DE2254282A1 - Verfahren und vorrichtung zum zuechten von mikroorganismen - Google Patents

Verfahren und vorrichtung zum zuechten von mikroorganismen

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Description

PATENTANWÄLTE
dr. W. Schalk · dipl.-ing. P. Wirth · dipl.-ing. G. Dannenberg DR. V. SCHMIED-KOWARZIK · DR. P. WEINHOLD · DR. D. GUDEL
6 FRANKFURT AM MAIN
G R.ESCHENHEIMER STRASSE 39
3. November 1972
Da/Pi.
Bec'ton, Dickinson and Company-East Rutherford, New Jersey, V.St.A.
Verfahren und Vorrichtung zum Züchten von Mikroorganismen
Es sind verschiedene Verfahren und Anlagen zum Züchten von Mikroorganismen in Gebrauch, insbesondere von Mikroorganismen, die in Körperflüssigkeitenj, wie beispielsweise Blut, enthalten sind. Der Untersuchung von Blut in solchen Kulturen kommt besondere Bedeutung zu, weil Blut normalerweise als steril betrachtet wird und irgendwelche darin enthaltenen Mikroorganismen Anzeichen für eine aktive Infektion sind. Die derzeitige Praxis erfordert, daß normales Blut für die Untersuchung derart verdünnt wird, daß im allgemeinen ein Verdünnungsverhältnis von Blut zu einem Medium von 1 : 8 und 1 : 10 für Züchtungszwecke bereitgestellt wird* Weiter ist zu bemerken, daß, falls Infektionen im Blut vorliegen, diese entweder durch strikt aerobe oder strikt anerobe Mikroorganismen verursacht sein können, und es ist daher erforderlich, die Blutproben in getrennten Gefäßen zu kultivieren, welche das geeignete Medium bzw. den geeigneten Nährboden zum Züchten aerober oder anerober Mikroorganismen enthalten.
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Drei verschiedene Techniken sind für das Aufnehmen von Blut oder anderen Körperflüssigkeiten üblich. So kann die Entnahme mit Hilfe einer Spritze mit Nadel erfolgen, um Blut aus einer Vene abzuziehen und dann zwei oder drei sterile Medienbehälter mit dem Blut zu impfen. Ein zweiten Verfahren besteht darin, Blut in einem evakuierten Rohr aufzunehmen, das ein Antikoagulationsmittel enthält und danach einen Teil des Blutes auf das geeignete Medium zu übertragen mit Hilfe einer mit Nadel versehenen Spritze oder durch Entfernen eines durchstechbaren Stopfens von dem evakuierten Rohr und Zumessung der geeigneten Blutmenge unter Verwendung einer Pipette. Bei einem dritten Verfahren wird ein Stück eines flexiblen Schlauchs verwendet, das an beiden Enden mit Nadeleinheiten versehen ist, von denen eine zum Einstechen in eine Vene geeignet ist, während die andere zum unmittelbaren Einsetzen in ein evakuiertes Gefäß mit oder ohne flüssigen und festen Nährboden dient. Bei diesem letztgenannten Verfahren ist es .jedoch notwendig, den Schlauch abzuklemmen, um zu verhindern, daß zusätzliches Blut in das Gefäß übertritt, weil ein bestimmtes Verhältnis von Blut zum Medium aufrechterhalten werden muß. Es erfordert außerdem die Verwendung von zwei Arten evakuierter Gefäße, eines für aerobe und eines für anerobe Organismen. Nachdem die Probe in das das Medium enthaltende Gefäß überführt wurde, wird sie in ein Milieu mit einer Temperatur von etwa 350C verbracht. Die Mischung aus Medium und Probe wird periodisch überprüft zur Identifizierung oder Feststellung eines Wachstums,in dem eine Teilprobe entnommen wird, beispielsweise mit Hilfe einer Spritze mit Nadel, einer Pipette, eines Tupfers oder einer Schlaufe. Die hierbei zur Zeit verwendeten Gefäße sind so ausgebildet, daß nur auf eine Weise Zugang zu dem Gefäß erfolgen kann, um eine Teilprobe zur Überprüfung zu entnehmen.
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Eines der Probleme, das beim Züchten von aerogenen gaserzeugenden Mikroorganismen auftritt, ist die Gefahr, daß der das Gefäß verschließende, durchstechbare Stopfen durch den inneren Gasdruck im Gefäß herausgedrückt wird, und in manchen Fällen, wo eine Schraubkappe verwendet wird, kann der Stopfen beim Öffnen herausgeschleudert werden und zu einer Verunreinigung des Arbeitsplatzes führen.
