DE3213921A1 - Ribonukleotide von lincomycin- und clindamycinanalogen und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents
Ribonukleotide von lincomycin- und clindamycinanalogen und verfahren zu ihrer herstellungInfo
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Description
before the
Möhlstraße37 D-8000 München 80
Tel.: 089/982085-87 Telex: 0529802 hnkld Telegramme: ellipsoid
TUC 3713/3841
THE UPJOHN COMPANY,
Kalamazoo, Mich. 49001, USA
Kalamazoo, Mich. 49001, USA
Ribonukleotide von Lincomycin- und Clindamycinanalogen
und Verfahren zu ihrer Herstellung
RlboDUkleotide von Lincomycin- und Clinda-
myclnanalogen und Verfahren zu Ihrer Her- Stellung
Die Eigenschaften und die Herstellung des Antibiotikums Lincomycin sind aus der US-PS 3 086 912 bekannt.
Clindamycin ist aus der US-PS 3 496 163 bekannt. Beide Antibiotika werden umfangreich als Medikamente für
Menschen und Tiere eingesetzt.
Lincomycin besitzt folgende Formel:
(D
Clindamycin besitzt folgende Formel;
CH2
HnH
MN /C
MN /C
Il
H 0
CH3
H-C-CI
N C-H
OH H
SCH2
(2)
H OH
Lincomycin- und Clindamycin-3-Nukleotide sind aus der
US-PS 3 671 647 bekannt. Sämtliche aus der IJS-PS 3 671 647 bekannten Lincomycin- und Clindamycinverbindungen
besitzen die Propylhygrinsäureeinheit. Bei
Tests hat es sich gezeigt» daß diese 3-Nukleotide etwa 1/10 der in-vivo-Aktivität der Mutterverbindung gegen
S. aureus aufweisen.
Die Erfindung betrifft 3-Ribonukleotide von lincomycin-
und clindamycinartigen Verbindungen, bei denen die Propylhygrinsäureeinheit durch verschiedene zyklische
Aminosäuren ersetzt ist. In unerwarteter Weise besitzen diese Hukleotide eine ebenso hohe in-vivo-Aktivität
gegen Bakterien wie die Mutterverbindungen. Wegen dieser hochrelevanten Eigenschaften können die
!Jukieotide der erfindungagemäßen Verbindungen als Hauptkandidaten
zum medizinischen Gebrauch angesehen werden. Diese Verbindungen eignen sich ferner zur prophylaktischen
und therapeutischen Behandlung von durch parasitäre Protozoeen befallenen Menschen und Tieren. Wenn
das Protozon beispielsweise ein Malariaparasit ist, kann es sich bei dem befallenen Tier beispielsweise um
eine mit Plasmodium berghei befallene Maus handeln. Vögelf z.B. Enten, können mit P. lophurae, Hühner von
P. gallinaceum befallen sein. Säugetiere, wie Primaten, z.B. Affen, können mit P. cynomolgi infiziert
sein. Menschen können mit P. falciparum, P. vivax und P. malariae infiziert sein.
Mit parasitären Protozoren der Klasse Sporazoa, Ordnung
Coccidia (Mikroparasit, der Coccidiosis hervorruft) befallene Säugetiere können durch Verabreichung
der erfindungsgemäßen Verbindungen behandelt werden. So können beispielsweise mit Eimeria zurnii, E. bovis
oder E. ellipsoidalis infizierte Rinder, mit E. parva oder E. faurei infizierte Schafe und Ziegen, mit
E. debliecki, E. scabra oder Isospora suis infizierte
Schweine, mit Isospora bigemina, I. felis, E. canis oder E. felina infizierte Hunde und Katzen, mit
E. tenella infiziertes Geflügel, mit E. stiedae oder E. perforans infizierte Kaninchen und mit E. mustelae
infizierte Nerze erfolgreich behandelt werden.
Erfindungsgemäß lassen sich folgende lincomycin- und clindamycinartigen Verbindungen in ihre 3-Ribonukleotide
umwandeln:
25
25
1.
worin bedeuten:
R1 einen oder mehrere Substituenten in beliebiger
Stellung des Pyridinrings, die noch nicht von R2
besetzt ist, insbesondere ein Wasserstoff- oder Halogenatom, einen Alkylrest, einen substituierten
Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom
(en) im Alkylteil einschließlich der Isomeren, einen Cycloalkylrest, einen substituierten Cycloalkylrest,
ein substituiertes Sauerstoff- oder Stickstoffatom, einen Phenylrest, einen substituierten
Phenylrest, einen Rest der Formel -(CH2)n-0H oder der Formel -(CH2)J1-IiE4R5 mit η
gleich einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 8 und R. und R5 gleich Wasserstoffatomen oder
Alkylresten mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatomen),
einschließlich der Isomeren hiervon, und Rp einen einzelnen Substituenten in beliebiger
Stelle des Pyridinrings, die noch nicht von R1 besetzt
ist, insbesondere einen Rest der Formel
0
η
-C-X
-C-X
mit Σ entsprechend der Aminofunktion von 7(R)-Hydroxymethyl-1-thio-a-lincosaminid,
7(S)-Hydroxymethyl 1-thio-a-lincosaminid, 7(S)-Halogenmethyl-I-thio-a-lincosaminid,
7(R)-Halogenmethyl-I-thio-a-lincosaminid, 7(S)-Methoxymethyl-1-thio-a-lincosaminid,
7-Desoxy-7(S)-(methylthio)-methyl-1-thio-a-lincosaminid
, 7-Desoxy-7(S)-(2-hydroxyethylthio)-methyl-1-thio-a-lincosaminid
und 7-Desoxy-7(S)-(3-hydroxypropylthio)-methyl-1-thio-a-lincosaminid,
sowie deren pharmazeutisch akzeptable Salze.
2.
30
30
worin R1 und R2* die sich in 2-, 3->
4-* 5-t 6-, 7-» 8- oder 9-Stellung des Rings befinden können,
die angegebene Bedeutung besitzenι R, für H, OH,,
CpHc oder -CHg-CH2-OH steht und η einer ganzen
Zahl von 1 bis einschließlich 4 entspricht, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.
3.
10
10
worin A, B und E, die gleich oder verschieden sein können, jeweils für ein Stickstoff-, Sauerstoffoder
Schwefelatom oder einen Rest der Formel CRaR1
stehen* R1 und R2 die angegebene Bedeutung besitzen
und an einem beliebigen Ring-Kohlenstoff- oder Stickstoffatom hängen können und R.. mehrmals an beliebigen
Ringkohlenstoffatomen hängen kann, und
deren pharmazeutisch akzeptable Salze, und
worin A, B, D und S, die gleich oder verschieden sein können, jeweils für ein Stickstoff-, Sauerstoff-
oder Schwefelatom oder einen Rest der Formel CE1R1 stehen, R1 und R2 die angegebene Bedeutung
besitzen und an einem beliebigen Ring-Kohlenstoffoder-Stickstoffatom hängen können und R1 mehrmals
an beliebigen Ringkohlenstoffatomen hängen kann,
und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.
Anstelle des Hydroxylrestes in 3-Stellung der Lincoeaminideinheit
befindet sich ein Nukleotid der Adenyl-, Guanyl-, Cytidyl- oder Uridylsäure.
Die 3-Ribonukleotide gemäß der Erfindung erhält man
durch mikrobiologische Umwandlung. Die 3-(5'-Mbonukleotide)
erhält man durch Umwandlung der Verbindung U-57930:
I: R-H
CH3
I8 H-C-Cl
Γ CONH- CH
HO
OH
II. R =
OH
IV: R= -P-Q-CH2
OHOH
V: R
·'
P-O-CH2
OH OH
I. U-57930
Die Ausgangsverbindungen I - IV erhält man gemäß den Lehren der US-Patentanmeldung mit der Ser.No. 148 056.
Die 3-(5'-Ribonukleotide) der Verbindungen I - IV erhält
man gemäß der US-PS 3 671 647. Die Salze dieser Nucleotide erhält man ebenfalls gemäß den Lehren der
US-PS 3 671 647.
Die erfindungsgemäßen Nucleotide können entsprechend
der DE-OS 30 43 502 zu Arzneimitteln verarbeitet werden.
Diese Arzneimittel erhält manf indem man die jeweils
aktive Verbindung der aaO angegebenen Beispiele durch ein Nukleotid gemäß der Erfindung ersetzt. Der
Ersatz kann auf äquimolarer Basis erfolgen. 15
Im folgenden werden die Test- und Charakterisierungsmaßnahmen zur Bestimmung und Charakterisierung der
erfindungsgemäßen Nukleotide näher erläutert:
Test der 3-(5'
Da den erfindungsgemäßen 3-Ribonukleotiden eine invitro-Aktivität
gegen Bakterien fehlt» läßt sich ihre Bildung aus den antibakteriell wirksamen Ausgangsverbindungen
ohne weiteres durch Messen des Verluste dieser antibiotisehen Aktivität verfolgen. Zur Bestimmung
der Mengen an antibakteriell aktiver Ausgangsverbindung in Kulturfiltraten oder Reaktionsgemischen
bedient man sich eines Standardtests mit Sacrina lutea ATCC 9341.
Zur Bestimmung der Anwesenheit der 3-Ribonukleotide in
Gärbrühen, Extrakten und gereinigten Substanzen wird zunächst die Phosphodiesterbindung mit roher alkalischer
Phosphatase oder Schlangengiftphosphodiesterase
in der im folgenden beschriebenen Weise hydrolysiert. Die antibakteriell aktive Verbindung im Hydrolysat
wird dann nach einem Standardtest bestimmt.
Alkalische Phosphatase: Vorratslösungen (0,5 mg/ml, 0,54 Einheiten/mg) von alkalischer Phosphatase aus
Taubendarm, EC 3.1.3.1 (Sigma) werden in Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-hydrochlorid-Puffer
(0,01 M, pH-Wert: 8,0) zubereitet. Zu behandelnde Proben werden im Verhältnis 1:2 mit dem Enzym/Puffer-Gemisch verdünnt
und 18 h bei 280C inkubiert.
Schlangengiftphosphodiesterase: Es werden Vorratslösungen
(100 mg/ml, 0,026 Einheiten/mg) gereinigter Schlangengiftphosphodiesterase EC 3.1.4.1 (Sigma) in
destilliertem Wasser zubereitet. Die Inkubationsgemische enthalten 0,2 ml einer Lösung (1 mg/ml) der zu
behandelnden Probe in Wasser, 0,6 ml 0,01 M Tris-(hydrochlorid)-Puffer,
pH-Wert: 9»0, 0,1 ml 0,3 M MgCl2 und 0,1 ml der Enzymvorratslösung. Die Inkubation dauert
18 h bei 370C.
Milzphosphodie3terase: Es werden Vorratslösungen von
Milzphosphodiesterase EC 3.1.4.18 (Sigma) (1 mg/ml, 19»6 Einheiten/mg) in destilliertem Wasser zubereitet.
Die Inkubationsgemische enthalten 0,4 ml einer Lösung (0,5 mg/ml) der zu behandelnden Probe in Wasser,
0,5 ml 0,02 M Tris-Puffer, pH-Wert: 7»0 und 0,1 ml
der Enzymvorratslösung. Die Inkubation dauert 18 h bei 370C
- as-
Dünnschichtchromatographische .Analyse der Zubereitungen und enzyraatisehen Hydrolysate
Die Herstellung und Reinigung der 3-Ribonukleotide wird durch einen Test gegen S. lutea (vgl. oben) und
dünnschichtchromatographische Maßnahmen unter Verwendung von Silikagel G und Methylethylketon/Aceton/Wasser
(Volumenverhältnis: 186/52/20) oder Ethylacetat/Aceton/-Wasser
(8:5:1) als Laufmittel überwacht. Die bioaktiven Ausgangsverbindungen werden durch Bioautographie auf
mit S. lutea beimpftem Agar nachgewiesen.
Die Produkte der enzymatischen oder chemischen Hydrolyse der 3-Nukleotide werden mittels folgender dünnschichtchromatographischer
Systeme getrennt: 15
A: Silikagel-GP-Platten: Wasser als Laufmittel.
B: Silikagel-GF-Platten: n-Propanol/konz. Ammoniumhydroxid/Wasser
(Volumenverhältnis: 55:10:35).
C: UM-PoIygramcellulose 300: 1-Butanol/Wasser/Ameisensäure
(Volumenverhältnis: 77:13:10) als Laufmittel.
DV-absorbierende Substanzen werden mittels einer kurzwelliges
UV-Licht abstrahlenden Lampe nachgewiesen.
Bioinaktive» UV-nicht-absorbierende Substanzen werden
mittels eines Permanganat/Perjodat-Sprühreagenzes nachgewiesen. Der Nachweis bioaktiver Nukleotidsubstanzen
erfolgt durch Bioautographie auf mit S. lutea beimpftem Agar.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Züchtungsbzw. Permentierungs- und Reinigungsmaßnahmen zur Herstellung
des Nukleotids der mit Ü-5793OE bezeichneten
Verbindung. In entsprechender oder äquivalenter Weise erhält man auch die 3-Ribonukleotide der anderen Aus-
gangsverbxndungen 1 bis 4.
Sofern nicht anders angegeben bedeuten sämtliche Prozentangaben
"Gew.-#n. Sämtliche lösungsmittelgemische
sind, sofern nicht anders angegeben» durch ihre VoIumenverhältnisse
definiert.
