DE3012921C2 - - Google Patents

Info

Publication number
DE3012921C2
DE3012921C2 DE3012921A DE3012921A DE3012921C2 DE 3012921 C2 DE3012921 C2 DE 3012921C2 DE 3012921 A DE3012921 A DE 3012921A DE 3012921 A DE3012921 A DE 3012921A DE 3012921 C2 DE3012921 C2 DE 3012921C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
threonine
dna
microorganism
ferm
plasmid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE3012921A
Other languages
English (en)
Other versions
DE3012921A1 (de
Inventor
Kiyoshi Matsudo Chiba Jp Miwa
Takayasu Tsuchida
Osamu Kawasaki Kanagawa Jp Kurahashi
Shigeru Yokohama Kanagawa Jp Nakamori
Konosuke Tokio/Tokyo Jp Sano
Haruo Kamakura Kanagawa Jp Momose
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
Publication of DE3012921A1 publication Critical patent/DE3012921A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE3012921C2 publication Critical patent/DE3012921C2/de
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/848—Escherichia
    • Y10S435/849—Escherichia coli

Description

Die Erfindung betrifft einen Mikroorganismus des Genus Escherichia mit hoher Produktivität für L-Threonin sowie die Verwendung dieses Mikroorganismus zur fermentativen Herstellung von L-Threonin.
Für die fermentative Herstellung von L-Threonin hat man bekanntlich bisher auxotrophe oder gegen bestimmte Wirkstoffe resistente Mutanten der Genera Brevibacterium und Escherichia verwendet (GB-PS 12 23 725, GB-PS 12 23 470 und JA-AS 44 876/1973).
Demgegenüber liegt der Erfindung die Aufgabe zugrunde, neue Mikroorganismen des Genus Escherichia zur Verfügung zu stellen, welche die fermentative Herstellung von L-Threonin in erhöhter Ausbeute ermöglichen.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß mit Hilfe eines Mikroorganismus des Genus Escherichia mit hoher Produktivität für L-Threonin gelöst, der erhalten wird mit Hilfe eines Verfahrens, bei dem man
  • a) chromosomale DNA aus der gegen α-Aminosäure-β-hydroxyvaleriansäure resistenten Mutante Escherichia coli AJ 11 332 (FERM BP-1640) gewinnt,
  • b) durch Behandlung mit einer Restriktionsendonuclease das DNA-Fragment mit der für die L-Threonin-Synthese verantwortlichen genetischen Information gewinnt,
  • c) dieses DNA-Fragment in ein Plasmid insertiert, das aus einem Mikroorganismus des Genus Escherichia extrahiert wurde und
  • d) das rekombinierte Plasmid einem Mikroorganismus des Genus Escherichia ohne L-Threoninbedarf als Wirtsorganismus einverleibt.
Gegenstand der Erfindung ist außerdem die Verwendung dieses Mikroorganismus zur fermentativen Herstellung von L-Threonin, insbesondere bei Anwesenheit von L-Asparaginsäure im Kulturmedium.
Erfindungsgemäß wird als Donor für die Desoxyribonucleinsäure- (nachstehend als DNA bezeichnet) eine Mutante des Genus Escherichia gewählt, die resistent gegen α-Amino-β-hydroxyvaleriansäure ist (nachstehend AHV). Aus dieser Mutante wird dann ein DNA-Fragment, das die für die L-Threonin-Synthese verantwortliche genetische Information trägt, erhalten und schließlich wird dieses DNA-Fragment in ein aus Escherichia coli erhaltenes Plasmid eingefügt (insertiert). Das rekombinierte Plasmid wurde erfolgreich in einen Mikroorganismus des Genus Escherichia eingeschleust.
Es wurde außerdem festgestellt, daß ein Stamm mit höherer Produktionsleistung für L-Threonin erhalten werden kann, wenn als Wirtsorganismus für das rekombinierte Plasmid ein Mikroorganismus verwendet wird, der keinen L-Threonin-Bedarf hat. Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Mikroorganismen L-Threonin in einer weit höheren Ausbeute bilden, als die bisher bekannten L-Threonin bildenden Mutanten.