Bei allen bekannten Verfahren müssen streng aseptische Techniken eingehalten werden, um ein Infizieren der zu untersuchenden Probe durch fremde Bakterien zu vermeiden,
Ein Ziel der vorliegenden Erfindung ist ein geschlossenes System zum Aufnehmen, Züchten und Identifizieren von aus Körperflüssigkeiten gewonnenen Mikroorganismen zu schaffen. Weiter bietet die Erfindung ein Verfahren zum Züchten von aeroben und aneroben Mikroorganismen in einer einzigen Vorrichtung. Auch wird nach der Erfindung ein Aufnahmegefäß zur Verfügung gestellt, das automatisch eine gesteuerte Menge einer Körperflüssigkeit, insbesondere Blut, abzieht, so daß sich ein konstantes Verhältnis von Körperflüssigkeit zum Medium ergibt, ohne die Notwendigkeit, die erforderliche Menge an Körperflüssigkeit zu messen. Weiter schafft die Erfindung eine Ventilationseinrichtung, durch die eine Verschmutzung des Stopfens und des Züchtungsmediums während der Impfung verhindert wird,mit einer Möglichkeit zur Abgabe von durch das Wachstum der Mikroorganismen entstandenen Gases sowie für den Austausch von Sauerstoff, der für das Wachstum aerober Mikroorganismen erforderlich ist. Ein weiterer Vorteil der Erfindung besteht darin, wahlweise verschiedene Verfahren für den Eingang in das Gefäß oder Rohr zu schaffen, welches die Mischung aus Probe und Medium enthält, um diese nach der Impfung in Teil- ±.~ oben zu untersuchen. Dabei sollen die Vorrichtungsteile des erfindungsgemäßen Systems zum Aufnehmen und Züchten von
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Mikroorganismen nach Gebrauch wegwerfbar und preisgünstig herzustellen sein und eine einfache Handhabung unter Einhaltung aseptischer Bedingungen beim Aufnehmen und übertragen von KörperflüssigkGiten auf einen Kulturboden ermöglichen, wobei der Begriff "Kulturboden" hier generell für Züchtungsmedien» also beispielsweise auch Nährbrühe, steht.
Allgemein schafft die Erfindung ein verbessertes System für die Aufnahme einer Probe unmittelbar in ein Rohr, welches ein für das Wachstum von in der Probe enthaltenen Mikroorganismen geeignetes Medium enthält. Die Vorrichtung bzw. das System umfaßt Einrichtungen zur automatischen Aufnahme der geeigneten Probenmenge, so daß ein vorbestimmtes Verhältnis der Probe zum Medium erholten wird. Weiter sind Mittel für die Übertragung der Probe auf das Medium unter aseptischen Bedingungen vorgesehen, ohne daß hierfür besondere Einrichtungen oder Maßnahmen erforderlich sind. Auch dient eine Einrichtung dazu, in dem Rohr eine bestimmte Atmosphäre aufrechtzuerhalten, die für das Wachstum von aeroben und/oder aneroben Mikroorganismen in einem einzigen Züchtungsgefäß erforderlich ist.
Bei dem verbesserten Verfahren nach der Erfindung v/ird eine Einrichtung zum Punktieren einer Vene verwendet, wie z.B. eine Einrichtung mit einem evakuierten Rohr und einem Halter bzw. einer Buchse mit einer Nadel für Mehrfachproben. Eine solche Einrichtung ist in der US-PS 2 460 641 beschrieben, und die Nadel für Mehrfachproben ist den US-PS 3 469 572 und 3 494 352 zu entnehmen. Gemäß der Erfindung wird ein evakuiertes Rohr, welches den gewünschten Nährboden enthalt, dazu verwendet, die Körperflüssigkeit, insbesondere Blut, durch die Nadel für Mehrfachproben zu entnehmen. In dem evakuierten Rohr herrscht ausreichender Unterdruck, um eine vorbestimmte Menge an Blut oder dergleichen darin aufzunehmen, und die Atmosphäre innerhalb des Hohres besteht aus Kohlendioxid und Stickstoff.
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Es wird dann eine Belüftungseinrichtung so auf das Rohr aufgesetzt, daß ein steriles Feld um den Stopfen herum während der Impfung, beispielsweise der Blutaufnähme, aufrechterhalten wird. Die Belüftungseinrichtung weist eine Kappe mit etwas größerem Durchmesser als der des Rohres auf sowie eine im Boden der Kappe gelagerten Nadel. Das spitze Ende der Nadel erstreckt sich so weit durch die Kappe hindurch, daß es einen, das Rohr verschließenden, durchstechbaren Stopfen durchsetzt und daher mit dem Inneren des Rohres und mit der Atmosphäre in Verbindung steht. Das stumpfe Ende der Nadel erstreckt sich von dem Stopfen und der Kappe nach außen und ist so mit einer Schutzhülse versehen, daß im Austausch Luft oder Gas aus der Umgebung des Rohres eindringen und im Rohr durch das Wachstum von Mikroorganismen entstandenes Gas austreten kann.
