DE3027326C2

DE3027326C2 -

Info

Publication number: DE3027326C2
Application number: DE3027326A
Authority: DE
Inventors: Hamao Tokio/Tokyo Jp Umezawa; Tomohisa Asaka Jp Takita; Akio Kamakura Jp Fujii; Mamoru Tokorozawa Jp Kunishima; Yasuhiko Kitamoto Jp Muraoka
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1979-07-19
Filing date: 1980-07-18
Publication date: 1988-09-01
Also published as: JPS643879B2; CA1150168A; DE3027326A1; US4326054A; FR2461716A1; GB2054591A; IT8049278A0; GB2054591B; IT1145379B; JPS5625197A; FR2461716B1

Description

Die Erfindung betrifft Cleomycin-Antibiotika, die zu der Phleomycin-Bleomycin-Gruppe gehören. Diese Substanzen haben antitumorale und antimikrobielle Aktivitäten, und sie sind als chemotherapeutische Mittel zur Behandlung von Krebs und bakteriellen Infektionen geeignet.

Als Antibiotika, die zu der Phleomycin-Bleomycin-Gruppe gehören, sind die folgenden Substanzen bekannt: Bleomycine, welche auf bekannte Weise aus einem flüssigen Kulturmedium von Streptomyces verticillus gewonnen werden (Umezawa et al. "Journal of Antibiotics", 19, 210 [1966]); Bleomycine, welche unter Verwendung eines Kulturmediums gewonnen werden, das mit einer Aminoverbindung als Vorläufer vermischt worden ist (US-PS 38 46 400 und 41 95 018); Bleomycine, die in der DE-OS 28 28 933 beschrieben werden; Bleomycine, die am endständigen Aminstickstoff N-substituiert sind (US-PS 39 22 262); Phleomycine, die durch Streptomyces verticillus 843-1 ATCC 21 890 hergestellt worden sind (Umezawa et al. "Journal of Antibiotics", 9, 82 [1956]); Zorbamycin, hergestellt durch Streptomyces bikiniensis var. zorbonesis (Argoudelis et al. "Journal of Antibiotics", 24, 543 [1971]); die Substanz YA-56, die durch Streptomyces humidus var. antitumoris hergestellt worden ist (Furumai et al. "Journal of Antibiotics", 24, 727 [1971]); Tallylsomycin, hergestellt durch ein Aktinomyzetikum Streptoalloteichus (Kawaguchi et al. "Journal of Antibiotics", 30, 779 [1977]); Platomycin, hergestellt durch ein Aktinomyzetikum Streptosporangium violaceochromogenes sub sp. globophilum (Takazawa et al. "Journal of Antibiotics", 28, 366 [1975]); Zorbonomycin, hergestellt durch Streptomyces bikiniensis var. zorbonensis (Argoudelis et al. "Journal of Antibiotics", 24, 543 [1971]); und Victomycin, hergestellt durch Streptosporangium violaceochromogenes (Kawamoto et al. "Journal of Antibiotics", 28, 358 [1975]).

Als Ergebnis ausgedehnter Untersuchungen betreffend neue Antibiotika der Phleomycin-Bleomycin-Gruppe wurden nun bestimmte Verbindungen, nämlich Cleomycine, aufgefunden, welche die Partialstruktur:

anstelle der Threoningrupppe in der Partialstruktur:

im Bleomycinskelett aufweisen. Es wurde weiterhin festgestellt, daß diese Verbindungen antitumorale und antimikrobielle Aktivitäten haben.

Gegenstand der Erfindung sind daher die im Patentanspruch 1 angegebenen Cleomycin-Antibiotika und das im Patentanspruch 2 angegebene Verfahren zur Herstellung dieser Cleomycine.

Die erfindungsgemäßen Cleomycine können dadurch erhalten werden, daß man einen cleomycinerzeugenden Stamm, der zur Gruppe der Actinomyceten bzw. Strahlpilze gehört, Streptomyces verticillus in ein Medium inokuliert, zu welchem erforderlichenfalls ein aliphatisches primäres Amin mit zwei oder mehreren basischen Gruppen zugesetzt worden ist, den Stamm kultiviert bzw. züchtet, um ein Cleomycin der obigen Formel I herzustellen, und danach das Cleomycin aus dem Medium gewinnt.

Der Mikroorganismus zur Verwendung für die Erfindung ist ein Actinomycetum Streptomyces verticillus, das als Stamm bekannt ist, welcher dazu imstande ist, Bleomycin-Antibiotika zu erzeugen (Umezawa et al. "Journal of Antibiotics", 19, 200 [1966]), wobei jeder beliebige Stamm, der zu dieser Art gehört, verwendet werden kann. Ein typischer Stamm ist z. B. Streptomyces verticillus Collection Nr. NK 68-144 (ATCC Nr. 31 307). Es ist weit bekannt, daß die Fähigkeit zur Erzeugung von Antibiotika von Actinomyceten natürlich oder künstlich verändert werden kann. Somit kann auch ein mutierter Stamm von Streptomyces verticillus mit einer höheren Fähigkeit zur Erzeugung von Cleomycin verwendet werden, wobei dieser in bekannter Weise beispielsweise durch Einwirkung von Röntgenstrahlen, Ultraviolettstrahlen oder von mutationsinduzierenden Mitteln hergestellt werden kann. Die für die Erfindung geeigneten cleomycinerzeugenden Stämme schließen naturgemäß solche Stämme ein, die natürlich oder künstlich mutiert worden sind.

Bei dem erfindungsgemäßen Kultivierungsprozeß werden als Nährmittel für das Kulturmedium entsprechende Kombinationen von Materialien verwendet, die aus Kohlenstoffquellen, wie Stärke, Stärkesirup, Glucose, Mannose, Lactose, Maltose, Saccharose, Inosit, Mannit, Glycerin, Molassen und organischen Säuren, anorganischen oder organischen Stickstoffquellen, wie Ammoniumchlorid, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Natriumnitrat, Harnstoff, Peptone, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Trockenhefe, Maisquellflüssigkeit, Sojabohnenmehl, entfettetes Sojabohnenmehl, Fischmehl, Casaminosäure® und Aminosäuren, und anorganischen Salzen, wie Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Phosphate, Calciumcarbonat, Zinksulfat und Kupfersulfat, ausgewählt werden.

Cleomycine können zufriedenstellenderweise durch Kultivierung des obengenannten Stamms in dem beschriebenen Medium hergestellt werden. Jedoch werden gewöhnlich mehrere Arten von Cleomycin mit verschiedenen endständigen Aminoresten, wie z. B. 3-S,S-Dimethylmercaptopropylaminocleomycin, 4- Guanidinobutylaminocleomycin und 3-(4-Aminobutylamino)- propylaminocleomycin, gebildet. Um die Erzeugung eines gewünschten Cleomycins je nach den Notwendigkeiten zu fördern, kann ein aliphatisches primäres Amin mit zwei oder mehreren basischen Gruppen im Molekül zusätzlich zu den oben beschriebenen Nährquellen zugesetzt werden, das der Einfachheit halber als Aminoverbindung bezeichnet wird und dem Kulturmedium in einer geeigneten Menge, z. B. von 0,01 bis 1 Gew.-%, zugesetzt wird. Entsprechende Untersuchungen haben gezeigt, daß während der Biosynthese der Cleomycine durch einen cleomycinerzeugenden Stamm diese Aminoverbindung von den Cleomycinen aufgenommen und in den endständigen Aminorest überführt wird. Nach dieser Methode können verschiedene Arten von Cleomycin durch Veränderung der Art der zugesetzten Aminoverbindung hergestellt werden. Weiterhin ist die selektive Erzeugung einer gegebenen Art von Cleomycin durch Zugabe einer geeigneten Menge einer Aminoverbindung möglich. Dies ist von großem technischen Vorteil. Hinsichtlich der zuzusetzenden Aminoverbindung bestehen keine besonderen Beschränkungen, vorausgesetzt, daß sie ein aliphatisches primäres Amin mit zwei oder mehreren basischen Gruppen im Molekül ist. Beispiele für solche Aminoverbindungen sind Aminoverbindungen der allgemeinen Formel:

X-R₁₁-NH₂ (II)

in der R₁₁ eine -(CH₂)₂-, -(CH₂)₃- oder -(CH₂)₄-Gruppe darstellt oder eine Gruppe der allgemeinen Formel

in der R₁ Wasserstoff oder Methyl bedeutet, R₁₂ für eine der folgenden Alkylengruppen:

steht und R₁₃ eine -(CH₂)₂-, -(CH₂)₃- oder -(CH₂)₄-Gruppe darstellt. X ist eine basische Gruppe entsprechend den Formeln:

in denen R₁ die gleiche Bedeutung hat wie oben angegeben und die Substituenten R₂ und R₃ Wasserstoff, Methyl, n-Butyl, 2-Hydroxypropyl, 3-Methoxypropyl, 6-Hydroxyhexyl, 1-Phenylethyl oder Benzyl bedeuten. Als zusätzliche Aminoverbindungen kommen auch N-(3-Cyclohexylaminopropyl)-1,3-diaminopropan und 2-(4-Imidazolyl)ethylamin in Frage.

Beispiele für Aminoverbindungen und Cleomycine, die durch Kultivierung in Gegenwart der genannten Aminoverbindung erhalten werden, sind in Tabelle 1 zusammengestellt.

Es sind das Kultivierungsverfahren in flüssigem Medium und insbesondere das Tauchkultivierungsverfahren technisch anwendbar. Bei der Kultivierung sind eine Temperatur von 20 bis 40°C und ein pH-Wert von nahezu neutral zweckmäßig. Cleomycine werden in dem Medium nach 2- bis 10tägiger Kultivierung in flüssigem Medium erzeugt und sie sammeln sich darin an. Die Kultivierung wird abgebrochen, wenn die Cleomycin-Konzentration in dem flüssigen Medium ein Maximum erreicht hat. Dann wird das Mycel abfiltriert, und aus dem Filtrat wird das angestrebte Produkt isoliert und gereinigt.

Cleomycine haben die Eigenschaft, daß sie mit Kupfer(II)-Ionen Komplexe bilden (nachstehend als "Kupfer enthaltende Form" bezeichnet). An erster Stelle werden aus dem Filtrat des Kulturmediums Cleomycine in dieser Kupfer enthaltenden Form isoliert, die leicht in die kupferfreien Cleomycine umgewandelt werden können; letztere werden nachstehend als "kupferfreie Form" bezeichnet.

Tabelle 1

Zur Gewinnung und Reinigung der Cleomycine sind alle bekannten Methoden anwendbar, die für Bleomycine verwendet werden, welche in physikalischen und chemischen Eigenschaften den Cleomycinen analog sind. Dies geschieht, wie nachfolgend beschrieben wird, durch eine geeignete Kombination von bekannten Flüssigchromatographietechniken. So wird z. B. das Filtrat des Kulturmediums durch eine Säule geleitet, welche mit einem schwach sauren Kationenaustauscherharz in der H⁺-Form gepackt ist, um die angestrebte Substanz zu adsorbieren. Nach dem Waschen der Säule mit Wasser wird das Adsorbat mit verdünnter Salzsäure eluiert. Die Fraktionen, die eine Aktivität gegenüber einem Testmikroorganismus Mycobacterium smegmatis ATCC 607 zeigen, werden gesammelt und mit Natriumhydroxid neutralisiert. Sodann wird zum Entsalzen durch eine Säule geleitet, die mit einem Adsorptionsharz vom makronetzförmigen Typ gepackt ist, um die angestrebte Substanz zu adsorbieren. Nach dem Waschen der Säule mit Wasser wird das Adsorbat mit wäßrigem Methanol, das mit Salzsäure angesäuert worden ist, eluiert. Die aktiven Fraktionen werden gesammelt, mit einem schwach basischen Anionenaustauscherharz in der OH^--Form neutralisiert und sodann bei vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Hierdurch wird ein entsalztes rohes bräunliches Pulver erhalten. Dieses wird in Methanol oder wäßrigem Methanol aufgelöst und die Lösung durch eine Säule geleitet, die mit neutralem Aluminiumoxid gepackt ist, wobei das gleiche Lösungsmittel verwendet wird. Bei der Elution mit dem gleichen Lösungsmittel wie oben werden bläulich-grüne Fraktionen erhalten. Diese werden eingeengt und zu einem Pulver zur Trockene eingedampft. Das Pulver wird in destilliertem Wasser aufgelöst und durch eine Säule von dreidimensional vernetztem Polysaccharid für Gelchromatographie (G-Polysaccharid) geleitet. Nach der Elution mit destilliertem Wasser werden gelbe färbende Stoffe eliminiert, und es werden blaue Fraktionen erhalten. Diese werden erneut in destilliertem Wasser aufgelöst und durch eine Säule geleitet, die mit dreidimensional vernetztem Polysaccharid mit Carboxymethylgruppen (CM-Polysaccharid) gepackt ist, wobei destilliertes Wasser verwendet wird. Blaue Fraktionen, die Cleomycine enthalten, werden gewonnen, indem mit einer wäßrigen Lösung, die Natriumchlorid enthält, in einer solchen Weise eluiert wird, daß die Natriumchloridkonzentration in dem Eluierungsmittel allmählich bis zu 1 mol/l erhöht wird. Wenn zwei oder mehrere Arten von Cleomycinen gebildet werden, dann werden diese bei dem obengenannten Prozeß abgetrennt und gesondert gewonnen. Diese Fraktionen werden auf die beschriebene Weise entsalzt und lyophilisiert. Auf diese Weise wird ein rohes blaues Pulver, das Cleomycin enthält, erhalten.

Übliche cleomycinerzeugende Stämme erzeugen Bleomycine als Nebenprodukt. Das durch die oben beschriebenen Reinigungsstufen erhaltene Cleomycinpulver ist daher mit dem Bleomycin mit dem gleichen endständigen Aminorest wie derjenige von Cleomycin verunreinigt. Es wurden daher ausgedehnte Untersuchungen durchgeführt, um gereinigtes Cleomycin zu erhalten, das frei von Bleomycin ist.

Als Ergebnis wurde ein Flüssigchromatographieverfahren entwickelt, bei dem eine Säule verwendet wird, die mit einem Adsorptionssalz vom makronetzförmigen Typ gepackt ist, oder eine Säule, die mit handelsüblichem chemisch gebundenem Siliciumdioxid für die Umkehrphasenchromatographie gepackt ist.

Cleomycin hat eine stärkere Affinität für das obengenannte Packmaterial als Bleomycin, das den gleichen endständigen Aminorest hat. Demgemäß gestattet die Entwicklung durch ein geeignetes Lösungsmittelsystem die Eliminierung von Bleomycin, wobei dieses früher als das Cleomycin eluiert wird. So wird beispielsweise eine wäßrige Lösung des obengenannten rohen Pulvers auf eine Säule aufgegeben, die mit einem makronetzförmigen Adsorptionsharz gepackt ist. Durch Entwicklung mit destilliertem Wasser oder wäßrigem Methanol wird das Bleomycin früher eluiert und eliminiert. Das späte Eluat, das Cleomycin enthält, wird gewonnen, konzentriert und lyophilisiert, wodurch ein reines Cleomycin (Kupfer enthaltende Form) in Form eines blauen amorphen Pulvers erhalten wird. Wenn das Zwischeneluat, das sowohl Cleomycin als auch Bleomycin enthält, in die obengenannte Säule zurückgeführt wird, um erneut der Adsorption und Elution unterworfen zu werden (dieses Vorgehen wird nachstehend als "Zurückführung" bezeichnet), dann kann eine weitere Menge von reinem Cleomycin gewonnen werden. Die Zurückführung kann, wie erforderlich, wiederholt werden.

Die Methanolkonzentration des obigen Elutionsmittels wird zweckmäßigerweise entsprechend der Hydrophobizität des zu erzeugenden Cleomycins erhöht. Im allgemeinen kann eine geeignete Konzentration von weniger als 80% (Volumen/Volumen) gewählt werden. Die Trennwirkung kann gesteigert werden, wenn man zu dem Elutionsmittel ein Salz, wie Natriumchlorid, Ammoniumchlorid, Natriumsulfat, Ammoniumsulfat, Natriumacetat, Kaliumacetat, Ammoniumacetat, Ammoniumformiat, Natriumcitrat, Natriumdihydrogenphosphat, Dinatriumhydrogenphosphat, Kaliumdihydrogenphosphat oder Dikaliumhydrogenphosphat, zusetzt oder wenn man eine Säure, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure oder Zitronensäure, zum Zwecke der pH-Einstellung zusetzt.

Das beschriebene Verfahren ist anwendbar, wenn andere Typen von Packmaterialien, z. B. das obengenannte chemisch gebundene Siliciumdioxid bzw. die oben erwähnte chemisch gebundene Kieselsäure, verwendet werden. Die gemessenen Retentionszeiten bei der Umkehrphasen-Flüssigchromatographie von Cleomycinen (Kupfer enthaltende Form), die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellt worden sind, sind in Tabelle 2 zusammengestellt.

Die Säule war mit chemisch gebundenem Siliciumdioxid gepackt. Als Lösungsmittel wurden eine wäßrige Lösung, enthaltend 1% Kaliumacetat und 0,5% Essigsäure, und Methanol in unterschiedlichem Mischungsverhältnis verwendet, und zwar:

Lösungsmittel 1: Wäßrige Lösung : Methanol=65 : 35 Volumen/Volumen
Lösungsmittel 2: Wäßrige Lösung : Methanol=70 : 30 Volumen/Volumen

Tabelle 2

Das so erhaltene Cleomycin (Kupfer enthaltende Form) wird nach bekannten Methoden, beispielsweise unter Verwendung von Ethylendiaminotetraessigsäure (EDTA, US-PS 39 29 993) von Kupfer befreit, wodurch die kupferfreie Form erhalten wird.

Nachstehend wird ein Beispiel für diese Methode gegeben: Die Kupfer enthaltende Form von Cleomycin wird in destilliertem Wasser aufgelöst, und die Lösung wird auf eine Säule aufgegossen, die mit makronetzförmigem Adsorptionsharz gepackt ist, um die gelösten Stoffe zu adsorbieren. Die Säule wird nacheinander mit einer wäßrigen Lösung, enthaltend 2% Natriumchlorid und 5% Ethylendiamintetraessigsäure-dinatriumsalz (EDTA.Na₂), mit einer wäßrigen Lösung, enthaltend 2% Natriumchlorid zur Entfernung von überschüssigem EDTA.Na₂, und mit destilliertem Wasser gewaschen. Sodann werden durch Elution mit saurem wäßrigen Methanol, z. B. 0,02 n-Salzsäure-Methanol (1 : 4, Volumen/Volumen), die Fraktionen gesammelt, die ein Ultraviolettabsorptionsmaximum nahe der Wellenlänge 290 mµm aufweisen. Das gesammelte Eluat wird unter Verwendung von schwach basischem Anionenaustauscherharz (OH^--Form) auf einen pH-Wert von 6,0 eingestellt, unter vermindertem Druck konzentriert und lyophilisiert, wodurch die kupferfreie Form von Cleomycinhydrochlorid als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver erhalten wird. Wenn beispielsweise verdünnter Schwefelsäure anstelle der genannten verdünnten Salzsäure verwendet wird, dann wird das angestrebte Produkt in Form des Sulfats erhalten. Ein nicht-toxisches Salz von Cleomycin mit einer beliebigen, jedoch pharmazeutisch annehmbaren Säure kann in der Weise erhalten werden, daß die in der oben beschriebenen Elutionsstufe verwendete Säure entsprechend ausgewählt wird.

Die Ultraviolettabsorptionsspektren der Cleomycine (Kupfer enthaltende Form), die erfindungsgemäß hergestellt worden sind, haben Maxima in der Nähe der Wellenlängen 292 nm und 243 nm, die sehr nahe an denjenigen der Bleomycine liegen. Die genannten Spektren (nachstehend als Ultraviolettabsorptionsspektren vom Bleomycintyp bezeichnet) unterscheiden sich im Vergleich mit denjenigen der Antibiotika, die zu der Phleomycin-Bleomycin-Gruppe gehören, eindeutig von den Spektren der Phleomycine, Zorbamycine und der Substanz YA-56.

Zersetzungsprodukte gemäß Tabelle 3 werden erzeugt, wenn die Cleomycine mit 6 n-Salzsäure 24 h bei 105°C hydrolysiert werden. Wie aus Tabelle 3 ersichtlich wird, haben die Cleomycine im Gegensatz zu den Bleomycinen das Merkmal, daß sie kein L-Threonin erzeugen. Bezüglich dieses Punkts ergeben im Vergleich zu den anderen Antibiotika mit Ultraviolettabsorptionsspektren vom Bleomycintyp Tallysomycin und Platomycin L-Threonin, bilden jedoch keine 2′-(2-Aminoethyl)-2,4′-bithiazol-4-carbonsäure, und sie unterscheiden sich daher eindeutig von den Cleomycinen. Auch Zorbonomycine unterscheiden sich eindeutig davon, da sie β-Hydroxy-L-valin erzeugen, obgleich sie kein L-Threonin bilden. Bei den Victomycinen beträgt der Schwefelgehalt nur 1,98%, während Cleomycine eine Schwefel enthaltende Aminosäure, 2′-(2-Aminoethyl)-2,4′-bithiazol-4-carbonsäure, als Bestandteil enthalten und der Schwefelgehalt, selbst bei dem Cleomycin mit dem kleinsten Schwefelgehalt, etwa 4% beträgt. Victomycine haben die obengenannte Schwefel enthaltende Aminosäure nicht und sie sind daher von Cleomycinen unterscheidbar.

Tabelle 3

Weiterhin wurden die ¹³C-NMR- und Protonen-NMR-Spektren von repräsentativen Cleomycinen, hergestellt nach dem erfindungsgemäßen Verfahren, gemessen. Auf der Basis dieser Ergebnisse und der chemischen Eigenschaften wurde die chemische Struktur von Cleomycin untersucht, und es wurde bestätigt, daß sie die neue Struktur gemäß der vorstehend angegebenen Formel I darstellt.

Die Protonen-NMR-Spektren wurden von Cleomycinproben in schwerem Wasser bei einer Frequenz von 100 MHz unter Verwendung von Tetramethylsilan als externem Standard gemessen. Ein breites Signal, welches den Cleomycinen gemeinsam ist und 4 Protonen entspricht, wurde bei einer chemischen Verschiebung δ von etwa 1,2 (ppm) beobachtet. Dieses Signal wurde den Methylengruppen (4 und 5) in der Partialstruktur der neuen Formel:

zugeordnet.

Es wurde festgestellt, daß diese Partialstruktur durch die obengenannte Hydrolyse zu 1-Amino-2-butanon durch Spaltung des Cyclopropanrings und Decarboxylierung zersetzt wird.

Die ¹³C-NMR-Spektren der Cleomycine wurden bei einer Frequenz von 25,2 MHz in schwerem Wasser gemessen, wobei Dioxan als interner Standard verwendet wurde. Als typisches Beispiel werden die Spektren von 3-[(s)-1′-Phenyl ethylamino]-propylaminocleomycin wie folgt angegeben: Als Signale, die für Cleomycine gemeinsam und ihrer Grundstruktur zuordbar sind, wurden die folgenden 51 Signale beobachtet, die von Kohlenstoffatomen ausgingen: (δ) 178,0, 176,9, 172,1, 172,0, 171,0, 169,8, 168,5, 166,1, 165,4, 163,8, 163,1, 158,7, 153,0, 149,3, 147,6, 137,6, 135,4, 125,7, 119,9, 118,6, 113,1, 99,0, 98,3, 75,4, 75,2, 74,4, 73,8, 71,2, 70,0, 69,2, 68,8, 67,9, 65,6, 61,8, 61,2, 60,4 (×2), 57,8, 56,3, 53,3, 48,3, 47,7, 43,6, 40,9, 39,9, 32,9, 15,6, 12,7 (×3) und 11,7. Weiterhin wurden als Signale (δ), die dem endständigen Aminorest zuordbar sind, 136,2, 130,3, 130,1 (×2), 128,3 (×2), 59,0, 45,3, 37,0, 26,3 und 19,3 beobachtet. Das heißt, es wurden insgesamt 62 Signale, die von Kohlenstoffatomen ausgingen, beobachtet. Diese Werte wurden bezüglich der Signale von Bleomycinen analysiert, die in der Literatur angegeben werden (Naganawa et al. "Journal of Antibiotics", 30, 388 [1977]). Die Ergebnisse bestätigten die Formel I. Bezüglich der Partialstrukturformel III wurde die folgende Zuordnung gemacht.

172,1 (1), 56,3 (3), 60,4 (2), 12,7×2 (4 und 5), wobei die Zahlen in Klammern die Positionszahlen der entsprechenden Kohlenstoffatome angeben.

Die physikalischen und chemischen Eigenschaften von typischen Cleomycinen sind in Tabelle 4 zusammengestellt.

Typische Beispiele von biologischen Aktivitäten, die bei Cleomycinen (kupferfreie Form) gemessen wurden, werden nachstehend angegeben.

(1) Antimikrobielle Aktivität

Ein Vergleich wurde mit den relevanten Bleomycin-Antibiotika durchgeführt. Die relative antimikrobielle Aktivität (µ/mg) gegen Mycobacterium smegmatis ATCC 607 wurde nach der Agarplattenzylindermethode gemessen, wobei Bleomycin A₂ als Standard (1000 µ/mg) verwendet wurde. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 5 zusammengestellt. Verbindung Nr.antimikrobielle Aktivität
(µ/mg)

1 1320 2 3262 3 2760 4 2150 5 1935 6 3575 7 7942 8 2280 9 980 1011420 11 878 12 2004 13 2273 14 2620 15 800 16 3590 17 1715 18 1869 19 6977 2010949 2114784 22 1147 23 6068 24 4806 25 2790 26 3520 27 8400 28 7660

(2) Aktivität gegenüber kultivierten HeLa-S₃-Zellen

Die 50%-Hemmkonzentration (LD₅₀) wurde bei einem Testcleomycin (Nr. 20) und bei Bleomycin A₂ als Referenzverbindung anhand der prozentualen Wachstumshemmung, gemessen bei HeLa-S₃-Zellen, bestimmt, nachdem die Zellen in Gegenwart der einzelnen Verbindungen kultiviert worden waren. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 6 zusammengestellt.
Verbindung (kupferfrei, Hydrochlorid)LD₅₀ (µg/ml)

Bleomycin A₂ (Referenzverbindung)0,73 Cleomycin Nr. 200,77

Aus den oben angegebenen Ergebnissen wird ersichtlich, daß die Cleomycine eine antimikrobielle Aktivität haben, die in keiner Weise derjenigen der Referenzverbindung Bleomycin A₂ unterlegen ist. Hinsichtlich der Anti-HeLa-Aktivität hat Cleomycin Nr. 20 ein repräsentatives Cleomycin, eine Aktivität, die nahezu gleich derjenigen von Bleomycin A₂ ist, welche Verbindung derzeit zur klinischen Behandlung von schuppigem Zellkarzinom verwendet wird. Diese Ergebnisse weisen auf die Eignung von Cleomycinen als Chemotherapeutikum zur Behandlung von bakteriellen Infektionen oder von Krebs hin.

Die Erfindung wird in den Beispielen und anhand der beigefügten Zeichnungen näher erläutert. Es zeigt

Fig. 1 die Ultraviolettabsorptionskurve von 3-[(s)-1′-Phe nylethylamino]-propylaminocleomycin (Verbindung Nr. 20), Hydrochlorid (Kupfer enthaltende Form) in destilliertem Wasser;

Fig. 2 die Ultraviolettabsorptionskurve von 3-[N-Methyl-N- (3-aminopropyl)]-aminopropylaminocleomycin (Verbindung Nr. 13), Hydrochlorid (kupferfreie Form) in 0,1 n-Salzsäure;

Fig. 3 die Ultraviolettabsorptionskurve von 3-[(s)-1′-Phenyl ethylamino]-propylaminocleomycin (Verbindung Nr. 20), Hydrochlorid (kupferfreie Form) in 0,1 n-Salzsäure;

Fig. 4 die Infrarotabsorptionskurve, bestimmt nach der Ka liumbromidtablettenmethode, von 3-[N-Methyl-N-(3- aminopropyl)]-aminopropylaminocleomycin (Verbindung Nr. 13), Hydrochlorid (Kupfer enthaltende Form);

Fig. 5 die Infrarotabsorptionskurve, bestimmt nach der Ka liumbromidtablettenmethode, von 3-[(s)-1′-Phenyl ethylamino]-propylaminocleomycin (Verbindung Nr. 20), Hydrochlorid (Kupfer enthaltende Form);

Fig. 6 die Infrarotabsorptionskurve, bestimmt nach der Ka liumbromidtablettenmethode, von 3-[N-Methyl-N-(3- aminopropyl)]-aminopropylaminocleomycin (Verbindung Nr. 13), Hydrochlorid (kupferfreie Form);

Fig. 7 und 8 die Infrarotabsorptionskurve, bestimmt nach der Kaliumbromidtablettenmethode, und die Protonen-NMR-Kurve (in D₂O) von 3-[(s)-1′-Phenylethylamino)- propylaminocleomycin (Verbindung Nr. 20), Sulfat (kupferfreie Form).

Beispiel 1 Herstellung von 3-[(s)-1′-Phenylethylamino]-propylaminocleomycin Stufe A

Streptomyces verticillus NK 68-144 (ATCC 31 307), kultiviert in einem Agarschrägmedium, wurde in ein Impfmedium (pH 7,0) inokuliert, das 2% Glucose, 0,3% Natriumchlorid, 0,75% Pepton und 0,75% Fleischextrakt enthielt. Es wurde 24 h lang bei 27°C eine Schüttelkultur durchgeführt, wodurch eine Impfkultur erhalten wurde. Ein Produktionskulturmedium (120 l, pH 7,0), enthaltend 10% Stärkesirup, 1% Glucose, 5% Sojabohnenmehl, 1% Maisquellflüssigkeit, 0,3% Natriumchlorid, 0,1% Dikaliumhydrogenphosphat, 0,05% Zinksulfat (Heptahydrat), 0,05% Kupfersulfat (Pentahydrat) und 0,2% Natriumnitrat, wurde in einem Edelstahltank mit einer Kapazität von 200 l sterilisiert und mit 2,5 Vol.-% der oben beschriebenen Impfkultur inokuliert. Danach wurden 0,1%, bezogen auf das Medium, von N-[(s)-1′- Phenylethyl]-1,3-diaminopropan zugesetzt. Nach 187stündiger Kultivierung bei 27°C unter Belüftung und Rühren wurde die Kultivierung abgebrochen, und das Medium wurde unter Verwendung eines Filterhilfsmittels filtriert, wodurch 115 l Kulturfiltrat erhalten wurden. Nach der Einstellung des pH-Werts mit Salzsäure auf 7,0 wurde das Material durch eine 7-l-Säule geleitet, die mit schwach saurem Kationenaustauscherharz (H⁺-Form) gepackt war, um die angestrebte Substanz zu adsorbieren. Nach dem Waschen mit Wasser wurde das Adsorbat mit 0,5 n-Salzsäure eluiert. Die Fraktionen, die gegenüber Mycobacterium smegmatis ATCC 607 aktiv waren, wurden gesammelt und mit 1 n-Natriumhydroxidlösung neutralisiert.

Sodann wurde das Material durch eine 2-l-Säule geleitet, die mit makronetzförmigem Adsorptionsharz gepackt war, um die angestrebte Substanz zu adsorbieren. Nach dem Waschen mit Wasser wurde das Adsorbat mit einem Gemisch aus 0,01 n-Salzsäure und Methanol (1 : 4 Vol./Vol.) eluiert, um aktive Fraktionen zu sammeln. Die gesammelten Fraktionen wurden mit schwach basischem Anionenaustauscherharz (OH^--Form) neutralisiert, eingedampft und unter vermindertem Druck getrocknet. Der Rückstand wurde mit Methanol extrahiert. Der in Methanol lösliche Teil wurde durch eine 400-ml-Säule geleitet, die mit neutralem Aluminiumoxid gepackt war, wobei Methanol verwendet wurde, das 20% (Vol./Vol.) Wasser enthielt. Durch Elution mit dem obengenannten Lösungsmittel wurden bläulich-grüne Fraktionen gesammelt und bei vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in 100 ml destilliertem Wasser aufgelöst und durch eine 2-l-Säule geleitet, die mit G-Polysaccharid gepackt war. Das Adsorbat wurde mit destilliertem Wasser eluiert. Blaue Fraktionen wurden gesammelt und durch eine 2-l-Säule geleitet, die mit CM-Polysaccharid (Na⁺-Form) gepackt war, um die angestrebte Substanz zu adsorbieren. Das Adsorbat wurde mit wäßriger Natriumchloridlösung in einer solchen Weise eluiert, daß die Natriumchloridkonzentration in dem Elutionsmittel allmählich auf 1 mol/l erhöht wurde. Die blauen Fraktionen, die bei Natriumchloridkonzentrationen von etwa 0,45 mol/l herausflossen, wurden gesammelt. Die gesammelten Fraktionen wurden auf die oben angegebene Weise entsalzt, wobei makronetzförmiges Adsorptionsharz verwendet wurde, worauf zur Trockene eingedampft wurde. Auf diese Weise wurden 11,7 g eines rohen blauen Pulvers erhalten.

10 g des obengenannten blauen Pulvers wurden in destilliertem Wasser aufgelöst, und die resultierende Lösung wurde in eine Säule von makronetzförmigem Adsorptionsharz (Volumen 1,4 l) eingegossen, welche zuvor mit einem Entwicklungslösungsmittel, nämlich einem Gemisch aus 0,02 mol/l wäßriger Essigsäure und Methanol (75 : 25 Vol./Vol.), ins Gleichgewicht gesetzt worden war. Die Säule wurde mit dem obengenannten Lösungsmittel entwickelt. Die Bleomycin enthaltenden Fraktionen, die früher mittels eines Ultraviolettdetektors festgestellt wurden, wurden eliminiert. Die späten Eluatfraktionen, die die angestrebte Substanz enthielten, wurden gewonnen, und die Zwischenfraktionen wurden zurückgeführt. Dieses Entwicklungsvorgehen wurde 7mal wiederholt. Die Fraktionen, die die angestrebte Substanz enthielten, wurden in jedem Zyklus gewonnen. Alle gewonnenen Fraktionen wurden miteinander kombiniert und mit 1 n-Natriumhydroxidlösung neutralisiert. Das Material wurde, wie oben beschrieben, entsalzt, wobei makronetzförmiges Adsorptionsharz verwendet wurde, unter vermindertem Druck konzentriert und schließlich lyophilisiert. Auf diese Weise wurden 3,2 g des Hydrochlorids des angestrebten Produkts (Kupfer enthaltende Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

Die Ultraviolettabsorptionsmaxima und die antimikrobielle Aktivität dieses Produkts waren wie folgt:
Wellenlänge nm(E , in destilliertem Wasser)

292 (117)
243 (143)
antimikrobielle Aktivität:11 300 µ/mg

(Die antimikrobielle Aktivität wurde bestimmt, indem Bleomycin A₂ als 1000 µ/mg genommen wurde und indem Mycobacterium smegmatis ATCC 607 als Testbakterium verwendet wurde. Danach wurde das Gleiche durchgeführt).

Stufe B

3 g des Kupfer enthaltenden Produkts, erhalten in der vorhergangenen Stufe A, wurden in 50 ml destilliertem Wasser aufgelöst. Zur Entfernung des Kupfers wurde die Lösung in eine Säule (500 ml) von makronetzförmigem Adsorptionsharz eingegossen. Die Säule wurde nacheinander mit 1 l einer wäßrigen Lösung, enthaltend 2% Natriumchlorid und 5% EDTA.Na₂, mit 1 l einer 2%igen wäßrigen Natriumchloridlösung und mit 1 l destilliertem Wasser gewaschen. Sodann wurde das Adsorbat mit einem Gemisch aus 0,02 n-Schwefelsäure-Methanol (1 : 4 Vol./Vol.) eluiert, und die Fraktionen mit einem Absorptionsmaximum um die Wellenlänge von 290 nm herum wurden gesammelt. Die gesammelte Lösung wurde mit einem schwach basischen Anionenaustauscherharz (OH^--Form) auf einen pH-Wert von 6,0 eingestellt und sodann bei vermindertem Druck konzentriert und lyophilisiert. Auf diese Weise wurden 2,6 g des angestrebten Produkts (Sulfat in kupferfreier Form) als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver mit einer Ausbeute von 90% erhalten.

Die Ultraviolettabsorptionsmaxima und die antimikrobielle Aktivität dieses Produkts waren wie folgt:
nm(E , in 0,1 n-HCl)

290 (102)
240 (Schulter) (132)
antimikrobielle Aktivität:10 949 µ/mg

Beispiel 2 Herstellung von 3-[N-Methyl-N-(3-aminopropyl)]-aminopropylaminocleomycin Stufe A

Die Kultivierung in flüssigem Medium, wie in Stufe A des Beispiels 1 beschrieben, wurde durchgeführt, wobei, bezogen auf das Medium, 0,1% N,N-Bis-(3-aminopropyl)-methylamin als Aminoverbindung zugesetzt wurden.

Aus dem Filtrat des kultivierten Mediums wurden 13,2 g eines rohen blauen Pulvers in der gleichen Weise wie in Stufe A des Beispiels 1 erhalten. 5 g des rohen Pulvers wurden in destilliertem Wasser aufgelöst, und die Lösung wurde in eine Säule (Vol. 11) von makronetzförmigem Adsorptionsharz eingegossen. Durch Entwickeln mit destilliertem Wasser wurde der größte Teil des Bleomycins eluiert, und ein kleiner Teil des Bleomycins zusammen mit der angestrebten Substanz blieb auf dem Harz zurück. Das Entwicklungslösungsmittel wurde zu einem Gemisch aus 0,01 n-Salzsäure-Methanol (1 : 4 Vol./Vol.) abgeändert, um die angestrebte Substanz zu eluieren. Das Eluat wurde mit 0,1 n-Natriumhydroxid neutralisiert, und das Methanol wurde abdestilliert. Der Rückstand wurde erneut der oben beschriebenen Chromatographie unterworfen, um das Bleomycin zu entfernen. Die erhaltenen Fraktionen, die die angestrebte Substanz enthielten, wurden unter vermindertem Druck konzentriert und sodann lyophilisiert. Auf diese Weise wurden 1,2 g des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

Die Ultraviolettabsorptionsmaxima und die antimikrobielle Aktivität dieses Produkts waren wie folgt:
nm(E , in destilliertem Wasser)

292 (118)
243 (145)
antimikrobielle Aktivität:2300 µ/mg

Stufe B

1 g des Produkts in der Kupfer enthaltenden Form, erhalten in der vorhergegangenen Stufe A, wurde in 20 ml destilliertem Wasser aufgelöst und, wie in Stufe B des Beispiels 1 beschrieben, von Kupfer befreit. Auf diese Weise wurden 702 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in kupferfreier Form) als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver mit einer Ausbeute von 73% erhalten.

289 (108)
240 (Schulter) (140)
antimikrobielle Aktivität:2273 µ/mg

Beispiel 3 Herstellung von 3-[N-Methyl-N-(3-aminopropyl)]-aminopropylaminocleomycin

100 mg des in der Stufe A des Beispiels 2 erhaltenen rohen Pulvers wurden in 5 ml destilliertem Wasser aufgelöst, und die Lösung wurde in eine Säule von chemisch gebundenem Siliciumdioxid (25 mm×310 mm) eingegossen, die zuvor mit einem Entwicklungsmittel, nämlich einem Gemisch aus 1% wäßriger Ammoniumacetatlösung-Methanol (87,5 : 12,5 Vol./Vol.), ins Gleichgewicht gesetzt worden war. Die Säule wurde mit dem gleichen Entwicklungslösungsmittel bei einer Fließgeschwindigkeit von 4,25 ml/min 7 h lang bei Raumtemperatur entwickelt. Das erste Eluat, das Bleomycin enthielt, wurde eleminiert, und das nachfolgende Eluat, das die angestrebte Substanz enthielt, wurde gewonnen. Es wurde auf die gleiche Weise unter Verwendung von makronetzförmigem Adsorptionsharz, wie in Stufe A des Beispiels 1 beschrieben, entsalzt, konzentriert und lyophilisiert. Auf diese Weise wurden 38 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

Beispiel 4 Herstellung von 4-Guanidinobutylaminocleomycin Stufe A

Ein Produktionskulturmedium, wie in Stufe A des Beispiels 1 beschrieben, wurde in einen 500-ml-Erlenmeyer-Kolben in Mengen von jeweils 110 ml eingegeben. Es wurde sterilisiert und mit 5 Vol.-% der Impfkultur gemäß Beispiel 1 inokuliert. Sodann wurden als Aminoverbindung 0,5% Agmatinsulfat zugesetzt.

100 der oben erwähnten Proben wurden hergestellt und 8 h bei 27°C unter Verwendung eines Drehschüttlers kultiviert. Danach wurden die kultivierten Proben kombiniert und filtriert, wodurch 8,5 l Filtrat als Kulturbrühe erhalten wurden.

Das Filtrat wurde in der gleichen Weise wie in Stufe A des Beispiels 1 behandelt, wodurch 1,2 g eines rohen blauen Pulvers erhalten wurden. 200 mg des rohen Pulvers wurden in 5 ml destilliertem Wasser aufgelöst, und die Lösung wurde in eine Patrone von chemisch gebundenem Siliciumdioxid (5,7 cm×30 cm) eingegossen, die zuvor mit einem Gemisch aus einer wäßrigen Lösung, enthaltend 1% Kaliumacetat und 0,5% Essigsäure-Methanol (7 : 3 Vol./Vol.), ins Gleichgewicht gesetzt worden war. Sodann wurde unter Verwendung einer Hochgeschwindig keits-Flüssigchromatographie-Vorrichtung für präparative Zwecke die Entwicklung durchgeführt, indem das gleiche Mischlösungsmittel, wie oben erwähnt, mit einer Geschwindigkeit von 100 ml/min 80 min bei Raumtemperatur durchgeleitet wurde. Während dieser Entwicklung wurde eine dreimalige Zurückführung durchgeführt, und Fraktionen der angestrebten Substanz wurden gewonnen. Die gewonnene Lösung wurde unter Verwendung von makronetzförmigem Adsorptionsharz wie in Stufe A des Beispiels 1 entsalzt, konzentriert und lyophilisiert. Auf diese Weise wurden 80 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

292 (120)
243 (152)
antimikrobielle Aktivität:3350 µ/mg

Stufe B

70 mg Produkt in der Kupfer enthaltenden Form, erhalten in der vorhergegangenen Stufe A, wurden in 2 ml destilliertem Wasser aufgelöst und, wie in Stufe B des Beispiels 1 beschrieben, von Kupfer befreit. Auf diese Weise wurden 60 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in kupferfreier Form) als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver mit einer Ausbeute von 89% erhalten.

Die Ultraviolettabsorptionsmaxima und die antimikrobielle Aktivität dieses Produkts waren wie folgt:
nm(E , 0,1 n-HCl)

290 (109)
240 (Schulter) (146)
antimikrobielle Aktivität:3262 µ/mg

Beispiel 5 Herstellung von 3-S,S-Dimethylmercaptopropylaminocleomycin Stufe A

Die Kultivierung in flüssigem Medium, wie in Stufe A des Beispiels 4 beschrieben, wurde unter Zugabe von, auf das Medium bezogen, 0,1% 3-Aminopropyldimethylsulfoniumbromid, Hydrobromid als Aminoverbindung durchgeführt.

Aus dem Filtrat der Kulturbrühe wurden 1,6 g eines rohen blauen Pulvers in der gleichen Weise, wie in Stufe A des Beispiels 1 beschrieben, erhalten. Durch Behandlung von 200 mg des rohen Pulvers auf die gleiche Weise, wie im Beispiel 4 beschrieben, wurden 76 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

292 (117)
243 (145)
antimikrobielle Aktivität:1360 µ/mg

Stufe B

70 mg des Produkts in der Kupfer enthaltenden Form, erhalten in der vorhergegangenen Stufe A, wurden in 2 ml destilliertem Wasser aufgelöst und, wie in Stufe B des Beispiels 1 beschrieben, von Kupfer befreit. Auf diese Weise wurden 61 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in kupferfreier Form) als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver in einer Ausbeute von 91% erhalten.

290 (112)
240 (Schulter) (146)
antimikrobielle Aktivität:1320 µ/mg

Beispiel 6 Herstellung von 3-S,S-Dimethylmercaptopropylaminocleomycin

Die Kultivierung in flüssigem Medium, wie in Stufe A des Beispiels 1 beschrieben, wurde ohne Zugabe irgendeiner Aminoverbindung durchgeführt.

Aus dem Filtrat des kultivierten Mediums wurden 6,7 g des angestrebten Produkts, 3,7 g 4-Guanidinobutylaminocleomycin und 320 mg 3-(4-Aminobutylamino)-propylaminocleomycin jeweils als rohes blaues Pulver durch die gleiche Behandlung wie in Stufe A des Beispiels 1 erhalten. Durch Behandlung von 200 mg des rohen Pulvers des angestrebten Produkts in der gleichen Weise, wie im Beispiel 4 beschrieben, wurden 68 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

Beispiel 7 Herstellung von 4-Guanidinobutylaminocleomycin

Das angestrebte Produkt (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) wurde erhalten, indem 200 mg des rohen Pulvers des angestrebten Produkts, das im Beispiel 6 erhalten worden war, in der gleichen Weise, wie im Beispiel 4 beschrieben, behandelt wurden.

Beispiel 8 Herstellung von 3-(4-Aminobutylamino)-propylaminocleomycin Stufe A

70 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) wurden erhalten, indem 200 mg des rohen Pulvers des angestrebten Produkts, erhalten im Beispiel 6, in der gleichen Weise, wie im Beispiel 3 beschrieben, behandelt wurden.

292 (119)
243 (146)
antimikrobielle Aktivität:3520 µ/mg

Stufe B

Durch Entfernung des Kupfers aus 50 mg des Kupfer enthaltenden Produkts, das in der vorhergegangenen Stufe A erhalten worden, in der gleichen Weise, wie in Stufe B des Beispiels 1 beschrieben, wurden 38 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in kupferfreier Form) als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver mit einer Ausbeute von 79% erhalten.

290 (98) 240 (Schulter) (128)
antimikrobielle Aktivität:3575 µ/mg

Beispiel 9 Herstellung von 3-(3-n-Butylaminopropylamino)-propylaminocleomycin Stufe A

Die Kultivierung in flüssigem Medium, wie in Stufe A des Beispiels 1 beschrieben, wurde unter Zugabe von, auf das Medium bezogen, 0,1% n-n-Butyl-N′-(3-amino propyl)-1,3-diaminopropan als Aminoverbindung durchgeführt.

Aus dem Filtrat des kultivierten Mediums wurden 8,3 mg eines rohen blauen Pulvers auf die gleiche Weise wie in Stufe A des Beispiels 1 erhalten. Durch Behandlung von 5 g des rohen Pulvers auf die gleiche Weise, wie in Stufe A des Beispiels 2 beschrieben, wurden 740 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in Kupfer enthaltender Form) als blaues amorphes Pulver erhalten.

292 (111)
243 (136)
antimikrobielle Aktivität:8130 µ/mg

Stufe B

In 20 ml destilliertem Wasser wurden 700 mg des Kupfer enthaltenden Produkts, erhalten in der vorhergegangenen Stufe A, aufgelöst, und das Produkt wurde von Kupfer wie in Stufe B des Beispiels 1 befreit. Auf diese Weise wurden 525 mg des angestrebten Produkts (Hydrochlorid in kupferfreier Form) als fahles gelblich-weißes amorphes Pulver mit einer Ausbeute von 78% erhalten.

290 (103)
240 (Schulter) (132)
antimikrobielle Aktivität:7942 µ/mg

Claims

1. Cleomycin-Antibiotika der allgemeinen Formel in der R die Gruppe (CH₃)₂-S-(CH₂)₃-NH bedeutet oder einen Aminorest der allgemeinen FormelX-R₁₁-NH-,in der R₁₁ eine -(CH₂)₂-, -(CH₂)₃- oder -(CH₂)₄-Gruppe darstellt, oder eine Gruppe der allgemeinen Formel in der R₁ Wasserstoff oder Methyl bedeutet, R₁₂ für eine der folgenden Alkylengruppen: steht, R₁₃ eine -(CH₂)₂-, -(CH₂)- oder -(CH₂)₄- Gruppe darstellt und X für einen Guanidin-, 1-Pyrrolidinyl-, Morpholino-, 1-Piperazinyl-, 2-Pyridyl- oder NR₂R₃-Rest steht, wobei die Substituenten R₂ und R₃ Wasserstoff, Methyl, n-Butyl, 2-Hydroxypropyl, 3-Methoxypropyl, 6-Hydroxyhexyl, 1-Phenylethyl oder Benzyl bedeuten, oder R für die Gruppe steht, sowie nichttoxische Salze davon.

2. Verfahren zur Herstellung von Cleomycin-Antibiotika gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise einen cleomycinerzeugenden Stamm von Streptomyces verticillus in ein Kulturmedium inokuliert, den Stamm kultiviert und Cleomycine gemäß Anspruch 1 gewinnt.