JPS6075500A - バクテロイデス・ジンジバリスに対するモノクロ−ナル抗体 - Google Patents
バクテロイデス・ジンジバリスに対するモノクロ−ナル抗体Info
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- JPS6075500A JPS6075500A JP18385883A JP18385883A JPS6075500A JP S6075500 A JPS6075500 A JP S6075500A JP 18385883 A JP18385883 A JP 18385883A JP 18385883 A JP18385883 A JP 18385883A JP S6075500 A JPS6075500 A JP S6075500A
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- gingivalis
- hybridoma
- cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はバクテロイデス・ジンジバリス（Ｂ ａｃｔｅ
ｒｏｔｄｅｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、以下Ｂ。
ｒｏｔｄｅｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、以下Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓと称する）に対する新規モノクロ
ーナル抗体に関する。
ーナル抗体に関する。
Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓは、成人の重症歯周炎、い
わゆる歯槽ＩＩｌ症病巣局所で圧倒的多数を占めており
、最近において成人歯周症の有力な原因菌として注目さ
れているものである。
わゆる歯槽ＩＩｌ症病巣局所で圧倒的多数を占めており
、最近において成人歯周症の有力な原因菌として注目さ
れているものである。
−１−
従来、血液平板−Ｆで黒色集落を形成する偏性嫌気性桿
菌は、全てバクテロイデス・メラニノジニカス（Ｂａｃ
ｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
、以下ｓ 、 ｍｅ＋ａｎ＋ｎｏｇｅｎｔｃｕｓど称す
る）として一括されていたが、歯周病原因菌としてはＢ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが重要であり、本菌種を他の
黒色集落形成性バクテロイデスと区別する必要がある。
菌は、全てバクテロイデス・メラニノジニカス（Ｂａｃ
ｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
、以下ｓ 、 ｍｅ＋ａｎ＋ｎｏｇｅｎｔｃｕｓど称す
る）として一括されていたが、歯周病原因菌としてはＢ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが重要であり、本菌種を他の
黒色集落形成性バクテロイデスと区別する必要がある。
しかし、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他の黒色集落形成性のバクテロ
イデスと区別することは容易でない。即ち、成人の歯周
病がＢ、 ｇｉｎｏｉｖａｌｉｓの感染によって発病し
、進行することが明確になって以来、歯周病の予防や治
療及びその予後の状態を知るためにも同菌種の動態を知
ることが大切になっているが、Ｂ。
イデスと区別することは容易でない。即ち、成人の歯周
病がＢ、 ｇｉｎｏｉｖａｌｉｓの感染によって発病し
、進行することが明確になって以来、歯周病の予防や治
療及びその予後の状態を知るためにも同菌種の動態を知
ることが大切になっているが、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの病巣での存在や菌数を知るには
嫌気的培養や菌の２０数項目にも亘る性状検査が必要と
されているため、 Ｂ、 Ｕｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態
を調べる場合に非常に困難な問題が多いものである。
嫌気的培養や菌の２０数項目にも亘る性状検査が必要と
されているため、 Ｂ、 Ｕｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態
を調べる場合に非常に困難な問題が多いものである。
この場合、本菌種を免疫したウサギ抗血清を用いてＢ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を調べる方法も考えられ
るが、本菌種に対する免疫血清はＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの動態を調べる方法も考えられ
るが、本菌種に対する免疫血清はＢ。
−２−
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対し必ずしも特異性の点で十分
でない上、菌の同定や病巣月利での割合を知ろうとして
もその希釈や′ａ度の決定までには様々な検討が必要で
、煩雑である。
でない上、菌の同定や病巣月利での割合を知ろうとして
もその希釈や′ａ度の決定までには様々な検討が必要で
、煩雑である。
このため、Ｂ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対して特異性が
高く、しかも力価を損なわない抗体が望まれ、これを用
いて簡単かつ確実にＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｌｓを同定
し、その動態を知る方法が望まれる。
高く、しかも力価を損なわない抗体が望まれ、これを用
いて簡単かつ確実にＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｌｓを同定
し、その動態を知る方法が望まれる。
本発明者らは、上記事情に鑑み、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対し特異性が高く、しかも力価
を損なわない抗体につき鋭意研究を行４にった結果、Ｂ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞とミエローマ
細胞とを融合することによって得られるハイブリドーマ
からＢ、 ｇｉＢｔｖａｌｉｓのモノクローナル抗体が
産生されると共に、このモノクローナル抗体がＢ。
を損なわない抗体につき鋭意研究を行４にった結果、Ｂ
、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞とミエローマ
細胞とを融合することによって得られるハイブリドーマ
からＢ、 ｇｉＢｔｖａｌｉｓのモノクローナル抗体が
産生されると共に、このモノクローナル抗体がＢ。
ｇｔｎｇｉｖａｌｉｓに対する特異性が高く、同菌種の
同定に有効に使用し得ることを知見し、本発明をなずに
至ったものである。
同定に有効に使用し得ることを知見し、本発明をなずに
至ったものである。
従って、本発明はＢ、 ｇｔｎｇｉｖａｌｉｓに対りる
モノクローナル抗体を提供するものである。
モノクローナル抗体を提供するものである。
−３−
以下、本発明につぎ更に詳しく説明する。
本発明のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクロ
ーナル抗体は、３． ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性
細胞とミエローマ細胞とを融合することによって１ｑら
れるＢ。
ーナル抗体は、３． ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性
細胞とミエローマ細胞とを融合することによって１ｑら
れるＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクローナル抗体産生
性ハイブリドーマから産生されるものである。
性ハイブリドーマから産生されるものである。
ここで、このハイブリドーマの製造に用いられるＢ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ｍ 胞ハ、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ｍ 胞ハ、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの全菌体或いはその血球凝集素、
莢膜、内毒素等の菌体成分及び産生酵素をマウスなどの
動物に免疫し、免疫後その牌臓等を採取することによっ
て得られる牌臓細胞等が用いられる。なお、Ｂ９ｇｉｎ
ｇｉｖａｌｉｓはボストンのＦ ｏｒｓｙｔｈ Ｄ ｅ
ｎｔａｌＱ ｅｎｔｅｒから分与される菌株、歯周炎の
病巣局所から分離した菌株等が使用される。また、Ｂ。
莢膜、内毒素等の菌体成分及び産生酵素をマウスなどの
動物に免疫し、免疫後その牌臓等を採取することによっ
て得られる牌臓細胞等が用いられる。なお、Ｂ９ｇｉｎ
ｇｉｖａｌｉｓはボストンのＦ ｏｒｓｙｔｈ Ｄ ｅ
ｎｔａｌＱ ｅｎｔｅｒから分与される菌株、歯周炎の
病巣局所から分離した菌株等が使用される。また、Ｂ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの血球凝集素としては、例えば、
Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ （ＢＢＬ） 、 Ｙｅａｓｔ
Ｆｘｔｒａｃｔ（Ｄ １ｒｃｏ）の透析外液に、ヘミン
５μ？／猷およびノナジオン０．５μ牙／１！を添加し
たものを使用し、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１
株の５日間振盪培養−４− 液１２．０００７を１５分遠心した上清から、凝集因子
の精製を行ない、上清に４０％の硫安を加え、−夜放置
後その沈渣を回収し、これを滅菌蒸溜水に浮遊させ、遠
心にて沈渣を取り除いた後、その浮遊液に１０％の硫安
を加え、−夜放置後、沈漬を回収し、さらにこれを０．
１５Ｍ ＮａＣｊ。
Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ （ＢＢＬ） 、 Ｙｅａｓｔ
Ｆｘｔｒａｃｔ（Ｄ １ｒｃｏ）の透析外液に、ヘミン
５μ？／猷およびノナジオン０．５μ牙／１！を添加し
たものを使用し、Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１
株の５日間振盪培養−４− 液１２．０００７を１５分遠心した上清から、凝集因子
の精製を行ない、上清に４０％の硫安を加え、−夜放置
後その沈渣を回収し、これを滅菌蒸溜水に浮遊させ、遠
心にて沈渣を取り除いた後、その浮遊液に１０％の硫安
を加え、−夜放置後、沈漬を回収し、さらにこれを０．
１５Ｍ ＮａＣｊ。
１０−４Ｍ Ｃａ（Ｊｚ 、１０−４Ｍ ｈ：５（Ｊｚ
を含むリン酸緩衝液に懸濁し、２時間室温および一夜４
℃に放置後、凝集してくる沈渣を回収し、この標品を０
．０２Ｍのリン酸緩衝液（ＰＨ８，３）に浮遊さ、せ、
３ ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂを用いてゲル濾過し、血
球凝集能の強い両分を回収し、次いでこの画分を０、０
３Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣオ緩衝液（１）８８．３＞に懸濁
させた後、Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ Ａ
５０のイオン交換クロマトグラフィーにて、０．２Ｍの
ＮａＣＲ１１度で溶出させた両分を水で充分透析後凍結
乾燥して精１１７凝集素としたものを使用することがで
きる（この標品１００μ牙は、１０２４倍に希釈して同
量の２％の血球を凝集させる）。
を含むリン酸緩衝液に懸濁し、２時間室温および一夜４
℃に放置後、凝集してくる沈渣を回収し、この標品を０
．０２Ｍのリン酸緩衝液（ＰＨ８，３）に浮遊さ、せ、
３ ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂを用いてゲル濾過し、血
球凝集能の強い両分を回収し、次いでこの画分を０、０
３Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣオ緩衝液（１）８８．３＞に懸濁
させた後、Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ Ａ
５０のイオン交換クロマトグラフィーにて、０．２Ｍの
ＮａＣＲ１１度で溶出させた両分を水で充分透析後凍結
乾燥して精１１７凝集素としたものを使用することがで
きる（この標品１００μ牙は、１０２４倍に希釈して同
量の２％の血球を凝集させる）。
また、Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの全菌体又は菌体成
分を−５− 免疫する場合、必要によりアジュバントを使用すること
ができる。これら［３０ｇｉｏｇｉｖａｌｉｓの全菌体
又は菌体成分の免疫に用いる動物としては、マウス、特
にＢＡＬＢ／ｃ系マウスが好ましく用いられる。
分を−５− 免疫する場合、必要によりアジュバントを使用すること
ができる。これら［３０ｇｉｏｇｉｖａｌｉｓの全菌体
又は菌体成分の免疫に用いる動物としては、マウス、特
にＢＡＬＢ／ｃ系マウスが好ましく用いられる。
なお、このようにして得られるＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓ抗体産生性細胞は、バラバラにほぐして使用するこ
とが好ましい。
ｉｓ抗体産生性細胞は、バラバラにほぐして使用するこ
とが好ましい。
このＢ、 ｇｉＨｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞と融合さ
れるミエローマ細胞としては、マウス等の骨髄腫細胞な
どが有効に使用され、これら両細胞を融合する場合は、
Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞に対してミ
エローマ細胞２倍量以上の割合でイグールの最少必須培
地（ＭｉｎｔｌＩｌａｌ Ｅｓ５ｅｎｔｔａｌ Ｍｅｄ
ｉｕｍ。
れるミエローマ細胞としては、マウス等の骨髄腫細胞な
どが有効に使用され、これら両細胞を融合する場合は、
Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞に対してミ
エローマ細胞２倍量以上の割合でイグールの最少必須培
地（ＭｉｎｔｌＩｌａｌ Ｅｓ５ｅｎｔｔａｌ Ｍｅｄ
ｉｕｍ。
ＭＥＭ）等の適宜な培地中で混合し、遠心して上清を除
去した後、ポリエチレングリコールで融合する方法が好
適に採用される。なおこの場合、ポリエチレングリコー
ルとしては分子量１０００〜６０００のものが好ましく
用いられ、ポリエチレングリコールは２０〜６０％水溶
液として使用す−６− ることができる。また、反応は３７℃前後で３〜７分間
とすることが好ましく、反応後は、必要により遠心し、
上清を除去した後、好適にはウシ胎児血清を１％以上含
むＲＰＭ１１６／ＩＯ培地等の適宜な培地を加えて１日
程度培養することが好ましい。
去した後、ポリエチレングリコールで融合する方法が好
適に採用される。なおこの場合、ポリエチレングリコー
ルとしては分子量１０００〜６０００のものが好ましく
用いられ、ポリエチレングリコールは２０〜６０％水溶
液として使用す−６− ることができる。また、反応は３７℃前後で３〜７分間
とすることが好ましく、反応後は、必要により遠心し、
上清を除去した後、好適にはウシ胎児血清を１％以上含
むＲＰＭ１１６／ＩＯ培地等の適宜な培地を加えて１日
程度培養することが好ましい。
この細胞融合によって得られる反応物中には目的とする
ハイブリドーマのほか、未融合のＢ。
ハイブリドーマのほか、未融合のＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの抗体産生性細胞、ミエローマ細
胞が混在しているため、ハイブリドーマのみを選択的に
培養する。
胞が混在しているため、ハイブリドーマのみを選択的に
培養する。
この場合、このハイブリドーマの選択には、ウシ胎児血
清を含むＲＰＭ ｒ １６４０培地にアミノプテリン、
ヒボキサンチン、チミジンを加えたトＩＡＴ培地が有効
に用いられる。このＨＡＴ培地を用いた培養（選択）に
より、目的とするハイブリドーマのみが生存し、未融合
のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞、ミエロ
ーマ細胞が死滅するものである。
清を含むＲＰＭ ｒ １６４０培地にアミノプテリン、
ヒボキサンチン、チミジンを加えたトＩＡＴ培地が有効
に用いられる。このＨＡＴ培地を用いた培養（選択）に
より、目的とするハイブリドーマのみが生存し、未融合
のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性細胞、ミエロ
ーマ細胞が死滅するものである。
この場合、ｌ−Ｉ Ａ Ｔ培地を１−ＩＴ培地に徐々に
変換−７− することができる。
変換−７− することができる。
このようにして生育されたハイブリドーマは、ミエロー
マ細胞が死滅した後、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ
１１６４．Ｏ培地にヒボキサンチン、チミジンを加えた
Ｈ Ｔ培地で５〜１０日間程度培養し、更にウシ胎児血
清を含むＲＰＭ１１６４０培地等のハイブリドーマ用培
地で培養することができる。
マ細胞が死滅した後、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ
１１６４．Ｏ培地にヒボキサンチン、チミジンを加えた
Ｈ Ｔ培地で５〜１０日間程度培養し、更にウシ胎児血
清を含むＲＰＭ１１６４０培地等のハイブリドーマ用培
地で培養することができる。
１ｑられたハイブリドーマから目的とするＢ。
ｇｉＨｉｖａｌｉｓに苅するモノクローナル抗体産生性
ハイブリドーマを選別する方法としては、間接螢光抗体
法、ソリッドフェーズ抗体結合法 （ＳＡＢΔ）、ビオチン−アビジン−システム（ＢＡＳ
＞、ラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッセイ
等の方法が有効に使用されるが、特にＥＬＩＳＡ法（Ｅ
ｎｚｙｍｅ ｌ １ｎｋｅｄＩ ｍｍｕｎｏｓｏｒｂ
ｅｎｔ Ａ ５ｓａｙ）は感度が高く、また簡便である
ため好適に採用される。
ハイブリドーマを選別する方法としては、間接螢光抗体
法、ソリッドフェーズ抗体結合法 （ＳＡＢΔ）、ビオチン−アビジン−システム（ＢＡＳ
＞、ラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッセイ
等の方法が有効に使用されるが、特にＥＬＩＳＡ法（Ｅ
ｎｚｙｍｅ ｌ １ｎｋｅｄＩ ｍｍｕｎｏｓｏｒｂ
ｅｎｔ Ａ ５ｓａｙ）は感度が高く、また簡便である
ため好適に採用される。
また、限界希釈法を採用することにより、ハイブリドー
マのクローニングを行なうことができる。
マのクローニングを行なうことができる。
−８−
この場合、培地としてはｌ−（Ｔ培地などを用いること
ができる。
ができる。
更に、目的とするハイブリドーマは、インごトロで培養
、増殖することができ、またマウス腹腔等に投与してイ
ンビボで増殖することができる。
、増殖することができ、またマウス腹腔等に投与してイ
ンビボで増殖することができる。
なお、このようにして得られたＢｏｇｉｎｇｔｖａｌｉ
ｓに対するモノクローナル抗体産生性ハイブリドーマは
、ウシ胎児血清及びジメヂルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
を含むＲＰＭ１１６４０培地等の適宜な培地で凍結保存
することができる。
ｓに対するモノクローナル抗体産生性ハイブリドーマは
、ウシ胎児血清及びジメヂルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
を含むＲＰＭ１１６４０培地等の適宜な培地で凍結保存
することができる。
本発明のハイブリドーマは、１３． ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓに対するモノクローナル抗体を産生するもので、下
記培地に対する生育状態は下記の通りである。
ｉｓに対するモノクローナル抗体を産生するもので、下
記培地に対する生育状態は下記の通りである。
−９−
ＲＰＭ１１６４０ ＋
８％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ１１６４０ 十り０％十
１０％ 〃 Ｈ丁培地 ＋
１０％ Ｉｒ１−Ｉ Ａ Ｔ培地 十
ダルベツコ変法ＭＥＭ −
ＨＡ、 Ｎ Ｋ Ｓ −
［３７℃、 ＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２、湿
度１００％）］本発明のハイブリドーマが産生ずるＢ。
度１００％）］本発明のハイブリドーマが産生ずるＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクローナル抗体はＢ
。
。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対する特異性が高く、他の黒色
集落形成性バクテロイデス群とは反応し難いため、Ｂ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他のバクテロイデス群と区別
して確実に同定し、菌数を知ることができ、歯周病原因
菌であるＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの病巣局所におけ
る局在、動態を容易に調べることができる。従って、歯
周病の診断を確実に行なうことができ、歯周病治療後の
状態等を確実に知ることができるものである。即ち、従
来は病巣局所の材料を嫌気培養し、−１０− その菌種の性状検査を行なって同定していたものであり
、この方法は時間的にも内容的にも非常に多くの問題が
あり、結果も不確かなものであったが、本発明モノクロ
ーナル抗体を用いることにより、このモノクローナル抗
体のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対する特異性が高い
ので、このような高い特異性を有する抗体を必要とする
螢光抗体法を利用し、或いは鋭敏度の高い抗体測定法で
あるＥ １．− Ｉ Ｓ Ａ法を利用するなどして、歯
周病局所のＢ。
集落形成性バクテロイデス群とは反応し難いため、Ｂ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを他のバクテロイデス群と区別
して確実に同定し、菌数を知ることができ、歯周病原因
菌であるＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの病巣局所におけ
る局在、動態を容易に調べることができる。従って、歯
周病の診断を確実に行なうことができ、歯周病治療後の
状態等を確実に知ることができるものである。即ち、従
来は病巣局所の材料を嫌気培養し、−１０− その菌種の性状検査を行なって同定していたものであり
、この方法は時間的にも内容的にも非常に多くの問題が
あり、結果も不確かなものであったが、本発明モノクロ
ーナル抗体を用いることにより、このモノクローナル抗
体のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対する特異性が高い
ので、このような高い特異性を有する抗体を必要とする
螢光抗体法を利用し、或いは鋭敏度の高い抗体測定法で
あるＥ １．− Ｉ Ｓ Ａ法を利用するなどして、歯
周病局所のＢ。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの存在を簡便かつ迅速にしかも正
確に知ることができ、歯周病の診断に利用覆ることがで
きる。
確に知ることができ、歯周病の診断に利用覆ることがで
きる。
このように本発明のハイブリドーマが産生するＢ、 ｇ
ｉｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクローナル抗体は極め
て特異性が高く、本菌種に共通する抗原と反応し得るも
のでありＮ Ｂ、 ＋Ｉｉｎｇｉｖａｌｉｓの同定から
病巣材料中での本菌種の割合を正確に把握するための有
用な免疫血清である。
ｉｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクローナル抗体は極め
て特異性が高く、本菌種に共通する抗原と反応し得るも
のでありＮ Ｂ、 ＋Ｉｉｎｇｉｖａｌｉｓの同定から
病巣材料中での本菌種の割合を正確に把握するための有
用な免疫血清である。
また、Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対して高い特異性
を有する本発明モノクローナル抗体を用いることによ−
１１ − リ、アフイニイｉイクロマトグラフイーを用いてＢ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの表層物質を純度高く取り出２こ
とができるものである。
を有する本発明モノクローナル抗体を用いることによ−
１１ − リ、アフイニイｉイクロマトグラフイーを用いてＢ、
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの表層物質を純度高く取り出２こ
とができるものである。
次に、Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓに対するモノクロー
ナル抗体を利用して歯周病を診断づ゛る方法につき更に
述べると、このモノクローナル抗体を歯周病の病巣から
取り出した菌と反応させ、この菌叢中におけるＢ、 ｇ
ｉｎｇｉｖａｌｉｓの存在を調べるものである。
ナル抗体を利用して歯周病を診断づ゛る方法につき更に
述べると、このモノクローナル抗体を歯周病の病巣から
取り出した菌と反応させ、この菌叢中におけるＢ、 ｇ
ｉｎｇｉｖａｌｉｓの存在を調べるものである。
この場合、調べるべき菌は、これをマイクロチタープレ
ート等にコーティングし、これにモノクローナル抗体（
ハイブリドーマ■８養十清など）を加え、ペルオキシダ
ーゼを用いてＥＩ ＩｓＡ法によりその吸光度を測定す
る方法、モノクローナル抗体ど調べるべき菌とを一緒に
培養し、これをマイクロチタープレート等に加え、Ｆ
Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法よりその吸光度を測定して抑制率をめ
る方法、モノクローナル抗体に直接ペルオキシダーゼを
結合し、このペルオキシダーゼ活性を測定してめる方法
、間接螢光抗体法など、適宜な方法を採用して、調べる
べき菌叢中のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの菌数を＝
１２ − 求め、これにより歯周病の進行程度、治Ｉ！Ｆ程度を診
断することができる。
ート等にコーティングし、これにモノクローナル抗体（
ハイブリドーマ■８養十清など）を加え、ペルオキシダ
ーゼを用いてＥＩ ＩｓＡ法によりその吸光度を測定す
る方法、モノクローナル抗体ど調べるべき菌とを一緒に
培養し、これをマイクロチタープレート等に加え、Ｆ
Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法よりその吸光度を測定して抑制率をめ
る方法、モノクローナル抗体に直接ペルオキシダーゼを
結合し、このペルオキシダーゼ活性を測定してめる方法
、間接螢光抗体法など、適宜な方法を採用して、調べる
べき菌叢中のＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの菌数を＝
１２ − 求め、これにより歯周病の進行程度、治Ｉ！Ｆ程度を診
断することができる。
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明する。
［実施例コ
Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３８１株を用い、これをト
リブチケースソイの透析外液にヘミン５μ’ｔ ／ ’
Ｉ！ 、メチジオン０．５μ２／１！を加えた培地で３
日間培養した菌体を供した。
リブチケースソイの透析外液にヘミン５μ’ｔ ／ ’
Ｉ！ 、メチジオン０．５μ２／１！を加えた培地で３
日間培養した菌体を供した。
全菌体をフロイント不完全アジュバン１〜に懸濁し、Ｂ
ＡＬＢ／ｃ系マウス腹腔内に２回免疫した。
ＡＬＢ／ｃ系マウス腹腔内に２回免疫した。
血中抗体価をＥＬＩＳＡ法により測定し、抗体価の上昇
したマウスに１回追加免疫し、３日後に牌臓と胸腺を無
菌的に採取した。採取し”た婢臓と胸腺とは別々にＨＡ
ＮＫＳ中でほぐして細胞浮遊液をつくり、Ｉ」ＡＮＫＳ
で２回洗った後、トリパンブルー液で細胞数をカウント
した。得られた牌細胞は細胞融合に使用し、胸腺細胞は
供給細胞に使用した。
したマウスに１回追加免疫し、３日後に牌臓と胸腺を無
菌的に採取した。採取し”た婢臓と胸腺とは別々にＨＡ
ＮＫＳ中でほぐして細胞浮遊液をつくり、Ｉ」ＡＮＫＳ
で２回洗った後、トリパンブルー液で細胞数をカウント
した。得られた牌細胞は細胞融合に使用し、胸腺細胞は
供給細胞に使用した。
一方、予め培養しておいた５Ｐ−２１０マウス−１３−
骨髄腫細胞を２回１−１八ＮＫＳで洗った後、１ヘリパ
ンブルー液で細胞数をカウントした。
ンブルー液で細胞数をカウントした。
この骨髄肝細胞（約１０７個）に１０倍量の牌細胞を加
え、ＭＥＭ中でよく混和し、１１０００ｒｐで５分間遠
心した。その上清を吸引除去し、ぺ（ノットをよく解ぎ
ほぐし、３７℃に温めておいた５０％ポリエチレングリ
コール４０００溶液を約１分間で遠沈管壁に伝わらせて
加えた。これを３７℃の温ｉ中でときどき振りまぜなが
ら４分間放置した後、ＭＥＭを加えて反応を止めた。次
に、８５０ｒｐｎ＋で５分間遠心した後、上清を吸引除
去し、３７℃に温めておいた１０％ウシ飴児而漬を含む
ＲＰＭ１１６４０培地を加え、９６穴平底マイクロプレ
一ト４〜６枚に胸腺細胞とともに分注し、培養した。
え、ＭＥＭ中でよく混和し、１１０００ｒｐで５分間遠
心した。その上清を吸引除去し、ぺ（ノットをよく解ぎ
ほぐし、３７℃に温めておいた５０％ポリエチレングリ
コール４０００溶液を約１分間で遠沈管壁に伝わらせて
加えた。これを３７℃の温ｉ中でときどき振りまぜなが
ら４分間放置した後、ＭＥＭを加えて反応を止めた。次
に、８５０ｒｐｎ＋で５分間遠心した後、上清を吸引除
去し、３７℃に温めておいた１０％ウシ飴児而漬を含む
ＲＰＭ１１６４０培地を加え、９６穴平底マイクロプレ
一ト４〜６枚に胸腺細胞とともに分注し、培養した。
翌日、ｌ−Ｉ Ａ Ｔ培地（１０％ウシ胎児血清を含む
ＲＰＭ１１６４０ｆＱ地にヒボキサンチン１０−４Ｍ。
ＲＰＭ１１６４０ｆＱ地にヒボキサンチン１０−４Ｍ。
アミノプテリン４Ｘ１０−７Ｍ、チミジン１．６×１０
”Ｍを加えたもの）を加え、２日目、４日目、７日目に
は培地の１／３（上清部分）を１−ＩＡＴ培−１４− 地で交換し、ハイブリドーマを選択した。
”Ｍを加えたもの）を加え、２日目、４日目、７日目に
は培地の１／３（上清部分）を１−ＩＡＴ培−１４− 地で交換し、ハイブリドーマを選択した。
１０日目頃から１−ＩＴ培地（１０％０％ウシ胎清を含
むＲＰＭ１１６／ＩＯ培地にヒボキザンチン１０−４Ｍ
、チミジン１，６Ｘ１０″５Ｍを加えたもの）に交換し
、約２週開目にＥＬＩＳＡ法によりめるＢ、 ｇｉｎｇ
ｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブリドーマをスクリーニン
グした。その結果、融合細胞は５０〜７０％のウェルに
認められ、そのうちの１０〜２０％がめる抗体産生性ハ
イブリドーマであった。
むＲＰＭ１１６／ＩＯ培地にヒボキザンチン１０−４Ｍ
、チミジン１，６Ｘ１０″５Ｍを加えたもの）に交換し
、約２週開目にＥＬＩＳＡ法によりめるＢ、 ｇｉｎｇ
ｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブリドーマをスクリーニン
グした。その結果、融合細胞は５０〜７０％のウェルに
認められ、そのうちの１０〜２０％がめる抗体産生性ハ
イブリドーマであった。
スクリーニングされたハイブリドーマは２４穴マルヂウ
エルプレートに移し、１」Ｔ培地で５日間培養した後、
再度ＥＬＩＳＡ法により抗体産生ｔ！１の確認を行なっ
てから限界希釈法によってクローニングした。
エルプレートに移し、１」Ｔ培地で５日間培養した後、
再度ＥＬＩＳＡ法により抗体産生ｔ！１の確認を行なっ
てから限界希釈法によってクローニングした。
限界希釈法は、ｌ−Ｉ Ｔ培地で融合細胞が５個／′Ｍ
！となるように希釈し、９６穴マイクロプレートに供給
細胞（正常なりＡＬＢ／ｃ系マウスの胸腺細胞）ととも
に分注した。２週間後、ＥＬＩＳＡ法によりＢ、 （Ｉ
ｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブリドーマ−１５− のクローンをスクリーニングし、２４穴マルチウエルプ
レートに移し、５日間培養後、培養フラスコに移した。
！となるように希釈し、９６穴マイクロプレートに供給
細胞（正常なりＡＬＢ／ｃ系マウスの胸腺細胞）ととも
に分注した。２週間後、ＥＬＩＳＡ法によりＢ、 （Ｉ
ｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗体産生性ハイブリドーマ−１５− のクローンをスクリーニングし、２４穴マルチウエルプ
レートに移し、５日間培養後、培養フラスコに移した。
なお、培地は通常培地（８％ウシ胎児面清を含むＲＰＭ
１１６４０培地）へと交換していった。
１１６４０培地）へと交換していった。
更に、抗体価の高いモノクローナル抗体を得るため、目
的とするハイブリドーマ１０６〜１０７個をＢＡＬＢ／
ｃ系マウス腹腔内に注射し、１０〜１４日後に腹水を採
取した。
的とするハイブリドーマ１０６〜１０７個をＢＡＬＢ／
ｃ系マウス腹腔内に注射し、１０〜１４日後に腹水を採
取した。
なお、目的とするハイブリドーマの凍結保存は３０％０
％ウシ胎清及び７％ＤＭＳＯを含むＲＰＭ１１６４０培
地で行なった。
％ウシ胎清及び７％ＤＭＳＯを含むＲＰＭ１１６４０培
地で行なった。
次に、上記の培養フラスコ中のハイブリドーマ細胞の培
養上清及びマウス腹水をそれぞれ使用し、以下の実験を
行なった。
養上清及びマウス腹水をそれぞれ使用し、以下の実験を
行なった。
（！１られたモノクローナル の−
Ｂ 、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３ （３１の５ｏｎｉｃ
ａｔｅ抗原、同菌体をガラスピーズ振盪によって抽出し
た表層抗原、Ｋ ＯＨで抽出した莢膜抗原、加熱フェノ
ール−水沫で抽出したリボ多糖体（ＬＰＳ）をそれぞれ
−１６− １０μｇ ／ ｘｉの濃度でマイクロチタープレートに
コーティングし、培養上清及び腹水をＥＬＩＳＡ法によ
ってどの抗原と反応するか測定した。
ａｔｅ抗原、同菌体をガラスピーズ振盪によって抽出し
た表層抗原、Ｋ ＯＨで抽出した莢膜抗原、加熱フェノ
ール−水沫で抽出したリボ多糖体（ＬＰＳ）をそれぞれ
−１６− １０μｇ ／ ｘｉの濃度でマイクロチタープレートに
コーティングし、培養上清及び腹水をＥＬＩＳＡ法によ
ってどの抗原と反応するか測定した。
その結果、Ｎｏ、１〜Ｎｏ、６の６ｆｆｆｉ類の全ての
モノクローナル抗体（培養上清、腹水）は、強弱はある
もののｓｏｒ＋＋ｃａｔｅ抗原、表層抗原に対し反応し
た。
モノクローナル抗体（培養上清、腹水）は、強弱はある
もののｓｏｒ＋＋ｃａｔｅ抗原、表層抗原に対し反応し
た。
また、第１表及び第１図に示したようにモノクローナル
抗体の中でも、Ｎｏ、１などの３種類は莢膜抗原に対応
し、Ｎｏ、４などの３種類はＬＰＳに対応することが認
められ、このことは第２図に示した吸収試験結果からも
認められた。
抗体の中でも、Ｎｏ、１などの３種類は莢膜抗原に対応
し、Ｎｏ、４などの３種類はＬＰＳに対応することが認
められ、このことは第２図に示した吸収試験結果からも
認められた。
Ｓに・するモノクローナル尺体
Ｎｏ、４の培養上清を使用し、ＬＰＳに対するモノクロ
ーナル抗体がＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＬＰＳ
にしか反応しないか否かを調べるため、吸収試験を行な
った。なおこの場合、ＬＰＳは８゜ｇｉｎｇｉｖａｌｉ
ｓ由来のものく第３図Ａ） 、Ｅ、 Ｃｏ１１由来のも
の（Ｂ ） 、Ｂ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕ
ｓｓｕｂｓｐ 、ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ 由
来のもの（Ｃ）、−１７− Ｂ、ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ、ｉ
ｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ由来のもの（Ｄ）１０／１１／猷
を用いた。
ーナル抗体がＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＬＰＳ
にしか反応しないか否かを調べるため、吸収試験を行な
った。なおこの場合、ＬＰＳは８゜ｇｉｎｇｉｖａｌｉ
ｓ由来のものく第３図Ａ） 、Ｅ、 Ｃｏ１１由来のも
の（Ｂ ） 、Ｂ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕ
ｓｓｕｂｓｐ 、ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ 由
来のもの（Ｃ）、−１７− Ｂ、ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ、ｉ
ｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ由来のもの（Ｄ）１０／１１／猷
を用いた。
その結果、第３図に示したように、培養上清はＢ、 ｇ
ｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＩ−Ｐ Ｓとしか反応せず、
特異性を示すことが認められた。
ｉｎｇｉｖａｌｉｓ由来のＩ−Ｐ Ｓとしか反応せず、
特異性を示すことが認められた。
得られたモノクローナル抗体のクラス
培養上清を５０％飽和硫安で塩析後、１０倍に濃縮した
。これをオクテルロニ−（□ ｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）
法にかけ、クラスを決定した。なおこの場合、抗血清ア
ンチマウスＩ！ＩＩＧ＋ 、Ｉ（ｌＧ２．１ｆ；ｌＧ３
゜ＴａＶＩはＢ １ｏｕｅｔｉｃｓのものを使用した。
。これをオクテルロニ−（□ ｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）
法にかけ、クラスを決定した。なおこの場合、抗血清ア
ンチマウスＩ！ＩＩＧ＋ 、Ｉ（ｌＧ２．１ｆ；ｌＧ３
゜ＴａＶＩはＢ １ｏｕｅｔｉｃｓのものを使用した。
その結果、得られた抗体のうち、Ｎｏ、４．５のものは
１ｇＧ２で、他のものはＩＣＪ Ｇ＋であることが認め
られた。
１ｇＧ２で、他のものはＩＣＪ Ｇ＋であることが認め
られた。
以上の結果を第１表に示す。
−１８−
−１９＝
更に、Ｒ、ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ３ Ｆ３１に対するモ
ノクローナル抗体を用いて下記の実験を行なった。
ノクローナル抗体を用いて下記の実験を行なった。
マイクロチタープレートにＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉ３
３８１、＃１０２１，０Ｔ−６．Ｂ。
３８１、＃１０２１，０Ｔ−６．Ｂ。
ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ ５ｕｂｓｐ 、ｉｎ
ｔｅｒｍｅｄｉｕｓ ４ Ｑ 。
ｔｅｒｍｅｄｉｕｓ ４ Ｑ 。
２４、Ｋ１−８、Ｂ、ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
５ｕｂｓｐ。
５ｕｂｓｐ。
ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉＧｕｓ １５９３０ 、 Ｓ
−１。
−１。
１−１３に−２の各画の５ｏｎｉｃａｔｅ抗原をコーテ
ィングした。
ィングした。
これに上記の培養−上清６種類とウサギ抗日。
ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ而清を各ウェル加え面抗マウスｒ
ｏｓ複合ペルオキシダーゼ（１： ５００． ｃａｐｐ
ｏＩ社）を用いてＥＬＩＳＡ法により各ウェルの吸光度
を測定した。第２表にその結果を示す。
ｏｓ複合ペルオキシダーゼ（１： ５００． ｃａｐｐ
ｏＩ社）を用いてＥＬＩＳＡ法により各ウェルの吸光度
を測定した。第２表にその結果を示す。
第２表の結果より、培養上清はＢ、 ｇｉｎｇｉｖａｌ
ｉｓの３種の抗原とは反応したが、Ｂ。
ｉｓの３種の抗原とは反応したが、Ｂ。
ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ等とは反応せず、本発
明のモノクローナル抗体の特異性が認められた。
明のモノクローナル抗体の特異性が認められた。
−２０＝
インヒどジョン・アラはイ（ＦＬＩＳＡ−上記の培養上
清ど８菌の５ｏｎｉｃａｔｅ抗原（Ｂ 、 Ｏｉｎｇｉ
ｖａｌｉｓ３８１ 、 Ｂ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇＯ
ｎｉｃｕｓｓｕｂｓｐ 、ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｃｕｓ
２４ 、３ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏ −ｇｅｎｉｃｕｓ
５ｕｂｓｐ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
１５９３０ ）１００田／ν！、１０ＴＩｌａ／ｘＩを
３７℃で４時間培養したのち、４０００ ｒｐｍで遠沈
し、上清だけを取り出し、濾過減菌俊、Ｂ、 ｇｔｎｇ
ｉｖａｌｉｓの５ｏｎｉｃａｔｅ抗原をコーティングし
たマイクロチタープレート上に加え、ＦＬＩＳＡ法で測
定を行なった。
清ど８菌の５ｏｎｉｃａｔｅ抗原（Ｂ 、 Ｏｉｎｇｉ
ｖａｌｉｓ３８１ 、 Ｂ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇＯ
ｎｉｃｕｓｓｕｂｓｐ 、ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｃｕｓ
２４ 、３ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏ −ｇｅｎｉｃｕｓ
５ｕｂｓｐ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
１５９３０ ）１００田／ν！、１０ＴＩｌａ／ｘＩを
３７℃で４時間培養したのち、４０００ ｒｐｍで遠沈
し、上清だけを取り出し、濾過減菌俊、Ｂ、 ｇｔｎｇ
ｉｖａｌｉｓの５ｏｎｉｃａｔｅ抗原をコーティングし
たマイクロチタープレート上に加え、ＦＬＩＳＡ法で測
定を行なった。
結果を第３表に示す。なお、結果は何も処置していない
培養上清の吸光度（ＯＤ４９０ｎｍ＝１．１７）を１０
０としたときの抑制率（％）で表わした。
培養上清の吸光度（ＯＤ４９０ｎｍ＝１．１７）を１０
０としたときの抑制率（％）で表わした。
第３表の結果より、Ｂ、 ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓど培養
したモノクローナル抗体〈培養上清）は８０％の抑制率
を示したが、Ｂ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
と培養したものの抑制率は３０％以下であり、このこと
からも本発明モノクローナル抗体の特異性が認められた
。
したモノクローナル抗体〈培養上清）は８０％の抑制率
を示したが、Ｂ 、 ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ
と培養したものの抑制率は３０％以下であり、このこと
からも本発明モノクローナル抗体の特異性が認められた
。
−２２−
従って、本発明モノクロール抗体を用いることにより、
Ｂ、 ｉ＋ｉｎｇｔｖａｔｔｓの病巣での存在や菌数を
簡単かつ確実に調べることができ、歯周病の診断が確実
になされることが知見される。
Ｂ、 ｉ＋ｉｎｇｔｖａｔｔｓの病巣での存在や菌数を
簡単かつ確実に調べることができ、歯周病の診断が確実
になされることが知見される。
−２３−
第１図はモノクローナル抗体のＢ、 （ｌｉｎｇｉｖａ
ｌｉｓに対する反応性をＦＬＩＳＡ法で測定した場合の
結果を示すグラフで、第１図（１）はＢ。 ｇｉｎｇｌｖａｌｔｓの莢膜抗原を用いた場合の結果、
第１図（２）はＬＰＳを用いた場合の結果を示し、第２
図は同反応性を吸収試験により測定した場合の結果を示
すグラフで、第２図（１）は莢膜抗原、第２図（２）は
ＬＰＳを用いた場合の結果、第３図はモノクローナル抗
体の各種菌体ＬＰＳに対する反応性を吸収試験により測
定した場合の結果を示すグラフである。 出願人 ラ イ オ ン 株式会社 代理人 弁理士 小 島 隆 司 −２５− 厭 届 冊 γ呵 区 ｑ 味 厭 届 俯 〜 区 一 馳
ｌｉｓに対する反応性をＦＬＩＳＡ法で測定した場合の
結果を示すグラフで、第１図（１）はＢ。 ｇｉｎｇｌｖａｌｔｓの莢膜抗原を用いた場合の結果、
第１図（２）はＬＰＳを用いた場合の結果を示し、第２
図は同反応性を吸収試験により測定した場合の結果を示
すグラフで、第２図（１）は莢膜抗原、第２図（２）は
ＬＰＳを用いた場合の結果、第３図はモノクローナル抗
体の各種菌体ＬＰＳに対する反応性を吸収試験により測
定した場合の結果を示すグラフである。 出願人 ラ イ オ ン 株式会社 代理人 弁理士 小 島 隆 司 −２５− 厭 届 冊 γ呵 区 ｑ 味 厭 届 俯 〜 区 一 馳
Claims (1)
- １、バクテロイデス・ジンジバリスに対する抗体産生性
細胞とミニ０−マ細胞とを融合し、選別することによっ
て得られるハイブリドーマから産生されるバクテロイデ
ス・ジンジバリスに対するモノクローナル抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18385883A JPS6075500A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | バクテロイデス・ジンジバリスに対するモノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18385883A JPS6075500A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | バクテロイデス・ジンジバリスに対するモノクロ−ナル抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6075500A true JPS6075500A (ja) | 1985-04-27 |
| JPH0526471B2 JPH0526471B2 (ja) | 1993-04-16 |
Family
ID=16143051
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18385883A Granted JPS6075500A (ja) | 1983-09-30 | 1983-09-30 | バクテロイデス・ジンジバリスに対するモノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6075500A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4689221A (en) * | 1982-12-28 | 1987-08-25 | Lion Corporation | Oral composition containing antibodies to Bacteroides gingivalis |
| JPS62211559A (ja) * | 1986-02-26 | 1987-09-17 | ザ リサ−チ フアウンデ−シヨン オブ ステイト ユニヴア−シテイ オブ ニユ−ヨ−ク | 歯根膜病の原因となる微生物の同定に有効なモノクロ−ナル抗体 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0726314A4 (en) * | 1993-10-08 | 1998-04-22 | Lion Corp | FIMBRILLIN PROTEIN FROM -i (PORPHYROMONAS GINGIVALIS) |
-
1983
- 1983-09-30 JP JP18385883A patent/JPS6075500A/ja active Granted
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ANNALES DE MICROBIOLOGIE(PARIS)=1981 * |
| INFECTION AND IMMUNITY=1981 * |
| J.INFECTIOUS DIS=1979 * |
| J.PERIODINTAL RES=1983 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4689221A (en) * | 1982-12-28 | 1987-08-25 | Lion Corporation | Oral composition containing antibodies to Bacteroides gingivalis |
| JPS62211559A (ja) * | 1986-02-26 | 1987-09-17 | ザ リサ−チ フアウンデ−シヨン オブ ステイト ユニヴア−シテイ オブ ニユ−ヨ−ク | 歯根膜病の原因となる微生物の同定に有効なモノクロ−ナル抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0526471B2 (ja) | 1993-04-16 |
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