Nachdem das die Kultur enthaltende und mit der Belüftungseinrichtung versehene Rohr in geeigneter Atmosphäre einer Temperatur, beispielsweise in einem Brüter, von etwa 35°C ausgesetzt würde, kann dem Kulturgemisch aus Probe und Medium eine Teilprobe zum weiteren Züchten, Prüfen und anschließenden Identifizieren entnommen werden. Die Vorrichtung ist so ausgebildet, daß aerobe Organismen mit dem Wachstum an oder nahe der Oberfläche des Mediums beginnen. Strikt anerobe Organismen dagegen beginnen mit dem Wachstum an oder nahe dem Boden des Rohres, während fakultative oder aktlvmotile Organismen über das Medium verteilt anzutreffen sein können.
Teilproben des Gemischs werden dem Rohr auf aseptische Weise entnommen, um ein Infizieren von außen zu vermeiden. Verschiedene Techniken können hierfür angewendet werden. Die Belüftungseinrichtung wird entfernt, um den durchstechbaren Stopfen wieder abzudichten und das Rohr wird einige male umgekehrt um das Gemisch vor der Entnahme der Teilprobe gründlich durchzumischen.
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Dann wird die Belüftungseinrichtung; wieder aufgesetzt, und durch Quetschen der biegsamen Kappe der Belüftungseinrichtung von außen wird der durchstechbare Stopfen erfaßt und (wie in Fig. 4 gezeigt) entfernt, so daß nunmehr dem Rohr das gewünschte Volumen einer Teilprobe entnommen werden kann. Auf diese Art und V.'eise kann der durchstechbare Stopfen aseptisch abgenommen und wieder aufgesetzt werden, und es wird auch eine Verunreinigung der Umgebung vermieden. Die Teilprobe ',-/ird dann weiteren Prüfungen unterzogen. Nach ihrer Entnahme wird die Belüftungseinrichtung und der Stopfen v/ieder auf dem Rohr angebracht, wie in Fig. 2 gezeigt.
Eine andere Möglichkeit zur Entnahme einer Teilprobe aus dem Rohr nach Abnahme der Ventilationseinrichtung und Mischen des Inhalts ist folgende:
Die Ventilationseinrichtung wird wieder aufgesetzt und dann nur die Schutzhülse aus Kunststoff, welche das äußere Ende der Kanüle abdeckt, w4p4 entfernt, so daß das Rohr umgekehrt gehalten und von seinem Inhalt tropfenweise auf einen vorbereiteten Objektträger oder ein Gerät für Subkulturen abgegeben v/erden kann, das ein festes Medium für die weitere Untersuchung und Identifizierung der Mikroorganismen enthält.
Gemäß einem weiteren Verfahren wird wiederum die Belüftungseinrichtung entfernt und das Rohr, wie oben beschrieben, umgekehrt gehalten und der Inhalt gemischt. Dann können Teilproben unter Verwendung einer den Stopfen durchstechenden Nadel mit Spritze, wie in Fig. 6 gezeigt, entnommen und.falls erforderlich, das Rohr dabei wiederum umgekehrt v/erden, um ein ausreichendes Volumen zu erhalten. Nach Entnehmen der Teilprobe und Entfernen der Nadel aus dem Stopfen wird die Belüftungseinrichtung v/ieder aufgesetzt.
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Auch kann ein Verfahren angewendet werden, v/ie es in Fig. 7 gezeigt ist, wobei eine Kanüle durch die Nadel der Belüftungseinrichtung hindurch in das in dem Rohr enthaltene Gemisch eingeführt wird, das, wie oben beschrieben, vorher gemischt wurde.
Auch gestattet die Ventilations- bzw. Belüftungseinrichtung es, einen biegsamen Schlauch auf das freie Ende der Nadel dieser Einrichtung aufzusetzen, wie in Fig. 8 gezeigt. Das andere Ende des "chlauchs wird mit einem Meßinstrument zum Feststellen der Anwesenheit eines bestimmten, von Mikroorganismen erzeugten Gases, verbunden.