Beispiel
10
10
A. Züchtung;
Streptomyces rochei NRRL 3533 wird auf einem Drehrüttler
in einem Medium aus 10g/l Glukose» 4 g/l Difco-Pepton, 4 g/l Difco-Hefeextrakt, 0,5 g/l
MgSO4·7Η2Ο, 2,0 g/l KH2PO4 und 4 g/l K2HPO4 drei Tage
lang bei 280C wachsen gelassen. Das gewachsene Mycel
dient zum Beimpfen eines dieselben Bestandteile enthaltenen Gärmediums. Die Gärung bzw. Fermentation erfolgt
48 h lang bei 280C auf einem Drehrüttler. Nach
beendeter 48-stündiger Inkubation wird so viel U-57930 zugesetzt, bis eine Endkonzentration von 50 mg/l erreicht
ist. Danach wird bei 320C weiter fermentiert. Nach 12 h wird weitere Verbindung U-57930 bis zu einer
Gesamtkonzentration von I50 mg/l zugesetzt. Nach weiteren 12 h wird die Konzentration U-57930 auf
150 mg/l erhöht. Nach der letzten Zugabe der Verbindung
U-57930 wird noch 24 h lang bei 320C weiter fermentiert. Danach werden die KuIturfiltrate gesammelt.
Es zeigt sich, daß sie nicht mehr als 1 mg/l Verbindung U-57930 enthalten. Die restlichen 249 mg/l
sind in eine bioinaktive Substanz umgewandelt.
S. rochei NERL 3533 stellt einen bekannten Mikroorganismus dar. Dieser ist auf Anforderung von der NRRL-Einterlegungsstelle
(Northern Utilization and Research
Division, Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, Peoria, 111., USA) erhältlich.
B. Isolierungs- und Reinigungsmaßnahmen;
Isolierung von U-57930-3-Ribonukleotiden aus der Gärbrühe:
Adsorption auf AmberliteXAD-2: Etwa 12 1 Gärbrühe mit
3 g inaktiviertem U-57930 wird bei dem Ernte-pH-Wert von 7»7 unter Verwendung eines Filterhilfsmittels
filtriert, worauf der Mycelkuehen mit 1,2 1 Wasser gewaschen und dann verworfen wird. Das klare Filtrat
und das Waschwasser werden miteinander vereinigt, auf einen pH-Wert von 6,0 eingestellt und über eine aus
600 ml Amberlite ZAD-2 hergestellte Säule mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 40 ml/min laufengelassen.
Das ausgebrauchte Material wird vor und nach der Behandlung mit alkalischer Phosphatase auf seine Bioaktivität
hin getestet und dann verworfen. Die Säule wird mit 2 1 Wasser gewaschen. Auch die wäßrige Waschflüssigkeit
hat sich vor und nach der Behandlung mit alkalischer Phosphatase als bioinaktiv erwiesen und
wird verworfen. Danach wird die Säule mit Methanol/-Wasser (Volumenverhältnis: 70:30) eluiert. Mit einer
Geschwindigkeit von 20 ml/min werden 20 ml Fraktionen aufgefangen. Eine Prüfung auf die Bioaktivität vor (-E)
und nach (+E) der Behandlung mit alkalischer Phosphatase zeigt folgende Ergebnisse:
| Fraktion Nr. | Zone (i | S. lutea) |
| -E | +S | |
| 5 | 0 | 0 |
| 10 | 0 | 0 |
| 11 | 0 | 0 |
| 13 | 0 | 36 |
| 20 | 33 | 55 |
| 25 | 32 | 54 |
| 40 | 31 | 50 |
| 45 | 29 | 48 |
| 50 | 26 | 39 |
| 55 | 23 | 38 |
| 60 | 21 | 37 |
| 65 | 19 | 27 |
| 70 | 17 | 26 |
| 75 | 17 | 26 |
| 80 | 16 | 26 |
| 85 | 16 | 26 |
| 90 | 16 | 26 |
| 95 | 16 | 26 |
| 100 | 16 | 26 |
| 110 | 16 | 21 |
| 120 | 15 | ' 21 |
| 130 | 15 | 21 |
| 140 | 15 | 21 |
| 150 | 15 | 21 |
| 160 | 15 | 21 |
| 170 | 15 | 21 |
| 180 | 15 | 21 |
| 190 | 15 | 21 |
| 200 | 15 | 21 |
Die Fraktionen 12 "bis 80 werden miteinander vereinigt,
zu einer wäßrigen Lösung eingeengt und gefriergetrock-35
net, wobei 12,22 g prep ADA-34.1 erhalten werden.
Bei einer weiteren Versuchsreihe werden 6 1 Gärbrühe mit 2 g "inaktiviertem" U-57930 in der geschilderten
Weise aufgearbeitet. Die methanolischen Eluate aus der 40 Amberlite XAD-2-Säule werden als ADA-143B bezeichnet.
Diese Lösung wird nicht zur Trockene eingedampft, statt-
dessen wird sie in der im folgenden beschriebenen Weise durch Dowex-1-Chromatographie gereinigt.
Dowex-1-Chromatographie: Die Säule wird aus 300 ml Dowex-1 (X-4) in Acetatform hergestellt. Danach wird
durch die Säule die methanolische Lösung ADA-H3B (pH-Wert: 8f2) laufengelassen. Die durchgelaufene
Flüssigkeit wird in 20 ml-Fraktionen mit einer Geschwindigkeit von 2,5 ml/min aufgefangen (Fraktionen
1 Ms 60). Danach wird die Säule mit 1,5 1 Wasser gewaschen (10 ml/min; Fraktionen 66 Ms 108). Schließlich
wird die Säule mit 5#iger Essigsäure (Geschwindigkeit: 10 ml/min; Fraktionen 109 bis 310) eluiert. Folgende
Pools werden gebildet:
| Pool 1 | Fraktionen | 1- 80 | 1000 | ml | (ADA-1A) |
| CVl | Fraktionen | 81-110 | 600 | ml | (ADA-2A) |
| 3 | Fraktionen | 111-130 | 450 | ml | (ADA-3A) |
| 4 | Fraktionen | 131-150 | ,450 | ml | (ADA-4A) |
| VJl | Fraktionen | 151-190 | 900 | ml | (ADA-5A) |
| 6 | Fraktionen | 191-230 | 900 | ml | (ADA-6A) |
| 7 | Fraktionen | 231-270 | 900 | ml | (ADA-7A) |
| 8 | Fraktionen | 271-310 | 900 | ml | (ADA-8A) |
Eine Prüfung vor (-E) und nach (+E) der Behandlung mit alkalischer Phosphatase ergibt folgende Ergebnisse:
Zone (S. lutea) 30
| -E | +E | |
| Pool 1 | 31 | 52 |
| 2 | 36 | 49 |
| 3 | 34 | 45 |
| 4 | 18 | 40 |
| 5 | 25 | 30 |
| 6 | 27 | 29 |
| 7 | 27 | 29 |
| 8 | 29 | 31 |
Die Pools 1 und 2 werden miteinander vereinigt, zu einer wäßrigen Lösung eingeengt und gefriergetrocknet,
wobei 1,48 g prep ADA-2.1 erhalten werden.
Die Pools 3 und 4 werden miteinander vereinigt und in entsprechender Weise aufgearbeitet, wobei 2,5 g
ADA-2.2 erhalten werden.
Die Produkte ADA-2.1 und -2.2 liefern nach der Behandlung
mit alkalischer Phosphatase U-57930.
Die Produkte ADA-34.1» -2.1 und -2.2 werden miteinander
vereinigt und in der im folgenden geschilderten Weise durch Gegendoppelstromverteilung gereinigt:
Gegendoppelstromverteilung:
16,20 g des durch Vereinigung der Produkte ADA-34.1»
-2.1 und -2.2 erhaltenen Materials werden jeweils in
25 ml eines Lösungsmittelsystems aus gleichen Volumina 1-Butanol und Wasser gelöst, worauf die Lösungen in die
zentralen Röhrchen einer vollständig aus Glas bestehenden Gegendoppelstromverteilungsvorrichtung (100 Röhrchen,
25 ml/Phase) gegossen werden. Die Verteilung wird nach 150 Übergängen auf die Bioaktivität vor (-E)
und nach (+E) der Behandlung mit alkalischer Phosphatase analysiert. Hierbei werden folgende Ergebnisse erhalten:
| 3213921 Unterer Sammler |
Zone (S. lutea-empfindlich.) | +E | +E |
| -E | 31 | 45 | |
| VJl | 29 | 33 | 46 |
| 10 | 31 | 33 | 47 |
| Ul | 30 | 33 | 47,5 |
| 20 | 27 | 33 | 47 |
| 25 - | 22 | 34 | 47 |
| 30 | 17 | 34 | 48 |
| 35 | 0 | 33,5 | 48 |
| 40 | 0 | 33 | 48 |
| 45 | 0 | 34 | 50 |
| 50 | 0 | 34 | 50 |
| 55 | 0 | 35 | |
| 60 | 0 | 36 | |
| 65 | 0 | 38 | |
| 70 | 0 | 39 | |
| 75 | 0 | 40 | |
| 80 | 0 | 41 | |
| 85 | 0 | 42 | |
| 90 | 0 | 43 | |
| 95 | 0 | 43,5 | |
| 100 | 0 | Zone (S. lutea-empfindlich) | |
| Untere Maschine | -E | ||
| 0 | |||
| 50 | Spuren | ||
| 45 | 15 | ||
| 40 | 17 | ||
| 35 | 17 | ||
| 30 | 18 | ||
| 25 | 17.5 | ||
| 20 | 17 | ||
| 15 | 16 | ||
| 10 | 15 | ||
| 5 | Spuren | ||
| 0 |
-3Ä-
Obere Maschine Zone (S. lutea-empfindlich)
-E +E
| VJl | Spuren | 49 |
| 10 | Spuren | 48,5 |
| 15 | Spuren | 48 |
| 20 | Spuren | 48,5 |
| 25 | Spuren | 49 |
| 30 | 30 | 50 |
| 35 | Spuren | 51 |
| 40 | 15 | 52 |
| 45 | 16 | 53 |
| 50 | 21 | 54 |
| Oberer Sammler | Zone (S. lutea-e | mpfindl |
| -E | +E |
100 17,5 54
95 17 53,5
90 19 53,5
85 20 53,5
80 21 53»5
75 22 , 53,5
70 24 53,5
65 26 53,5
60 28 53,5
55 30 52,5
50 32,5 52
45 33 52
40 35 52
35 36 52
30 39 49
25 41 47
20 43 48
15 43 46
10 43 43
5 35 35
Es werden folgende Pools gebildet. Jeder Pool wird zu einer wäßrigen Lösung eingeengt und gefriergetrocknet,
wobei folgende Produkte erhalten werden:
'-33
Pool I: Unterer Sammler 1-50;
Pool II: Unterer Sammler 51-100; untere Maschine 50-30;
Pool III: Untere Maschine 29-0; obere Maschine 1-50;
oberer Sammler 100-30.
Die erhaltenen Produkte sind folgende:
Aus Pool I - Produkt ADA-47.1 (9.78 g)
Aus Pool II - Produkt ADA-47.2 (0,30 g) Aus Pool III - Produkt ADA-47.3 (5.29 g).
Die Produkte ADA-47.2 und -47.3 werden miteinander vereinigt und in der im folgenden beschriebenen Weise
durch die DEAE-Sephadex-Chromatographie gereinigt.
DEAE-Sephadex-Chromatographie: 300 g DEAE-Sephadex
(A-25) werden 1 h lang mit Wasser und 2 h lang mit 0)5 H wäßriger Natriumhydroxidlösung verrührt, worauf
der Ionenaustauscher so lange mit Wasser gewaschen wird, bis der pH-Wert etwa 7,5 beträgt. Danach wird
der Ionenaustauscher 2 h lang mit 0,5 N wäßriger Essigsäure verrührt, mit Wasser auf einen neutralen
pH-Wert gewaschen, in eine Säule gegossen und unter -i einem Druck von etwa 920 g auf konstante Höhe gepackt.
Danach wird die Säule mit 4 1 Wasser, 8 1 0,1#iger wäßriger Lösung von tris-(Hydroxymethyl)-aminomethan
(THAM) und 3 1 0,03 M THAM-Acetatpuffer (pH-Wert: 8,0),
der durch Auflösen von 3» 64 g THAM und 800 ml Wasser, Einstellen des pH-Werts auf 8,0 mit Eisessig und Auffüllen
auf ein Volumen von 1 1 zubereitet worden war, gewaschen.
Das Ausgangsmaterial, nämlich 5»50 g der Produkte
ADA-47.2 und -47.3» wird in 20 ml 0,03 M THAM-Acetat-
1 Puffer eines pH-Werts von 8,0 gelöst und auf die Säule gegossen. Die Säule wird dann im Abwärtsstrom mit 0,3 M
THAM-Acetat-Puffer eines pH-Werts von 8,0 eluiert. Jeweils
20 ml-Fraktionen 1 bis 190 werden aufgefangen. 5 Danach wird die Säule im Aufwärtsstrom eluiert, wobei
jeweils 1 1 umfassende Fraktionen A, B, C, D und E aufgefangen werden. Eine Prüfung der Bioaktivität vor
(-E) und nach (+E) der Behandlung mit alkalischer Phosphatase ergibt folgende Ergebnisse:
10
Zone (S. lutea-empfindlich)
| Fraktion Nr. | -E | +E |
| 3 | 0 | 0 |
| 6 | 0 | 0 |
| 9 | 0 | 0 |
| 12 | 0 | 0 |
| 15 | 0 | 0 |
| 18 | 0 | 0 |
| 21 | 0 | 0 |
| 24 | 0 | 0 |
| 27 | 0 | 0 |
| 30 | 0 | 0 |
| 33 | 0 | 0 |
| 36 | 38 | 39 |
| 39 | 43,5 | 44 |
| 42 | 36 | 36 |
| 45 | 23,5 | 23 |
| 48 | 15 | 16 |
| 51 | 0 | 0 |
| 54 | 0 | 0 |
| 57 | 0 | 0 |
| 60 | 0 | 0 |
| 63 | 0 | 0 |
| 66 | 0 | 0 |
| 69 | 15 | 16 |
| 72 | 17 | 20 |
| 75 | 21 | 26 |
| 78 | 23 | 27 |
| 81 | 23 | 30 |
| 84 | 23 | 29 |
| 87 | 22 | 24 |
| 90 | 21 | 23 |
| 93 | 21 | 24 |
| 96 | 22 | 26 |
| 99 | 21 | 35 |
| 102 | 22 | 44 |
| 105 | 23 | •51 |
| Fraktion Nr. | -E | +E |
| 108 | 22,5 | 54 |
| 111 | 22,5 | 52,5 |
| 114 | 22 | 52 |
| 117 | 22 | 54,5 |
| 120 | 20,5 | 56 |
| 123 | 20 | 56 |
Es werden folgende Pools gebildet:
Pool I Fraktionen 34-38, 280 ml (ADA-69B)
Pool II Fraktionen 75-90, 330 ml (ADA-69C)
Pool III Fraktionen 101-111, 180ml (ADA-69D)
Pool IV Fraktionen 114-150, 580 ml (ADA-69E)
Pool V Fraktionen 151-164, 100 ml (ADA-69F)
Pool VI Fraktionen 165-186, 125 πα (ADA-69G)
Pool VII Fraktion C, 1 liter (ADA-69A).
Der Pool 1 (ADA-69B) enthält nicht veränderte Verbindung U-57930 und wird verworfen.
Der Pool II (ADA-69C) enthält eine unbekannte Substanz,
die bei der Behandlung mit alkalischer Phosphatase die Verbindung ü-57930 liefert. UV-Spektrum: \„a- 275 nm.
Der Pool III (ADA-69D) enthält U-57930-Cytidylat und
wird in der später beschriebenen Weise weiterverarbeitet. UV-Spektrum: λ 270 nm.
30
30
Der Pool IV (ADA-69E) enthält U-57930-Adenylat und wird
in der später beschriebenen Weise weiterverarbeitet. UV-Spektrum: Amax 260 nm.
Der Pool V (ADA-69F) enthält ein Gemisch aus U-57930-Adenylat, U-57930-Uridylat und U-57930-Guanylat. Diese
Lösung wird in der später beschriebenen Weise weiterverarbeitet.
Der Pool VI (ADA-69G) enthält U-57930-Guanylat und wird in der später folgenden Weise weiterverarbeitet
UY-Spektrum:A ___ 254 nm (Schulter bei 275).
Der Pool VII (ADA-69A) enthält ein Gemisch aus U-57930-Guanylat
und U-57930-Uridylat. Diese lösung wird in der
später beschriebenen Weise weiterverarbeitet.
Isolierung von im wesentlichen reinem U-57930-Cytidylatf
U-57930-Adenylat und U-57930-Guanylat aus den Pools III,
IV bzw. VI. Entfernung des THAM-Acetat-Puffers durch
Amberlite XAD-2-Chromatographie:
Die in der geschilderten Weise erhaltenen Pools III, IV und VI werden über Amberlite XAD-2-Säulen laufengelassen.
Die durchgelaufenen Flüssigkeiten werden verworfen. Danach werden die Säulen mit Wasser gewaschen
und mit einem Methanol/Wasser-Gemisch (Volumenverhältnis: 70:30) eluiert. Die Fraktionen werden mittels
UV-licht analysiert und vor und ,nach der Behandlung mit alkalischer Phosphatase auf ihre Bioaktivität
hin untersucht. Geeignete Fraktionen werden miteinander vereinigt, zu einer wäßrigen lösung eingeengt und gefriergetrocknet.
Einzelheiten bezüglich der Menge an für jeden Pool verwendetem Amberlite XAD-2, der Menge
an Waschwasser, der Menge an methanolischem Eluat und der Menge an erhaltenem Produkt finden sich in der
folgenden tabellarischen Zusammenstellung:
Pool verwendete Wasch- methanoli- isoliertes
Menge wasser sches Produkt in
Amberlite XAD-2 in ml Eluat in ml mg
in ml
III 50 200 300 150
IV 200 800 600 3510 VI 50 200 300 470
Bas aus Pool III erhaltene Produkt wird als ADA-73.1,
das aus Pool IV erhaltene Produkt als ADA-74.1 und das aus Pool VI erhaltene Produkt als ADA-75.1 bezeichnet.
5
5
Entfernung des THAM-Acetatpuffers aus Pool V (ADA-69I1)
und Pool VII (ADA-69A) durch Amberlite XAD-2-Chromatographie:
Die Säule wird aus 300 ml Amberlite XAD-2 hergestellt.
Die ein Gemisch aus U-57930-Adenylat, U-57930-Uridylat und U-57930-Guanylat enthaltenden Pools V und VII werden
durch die Säule laufengelassen. Die durchgelaufene Flüssigkeit wird verworfen. Danach wird die Säule mit
600 ml Wasser gewaschen. Das durchgelaufene Wasser wird ebenfalls verworfen. Schließlich wird die Säule
mit einem Methanol/Wasser-Gemisch (Volumenverhältnis: 70:30) eluiert. Fraktionen mit bioaktivem Material nach
der Behandlung mit alkalischer Phosphatase werden miteinander vereinigt (300 ml), zu einer wäßrigen Lösung
eingeengt und gefriergetrocknet, wobei 670 mg Produkt ADA-71.1 erhalten werden. Das Produkt ADA-71.1 wird in
der später beschriebenen Weise weiterbehandelt.
Trennung von U-57930-Uridylat von U-57930-Adenylat und U-57930-Guanylat. DEAE-Sephadex-Chromatographie:
600 ml von in der geschilderten Weise zubereitetem DEAE-Sephadex in Acetatform werden mit 0,03 M THAM-Acetat-Puffer
eines pH-Werts von 8,0 gewaschen und in eine Glassäule eines Innendurchmessers von 4»5 cm
unter hydrostatischem Druck bis zu einer Höhe von 40 cm gepackt.
Nun wird das Produkt ADA-71.1 in 10 ml 0,03 M THAM-Acetat-Puffer
eines pH-Wertß von 8,0 gelöst und auf die Säule gegossen. Die Säule wird eluiert mit:
1. 0,03 M THAM-Acetat eines pH-Werts von 8,0
(Fraktionen 1-79)
2. 0,12 M TEAM-Acetat eines pH-Werts von 8,0 (Fraktionen 80-395)
3. 0,25 M THAM-Acetat eines pH-Werts von 8,0 (Fraktionen 396-750).
Aufgefangen werden 20 ml umfassende Fraktionen. Sie werden mit Hilfe von UV-Licht analysiert und auf ihre
Bioaktivität vor und nach der Behandlung mit alkalischer Phosphatase hin untersucht. Me Fraktionen
51-60 enthalten U-57930-Adenylat, die Fraktionen 62-73 (ADA-94.B) enthalten U-57930-Uridylat und die
Fraktionen 75-110 enthalten U-57930-Guanylat.
Isolierung von im wesentlichen reinem U-57930-Uridylat. Entfernung des THAM-Acetat-Puffers durch Amberlite XAD-2-Chromat
ο graphi e:
Die Säule wird aus 50 ml Amberlite XAD-2 hergestellt.
Die Säule wird aus 50 ml Amberlite XAD-2 hergestellt.
Der U-57930-Uridylat enthaltende Pool ADA-94B wird mit einer Geschwindigkeit von 2 ml/min über die Säule laufengelassen.
Die durchgelaufene Flüssigkeit wird verworfen. Danach wird die Säule mit 200 ml Wasser gewaschen.
Das durchgelaufene Waschwasser wird ebenfalls verworfen. Schließlich wird die Säule mit einem
Methanol/Wasser-Gemisch (Volumenverhältnis: 70:30) eluiert. Die - mittels UV-Licht bestimmt - U-57930-Uridylat
enthaltenden Fraktionen (200 ml) werden miteinander vereinigt und zu einer wäßrigen Lösung eingeengt
und gefriergetrocknet, wobei 60 mg Produkt ADA-95.1 erhalten werden.
Charakterisierung von U-5793O-3'-(5'-Cytidylat)
1. Tabellarische Auflistung des IR-Spektrums:
Folgende tabellarische Auflistungen enthalten Angaben über die IR-Absorptionen (Nujol und KBr):
| Banden | Inten | Art | Banden | Inten | Art |
| fre | sität | fre | sität | ||
| quenz | quenz | ||||
| 3417.3 | 24 | SH | 1249.0 | 33 | SH |
| 3341.1 | 19 | BRD | 1214.3 | 21 | AVG |
| 3211.8 | 19 | BRD | 1146.8 | 42 | SH |
| 3108.6 | 25 | BRD | 1089.9 | 15 | BRD |
| 2951.4 | 2 | BRD M | 1070.6 | 12 | AVG |
| 2926.3 | 1 | BRD M | 1056.1 | 14 | SH |
| 2854.9 | 2 | BRD M | 992.4 | 39 | AVG |
| 2729.6 | 48 | BRD M | 972.2 | 39 | AVG |
| 2693.9 | 51 | SH | 955.8 | 49 | SH |
| 2535.7 | 65 | SH | 930.7 | 51 | AVG |
| 1649.3 | 8 | AVG | 889.2 | 36 | AVG |
| 1610.7 | 26 | AVG | 860.3 | 52 | AVG |
| 1575.0 | 35 | AVG | 849.7 | 53 | AVG |
| 1528.7 | 31 | AVG | 804.4 | 46 | SH |
| 1489.2 | 23 | AVG | 788.9 | 40 | AVG |
| 1462.2 | 9 | AVG M | 721.4 | 44 | AVG M |
| 1404.3 | 41 | BRD | 705.0 | 47 | BRD |
| 1377.3 | 18 | AVG M | 654.9 | 45 | SH |
| 1368.6 | 31 | SH M | 632.7 | 38 | AVG |
| 1286.6 | 34 | AVG |
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellenzahlen
(cm~ ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (%T) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BHD = breit; AVG- = Durchschnitt; SHP = scharf;
SH = Schulter. 35 Ausgegebene Peak-Liste: * zeigt zusätzliche Peaks.
M: Mögliche Störung durch das Mineralöl.
25 stärkste Peaks
| jftr | Frequenz | * | Frequenz |
| 1 | 2926.2 | 24 | 3417.2 |
| 2 | 2951.3 | 25 | 3108.5 |
| 2 | 2854.8 | 26 | 1610.6 |
| 8 | 1649.2 | 31 | 1528.6 |
| 9 | 1462.1 | 31 | 1368.5 |
| 12 | 1070.5 | 33 | 1249.0 |
| 14 | 1056.0 | 34 | 1286.5 |
| 15 | 1089.8 | 35 | 1575.0 |
| 18 | 1377.2 | 36 | 889.1 |
| 19 | 3341.0 | 38 | 632.6 |
| 19 | 3211.7 | 39 | 992.3 |
| 21 | 1214.2 | 39 | 972.1 |
| 23 | 1489.1 |
15 Präparat: Mineralölgemisch
Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 87 β 1648.0
Prozentuale Durchlässigkeit bei 3800 (cm"1): 83 Dichte (cnfVpt): 0,964.
Banden-Inten- Art
fre- sität
quenz
quenz
3408.6 10 BRD
3102.8 26 SH 2963.9 28 AVG
2930.2 27 BRD 2878.1 37 AVG
2862.7 39 SH 2768.1 51 SH
2511.6 65 BRD
1649.3 4 AVG *n 1614.6 20 SH
1576.0 30 AVG
1528.7 28 AVG
1491.1 21 AVG
1462.2 33 AVG 1450.6 35 SH
1404.3 37 AVG 1384.0 33 AVG
1360.9 42 SH
1286.6 32 AVG
1251.9 30 SH 1215.2 18 AVG
| Banden | Inten | Art |
| fre | sität | |
| quenz | ||
| 1088.9 | 12 | BRD |
| 1071.5 | 9 | AVG |
| 1057.1 | 11 | SH |
| 992.4 | 35 | AVG |
| 972.2 | 36 | AVG |
| 956.8 | 45 | SH |
| 928.8 | 48 | AVG |
| 889.2 | 32 | AVG |
| 859.3 | 47 | . AVG |
| 851.6 | 47 | SH |
| 804.4 | 39 | SH |
| 788.9 | 34 | AVG |
| 743.6 | 47 | SH |
| 705.0 | 40 | AVG |
| 654.9 | 39 | SH |
| 634.6 | 35 | AVG |
| 595.1 | 33 | AVG |
| 572.9 | 33 | AVG |
| 525.6 | 32 | AVG |
| 447.5 | 36 | AVG |
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellenzahlen
(cm" ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (#T) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BED = breit; AVG = Durchschnitt; SHP = scharf; SH = Schulter.
Ausgegebene Peak-Idste: * zeigt zusätzliche Peaks.
25 stärkste Peaks 15
| Frequenz | 30 | Frequenz | |
| 4 | 1649.2 | 32 | 1251.8 |
| 9 | 1071.5 | 32 | 1286.5 |
| 10 | 3408.5 | 32 | 889.1 |
| 11 | 1057.0 | 33 | . 525.5 |
| 12 | 1088.8 | 33 | 1462.1 |
| 18 | 1215.1 | 33 | 1384.0 |
| 20 | 1614.5 | 33 | 595.0 |
| 21 | 1491.0 | 34 | 572.8 |
| 26 | 3102.7 | 35 | 788.8 |
| 27 | 2930.1 | 35 | 1450.5 |
| 28 | 2963.8 | 35 | 992.3 |
| 28 | 1528.6 | 634.5 | |
| 30 | 1576.0 | ||
Präparat: KBR-PeIlet
Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 100 @ 403,1 Prozentuale Durchlässigkeit bei 4000 (cm""1):
Dichte (cm"1/pt): 0,964.
2. UV-Absorptionsspektrum (λ max (a)):
In Wasser bei pH-Wert von 2,0: 279 mn (6,5)
pH-Wert von 7,0: 270 nm (9,9) pH-Wert von 11,0: 271 nm (9,6). 5
3. Elementaranalyse:
Molekülformel: C26Ii43N5°12 SC1I>»
Molekulargewicht: 715
Berechnet: C 43,64 H 6,01 N 9,79 0 26,88 S 4,47 Cl 4,89 P 4,33.
4. Optische Drehung:
[ctj25 = +107° (c, 0,854, Wasser).
5· löslichkeitsverhalten:
Sehr gut löslich in Wasser, Methanol und Ethanol. Schwach löslich in Aceton und sonstigen Ketonen,
Ethylacetat und sonstigen Estern, Chloroform und Methylenchlorid. Unlöslich in gesättigten Kohlen-Wasserstofflösungsmitteln.
6. Antibakterielle Aktivität:
U-5793O-3-(5'-Cytidylat) ist in vitro nicht aktiv.
Bei der Behandlung mit alkalischer Phosphatase oder Phosphodiesterase I entsteht U-57930, das gegen
die verschiedensten G -Organismen sowohl in vitro als auch in vivo hochaktiv ist.
7. Fp: 205° bis 2070C (unter Zersetzung).
Mi-
Charakterisierung von U-5793O-3'-(5l-Adenylat)
1. Tabellarische Auflistung des IR-Spektrums:
Folgende tabellarische Auflistungen enthalten Angaben über die IR-Absorptionen (Nujol und KBr):
Bandenfre quenz
3335.3 3267.8 3210.8 2954.3 2924.4 2868.4 2854.9 2727.6 2520.2 1684.0
1641.6 1600.1 1576.0 1550.9 1509.4 1463.
1420.
1377.
1367.6 1332.0 1299.2
.1 .7 .3
Inten sität
16
17
17
46 61 22 14 28 31 43 53 15 35 24 35 36 34
- Art
BRD
BRD
BRD
BRD M
BRD M
SH M
AVG M
BRD M
BRD
SH
AVG
AVG
AVG
SH
SH
AVG M
AVG
AVG M
SH M
AVG
AVG
| Banden | Inten | Art |
| fre | sität | |
| quenz | ||
| 1245.1 | 24 | SH |
| 1213.3 | 17 | AVG |
| 1175.7 | 43 | SH |
| 1146.8 | 40 | SH |
| 1089.9 | 13 | AVG |
| 1069.6 | 10 | AVG |
| 1055.1 | 13 | SH |
| 991.5 | 35 | AVG |
| 972.2 | 36 | AVG |
| 957.7 | 45 | SH |
| 930.7 | 48 | AVG |
| 889.2 | 32 | AVG |
| 861.3 | 47 | AVG |
| 848.7 | 49 | AVG |
| 818.8 | 45 | AVG |
| 798.6 | 40 | AVG |
| 722.4 | 36 | AVG M |
| 708.9 | 40 | SH |
| 647.1 | 33 | SH |
| 635.6 | 31 | AVG |
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellenzahlen
(cm ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (#T) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BRD = breit; AVG = Durchschnitt;
SHP - scharf;
SH - Schulter.
Ausgegebene Peak-liste: * zeigt zusätzliche Peaks.
M: Mögliche Störung durch das Mineralöl.
25 stärkste Peaks
| ft | Frequenz | *T | Frequenz |
| CVJ | 2924.3 | 22 | 1684.0 |
| 3 | 2954.2 | 24 | 1377.2 |
| 4 | 2854.8 | 24 | 1245.0 |
| 6 | 2868.3 | 28 | 1600.0 |
| 10 | 1069.5 | 31 | 1576.0 |
| 13 | 1089.8 | 31 | 635.5 |
| 13 | 1055.0 | 32 | 889.1 |
| 14 | 1641.5 | 33 | 647.0 |
| 15 | 1463.0 | 34 | 1299.1 |
| 16 | 3335.2 | 35 | 1420.6 |
| 17 | 3267.7 | 35 | 1367.5 |
| 17 | 3210.7 | 35 | 991.5 |
| 17 | 1213.2 |
Präparat: Mineralölmischung
15 Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 85 β 1864.4
Prozentuale Durchlässigkeit bei 3800 (cm~ ): Dichte (cm*"1 /pt): 0.964
| 321 | 3921 | Banden | Inten | m » f λ | |
| Banden | Inten | Art | fre | sität | Art |
| fre | sität | quenz | |||
| quenz | 1090.8 | 8 | |||
| 3375.8 | 7 | BRD | 1069.6 | 5 | AVG |
| 3223.4 | 10 | BRD | 1050.3 | 8 | AVG |
| 3124.0 | 17 | SH | 990.5 | 27 | SH |
| 2963.0 | 22 | AVG | 972.2 | 29 | AVG |
| 2929.2 | 22 | BRD | 956.8 | 38 | AVG |
| 2878.1 | 31 | AVG | 929.8 | 42 | SH |
| 2863.6 | 33 | SH | 889.2 | 24 | AVG |
| 2756.6 | 45 | BRD | 861.3 | 38 | AVG |
| 2521.2 | 60 | BRD | 851.6 | 40 | AVG |
| 2188.5 | 75 | BRD | 818.8 | 36 | SH |
| 1678.2 | 15 | SH | 807.3 | 36 | AVG |
| 1643.5 | 7 | AVG | 798.6 | 30 | BRD |
| 1602.0 | 20 | AVG | 768.7 | 41 | AVG |
| 1576.0 | 23 | AVG | 721.4 | 30 | BRD |
| 1553.8 | 35 | SH | 706.9 | 31 | AVG |
| 1511.4 | 49 | SH | 648.1 | 26 | BRD |
| 1475.7 | 27 | AVG | 636.5 | 26 | AVG |
| 1421.7 | 29 | AVG | 584.5 | 28 | AVG |
| 1384.0 | 32 | AVG | 571.9 | 26 | SH |
| 1332.0 | 31 | AVG | 533.3 | 27 | AVG |
| 1301.1 | 28 | AVG | 522.7 | 25 | SH |
| 1246.1 | 19 | SH | 503.4 | 25 | AVG |
| 1215.2 | 12 | AVG | AVG | ||
| 1176.7 | 36 | SH | |||
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellenzahlen
(cm ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (#E) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BED = breit;
AVG = Durchschnitt;
SHP = scharf;
SH = Schulter.
Ausgegebene Peak-Iiste: * zeigt zusätzliche Peaks,
25 stärkste Peaks
| Frequenz | 23 | Frequenz | |
| 5 | 1069.5 | 24 | 1576.0 |
| 7 | 3375.7 | 25 | 889.1 |
| 7 | 1643.5 | 25 | 522.6 |
| 8 | 1090.7 | 26 | 503.3 |
| 8 | 1050.2 | 26 | 648.0 |
| 10 | 3223.3 | 26 | 636.5 |
| 12 | 1215.1 | 27 | 571.8 |
| 15 | 1678.1 | 27 | 1475.6 |
| 17 | 3124.0 | 27 | 990.5 |
| 19 | 1246.0 | 28 | 533.2 |
| 20 | 1602.0 | 28 | 1301.0 |
| 22 | 2963.0 | 584.5 | |
| 22 | 2929.1 | ||
Präparat: KBR-PeIlet Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 95 <§ 405.0
Prozentuale Durchlässigkeit bei 4000 (cm ): Dichte (cm"Vpt): 0,964.
2. UV-Absorptionsspektrum (Amax: (a)):
In Wasser bei einem pH-Wert von 2,0: 258 nm (16,0)
pH-Wert von 7,0: 261 nm (16,5) pH-Wert von 11,0: 261 nm (16,0)
3. Elementaranalyse:
Molekülformel: C27H45N7O10 SClP;
Molekulargewicht: 723
Berechnet: C 44>81 H 5,94 N 13,55 O 22,13
S 4,42 Cl 4,84 P 4»28
Gefunden: N 12,87 S 5.39 Cl 4»76 P 3,83.
4. Optische Drehung:
[α]£5 = +94° (C, 0,887, Wasser).
5. Löslichkeitsverhalten:
In hohem Maße löslich in Wasser, Methanol und Ethanol; schwach löslich in Aceton und sonstigen
Ketonen, Ethylacetat und sonstigen Estern, Chloroform und Methylenchlorid. Unlöslich in gesättigten
Kohlenwasserstofflösungsmitteln.
6. Antibakterielle Aktivität:
U-5793O-[3-(5'-Adenylat)] ist in vitro nicht aktiv.
Bei der Behandlung mit alkalischer Phosphatase oder Phosphodiesterase I entsteht jedoch U-57930, das
gegen die verschiedensten G -Organismen sowohl in vitro als auch in vivo hochaktiv ist. U-57930-3-(5'-Adenylat)
hat sich bei subkutaner Verabreichung an Mäuse in vivo mit einem CDc0 von 0,62
(0,48 bis 0,79) mg/kg gegen S. pyogenes aktiv erwiesen.
7. Pp: 203,5 bis 2050C (unter Zersetzung).
20
1. Tabellarische Auflistung des IR-Spektrums:
Polgende tabellarische Auflistungen enthalten Angaben über die IR-Absorptionen (Nujol und KBr):
| Banden-In ten- | 19 | Art | M | Banden | Inten | ArI |
| fre- sität | 21 | M | fre | sität | ||
| quenz | 1 | M | quenz | |||
| 3330.4 | 0 | BRD | M | 1332.9 | 44 | BRD |
| 3224.4 | 4 | BRD | M | 1296.3 | 40 | SH |
| 2952.4 | 3 | BRD | 1251.9 | 28 | RRD | |
| 2924.4 | 49 | BRD | 1215.2 | 19 | AVG | |
| 2867.5 | 53 | SH | 1089.9 | 13 | AVG | |
| 2854.0 | 67 | AVG | 1071.5 | 9 | AVG | |
| 2733.4 | 73 | SH | 1056.1 | 13 | SH | |
| 2695.8 | 8 | SH | 991.5 | 39 | AVG | |
| 2532.8. | 21 | SH | 973.2 | 39 | AVG | |
| 1757.3 | 41 | SH | 957.7 | 48 | SH | |
| 1685.9 | 42 | AVG | M | 931.7 | 49 | AVG |
| 1647.4 | 43 | SH | 890.2 | 34 | AVG | |
| 1602.0 | 12 | AVG | M | 858.4 | 50 | AVG |
| 1574.1 | 37 | AVG | M | 813.0 | 43 | AVG |
| 1555.7 | 22 | BRD | 798.6 | 47 | AVG | |
| 1462.2 | 37 | AVG | 767.7 | 50 | AVG | |
| 1425.5 | SH | 721.4 | 42 | AVG | ||
| 1378.3 | AVG | 634.6 | 35 | AVG | ||
| 1367.6 | SH | |||||
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellenzahlen
(cm" ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (#P) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BED = breit;
AVG = Durchschnitt;
SHP = scharf;
SH = Schulter. Diese Peak-Liste ist nicht ausgegeben.
M: Mögliche Störung durch Mineralöl.
ft · ·
25 stärkste Peaks
| «Γ | Frequenz | *τ | Frequenz |
| O | 2924.3 | 22 | 1378.2 |
| 1 | 2952.3 | 28 | 1251.8 |
| 3 | 2854.0 | 34 | 890.1 |
| 4 | 2867.5 | 35 | 634.5 |
| 8 | 1685.8 | 37 | 1425.5 |
| 9 | 1071.5 | 37 | 1367.5 |
| 12 | 1462.1 | 39 | 991.5 |
| 13 | 1089.8 | 39 | 973.1 |
| 13 | 1056.0 | 40 | 1296.2 |
| 19 | 3330.3 | 41 | 1602.0 |
| 19 | 1215.1 | 42 | 1574.0 |
| 21 | 3224.3 | 42 | 721.3 |
| 21 | 1647.3 |
Präparat: Mineralölmischung
Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 86 6 3764.5 Prozentuale Durchlässigkeit bei 3800 (cm~1):
Dichte (cm"1/pt): 0,964
| 321 | 3921 | - | Art | 3fr- | • | > »· | Art | |
| SO- | ||||||||
| Banden | Inten | Banden- | Inten | |||||
| fre | sität | BRD | ire- | sität | SH | |||
| quenz | SH | quenz | AVG | |||||
| 3387.4 | 12 | AVG | 1055.1 | 10 | AVG | |||
| 3114.4 | 25 | BRD | 992.4 | 35 | SH | |||
| 2962.0 | 26 | AVG | 973.2 | 36 | AVG | |||
| 2931.1 | 26 | SH | 956.8 | 45 | AVG | |||
| 2879.1 | 36 | SH | 929.8 | 48 | AVG | |||
| 2863.6 | 38 | BRD | 889.2 | 31 | AVG | |||
| " 2833.7 | 43 | BRD | 859.3 | 46 | SH | |||
| 2509.6 | 64 | SH | 813.0 | 40 | AVG | |||
| 1685.0 | 6 | SH | 811.1 | 40 | BRD | |||
| 1647.4 | 17 | AVG | 798.6 | 43 | AVG | |||
| 1605.9 | 35 | BRD | 782.2 | 48 | AVG | |||
| 1576.0 | 37 | AVG | 768.7 | 48 | SH | |||
| 1556.7 | 39 | AVG | 707.9 | 43 | SH | |||
| 1463.1 | 31 | AVG | 669.3 | 43 | AVG | |||
| 1423.6 | 35 | AVG | 649.1 | 40 | SH | |||
| 1384.0 | 32· | SH | 634.6 | 37 | AVG | |||
| 1331.0 | 43 | AVG | 585.4 | 38 | AVG | |||
| 1297.2 | 38 | AVG | 567.1 | 34 | AVG | |||
| 1255.8 | 24 | AVG | 523.7 | 35 | ||||
| 1214.3 | 17 | AVG | 447.5 | 39 | ||||
| 1090.8 | 10 | |||||||
| 1070.6 | 7 | |||||||
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellenzahlen
(cm" ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (JiT) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen: BBD * breit;
AYG- = Durchschnitt;
SHP = scharf;
SH = Schulter.
Ausgegebene Peak-Iiste: * zeigt zusätzliche Peaks.
-Si.
25 stärkste Peaks
| fr | Frequenz | fr | Frequenz |
| 6 | 1685.0 | 32 | 1384.0 |
| 7 | 1070.5 | 34 | 567.0 |
| 10 | 1090.7 | 35 | 1605.8 |
| 10 | 1055.0 | 35 | 1423.5 |
| 12 | 3387.3 | 35 | 992.3 |
| 17 | 1647.3 | 35 | 523.6 |
| 17 | 1214.2 | 36 | 2879.0 |
| 24 | 1255.7 | 36 | 973.1 |
| 25 | 3114.3 | 37 | 1576.0 |
| 26 | 2962.0 | 37 | 634.5 |
| 26 | 2931.0 | 38 | 2863.5 |
| 31 | 1463.0 | 38 | 1297.1 |
| 31 | 889.1 |
Präparat: KBE Pellet.
Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 101 S 405.0 Prozentuale Durchlässigkeit bei 4OOO (cm ): 76
Dichte (cm"1/pt): 0,964.
2. UV-Absorptionsspektrum (λ max (a)):
In Wasser bei einem pH-Wert von 2,0: 261 nm (11»5)
pH-Wert von 7»0: 262 nm (10,7) pH-Wert von 11,0: 262 nm (11,5).
3. Elementaranalyse:
Molekülformel: C 26H42N4°13 SC1P;
Molekulargewicht: 716;
Berechnet: 0 43.57 H 5.86 N 7.82 0 29,05
S 4,46 Cl 4,89 und P 4.33. 30
4. Optische Drehung:
£ = +105° (C, 0,94, Wasser).
5. Löslichkeitsverhalten:
Hochlöslich in Wasser, Methanol und Ethanol. Schwach löslich in Aceton und sonstigen Ketonen,
Ethylacetat und sonstigen Estern, Chloroform und Methylenchlorid. Unlöslich in gesättigten Kohlenwasserstoff
lösungsmitteln .
6. Antibakterielle Aktivität:
U-5793O-3-(5'-Uridylat) ist in vitro nicht aktiv.
Bei der Behandlung mit alkalischer Phosphatase oder Phosphodiesterase I entsteht U-57930, das gegen
die verschiedensten G+-Organismen sowohl in vitro als auch in vivo hochaktiv ist.
7. Pp: 202° bis 2030C (unter Zersetzung).
Charakterisierung von U-5793O-3-(5!-«Gruanylat)
1. Tabellarische Auflistung des IR-Spektrums:
Folgende tabellarische Auflistungen enthalten Angaben über die IR-Absorptionen (Nujol und KBr):
-63 -
| Banden | Inten | Art | M | Banden | Inten | Art |
| fre | sität | M | fre | sität | ||
| quenz | M | quenz | ||||
| 3335.3 | 16 | BRD | M | 1250.0 | 36 | SH |
| 3227.2 | 19 | BRD | M | 1213.3 | 21 | AVG |
| 2953.3 | 2 | AVG | 1173.8 | 39 | AVG | |
| 2925.3 | 1 | BRD | 1149.7 | 41 | AVG | |
| 2868.4 | 6 | SH | 1087.9 | 14 | SH | |
| 2855.9 | 4 | AVG | 1071.5 | 9 | AVG | |
| 2737.3 | 51 | BRD | 991.5 | 42 | AVG | |
| 2521.2 | 73 | BRD | 972.2 | 42 | AVG | |
| 1684.0 | 6 | AVG | M | 956.8 | 52 | SH |
| 1635.8 | 11 | AVG | 929.8 | 51 | AVG | |
| 1598.2 | 21 | AVG | M | 890.2 | 36 | AVG |
| 1572.1 | 26 | AVG | 860.3 | 51 | AVG | |
| 1534.5 | 34 | AVG | 800.5 | 46 | AVG | |
| 1462.2 | 18 | AVG | 783.1 | 42 | SHP | |
| 1414.9 | 44 | AVG | 720.4 | 43 | AVG M | |
| 1377.3 | 24 | AVG | 707.9 | 45 | BRD | |
| 1365.7 | 31 | AVG | 681.9 | 4(1 | AVG | |
| 1312.7 | 44 | AVG | 635.6 | 34 | AVG | |
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellen zahlen (cm"" ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit ($T) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BED = breit;
AVG = Durchschnitt;
SHP = scharf;
SH = Schulter. Ausgegebene Peak-Liste: * zeigt zusätzliche Peaks.
M: Mögliche Störung durch das Mineralöl.
25 stärkste Peaks
| Frequenz | 24 | Frequenz | |
| 1 | 2925.2 | 26 | 1377.2 |
| 2 | 2953.2 | 31 | 1572.0 |
| 4 | ■ 2855.8 | 34 | 1365.6 |
| 6 | 2868.3 | 34 | 1534.5 |
| 6 | 1684.0 | 36 | 635.5 |
| 9 | 1071.5 | 36 | 1250.0 |
| 11 | 1635.7 | 39 | 890.1 |
| 14 | 1087.8 | 40 | 1173.7 |
| 16 | 3335.2 | 41 | 681.8 |
| 18 | 1462.1 | 42 | 1149.6 |
| 19 | 3227.1 | 42 | 991.5 |
| 21 | 1598.1 | 972.1 | |
| 21 | 1213.2 | ||
Präparat: Mineralölmischung Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 97φ 3762.6
Prozentuale Durchlässigkeit bei 3800 (cm*1):
Dichte (cm"1/pt): 0,964.
| 9 | 3921 | * · · · · * | Inten | Art | |
| 13 | ^-55- | sität | |||
| 321 | 22 | Art | Banden | ||
| 21 | fre | 31 | AVG | ||
| Banden- Inten— | 31 | quenz | 33 | BRD | |
| fre- sität | 33 | BRD | 1174.7 | 9 | BRD |
| quenz | 44 | BRD | 1147.7 | 6 | AVG |
| 3380.6 | 61 | AVG | 1088.9 | 33 | AVG |
| 3234.0 | 4 | BRD | 1070.6 | 34 | AVG |
| 2963.0 | 6 | AVG | 991.5 | 43 | SH |
| 2929.2 | 14 | SH | 972.2 | 44 | AVG |
| 2878.1 | 19 | BRD | 956.8 | 28 | AVG |
| 2862.7 | 26 | BRD | 929.8 | 41 | AVG |
| 2744.0 | 38 | BRD | 889.2 | 36 | AVG |
| 2522.2 | 36 | AVG | 860.3 | 32 | AVG |
| 1683.0 | 36 | AVG | 800.5 | 38 | SH |
| 1634.8 | 34 | AVG | 783.1 | 38 | SH |
| 1598.2 | 29 | AVG | 715.6 | 33 | AVG |
| 1571.2 | 30 | AVG | 705.0 | 31 | AVG |
| 1534.5 | 37 | AVG | 679.9 | 34 | SH |
| 1482.4 | 29 | BRD | 635.6 | 32 | AVG |
| 1461.2 | 16 | AVG | 584.5 | 31 | AVG |
| 1448.7 | AVG | 571.9 | 30 | AVG | |
| 1413.9 | AVG | 523.7 | 34 | AVG | |
| 1384.0 | AVG | 502.5 | |||
| 1359.9 | SH | 447.5 | |||
| 1312.7 | AVG | ||||
| 1250.9 | |||||
| 1213.3 | |||||
Bandenfrequenz: Die Bandenfrequenzen sind in Wellen zahlen (cm~ ) angegeben.
Intensität: Die Intensität ist als prozentuale Durchlässigkeit (#T) angegeben.
Datenarten in lokalen Peak-Bereichen:
BED = breit; AYG = Durchschnitt; SHP = scharf; SH = Schulter.
Ausgegebene Peak-Liste
zeigt zusätzliche Peaks.
25 stärkste Peaks
| Frequenz | 29 | Frequenz | |
| 4 | 1683.0 | 29 | 1384.0 |
| 6 | 1634.7 | 30 | 1250.8 |
| 6 | 1070.5 | 30 | 1359.8 |
| 9 | 3380.5 | 31 | 502.5 |
| 9 | 1088.8 | 31 | 2878.0 |
| 13 | 3234.0 | 31 | 1174.6 |
| 14 | 1598.1 | 31 | 635.5 |
| 16 | 1213.2 | 32 | 523.6 |
| 19 | 1571.1 | 32 | 783.0 |
| 21 | 2929.1 | 33 | 571.8 |
| 22 | 2963.0 | 33 | 2862.6 |
| 26 | 1534.5 | 1147.6 | |
| 28 | 889.1 | ||
Präparat: KBR Pellet.
Maximale prozentuale Durchlässigkeit: 97 5 405,0 Prozentuale Durchlässigkeit bei 4000 (cm ):
Dichte (cm"1/pt): 0,964.
2. UV-Absorptionsspektrum (Amax (a)):
In Wasser bei einem:
pH-Wert von 2,0: 256 nm (13,4); 280 nm (8,4) Schulter
pH-Wert von 7,0: 254 nm (14,5);
273 nm (9,7) Schulter
pH-Wert von 11,0: 259 nm (12,6); 266 nm (12,4) Schulter,
3. Elementaranalyse:
Molekülformel: C27H45N7O11 SClP;
Molekulargewicht: 739 Berechnet: C 43,84 H 5,81 N 13,26 0 23,27
S 4,33 Cl 4,73 P 4,19; Gefunden: N 13,32 S 4,86 Cl 4,49 P 3,25.
4. Optische Drehung:
\_α]ψ = +97° (C, 0,855, Wasser).
5. Löslichkeitsverhalten:
Hochlöslich, in Wasser, Methanol und Ethanol.
Schwach löslich in Aceton und sonstigen Ketonen, Ethylacetat und sonstigen Estern, Chloroform und
Methylenchlorid. Unlöslich in gesättigten Kohlenwasserstoff lösungsmitteln .
10
10
6. Antibakterielle Aktivität:
ü-5793O-3-(5l-Guanylat) ist in vitro nicht aktiv.
Bei der Behandlung mit alkalischer Phosphatase oder Phosphodiesterase I entsteht U-57930, das
gegen die verschiedensten Gr+-Organismen sowohl
in vitro als auch in vivo hochaktiv ist.
7. Ip: 219° bis 2200C (unter Zersetzung).
Da die erfindungsgemäßen Verbindungen gegen die verschiedensten gram-Positiven und gram-Negativen Mikroorganismen
aktiv Find, können sie zur Inhibierung solcher Mikroorganismen in den verschiedensten Umgebungen
zum Einsatz gebracht werden. So können sie beispielsweise als Desinfektionsmittel zur Inhibierung von
S. aureus auf mit diesem Bakterium kontaminierten, gewaschenen und gestapelten Gegenständen, die mit
Nahrungsmitteln in Berührung gelangen, verwendet werden. Ferner eignen sie sich als Desinfektionsmittel
zum Desinfizieren der verschiedensten mit S. aureus kontaminierten zahnmediziniechen und medizinischen
Vorrichtungen. Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen als bakteriostatische Spüllösungen
für gewaschene Kleider, zum Imprägnieren von Papier
und Geweben und zum Unterdrücken des Wachstums empfindlicher Organismen auf !Festplatten und sonstigen mikrobiologischen
Medien.
5
5
Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich auch zur Behandlung von durch Mitglieder der Gattung
Mycoplasma hervorgerufenen Erkrankungen. Die bekanntesten Formen dieser Gattung sind PPLO (pleuropneumoniaartige
Organismen), wie M. hominis, M. salivarium, M. mycoldes, M. hyopneumonia, M. hyorhinis,
M. gallisepticum und M. arthriditis sowie sonstige Arten bei Mensch und Tier, einschließlich domestizierten
Tieren, wie Schafen, Hunden, Rindern, Schweinen und Geflügel (beispielsweise Hühnern, Truthähnen,
Enten und Gänsen) sowie !abortieren (wie Ratten und Mäusen).
Die U-57930-3-(5'-Ribonukleotide) lassen sich zur Behandlung
von Niereninfektionen und sonstigen Infektionen bei Vorhandensein der L-Pormen gram-negativer und grampositiver Bakterien, beispielsweise der L-Pormen von
P. mirabilis, verwenden.
Da es sich bei den erfindungsgemäßen Verbindungen um amphotäre Substanzen handelt, können sie in üblicher
bekannter Weise sowohl mit Säuren als auch Basen Salze bilden. Beispiele für zur Salzbildung verwendbare anorganische
Säuren sind Chlorwasserstoff-, Schwefel- und Phosphorsäure. Beispiele für verwendbare anorganische
Basen sind die Basen von Natrium, Kalium, Calcium und Mthium. Die Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen
lassen sich zum selben Zweck einsetzen wie die Ausgangsverbindungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind verwendbar als
antibakterielle Mittel in geeigneten Zusammensetzungen. Diese Zusammensetzungen sind vorzugsweise zubereitet
für die Verabreichung an Menschen und Tiere in einheitlichen Dosierformen, wie Tabletten, Kapseln,
Pillen, Pulvern, Granulaten, sterilen parenteralen Lösungen oder Suspensionen und oralen Lösungen oder
Suspensionen, sowie Öl-in-Wasser-Emulsionen, die geeignete Mengen an aktiver Verbindung in Form der
Mutterverbindung oder eines pharmakologisch akzeptablen
Salzes hiervon enthalten.
I1Ur die orale Verabreichung können sowohl feste als
auch flüssige Dosiereinheiten hergestellt werden. Pur die Herstellung fester Zusammensetzungen, wie Tabletten,
wird der aktive Bestandteil mit herkömmlichen Bestandteilen, wie Talkum, Magnesiumstearat, Dicalciumphosphat,
Magnesiumaluminiumsilikat, Calciumsulfat, Stärke, Lactose, Akaziengummi, Methylcellulose und funktionell
vergleichbare Materialien, als pharmazeutische Verdünnungs- oder Trägermaterialien vermischt. Die Tabletten
können laminiert oder in sonstiger Weise zusammengesetzt werden, um eine Dosierungsform zu ergeben, welche
den Vorteil einer verlängerten oder aufgeschobenen Wirkung aufweist oder eine vorausbestimmte sukzessive Wirkung
des eingeschlossenen Medikaments aufweist. Beispielsweise kann eine Tablette eine innere Dosierungsund
eine äußere Dosierungskomponente umfassen, wobei letztere in Form einer Hülle über ersterer liegt. Beide
Komponenten können durch eine enterische Schicht voneinander getrennt sein. Diese enterische Schicht dient
dazu, die Zersetzung im Magen zu verhindern. Dadurch wird es der im Inneren befindlichen Komponente möglich,
intakt in den Zwölffingerdarm zu gelangen oder verzögert freigegeben zu werden. Zur Ausbildung einer solchen
- vtr-GO-
enterischen Schicht bzw. eines solchen enterischen
Überzugs können die verschiedensten Substanzen verwendet werden. Beispiele hierfür sind polymere Säuren
oder Gemische von polymeren Säuren mit beispielsweise Schellack, Cetylalkohol, Celluloseacetatphthalat,
Styrolmaleinsäuremischpolymerisaten und dergleichen. Andererseits kann das Zweikomponentensystem dazu verwendet
werden, Tabletten herzustellen, die zwei oder mehrere miteinander unverträgliche aktive Bestandteile
enthalten. Oblatenkapseln werden in der gleichen Axt und Weise hergestellt wie !Tabletten, wobei der einzige
Unterschied darin besteht, daß die Form anders ist und ferner noch Saccharose oder andere Süßmittel und Geschmacksstoffe
mitverwendet werden. In der einfachsten Ausführungsform werden Kapseln wie Tabletten hergestellt,
indem man den aktiven Bestandteil der Rezeptur mit einem inerten pharmazeutischen Verdünnungsmittel
vermischt und dann das erhaltene Gemisch in eine harte Gelatinekapsel geeigneter Größe abfüllt. In anderer
Ausführungsform werden die Kapseln durch Pullen der harten Gelatinekapseln von mit polymerer Säure überzogenen
Kügelchen, die die aktive Verbindung enthalten, hergestellt. Weichgelatinekapseln erhält man durch
maschinelle Einkapselung einer Aufschlämmung der aktiven Verbindung in einem akzeptablen Pflanzenöl, z.B.
leichter flüssiger Vaseline oder einem sonstigen inerten Öl.
Es können auch fließfähige Einheitsdosen oder Dosiereinheiten zur oralen Verabreichung, z.B. Sirupe,
Elixiere und Suspensionen zubereitet werden. Die wasserlöslichen Formen können zusammen mit Zucker,
aromatischen Geschmacksstoffen und Konservierungsmitteln in einem wäßrigen Träger gelöst werden, wobei
ein Sirup erhalten wird. Ein Elixier erhält man unter
Verwendung eines wäßrig-alkoholischen, z.B. wäßrigethanolischen
Trägers und geeigneten Süßungsmittels,
wie Zucker und künstlichen Süßstoffen, sowie aromatischen Geschmacksstoffen.
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Suspensionen erhält man mit einem wäßrigen Träger unter Mitverwendung eines Suspendiermittels, wie Akaziengummi,
Traganth, Methylcellulose und dergleichen. Topisch zu applizierende Salben erhält mand durch Dispergieren
der aktiven Verbindung in einer geeigneten Salbengrundlage, wie Vaseline, Lanolin, Polyethylenglykolen
und Mischungen hiervon. Zweckmäßigerwexse wird die Verbindung mittels einer Kolloidmühle unter Ausnutzung
leichter flüssiger Vaseline als Glättmittel vor dem Dispergieren in der Salbengrundlage fein
verteilt. Topisch zu applizierende Cremes und Lotionen erhält man durch Dispergieren der Verbindung in der ölphase
vor deren Emulgierung in Wasser.
Unter Verwendung der betreffenden Verbindung und eines sterilen Trägers, vorzugsweise von Wasser, lassen sich
fließfähige Dosiereinheiten oder Einheitsdosen zur parenteralen Verabreichung zubereiten. Die Verbindung
kann je nach ihrer Form und der vorgesehenen Konzentration in dem Träger entweder suspendiert oder in Lösung
gebracht werden. Zur Zubereitung von Lösungen können die Verbindungen in Wasser zu Injektionszwecken gelöst
und die erhaltenen Lösungen vor dem Einfüllen in geeignete Phiolen und Ampullen und dem .Versiegeln derselben
filtrationssterilisiert werden. Zweckmäßigerweise
werden in dem Träger Hilfsmittel, z.B. Lokalanästhetika, KonservierungSBtoffe und Puffer, mitgelöst.
Zur Verbesserung der Stabilität können die erhaltenen Zubereitungen nach dem Einfüllen in die
Phiolen und Entfernen des Wassers im Vakuum gefroren werden. Das trockene lyophilisierte Pulver wird dann
in der Phiole eingeschmolzen, wobei eine weitere Phiole mit Wasser zu Injektionszwecken zur Wiederaufbereitung
des Pulvers vor Gebrauch beigepackt wird. Parenterale Suspensionen erhält man in praktisch derselben Weise,
wobei jedoch die betreffende Verbindung, anstatt in dem Träger gelöst zu werden, darin suspendiert wird.
In diesem Falle ist allerdings eine ■Filtrationssterilisation
nicht möglich. Die Verbindung läßt sich aber durch Einwirkenlassen von Ethylenoxid vor dem Suspendie-
ren in dem sterilen Träger sterilisieren. Zweckmäßigerweise
wird der Zubereitung zur gleichmäßigeren Verteilung der betreffenden Verbindung ein oberflächenaktives
Mittel oder Netzmittel einverleibt.
Der Ausdruck "Einheitsdosis" oder "Dosiereinheit11 dient zur Bezeichnung physikalisch unterteilter Einheiten,
die sich als Einzeldosis für Patienten und Tiere eignen. Jede Einheit enthält eine so große Menge
an aktivem Material, wie sie zusammen mit dem o'eweiligen
pharmazeutischen Verdünnungsmittel, Träger oder Vehikel, die gewünschte therapeutische Wirkung herbeiführen
soll. Die Vorschrift für die Dosiereinheiten oder Einheitsdosen richtet sich nach den jeweiligen
Eigenschaften des aktiven Materials und der zu erreichenden Wirkung sowie den dem Fachmann bekannten Rezeptiergrsnzen.
Beispiele für geeignete Dosiereinheiten oder Einheitsdosen sind Tabletten, Kapseln, Pillen, Suppositorien,
Pulverbeutelchen, Oblaten, Granulat, Pastillen, Teelöffelvoll,
Eßlöffelvoll, Tropfervoll, Ampullen, Phiolen, Aerosole mit Dosiervorrichtungen, unterteilte
Mehrfache der genannten Zubereitungsformen und sonstige Zubereitungsformen.
Die aktive Verbindung wird mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger zu einer Einheitsdosis oder Dosiereinheit
zur bequemen und wirksamen Verabreichung verarbeitet. Vorzugsweise enthalten die Dosiereinheiten
zur systemischen Behandlung 10, 25, 50, 100, 250 bzw. 500 mg an aktiver Verbindung. Zur parenteralen Behandlung
bedient man sich 5- bis 65gew.#iger Einheitsdosen oder Dosiereinheiten. Die Dosierung der eine aktive
Verbindung und einen oder mehrere sonstige aktive(n)
Bestandteil(e) enthaltenden Zubereitungen ergibt sich
aus der üblichen Dosierung der Einzelbestandteile.
Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher veranschaulichen.
Selbstverständlich können anstelle der in den Beispielen als aktive Verbindung verwendeten 3-(5'-Ribonukleotide)
von U-5793OE oder U--6O97OE auch andere
aktive Verbindungen gemäß der Erfindung verwendet werden. U-6O97OE ist das 4-cis-n-Butyl-L-pipecolsäureamid
von 7-Cl-Methylthiolincosaminid. Bezüglich seiner
Herstellung vgl. Beispiel 7 der DE-OS 30 43 502.
U-5793OE bzw. U-6O97OE steht für die 3-(5'-Ribonukleotide)
dieser Verbindungen. Bei den 3-Ribonukleotiden handelt es sich um die beschriebenen Ribonukleotide.
Beispiel 1 - Kapseln
Unter Verwendung folgender Bestandteile:
U-5793OE oder Ü-6O97OE 250 g
Maisstärke 100 g
Talkum 75 g
Magnesiumstearat 25 g
werden 1000 doppelstückige Hartgelatinekapseln zum oralen
Gebrauch mit jeweils 250 mg U-5793OE bzw. U-60970E hergestellt.
Die verschiedenen Substanzen werden gründlich miteinander gemischt und dann in üblicher bekannter Weise eingekapselt.
Die erhaltenen Kapseln eignen sich zur systemischen Behandlung von Infektionen bei Erwachsenen durch orale
Verabreichung von jeweils einer Kapsel alle 6 h.
In der geschilderten Weise lassen sich auch Kapseln mit 10, 25, 50, 100 bzw. 500 g U-57930E bzw. U-60970E
herstellen, indem man anstelle der verwendeten 250 g Wirkstoff 10, 25, 50, 100 bzw. 500 g verwendet.
| Beispiel 2 - Kapseln | 200 g |
| 250 g | |
| Unter Verwendung der folgenden Bestandteile: | 75 g |
| U-5793OE bzw. U-60970E | 25 g |
| Tetracyclin-hydrochlorid | |
| Talkum | |
| Magnesiumstearat |
werden 1000 doppelstückige Hartgelatinekapseln zum oralen Gebrauch mit jeweils 200 mg U-5793OE bzw. U-6O97OE und
250 mg Tetracyclin-hydrochlorid zubereitet.
Zunächst werden die verschiedenen Bestandteile gründlich miteinander gemischt und dann in üblicher bekannter Weise
eingekapselt.
Die erhaltenen Kapseln eignen sich zur systemischen Behandlung von Infektionen bei Erwachsenen durch orale
Verabreichung jeweils einer Kapsel alle 6h.
In entsprechender Weise lassen sich auch Kapseln mit TJ-57830E bzw. U-6O97OE und anstelle des Tetracycline
Chloramphenicol, Oxytetracyclin, Chlortetracyclin, Pumagillin, Erythromycin, Streoptomycin, Dihydronovobiocin
oder Novobiocin zubereiten, indem man die 250 g
Tetracyclin-hydrochlorid durch 250 g der genannten anderen
Antibiotika ersetzt. Wird anstelle des Tetracycline ein Penicillin, z.B. Kaliumpenicillin G, verwendet,
enthält eine Kapsel 250 000 Einheiten.
Solche Kombinationspräparate eignen sich zur systemischen Behandlung von Mischinfektionen bei Erwachsenen
durch orale Verabreichung von jeweils einer Kapsel alle 6 h.
10
10
Beispiel 3 - Tabletten Aus folgenden Bestandteilen;
U-5793OE bzw. U-6O97OE 500 g
Lactose 125 g
Maisstärke 65 g
Magnesiumstearat 25 g
helle flüssige Vaseline ' 3 g 20
werden 1000 Tabletten zur oralen Verabreichung mit jeweils 500 mg U-5793OE bzw. Ü-6O97OE hergestellt.
Beim gründlichen Vermischen der Bestandteile kommt es zu einer Brockenbildung. Die gebildeten Brocken werden
zerkleinert, indem sie durch ein Sieb Nr.16 gedruckt
werden. Danach wird das hierbei erhaltene Granulat zu Tabletten verpreßt, wobei jede Tablette 500 mg
U-5793OE bzw. U-6O97OE enthält.
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Die erhaltenen Tabletten eignen sich zur systemischen Behandlung von Infektionen einschließlich von
Malariainfektionen bei Erwachsenen durch orale Verabreichung
einer Tablette dreimal pro Tag. 35
In der geschilderten Weise lassen sich bei Reduzieren
der Mengen an U-5793OE bzw. TJ-6O97OE auf 250 g auch
Tabletten mit 250 mg Wirkstoff herstellen.
Beispiel 4 - Tabletten
| Aus folgenden Bestandteilen: | 250 | g |
| TJ-5793OE bzw. Ί7-6Ο97ΟΕ | 83, | 3 g |
| Sulfadiazin | 83, | 3 g |
| Sulfamerazin | 83, | 3 g |
| Sulfamethazin | 50 | g |
| Lactose | 50 | g |
| Maisstärke | 25 | g |
| CaIciumstearat | 5 | g |
| helle flüssige Vaseline | ||
werden 1000 oral zu verabreichende Tabletten mit jeweils 250 mg Ü-5793OE bzw. U-6O97OE und insgesamt
250 mg (jeweils 83,3 mg) Sulfadiazin, Sulfamerazin
und Sulfamethazin zubereitet.
Beim gründlichen Vermischen der Bestandteile kommt es
zu einer Brockenbildung. Die gebildeten Brocken werden zerkleinert, indem sie durch ein Sieb Nr.16 gedrückt
werden. Pas hierbei erhaltene Granulat wird dann zu Tabletten mit jeweils 250 mg Ü-5793OE bzw. U-6O97OE
und insgesamt 250 mg (jeweils 83,3 mg) Sulfadiazin, Sulfamerazin und Sulfamethazin verpreßt.
Die erhaltenen Tabletten eignen sich zur systemischen Behandlung von Infektionen durch orale Verabreichung
von zunächst 4 Tabletten und dann 1 Tablette alle 6 h.
Zur Behandlung von Infektionen des Urogenitaltrakts wer-
den die drei zusätzlichen Bestandteile der angegebenen
Rezeptur zweckmäßigerweise durch. 250 g Sulfamethylthiadiazol
oder 250 g SuIfacetamid ersetzt.
Beispiel 5 - oral einzunehmender Sirup Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE
10 Sulfadiazin
Sulfamerazin
Sulfamethazin
Zitronensäure
Benzoesäure 15 Saccharose
Traganth
Zitronenöl
mit entionisiertem Wasser auf 1000 ml aufgefüllt,
werden 1000 ml einer wäßrigen Suspension zur oralen Verabreichung mit jeweils 250 mg U-5793OE bzw. U-60970E
und insgesamt 500 mg Sulfadiazin, Sulfamerazin und Sulfamethazin pro 5 ml zubereitet.
Bei der Zubereitung werden zunächst die Zitronensäure, Benzoesäure und Saccharose, das Traganth und das
Zitronenöl in soviel Wasser dispergiert, daß 850 ml Lösung erhalten werden. Danach werden U-5793OE bzw.
U-6O97OE und die feinteiligen sonstigen Wirkstoffe
bis zur gleichmäßigen Verteilung in den Sirup eingerührt, worauf das Ganze mit Wasser auf 1000 ml aufgefüllt
wird.
Der erhaltene Sirup eignet sich zur systemischen Behandlung von Pneumonie bei Erwachsenen in einer Dosis
von einem Eßlöffelvoll (10 ml) 4mal pro Tag.
| 50 | 3 | g |
| 33, | 3 | g |
| 33, | 3 | g |
| 33, | g | |
| 2 | g | |
| 1 | g | |
| 700 | g | |
| 5 | g | |
| 2 | ml | |
Beispiel 6 - parenteral zu verabreichende ' lösung
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 200 g
lidocain-hydrochlorid 4 g
Methylparaben 2,5 g
Propylparaben 0,17 g
mit Wasser zu Injektionszwecken aufgefüllt auf 1000 ml
wird eine sterile wäßrige lösung zur intramuskulären Verabreichung mit 200 mg U-5793OE bzw. U-60970E pro
ml zubereitet.
Bei der Zubereitung werden die Bestandteile in Wasser gelöst, worauf die erhaltene lösung filtrationssterilisiert
wird. Die erhaltene sterile lösung wird in Phiolen gefüllt, worauf diese verschweißt werden.
Beispiel 7 - parenteral zu verab reichende
"-^————^-^——^—-—— Zubereitung
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE b:',w. U-6O97OE 200 r
Spectinomycinsulfat 400 g
lactose 50 g
mit Wasser zu Injektionszwecken aufgefüllt auf
1000 ml
wird eine sterile wäßrige lösung zur intramuskulären Verabreichung mit 200 mg U-5793OE bzw. Ü-6O97OE und
400 mg Spectinomycinsulfat pro 1 ml zubereitet.
Die Wirkstoffe U-5793OE bzw. U-6O97OE und Spectinomycinsulfat
sowie lactose werden in Wasser dispergiert und
sterilisiert. Die erhaltene sterile Zubereitung wird in einer Menge von 2 ml aseptisch in sterile Phiolen
abgefüllt.
Beispiel 6 - lokal zu applizierende Salbe Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 2,5 g
Zinkoxid 50 g
Calamin 50 g
flüssige Vaseline (schwer) 250 g
Wollfett 200 g
mit weißer Vaseline auf 1000 g aufgefüllt werden 1000 g einer O,25$igen Salbe zubereitet.
Die weiße Vaseline und das Wollfett werden aufgeschmolzen und mit 100 g flüssiger Vaseline versetzt.
Danach werden U-5793OE bzw. U-6O97OE* Zinkoxid und
Calamin in die restliche flüssige Vaseline eingetragen, worauf das Gemisch so lange vermählen wird, bis ein
feinteiliges und gleichmäßig dispergiertes Pulver erhalten wird. Das Pulvergemisch wird dann in das weiße
Vaselinegemisch eingerührt. Das Ganze wird dann so lange weitergerührt, bis die Salbe erstarrt.
Die erhaltene Salbe eignet sich zur topischen Applikation auf die Haut von Säugetieren zur Behandlung von
Infektionen.
30
30
Ferner kann man die Salbe auch ohne Zinkoxid und Calamin zubereiten.
In entsprechender Weise erhält man auch Salben mit 0,5» 1,2 bzw. 5 # U-5793OE bzw. U-6O97OE, indem man die
2,5g U-5793OE bzw. U-6O97OE durch 5» 10, 20 und 50 g
Wirkstoff ersetzt.
Beispiel 9 - Creme
Aus folgenden Bestandteilen:
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 50 g
selbstemulgierendes Glycerylmonostearat
150 g
Spermaceti 100 g
Propylenglykol 50 g
Polysorbat 80 5g
Methylparaben 1 g
mit entionisiertem Wasser aufgefüllt auf 1000 g
werden 1000 g einer Vaginalcreme zubereitet.
Zunächst werden das selbstemulgierende Glycerylmonostearat und Spermaceti miteinander bei einer Temperatur
■von 70 - 800C aufgeschmolzen. Das Methylparaben wird
in etwa 500 g Wasser gelöst, worauf das Propylenglykol, Polysorbat 80 und der Wirkstoff U-57930E bzw. U-60970E
in der angegebenen Reihenfolge zugegeben werden. Hierbei wird die Temperatur auf 75° bis 800C gehalten. Schließlich
wird das Methylparabengemisch langsam unter konstantem Rühren in die Glycerylmonostearat- und Spermacetischmelze
eingetragen. Die Zugabe dauert mindestens 30 min unter fortgesetztem Rühren^bis die Temperatur auf 40°
bis 450C gesunken ist. Der pH-Wert der fertigen Creme wird durch Zusatz von 2,5 g Zitronensäure und 0,2 g
dibasischen Natriumphosphats in etwa 50 g Wasser auf 3,5 eingestellt. Schließlich wird so viel Wasser zugegeben,
daß das Endgewicht 1000 g beträgt. Nach der Wasserzugabe wird die Zubereitung zur Aufrechterhaltung einer
homogenen Mischung so lange gerührt, bis sie erkaltet und erstarrt ist.
Die erhaltene Creme eignet sich zur Behandlung von Vaginalinfektionen "bei Frauen.
Beispiel 10 - ophthalmische Salbe
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 5 g
Bacitracin 12,2 g
Polymyxin-B-sulfat
(10 000 Einheiten/mg) 1 g
leichte flüssige Vaseline 250 g
Wollfett 200 g
mit weißer Vaseline aufgefüllt auf 1000 g
werden 1000 g einer 0,5 51ε U-5793OE bzw. U-6O97OE
enthaltenden ophthalmisehen Salbe zubereitet.
Die festen Bestandteile werden zunächst mittels eines Luftmikronisators feinverteilt und dann in die leichte
flüssige Vaseline eingetragen. Zur gleichmäßigen Verteilung der mikronisierten Teilchen wird das Gemisch
durch eine Kolloidmühle laufengelassen. Nun werden das Wollfett und die weiße Vaseline miteinander aufgeschmolzen,
geseit und auf eine Temperatur von 45° bis 500C eingestellt. Nach Zugabe der flüssigen Vaselineaufschlämmung
wird die Salbe bis zum Erstarren gerührt« Zweckmäßigerweise wird die Salbe in 3,88 g ophthalmischen
Röhrchen verpackt.
Die erhaltene Salbe kann zur Behandlung lokaler Infektionen bei Menschen und Tieren auf das Auge appliziert
werden.
Die Salbe kann ferner 5 g (0,5 %) Methylprednisolon
zur Behandlung von entzündlichen Zuständen enthalten. Ferner können auch das Bacitracin und Polyrnyx^n-B-sulfat
weggelassen werden.
Beispiel 11 - Augen- "bzw. Ohrentropfen Aus folgenden Bestandteilen:
Ü-5793OE bzw. U-6O97OE 10 g
Methylprednisolonphosphat, Natriumsalz 5 g
liatriuncitrat 4,5 g
Natriumbisulfit 1 g
Polyethylenglykol 4000 120 g
Myristyl-Y-picoliniumchlorid 0,2 g
Polyvinylpyrrolidon 1 g
mit entionisiertem Wasser aufgefüllt auf 1000 ml
werden 1000 ml einer sterilen wäßrigen lösung zur Application ins Auge oder Ohr mit 10 mg U-5793OE
bzw. U-6O97OE und 5 mg Methylprednisolon zubereitet.
Die Bestandteile werden in Wasser gelöst, worauf die erhaltene Lösung filtrationssterilisiert wird. Schließlich
wird die sterile lösung aseptisch in sterile Tropfbehälter gefüllt.
Die Zubereitung eignet sich zur topischen Behandlung entzündlicher und infektiöser Zustände des Auges und
Ohrs sowie sonstiger empfindlicher Gewebe des menschliehen oder tierischen Körpers.
Beispiel 12 - Pastillen Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE "bzw. Ü-6O97OE 100 g
Neomycinsulfat 50 g
Polymyxin-B-sulfat (10 000 Einheiten/
mg) 1g
Ethylaminobenzoat 50 g
Calciumstearat 150 g
mit pulverisierter Saccharose auf 5000 g aufgefüllt
werden 10 000 Pastillen zubereitet.
Die pulverisierten Substanzen werden gründlich miteinander
gemischt und dann in für die Herstellung von Preßtabletten üblicher bekannter Weise zu 0,5 g—
Pastillen verpreßt.
Die Pastillen werden im Mund belassen und gehen dabei langsam in Lösung* wobei eine Mund- und Rachenbehandlung
von Menschen erfolgt.
Beispiel 13 - rektales Suppositorium
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. Ü-6O97OE 100 g
Polymyxin-B-sulfat
(10 000 Einheiten/mg) 1,25 g
Methylprednisolon 1 g
Ethylaminobenζοat 75 g
Zinkoxid 62,5 g
Propylenglykol 162,5 g
mit Polyethylenglykol 4000 auf 2500 g aufgefüllt
werden 1000 Suppositorien eines Gewichts von jeweils
2,5 g mit 100 mg U-5793OE bzw. U-6O97OE zubereitet.
Der Wirkstoff Ü-5793OE bzw. U-6O97OE, das Polymyxin-B-sulfatι
das Methylprednisolon, das Ethylaminobenζοat
und das Zinkoxid werden zu dem Propylenglykol zugegeben,
worauf das Gemisch so lange vermählen wird, bis ein feinteiliges und gleichmäßig dispergiertes Pulver
erhalten wird. Danach wird das Polyethylenglykol 4000 aufgeschmolzen und langsam unter Rühren mit der
Propylenglykoldispersion versetzt. Schließlich wird die Suspension bei 400C in nicht-gekühlte !Formen gegossen.
Darin wird die Zubereitung sich abkühlen und erstarren gelassen. Schließlich werden die einzelnen Suppositorien
aus der Form entnommen und in eine Folie verpackt .
Die erhaltenen Suppositorien werden zur lokalen Behandlung entzündlicher und infektiöser Zustände rektal eingeführt
.
Bei den Suppositorien kann das Steroid auch weggelassen werden.
Beispiel 14 - Mastitissalbe Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 25 g
Methylprednisolonacetat 0,5 g
leichte helle Vaseline 300 g
Chlorbutanol, wasserfrei 5 g
Polysorbat 80 5 g
2$Iges Aluminiummonostearat-Erdnuß-
ölgel 400 g
mit weißer Vaseline auf 1000 g aufgefüllt
-werden 1000 g einer Salbe zur Behandlung von Mastitis
bei Milchkühen zubereitet.
Bei der Zubereitung der Salbe werden zunächst der Wirkstoff U-5793OE bzw. U-6O97OE und das Methylprednisolonacetat
mit der leichten flüssigen Vaseline so lange vermählen, bis das Ganze feinteilig und gleichmäßig
dispergiert ist. Nun werden das Chlorbutanol, PoIysorbat 80, Erdnußölgel und die weiße Vaseline bei einer
Temperatur von 48,90C aufgeschmolzen. In die Schmelze
wird die flüssige Vaselinedispersion eingerührt. Unter fortgesetztem Rühren darf sich die Dispersion auf Raumtemperatur
abkühlen, wobei sie erstarrt. Schließlich wird sie in Einmal-Mastitisspritzen in 10 g-Dosen abgefüllt
.
Beispiel 15 - Tierfutter
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 10 g
Sojabohnenmehl 400 g
Fischmehl 400 g
Weizenkeimöl 50 g
Sorghummelasse 140 g
werden 1000 g einer Futtermittelmischung zubereitet.
Zu diesem Zweck werden die genannten Bestandteile miteinander vermischt und zu Pellets verpreßt. Die Pellets
können an Versuchstiere, z.B. Ratten, Mäuse, Meerschwein-
chen und Hamster zur Prophylaxe während des Versands
verfüttert werden.
Für andere Tiere, z.B. Geflügel,wie Hühner, Enten, Truthähne und Gänse, kann die Zubereitung dem normalen
Tierfutter in einer die gewünschte Dosis U-5793OE bzw. U-6O97OE liefernden Menge zugesetzt werden.
Beispiel 16
Entsprechend Beispielen 1 bis 15 werden verschiedene antibakteriell wirksame Verbindungen gemäß der Erfindung
in äquivalenter Menge anstelle des Wirkstoffs U-57930E bzw. U-6O97OE eingesetzt, wobei entsprechende
therapeutische Wirkungen erzielt werden.
Ferner können auch die als freie Base eingesetzten Verbindungen als pharmazeutisch oder<pharmakologisch
akzeptable Salze, z.B. Hydrochloride, Sulfate oder Phosphate oder als Natrium-, Kalium-, Calcium- oder
Lithiumsalze zum Einsatz gelangen.
Beispiel 17 - Kapseln Aus folgenden Bestandteilen:
TJ-5793OE bzw. Ü-6O97OE 200 g
Hydroxychlorochinsulfat 200 g
Talkum 75 g
Magnesiumstearat 25 g
werden 1000 doppelstückige Hartgelatinekapseln zum oralen Gebrauch mit jeweils 200 mg U-5793OE bzw.
U-6O97OE und 200 mg Hydroxychlorochinsulfat zubereitet«
Bei der Zubereitung werden die Bestandteile gründlich miteinander gemischt und dann in üblicher bekannter
Weise eingekapselt.
Die Kapseln eignen sich zur Verhinderung wiederkehrender Attacken durch P. vivax bei Erwachsenen durch orale
Verabreichung von einer Kapsel wöchentlich.
Beispiel 18 - Tabletten
Aus folgenden Bestandteilen:
U-5793OE bzw. U-6O97OE 125 g
Chininsulfat 325 g
Lactose 50 g
Maisstärke 50 g
Calciumstearat 25 g
leichte flüssige Vaseline 5 g
werden 1000 oral zu verabreichende Tabletten mit jeweils
125 mg U-5793OE bzw. Π-60970Ε und 325 mg Chininsulfat
zubereitet.
Bei der Tablettenherstellung werden zunächst die Bestandteile gründlich miteinander gemischt, wobei Brocken
entstehen. Die Brocken werden zerkleinert, indem sie durch ein Sieb Nr.16 gepreßt werden. Das hierbei erhaltene
Granulat wird dann zu Tabletten mit jeweils 125 mg U-5793OE bzw. U-60970E und 325 mg Chininsulfat verpreßt.
30
Die erhaltenen Tabletten eignen sich zur Behandlung von Malaria durch orale Einnahme von 2 Tabletten alle 8 Tage
während 7 Tagen und dann von 1 Tablette dreimal pro Tag
während 7 Tagen .
35
35
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U-5793OE bzw. Ü-60970E 200 g
Lactose 50 g
mit Wasser zu Injektionszwecken aufgefüllt auf 1000 ml
wird eine sterile wäßrige Lösung zur intramuskulären Verabreichung mit pro 1 ml 200 m9 U-5793OE bzw.
U-6O97OE zubereitet.
Nach dem Eintragen des Wirkstoffs U-5793OE bzw. U-6O97OE und der Lactose in Wasser wird das Ganze
sterilisiert. Die sterile Zubereitung wird in einer Menge von 2 ml aseptisch in sterile Phiolen abgefüllt,
Beispiel 21
Entsprechend den vorherigen Beispielen können die Wirkstoffe U-5793OE bzw. Ü-6O97OE in äquivalenter
Menge durch andere gegen Malaria wirksame Verbindungen gemäß der Erfindung ersetzt werden, wobei entsprechende
therapeutische Wirkungen erzielt werden.
Die verschiedenen Verbindungen können auch in Form pharmazeutisch oder pharmakologisch akzeptabler Salze»
z.B. als Hydrochloride, Sulfate oder Phosphate oder als Natrium-, Kalium·'-» Calcium-oder Lithiumsalze eingesetzt
werden.
Beispiel 22
In vivo-Ergebnisse gegen P. berghei:
1 2
Verbindung MED mg/kg GD50 mg/kg
Sub. OK OI Sub Q OI
U-5793OE 0,16 1,6 16 (12-22)
>50
U-2125IF <20 -■ 53 (46-61)
U-24729A < 1,25 - 4,7 (3,2-6,9)
U-8284 Chlorochin < 5-10 12,5 11*5 (8,8-15) H
Chlorochin (P0.)2 < 5 - <20
«4
MED = Dosis, bei der sich die mittlere Überlebensdauer (STcq) signifikant (p = 0,05) gegenüber
der STr-n unbehandelter Versuchstiere erhöht.
pu
CD50 = mittlere Schutzdosis in mg/kg 95 ^ Grenzen.
3 = Verabreichungsweg.
Intimalaria-Test (P. berghei)
Testverfahren:
18-20 g schwere männliche CF-1 Mäuse werden in Gruppen
von 10 Versuchstieren gehalten und intraperitoneal mit Vollblut von 3 Tage vor dem Eingehen mit P.Berghei infizierten
Mäusen infiziert. Als Inokulat dient 0,2 ml heparinisiertes Blut, das 1:10 mit physiologischer Kochsalzlösung
verdünnt ist. Dieses Volumen enthält etwa 10 Parasiten.
4 h nach der Infektion wird jede Gruppe aus 10 Mäusen behandelt, und zwar entweder subkutan mit 0,2 ml oder oral
(mittels einer Magensonde) mit 0,5 ml der gewünschten
Wirkstoffkonzentration. Die Behandlung wird einmal pro Tag über 4 Tage fortgesetzt. Me Versuchstiere werden
28 Tage lang beobachtet» wobei Todesfälle aufgezeichnet werden. Todesfälle vor dem 6.Tag werden als traumatische
Todesfälle angesehen.
Die Bewertung der Wirksamkeit der verschiedenen Analogen und Wirkstoffkonzentrationen der einzelnen Analogen
basiert auf der mittleren Überlebensdauer der Versuchstiere
bei der jeweiligen Behandlungsdosis und der mittleren Schutzdosis der einzelnen Analogen. Die mit den
behandelten Gruppen erzielten Ergebnisse werden mit den Ergebnissen unbehandelter Gruppen oder mit Chlorochin
behandelter Gruppen verglichen.
Andere erfindungsgemäß behandelbare Protozonen sind intrazelluläre Parasiten, beispielsweise die Arten
Plasmodia, Toxoplasma und Leishmania, Protozonen, die die roten Blutkörperchen behandelter Patienten verdauen,
beispielsweise Entamoeba histolytica und bestimmte Trypanosoma, sowie sonstige Helminthen, die die roten
Blutkörperchen während krankhafter Prozesse auffressen, z.B. Schistosomen.
Claims (1)
- • 1. · ·PATENTANSPRÜCHE3-(5'-Ribonukleotide) von Verbindungen der allgemeinen Formel:10worin bedeuten:R1 einen oder mehrere Substituenten in beliebiger Stellung des Pyridinrings, die noch nicht von Rp besetzt ist, insbesondere ein Wasserstoff- oder Halogenatom, einen Alkylrest, einen substituierten Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom(en) im Alkylteil, einschließlich der Isomeren, einen Cycloalkylrest, einen substituierten Cycloalkylrest, ein substituiertes Sauerstoff- oder Stickstoffatom, einen Phenylrest, einen substituierten Phenylrest, einen Rest der Formel -(CH2)n-0H oder der Formel -(CH2Jn-NR4R5 mit η gleich einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 8 und R^ und R5 gleich Wasserstoffatomen oder Alkylresten mit 1 bis einschließlich 8 Kohl?nstoffatom(en), einschließlich der Isomeren hiervon, undR2 einen einzelnen Substituenten in beliebiger Stelle des Pyridinrings, die noch nicht von R<. besetzt ist, insbesondere einen Rest der FormelOIl-C-Xmit X entsprechend der Aminofunktion von 7(S)-HaIogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid oder 7(R)-Halogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid
und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.2. 3-(5'-Ribonukleotide) von Verbindungen der allgemeinen Formel:worin R1 und R2» die sich in 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- oder 9-Stellung des Rings befinden können, die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, R, für H, CH,, C2H5 oder -CH2-CH2-OH steht und η einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 4 entspricht ,
und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.3. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie der angegebenen Formel entsprechen, worin R1, das sich in 4-Stellung befindet, für einen Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatomen) oder ein Isomeres hiervon steht und R2 sich in 2- oder 3-Stellung befindet, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.4. Verbindungen nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie der angegebenen Formel entsprechen, worin R1 sich in 4-Stellung befindet und einenAlkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatomen) oder ein Isomeres hiervon darstellt, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.5. 3-(5'-Ribonukleotide) von Verbindungen der allgemeinen Formel:worin bedeuten:Rj. einen oder mehrere Substituenten in beliebiger ' Stellung des Pyridinrings, die noch nicht von R2 besetzt ist, insbesondere ein Wasserstoff- oder Halogenatom, einen Alkylrest, einen substituierten Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom(en) im Alkylteil, einschließlich der Isomeren, einen Cycloalkylrest, einen substituierten Cycloalkylrest, ein substituiertes Sauerstoff- oder Stickstoffatom, einen Phenylrest, einen substituierten Phenylrest, einen Rest der Formel -(CH2)n-0H oder der Formel -(CH2Jn-NR4R5 mit η gleich einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 8 und R^ und Rc gleich Wasserstoffatomen oder Alkylresten mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom(en), einschließlich der Isomeren hiervon,und Y 7(S)-Halogen oder 7(R)-Halogen, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.6. Verbindungen nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß sie der angegebenen Formel entsprechen, worin Y für 7(S)-Halogen steht, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.7. 3-(5'-Ribonukleotide) von Verbindungen der allgemeinen Formel:SCH:OH 20worin bedeuten:R1 einen oder mehrere Substituenten in 3-, 4-, 5-, 7-, 8- oder 9-Stellung(en) des Rings, insbesondere ein Wasserstoff- oder Halogenatom, einen Alkylrest, einen substituierten Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom(en) im Alkylteil einschließlich der Isomeren, einen Cycloalkylrest, einen substituierten Cycloalkylrest, ein substituiertes Sauerstoff- oder Stickstoffatom, einen Phenylrest, einen substituierten Phenylrest, einen Rest der Formel -(CHg)n-OH oder der Formel -(CH2)n-NR^Rc mit η gleich einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 8 und R^ und R5 gleich Wasserstoffatomen oder Alkylresten mit 1 bis einschließlieh 8 Kohlenstoffatom(en), einschließlich der Iso-meren hiervon}R3 H, CH3, C2H5 oder -CH2-CH2-OH; η eine ganze Zahl von 1 bis einschließlich 4 undY 7(S)-Halogen oder 7(R)-Halogen,und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.8. Verbindungen nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß sie der angegebenen Formel entsprechen, worin Y für 7(S)-Chlor steht.9. Verbindungen nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß sie der angegebenen Formel entsprechen, worin bedeuten:Y 7(S)-Halogen;R1 einen Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom (en) oder ein Isomeres hiervon und R, ein Wasserstoffatom,
und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.10. Verbindungen nach Anspruch 9, dadurch gekennzeich* net, daß sie der in Anspruch 7 angegebenen Formel entsprechen, worin bedeuten:Y 7(S)-Halogen;
R1 C2H5 undR3 ein Wasserstoffatom.11. Verbindungen nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß sie der in Anspruch 7 angegebenen Formel entsprechen, worin bedeuten:
Y 7(S)-Halogen;undR, ein Wasserstoffatom.12. Verbindungen nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß sie der in Anspruch 7 angegebenen Formel-β-entsprechen, worin Y für 7(S)-Chlor steht.13. Verbindungen nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß sie der in Anspruch 7 angegebenen Formel entsprechen, worin Y für 7(S)-Chlor steht.14. Verbindungen nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß sie der in Anspruch 7 angegebenen Formel entsprechen, worin Y für 7(S)-Chlor steht.1015 2015. 3-(5'-Ribonukleotid) einer Verbindung der Formelund dessen pharmazeutisch akzeptable Salze.16. 3-(5'-Ribonukleotid) einer Verbindung der Formel:30 35S-CH,17.dessen 2-Palmitat und dessen pharmazeutisch akzeptable Salze.3-(5'-Ribonukleotide) einer Verbindung der allgemeinen Formel:C2H-18.'' C-Xworin X für 7(S)-Halogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid oder 7(R)-Halogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid steht, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.3-(5'-Ribonukleotide) einer Verbindung der allgemeinen Formel:C2H319.worin X für 7(S)-Halogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid oder 7(R)-Halogenmethyl-1-thio-oc-lincosaminid steht, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.3-(5'-Ribonukleotide) einer Verbindung der allgemeinen Formel:C2H5worin X für 7(S)-Halogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid oder 7(R)-Halogenmethyl-1-thio-a-lincosaminid steht, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.20. 3-(5'-Ribonukleotide) einer Verbindung der allgemeinen Formel:worin A, B und E, die gleich oder verschieden sein können, jeweils für ein Stickstoff-, Sauerstoff- oder Schwefelatom oder einen Rest der Formel CR^R1 stehen,R^ und Rp die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen und an einem beliebigen Ring-Kohlenstoffoder-Stickstoffatom hängen können und R1 mehrmals an beliebigen Ringkohlenstoff at omen hängen kann, ■' und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.21. 3-(5'-Ribonukleotid) einer Verbindung der Formel: 25und dessen pharmazeutisch akzeptable Salze.22. 3-(5'-Ribonukleotide) einer Verbindung der allgemeinen Formel:1020worin A, B und E, die gleich oder verschieden sein können, Jeweils für ein Stickstoff-, Sauerstoffoder Schwefelatom oder einen Rest der Formel CR1R-, stehen,R,. und Rp die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen und an einem beliebigen Ring-Kohlenstoffoder-Stickstoffatom hängen können und R1 mehrmals an beliebigen Ringkohlenstoffatomen hängen kann, und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.23. Verbindung nach Anspruch 22,der Formel:30^fK ^C -NH CHN0H Ac«,OH35und deren pharmazeutisch akzeptable Salze.24. Verbindung der Formel:CH2CHworin R fürOHOH OHsteht.25Verbindung der Formel: CH2CH3 CH:H-C-Cl CONH — CHHO/i—α.ORSCH2OH- 11 -worin R fürHO HO^ HO sHO-O-dsteht.26. Verbindung der Formel:CH2CH320CH3I H-C-CICONH — CH HO λ—0 ORSCH;25OHworin R für30OHOH- 12 -steht.27. Verbindung der Formel:CH3CH3worin R fürOH OHsteht.28. Verfahren zur Herstellung von 3-(5'-Ribonukleotiden) einer Verbindung der allgemeinen Formel::-NHworin bedeuten:R1 einen oder mehrere Substituenten in 3-, 4-, 5-ι 7-, 8- oder 9-Stellung(en) des Rings, insbesondere ein Wasserstoff- oder Halogenatom, einen Alkylrest, einen substituierten Alkylrest mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom (en) im Alkylteil,. einschließlich der Isomeren, einen Cycloalkylrest, einen substituierten Cycloalkylrest, ein substituiertes Sauerstoff- oder Stickstoffatom, einen Phenylrest, einen substituierten Phenylrest, einen Rest der Formel -(CHp)-OH oder der Formel -(CH2J-NRiRc mit η gleich einer ganzen Zahl von 1 bis einschließlich 8 und R^ und Rc gleich Wasser-Stoffatomen oder Alkylresten mit 1 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatom(en), einschließlich der Isomeren hiervon;R, H, CH,, C2H5 oder -CH2-CH2-OH; η eine ganze Zahl von 1 bis einschließlich 4 und Y 7(S)-Halogen oder 7(R)-Halogen, und deren pharmazeutisch akzeptablen Salzen, dadurch gekennzeichnet, daß man in einem wäßrigen Medium mit geeigneten Nährstoffen Streptomyces rochei (NRRL 3533) in Gegenwart einer Verbindung der angegebenen Formel züchtet und das gewünschte1 3-(5'-Ribonukleotid) aus dem Kulturmedium gewinnt.
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