DE3447343A1

DE3447343A1 - Oral anzuwendendes mittel

Info

Publication number: DE3447343A1
Application number: DE19843447343
Authority: DE
Inventors: Yasuo Funabashi Chiba Kikuchi; Tatsuo Hadano Kanagawa Kiyoshige; Katsuji Chiba Okuda; Ichiro Tokio/Tokyo Takazoe
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 1983-12-28
Filing date: 1984-12-24
Publication date: 1985-07-11
Also published as: JPS632922B2; GB2151923B; GB8432409D0; GB2151923A; US4689221A; JPS60142915A

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein oral anzuwendendes Mittel zur Verhinderung von periodontalen Erkrankungen durch Unterdrückung der Verbreitung von Bacteroides gingivalis im Mundraum, d. h. eines der Bakterien, die periodontale Erkrankungen verursachen.

Sehr viele Menschen leiden an periodontalen Erkrankungen, wie Gingivitis und Periodontitis. Das Auftreten dieser Erkrankung bei Erwachsenen ist besonders stark im Zunehmen begriffen. Die Verhinderung von periodontalen Erkrankungen ist ein wesentliches Problem insbesondere unter Berücksichtigung der Tatsache , daß in Zukunft der Anteil der älteren Menschen immer größer wird.

Die periodontalen Erkrankungen werden überwiegend durch Bakterien verursacht, die in der angesammelten Plaque in periodontalen Taschen vorliegen. Eine gesunde periodontale Tasche umfaßt eine überwiegende Menge grampositiver Bakterien, während die Anzahl der gramnegativen Bakterien mit dem Fortschreiten der periotontalen Erkrankung zunimmt. Bacteroides gingivalis, Fusobacterium nucleatum, Eikenella corrodens, Actionabacillus actinomycetemcomitans und dergleichen sind überwiegend als gramnegative Bakterien dieser Art festzustellen. Bei erwachsenen Patienten, die an schwerer periodontaler Erkrankung leiden, werden gramnegative Bakterien in den meisten Fällen festgestellt, wo- bei Bacteroides gingivalis mit besonders großer Häufigkeit auftritt. In vielen dieser Fälle nimmt auch der Titer des Anti-Bacteroides gingivalis-Antikörpers im Serum des Patienten zu. Weiterhin konnte gezeigt werden, daß das Animpfen eines Tiers mit Bacteroides gingivalis die periodontale Entzündung verschärft. Diese Ergebnisse weisen darauf hin, daß Bacteroides gingivalis eine wichtige RoI-

TER MEER-MÜLLER · STEINMEIST-Etf.I. . : .' -Lion:-Corp. - FAP-255

Ie in der Entwicklung der periodontalen Erkrankungen spielt.

Bacteroides gingivalis haftet aufgrund seiner PiIi und der Kapsel, die an der Oberfläche seines Bakterienkörpers vorliegen, an der periodontalen Schleimhaut, wodurch seine Ausbreitung begünstigt und der Periodontalbereich nachteilig beeinflußt wird. Zur Verhinderung von periodontalen Erkrankungen ist die Inhibierung des Befalls durch oder die Unterdrückung der Verbreitung von Bacteroides gingivalis im Mund wirksam, wobei zu diesem Zweck überwiegend Bakterizide eingesetzt werden. Bei einigen spezifischeren Methoden wird die Inhibierung des Befalls des Mundraums durch Bacteroides gingivalis unter Verwendung eines Impfstoffs versucht. Da jedoch in diesen Fällen der Bakterienkörper direkt als aktiver Impfstoff eingesetzt und bei all diesen Methoden in den lebenden menschlichen Körper inhibiert wird, ergeben sich Probleme sowohl im Hinblick auf den Effekt als auch im Hin-

20 blick auf die Toxizität.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht somit darin, ein oral anzuwendendes Mittel zu schaffen, welches einen ausgezeichneten Effekt im Hinblick auf die Verhinderung von periodontalen Erkrankungen ausübt.

Bei den Untersuchungen der Anmelderin zur Ermittlung einer sicheren Methode zur Vorbeugung von periodontalen Erkrankungen durch die effektive Unterdrückung des Befalls des Mundes durch Bacteroides gingivalis hat sich gezeigt, daß Serumantikörper oder Milchantikörper, die man durch Immunisieren von Säugern bzw. Säugetieren mit Bacteroides gingivalis oder auch dessen Pilus- oder Kapselfraktion als Antigen erhält, eine bemerkenswerte Wirkung im Hinblick auf die Unterdrückung der Ansiedlung von Bacteroides gingivalis im Mund ausübt und daß die periodonta-

TER meer · Müller . steinmeister:. . : -" .Licux-Corp. - fap-255

len Erkrankungen in wirksamer Weise dadurch verhindert werden können, daß man die oben angesprochenen Antikörper in ein oral anzuwendendes Mittel einarbeitet bzw. einmischt.
5

Gegenstand der Erfindung ist daher das oral anzuwendende Mittel gemäß Hauptanspruch. Die Unteransprüche betreffen besonders bevorzugte Ausführungsformen dieses Erfindungsgegenstandes .

Gegenstand der Erfindung ist daher ein oral anzuwendendes oder orales Mittel, welches einen Antikörper enthält, der durch Immunisieren eines Säugers bzw. Säugetieres mit mindestens einem Antigen aus der Bacteroides gingivalis und dessen Pilus- und Kapselfraktionen umfassenden Gruppe erhalten worden ist.

Da das erfindungsgemäß oral anzuwendene Mittel den oben angesprochenen Antikörper enthält, wird die Ansiedlung von Bacteroides gingivalis im Mund in wirksamer Weise verhindert, was zu einer Vorbeugung von periodontalen Erkrankungen, wie der Periodontitis, führt.

Da dieser Antikörper äußerst sicher ist, können die erfindungsgemäßen oral anzuwendenden Mittel mit großer Sicherheit angewandt werden.

Das erfindungsgemäß anzuwendende Mittel bzw. die erfindungsgemäße orale Zubereitung enthält einen Antikörper, den man dadurch erhält, daß man Säuger bzw. Säugetiere mit Bacteroides gingivalis, seinen Härchen oder seiner Kapselfraktion, welche Materialien als Antigen eingesetzt werden, immunisiert.

Als Bacteroides gingivalis, die zur Herstellung der obigen Antikörper eingesetzt werden können, kann man den von

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Lien-Corp. - FAP-255

— 6 —

dem Forsyth Dental Center in Boston gelieferten Bakterienstamm oder Bakterienstämme, die aus den fokalen Periodontitisbereichen gewonnen worden sind,und dergleichen einsetzen.

Das als Antigen verwendete Bacteroides gingivalis kann in an sich bekannter Weise bereitet werden, beispielsweise durch Züchten des Bakteriums in einem Medium, das man durch Zugabe von Hämin und Menadion zu der Todd-Hewitt-Brühe erhält, bevor man das vermehrte Bakterium wäscht und mit einer wäßrigen Formaldehydlösung (Formalin) behandelt. Die als Antigene verwendeten PiIi und Kapseln von Bacteroides gingivalis können in an sich bekannter Weise aus den Bakterien (Bacteroides gingivalis) gewonnen

15 und abgetrennt werden.

Zur Immunisierung der Säuger mit den Antigenen kann man übliche Methoden anwenden. Als Sauger kann man beispielsweise Kaninchen, Ziegen, Schafe, Pferde, Schweine etc. immunisieren.

Der Antikörper (Immunoglobulinfraktionen im Antiserum und der Milch) können unter Anwendung üblicher Antikörper-Reinigungsmethoden aus dem Antiserum und der Milch gewonnen werden, beispielsweise durch Aussalzen, durch Gelfiltration, durch Ionenaustauschchromatographie, durch Affinitätschromatograhie und dergleichen, wobei das Aussalzverfahren unter Verwendung von Ammoniumsulfat bevorzugt ist. Bei der Aussalzmethode wird das Antiserum oder die Milch mit Ammoniumsulfat gesättigt, um einen Niederschlag zu bilden, der dann gegen physiologische Salzlösung dialysiert wird, um den gereinigten Niederschlag als Antikörper zu gewinnen. Den bevorzugten Antikörper erhält man aus Pferdeantiserum sowie Rinderantiserum und Kuh-

35 milch.

TER MEER · MÜLLER · STEINMEISTERI. . I -' A^ie>P: $9^rP' "FAP-255

_ "7 mm

Erfindungsgemäß wird der Antikörper, der in dem Antiserum bzw. der Milch enthalten ist, die man durch Immunisieren des Säugers mit dem Antigen erhält, in das Mittel eingemischt. In diesem Fall kann man das Antiserum und die Milch als auch den aus dem Antiserum und der Milch abgetrennten und gereinigten Antikörper verwenden. Diese Materialien können dabei auch einzeln oder Kombination von zwei oder mehreren Produkten dieser Art eingesetzt werden.

Vorzugsweise beträgt die Menge der oben angesprochenen verabreichten Antikörper 0,0001 bis 50 g/kg/Tag, wobei der Gehalt der obigen Antikörper, bezogen auf das Gewicht des Mittels, 0,0002 bis 10 Gew.-% und vorzugsweise 0,002

15 bis 5 Gew.-% beträgt.

Das erfindungsgemäße oral anzuwendende Mittel, welches den oben angesprochenen Serum- oder Milchantikörper enthält, kann in verschiedenartiger Form, die für die An-Wendung im Mund geeignet ist, zubereitet werden, beispielsweise als Zahnpflegemittel, wie Zahnpasta, Zahnpulver und flüssige Zahnreinigungsmittel, flüssige Erfrischungsmittel einschließlich Mundwasser, feste Erfrischungsmittel einschließlich Pastillen und Kaugummi, Zahnpasta, Zahnfleischmassagesalben, Gurgeltabletten, Milchprodukte einschließlich Eiscreme, Joghurt, Babaroagrundlagen und dergleichen.

Das erfindungsgemäße oral anzuwendende Mittel kann weiterhin zusätzliche gut bekannte Bestandteile enthalten, die von der Art und der Form des jeweiligen oral anzuwendenden Mittels abhängt. Man kann irgendwelche gewünschten bekannten Bestandteile mit dem Antikörper vermischen.

Bei der Herstellung von Zahnpflegemitteln kann man ein Schleifmittel, wie beispielsweise Dicalciumphosphatdihy-

TER MEER-MÜLLER ■ STEINMEISTER ;, . ; ". Lion-Corp. - FAP-255

drat, kristallwasserfreies Dicalciumphosphat, Monocalciumphosphat, tertiäres Tricalciumphosphat, Calciumcarbonat, Calciumpyrophosphat, Siliciumdioxid-Schleifmittel, Aluminiumoxid, Aluminiumhydroxid, unlösliches Natriummetaphosphat, Trimagnesiumphosphat, Magnesiumcarbonat, Calciumsulfat, Titandioxid, Harze und dergleichen im allgemeinen in einer Menge von 5 bis 95 Gew.-% und insbesondere 15 bis 60 Gew.-% des Mittels zugeben.

Bei der Herstellung von pastenartigen Mitteln, typischerweise Zahnpasten, kann man ein Bindemittel, wie beispielsweise Natriumcarboxymethylcellulose, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylhydroxyethylcellulose, Hydroxyethylcellulose, Natriumalginat, Carrageenan, Gummi arabicum, Tragantgummi, Karayagummi, Polyvinylalkohol, Natriumpolyacrylat, Carboxyvinylpolymere, Polyvinylpyrrolidon und dergleichen in einer Menge im allgemeinen von 0,3 bis 5 Gew.-% einsetzen.

Bei der Herstellung pastenartiger und flüssiger oral anzuwendender Mittel, wie typischerweise von Zahnpasten und Mundwässern, kann man ein Befeuchtungsmittel, wie beispielsweise Polyethylenglykol, Ethylenglkyol, Sorbit, Glycerin, Propylenglykol, 1,3-Butylenglykol, Xylit, Maltit, Lactit und dergleichen im allgemeinen in einer Menge von 10 bis 70 Gew.-% zumischen.

Neben den oben angesprochenen Bestandteilen kann man oberflächenaktive Mittel, wie wasserlösliche Salze von Alkyl-Sulfaten mit 8 bis 18 Kohlenstoffatomen, wie Natriumlaurat und Natriummyristat, Natriumsalze höhermolekularer Fettsäuren, wasserlösliche Salze von Sulfonaten von Monoglyceriden höherer Fettsäuren mit 10 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Fettsäuregruppe, wie Natriumlaurylmonoglyceridsulfonat und Natriumkokosnußmonoglyceridsulfonat, Natriummonoglyceridmonosulfat höherer Fettsäuren, Olefinsul-

TER MEER -MÜLLER · STEINMEIST-ERI. - I ," Iii^OlGorp. -FAP-255

— Q —

fonate, Paraffinsulfonate, Natrium-N-methyl-N-palmitoyltaurat, Natrium-N-lauroyl-sarcosinat, Natrium-N-lauroylß-alaninat, Stearylmonoglycerid, Alkoylethanolamide, wie Lauroylmonoethanolamid und Lauroyldiethanolamid, Saccharose-fettsäureester mit 12 bis 18 Kohlenstoffatomen im Fettsäurerest, wie Saccharosemonolaurat und -dilaurat, Lactosefettsäureester, Lactitfettsäureester, Maltitfettsäureester, Stearinsäuremonoglycerid, Polyoxyethylensorbitanmonolaurat, polyethoxyliertes gehärtetes Rizinusöl, Kondensate aus Sorbitanmonostearat und etwa 60 Mol Ethylenglykol, Kondensate aus Ethylenoxid und Propylenoxid und deren Derivate, wie Polyoxyethylen-Polyoxypropylen-Monolaurylester, Betain und aminosäureartige amphotere oberflächenaktive Mittel in Mengen von 0 bis 10, vorzugsweise 0,1 bis 5 und noch bevorzugter 1 bis 2,5 Gew.-%, bezogen auf das Mittel, einmischen. Man kann auch Aromastoffe, wie ätherische Öle, einschließlich Pfefferminzöl und Krauseminzeöl, sowie Geruchsstoffe, wie Jt-Menthol, Carvon, Eugenol und Anethol, Süßstoffe, wie Natriumsaccharinat, Steviosid, Neohesperidyldihydrochalcon, Glycyrrhizin, Peril lartin, p-Methoxyzimtsäurealdehyd und Konservierungsmittel und dergleichen in wirksamen Mengen zugeben.

Erfindungsgemäß kann man auch wirksame Bestandteile, wie Sorbinsäure, Alexidin, Hinokitiol, Cetylpyridiniumchlorid, Alkylglycin, Alkyldiaminoethylglycinat, Allantoin, £-Aminocapronsäure, Tranexamsäure, Azulen, Vitamin E,. wasserlösliche primäre oder sekundäre Phosphate, quartäre Ammoniumverbindungen, Natriumchlorid, Enzyme, wie Dextranase, Mutanase, lösende Enzyme und Protease, Fluoridverbindungen, wie Natriumfluorid, Zinn(II)-fluorid und Natriummonofluorophosphat, Chlorhexidin und dessen Salze, Bacteriocin, GIucosyltransferaseinhibitor und weitere Wirkstoffe in effektiven Mengen zusetzen.
35

Andere Arten von Mitteln kann man auch dadurch herstellen,

TERMEER-MULLER-STEINMEIoTER₁.. "; ' ■ Li Oil :Cp„rp. - FAP-255

daß man irgendwelche gewünschten üblichen Bestandteile auswählt und in üblicher Weise vermischt.

Beispiele der anderen Bestandteile für verschiedenartige Formen des Mittels ergeben sich aus den folgenden Beispielen.

Die pastenartigen und flüssigen oral anzuwendenden Mittel besitzen im allgemeinen einen pH-Wert von 5 bis 10, wobei die Erfindung hierauf nicht beschränkt ist.

Das erfindungsgemäße oral anzuwendende Mittel kann aufgrund des Einmischens des oben angesprochenen Serum- oder Milchantikörpers in wirksamer Weise periodontalen Erkrankungen vorbeugen, und zwar durch effektive Verhinderung der Ausbreitung von Bacteroides gingivalis im Mund.

Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung.
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Beispiel 1

(1) Herstellung der Antigene

Nachdem man Bacteroides gingivalis 381 in einer Hämin und Menadion enthaltenden Todd-Hewitt-Brühe während zwei Tagen gezüchtet hat, trennt man die gezüchteten Bakterien durch Zentrifugieren bei 800 min während 15 Minuten ab. Die in dieser Weise abgetrennten Bakterien werden mit einem 5 mM Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 7,4 gewaschen und dann in 0,5 %-iger wäßriger Formaldehydlösung über Nacht behandelt, so daß man das ganzzellige Antigen erhält.

Zur Herstellung des Pilus-Antigens gewinnt man die in der obigen Weise während zwei Tagen gezüchteten Bacteroides gingivalis, wäscht sie, verrührt die gewaschenen Bakterien vor-

TER MEER -MÜLLER ■ STEINMEISTER.;. *; -" Liori ^Gorp. - FAP-255

- 11 -

sichtig während zwei Tagen in Glaskügelchen enthaltendem destilliertem Wasser, wonach man sie dreimal durch eine Injektionsnadel Nr. 25 (0,5 χ 25 mm) führt, um die PiIi von den Bakterien abzutrennen. Die in dieser Weise erhaltene Lösung wird während 15 Minuten bei 8000 min zentrifugiert, um die Bakterien von den in der überstehenden Flüssigkeit enthaltenen PiIi abzutrennen, wonach die über stehende Flüssigkeit gegen destilliertes Wasser dialysiert und dann zur Gewinnung des Pilus-Antigens gefriergetrocknet wird. Man erzielt eine Ausbeute von 0,0042 %, bezogen auf das Naßgewicht der Bakterien.

Zur Gewinnung des Kapsel-Antigens gewinnt man die Bakterien in der oben beschriebenen Weise, läßt sich mit einem Phosphatpuffer (0,05 M, pH-Wert = 7,4), der 0,01 M Ethylendiamintetraessigsäure enthält, während 30 Minuten bei 60⁰C reagieren, wonach man die gemischte Lösung dreimal durch eine Injektionsnadel Nr. 25 führt, um die Kapsel von dem Bakterium abzutrennen. Anschließend entfernt man die Bakterien durch Zentrifugieren der in dieser Weise erhaltenen Lösung während 15 Minuten bei 8000 min unter Bildung einer überstehenden Flüssigkeit, die dann während 2 Stunden einer ültrazentrifugation bei 40000 min unterzogen wird, wonach man eine Abscheidung erhält, die als Kapsel-Antigen eingesetzt wird. Die Ausbeute beträgt 0,09 %, bezogen auf das Naßgewicht der Bakterien.

(2) Herstellung der Antikörper

Man erhält Serum-Antikörper durch Immunisieren von Kaninchen oder trächtigen Schafen. Man bewirkt die Immunisierung unter Anwendung der üblicherweise angewandten Technik, wobei die anfängliche Immunisierung der Kaninchen mit dem ganzzelligen Antigen durch subkutanes Injizieren einer Mischung erfolgt, die aus dem vollständigen Freund¹-sehen Adjuvans und 20 mg Bakterienzellen besteht. Nach der

TER MEER · MÜLLER . STEINMEISTER - - : LlOJl Corp. - FAP-255

subkutanen Injektion injiziert man viermal alle 7 Tage jeweils 10 mg Bakterienzellen in die Ohrvene des Tiers, wobei man insgesamt 4 0 mg verabreicht. Das erhaltene Antiserum wird zweimal einem Aussalzvorgang in 50 %-iger Ammoniumsulfatlösung unterworfen, bevor man es zur Gewinnung eines Antikörperpräparats gegen destilliertes Wasser dialysiert. Die Antikörperpräparate aus dem Pilus-Antigen und dem Kapsel-Antigen werden in der gleichen Weise erzeugt.
10

Man erhält die Milch-Antikörper durch Immunisieren einer Ziege, die seit zwei Monaten trächtig ist, mit dem ganzen Bakterienzellen-Antigen. Die anfängliche Immunisierung der trächtigen Ziege erfolgt durch subkutane Injektion einer Mischung aus dem vollständigen Freund'sehen Adjuvans und 500 mg Bakterienzellen, wobei weitere subkutane Injektionen dieser Art in gleicher Weise 21 Tage und 28 Tage nach der anfänglichen Immunisierung durchgeführt werden. Zur Steigerung der Produktion der Antikörper in der Milch verabreicht man 500 mg Bakterienzellen auf oralem Wege 24 Tage nach der anfänglichen Immunisierungsbehandlung. Man sammelt die Milch täglich nach der Verabreichung. Die gesammelte Milch wird während einer Stunde bei 15000 min zentrifugiert, worauf die Zwischenschicht aufgefangen wird. Die in dieser Weise gesammelte Schicht wird zweimal einem Aussalzvorgang in einer 50 %-igen Ammoniumsulfatlösung unterworfen, bevor man es zur Gewinnung des Ziegenmilch-Antikörperpräparats gegen destilliertes Wasser dialysiert.
30

(3) Bewertung der Antikörper

1. Verstärkungseffekt der Kaninchenserum-Antikörper auf

das phagozytische Verhalten der Makrophagen 35

Der Verstärkungseffekt der Antikörper auf die phagozyti-

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sehe Fähigkeit gegenüber Bacteroides gingivalis wird unter Verwendung von Meerschweinchen-Peritonealmakrophagen untersucht.

Man vermischt eine Hämin und Menadion enthaltende Hank'sehe Lösung mit Meerschweinchen-Peritonealmakrophagen, die man 5 Tage nach der Reizung mit Austern-Glykogen erzeugt hat, während 2 Tage gezüchteten Bacteroides gingivalis und den verschiedenen Arten von Kaninchen-Antikörpern (Endkonzentration =10 %), worauf man die Mischung bei 37°C in einer anaeroben Schüttelkultur züchtet. Anschließend bestimmt man die Anzahl der lebenden Bakterien 0, 0,5, 1,
2 und 3 Stunden später. Bei diesem Experiment gibt man
3,4 χ 10 Makrophagen/ml zu und beobachtet 3 Stunden später eine Überlebensrate von 95 bis 97 %. Die hierbei erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle I zusammengestellt.

TABELLE I

	0	Stunden	X	10	5	0,5	Stunden	6	X	10	5	1	Stunde	X	10	5	2	Stunden	X	10	4	3	Stunden	X	10⁴
Phosphatpuffer (Kontrolle)	2	,7	X	10	5	Ir	7	X	10	4	1	,5	X	10	3	4	,8	X	10	3	1	,7	X	10
Anti-Ganzzellen- Antikörper	2	,1	X	10	5	5,	2	X	10	4	6	,8	X	10	3	1	,0	X	10	3	6	,8	X	10²
Anti-Pili-Antikörper	1	,5	X	10	5	If	4	X	10	4	5	,5	X	10	4	3	,5	X	10	4	3	,0	X	10³
Anti-Kapsel-Antikör	2	,4				8,					1	,8				1	,1				1	,5
per

CO 4^ CO

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Aus den obigen Ergebnissen der Tabelle I ist zu erkennen, daß die oben angesprochenen verschiedenartigen Antikörper eine verstärkende Wirkung auf .die phagozytische Fähigkeit von Makrophagen im Vergleich zu dem als Kontrolle eingesetzten Phosphatpuffer (0,5 M, pH-Wert = 7,4) ausüben.

2. Wirkung der Kaninchenserum-Antikörper auf die Inhibierung der Verbreitung von Bacteroides gingivalis im Hamstermaul

Man suspendiert während 3 Tagen gezüchtete Bacteroides gingivalis in einem 1 mM Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 7,2 in der Weise, daß man eine Suspension mit einer Trübung von 1,0 (OD _ = 1,0) erhält. Die in dieser Weise erhaltene Suspension vermischt man mit jedem der oben angesprochenen verschiedenartigen Antikörper in einem Mischungsverhältnis von 1:1, wonach man die Mischung während 30 Minuten bei 37⁰C reagieren läßt. In der Kontrollgruppe läßt man die Suspension in der oben beschriebenen

20 Weise mit Phosphatpuffer reagieren.

Nach dem Abbinden des ersten Unterkieferbackenzahns eines Goldhamsters mit einem Baumwollfaden (Nr. 50) injiziert man 0,1 ml der in der obigen Weise erhaltenen Reaktionslösung in den Mund des Tieres und jeweils 0,1 ml der gleichen Reaktionslösung in die rechte bzw. linke Backentasche. Die Behandlungen mit der obigen Reaktionslösung werden während drei aufeinanderfolgender. Tage fortgesetzt, worauf der zum Abbinden verwendete Faden eine Woche nach der letzten Injektion entfernt wird. Dann bestimmt man die Anzahl der Bacteroides gingivalis und die Anzahl der anaeroben Bakterien, die in dem Faden enthalten sind. Während dieser Untersuchung, bei der man jeweils Gruppen von neun Tieren verwendet, versorgt man die Tiere mit dem Futter 2000 mit einem hohen Zuckergehalt und ad libitum mit Leitungswasser als Trinkwasser. Die hierbei erhaltenen Ergeb-

TER MEER ■ MÜLLER · STEINMEIÖTlSR " ' : . Lion Corp.-FAP-255

nisse sind in der Tabelle II angegeben.

Wie aus den Ergebnissen der Tabelle II deutlich hervorgeht, ist zu beobachten, daß die verschiedenartigen Antikörper der oben angegebenen Art in signifikanter Weise die Ansiedlung von Baüteroides gingivalis im Mund im Vergleich zu der Kontrollgruppe inhibieren.

3. Wirkung von Ziegen-Antikörpern auf die Inhibierung der Ansiedlung von Bacteroides gingivalis im Mund

Man wendet die oben beschriebene Verfahrensweise auch bei diesem Experiment an. Dabei verwendet man als Probe Anti-Ganzzellen-Milch-Antikörper von Ziegen. Die hierbei erhaltenen Ergebnisse sind in der Tabelle III angegeben.

Wie aus den Ergebnissen der Tabelle III hervorgeht, ist festzustellen, daß die Ziegenmilch-Antikörper in signifikanter Weise die Ansiedlung von Bacteroides gingivalis im Mund im Vergleich zu der Kontrollgruppe inhibieren.

TABELLE II

	Anzahl der Tiere, bei denen B. gingivalis festgestellt werden kann	Anzahl von B. gingivalis /	/Anzahl von anaeroben Bakterien χ 100
Phosphatpuffer (Kontrolle)	9/9	4,06 +	0,77
Anti-Ganzze11en-Antikörper	8/9	1,10 +	0,41 **
Anti-PiIi-Antikörper	9/9	1,03 +	0,38 **
Anti-Kapsel-Antikörper	9/9	0,79 +	0,26 **

**: P < 0,01

TABELLE III

Anzahl der Tiere, bei denen B. gingivalis festgestellt werden kann Anzahl von B.
gingivalis

''Anzahl von anaeroben Bakterien χ 100

Phosphatpuffer (Kontrolle

Ziegen-Anti-Ganzzellen-Mi Ich-Antikörper

8/9 4/10 0,50 + 0,17
0,04 + 0,03 *

*: P<0,05

CO-

-J

Ca>

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- 19

4. Wirkung von Kaninchenserum-Antikörpern auf die Inhibierung der Ansammlung von Bacteroides gingivalis im Hamstermaul bei einer Behandlung durch Bürsten

Man suspendiert Bacteroides gingivalis, die man während 3 Tagen gezüchtet hat, in 1 mM Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 7,2 in der Weise, daß man eine Suspension mit einer Trübung von 1,0 (OD₅₅₀ = 1,0) erhält. Man impft das Maul eines Goldhamsters, dessen rechter und linker erster Unterkieferbackenzahn mit Baumwollfäden abgebunden worden sind (Nr. 50) mit 0,1 ml der in dieser Weise erhaltenen Suspension an. 30 Minuten nach dem Animpfen injiziert man 0,1 ml der jeweiligen Mischung der Antikörperart und Glycerin bzw. 0,1 ml einer äquivalenten Mischung aus Wasser und Glycerin in das Maul und bürstet die bukkalen und lingualen Oberflächen der Unterkieferbackenzähne 20-mal mit einer Zwischenzahnbürste. Man wiederholt diese Maßnahme während drei aufeinanderfolgender Tage, wonach lediglich der Bürstvorgang zweimal täglich wiederholt wird. Eine Woehe bzw. drei Wochen nach dem letzten Impfvorgang entfernt man die zum Abbinden verwendeten Fäden. Man bestimmt die Anzahl der Bacterpides gingivalis und die Anzahl der anaeroben Bakterien, die in dem zum Abbinden verwendeten Faden enthalten sind. Während dieses Experiments versorgt man die Tiere mit dem Futter 2000 mit einem hohen Saccharosegehalt und versorgt sie frei mit Leitungswasser als Trinkwasser. Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in der Tabelle IV zusammengestellt.

Wie deutlich aus den Ergebnissen der Tabelle IV hervorgeht, inhibieren die oben angesprochenen verschiedenartigen Antikörper in signifikanter Weise im Vergleich zu der Kontrollgruppe die Ansiedlung von Bacteroides gingivalis im Maul bzw. dem Mund.

TABELLE IV

	Eine Woche nach	8/8	dem Animpfen	Drei Wochen nach	6/7	dem Animpfen
	Anzahl der Tiere, in		Anzahl von / Anzahl der	Anzahl der Tiere, in		Anzahl von /Anzahl der
	denen B. gingivalis	6/8	B. gingiva- / anaeroben χ 100	denen B. gingivalis	1/8	B. gingiva-/ anaeroben χ 100
	festgestellt werden		lis / Bakterien	festgestellt werden		lis / Bakterien
	<ann	4/8		kann	0/8
Wasser (Kontrolle)	6/8	0,305 + 0,108	0/8	0,150 + 0,047
Anti-Ganzzel
len-Antikör	0,051„+ 0,018	0,0004
per
Anti-Pili- Antikörper	0,052 + 0,017	0
Anti-Kapsel- Antikörper	0,031 + 0,024	0

TER MEER · MÖLLER . STEINMBSTER

-"2T -"

Beispiel 2 Zahnpasta

Dicalciumphosphatdihydrat 50,0 %

Glycerin 20,0

Natriumcarboxymethylcellulose 1,0

Natriumlaurylsulfat 1,5

Natriumlaurylsarcosinat 0,5

Aromastoff 1,0

Natriumsaccharin 0,1

Dextranase 0,01

Wasser Rest

100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 % oder 0,2 % Ziegen-Anti-Ganzzellen-Serum und 0,01 % Chlorhexidingluconat.

20 Beispiel 3 Zahnpasta

Dicalciumphosphatdihydrat 50,0 %

Sorbit 10,0

Glycerin 10,0

Natriumcarboxymethylcellulose 1,0

Natriumlaurylsulfat 2,0

Aromastoff 1,0

Natriumsaccharin 0,1

Ethanol 2,0

Mutanase 0,1

Wasser Rest

100,0 % 35

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 %

TER MEER · MÜLLER · STEINMEISTER " :: - T ' ¹T¹⁰¹¹. '^CorP · ^{FAP 255}

Rinder-Anti-Kapselserum und 0,3 % Natriummonofluorophosphat oder 0,01 % Chlorhexidingluconat oder 0,05 % des lösenden Enzyms oder 0,02 % Bacteriocin.

Beispiel 4
Zahnpasta

Calciumcarbonat	50,0 %
Glycerin	20,0
Carrageenan	0,5
Natriumcarboxymethylcellulose	1,0
Lauroyldiethanolamid	1,0
Saccharosemonolaurat	2,0
Aromastoff	1,0
Natriumsaccharin	0,1
Wasser	Rest

100,0 %

20 Die oben angegebenen Bestandteile vermischt man mit 0,05 Rinder-Anti-Ganzzellen-Milch-Antikörpern, 0,005 % Chlorhexidingluconat und 0,05 % Tranexamsäure._f

Beispiel 5
25

Zahnpasta

Dicalciumphosphatdxhydrat 50,0 %

Glycerin 20,0 Natriumcarboxymethylcellulose 2,0

Natriumlaurylsulfat 2,0

Aromastoff 1,0

Natriumsaccharin 0,1

Wasser Rest

100,0 %

TER MEER - MÜLLER . STEINMEISTER

"· " ftioil..CÖirp. -FAP-255

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 % Pferde-Anti-Pilusserum und 0,01 % Chlorhexidingluconat oder 0,05 % £-Aminocapronsäure.

5 Beispiel 6 Zahnpasta

Kieselsäureanhydrid	30,0 %
Glycerin	30,0
Sorbit	20,0
Natriumcarboxymethylcellulose	IfO
Natriumlaurylsulfat	2,0
Aromastoff	IrO
Natriumsaccharin	0,1
Ethanol	2,0
Wasser	Rest
	100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 % Schaf—Anti-Kapselserum und 0,1 % Natriumfluorid oder 0,01 % Chlorhexidingluconat oder_?0,1 % eines lösenden Enzyms oder 0,01 % Bacteriocin.

25 Beispiel 7 Zahnpuder

Dicalciumphosphatdxhydrat 50,0 %

Calciumcarbonat 30,0

Glycerin 10,0

d-Olefinsulfonat 1,0

Aromastoff 1,0

Natriumsaccharin 0,1

Dextran 0,5

Wasser Rest

100,0 %

TER MEER · MÜLLER . STEINMEISTER ' - . Lion Corp. - FAP-255

-'24 -

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 % Schaf-Anti-Pilusserum und 0,01 % Chlorhexidingluconat oder 0,05 % eines lösenden Enzyms oder 0,001 % Bacteriocin.

Beispiel 8 Flüssiges Zahnpflegemittel

Natriumpolyacrylat 50,0 %

Glycerin 30,0

Aromastoff 0,9

Natriumsaccharin 0,1

Ethanol 3,0

Linolsäure 0,05

Wasser Rest

100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,01 % Ziegen-Anti-Ganzzellen-Milch-Antikörpern und 0,05 % Chlor-20 hexidingluconat oder 0,05 % eines lösenden Enzyms oder 0,001 % Bacteriocin.

Beispiel 9
Mundspülunq

Ethanol 20,0 % Aromastoff 1,0

Natriumsaccharin 0,05

Lauroyldiethanolamid 0,3

Wasser Rest

100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 % 35 Ziegen-Anti-Kapselserum und 0,01 % Chlorhexidingluconat.

TER MEER · MÜLLER · STEINMEISTER " .^:;.;_ "; * ^¹⁰?¹-??³;?' ~ ^FAP~²⁵⁵

-"2*5 -

Beispiel 10
Gurgeltablette

Natriumhydrogencarbonat	54,0 %
Dinatriumphosphat	10,0
Polyethylenglycol	3,0
Citronensäure	17,3
Natriumsulfat (wasserfrei)	13,6
Aromastoff	2,0
Ölsäure	0,1

Ölsäure

100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 15 Kaninchen-Anti-Ganzzellen-Serum und 0,05 % Chlorhexidingluconat oder 0,05 % eines lösenden Enzyms oder 0,01 %
Bacteriocin.

Beispiel 11
20

Zahnfleischmassagecreme

Weiße Vaseline	8,0 %
Propylenglykol	4,0
Stearylalkohol	8,0
Polyethylenglykol 4000	25,0
Polyethylenglykol 400	37,0
Saccharosemonostearat	0,5
Wasser	Rest

100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,5 % Rinder-Anti-Kapselserum und 0,01 % Chlorhexidingluconat oder 0,1 % Toxopherylacetat.
35

TER MEER · MÜLLER ■ STEINMEISTER

Lion Cörp. - FAP-255

Beispiel

12

Kaugummi

Gummigrundlage

Calciumcarbonat

Stärkesirup

Zucker

Saccharosepaimitat

Fructose

Maltose

Aromastoff

44,0 %

2,0 15,0 30,0 1,0 4,0 3,0

1,0 100,0 %

15 Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,1 % Rinder-Anti-Ganzzellen-Milch-Antikörpern und 0,01 % Chlorhexidingluconat oder 0,1 % eines lösenden Enzyms oder
0,01 % Bacteriocin.

Beispiel Lutschtablette

Gummi arabicum

Glucose

Gelatine

Aromastoff

i-Menthol

Krauseminzeöl

Natriumascorbat

Wasser

6,0 % 72,0 3,0 0,2 0,1 0,1 0,1 Rest 100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,05 ' 35 Ziegen-Anti-Pilusserum und 0,01 % Chlorhexidingluconat

oder 0,05 % eines lösenden Enzyms oder 0,01 % Bacteriocin

TERMEER-MaLLER-STEINMEISTER" -~ - '- " ί,ίόη - COJrp. - FAP-255

oder 0,05 % Tocopherylnicotinat. Beispiel 14
Zahnpasta

Polyoxyethylenmonostearat	2,0 % 2,0 %
Sorbitanmonooleat	2,0
Cetylalkohol	2,0
Palmity!alkohol	3,0
Propylenglykol	15,0
Natriumcarboxymethylcellulose	5,0
Gelatine	1,0
Natriumsaccharin	0,2
Pfefferminzöl	0,5
Krauseminzeöl	0,5
Lysozymchlorid	5000 Einheiten/g
Wasser	Rest

100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,05 % oder 0,1 % Pferde-Anti-Kapselserum und 0,1 % Zinn(II)-fluorid oder 0,01 % Chlorhexidinhydrochlorid oder 0,05 % eines lösenden Enzyms oder 0,01 % Bacteriocin.

Beispiel 5

Zahnpasta

Glycerylmonolaurat 3,0 %

Oleylalkohol 5,0

Polyethylenglykol 15,0

Weiße Vaseline 3,0

N-Palmitoylmononatriumglutamat 0,5

Hydroxyethylcellulose 5,0

Tocopherylacetat 0,1

TER MEER · MÜLLER · STEINMEISTER " '- ~. . ". ' Lior. Corp. - FAP-255

Natriumsaccharin	0,2 %
Japanisches Pfefferminzöl	0,7
Carvon	0,5
Anethol	0,3
Eugenol	0,1
Wasser	Rest
	100,0 %

Man vermischt die oben angegebenen Bestandteile mit 0,025 10 oder 0,05 % Kaninchen-Anti-Pilusserum und 0,01 % Chlorhexidinhydrochlorid und 0,1 % O-Glycyrrhizinsäure.

Beispiel 16
15 Eiscreme

Sahne (Fettgehalt	50 %)	16,84 %
Milch (Fettgehalt	3,7 %)*	42,65
Magermi1chpulver		24,24
Zucker		11,25
Maissirup		4,65
■ Stabilisator		0,35
		100,0 %

25 * Enthält 0,5 % Rinder-Anti-Pilus-Muttermilch, Beispiel 17

Eiscreme
30

Sahne (Fettgehalt	40 %)	31,54 %
Milch (Fettgehalt	3,7 %)**	37,16
Magermilchpulver		15,08
Zucker		11,25
Maissirup		4,67
Stabilisator		0,30

Stabilisator

100,0 %

TER MEER · MÖLLER · STEINMEISTER " _^::_:. . '; " _ΐ.χοΐ>-0ό^ρ. - FAP-355

**Enthält 5 % Rinder-Anti-Ganzzellen-Milch-Antikörper Beispiel 18
5 Joghurt

Magermilch 320 kg

Zuckerhaltige Trockenmilch*** 56 kg

Zucker 23 kg 10

Man fermentiert die oben angegebenen Bestandteile in üblicher Weise.

***Enthält 10 % Rinder-Anti-Pilus-Muttermilch. 15

Beispiel 19

Barbaroagrundlage

Milch**** 375 ml

Zucker 60 g

Vanilleschote eine >

Eigelb fünf

Gelatine 20 g

Frische Sahne 75 ml

****Enthält 5 % Rinder-Anti-Kapsel-Muttermilch

Claims

Priorität: 28. Dezember 1983, Japan,Nr. 58-247930 (P) Patentansprüche

1. Oral anzuwendendes Mittel, enthaltend einen Antikörper, der durch Immunisieren eines Säugers mit mindestens einem Antigen aus der Bacteroides gingivalis und dessen Pilus- und Kapselfraktionen umfassenden Gruppe erhalten worden ist.

2. Oral anzuwendendes Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß es den Antikörper enthält, der aus einem Antiserum oder Milch abgetrennt worden ist, das bzw. die durch Immunisieren des Säugers mit dem Antigen erhalten worden ist.

TER MEER · MÜLLER · STEINMEISTER ;. . ': .^: ,Liüh Corp. - FAP-255

3. Oral anzuwendendes Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß es als Antikörper ein
Antiserum oder die Milch enthält, das bzw. die durch Immunisieren des Säugers mit dem Antigen erhalten worden

5 ist.

4. Oral anzuwendendes Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß die eingemischte Menge des Antikörpers im Bereich von 0,0002 bis 10 Gew.-%, be-

10 zogen auf das Mittel, beträgt.