DE3043498C2 - - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft den Gegenstand der Ansprüche.

Es gibt verschiedene Substanzen, denen eine vorbeugende oder lindernde Wirkung bei Krankheiten zugeschrieben wird, die durch Virus-Infektion verursacht werden, deren Gastgeber Wirbeltiere sind, oder von denen angenommen wird, daß sie befähigt sind, die Symptome solcher Krankheiten durch merkliche Verstärkung der Antikörper-Aktivität im Tier zu lindern. Bisher bekannte antivirale Stoffe umfassen Interferon, Substanzen, die die Fähigkeit haben, Interferon zu induzieren, d. h. Induktionsstoffe (Interferon-Induktionsstoffe), Amantadinhydrochlorid oder synthetisch hergestellte Substanzen wie Methysazon, die unmittelbar einen inhibierenden Effekt auf die Virus-Ausbreitung haben. Interferon ist ein Glycoprotein, welches antivirale und Antitumoraktivität besitzt. Dieses Glycoprotein wird in situ durch Zellen von Wirbeltieren produziert, wenn die Zellen mit dem Virus infiziert sind. Es ist empfohlen worden für die Therapie von infektiösen Viruskrankheiten und auch für die Therapie von Krebs. Bekannte Induktionsstoffe, die Interferon in Wirbeltieren nach einem anderen Verfahren als der Virus-Infektion induzieren, umfassen natürliche hochmolekulare Substanzen wie Doppelketten-Ribonucleinsäuren von Bacteriophagen einer gewissen Spezies oder synthetische hochmolekulare Substanzen wie Doppelketten-Ribonucleinsäuren. Typische Beispiele hierfür sind Polyinosinsäure-Polycytidylsäure oder niedrigmolekulare Induktionsstoffe wie Tyrolon.

Bei der Herstellung von Interferon besteht jedoch ein erhebliches Problem in dessen Reinigung, und bisher ist noch kein wirtschaftliches Verfahren zu dessen Herstellung gefunden worden. Andererseits sind bekannte Interferon-Induktionsstoffe bisher noch nicht praktisch eingesetzt worden, und zwar im wesentlichen wegen deren Toxizität. Synthetische antivirale Stoffe, die unmittelbar einen inhibierenden Effekt auf die Virusausbreitung ausüben und die zur Zeit im Handel erhältlich sind, haben einen sehr engen Bereich hinsichtlich der Virus- infizierten Krankheiten, welche durch Verabreichung dieser Mittel heilbar sind. Deshalb besteht ein beträchtliches Bedürfnis in der Schaffnung neuer synthetischer Stoffe mit antiviralen Eigenschaften. Es wurden deshalb umfangreiche Forschungsarbeiten durchgeführt mit dem Ziel, solche Verbindungen zu finden, die zur Produktion von Interferon mit hoher Wirksamkeit befähigt sind und die darüber hinaus auf der biologischen Ebene eine antivirale Aktität besitzen. Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß die Verbindungen der nachfolgend wiedergegebenen allgemeinen Formel I und deren Säureadditionssalze eine ausgezeichnete Interferon- Induktionsfähigkeit besitzen und gleichzeitig eine ausgezeichnete antivirale Aktität selbst im biologischen Test zeigen.

Zur Herstellung der Decaprenylaminderivate der allgemeinen Formel I und deren Säureadditionssalze kann ein Verfahren angewandt werden, bei dem an sich bekannte Verfahrensmaßnahmen zur Amin-Synthese auf das Ausgangsdecaprenol der nachfolgenden Formel

angewandt werden, um ein gewünschtes Aminderivat herzustellen.

Das so erhaltene Aminderivat kann weiterhin in ein entsprechendes Salz in an sich bekannter Weise übergeführt werden. Genauer ausgedrückt, kann ein gewünschtes Amin nach einem Verfahren hergestellt werden, gemäß dem ein geeigneter Decaprenylalkohol der obigen allgemeinen Formel II in ein entsprechendes Halogenid oder einen Sulfonsäureester übergeführt und anschließend mit einer entsprechenden heterocyclischen Verbindung, die mindestens eine primäre oder sekundäre Aminogruppe enthält, in Gegenwart oder Abwesenheit einer Base umgesetzt wird.

Ein Säureadditionssalz von einem so hergestellten Aminderivat kann dadurch erhalten werden, daß das erhaltene Amin in einem geeigneten Lösungsmittel mit einer entsprechenden Säure unter Bildung des Salzes vermischt und das Salz auskristallisiert oder durch Eindampfen oder auf andere Weise gewonnen wird. Beispiele für geeignete Additionssalze für die medizinische Anwendung sind z. B. Salze mit Salzsäure, Essigsäure, Zitronensäure oder Fumarsäure.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Decaprenylaminderivate wird anhand der nachfolgenden Herstellungsbeispiele erläutert.

Herstellungsbeispiel 1 N-Decaprenyl-N′-methylpiperazindihydrochlorid

Zu einer Lösung N-Methylpiperazin (10 g) in Isopropyläther (20 ml) wurde eine Lösung von Decaprenylbromid (10 g) in Isopropyläther (20 ml) tropfenweise bei Raumtemperatur unter Rühren während 2 Stunden gegeben. Das Rühren wurde 2 Stunden lang fortgesetzt. Danach wurde das Reaktionsgemisch über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde dann mit 2 n-NaOH (20 ml) unter Rühren versetzt und mit Isopropyläther extrahiert. Der erhaltene flüssige Extrakt wurde mit Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand (8,5 g) wurde durch Kolonnenchromatographie unter Verwendung von Silicagel (85 g) gereinigt. Die erhaltene Hexan/Aceton-Fraktion (6,8 g) wurde in Aceton gelöst, mit HCl-Methanol zu schwach saurer Reaktion versetzt und dann abgekühlt. Die kristalline Masse wurde abfiltriert und aus Äthanol umkristallisiert, wobei N-Decaprenyl-N′-methylpiperazindihydrochlorid (5,3 g), F. 142-145°C, erhalten wurde. Die Elementaranalyse für C₅₅H₉₂N₂ · 2 HCl H₂O ergab die folgenden Werte:

Herstellungsbeispiele 2 bis 7

Nach dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde Decaprenylbromid mit einer heterocyclischen Verbindung, die eine sekundäre Aminogruppe enthält, umgesetzt, wobei die nachfolgend beschriebenen Verbindungen hergestellt wurden. Es sind deren Strukturformel, Summenformel, Schmelzpunkt und Werte der Elementaranalyse in der Tabelle 1 zusammengestellt.

Die physiologischen Wirkungen der Verbindungen der Erfindung sind nachfolgend erläutert.

1. Interferon-Induktionsaktivität

Die Versuchsverbindung wurde, mit einem oberflächenaktiven Mittel in Wasser suspensiert, Gruppen von jeweils 5 weiblichen ICR-Mäusen mit einem Gewicht von etwa 25 g intraperitoneal verabreicht. 20 Stunden nach der Verabreichung wurde das Blut der Mäuse gesammelt, und das Serum wurde abgetrennt, um ein Serum-Interferon zu erhalten. Die nachfolgend beschriebenen Schritte wurden in der angegebenen Reihenfolge durchgeführt, um die Potenz des so induzierten Serum-Interferons zu bestimmen. L-929-Zellen, die von Mäusen stammen und vorher in einr Monoschicht inkubiert worden waren, wurden mit der 10fach verdünnten Testserumlösung in Kontakt gebracht, über Nacht bei 37°C in einem Inkubator in Kohlendioxidatmosphäre inkubiert, und die verdünnte Testserumlösung wurde davon entfernt. Danach wurden die Zellen mit Vesiculär-Stomatitis-Virus inoculiert und auf ein Tissue-Kulturmedium, enthaltend 1% Agar, gegeben. Nach 24stündiger Inkubation bei 37°C wurden die Zellen mit einer Neutralrotlösung gefärbt und auf eine geeignete Konzentration verdünnt, um die gebildete Plaque-Anzahl zu zählen und dadurch die Plaque-Inhibierungsrate in der jeweiligen Testgruppe gegen eine Gruppe zu berechnen, der keine Testverbindung verabreicht worden war. In der Tabelle 2 sind die Plaque-Inhibierungsraten der Testverbindungen zusammengestellt.

2. Wirkung auf mit Vaccinia-Virus infizierte Mäuse

Gruppen von jeweils 10 weiblichen ICR-Mäusen wurde durch die Schwanzvene Vaccinia-Virus (DIE-Stamm) intravenös injiziert. Am 8. Tag nach der Injektion wurde die Zahl der Schädigungen in Form kleiner Pocken auf der Schwanzoberfläche gezählt nach Anfärben des Schwanzes mit einer Äthanollösung, enthaltend 1% Fluorescein und 0,5% Methylenblau. In diesem Versuch wurden die Testverbindungen am Tag unmittelbar bevor der Inoculation des Virus den Mäusen intraperitoneal verabreicht. Die antivirale Aktivität der Testverbindungen wurde dadurch ausgedrückt, daß die Inhibierung der Schwanzschädigungen der jeweiligen Versuchsgruppe in Vergleich gesetzt wurde zu denjenigen der Gruppe, der keine Testverbindung verabreicht worden war.

In der Tabelle 2 sind die Inhibierungsraten hinsichtlich der Schwanzläsionen der Testverbindungen zusammengestellt.

3. Effekt auf mit Influenza-Virus infizierte Mäuse

Gruppen von jeweils 10 weiblichen ICR-Mäusen mit einem Gewicht von etwa 25 g wurden durch Inhalieren von vernebeltem Influenza- Virus A/PR-8 infiziert. Eine Lösung der jeweiligen Testverbindung in einer wäßrigen Lösung, enthaltend ein oberflächenaktives Mittel, wurde jeweils 24 Stunden und 3 Stunden vor der Virusinfektion und fünfmal jeden zweiten Tag nach dem zweiten Tag nach der Infektion den Mäusen intraperitoneal verabreicht. Diejenigen Mäuse, die 21 Tage nach der Infektion überlebten, wurden als überlebende Tiere angesehen, und die Überlebensrate wurde gemäß der folgenden Gleichung berechnet:

Tabelle 2

4. Toxizität

Zur Bestimmung der akuten Toxizität der Verbindungen gemäß der Erfindung wurde die 50%ige letale Dosis der Verbindungen an männlichen ddY-Mäusen mit einem Gewicht von 20 bis 25 g ermittelt. Aus den in Tabelle 3 zusammengestellten Ergebnissen ist ersichtlich, daß die Verbindungen einen hohen Sicherheitsbereich bei der intraperitonealen Verabreichung haben.

Tabelle 3

Aus den obigen Versuchsergebnissen ist deutlich ersichtlich, daß die aktiven Bestandteile der Erfindung in vivo eine Interferon-Induktionsaktivität besitzen und wenig toxisch sind und dabei eine ausgezeichnete antivirale Aktivität haben. Im Hinblick auf die Tatsache, daß eine strikte Correlation der Interferonaktivität mit der jeweiligen antiviralen Aktivität nicht immer bei den Verbindungen gemäß der Erfindung beobachtet wird, wird auch die Möglichkeit in Betracht gezogen, daß die antivirale Aktivität dieser Verbindungen im biologischen Bereich nicht nur auf dem Interferon beruht, sondern auch auf einem anderen Verteidigungsmechanismus des Gastgebers. Wenn dementsprechend die aktiven Bestandteile der Erfindung bei der Behandlung von durch Virus infizierten Krankheiten verwendet werden, können sie den Patienten durch irgendwelche Methoden verabreicht werden, z. B. oral, durch Inhalation oder durch andere Verabreichungsmethoden und auch durch subkutane, intramuskuläre oder intravenöse Injektion. Je nach dem Zustand des Patienten, z. B. dessen Alter, Symptom und Art der Verabreichung der Wirkstoffe wird der aktive Bestandteil gemäß der Erfindung zweckmäßig in einer Dosis von 0,5 bis 20 mg/kg, vorzugsweise 3 bis 5 mg/kg mehrmals (2- bis 4mal) täglich verabreicht.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung können zu geeigneten Zubereitungen für die medizinische Verabreichung formuliert werden, z. B. zu Tabletten, Kapseln, Granulat, Pulver, flüssigen Präparaten für die orale Verwendung, Augentropfen, Suppositorien, Salben oder Injektionslösungen.

Wenn die Verbindungen gemäß der Erfindung oral verabreicht werden, können sie in Form von Tabletten, Kapseln, Granulat oder Pulver verabreicht werden. Diese festen Zubereitungen zur oralen Verabreichung können üblicherweise verwendete Trägerstoffe enthalten, z. B. Kieselsäureanhydrid, Metakieselsäure, Magnesiumalginat, snythetisches Aluminiumsilicat, Lactose, Rohrzucker, Maisstärke, mikrokristalline Zellulose, hydroxypropylierte Stärke oder Glycin; Bindemittel wie Gummi arabicum, Gelatine, Tragacanth, Hydroxypropylcellulose oder Polyvinylpyrrolidon; Gleitmittel wie Magnesiumstearat, Kalk oder Silica; Zerfallsmittel wie Kartoffelstärke und Carboxymethylcellulose; Benetzungsmittel wie Polyäthylenglycol, Sorbitanmonooleat, hydriertes Castoröl, Natriumlaurylsulfat. Zur Herstellung weicher Kapseln können die Verbindungen gemäß der Erfindung insbesondere dadurch formuliert werden, daß sie in in üblicher Weise verwendeten öligen Substraten wie Sesamöl, Erdnußöl, Keimöl oder fraktioniertem Kokosnußöl gelöst oder suspendiert werden. Tabletten oder Granulat-Präparate können gemäß üblichen Verfahren beschichtet werden.

Flüssige Präparate zur oralen Verabreichung können in Form von wäßrigen oder öligen Emulsionen oder Sirup vorliegen.

In alternativer Weise können sie in Form von trockenen Produkten vorliegen, die vor der Verwendung mittels geeigneter Trägerstoffe wieder aufgelöst werden können. Diesen flüssigen Präparaten können üblicherweise verwendete Zusatzstoffe zugefügt werden, beispielsweise Emulgierhilfsmittel wie Sorbitsyrup, Methylcellulose, Gelatine oder Hydroxyäthylcellulose; Emulgatoren wie Lecithin, Sorbitanmonooleat, hydriertes Castoröl, nichtwäßrige Trägerstoffe wie fraktioniertes Kokosnußöl, Mandelöl oder Erdnußöl; oder Antiseptica wie Methyl- p-hydroxybenzoat, Propyl-p-hydroxy-benzoat oder Sorbinsäure. Diese Präparate zur oralen Verabreichung können außerdem, falls nötig, Konservierungsmittel oder Stabilisatoren enthalten.

Wenn die Verbindungen gemäß der Erfindung in Form nicht-oraler Suppositorien verabreicht werden, können sie in an sich bekannter Weise dazu formuliert werden unter Verwendung von oleophilen Substraten wie Kakaoöl oder sie können in Form von Rektalkapseln verwendet werden, die erhalten werden durch Einhüllen eines Gemisches von Polyäthylenglykol, Sesamöl, Keimöl oder fraktioniertem Kokosnußöl in ein Gelatineblatt. Die Rektalkapseln können, falls gewünscht, mit wachsartigen Stoffen beschichtet werden.

Wenn die Verbindungen gemäß der Erfindung als Injektionslösungen verwendet werden, können sie dazu in Öllösungen, emulgierte Lösungen oder wäßrige Lösungen formuliert werden, und diese Lösungen können üblicherweise verwendete Emulgatoren oder Stabilisatoren enthalten.

Je nach der Art der Verabreichung können die beschriebenen Zubereitungen die Verbindungen gemäß der Erfindung in einer Menge von z. B. mindestens 1%, vorzugsweise 5 bis 50% enthalten.

Claims (5)

1. Decaprenylaminderivate der allgemeinen Formel worin R mit dem benachbarten Stickstoffatom die Reste bildet, und deren Säureadditionssalze.

2. N-Decaprenyl-N′-methylpiperazindihydrochlorid.

3. N-Decaprenylpiperidindihydrochlorid.

4. N-Decaprenylimidazol.

5. Verwendung von Verbindungen gemäß Anspruch 1 bei der Bekämpfung von Virus-Infektionen.