Die Erfindung ist nachstehend anhand der Zeichnung beispielsweise näher erläutert, und zwar zeigen:
Fig. 1 in auseinandergezogener Darstellung eine Ansicht einer betriebsfertigen erfindungsgemäßen Vorrichtung zum Züchten von Mikroorganismen;
Fig. 2 vergrößert und im Schnitt eine Teilansicht der Belüftungseinrichtung auf dem in Fig. 1 gezeigten Rohr;
Fig. 3 einen Schnitt nach der Linie"3—3 der Fig. 2;
Fig. 4 einen Axialschnitt durch die von dem Rohr abgenommene Belüftungseinrichtung mit dem durchstechbaren Stopfen; und
Fig. 5 bis 8 verschiedene Verfahren zur Entnahme von Teilproben aus dem das Gemisch enthaltenden Rohr.
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BAD ORIGINAL
Das geschlossene Kultursystem zum Züchten von entweder strikt aeroben oder aneroben Mikroorganismen ist in Fig. 1 auseinandergezogen gezeigt und allgemein mit 10 bezeichnet. Ein evakuiertes Rohr 12, das aus Glas oder durchsichtigem Kunststoff bestehen kann, der nicht toxisch und inert gegenüber dem Nährboden und den zu züchtenden Organismen ist, wird verwendet. Ein durchstechbarer Stopfen 14 ist lösbar in das offene Ende 15 des Rohres 12 eingesetzt.
Eine Belüftungseinrichtung 16 (Fig. 4) wird auf das Rohr 12 aufgesetzt, wie in Fig. 2 gezeigt. Die Belüftungseinrichtung weist eine Kappe 18 aus biegsamen Kunststoff, beispielsweise Polyethylen auf. Die Kappe 18 hat einen zylindrischen Hauptteil mit etwas größerem Durchmesser als das Rohr 12 und nimmt mit ihrem offenen Ende das mit dem Stopfen 14 versehene Ende des Rohres 12 auf. Der Boden der Kappe 18 ist mit 19 bezeichnet In der Mitte des Bodens 19 ist eine Nabe 20 mit einer axialen Bohrung 21 ausgebildet, durch die eine Nadel 24 axial in die Kappe 18 einsetzbar ist. Die Nadel 24 ist fest in der Bohrung 21 angebracht, beispielsweise durch ein Epoxiharz. Sie ist zwischen ihren Enden 25 und 26 in der Nabe 20 gelagert. Das Ende 25 ist angespitzt, um das Durchstechen des Stopfens 14 zu erleichtern, wodurch eine Verbindung zwischen dem Inneren des Rohres 12 und seiner Umgebung aufrechterhalten wird.
Wie in Fig. -2 gezeigt, ist die Belüftungseinrichtung so auf dem Rohr 12 angebracht, daß das spitze Ende 25 der Nadel 24 sich durch den Stopfen 14 hindurch erstreckt, wobei das spitze Ende 25 sich oberhalb des Kulturmediums bzw. Nährbodens 30 befindet. Es kann dann, wenn die Vorrichtung in eine erwärmte Umgebung gebracht wird, durch die Kanüle bzw. Nadel 24 ein Gasaustausch stattfinden, in dem innerhalb des Rohres oberhalb des Nährbodens 30 befindliches Gas durch die Nadel 24 nach außen gelangen und die gewünschte Atmosphäre von außen
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in den Raum oberhalb des Nährbodens 30 eintreten kann.
Zu der Belüftungseinrichtung 16 gehört eine Schutzhülse 28 aus Kunststoff, die um ihre Innenfläche verteilt mit Rippen 29 ausgebildet ist, die auf die Nabe 20 aufgesetzt, Kanäle bilden, durch die das Gas oberhalb des Nährbodens 30 über die Nadel austreten kann, während gleichzeitig aus der äußeren Umgebung die gewünschte Atmosphäre durch die Nadel 24 eintreten kann, so daß in dem Rohr 12 enthaltene Mikroorganismen mit optimaler Rate wachsen können oder daß auch eine inerte Atmosphäre für die Züchtung strikt anerober Mikroorganismen aufrechterhalten werden kann.
In Fig. 4 ist die Belüftungseinrichtung 16 gezeigt, um eine der Möglichkeiten zum Entfernen des Stopfens 14 von dem Rohr 12 zu erläutern, wenn eine Teilprobe unter Aufrechterhaltung aseptischer Bedingungen dem Rohr 12 entnommen werden soll. Der Stopfen 14 ist, wie gezeigt, von der Nadel 24 durchsetzt, wobei deren spitzes Ende 25 sich über den Stopfen hinaus erstreckt.
