Sugar extracts |
| JP6239622B2 (ja) | 2012-08-28 | 2017-11-29 | ザ プロダクト メーカーズ （オーストラリア） プロプライエタリー リミテッド | 抽出方法 |
| CN105722520A (zh) | 2013-08-16 | 2016-06-29 | 产品制造商（澳大利亚）有限公司 | 甘蔗衍生提取物及治疗方法 |
| US10285961B2 (en) | 2014-02-06 | 2019-05-14 | University Of Houston System | Organic acids as agents to dissolve calcium minerals in pathological calcification and uses thereof |
| KR101781365B1 (ko) * | 2016-08-31 | 2017-09-25 | 주식회사 코씨드바이오팜 | 반응표면분석법을 이용하여 가르시니아 캄보지아로부터 하이드록시 시트르산을 고수율로 추출하는 방법 |
| EP3638226A4 (en) * | 2017-06-15 | 2021-04-07 | Sami Labs Limited | POTENTIAL OF GARCINOL AGAINST OBESITY |
| WO2019212929A1 (en) * | 2018-04-30 | 2019-11-07 | Muhammed Majeed | Compositions for weight loss |
| GB2623571A (en) * | 2022-10-21 | 2024-04-24 | Mootral Innovations Ltd | Compositions for reducing methane emission |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1276253B1 (it) * | 1995-12-15 | 1997-10-27 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Composizione farmaceutica contenente l-carnitina o alcanoil l-carnitine per la prevenzione ed il trattamento di stati morbosi |
| ATE277613T1 (de) | 1995-12-26 | 2004-10-15 | Suntory Ltd | Procyanidin als den aktiven bestandteil enthaltende mittel gegen fettleibigkeit |
| JPH10203968A (ja) * | 1997-01-27 | 1998-08-04 | Munekazu Iinuma | 抗腫瘍剤 |
| JPH10265397A (ja) * | 1997-03-25 | 1998-10-06 | Toyotama Kenko Shokuhin Kk | 肥満予防剤 |
| JPH111431A (ja) * | 1997-06-10 | 1999-01-06 | Nichiyaku Kk | 肥満抑制剤 |
| JPH11139965A (ja) * | 1997-11-06 | 1999-05-25 | Kikkoman Corp | 抗腫瘍薬 |
| JP2000044468A (ja) * | 1998-07-29 | 2000-02-15 | Kikkoman Corp | リパーゼ阻害剤及び抗肥満剤又は高脂血症抑制剤 |
| JP2000072665A (ja) * | 1998-08-31 | 2000-03-07 | Kikkoman Corp | ヒアルロニダーゼ阻害剤 |
| AU5802499A (en) * | 1998-09-01 | 2000-03-21 | Amway Corporation | Diet composition and method of weight management |
| FR2790645B1 (fr) * | 1999-03-12 | 2001-06-08 | Arkopharma Laboratoires | Complement alimentaire et procede de traitement cosmetique a base d' un extrait de raisin riche en polyphenols |
| JP2000355536A (ja) * | 1999-06-10 | 2000-12-26 | Kikkoman Corp | 発癌予防薬 |
| FR2804319B1 (fr) * | 2000-01-28 | 2002-10-25 | Clarins Lab | Composition cosmetique amincissante comprenant en tant qu'agent actif un extrait de plante contenant de l'anp |
| ATE320248T1 (de) * | 2000-08-17 | 2006-04-15 | Sabinsa Corp | Zusammensetzung enthaltend hydroxyzitronensäure und garcinol zur gewichtsreduzierung |
-
2001
- 2001-08-17 AT AT01977759T patent/ATE320248T1/de active
- 2001-08-17 DK DK01977759T patent/DK1254209T3/da active
- 2001-08-17 JP JP2002519605A patent/JP4205943B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-17 EP EP01977759A patent/EP1254209B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-17 US US09/926,746 patent/US7063861B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-17 ES ES01977759T patent/ES2260293T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-17 WO PCT/US2001/041748 patent/WO2002014477A2/en active IP Right Grant
- 2001-08-17 CA CA002387548A patent/CA2387548A1/en not_active Abandoned
- 2001-08-17 PT PT01977759T patent/PT1254209E/pt unknown
- 2001-08-17 AU AU96851/01A patent/AU773081B2/en not_active Expired
- 2001-08-17 DE DE60118019T patent/DE60118019T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-17 NZ NZ518116A patent/NZ518116A/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-01-30 JP JP2008018756A patent/JP2008110996A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20020187943A1 (en) | 2002-12-12 |
