DE2806902A1 - Verfahren und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens zum nachweis von mikroorganismen - Google Patents

Verfahren und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens zum nachweis von mikroorganismen

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Description

ipl-ha ,: „r .. Mayer . if. 17. Februar 19
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Ι*«Ιβ·ιίπ»π;.ί«Γ. 22, Tel. iO89j 472942
RAN 4092/002
F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft, Basel/Schweiz
Verfahren und Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens
zum Nachweis von Mikroorganismen
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zum Nachweis von Mikroorganismen, z.B. in Körperflüssigkeiten.
Zum Nachweis von Mikroorganismen in Körperflüssigkeiten, insbesondere von Bakterien im Blut,ist es notwendig, flüssiges Nährmedium zu beimpfen und anschliessend das Wachstum auf einem festen Nährboden weiterzuführen. Seit Jahren gibt es Systeme, bei denen beide Nährmedien im gleichen Behälter kombiniert sind, um die lästige und unter Umständen riskante Ueberführung der Vorkulturen im flüssigen Nährmedium auf einen festen Nährboden ausserhalb des Behälters zu vermeiden.
Die bekannten- Vorrichtungen, in welchen ein festes und ein flüssiges Nährmedium kombiniert werden, sind jedoch aus vielen Gründen nicht zufriedenstellend. Insbesondere kann wegen
Hen/ 16.11.1977
j der Gefahr des Herauslösens von Bestandteilen des festen Nährbodens in die flüssige Nährbouillon meistens nur ein mit der flüssigen Nährbouillon kompatibles festes Nährmedium verwendet werden. Dies hat unter anderem den erheblichen Nachteil, dass keine Differenzierung der Erreger möglich ist.
Die bisher vorgeschlagenen Lösungen zur Separierung des festen Nährbodens und der flüssigen Nährbouillon während der Inkubationszeit und des Transportes sind aufwendig und kostspielig und/oder gewährleisten eine Separierung beider Medien nur während der Inkubation, jedoch nicht während des Transportes.
Gemäss vorliegender Erfindung werden nun die obigen Nachteile vermieden, indem der Transport des festen Nährbodens zum Benutzer vor der Inkubation, oder zu einer Stelle für die Weiterbehandlung nach der Inkubation - von der Nährbouillon getrennt erfolgt, die Beimpfung des festen Nährbodens dennoch, wie bei den konventionellen Doppelkulturflaschen in einer geschlossenen Vorrichtung durch einfaches Schütteln und üeberfluten der Oberfläche des festen Nährbodens mit der Nährbouillon durchgeführt werden kann.
Genauer gesagt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Nachweis von Mikroorganismen in einer Probe, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man
a) die Probe in einen ein flüssiges Nährmedium enthaltenden ersten Behälter einführt;
b) den ersten Behälter, gegebenenfalls nach Inkubation, mit einem zweiten Behälter enthaltend mindestens ein festes Nährmedium so verbindet, dass die Innenräume beider Behälter in Kontakt sind;
c) die Oberfläche des festen Nährmediums im zweiten Behälter mit dem Inhalt des ersten Behälters in Berührung bringt;
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d) inkubiert; und \
e) die Anwesenheit von Kolonien auf der Oberfläche des festen Nährmediums untersucht.
Weiter betrifft die vorliegende Erfindung eine Vorrichtung zum Nachweis von Mikroorganismen bestehend aus einem ersten Behälter enthaltend ein flüssiges Nährmedium und einem zweiten Behälter enthaltend mindestens ein festes Nährmedium, wobei die Innenräume beider Behälter in Kontakt sind und diese Behälter so verbunden sind, dass sie wieder getrennt werden können.
Weiter betrifft die vorliegende Erfindung eine Vorrichtung zum Nachweis von Mikroorganismen, bestehend aus einem auf beiden Seiten mit einem Verschluss versehenen durchsichtigen Röhrchen, wobei an einem der beiden Verschlüsse ein mit einem oder mit verschiedenartigen festen Nährmedien beschichteter Träger, welcher in das Röhrchen hineinragt, fixiert ist. 20
Weitere Einzelheiten und Merkmale der vorliegenden Erfindung ergeben sich aus der nachstehend detaillierten Beschreibung einer bevorzugten Ausführungsform der zur Durchführung des erfindungsgemässen Verfahrens notwendigen Vorrichtungen.
Fig. 1 zeigt den ersten Behälter mit flüssiger Nährbouillon im Längsschnitt,
Fig. 2 zeigt den zweiten Behälter mit festem Nährboden im Längsschnitt,
Fig. 3 zeigt die durch die Kombination der Behälter 1 und 10 gebildete Einheit im Längsschnitt.
Der erste Behälter 1 besteht aus einer Flasche 2, die vorzugsweise aus einem transparenten Material wie Glas oder Kunststoff besteht. Die Flasche 1 ist durch einen Stopfen 6, vorzugsweise einen Gummistopfen, welcher zur Einführung einer
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Körperflüssigkeit,wie Blut,mit einer Nadel durchstochen werden kann, geschlossen. Der Stopfen 6 ist in einer auf den Flaschenhals aufgeschraubten, vorzugsweise metallischen Kappe 4, so eingeklemmt, dass beim Oeffnen der Kappe 4 der Stopfen 6 automatisch mitgenommen wird. Damit eine Nadel problemlos durch den Stopfen 6 gestochen werden kann, weist die Kappe 4 einen entfernbaren Teil 5 auf. Der Behälter 1, welcher ein flüssiges Nährmedium 7 enthält, steht vorzugsweise unter CO„-Atmosphäre und partiellem Vakuum.
Der zweite Behälter 10 besteht aus einem durchsichtigen Röhrchen 11 aus Glas oder Kunststoff, und weist ein Schraubgewinde 12 auf der Innenseite der zylindrischen Begrenzung 14 am unteren Ende und ein Schraubgewinde 13 auf der Aussenseite des oberen Endes auf. Das Schraubgewinde 12 stimmt mit dem auf dem Hals der Flasche 2 vorhandenen Schraubgewinde überein und ermöglicht die Verbindung beider Behälter. Das Röhrchen 11 ist am unteren Ende mit einem Schraubverschluss 16 verschlossen.
Um eine dichte Verbindung beider Behälter zu erreichen ist das Röhrchen 11 innerhalb der unteren zylindrischen Begrenzung 14 mit einem Dichtungsring 17, vorzugsweise aus Polyäthylen, versehen. Der Behälter 10 ist am oberen Ende mit einem auf das Schraubgewinde 13 aufgeschraubten Verschluss 15 versehen. Mit dem Verschluss 15 ist ein mit einem oder mit verschiedenartigen Nährböden ein- oder beidseitig beschichteter Objektträger 18 vorzugsweise aus Glas oder Kunststoff festverbunden.
Bei Gebrauch wird mit Hilfe eines mit einer Nadel versehenen Uebertragungsgerätes Blut von einem Patienten in den Behälter 1 geführt. Zu diesem Zweck wird die Nadel des Uebertragungsgerätes nach Entfernung des Teiles 5 durch den Stopfen gestochen. Das Fliessen des Blutes in die Flasche 2 wird vorzugsweise durch ein in dieser Flasche herrschendes partielles Vakuum erleichtert.
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• ΟΙ Wenn die Flasche 2 die gewünschte Menge an Blut enthält wird die Nadel entfernt, wobei das von der Nadel im Stopfen 6 erzeugte Loch sich von alleine schliesst. Die Blutkulturflasche 2 wird während etwa 1 Stunde bis zu etwa 10 Tagen bei 2O-37°C inkubiert.
Anschliessend wird die Kappe 4 der Flasche 2 aufgeschraubt und damit gleichzeitig der Stopfen 6 entfernt. Der Behälter 1 wird auf den Behälter IO, welcher an seinem unteren Ende durch Aufschrauben des Verschlusses 16 geöffnet wurde, aufgeschraubt.
Die auf diese Weise gebildete Vorrichtung enthaltend mindestens ein festes und ein flüssiges Nährmedium wird mehrmals gekippt, um einen optimalen Kontakt zwischen beiden Nährmedien zu gewährleisten. Nach Bebrütung bei 20-37 C während 1 Stunde bis 10 Tagen wird das auf dem festen Nährboden allfällig vorhandene Wachstum beobachtet und bewertet. Ist kein Wachstum feststellbar, kann dieser Vorgang mehrmals wiederholt werden. Bei längerer Inkubation wird die Vorrichtung mindestens täglich gekippt, um einen optimalen Kontakt zwischen dem flüssigen und dem festen Nährmedium zu gewährleisten.
Die vorliegende Erfindung ist selbstverständlich nicht auf die bereits beschriebene spezifische Ausfuhrungsform beschränkt. 25
So können z.B. im Rahmen der vorliegenden Erfindung die Behälter 1 und 10 eine beliebige Form besitzen und auf verschiedene Weise verschlossen sein. Der Behälter 10 braucht z.B. nicht an beiden Enden einen Verschluss aufweisen und der feste Nährboden kann anstatt auf einem Objektträger, an einer der Wände dieses Behälters angebracht sein.
Weiter brauchen zum Verschliessen der Behälter nicht unbedingt Schraubverschlüsse verwendet werden. Auch kann das Verbinden beider Behälter anders als durch Aufschrauben, wie z.B. durch Aufstecken, erfolgen.
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Weiter können die Verschlüsse beider Behälter so ausgestaltet werden, dass bei Verbinden beider Behälter, z.B. durch Aufschrauben, die Innenräume dieser Behälter in Kontakt gebracht werden, ohne dass vorher eine Entfernung beider Ver-Schlüsse und eine Oeffnung beider Behälter nach aussen notwendig
Die in Schritt b) des erfindungsgemässen Verfahrens erwähnte Inkubation des Behälters mit dem flüssigen Nährmedium vor Verbinden mit dem Behälter, welcher ein festes Nährmedium enthält, ist fakultativ.
Die Inkubation in Schritt d) ist dagegen zwingend und kann sowohl unter aeroben als unter anaeroben Bedingungen erfolgen.
Im letzteren Fall kann der Deckel des Behälters enthaltend das feste Nährmedium mit einer Oeffnung zum Einleiten eines inerten Gases wie z.B. Stickstoff oder CO2 und zur Verdrängung der Luft versehen sein. Das inerte Gas, z.B. CO„, kann auch mit Hilfe einer im Behälter mit dem festen Nährmedium vorhandenen oder an dessen Deckel angebrachten Gasquelle erzeugt werden.
Die vorliegende Erfindung ermöglicht den Nachweis von Mikroorganismen wie beispielsweise Bakterien, Pilze, Hefen, usw. in einer Probe. Diese Probe kann aus irgendeiner Flüssigkeit stammen, wobei vorzugsweise Körperflüssigkeiten wie z.B. Blut, Liquor oder Urin untersucht werden.
Schliesslich ist die vorliegende Erfindung nicht auf die Verwendung eines einzigen festen Nährmediums beschränkt. So können z.B. zur Keimidentifizierung gleichzeitig mehrere Arten von Nährmedien benützt werden. Ferner können die Nährmedien Antibiotika und/oder Chemotherapeutika enthalten, wodurch eine Empfindlichkeitsprüfung von Mikroorganismen ermöglicht wird.
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• 40-
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Claims (15)

Patentansprüche *
1. Verfahren zum Nachweis von Mikroorganismen in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass man
a) die Probe in einen ein flüssiges Nährmedium enthaltenden ersten Behälter einführt;
b) den ersten Behälter, gegebenenfalls nach Inkubation, mit einem zweiten Behälter enthaltend mindestens ein festes Nährmedium so verbindet, dass die Innenräume beider Behälter in Kontakt sind;
c) die Oberfläche des festen Nährmediums im zweiten Behälter mit dem Inhalt des ersten Behälters in Berührung bringt;
d) inkubiert; und
e) die Anwesenheit von Kolonien auf der Oberfläche des festen Nährmediums untersucht.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der erste Behälter vor Verbinden mit dem zweiten Behälter inkubiert wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der erste Behälter vor Verbinden mit dem zweiten Behälter nicht inkubiert wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass der erste und der zweite Behälter durch Aufschrauben verbunden werden.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, dass der zweite Behälter einen einzigen Nährboden aufweist.
• a-
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1,-4, dadurch gekennzeichnet, dass der zweite Behälter mehrere Nährböden aufweist.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-6 zum Nachweis von Bakterien im Blut.
8. Vorrichtung zum Nachweis von Mikroorganismen, bestehend aus einem ersten Behälter,enthaltend ein flüssiges Nährmedium -JO und einem zweiten Behälter, enthaltend mindestens ein festes Nährmedium, wobei die Innenräume beider Behälter in Kontakt sind und diese Behälter so verbunden sind, dass sie wieder getrennt werden können.
9. Vorrichtung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass der erste und der zweite Behälter durch Aufschrauben verbunden sind.
10. Vorrichtung nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, dass der zweite Behälter einen einzigen Nährboden aufweist.
11. Vorrichtung nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, dass der zweite Behälter mehrere Nährböden aufweist.
12. Vorrichtung zum Nachweis von Mikroorganismen, bestehend aus einem auf beiden Seiten mit einem Verschluss versehenen durchsichtigen Röhrchen, wobei an einem der beiden Verschlüsse ein mit einem oder mit verschiedenartigen festen Nährmedien beschichteter Träger, welcher in das Röhrchen hineinragt, fixiert ist.
13. Vorrichtung nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass der Träger die Form eines Objektträgers besitzt.
14. Vorrichtung nach Anspruch 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, dass der Objektträger beidseitig mit Nährboden beschichtet ist.
15. Verwendung der Vorrichtung gemäss qinem der Ansprüche 12-14 als zweiter Behälter im Verfahren gemäss einem der Ansprüche 1-7.
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