Die verwendete, gegen AHV resistente Mutante des Genus Escherichia ist bekannt (JA-AS 26 709/1970) und wird mit Hilfe von üblichen künstlichen Mutationsmethoden erhalten. Chromosomale DNA wird aus der Mutante in üblicher Weise extrahiert und nach einer üblichen Methode mit Restriktionsendonuclease behandelt. Erfindungsgemäß wurde als Restriktionsendonuclease Hind III verwendet, um das DNA-Fragment zu erhalten, welches die für die L-Threonin-Synthese verantwortliche genetische Information trägt. Es können jedoch auch andere Restriktionsendonucleasen, wie Bam HI verwendet werden, wobei ähnliche Ergebnisse wie mit Hind III erhalten werden.
Geeignete Restriktionsendonucleasen, mit deren Hilfe aus der DNA eines Donorstammes das DNA-Fragment mit der für die L-Threoninsynthese verantwortlichen genetischen Information herausgeschnitten wird, sind allgemein bekannt und in weitem Umfang in der Literatur beschrieben. Dies ist beispielsweise aus dem Lehrbuch von Old und Primrose "Principles of Gene Manipulation", Blackwell-Verlag 1980/1981, Seiten 171 und 172, ersichtlich.
Als Vektor-DNA kann jedes beliebige aus Escherichia coli extrahierte geöffnete Plasmid verwendet werden. Zur Insertion des DNA-Fragments, das aus einem AHV-resistenten Stamm von Escherichia erhalten wird und die genetische Information für die L-Threonin-Biosynthese trägt, in den Vektor kann eine übliche Verfahrensweise angewendet werden. Das so erhaltene rekombinierte Plasmid kann dann mit Hilfe von üblichen Transformations-Methoden in einen Mikroorganismnus des Genus Escherichia eingeschleust werden, wenn auch in Abhängigkeit von den jeweiligen Methoden die Wirksamkeit variieren kann.
Als Wirtsorganismus für das rekombinierte Plasmid wird normalerweise eine Mutante von Escherichia mit L-Threonin-Bedarf verwendet, da diese Mutante für die Selektion und Isolierung der transformierten Organismen günstig ist. Falls eine Mutante, die für ihr Wachstum kein L-Threonin benötigt, speziell eine gegen AHV resistente Mutante, als Wirtsorganismus verwendet wird, so werden L-Threonin bildende Transformanten mit höherer Produktivität erhalten.
Die so erhaltenen transformierten Mikroorganismen (Transformanten) können mit Hilfe üblicher Methoden selektiert und isoliert werden, die auf die Eigenschaften der Vektor-DNA und/oder des Wirtsorganismus abgestellt sind.
Zur Züchtung des so erhaltenen L-Threonin bildenden Stammes werden übliche Methoden angewendet, die den Methoden zur Züchtung von bekannten L-Threonin bildenden Mikroorganismen entsprechen. So wird ein übliches Kulturmedium verwendet, welches Kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen, anorganische Ionen und erforderlichenfalls organische Spurennährstoffe, wie Vitamine oder Aminosäuren, enthält. Zu Beispielen für Kohlenstoffquellen gehören Glucose, Saccharose, Stärkehydrolysat und Melassen. Als Stickstoffquelle können gasförmiges Ammoniak, wäßriges Ammoniak, Ammoniumsalze und entsprechende andere Verbindungen verwendet werden. Wenn dem Medium L-Asparaginsäure in einer Menge von mehr als 50 mg/dl zugesetzt wird, wird die Ausbeute an L- Threonin gewöhnlich verbessert.
Die Züchtung wird unter aeroben Bedingungen durchgeführt, wobei der pH-Wert und die Temperatur des Mediums auf geeignete Werte eingestellt werden, und so lange fortgesetzt, bis die Bildung von L-Threonin aufhört.
In dem Kulturmedium angereichertes L-Threonin kann in üblicher Weise gewonnen werden.
Mit Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens kann L-Threonin in einer höheren Ausbeute gebildet werden, als mit Hilfe von bekannten Methoden. Darüber hinaus ist die Menge der als Nebenprodukte gebildeten Aminosäuren gering, so daß das L-Threonin mit Hilfe eines einfachen Verfahrens in hoher Ausbeute gewonnen werden kann.
Die in den nachstehenden Beispielen mit ihrer "AJ"-Bezeichnung aufgeführten Mikroorganismen wurden beim Fermentation Research Institute in der internationalen und der nationalen Hinterlegungsstelle hinterlegt und haben dort die nachstehenden Hinterlegungsnummern erhalten:
AJ 11 332 = FERM BP-1640 = FERM P 4898
AJ 11 333 = FERM BP-1482 = FERM P 4899
AJ 11 334 = FERM BP-1483 = FERM P 4900
AJ 11 335 = FERM BP-1484 = FERM P 4901.
Beispiel 1
Aus dem L-Threonin bildenden Stamm AJ 11 332 (pro-, thi-, ile-, met-, AHV ϕ ), der von Escherichia coli K-12 (ATCC 10 798) abgeleitet ist, wurden neue Stämme mit hoher Produktivität für L-Threonin mit Hilfe der folgenden Verfahrensstufen hergestellt:
(1) Herstellung von chromosomaler DNA, welche die genetische Information für hohe Produktivität für L-Threonin trägt
Der Stamm AJ 11 332 wurde 3 Stunden bei 37°C unter Schütteln in einem Liter L-Medium gezüchtet, das 1% Pepton, 0,5% Hefeextrakt, 0,1% Glucose und 0,5% NaCl enthielt und auf einen pH-Wert von 7,2 eingestellt war, und in der exponentiellen Wachstumsphase wurden die Bakterienzellen gewonnen. Chromosomale DNA wurde mit Hilfe der üblichen Methode mit Phenol extrahiert, wobei 5,3 mg gereinigte DNA erhalten wurde.
(2) Herstellung der Vektor-DNA
Zum Klonen des Gens, das die hohe Produktionsleistung für L-Threonin kontrolliert (Threonin-Operon, welches den Mutationspunkt der AHV-Resistenz enthält), wurde DNA aus dem Plasmid pBR 322, einem Vektor, der sowohl Ampicillin als auch Tetracyclin-Resistenz-Gene als Marker enthält, in folgender Weise hergestellt:
Ein Stamm von Escherichia coli K-12, der das Plasmid pBR 322 enthält, wurde bei 37°C in 1 l eines Glucose-"Casaminosäure"-anorganische Salze enthaltenden Mediums, dem 170 µg/ ml Chloramphemicol zugesetzt waren, inkubiert. Das Glucose- "Casaminosäure"-anorganische Salz-Medium enthält 2 g Glucose, 1 g NH₄Cl, 6 g Na₂HPO₄, 3 g KH₂PO₄, 5 g NaCl, 0,1 g MgSO₄ · 7 H₂O, 0,015 g CaCl₂ · 2 H₂O, 20 g "Casaminosäure", 0,05 g L-Tryptophan, 0,05 g Thymin und 100 µg Thiamin · HCl pro Liter und der pH-Wert des Mediums war auf 7,2 eingestellt. Mit Hilfe dieses Verfahrens wurde die Plasmid-DNA verstärkt und in großem Umfang in den Bakterienzellen angereichert.
Nach 16stündiger Inkubierung wurden die Zellen gewonnen und durch Behandlung mit Lysozym und SDS lysiert. Das Lysat wurde bei 30 000 g X eine Stunde lang zentrifugiert, um die überstehende Flüssigkeit zu gewinnen. Nach dem Konzentrieren der überstehenden Flüssigkeit wurden 580 µg der Plasmid-DNA durch Fraktionierung mit Hilfe der Cäsiumchlorid- Äthidiumbromid-Gleichgewichts-Dichtegradienten-Zentrifugierung gewonnen.
(3) Insertion des chromosomalen DNA-Fragments in den Vektor
Je 10 µg der chromosomalen DNA und der Vektor-DNA wurden bei 37°C 1 Stunde lang mit der Restriktionsendonuclease Hind III behandelt, um die DNA-Ketten zu spalten, und dann jeweils 5 Minuten bei 65°C erhitzt.
Die dem Abbau unterworfene chromosomale DNA-Lösung und Vektor-DNA-Lösung wurden vermischt und dann 24 Stunden lang bei 10°C in Gegenwart von ATP und Dithioerythrit der Renaturierungsreaktion von DNA-Fragmenten unter der Einwirkung von DNA-Ligase des T₄-Phagen unterworfen. Das Reaktionsgemisch wurde dann 5 Minuten auf 65°C erhitzt und das zweifache Volumen an Äthanol wurde zugesetzt. Die ausgefällte rekombinante DNA wurde dann gewonnen.
(4) Genetische Transformation mit dem Hybrid-Plasmid, das die genetische Information für hohe Threonin-Bildung trägt
Ein L-Threonin benötigender Stamm von Escherichia coli Nr. 255, der von dem Threonin-bildenden Stamm AJ 11 332 durch mutagene Behandlung mit N-Methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidin abgeleitet worden war, wurde unter Schütteln in 10 ml L-Medium bei 37°C gezüchtet.
In der exponentiellen Wachstumsphase wurden die Zellen gewonnen und in einer 0,1 m MgCl₂-Lösung und dann in einer 0,1 m CaCl₂-Lösung in einem Eisbad suspendiert, wobei kompetente Zellen mit Fähigkeit zur DNA-Aufnahme erhalten wurden.
In die Suspension der kompetenten Zellen wurde die in Stufe (3) erhaltene DNA, welche die Hybrid-Plasmid-DNA enthält, gegeben. Die Suspension wurde 30 Minuten in einem Eisbad gehalten, dann 2 Minuten lang auf 42°C erwärmt und erneut 30 Minuten lang in einem Eisbad stehengelassen. Die Zellen, in die die DNA eingeschleust worden ist, wurden in L-Medium inokuliert und das Medium wurde 2 Stunden bei 37°C geschüttelt, wodurch die Transformationsreaktion vervollständigt wurde. Die Zellen wurden gewonnen, gewaschen und wieder suspendiert. Ein kleiner Anteil der Zellsuspension wurde auf einer Agarplatte ausgestrichen, die pro Liter 2 g Glucose, 1 g (NH₄)₂SO₄, 7 g K₂HPO₄, 2 g KH₂PO₄, 0,1 g MgSO₄ · 7 H₂O, 0,5 g Natriumcitrat · 2 H₂O, 20 mg Ampicillin, 100 mg L-Prolin, 100 mg L-Isoleucin, 100 mg L-Methionin und 1 mg Thiamin · HCl sowie 2 g Agar enthielt (der pH-Wert war auf 7,2 eingestellt). Die Platte wurde bei 37°C bebrütet. Nach 3tägiger Bebrütung erschienen auf der Platte 21 Kolonien. Sämtliche Kolonien wurden entnommen, gereinigt und isoliert.
Jeder der so erhaltenen Transformanten hatte keinen L- Threonin-Bedarf und war resistent gegen Ampicillin und hatte somit offensichtlich andere Eigenschaften als Stamm Nr. 255, der als Wirtsorganismus verwendet wurde. Das bedeutet, daß nur die Zellen als wachsende Kolonien selektiert wurden, welche das pBR-322-Plasmid enthalten, in welches das chromosomale DNA-Fragment mit dem Gen für die Threonin-Synthese insertiert wurde.
(5) Herstellung von L-Threonin mit Hilfe der neuen threoninbildenden Stämme
Tabelle 1-A zeigt die experimentellen Ergebnisse der fermentativen Bildung von L-Threonin unter Verwendung von Stamm AJ 11 334, der eines der in Stufe (4) erhaltenen Klone darstellt.
Das Fermentationsmedium enthielt 3 g/dl Glucose, 1 g/dl (NH₄)₂SO₄, 0,2 g/dl KH₂PO₄, 0,1 g/dl MgSO₄ · 7 H₂O, 2 ppm Fe⁺⁺, 2 ppm Mn⁺⁺, 1 mg/l Thiamin-HCl, 300 mg/l L-Prolin, 100 mg/l L-Isoleucin, 100 mg/l L-Methionin, 2 g/dl CaCO₃ und der pH- Wert des Mediums wurde mit KOH auf 7,0 eingestellt. 20-ml-Anteile des Mediums wurden in 500-ml-Kolben gegeben, mit AJ 11 334 inokuliert und 70 Stunden bei 37°C geschüttelt.
Kontrollversuche wurden unter Züchtung des Elternstammes AJ 11 332 unter den gleichen Kulturbedingungen durchgeführt.
Wie aus der Tabelle ersichtlich ist, zeigte der Stamm AJ 11 334 im Vergleich mit AJ 11 332 bemerkenswert erhöhte Produktivität für L-Threonin.
Tabelle 1-B zeigt ein Beispiel für die fermentative Bildung von L-Threonin unter Verwendung von AJ 11 333, einem anderen in Stufe (4) erhaltenen Klon. Das Fermentationsmedium wurde durch Zugabe von 0,1 g/dl Hefeextrakt zu dem gleichen Medium, welches in Versuch A gemäß Tabelle 1 verwendet worden war, hergestellt. Die Züchtungsbedingungen waren die gleichen wie in dem Versuch gemäß Tabelle 1-A, mit der Ausnahme, daß die Temperatur 30°C betrug.
Auch in diesem Fall zeigte der Stamm AJ 11 333 bemerkenswert erhöhte Produktivität für L-Threonin.
Tabelle 1
Die Menge an Threonin wurde durch mikrobiologische Prüfung der durch Zentrifugieren der Kulturbrühe erhaltenen überstehenden Flüssigkeit bestimmt.
(6) Einschleusung des Hybrid-Plasmid in einen Stamm ohne L-Threonin-Bedarf
Das in AJ 11 334 enthaltene Hybrid-Plasmid wurde in der in Stufe (2) beschriebenen Methode isoliert und einem Eltern-Stamm AJ 11 332, der zum Wachstum kein L-Threonin benötigt, und der L-Threonin produziert, einverleibt. Zu diesem Zweck wurde eine analoge Transformationsmethode wie in Stufe (4) angewendet.
Der transformierte Mikroorganismus AJ 11 335, der als Ampicillin-resistente Kolonie selektiert wurde, wurde in einer ähnlichen Methode, wie sie in Stufe (5) beschrieben ist, für die fermentative Bildung von L-Threonin eingesetzt.
Die gebildete und im Kulturmedium angereicherte Menge an L-Threonin sowie die Menge der als Nebenprodukt gebildeten Aminosäuren wurden durch Flüssigkeitschromatographie bestimmt. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt.
Tabelle 2
Beispiel 2
Die vorstehend beschriebene Fermentation wurde unter Verwendung von AJ 11 333 und AJ 11 335 durchgeführt. Als Kulturmedium wurde das gleiche wie in Tabelle 1-A und Medien verwendet, die durch Zusatz von 0,05 g/dl bzw. 0,1 g/dl Asparaginsäure zu diesem Medium erhalten wurden.
Die dabei erzielten Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt.
Tabelle 3

Claims (3)

1. Mikroorganismus des Genus Escherichia mit hoher Produktivität für L-Threonin, erhalten mit Hilfe eines Verfahrens, bei dem man
  • a) chromosomale DNA aus der gegen α-Aminosäure-β-hydroxyvaleriansäure resistenten Mutante Escherichia coli AJ 11 332 (FERM BP-1640), gewinnt,
  • b) durch Behandlung mit einer Restriktionsendonuclease das DNA-Fragment mit der für die L-Threonin-Synthese verantwortlichen genetischen Information gewinnt,
  • c) dieses DNA-Fragment in ein Plasmid insertiert, das aus einem Mikroorganismus des Genus Escherichia extrahiert wurde und
  • d) das rekombinierte Plasmid einem Mikroorganismus des Genus Escherichia ohne L-Threoninbedarf als Wirtsorganismus einverleibt.
2. Mikroorganismus nach Anspruch 1 in Form der Stämme Escherichia coli FERM BP-1482, FERM BP-1483 und FERM BP- 1484.
3. Verwendung des Mikroorganismus nach Anspruch 1 oder 2 zur fermentativen Herstellung von L-Threonin, insbesondere bei Anwesenheit von L-Asparaginsäure im Kulturmedium.
DE19803012921 1979-04-02 1980-04-02 Verfahren zur fermentativen herstellung von l-threonin Granted DE3012921A1 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP3961779A JPS55131397A (en) 1979-04-02 1979-04-02 Preparation of l-threonine by fermentation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE3012921A1 DE3012921A1 (de) 1980-10-23
DE3012921C2 true DE3012921C2 (de) 1990-01-18

Family

ID=12558063

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19803012921 Granted DE3012921A1 (de) 1979-04-02 1980-04-02 Verfahren zur fermentativen herstellung von l-threonin

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4347318A (de)
JP (1) JPS55131397A (de)
DE (1) DE3012921A1 (de)
FR (1) FR2453216A1 (de)
GB (1) GB2049670B (de)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57186496A (en) * 1981-05-11 1982-11-16 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-threonine by fermentation
JPS58893A (ja) * 1981-06-25 1983-01-06 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法
US5236831A (en) * 1981-12-29 1993-08-17 Kiowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Amino acid synthesis in corynebacteria using E. coli genes
JPS59232088A (ja) * 1983-06-15 1984-12-26 Tanabe Seiyaku Co Ltd Ｌ−アスパラギン酸の製法
JPS6043392A (ja) * 1983-08-20 1985-03-07 Showa Denko Kk Ｌ−トリプトフアンの製造法
JPS6274294A (ja) * 1985-09-28 1987-04-06 Ajinomoto Co Inc Ｌ−スレオニンの精製方法
JPS6291176A (ja) * 1985-10-18 1987-04-25 Toray Ind Inc Ｌ−スレオニン生産能を有する形質転換体
JPH0716429B2 (ja) * 1985-10-18 1995-03-01 東レ株式会社 Ｌ−スレオニンの製造法
US5175107A (en) * 1988-10-25 1992-12-29 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of escherichia coli bkiim b-3996 as the producer of l-threonine
US5976843A (en) 1992-04-22 1999-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
DE69330518T2 (de) * 1992-11-10 2002-05-08 Ajinomoto Kk Dna, die aspartokinase iii-mutanten kodiert und ihre verwendung zur herstellung von l-threonin durch fermentation
EP1020526B1 (de) * 1992-11-10 2008-03-19 Ajinomoto Co., Inc. Verfahren für die Produktion von L-Threonin mittels Fermentation
JP3880636B2 (ja) * 1994-01-10 2007-02-14 味の素株式会社 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
US5939307A (en) * 1996-07-30 1999-08-17 The Archer-Daniels-Midland Company Strains of Escherichia coli, methods of preparing the same and use thereof in fermentation processes for l-threonine production
US7220571B2 (en) * 2000-09-28 2007-05-22 Archer-Daniels-Midland Company Escherichia coli strains which over-produce L-threonine and processes for the production of L-threonine by fermentation
AU2002345038A1 (en) * 2001-07-06 2003-01-21 Degussa Ag Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
US20050221448A1 (en) * 2001-07-18 2005-10-06 Degussa Ag Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family which contain an attenuated aceb gene
EP1407035B1 (de) * 2001-07-18 2006-04-12 Degussa AG Verfahren zur herstellung von l-aminosäuren unter verwendung von stämmen aus der familie der enterobacteriacea die ein attenuiertes aspa-gen enthalten
DE10154102A1 (de) * 2001-11-02 2003-05-15 Degussa Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
KR100892577B1 (ko) 2004-08-10 2009-04-08 아지노모토 가부시키가이샤 유용한 대사산물을 생산하기 위한 포스포케톨라제의 용도
US7723097B2 (en) * 2005-03-11 2010-05-25 Archer-Daniels-Midland Company Escherichia coli strains that over-produce L-threonine and processes for their production
CN103497979B (zh) * 2005-06-20 2018-09-11 阿彻-丹尼尔斯-米德兰公司 用于改良生产天冬氨酸衍生的氨基酸及化学品的改变的乙醛酸支路
WO2007086618A1 (en) * 2006-01-30 2007-08-02 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid
JP2009153382A (ja) 2006-03-30 2009-07-16 Ajinomoto Co Inc メタノール資化性細菌を用いたカルボン酸の製造法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1580549A (de) * 1967-07-28 1969-09-05
GB1521032A (en) * 1974-08-08 1978-08-09 Ici Ltd Biological treatment
US4237224A (en) * 1974-11-04 1980-12-02 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Process for producing biologically functional molecular chimeras
SU875663A1 (ru) * 1978-06-30 1982-09-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени
JPS55156591A (en) * 1979-05-23 1980-12-05 Ajinomoto Co Inc Method for stabilizing property of bacteria containing plasmid
FR2464299A1 (fr) * 1979-08-28 1981-03-06 Inst Genetiki Selektsii Procede de preparation de souches productrices d'acides amines

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0129559B2 (de) 1989-06-12
FR2453216B1 (de) 1984-03-09
GB2049670B (en) 1983-03-30
GB2049670A (en) 1980-12-31
DE3012921A1 (de) 1980-10-23
US4347318A (en) 1982-08-31
JPS55131397A (en) 1980-10-13
FR2453216A1 (fr) 1980-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3012921C2 (de)
DE3027922C2 (de)
DE3022257C2 (de)
DE69530242T2 (de) Verfahren zur Herstellung von Glutaminsäure durch Fermentation
DE3891417C5 (de) Verfahren zur Veränderung eines L-Threonin produzierenden Mikroorganismus und Verwendung eines so erhaltenen Mikroorganismus zur Herstellung von L-Threonin
EP0435132B1 (de) Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren, insbesondere L-Lysin, dafür geeignete Mikroorganismen und rekombinante DNA
DE69219775T3 (de) Neuartiges L-threoninproduzierendes Mikrobakterium und eine Herstellungsmethode für L-Threonin
DE3023850A1 (de) Verfahren zur fermentativen herstellung von l-histidin
DE60129877T2 (de) Aminosaüre-herstellende Escherichia Stämme und Verfahren zur Herstellung einer Aminosaüre
EP0472869A2 (de) Neue Plasmide aus Corynebacterium glutamicum und davon abgeleitete Plasmidvektoren
GB2075056A (en) L-proline-producing Microorganisms
EP0069697A2 (de) Herstellung und Anwendung von Plasmiden mit Genen für die Biosynthese von L-Prolin
DE3115515A1 (de) Verfahren zur fermentativen herstellung von l-glutamisaeure
EP0019877B1 (de) Verfahren zur Herstellung eines ein Plasmid enthaltenden Mikroorganismus mit stabilisierten Eigenschaften und so erhaltener Mikroorganismus
DE3823451C2 (de) Rekombinante DNA, damit transformierte Mikrooganismen und Verwendung dieser Mikroorganismen zur Herstellung von L-Lysin mit Hilfe dieser Mikroorganismen
EP0066857B1 (de) Verfahren zur Herstellung eines Mikroorganismus, welcher alpha-Galactosidase, aber keine Invertase bildet, so erhaltener Mikroorganismus and seine Verwendung
EP0722500B1 (de) Gene für den butyrobetain/crotonobetain-l-carnitin-stoffwechsel und ihre verwendung zur mikrobiologischen herstellung von l-carnitin
EP0436886B1 (de) Verfahren zur Herstellung von L-Isoleucin und dafür geeignete Mikroorganismen und rekombinante DNA
CH640268A5 (en) Process for the preparation of filamentous hybrid phages, novel hybrid phages and their use
EP0543344B1 (de) Mikroorganismen zur Stabilisierung von Plasmiden
DE2411209C2 (de) Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Valin
DE2839052A1 (de) Mikrobiologisches verfahren
DE3530935C2 (de)
US4504581A (en) Method for producing L-histidine by fermentation
EP0318663A1 (de) Pendelvektor pZ1, rekombinantes, ein Aspartasegen enthaltendes Plasmid, seine Verwendung zur Herstellung von Aminosäuren der Aspartat-Familie aus Fumarat-haltigem Nährmedium und es enthaltende Mikroorganismen

Legal Events

Date Code Title Description
8128 New person/name/address of the agent

Representative=s name: STREHL, P., DIPL.-ING. DIPL.-WIRTSCH.-ING. SCHUEBE

8110 Request for examination paragraph 44
8125 Change of the main classification

Ipc: C12N 1/20

D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition