JPS5995461A - β−リポタンパク質分析用発色剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明に、β−リポタンパ２班の同定における「β−リ
ポタンパク貞染料」の使用に係わる。さらに詳述すれば
、本発明に、β−リポタンパク質の半定量または定量に
おいて、緩衝溶液中、好適な陽イオン形４たぼ非イオン
形表面油性剤および金属塩１北に無機酸からの陰イオン
基の存在下で、［β−リポタンパク貢染料］ヲ便用する
ことに係わる。

リポタンパク買ニ、血液中で、液相担体として作用する
ことが知られている。これらは、漱相担体の組成、運は
れるタンパク′貞、サイズ、比重、電気体動における挙
動、および抗原特性によって区別されるｑつの主７ラク
シヨンに分けられる。

これらのうちＪ　ｊＷ４１の７２クシヨン、すなわちＶ
ＬＤＬ（Ｖｅｒｙ　Ｌｏｖｒ　Ｄｅｎｓｉｔｙ　Ｌｉｐ
ｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　；超低比重リポタンパク′尚）、
ＬＤＬ　（ＬＯＷ　Ｄｅｎｓｉｔｙ　Ｌｉｐｏｐｒｏｔ
ｅｉｎ；低比取りボタンバク實）およびＨＤＬ（Ｆｌｉ
ｇｈＤｅｎａｉ　ｔ７　Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　；高
比直りボタンバク質ハに絶食状態の血しよう中で測定さ
れる。また、食後の血しよう中でＵ％ｌＩ番目の７２ク
シヨン、すなわち乳び球、が見られるが、絶食時の血し
よう中に乳び球が存在することは病的である。

各種リポタンパク質７ラクシヨンの測定は、これらが動
脈硬化症に直接関係するため、臨床上きわめて興味深い
。各種リポタンパク貞７ラクシヨンを測定するための方
法Ｋに以下のものがおる。

＋１１　　遥気泳動法 （２）超遠心法 （３）　　免疫または免役電気泳動法 比色法も公知であり、この方法でに、タンノ（り′直に
結合したコレステロールおよび狛賀を測定することによ
Ｖ％はぼ正確にタンパク質Ｊ４度全知ることができる。

％ＫＬＤＬ、’ｆなわち動脈硬化症に直接関係するもの
と考えられているリポタンパク貞、ニついては、これら
を測定するための直接分光光度法は知られていない。

発明者らに、β−リポタンパク貢は特殊な態様で［β−
リボタシバク實染料」と反応することを見出し、本発明
の完成に至った。

本発明の第１の目的に、トリフェニルメチル導体から選
：ばれる［βーリボタンノ（り質東科」であって、一般
式（Ｉ） （式中、Ｒ，および８２　　は同一またば異なる）１０
ゲンでめ９ｓ　ｘに水素またば１価の１湯イオンであり
、さらに図示されていない７１ノール基の水素力五置換
されてもよい）を有する水素置換体を必須成分とするこ
とｔＷ徴とする［β−１７ボタンノくり質染料」の（β
ーリボタンノ（り質の同定におけるン使用法にある。

本発明の第２の目的に、以下の成分でなる組成にある。

（１）　　緩衝液中に含まれる「βーリボタンノぐり質
染料」 （１１）　　より特殊な反応を行なわせるために、サン
プル中に存在する妨害釡属イオンをキレ−トイじさせう
るキレート化剤 （ｉｔｉｌ　　無機註陰イオン基 ［ＩＶ）　　できれは嚇イオン形またはシトイオン形表
面活性剤 さらに詳述すれば、組す．ｘば以下の成分でなる。、（
ａ）　　ｐ’（　　會３ないし７に維持しうる緩，−］
系ｔｂ＋　　金属イオン、特に鉄全キレートイヒしうる
キレート化剤 （特に好筐いキレート化剤イ」ａクヱン威およびその塩
、ＥＤＴ−Ａおよびその塩であり、これらぼＸ＆　調剤
カプルとしても作用できる）（Ｃ）　　陽イオン形また
ｒｘＩμイオン剤表面活注Ｒ１、特に非疎水基がアルキ
ル基、である第りアンモニウム塩基の如き陽イオン表面
活性Ｍｌｌ （これらのうち、臭化セチルトＩＪメチルアンモニウム
が特に好適であること力Ｘ１匠明されているン（ｄ）　
　塩化物、硝酸塩、硫「亥塩、リン准虚などのり口き隘
イオン基 （混合物に塩またに酸の形で添刀０されるン本発明によ
る方法の効果を、ヒト血しようのりンバク質（，１ＩＴ
Ｉ当な条件下で「β−リポタンパク質染料」と反応する
）をクロマトグラフィーにまり単離し、これらを特殊な
抗血清により免疫学的に同定することによって測定した
。

同時に、分別された他の血しようタンパク質に同様の条
件下では［β−リポタンパク質染料］とは反応しはいこ
とを証明した。

夷／ｆ１例１ Ａ）試４：緩衝刊　Ｋ−酢酸塩　Ｏｊ　Ｍ相ヒセナルト
リノチルアンモ二つム　　、２７０７！５！／Ｊ１モル
ダントブルー／　　　　　　　　７０ツ／２ＭＩＣｌ２
ｅ６Ｈ２０、ＡＯｆ１句 クエン酸　　　　　　　　　　　θ、０　＋２ＡＭ三塩
基クエン酸Ｎａ　　　　　　　Ｏ，０３ｇＭＢ）試薬：
モルダントフル−１の代りにモルダントブルーコ？２ｉ
ｌ−濃度ｇＯツ／Ｅで使用し、他に上記試薬Ａ）と同− 実軸しｌｌコ ヒト血しよう中のβ−リポタンパク質の同定このように
して蒔られた反応混合物の吸収スペクトルを、試薬−一
および生垣食塩水０．／−でなる対照と比較して、分元
元度計により測定した。６弘Ｏないし！；９０ｎｍの間
の′ビーク（６０θないし６１θｎｍ　の間に最大吸収
金示す）に血しよう中にβ−リポタンパク質が存在する
ことを示した。

（Ｂ）　　上記試薬Ｂルーに血しょう０．／飢を添加し
、夷ｔ、（Ｉｉ例２−（Ａ）と同様に操作した。６グＯ
ないしｊ　７０　ｎｍ　　の間のピーク＜５ｔｒｏない
しＳデθｎｍ°の間に最大吸収を示す）に血しよう中に
β−リポタンパク質が存在することを示した〇夷／ｆａ
ｉ例３ 該試薬！成に以下の如く構成される。

（ａ）　　実施例／のド薬と同様の色原体溶液（ｂ）　
　色原体ｆ８にと同じではあるが、「β−リポタンパク
貞染料」を含まない対照溶液 夷１ト ヒト血しよう中のβ−リポタンパク質の定量次表に従っ
て、香物＊全ピペットにより試験管に注入した。

血しよう（７）　　　０．θｚ　　　　　　　ｏ、ｏｒ
　　　−生理食塩水＜ｒｎｅ）　　　　　　　　　０１
ｏｒ　　　　　　　　　　ｏ、ｏｒ色原体溶液Ｃｒｄ）
　　　／、！ｒ　　　　／、ｔ　　　　　　−一対照溶
液（Ｉｄ）　　　　　　　　　　／ｊ　　　／ｊ、２０
分後、サンプルのＯ，Ｄ、’ｉ対照／（札）と比較して
Ａ／ｆないし６コＯｎｍ　で測定し、サンプル対照の０
．Ｄ、を対照コ（、Ｑ２）と比較して６／ｊないし６Ｊ
　Ｏｎｍ　で測定した。Ａ（すなわちＡ、−Ａ２）は血
しよう中のβ−リボタンパ〉貞濃度に比例していた。

実施例 ヒト血しようサンプル対照本を夷捲例弘の方法でテスト
した。同時に、同じ血しようについて、ラジカル免疫拡
散法（ＢＥＨＲＩＮＧＷＥＲＫＥ　ＡＧにより供給され
たプレートンにより、β−リボタンノくり質全定量した
。これらλつの方法ＶＣ，Ｊ：って碍られた結果の相関
率（ｒ）にＯＪ　Ａであった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／　基本試薬としてトリフェニルメタン誘導体を包ます
   るβ−リポタンパク質分析用発色剤において、一般式（
   Ｉ） （式中、Ｒ１およびＲ２ｆｌ同−葦りは異なるハロゲン
   であり、Ｘは水素または７価の陽イオンであり、さらに
   図示されていないアリール基の水素が置換さルていても
   よい）を有する水素置換体を必須成分とすること全特徴
   とする、β−リポタンパク質分析用発色剤。 Ｑ　　トリフェニルメタン誘導体が好ましくはモルダン
   トブルー／　、（Ｃ，Ｉ、グＪｇ）０　）丑たにモルダ
   ントブルーコタ（Ｃ，ｒ、１１３ｇ２！　）である特許
   請求の範囲第／項記載の発色剤。 ３（ａ）緩衝溶液中に含まれる前記一般式（Ｉ）で表わ
   される少なくとも７つ化合物、（○）妨害金属イオンを
   キレート化しうるキレート化削、（Ｃ）無機注呉イオン
   基、および（ｄ）できれは巷イオン形または非イオン形
   表面活性剤全包含する特許請求の頓１」第７項記載の発
   色剤。