DE4122668C2 - Verfahren zur Bestimmung von Metallen mit der Hilfe von Proteinen - Google Patents
Verfahren zur Bestimmung von Metallen mit der Hilfe von ProteinenInfo
- Publication number
- DE4122668C2 DE4122668C2 DE19914122668 DE4122668A DE4122668C2 DE 4122668 C2 DE4122668 C2 DE 4122668C2 DE 19914122668 DE19914122668 DE 19914122668 DE 4122668 A DE4122668 A DE 4122668A DE 4122668 C2 DE4122668 C2 DE 4122668C2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- metals
- determination
- protein
- determined
- proteins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 title claims description 22
- 239000002184 metal Substances 0.000 title claims description 22
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 title claims description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 11
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 claims description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 102000028703 oxygen binding proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108091009355 oxygen binding proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000005048 flame photometry Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011133 lead Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/18—Water
- G01N33/1813—Specific cations in water, e.g. heavy metals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von
Metallen gemäß dem Oberbegriff des Patentanspruchs 1.
Es ist bekannt, daß sich die strukturellen und/oder
funktionellen Eigenschaften metallhaltiger Proteine unter
dem Einfluß von Stoffen oder Stoffverbindungen, z. B.
Kohlenmonoxid, Kohlendioxid oder dgl. meßbar verändern.
Bisher war es jedoch nicht möglich, mit Proteinen als
Biosensoren Metallkonzentrationen in wässrigen Lösungen zu
bestimmen, wobei dies im wesentlichen auf deren begrenzte
Stabilität in z. B. nicht-physiologischen Lösungen
zurückzuführen war.
Aus der DE OS-20 57 237 ist eine Membran zum Nachweis und zur Bestimmung von
mehrwertigen Metallionen bekannt, wobei als polymere Matrix eine Membran aus
Ethylcellulose, Polyvinylchlorid, Celluloseacetat und Kollodium verwendet wird, wobei
in diese Polymermatrix ein Chelat bildendes Mittel eingebracht ist. Die Bindung der in
einer wässrigen Lösungen befindlichen Metalle durch ein Protein und die Bestimmung
der mit der Bindung der Metalle einhergehenden, veränderten funktionellen und/oder
strukturellen Eigenschaften des Proteins ist nicht entnehmbar.
Die DD 229 595 A1 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung von mit Chelatbildnern
gekoppelten Biomolekülen, wobei Säureanhydride als Chelatbildner eingesetzt werden.
Der gebildete Chelatbildner-Biomolekül-komplex wird zur In vivo- und In vitro-Diagnostik
in der Human- und Veterinärmedizin eingesetzt, wobei als zwingende Voraussetzung
Chelatbildner wie EDTA und DTPA erforderlich sind. Die Bindung von Metallen in
wässriger Lösung an Proteine und die Bestimmung der Veränderung der strukturellen
und/oder funktionellen Eigenschaften des Proteins sind nicht entnehmbar.
Aufgabe der Erfindung ist es daher, ein Verfahren zur
Bestimmung von Metallen in wässrigen Lösungen
bereitzustellen, mit dem auf einfache Weise kritische
Konzentrationen oder Schwellenwerte meßbar sind.
Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe durch die Merkmale des
Anspruchs 1 gelöst. Bevorzugte Weiterentwicklungen der
Erfindung sind den Unteransprüchen zu entnehmen.
Gemäß der Erfindung werden in einer wässrigen Lösung
befindliche Metalle, wie Calcium, Magnesium oder
insbesondere Schwermetalle durch ein in diese Lösung
eingebrachtes Protein gebunden und die dadurch veränderten
funktionellen und/oder strukturellen Eigenschaften gemessen.
Als die zu bestimmenden Schwermetalle haben sich
erfindungsgemäß toxische Schwermetalle, wie Quecksilber,
Cadmium, Chrom, Zink, Blei, Cobalt, Kupfer oder dgl.
gezeigt.
Als geeignete Lösungen haben sich vorzugsweise wässrige
Lösungen eines pH-Wertes von pH 4 bis 11, insbesondere eines
pH-Wertes von 5 bis 9 gezeigt. Vorzugsweise werden dabei
sauerstoffbindende Proteine mit Eisen oder Kupfer als
Zentralatom eingesetzt. Auf Grund seiner hohen Stabilität in
wässrigen Lösungen mit sehr unterschiedlichen pH-Werten
sowie verschiedenster Zusammensetzungen hat sich dabei
Hämocyanin als besonders geeignet erwiesen. Diese Stabilität
auch in nicht-physiologischen Lösungen, unabhängig von ihrem
Gehalt an z. B. Chelatbildnern oder Salzkonzentrationen,
ermöglicht eine sowohl kontinuierliche wie auch
diskontinuierliche Bestimmung von Konzentrationen von
Metallionen. Eine Pufferung des die Metalle, die in der
Regel in ionogener Form vorliegen, enthaltenden Systems ist
nicht notwendig, kann jedoch in Abhängigkeit vom
beabsichtigten Zweck vorgenommen werden.
Von Hämocyaninen ist bekannt, daß sie reversibel Sauerstoff
binden, der in der Regel in wässrigen Lösungen vorhanden
ist. Durch die quantitativ und/oder qualitativ zu
bestimmenden Schwermetalle und/oder Metalle werden die
strukturellen und/oder funktionellen, insbesondere die
Sauerstoffbindungseigenschaften von Hämocyanin meßbar
verändert. In wässrigen Lösungen, z. B Abwässern,
Flußwässern, aber auch in körpereigenen Flüssigkeiten, liegt
in der Regel eine ausreichend hohe Sauerstoffkonzentration
vor, um Hämocyanine im wesentlichen vollständig mit
Sauerstoff zu sättigen. Die Verdrängung proteineigener
Metallatome durch die zu bestimmenden Metalle und/oder Ionen
sowie die Bindung der zu bindenden Metalle und/oder deren
Ionen an Seitengruppen, insbesondere die Sulfhydrilgruppen
der Cysteine und/oder Cystine führt zu einer Veränderung
der spektralen Eigenschaften und/oder des
Sauerstoffbindungsvermögens. Damit sind kritische
Konzentrationen an Metallionen, insbesondere
Schwermetallionen, oder Schwellenwerte davon meßbar. Diese
Veränderungen werden mittels gängiger Analyseverfahren,
insbesondere spektroskopischer Verfahren wie Absorption,
Fluoreszenz, Streulicht oder flammenphotometrisch gemessen.
Das vorstehend beschriebene Verfahren eignet sich
ausgezeichnet zur qualitativen und/oder quantitativen
Bestimmung von im wesentlichen aller, die Eigenschaften
eines, insbesondere sauerstoffbindenden, Proteins
beeinflussender Faktoren. Es findet daher vor allem
Verwendung zur Bestimmung von Metallen und/oder
Schwermetallen im Bereich der Bestimmung von
umweltbelastenden Faktoren, aber auch im Bereich der
medizinischen Diagnostik.
Claims (8)
1. Verfahren zur Bestimmung von Metallen in wässrigen Lösungen unter Verwendung
von Proteinen, dadurch gekennzeichnet, daß Metalle durch ein in die wässrige Lösung
eingebrachtes Protein gebunden und die damit einhergehenden, veränderten
funktionellen und/oder strukturellen Eigenschaften des Proteins bestimmt werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein sauerstoffbindendes
Protein eingesetzt wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, . daß als Metalle
toxische Metalle bestimmt werden.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die
Bestimmung der Metalle in einem pH-Bereich von pH 4 bis 11 durchgeführt wird.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die
Metalle an Stelle der proteineigenen Metallatome und/oder spezifischer Seitengruppen
gebunden werden.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß als
sauerstoffbindende Proteine Hämocyanine eingesetzt werden.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß veränderte strukturelle
und/oder funktionelle Eigenschaften des Hämocyanins mittels spektroskopischer
Analyseverfahren bestimmt werden.
8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die veränderten
strukturellen und/oder funktionellen Eigenschaften des Hämocyanins kontinuierlich
und/oder akkumulativ über einen längeren Zeitraum bestimmt werden.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19914122668 DE4122668C2 (de) | 1991-07-09 | 1991-07-09 | Verfahren zur Bestimmung von Metallen mit der Hilfe von Proteinen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19914122668 DE4122668C2 (de) | 1991-07-09 | 1991-07-09 | Verfahren zur Bestimmung von Metallen mit der Hilfe von Proteinen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE4122668A1 DE4122668A1 (de) | 1993-01-14 |
| DE4122668C2 true DE4122668C2 (de) | 2002-05-16 |
Family
ID=6435744
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19914122668 Expired - Fee Related DE4122668C2 (de) | 1991-07-09 | 1991-07-09 | Verfahren zur Bestimmung von Metallen mit der Hilfe von Proteinen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE4122668C2 (de) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2057237A1 (de) * | 1969-11-20 | 1971-06-09 | Miles Lab | Membran zum Nachweis und zur Bestimmung von mehrwertigen Metallionen |
| DD229595A1 (de) * | 1984-12-14 | 1985-11-13 | Adw Ddr | Verfahren zur herstellung von mit chelatbildnern gekoppelten biomolekuelen |
-
1991
- 1991-07-09 DE DE19914122668 patent/DE4122668C2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2057237A1 (de) * | 1969-11-20 | 1971-06-09 | Miles Lab | Membran zum Nachweis und zur Bestimmung von mehrwertigen Metallionen |
| DD229595A1 (de) * | 1984-12-14 | 1985-11-13 | Adw Ddr | Verfahren zur herstellung von mit chelatbildnern gekoppelten biomolekuelen |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE4122668A1 (de) | 1993-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3688297T2 (de) | Verfahren zur nichtsegmentierten Durchflussanalyse unter Benutzung der Wechselwirkung von Strahlung mit einem in einer Durchflusszelle angebrachten festen Material. | |
| DE69221086T2 (de) | Reagenzzusammensetzungen und ihre Verwendung zur Erzeugung von kugelförmigen roten Blutzellen | |
| DE3001669C2 (de) | ||
| DE2851138A1 (de) | Faseroptische ph-sonde | |
| DE2856251A1 (de) | Fuellungen fuer indikatorraeume | |
| DE69019149T2 (de) | Verfahren zur analyse, reagenszusammensetzung sowie deren verwendung bei der glukosebestimmung. | |
| DE1944246A1 (de) | Verfahren und Vorrichtung zur quantitativen Bestimmung von chemischen Blutsubstanzen in Blutderivaten | |
| DE1240306B (de) | Mittel zum Nachweis von Harnstoff im Blut | |
| AT390145B (de) | Verfahren zur bestimmung der konzentration von in einer substanz enthaltenen stoffen, insbesondere von sauerstoff | |
| DE4122668C2 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Metallen mit der Hilfe von Proteinen | |
| WO2024083479A1 (de) | Mittel zur quantitativen entfernung von wasser aus einem gasstrom sowie vorrichtung hierfür und verwendung desselben | |
| DE4436948A1 (de) | Mittel und Verfahren zur Bestimmung von Ammoniumionen | |
| DE60112425T2 (de) | Voltammetrische Analyse unter Verwendung einer Amalgamelektrode | |
| EP0358991B1 (de) | Testvorrichtung zur optischen Bestimmung von Kationen, Anionen oder elektrisch neutralen ionogenen Spezien und Testverfahren unter Verwendung dieser Testvorrichtung | |
| DE10144436B4 (de) | Testformulierung und ihre Verwendung zur gleichzeitigen Bestimmung von Gesamteiweiß und Harnsäure in biologischen Flüssigkeiten | |
| DE4340827C1 (de) | Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung der Wirksamkeit eines Hautschutzmittels | |
| DE2318044A1 (de) | Verfahren zur analytischen bestimmung von bestandteilen in einer materialprobe wie einer biologischen fluessigkeit | |
| CH642747A5 (de) | Verfahren und reagenz zur verringerung der stoerenden wirkungen von bromid- und iodidionen bei der analyse mit ionenselektiven elektroden. | |
| EP3036539B1 (de) | Verfahren zur erweiterung des messbereiches von fotometrischen systemen | |
| DE3907164C2 (de) | ||
| DE3016618C2 (de) | Testmittel unter Verwendung von polymer gebundenen, bezüglich des Systems Peroxydase-Wasserstoffperoxyd oxydierbaren Chromogenen | |
| DE202004012479U1 (de) | Testsystem zur schnellen Bestimmung von Bence Jones Protein in biologischen Flüssigkeiten | |
| DE19858949B4 (de) | Testkit zur Bestimmung von Eiweiß in biologischen Flüssigkeiten, insbesondere im Urin | |
| EP0037905A1 (de) | Verfahren zur Bestimmung leukämischer Zellen | |
| DE102022125783A1 (de) | Verfahren zur Aufkonzentrierung mindestens einer anthropogenen Zielsubstanz in einer Probenflüssigkeit |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8127 | New person/name/address of the applicant |
Owner name: DECKER, HEINZ, PROF. DR., 55127 MAINZ, DE HEIMERL, |
|
| 8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
| D2 | Grant after examination | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |