DE2953674C2 - Verfahren zur Herstellung von menschlichen Immungammaglobulinderivaten - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von menschlichen ImmungammaglobulinderivatenInfo
- Publication number
- DE2953674C2 DE2953674C2 DE2953674T DE2953674T DE2953674C2 DE 2953674 C2 DE2953674 C2 DE 2953674C2 DE 2953674 T DE2953674 T DE 2953674T DE 2953674 T DE2953674 T DE 2953674T DE 2953674 C2 DE2953674 C2 DE 2953674C2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- sodium
- human
- trithionate
- immunogammaglobulin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- LSVVNVHHHMEPJZ-UHFFFAOYSA-L [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SS([O-])(=O)=O Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SS([O-])(=O)=O LSVVNVHHHMEPJZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 3
- WAIZSJUARDIDFV-UHFFFAOYSA-L [K+].[K+].[O-]S(=O)(=O)SS([O-])(=O)=O Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)(=O)SS([O-])(=O)=O WAIZSJUARDIDFV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 claims description 2
- KRURGYOKPVLRHQ-UHFFFAOYSA-L trithionate(2-) Chemical compound [O-]S(=O)(=O)SS([O-])(=O)=O KRURGYOKPVLRHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 32
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 9
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 9
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- -1 tetrathionate ions Chemical class 0.000 description 8
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 4
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 4
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L sulfite Chemical compound [O-]S([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- HPQYKCJIWQFJMS-UHFFFAOYSA-L tetrathionate(2-) Chemical class [O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HPQYKCJIWQFJMS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 2
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100020289 Xenopus laevis koza gene Proteins 0.000 description 1
- HIPVJRPEJALNIE-UHFFFAOYSA-L [Na+].[K+].OS([O-])=O.OS([O-])=O Chemical compound [Na+].[K+].OS([O-])=O.OS([O-])=O HIPVJRPEJALNIE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940096329 human immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000246 remedial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39566—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against immunoglobulins, e.g. anti-idiotypic antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Die Erfindusj betrifft ein Verfahren zur Herstellung
von menschlichen Immungammaglobulinderivaten in Wasser durch Oxidation der Zwischenkettendisulfidbindungen
mit einem Polythionat und S-Sulfonierung der bei der Oxidation aufgespaltenen Schwefelatome mit
einem Sulfit
Immunglobulin enthält Antikörper gegen eine Anzahl von Krankheiten und wird zur Prophylaxe und Therapie
dieser Krankheiten benutzt Jedoch ist die Verwendung des Immunglobulinpräparats auf die intramuskuläre Injektion
beschränkt gewesen. Wenn nämlich ein Immunglobulinpräparat
intravenös injiziert wird, bindet sich das Immunglobulin mit dem Komplement, um die Serumkomplementärkonzemration
~a erniedrigen und einen Nebeneffekt, als Antrkomplementärwirkung bezeichnet,
zu verursachen, was dazu . jhrt, daß ein Abfall des Blutdrucks, ein Anstieg der Körpertemperatur, eine
Unordnung in dem Kreislaufsystem und andere Dinge zu beobachten sind. Daher sind viele Studien mit dem
Zweck durchgeführt worden, Immunglobulin bei der intravenösen Verabreichung stabil zu halten.
Das erste Verfahren besteht darin, den Teil, von dem
angenommen wird, daß er sich mit dem Komplement verbindet, vom menschlichen Immunglobulin unter Verwendung
eines Enzyms abzutrennen. Zum Beispiel ist von A.Nisonoff vorgeschlagen worden, Pepsin als Enzym
zu verwenden (vgl. Science 132, 1770 (1970)). Ein anderes Verfahren wird in der japanischen Patentschrift
47-37529 (1972) beschrieben, wonach Plasminogen in Serum, Cathepsin und anderen als Enzym verwendet
werden. Jedoch haben diese enzymbehandelten Immunglobuline
den Nachteil, daß ihre Halbwertzeit kurz ist und daher die Zeitdauer der Wirksamkeit kurz ist, wie es
E. Merler und B. Jager in ihren Artikeln Vox Sang 13,
102 (1967) bzw. Arch. Intora. Med. 119,60 (1967) gezeigt
haben.
Das zweite Verfahren besteht darin, menschliches Immunglobulin mit einem Protein-Acylierungs-Reagens
zu behandeln. Zum Beispiel beschreibt die offengelegte japanische Patentanmeldung 49-6119 (1974), daß die
Acylierung menschlichen Immunglobulins ein modifiziertes Immunglobulin mit einem reduzierten Antikomplementaktivitätsniveau
liefert. Das acylierte Immunglobulin, das durch dieses Verfahren gebildet wird, führt
jedoch zu der Gefahr, daß die Antigenwirkung in menschlichen Körpern ansteigt. Es ist angenommen
worden, daß die Verabreichung in großen Mengen schwierig ist.
Nach dem dritten Verfahren werden die Disulfidbindungen in menschlichem Immunglobulin herabgesetzt,
wonach eine Alkylierung folgt. Zum Beispiel liefert dieses Verfahren nach der offengelegten japanischen Patentanmeldung
48-103723 (1973) ein modifiziertes Immunglobulin, das das gleiche scheinbare Molekulargewicht
wie das nicht-modifizierte Immunglobulin und ein herabgesetztes Antikomplementaktivitätsniveau aufweist
Jedcch handelt es sich hierbei um ein Zweistufenverfahren. Die Betriebsmaßnahmen sind verhältnismäßig
kompliziert so daß es für industrielle Zwecke nachteilig ist
ίο Das vierte Verfahren besteht darin, die Zwischenkettendisulfidbindungen
in menschlichem Immunglobulin mit Tetrathionationen und Sulfitionen zu S-sulfonieren,
um Immunglobulinderivate zu erhalten, die für die intravenöse
Injektion geeignet sind (vgL offengelegte japanisehe Patentanmeldungen 50-121421 (1975), 51-1630,
51-76418 und 51-112512 (1976)). Dieses Verfahren stellt
unter den bekannten das beste dar. Jedoch wird bei diesem Verfahren instabiles Tetrathionatsalz als Oxidationsmittel
verwendet. Daher ist eine große Menge an Tetrathionatsalz erforderlich, um die vollständige Reaktion
zu fördern, was oftmals Nebenreaktionen und des weiteren die Denaturierung des Proteins hervorruft, um
die ausreichende Herabsetzung des Antikomplementaktivitätsniveaus zu hemmen, wobei es sich um einen zu
behebenden Mangel handelt Des weiteren ist die Oxidationsstärke von Tetrathionationen relativ stark, um
eine Möglichkeit zu haben, die Disulfidbindungen innerhalb der Kette wie auch die Zwischenkettensulfidbindungen
aufzubrechen. Eine ausreichende Behutsamkeit ist unbequemerweise erforderlich, um die Reaktion einzuregeln.
Gemäß »Gmelins Handbuch der anorganischen Chemie«, 8. Auflage, Schwefel B, S. 969-1010 (1960), Verlag
Chemie Weinheim, sollen sich die einzelnen PoIythionsäuren in ihren chemischen und physikalischen Eigenschaften
sehr ähnlich sein, so daß sich erwartungsgemäß bei der Oxidation der Zwischenkettendisulfidbindungen
die Tetrathionate gleich oder ähnlich verhalten sollten wie die Trithionate. Dies ist aber nicht der Fall,
wie ein Vergleich der Ergebnisse (bezüglich der Antikomplementaktivität)
der später folgenden Beispiele 1 und 2 mit dem Vergleichsbeispiel zeigt.
Es hat sich nun überraschenderweise gezeigt, daß dann, wenn Trithionationen, die hochstabil sind und eine
geeignete Reaktivität aufweisen, und Sulfitionen zusammen als Oxidationsmittel verwendet werden, Zwischenkettendisulfidbindungen
im menschlichen Immunglobulin aufgespalten werden und gleichzeitig die aufgespaltenen
Schwefelatome S-sulfoniert (-S-SO3-) werden,
um Immunglobulinderivate herzustellen, die zur intravenösen Injektion geeignet sind, da sie frei von den
vorgenannten Nachteilen sind, wodurch die vorliegende Erfindung erhalten wurde.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren der eingangs beschriebenen Art, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man als Polythionat ein Trithionat verwendet.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren der eingangs beschriebenen Art, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man als Polythionat ein Trithionat verwendet.
Die Erfindung ist an Hand der Zeichnungen näher erläutert. Im einzelnen zeigen
Fig. l(a), (b) und (c) Muster der elektrophoretischen
Wanderung von Immunglobulin (IG), sulfonierten! Gammaglobulin (GGS), erhalten nach Beispiel 1, und
einem anderen sulfonierten Gammaglobulin, erhalten nach dem Bezugsbeispiel auf Natriumdodecylsulfonatscheiben.
F i g. l(d) zeigt die Beziehung zwischen jedem Band in den obigen Mustern und dem Molekulargewicht.
F i g. 2(a) und (b) die Gelfiltrationsmuster sulfonierten
Gammaglobulins (GGS), erhalten nach Beispiel 1, und eines anderen sulfonierten Gammaglobulins (GGS), erhalten
nach dem Bezugsbeispiel unter Verwendung von Sephadex G200.
Von den Trithionaten, welche in Wasser Trithionationen
bilden, werden die Alkalimetallsalze, wie Natriumtrithionat oder Kaliumtrithionat, bevorzugt
Als Sulfitionenqaelle kann jede Verbindung verwendet
werden, sofern sie Sulfitionen in Wasser bilden kann, wobei jedoch schweflige Säure, Natriumsulfit Natriumbisulfit
Kaliumsulfh oder Natriumpjrobisulfit bevorzugte
Beispiele darstellen.
Die Menge der Verbindung, die zur Bildung von Sulfitionen imstande ist beträgt das zwei- oder mehrfache,
vorzugsweise mehr als das zehnfache der molaren Menge der im Immunglobulin zu spaltenden Zwischenkettendisuifidbindungen.
Die Menge der Verbindung, die zur Bildung von Trithionationen imstande ist, beträgt
mehr als 1 Mol, vorzugsweise 2 oder mehr Mol pro Mol der Zwischenkettendisulfidbindungen, die im Immunglobuiin
zu spalten sind. Die Reaktion wird Ji Wasser
durchgeführt der pH-Wert wird während der Reaktion vorzugsweise in dem Bereich von 6,0 bis 10,0 gehalten.
Die Reaktionstemperatur liegt bei 50° C oder weniger, vorzugsweise in dem Bereich von 10 bis 45° C.
Wenn die Temperatur 500C überschreitet wird das Immunglobulinmolekül
unzweckmäßigerweise stärker anfällig gegen Proteindenaturierung, während Temperaturen
von weniger als 100C den Fortschritt der Reaktion extrem hemmen, so daß sie industriell unpraktisch
sind.
Die Reaktionszeit innerhalb derer nahezu alle Zwischenkettendisulfidbindungen
im Immunglobulin gespalten und S-sulfoniert werden, hängt von der Menge
der Oxidationsmittel und der Reaktionstemperatur ab. Im allgemeinen wird sie so gewählt, daß sie in dem
Bereich von 0,5 bis 24 h liegt
Entsprechend der vorliegenden Erfindung wird Immunglobulin
bezüglich nahezu sämtlicher Zwischenkettendisulfidbindungen
gespalten und das DisuKid in S-sulfonierte Gruppen (—S—SO*-) überführt um die H-Kette
und die L-Kette zu liefern. Das Reaktionsprodukt wird durch übliche Reinigungsverfahren, wie Dialyse,
Aussalzen ovJer Säulenchromatograp.iie, abgetrennt.
Zum Beispiel wird die Reaktionsmischung mit normaler Salzlösung dialysiert, um die gegenständliche Substanz
in normaler Salzlösung zu liefern.
Im folgenden Herstellunfe-sbeispiel wird zunächst die
Herstellung der in den folgenden Beispielen und im Vergleichsbeispitl
verwendeten Oxidationsmittel erläutert.
Herstellungsbeispiel
1. Herstellung von Natriumtrithionat
55
Das Natriumtrithionat wurde aus Natriumthiosulfat und 30prozentiger wäßriger Hydrogenperoxidlösung
nach einem Verfahren erhalten, das in neuen Serien der Experimentalchemie (»Shin Jikken Kagaku Koza«),
Bd. 8, Syntheses of inorganic compounds (II), P 482, Maruzen Tokyo, beschrieben wird.
Im wesentlichen wurde keine Veränderung festgestellt, wenn sie bei Raumtemperatur mehrere Monate stand.
Des weiteren verursachte das Erhitzen der wäßrigen Lösung bei 45°C während -7,5 h ebenfalls kaum Veränderungen.
2. Herstellung von Natriumtetrathionat
Natriumtetrathionat wurde aus Natriumthiosulfat und Jod nach einem Verfahren hergestellt das in
»Handbuch der Präparativen Anorganischen Chemie«, Bd. 1, S. 362, Ferdinand Enke Verlag, Stuttgart, I960,
beschrieben wird.
Das Produkt fiel in 85prozentiger Reinheit an, wenn es bei Raumtemperatur 1 Woche lang stand, um den
Geruch von Schwefeldioxid zu entwickeln. Des weiteren führte das Erhitzen der wäßrigen Lösung bei 45° C
während 4,5 h zu der Verminderung der Reinheit auf weniger als 50%.
Eine Lösung von menschlichem Immunglobulin in einer normalen Salzlösung in 16prozentiger Konzentration,
die mittels einer Phosphatlösunr (5 ml) auf den pH-Wert von 7,5 gepuffert war, wurde ir.it einer normalen
Salzlösung (5 ml) kombiniert die Natriumsulfit (0,1616 g, 6,4fache molare Menge der Zwischenkettendisulfidbindungen
im Immunglobulin) und Natriuintrithionat
(0,076 g, 16fache molare Menge der Zwischenkettendisulfidbindungen)
enthielt und mittels einer Phosphatlösung auf den pH-Wert von 7,5 gepuffert war.
Die Reaktion wurde bei einer Temperatur von 45° C während 4,5 h durchgeführt Nach Absch'uß der Reaktion
wurde die Reaktionsmischung mit einer normalen Salzlösung so lange dialysiert, bis die Reaktionspartner
0,1 mMoI/1 oder weniger bezüglich der Konzentration
wurden, um 11 ml einer Lösung von sulfonierten! Gammaglobuiin
in 7prozentiger Konzentration in normaler Salzlösung zu erhalten.
Das Antikomplementaktivitätsniveau CHy>
wurde auf der Grundlage der 5prozentigen Lösung entsprechend dem Verfahren-ermittelt, das von Kabat und Mayer (Experimental
Immunochemistry, S. 221,1961) beschrieben wurde. Es wurde mit 14,9% ermittelt.
De· CH5o-Wert der 5prozentigen Lösung des menschlichen Immunglobulins, das Ausgangsmaterial,
betrug 90%.
Der Antidiphtherietiter des Produkts wurde mit 0,8 Einheiten/ml ermittelt, wobei es sich um den gleichen
Wert wie bei dem menschlichen Immunglobulin, dem Ausgangsmaterial, handelt.
Des weiteren wurde das Produkt der Natriumdodecylsulfonat-Scheibenelektrophorese
entsprechend dem Verfahren von Weber und Osborne (J. Biol. Chem. 244,
446,1969) unterzogen. Das Ergebnis ergibt sich aus der F i g. l(b), die definitiv zeigt, daß das Produkt nahezu aus
der H-K«me und der L-Kette'aufgebaut ist und die Zwischenkettendisulfidbindungen
sulfoniert worden sind.
Mittlerweile wurd^· die gleiche Reaktion unter Verwendung
von 35S-markiertem Natriumsulfit durchgeführt,
um zu bestätigen, daß 7 bis 8,5 Mol der — S—SO3~-Gruppen pro Mol Immunglobulin eingeführt
wurden.
Es wurde gefunden, daß das Muster der Immunelektrophorese
vollständig mit dem des Produkts zusammenfällt, das durch die Verwendung von Nairiumtetrathionat
erhalten wurde (vgl. F i g. I (c)).
Zum Vergleich wird das Muster des menschlichen lmmungammaglobulins ^n F i g. l(a) angegeben.
Des weiteren wird das Gelfiltrationsmuster unter Verwendung von Sephadex G200 als Fig.2(a) gezeigt.
Es wurde gefunden, daß der OD45o-Wert der 5prozentigen
Lösung 0,950 betrug.
5
Die Reaktion wurde in der gleichen Weise wie in Beispiel I durchgeführt, wobei jedoch 0,0t 5 g (3,2fache
molare Menge der Zwischenkettensulfidbindungen) des Natriumtrithionats eingesetzt wurden, um sulfoniertes
Gammaglobulin mit einem Antikomplementaktivitätsni veau CH50 von 15,2% zu bilden.
Eine normale Salzlösung (5 ml), in der menschliches Immunglobulin ii. 16prozentiger Konzentration gelöst
vorlag und die phosphatgepuffert war, wurde mit einer anderen normalen Salzlösung kombiniert, die mit einer
Phosphatlösung (5 ml) auf den pH-Wert von 7,5 gepuffert war und die Natriumsulfit (0,1616 g, 64fache molare
Menge der Zwischenkettendisulfidbindungen im Immunglobulin) und Natriumtetrathionatdihydrat (0,098 g,
löfache molare Menge der Zwischenkettendisulfidbindüngen) enthielt. Die Reaktion wurde bei einer Temperatur von 45°C während 4,5 h durchgeführt. Nach Abschluß der Reaktion wurde die Reaktionsmischung mittels normaler Salzlösung so lange dialysiert, bis die Konzentration der Reaktionspartner weniger als 0,1 mMol/1
wurde, um 11 ml einer 7prozentigen sulfonierten Gammaglobulinlösung in normaler Salzlösung zu erhalten.
Das Antikomplementaktivitätsniveau CH50 der 5prozentigen Lösung wurde mit 20,2% gefunden. Der
OD450-Wert betrug 0,112.
Das Muster der Natriumdodecylsulfatscheibenelektrophorese des Produkts wird in der F i g. l(c) wiedergegeben. Das Gelfiltrationsmuster, bei dem Sephadex G200 verwendet wurde, wird in der Fig. 2(b) gezeigt.
im Rahrnen des Verfahrens gemäß der Erfindung
werden relativ stabile Trithionationen und Sulfitionen als Sulfonierungsmittel verwendet. Unzweckmäßige
Zersetzung dieser Reaktionspartner kann vermieden werden. Somit werden große Mengen Reaktionspartner
unnötig. Dies führt zu weniger Nebenreaktionen. Folglich erhält man erfindungsgemäß in vorteilhafter Weise
Derivate des Immungammaglobulins, die zur intravenösen Injektion verwendbar sind, da sie niedriges Antikomplementaktivitätsniveau und geringe Trübung ha-
ben und ohne weiteres durch sehr einfache Maßnahmen gereinigt werden können.
Das gemäß der vorliegenden Erfindung hergestellte S-sulfonierte Immungammaglobulin wird auf das ursprüngliche Immunglobulin in vivo zurückgeführt und
widersteht der Zersetzung in Blut, ohne daß die Gefahr
des Auftretens von Antigenwirkung besteht Darüber i
hinaus zeigt das S-sulfonierte Immungammaglobulin eine Charakteristik, die die intravenöse Injektion ermöglicht, was auf das verminderte Antikomplementaktivi- 55 '
tätsniveau ohne irgendeinen nachteiligen Effekt bei verschiedenen Arten von Antikörperaktivitäten und auf die
sehr lange Zeitdauer der Wirksamkeit in vivo zurück- '
geht. j
60 j
Claims (2)
1. Verfahren zur Herstellung von menschlichen
Immungammaglobulinderivaten in Wasser durch Oxidation der Zwischenkettendisulfidbindungen mit
einem Polythionat und S-Sulfonierung der bei der
Oxidation aufgespaltenen Schwefelatome mit einem Sulfit, dadurch gekennzeichnet, daß man
als Polythionat ein Trithionat verwendet
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Natriumtrithionat und/oder KaIiumtrithionat
verwendet
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/JP1979/000131 WO1980002561A1 (en) | 1979-05-23 | 1979-05-23 | Process for preparing immune ypsilon-globulin derivative |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2953674T1 DE2953674T1 (de) | 1982-01-28 |
| DE2953674C2 true DE2953674C2 (de) | 1986-04-24 |
Family
ID=13677660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2953674T Expired DE2953674C2 (de) | 1979-05-23 | 1979-05-23 | Verfahren zur Herstellung von menschlichen Immungammaglobulinderivaten |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4347179A (de) |
| CH (1) | CH644131A5 (de) |
| DE (1) | DE2953674C2 (de) |
| DK (1) | DK147225C (de) |
| SE (1) | SE425348B (de) |
| WO (1) | WO1980002561A1 (de) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4432895A (en) * | 1982-11-24 | 1984-02-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Monomeric interferons |
| AU590754B2 (en) * | 1985-05-01 | 1989-11-16 | Commonwealth Serum Laboratories Commission | Novel molecular weight standards and methods of use thereof |
| NZ215967A (en) * | 1985-05-01 | 1988-05-30 | Commw Serum Lab Commission | Composition of peptides of known weight for determining weight of unknown peptide |
| US4877868A (en) * | 1986-03-12 | 1989-10-31 | Neorx Corporation | Radionuclide antibody coupling |
| US6221134B1 (en) | 1999-07-27 | 2001-04-24 | G.B.D. Corp. | Apparatus and method for separating particles from a cyclonic fluid flow |
| US6228260B1 (en) | 1999-07-27 | 2001-05-08 | G. B. D. Corp. | Apparatus for separating particles from a cyclonic fluid flow |
| US6231645B1 (en) | 1999-07-27 | 2001-05-15 | G.B.D. Corp. | Apparatus and method for separating particles from a cyclonic fluid flow utilizing a movable access member associated with a cyclonic separator |
| US6440197B1 (en) | 1999-07-27 | 2002-08-27 | G.B.D. Corp. | Apparatus and method separating particles from a cyclonic fluid flow including an apertured particle separation member within a cyclonic flow region |
| US6251296B1 (en) | 1999-07-27 | 2001-06-26 | G.B.D. Corp. | Apparatus and method for separating particles from a cyclonic fluid flow |
| US6228151B1 (en) | 1999-08-18 | 2001-05-08 | G.B.D. Corp. | Apparatus and method for separating particles from a cyclonic fluid flow |
| US9888817B2 (en) | 2014-12-17 | 2018-02-13 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US11857142B2 (en) | 2006-12-15 | 2024-01-02 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus having an energy storage member and a charger for an energy storage member |
| US10165912B2 (en) | 2006-12-15 | 2019-01-01 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US20210401246A1 (en) | 2016-04-11 | 2021-12-30 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9192269B2 (en) | 2006-12-15 | 2015-11-24 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9265395B2 (en) | 2010-03-12 | 2016-02-23 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9211044B2 (en) | 2011-03-04 | 2015-12-15 | Omachron Intellectual Property Inc. | Compact surface cleaning apparatus |
| US10722086B2 (en) | 2017-07-06 | 2020-07-28 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US9591958B2 (en) | 2013-02-27 | 2017-03-14 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9027198B2 (en) | 2013-02-27 | 2015-05-12 | G.B.D. Corp. | Surface cleaning apparatus |
| US20140237764A1 (en) | 2013-02-28 | 2014-08-28 | G.B.D. Corp. | Cyclone such as for use in a surface cleaning apparatus |
| US9238235B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-01-19 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclone such as for use in a surface cleaning apparatus |
| US9295995B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-03-29 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclone such as for use in a surface cleaning apparatus |
| US9227201B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-01-05 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclone such as for use in a surface cleaning apparatus |
| US9820621B2 (en) | 2013-02-28 | 2017-11-21 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9227151B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-01-05 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclone such as for use in a surface cleaning apparatus |
| US9451855B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-09-27 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9326652B2 (en) | 2013-02-28 | 2016-05-03 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US9420925B2 (en) | 2014-07-18 | 2016-08-23 | Omachron Intellectual Property Inc. | Portable surface cleaning apparatus |
| US9451853B2 (en) | 2014-07-18 | 2016-09-27 | Omachron Intellectual Property Inc. | Portable surface cleaning apparatus |
| US9585530B2 (en) | 2014-07-18 | 2017-03-07 | Omachron Intellectual Property Inc. | Portable surface cleaning apparatus |
| US9314139B2 (en) | 2014-07-18 | 2016-04-19 | Omachron Intellectual Property Inc. | Portable surface cleaning apparatus |
| US10251519B2 (en) | 2014-12-17 | 2019-04-09 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US10136778B2 (en) | 2014-12-17 | 2018-11-27 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US11950745B2 (en) | 2014-12-17 | 2024-04-09 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus |
| US11445878B2 (en) | 2020-03-18 | 2022-09-20 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus with removable air treatment member assembly |
| US10702113B2 (en) | 2017-07-06 | 2020-07-07 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US10842330B2 (en) | 2017-07-06 | 2020-11-24 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US10750913B2 (en) | 2017-07-06 | 2020-08-25 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US10537216B2 (en) | 2017-07-06 | 2020-01-21 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US10631693B2 (en) | 2017-07-06 | 2020-04-28 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US11730327B2 (en) | 2020-03-18 | 2023-08-22 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus with removable air treatment assembly |
| US10506904B2 (en) | 2017-07-06 | 2019-12-17 | Omachron Intellectual Property Inc. | Handheld surface cleaning apparatus |
| US11666193B2 (en) | 2020-03-18 | 2023-06-06 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus with removable air treatment member assembly |
| US11766156B2 (en) | 2020-03-18 | 2023-09-26 | Omachron Intellectual Property Inc. | Surface cleaning apparatus with removable air treatment member assembly |
| US11192122B2 (en) | 2018-08-13 | 2021-12-07 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclonic air treatment member and surface cleaning apparatus including the same |
| US11013384B2 (en) | 2018-08-13 | 2021-05-25 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclonic air treatment member and surface cleaning apparatus including the same |
| US11006799B2 (en) | 2018-08-13 | 2021-05-18 | Omachron Intellectual Property Inc. | Cyclonic air treatment member and surface cleaning apparatus including the same |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2508132C3 (de) * | 1974-03-08 | 1980-10-16 | Teijin Ltd., Osaka (Japan) | Verfahren zur Herstellung von Humanimmunglobulin-Derivaten und parenteral applizierbare Lösung hiervon |
| JPS51112512A (en) * | 1975-03-27 | 1976-10-05 | Teijin Ltd | A process for preparing immunoglobulin derivative |
-
1979
- 1979-05-23 WO PCT/JP1979/000131 patent/WO1980002561A1/ja unknown
- 1979-05-23 CH CH78581A patent/CH644131A5/de not_active IP Right Cessation
- 1979-05-23 DE DE2953674T patent/DE2953674C2/de not_active Expired
- 1979-05-23 US US06/233,611 patent/US4347179A/en not_active Expired - Fee Related
-
1981
- 1981-01-22 DK DK29681A patent/DK147225C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-01-22 SE SE8100368A patent/SE425348B/sv not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Gmelin: Handbuch der anorganischen Chemie, 8. Aufl., Schwefel B, Weinheim 1960, S. 969-974, 992 u. 1010 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK29681A (da) | 1981-01-22 |
| DK147225C (da) | 1984-11-26 |
| SE425348B (sv) | 1982-09-27 |
| WO1980002561A1 (en) | 1980-11-27 |
| CH644131A5 (en) | 1984-07-13 |
| DK147225B (da) | 1984-05-21 |
| SE8100368L (sv) | 1981-01-22 |
| US4347179A (en) | 1982-08-31 |
| DE2953674T1 (de) | 1982-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2953674C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von menschlichen Immungammaglobulinderivaten | |
| DE2901822A1 (de) | Verfahren zur herstellung einer fuer die intravenoese applikation geeigneten immunglobulinloesung, die igm in ankonzentrierter form enthaelt | |
| DE1617447B1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines reinen hochviskosen Hyaluronsäurepräparates | |
| DE2936047A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines intravenoes verabreichbaren antikoerperhaeltigen immunglobulinpraeparates und danach hergestellte praeparate | |
| DE3532081C2 (de) | ||
| EP0447585A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates | |
| DE1668033A1 (de) | Neue Ferrihydroxyd-carbohydrat-Koplexe und Verfahren zu deren Herstellung | |
| DE2837168A1 (de) | Verfahren zur herstellung einer fuer die intravenoese anwendung geeigneten immunglobulinloesung | |
| DE3129987A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf)-hochkonzentrates | |
| DE2508132C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Humanimmunglobulin-Derivaten und parenteral applizierbare Lösung hiervon | |
| DE2260536A1 (de) | Neue silber-cycloheptaamylose-einschlussverbindung, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung | |
| DE2848529A1 (de) | Verfahren zur herstellung des kaelteunloeslichen globulins und dieses enthaltende arzneimittel | |
| DE2835843A1 (de) | Verfahren zur herstellung einer fuer die intravenoese anwendung geeigneten gammaglobulinloesung | |
| EP0835880A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines IgM Präparates für die intravenöse Applikation | |
| DE3430320A1 (de) | Verfahren zur herstellung von immunglobulin-praeparaten mit verminderter komplementaktivitaet | |
| CH639394A5 (de) | Verfahren zur herstellung von immunglobulinpraeparationen mit verminderter komplementaktivitaet. | |
| DE3018901C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Immunoglobulinderivaten | |
| DE3928032A1 (de) | Organogermaniumverbindungen und verfahren zu ihrer erzeugung | |
| DE1189674B (de) | Verfahren zur Isolierung von alpha-Antitrypsin | |
| DE2635894A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines antihaemophiles globulin a enthaltenden konzentrats | |
| DE2856939A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von intravenoes-vertraeglichen gammaglobulinen | |
| DE2234719C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Calciumphosphat | |
| WO2008083680A2 (de) | Verwendung von cohn-oncley-fraktionen ii/iii und/oder iii zur herstellung einer pharmazeutischen zubereitung zur behandlung und vorbeugung von organmanifestationen bei autoimmunerkrankungen | |
| EP0006151B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von 17-Hydroxyspartein | |
| AT87806B (de) | Verfahren zur Reinigung und zur Anreicherung der wirksamen Substanz von Heilseren und ähnlich zusammengesetzten Gemischen. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8128 | New person/name/address of the agent |
Representative=s name: HENKEL, G., DR.PHIL. FEILER, L., DR.RER.NAT. HAENZ |
|
| D2 | Grant after examination | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition |