DE3339042A1 - Colorimetrisches reagens zur bestimmung von (beta)-lipoproteinen - Google Patents

Colorimetrisches reagens zur bestimmung von (beta)-lipoproteinen

Info

Publication number
DE3339042A1
DE3339042A1 DE19833339042 DE3339042A DE3339042A1 DE 3339042 A1 DE3339042 A1 DE 3339042A1 DE 19833339042 DE19833339042 DE 19833339042 DE 3339042 A DE3339042 A DE 3339042A DE 3339042 A1 DE3339042 A1 DE 3339042A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
lipoproteins
colorimetric reagent
serum
lipoprotein
determining
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE19833339042
Other languages
English (en)
Inventor
Edoardo Siena Moda
Alessandro Tabacco
Paolo Monteriggioni Siena Tarli
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sclavo SpA
Original Assignee
Sclavo SpA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sclavo SpA filed Critical Sclavo SpA
Publication of DE3339042A1 publication Critical patent/DE3339042A1/de
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Colorimetrisches Reagens zur Bestimmung von ß-Lipoproteinen
Die Erfindung betrifft die Anwendung eines "ß-Lipoprotein-Farbstoffs" zu Identifizierung von ß-Lipoproteinen. Insbesondere betrifft sie die Verwendung eines "ß-Lipoprotein-Farbstoffs" in Pufferlösung und in Gegenwart von geeigneten kationischen oder nicht-ionischen grenzflächenaktiven Substanzen und anionischen Gruppen, die von Metallsalzen oder von anorganischen Säuren stammen zur semiquantitativen oder quantitativen Bestimmung von ß-Lipoproteinen.
Es ist bekannt, daß Lipoproteine als Flüssigkeitsträger im Blut wirken.
Sie können in vier Hauptgruppen eingeteilt werden, die sich durch die Zusammensetzung der Flüssigkeiten (die sie tra- gen) t der irägerproteine ihre Größe, Dichte, elektrophoretisch^ Mobilität und ihre Antigeneigenschaften unterscheiden.
/2
Drei Lipoproteinfraktionen können im Serum, das beim Fasten entnommen und gewonnen wird (Nüchternserum) bestimmt werden, nämlich VLDL (very Low Density Lipoproteins), LDL (Low Density Lipoprotein) und HDL (High Density Lipoprotein). Im Serum, das nach dem Essen entnommen wird, ist eine vierte Fraktion vorhanden, nämlich Chylomikronen, deren Vorhandensein im Nüchternserum pathologisch ist.
Die Bestimmung der verschiedenen Lipoproteinfraktionen ist von beträchtlichem klinischem Interesse, da sie direkt zusammenhängen mit der Pathologie der Arteriosklerose. Die
üblichen Verfahren zur Bestimmung der verschiedenen Lipoproteinfraktionen sind
1) Elektrophorese
2) Ultrazentrifugation
3) Immunologische und immunoelektrophoretische Verfahren und
4) Immunonephelometrische Verfahren
Es sind auch colorimetrische Verfahren bekannt, bei denen die Proteinkonzentration mehr oder weniger näherungsweise erhalten wird durch Bestimmung von Cholesterin und Lipiden, die an die Proteine gebunden sind.
Insbesondere sind in Beziehung auf die LDL's, d.h. die Proteine, die zur Zeit als diejenigen angesehen werden, die direkt in Beziehung stehen zum Auftreten von Arteriosklerose keine direkten spe ktrophotometrischen Verfahren zu ihrer Bestimmung bekannt.
Es hat sich nun gezeigt, daß ß-Lipoproteine spezifisch mit einem "ß-Lipoprotein-Farbstoff" reagieren.
Die Erfindung betrifft die Verwendung (bei der Indentifizierung von ß-Lipoproteinen) eines "ß-Lipoprotein-Farb-
/3
Stoffs", der ausgewählt ist aus Triphenylmethan-derivaten, bei denen das Vorhandensein der Wasserstoffsubstituenten, wie sie in der allgemeinen Formel I angegeben sind, wesentlich ist:
XOOC.
(I)
wobei R, und R2 gleich oder unterschiedlich sind und jeweils ein Halogenatom bedeuten und X ein Wasserstoffatom oder ein einwertiges Kation bedeutet und die nicht ausdrücklich angegebenen am aromatischen Ring gebundenen Wasserstoff atome ebenfalls substituiert sein können.
Die Erfindung betrifft auch eine Zubereitung (zur Bestimmung von Lipoproteinen), umfassend: i) "ß-Lipoprotein-Farbstoff" in Pufferlösung, ii) ein Qelat bildendes Mittel, das im Stande ist, in der Probe vorhandene störende Metallionen zu chelatisieren,
um eine spezifischere Reaktion zu erhalten, iii) anorganische und anionische Gruppen und iv) gegebenenfalls kationische oder nicht-ionische grenzflächenaktive Mittel.
Ein solches Mittel kann beispielsweise enthalten
a) ein Puffersystem, das imstande ist einen pH-Wert zwischen 3 und 7 aufrechtzuerhalten,
b) ein Che1at bildendes Mittel, das imstande ist, Metall-
/4
ionen und insbesondere Eisen zuchelatisieren. Besonders geeignete Ghelat bildende Mittel sind Citronensäure und deren Salze und EDTA (Ethylen-diamin-tetraessigsäure) und deren Salze, die auch als Puffer wirken können.
c) Ein kationisches oder nicht-ionisches grenzflächenaktives Mittel und besonders kationische grenzflächeaktive Mittel wie Salze von quaternären Aminoniumbasen, in denen dieInicht)hydrophoben Gruppen Alkylreste sind. Dabei hat ο sich Cetyltrimethylammonium-bromid als besonders geeignet erwiesen.
d) Anionische Gruppen bzw. Anionen wie Halogenide, Nitrate, Sulfate, Phosphate usw., die zu dem Gemisch in Form von Salzen oder Säuren zugesetzt werden können.
Die Wirksamkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens wurde bestimmt durch chromatographische Isolierung der Proteine von gepooltem Humanserum, das unter geeigneten Bedingungen eine positive Reaktion mit einem "ß-Lipoprotein-Farbstoff" gab und immunolgische Identifizierung mit Hilfe spezifischer Antisera. ι
Gleichzeitig wurde sichergestellt, daß die anderen fraktio-
I nierten Serumproteine keine positive Reaktion mit dem "ß-Lipoprotein-Farbstoff" unter analogen Bedingungen ergaben .
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert.
Beispiel 1
Reagenszusammensetzung zur Identifizierung von Lipoproteinen A) Reagens: Puffer;K-Acetat 0,5 m
/5
BAD ORIGINAL
Cetyltrimethylammonium-bromid 270 mg/1 Mordant Bleu 1 70 mg/1
MgCl2.6H2O 60 g/l
Citronensäure 0,026 m
Dreibasisches Na-Citrat 0,038 m
B) Gleiches Reagens, wobei jedoch anstelle von Mordant Bleu 1, Mordant Bleu 29 in einer Konzentration von 80 mg/1 enthalten war.
0 Beispiel 2
Identifizierung von ß-Lipoproteinen in einem Humanserum
A) 0,1 ml Serum wurde zu 2 ml des oben erwähnten Reagens A zugegeben. Das Absorptionsspektrum des so erhaltenen Reak-5 tionsgemisches wurde mit einem Spektrophotometer gegenüber einer Blindprobe aus 2 ml Reagens und 0,1 ml physiologischer Kochsalzlösung abgelesen. Eine Spitze zwischen 640 und 590 nm mit einem Absorptionsmaximum zwischen 600 und 610 nm zeigt das Vorhandensein von ß-Lipoproteinen in dem Serum an.
B) 0,1 ml Serum wurden zu 2 ml des oben erwähnten Reagens
B gegeben, wobei entsprechend Beispiel 2A) gearbeitet wurde, Eine Spitze zwischen 640 und 570 nm mit einem Absorptionsmaximum zwischen 580 und 590 nm zeigt das Vorhandensein von ß-Lipoproteinen im Serum an.
Beispiel 3
Reagenszubereitung zur Bestimmung von Lipoproteinen Das Reagens bestand aus
- Chromogene Lösung entsprechend den Reagentien nach Beispiel 1
- Leer-Lösung: Identisch der chromogenen Lösung jedoch ohne "ß-Lipoprotein-Farbstoff".
/6
Beispiel 4
Bestinunung von ß-Lipoproteinen in Humansera Die folgenden Bestandteile wurden entsprechend dem folgendem Schema in Reagensgläser pipetiert
Probe Blindprobe 1 Seirum-Blindprobe Blindprobe Serum 0,05 - 0,05
physiologische Kochsalz- - 0,05 - 0,05
lösung
chromogene Lösung 1,5 1,5
Leer-Lösung - - 1,5 1,5
Nach 20 min wurde die optische Dichte der Probe bei 610 bis 620 nm gegenüber der Blindprobe 1 (A,) und die optische Dichte der Serum-Blindprobe bei 615 bis 620 nm gegenüber der Blindprobe 2 (C„) abgelesen. A, d.h. A, - A_ ist proportional zu der ß-Lipoprotein-Konzentration im Serum.
Beispiel 5
Vergleich
80 Humansera wurden nach dem Verfahren des Beispiels 4 untersucht. Die Lipoproteine wurden in dem gleichen Serum nach dem Radi al-Iinmunodif fusionsverfahren (Platten von Behringwerke AG) bestimmt. Der Korrelationskoeffizient, der nach den beiden Verfahren erhaltenen Ergebnisse;r beträgt 0,86.
6238 BAD ORIGINAL

Claims (4)

Patentansprüche ■©
1.) Colorimetrisches Reagens zur Bestimmung von ß-Lipoproteinen, umfassend ein Triphenylmethan-derivat der Formel
KO
XOOC
(D
in der R, und R„ gleich oder verschieden sind und jeweils ein Halogenatom bedeuten und X ein Wasserstoffatom oder ein einwertiges Kation sein kann und die in der Formel nicht ausdrücklich angegebenen Wasserstoffatome der aromatischen Ringe ebenfalls substituiert sein können.
2 * Colorimetrisches Reagens nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß das Triphenylmethan-derivat Mordant Bleu 1 (C.I. 43830) oder Mordant Bleu 29 (CI. 43825) ist.
3, Colorimetrisches Reagens nach Anspruch 1 oder 2, bestehend aus
/2
a) mindestens einer Verbindung der allgemeinen Formel I in Pufferlösung,
b) einem Oelat bildenden Mittel,
c) anorganischen Anionen und
d) gegebenenfalls kationischen oder nicht-ionischen grenzflächenaktiven Mitteln.
4. Anwendung des colorimetrischen Reagens nach Anspruch 1 bis 3 zur Identifizierung von ß-Lipoproteinen.
6238
DE19833339042 1982-10-28 1983-10-27 Colorimetrisches reagens zur bestimmung von (beta)-lipoproteinen Ceased DE3339042A1 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT8223974A IT1191052B (it) 1982-10-28 1982-10-28 Reattivo per la determinazione delle beta-lipoproteine.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE3339042A1 true DE3339042A1 (de) 1984-05-03

Family

ID=11211248

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19833339042 Ceased DE3339042A1 (de) 1982-10-28 1983-10-27 Colorimetrisches reagens zur bestimmung von (beta)-lipoproteinen

Country Status (6)

Country Link
JP (1) JPS5995461A (de)
DE (1) DE3339042A1 (de)
ES (1) ES8602254A1 (de)
FR (1) FR2535461A1 (de)
GB (1) GB2129129A (de)
IT (1) IT1191052B (de)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8401166D0 (en) * 1984-01-17 1984-02-22 Bevaloid Ltd Labelled polymer compositions
JPH0752198B2 (ja) * 1989-08-30 1995-06-05 マイルス・インコーポレーテッド 変色を示す組成物、アルブミンの存在及び/又は濃度の測定方法及び検出具
AU609630B1 (en) * 1989-08-30 1991-05-02 Miles Inc. Method and composition for the assay of albumin

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1277592B (de) * 1963-03-26 1968-09-12 Haury Chem Fab Dr Heinz Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung der Serum-ª‰-Lipoproteide
GB1183044A (en) * 1966-04-05 1970-03-04 Agfa Gevaert Nv Optically Sensitized Photoconductive Recording Elements
DE2832491A1 (de) * 1978-07-24 1980-02-07 Merck Patent Gmbh Mittel und verfahren zur anfaerbung von zellabstrichen

Also Published As

Publication number Publication date
GB8328420D0 (en) 1983-11-23
FR2535461A1 (fr) 1984-05-04
ES527175A0 (es) 1985-04-16
JPS5995461A (ja) 1984-06-01
ES8602254A1 (es) 1985-04-16
IT1191052B (it) 1988-02-24
GB2129129A (en) 1984-05-10
IT8223974A0 (it) 1982-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69731203T2 (de) Methode zur quantifizierung von ldl-cholesterin
DE19752665B4 (de) Azofarbstoffe
DE1255353C2 (de) Verfahren zur Herstellung eines Diagnostiziermittels zur Bestimmung von Eiweiss in biologischen Fluessigkeiten
EP0088420B1 (de) Verfahren zur spezifischen Bestimmung des Cholesterins der LDL-Fraktion im Serum
DE2833612C3 (de) Mittel und Verfahren zur Bestimmung von Wasserstoffperoxyd
DE3249743C2 (de)
DE2406959C3 (de) Anordnung und Verfahren zur Bestimmung von Antigenen
EP0035211A1 (de) Verfahren und Reagens zur Bestimmung der beta-Lipoproteine (LDL)
DE68901878T2 (de) Verfahren zur faerbung von nichtradioaktiven markierten nukleinsaeuren und zusammensetzung zum gebrauch in diesem verfahren.
DE69233059T2 (de) Verfahren zur Lp(a)-Trennung durch Elektrophorese und Anwendung des Verfahrens auf die in vitro Bestimmung des Atherogen-Risikos in Zusammenhang mit der Anwesenheit des Lp(a)
DE2840680A1 (de) Verfahren zum messen von lipoproteidcholesterinen
DE2617739B2 (de) Haarfärbemittel
CH632092A5 (de) Verfahren und mittel zur bestimmung von hydroperoxiden.
DE3339042A1 (de) Colorimetrisches reagens zur bestimmung von (beta)-lipoproteinen
DE2256331C3 (de) Verfahren zur quantitativen kolorimetrischen Harnsäurebestimmung
DE2703523C2 (de) Verdünnungsmittel für den Rubella- Virus-Hämagglutinations-Hemmungstest
DE2517545C2 (de) Reagenz und Verfahren zur spektrophotometrischen Bestimmung von anorganischem Phosphor
DE2707913C2 (de) Verfahren zum Nachweis von rheumatoiden Faktoren
EP0664454B1 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Eisen
DE2921023C2 (de) Zusammensetzung, Testmittel und Verfahren zum Bestimmen von Urobilinogen in einer Probe unter Verwendung der Zusammensetzung, sowie Verfahren zum Herstellen des Testmittels
DE69119576T2 (de) Verfahren zur Abtrennung, Identifizierung und Quantifizierung von Isoenzymen und Isoformen der alkalischen Phosphatase
DE2032270A1 (de) Diagnostische Reagenzien für die Bestimmung von gamma-Glutamyltranspeptidase im menschlichen Serum
DE3122917A1 (de) Waessrige cholesterin-standardloesung und verfahren zu ihrer herstellung
DE3873837T2 (de) Analytisches verfahren und element fuer eine ferroion-probe.
DE3046526A1 (de) Bestimmung von harnstoff

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8131 Rejection