| NZ518116A (en) | 2005-06-24 |
| JP2008110996A (ja) | 2008-05-15 |
| EP1254209A2 (en) | 2002-11-06 |
| PT1254209E (pt) | 2006-08-31 |
| WO2002014477A2 (en) | 2002-02-21 |
| US7063861B2 (en) | 2006-06-20 |
| DE60118019D1 (de) | 2006-05-11 |
| EP1254209A4 (en) | 2004-09-08 |
| AU773081B2 (en) | 2004-05-13 |
| EP1254209B1 (en) | 2006-03-15 |
| DE60118019T2 (de) | 2006-11-02 |
| WO2002014477A3 (en) | 2002-08-01 |
| AU9685101A (en) | 2002-02-25 |
| JP2004506657A (ja) | 2004-03-04 |
| ATE320248T1 (de) | 2006-04-15 |
| ES2260293T3 (es) | 2006-11-01 |
| CA2387548A1 (en) | 2002-02-21 |
| DK1254209T3 (da) | 2006-07-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4205943B2 (ja) | 天然および合成ｈｃａのバイオアベイラブルな組成物 | |
| WO2009029887A1 (en) | Nutritional supplement | |
| JP2016104806A (ja) | 経口紫外線抵抗性向上剤 | |
| JP2004516257A (ja) | 糖尿病性神経障害の治療に対する組成物及びその方法 | |
| Rahiman et al. | Oleuropein and oleic acid: A novel emerging dietary target for human chronic diseases | |
| US20200206157A1 (en) | Composition for use in the prevention and treatment of pathologies of the cardiovascular apparatus | |
| CA3090394A1 (en) | Methods for treating mitochondrial disorders | |
| KR20200108120A (ko) | 염증후 색소과다침착의 치료를 위한 바쿠치올 조성물 | |
| KR19990071183A (ko) | 순환기 질환의 예방 및 치료 효능을 갖는 홍경천 추출물 | |
| US20120122995A1 (en) | Anti-Inflammatory Agent and Cancer-Preventive Agent Comprising Canolol or Prodrug Thereof and Pharmaceutical, Cosmetic and Food Comprising the Same | |
| TWI666024B (zh) | 經由植物調配物之協同性組合來抑制三酸甘油酯合成之組成物及方法 | |
| JP6116869B2 (ja) | 経口紫外線抵抗性向上剤 | |
| JP4825957B2 (ja) | 抗腫瘍剤 | |
| EP3427740B1 (fr) | Nouveau traitement du cancer par une combinaison d'un dérivé phosphorique d'inositol et de chlorure de magnésium | |
| US8128969B2 (en) | Hypoglycemic composition containing acacia bark derivative | |
| Pourmousavi et al. | Potential therapeutic effects of crocin | |
| JP2011132173A (ja) | キサンチンオキシダーゼ阻害剤及び尿酸生成阻害剤 | |
| KR20190061636A (ko) | 검은콩 품종 소청자와 소청 2호 추출물을 이용한 항산화용 조성물과 항염증용 조성물 | |
| JP2018193313A (ja) | 精巣障害予防及び／又は改善剤 | |
| HU207224B (en) | Process for producing selenium-supplementing composition of bioactive vehicle |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070730 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20071026 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20071026 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20071026 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20071030 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20071105 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080130 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080317 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080616 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080827 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20080901 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20081014 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20081017 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111024 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4205943 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121024 Year of fee payment: 4 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131024 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |