DE2205882C3

DE2205882C3 - Arzneimittel gegen die Erkrankungen der Mundhöhle und der Zähne

Info

Publication number: DE2205882C3
Application number: DE2205882A
Authority: DE
Inventors: Raymond Francois Jacques Sarbach; Demetre Yavordios
Original assignee: Institut De Recherche Scientifique (irs) Sa Chatillon-Sur-Chalaronne Ain (frankreich)
Current assignee: Institut De Recherche Scientifique (irs) Sa Chatillon-Sur-Chalaronne Ain (frankreich)
Priority date: 1971-02-08
Filing date: 1972-02-08
Publication date: 1979-09-20
Also published as: OA03952A; BE778267A; FR2124124B1; CA984294A; DE2205882B2; FR2124124A1; AT315367B; GB1385033A; DD95911A1; DE2205882A1

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels zur vorbeugenden und heilenden Behandlung von Erkrankungen der Mundhöhle und der Zähne.

Aus der DE-OS 19 31 195 ist ein pharmazeutisches Mittel auf der Basis bakterieller Antigene bekannt, das zur Immunotherapie der oberen und unteren Atmungswege bestimmt ist. Dieses Mittel wird dadurch erhalten, daß man abgetötete Bakterien durch physikalische Mittel, z. B. aufeinanderfolgendes langsames Einfrieren und Wiederauftauen bei Temperaturen zwischen -20⁰C und +55"C und gegebenenfalls zusätzliche dosierte Ultraschallbehandlung teilweise lysiert, die erhaltenen Suspensionen, die lysierte und nichtlysierte Keime enthalten, in bestimmten Mengenanteilen mischt und homogenisiert und, gegebenenfalls nach Zusatz von Konservierungsmitteln, lyophilisiert und das trockene Produkt fein vermahlt.

Erfindungsgemäß wird nun ein Arzneimittel zur vorbeugenden oder heilenden Behandlung von Erkrankungen der Mundhöhle und der Zähne ausgehend von lebenden saprophytischen oder pathogenen Mikroorganismen des Menschen, die einer weitgehenden Lyse mit chemischen Mitteln unterworfen werden, hergestellt.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man Kulturen von Mikroorganismen, welche die Erkrankung der Mundhöhle und der Zähne hervorrufen, in Gegenwart von Aminoessigsäure einer Bakteriolyse sowie von hefeartigen Mikroorganismen in Gegenwart von Natriumdesoxycholat einer Lyse unterwirft, die erhaltenen Lysate durch ein bakteriendichtes Filter filtriert, das Filtrat nach Zusatz eines Konservierungsmittels trocknet und in üblicher Weise konfektioniert.

Die nach Zusatz von Konservierungsmittel, Stabilisator und gegebenenfalls erforderlichen üblichen Hilfsstoffen filtrierten Lysate werden gefriergetrocknet (lyophilisiert) oder durch Zerstäubung getrocknet. Die erhaltenen beständigen Pulver werden nach Zusatz eines Excipiens zu verschiedenen pharmazeutischen Verabreichungsformen wie Tabletten, Suppositorien, Zahnpasten. Mundwasser oder Kaugummi verarbeitet.

Beispiel 1

I. Wahl und Züchtung des oder der
Mikroorganismen-Keime

Oic Wahl wurde durch <!n^r, Bemühen bestimmt, die größtmöglichste An/:ih' Kcimr¹, die für die Infektionen der Mundhöhle und der Zähne verantwortlich sind, mit den für die Parodontopathie verantwortlichen Keimen und einer Annäherung soweit wie möglich an die Bakterienflora, die verantwortlich ist für Zahn-Papel und Zahnkaries, zu kombinieren.
Hierzu wurden verwendet:

verschiedene Lactobacilli: acidophilus, helveticus, lactis, fermentatum;

Streptokokken der Gruppen A und D nach L a η c e f i e 1 d (vgl. »Bacteriologie Medicale« von J. Dumas, Flammarion, 1951 [Ergänzungslieferung 19581 S. 281 bis 281c sowie »Leitfaden der Medizinischen Mikrobiologie« von H. J. 011 e, Gustav Fischer Verlag, Stuttgart), isoliert durch Haemogingivokulturbeim Menschen;
ein Staphylococcus aureus;
ein Corynebacterium pseudodiphteriticus;
ein Fusiformis fusiformis;
eine Klebsiella nneumoniae:
eine Candida albicans.

Die Keime wurden gemäß den it; der Bakteriologie üblichen Methoden unter den ihrer Entwicklung am besten entsprechenden Bedingungen gezüchtet.

Die Keime wurden nach bekannten Verfahren in aktiver Wachstumsphase so gewonnen, daß man eine oder mehrere wäßrige Suspensionen erhielt, die die in Betracht gezogenen Mikrobenarten getrennt enthielten.

2. Herstellung der Lysate
a) Für die Bakterien insgesamt

Nach dem Zentrifugieren der Bakterienkulturen wurden die Bakterien-Kuchen zweimal mit sterilem destilliertem Wasser gewaschen und in einer wäßrigen 10%igen Aminoessigsäurelösung gelöst, so daß im Photometer eine optische Dichte = 1,1 gemessen wurde. Die Anzahl lebender Keime betrug für die in Betracht gezogene optische Dichte

Lactobacilli
Streptokokken
4ί Staphylococcus aureaus
Klebsiella pneumoniae
Corynebacterium pseudodiphteriticus
Fusiformis fusiformis

10⁸ Keime/ml
Ibis 1Ox 10" Keime/ml 1Ox 10^q Keime/ml
10« Keime/ml

10⁷ Keime/ml
10⁷K<;ime/ml

Diese Suspensionen wurden dann im Brutofen 10 Tage bei 37°C gehalten.

b) Für die Hefe

Nach dem Zentrifugieren der Kultur wurde der Rückstand zweimal mit sterilem destilliertem Wasser gewaschen und dann mit einer wäßrigen 1%igen Natriumdesoxycholat-Lösung verdünnt, so daß im Photometer eine optische Dichte = 1,1 gemessen wurde. Die Anzahl lebender Keime betrug 1Ox 10⁹ Keime/ml. Die Suspension wurde im Brutofen 10 Tage lang bei 37°C gehalten.

Die fortschreitende Lyse Mikroorganismen-Suspensionen wurde durch photometrische Messung der optischen Dichten am ersten und letzten Tag, nach Aufenthalt im Brutschrank, verfolgt. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengefaßt.

Tabelle

Mikroorganismen	Optische	Dichte am	Lyse der
			Suspension
	!.Tag	10. Tag	%
Lactobacillus
acidophilus	1,20	0,31	75
helveticus	1,20	0,66	45
lactis	1,20	0,60	50
fermentatum	1,20	0,10	91,7
Streptococcus
Gruppe A I. Stamm	1,20	0,72	45
Gruppe A 2. Stamm	1,20	0,49	59
Gruppe A 3. Stamm	1,20	0,96	20
Gruppe D 1. Stamm	1,20	0,52	66
Gruppe D 2. Slamm	1,20	0,06	95
Staphylococcus aureaus	1,20	0,24	80
Kichscilia pneurrsoniae	120	0,48	60
Corynebacterium pscudodiphteriticus	1,20	0,96	20
Fusiformis fusiformis	1,20	0,52	56
Candida albicans	1,20	0,49	69

3. Herstellung des Medikamentes

Die erhaltenen Lysate wurden durch ein
dichtes Filter filtriert und entsprechend
Rezeptur miteinander vermischt:

Lysat von Lactobacillus acidophilus

Lysat von Lactobacillus helveticus

Lysat von Lactobacillus lactis

Lysat von Lactobacillus fermentatum

Lysai von Streptococcus

Gruppe A, 1. Stamm

Lysat von Streptococcus

Gruppe A, 2. Stamm

Lysat von Streptococcus

Gruppe A, 3. Stamm

Lysat von Streptococcus

Gruppe D

Lysat von Streptococcus

Gruppe D

Lysat von Staphylococcus

aureaus pseudodiphteriticus

Lysat von Fusiformis fusiformis

Lysat von Klebsieila pneumoniae

Lysat von Candida albicans

Merthiolat

baktericnfolgender

70 ml 70 ml 70 ml 70 ml

70 ml 70 ml 70 ml 70 ml 50 ml

100 ml 100 ml 50 ml 70 ml 0,025 g

Das Lysat-Gemisch wurde lyophilisiert und gemäß folgender Rezeptur zu leicht brausenden oder sprudelnden Mikrotabletten, die man unter der Zunge zergehen läßt, verarbeitet:

Lyophilisiertes Bakterienlysat	0,050 g	I vnnhιIiciprtp^ Rfilct
Excipiens:
Mannit	0,100 g	_Mi gemäß Beispiel \|
Lactose	0,350 g	Excipiens:
Polyvinylpyrrolidon	0,010 g	Eiszucker
Natriumbicarbonat	0,030 g	Tricalciumphosphat
Saccharin	0,001 g	Calciummalat
Citronensäure	0,023 g	h) Kristallglucose
Gemisch aus Glycerin-Palmitinsäure/		Kaugummipaste
Stearinsäureestern	0,005 g	Sorbitpulver
Pfefferminzaroma	0,008 g	Geschmackstoffe

Beispiel 2

Es wurde eine Zahnpasta gemäß folgender Rezeptur in hergestellt:

Lyophylisiertes Bakterienlysat

gemäß Beispiel 1 2,50 g

Excipiens:

π Natriummetaphosphat 40 g

Glycerin 15 g

70%ige Sorbitlösung 15 g

Natriumsaccharinat 0,10 g

Titanoxid 1 g

in Natriumsalz des p-Hydroxybenzoe-

säure-methylesters 0,10 g Natriumsalz des p-Hydroxybenzoe-

säure-propylesters 0.05 g Kieselsäure, chemisch rein,

■Γι mikrofein, mit Oberfläche

200 m²/g 1 g

Carraghenat 1,40 g

Natriumlauryisulfat 0,70 g

Zahnpasten-Aroma 1 g

vi Entsalztes Wasser ad 100 g

Beispiel 3

Zur Herstellung eines Kaugummis wurden verwendet:

0.050 g

0,660 g 0,030 g 0,010 g 0,090 g 0,230 g 0,160 g 0.007 g

Beispiel 4 Es wurde ein Mundwasser hergestellt:

Lyophilisiertes Bakterienlysat

gemäß Beispiel 1

Excipiens:

96% iger Alkenol

Menthol

Natriumsaccharinat

Natriumsalz des p-Hydroxybenzoesäure-methylesters

Natriumsalz des p-Hydroxybenzoesäure-propylesters

Addukt aus Äthylenoxid Ricinusöl Lösliche Geschmacksstoffe für

Mundwasser

Entsalztes Wasser

Tabeiic 2

Identifizierung und Kontrolle

Die Kontrolle erfolgte gemäß der Arbeitsweise der Abweichung des Komplementes von K ο I m e r oder bei "ι bestimmten Antigenen gemäß der Arbeitsweise der Diffusion auf Agar-Agar mit Hilfe von spezifischen 1.25 g Seren.

Bei Kaninchen wurde teilweise die Produktion von ml Antikörpern in vivo nachgewiesen. Hierzu wurde der

0,30 g in Weg über die Darmschleimhaut gewählt mit Hilfe von 0,20 g der Anatomie des Kaninchens angepaßten Supposito-

rien, die lyophilisiertes Lysatgemisch gemäß Beispiel 1 0,10 g enthielten und in einer Dosierung von einem Suppositorium je Tag 4 Wochen lang (5 Tage/Woche) verabfolgt 0,05 g ι ϊ wurden. Insgesamt wurden 50 mg lyophilisiertes Lysatg gemisch je Tier gegeben.

In der folgenden Tabelle 2 sind die mit den g Serumverdünnungen (Agglutinine) erhaltenen Ergeb-

ad 100 ml nisse zusammengefaßt.

Kaninchen Streptococcus

Versuchs- Gruppe A*)
tier yi-haemolytisch

Staphylococcus
aureus

K. l'neumoniae

Nr. 2
Ni. 3
Nr. 4
Nr. 5

d„
rein**)

rein
0
0
0

el.«.

ver- J^ dünnt 4 ve τ- 2 dünnt 2 ver- }_ dünnt 2 ver- ]_ dünnt 2 ver- _[ dünnt 4

el,,

ver- 2 dünnt 2 ver- J^ dünnt 2 rein

rein rein

d«

el = Tag.

*) Nach Lanccficld.
**) Rein = unverdünntes Serum des Versuchstieres.

ver dünnt	1 Ϊ28	ver dünnt	I 64
ver dünnt	1 128	ver dünnt	32
ver dünnt	1 128	ver dünnt	32
ver dünnt	T28	ver dünnt	1 64
ver dünnt	1 128	ver dünnt	8

ver- J_
dünnt 64
ver- _1_
dünnt 32
ver- J_
dünnt 64
ver- _1_
dünnt 256
ver- J_
dünnt 32

Ein anderes Beispiel für das immunisierende Vermögen der wie beschrieben erhaltenen Lysate wird von Fusiformis fusiformis gegeben, das sich schlecht für die Aggiutinationsteste eignet (spontane Agglutination in destilliertem Wasser oder wäßriger physiologischer Lösung).

Das Lysat von Fusiformis fusiformis, zuvor filtriert auf einer Membran mit 0,22 mum weiten Milliporen wurde mit dem vollständigen Adjuvans von Freund vermischt und intracutan an verschiedenen Stellen in den Nacken des Kaninchens injiziert. Am 25. Tag wurde eine Wiederholungsinjektion intramuskulär gegeben.

Das gewonnene Serum des Tieres war stark fällend, wie der Versuch durch Diffusion auf Agar-Agar ergab.

In toxikologischer Hinsicht erwies sich das Gemisch gemäß Beispiel 1 der verschiedenen Lysate als atoxisch; die Bestimmung der lethalen Dosis bei der Maus ergab LD₅₀> 2500 mg/kg bei oraler Applikation.

Untersuchungsbeispiele über therapeutische Eigenschaften

Beim erwachsener Menschen wurde das neue Medikament zur vorbeugenden oder heilenden immunisierenden Behandlung von Erkrankungen der Mundhöhle verwendet, und zwar in Form der Mikro-Lingualtabletten des Beispiels 1.

18 Kranke mit unterschiedlichen Leiden der Mund höhle wurden mit 4 bis 8 Tabletten je Tag behandelt. Die Behandlungsdauer war unterschiedlich; in den akuten Fällen betrug sie 5 bis 8 Tage, in den chronischen Fällen mehrere Wochen. Die Analyse der behandelten Fälle errab:

Eine schnelle Wirkung auf die schmerzhaften Erscheinungen, eine entzündungshemmende Wirkung, die innerhalb von 48 Stunden eine Besserung der klinischen Anzeichen brachte:

Verschwinden der spontanen Zahnfleischblutun-

gen,

Verminderung und häufig bei Behandlungsende

Verschwinden der provozierten Zahnfleiachblutun-

gen,

Verringerung des Ödems,

Verschwindpn der Geschwürbildungen.

Eine antiinfektiöse Wirkung und im Falle von Parodontitis Verminderung oder Unterdrückung der Eiterung.

Verschwinden des unangenehmen Geruches (O/osto· mie).

Klinische Beobachtungen Beobachtung Nr. I (Dezember 1969) Herr D. F, Student, 25 Jahre

Guter Allgemeinzustand. n

Gingivitis mit Geschwüren; sponiane Zahnfleischblutungen, Schmerzen.

8 Mikrotabletten je Tag während 8 Tagen.

Ausgezeichnetes Ergebnis, Erleichterung und Besserung innerhalb von 48 Stunden;

vollständige Heilung bei Behandlungsende; seither kein Rückfall (Rezidive).

Beobachtung Nr. 2 (Januar 1970) Frau S. A.. Krankenschwester. 26 Jahre

Hormonale Störungen (unregelmäßige Menstrua : tionszyklen).
Einfache Parodontitis.

Rotes und geschwollenes Zahnfleisch mit vorhandenen Säcken, lokalisierte Eiterung.

8 Mikrotabletten je Tag während I ^ri Tagen.

Gute Ergebnisse, Verschwinden der Zahnflcischblutungen.

!n den folgenden 8 Tagen bei Anwendung von Pulver r Wiederauftreten der Zahnfleischblutungen.

Beobachtung Nr. 3 (lanuar 1970)
Fräulein D. de S.. Verkäuferin. 20 Jahre

Guter Allgemeinzustand

Erythematische Gingivitis und beginnende Parontitis.

Funktionelle Atiologie. vorangehende, sehr traumatische Rekonstitution. außerdem schlechte Hygiene

Rotes, schmerzhaftes Zahnfleisch mit Ödemen, provozierte und spontane Zahnfleischblutungen. Eiterung, parodontische Abs/esse, bewegliche (lose Zähne). Die ersten Anzeichen reichen bis zu J lahren zurück.

8 Mikrotabletten je Tag während 15 Tagen.

Gute Ergebnisse. Verschwinden der Eiterung und der schmerzhaften Erscheinungen, Verringerung der Zahnfleischblutiingen.

Diese Patientin wurde um den 15. September erneut untersucht: keine Rezidiven.

Beobachtung Nr.4(Januar 1970)
Herr J. P. M., Aufseher für Externate, 25 Jahre

Guter Allgemeinzustand.

Erythema 'sehe Gingivitis und beginnende Parodontitis, Beginn liegt 3 Jahre zurück.
Sehr rotes Zahnfleisch, spontane und provozierte Zahnfleischblutungen. Schmerzen Eiterung auf dem Niveau der unteren und oberen Schneidezähne. Traumatische Occlusion, schlechte Hygiene.

8 Mikrotabletten je Tag während 15 Tagen.

Sehr gute Ergebnisse, keine Schmerzen mehr, keine spontanen Zahnfleischblutungen. Verschwinden der Entzündung.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels zur vorbeugenden oder heilenden Behandlung von Erkrankungen der Mundhöhle und der Zähne, dadurch gekennzeichnet, daß man Kulturen von Mikroorganismen, welche die Erkrankungen der Mundhöhle und der Zähne hervorrufen, in Gegenwart von Aminoessigsäure einer Bakteriolyse sowie von hefeartigen Mikroorganismen in Gegenwart von Natriumdesoxycholat einer Lyse unterwirft, die erhaltenen Lysate durch ein bakteriendichtes Filter nitriert, das Filtrat nach Zusatz eines Konservierungsmittels trocknet und in üblicher Weise konfektioniert.