Fig. 5 zeigt das Rohr 11 nach Entfernung des Stopfens 14. Eine Pipette 40 mit elastischem Ballon 42 am äußeren Ende wird in die im Rohr 12 enthaltene Kultur eingeführt. Eine beliebige Menge des geimpften Kulturmediums- kann dann iür Zwecke von Subkulturen dem Rohr entnommen werden.
Fig. 6 zeigt ein anderes Verfahren zur Entnahme einer Teilprobe. Hier ist nur die -Belüftungseinrichtung 16 entfernt und eine sterile Spritze 44 mit Nadel dient zum Abziehen des Gemischs aus dem Rohr 12 nach Durchstechen des Stopfens 14 mit der Nadel 45. Natürlich ist die Nadel 45 lang genug, um mit ihrem spitzen Ende 46 in das Kulturmedium einzutauchen.
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- ίο -
Bei dem in Fig. 7 gezeigten Verfahren wird eine Mikropipette 47 verwendet, mit einem Durchmesser, der die gleitende Einführung durch die Nadel 24 der Belüftungseinrichtung 16 hindurch ermöglicht. Die Mikropipette ist mit einem flexiblen Ballon 48 dargestellt. Statt dessen kann Jedoch auch eine andere Einrichtung zum Abziehen der Teilprobe verwendet werden. Nach Entnahme der Teilprobe wird die Schutzhülse 28 wieder auf die Nabe 20 zur Aufrechterhaltung aseptischer Bedingungen aufgesetzt.
Auch bei dem anhand der Fig. 8 gezeigten Verfahren ist von der Belüftungseinrichtung 60 nur die Schutzhülse 28 abgenommen worden. An das äußere Ende 26 der Nadel 24 ist ein biegsamer Schlauch 50 angeschlossen, so daß in dem Rohr 12 entstandenes Gas über den Schlauch 50 abgeleitet und mit Hilfe geeigneter Geräte analysiert werden kann, um die Anwesenheit eines für bestimmte Arten von Organismen typischen Gases festzustellen. Auch ist das Volumen des von den Mikroorganismen erzeugten Gases als Indiz des Wachstums der Kultur innerhalb des Rohres 12 zu verwenden.
Ss ist vorgesehen, daß bei Anwendung der Erfindung jede Art eines Kulturmediums verwendet werden kann, um Mlkroorganis- " η ';; züchten, die in einer Körperflüssigkeit enthalten sein k jfinjn. Im Handel sind zahlreiche solcher Nährböden bzw. Kulturmedien erhältlich, um bestimmte Mikroorganismen zu züchten und viele können abgewandelt werden, um einige Typen solcher Mikroorganismen zu züchten. Körperflüssigkeiten, die unter Verwendung der Erfindung für Züchtungszwecke benutzt werden können, sind beispielsweise Syno v.talflüssigkeit, Rückenmarksflüssigkeit, Peritonalflüssigkeit, Pleuralflüssigkeit, Urin und auch Wundgewebe von offenen Verletzungen oder Schnitten im Zusammenstellung mit Blut.
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Das folgende Beispiel kann der Erläuterung der Verwendung der Erfindung dienen und betrifft das Züchten von Mikroorganismen, die entweder strikt anerob oder strikt aerob sein und im gleichen Rohr mit dem gleichen Nährboden aufgenommen werden können, wobei die Körperflüssigkeit Blut ist.
Beispiel
Ein Blutentnahmegerät wird verwendet, wie es in den US-PS 3 469 572 und 3 494 352 offenbart ist, wo eine Kulturprobe zusammen mit anderen Blutproben für hämatologische Untersuchungen im Laboratorium entnommen wird. Wo nur eine Kulturprobe benötigt wird, kann eine Blutentnahmeeinrichtung verwendet werden, wie sie in der US-PS .2 460 641 offenbart ist.
Das Blutentnahmegerät enthält eine Nadel für Mehrfachproben und einen die Nadel aufnehmenden Halter. Es wird dann in der üblichen Weise eine Venenpunktur vorgenommen,. Ein evakuiertes Rohr 12, das einen flüssigen Nährboden bzw. ein flüssiges Kulturmedium für Blut enthält, wird in den Halter eingesetzt. Das Rohr 12 wird in den Halter geschoben, so daß der Stopfen von der Nadel durchstochen wird. Nur eine vorbestimmte Menge an Blut wird von dem Rohr aufgenommen, so daß"das Verhältnis von Blut zu Nährboden darin zwischen 1:8 und 1:10 beträgt. Das Rohr wird dann von dem Halter abgezogen und ist damit für die Weitergabe an das Laboratorium bereit. Bevor das Rohr jedoch in ein erwärmtes Milieu verbracht wird, wird die Belüftungseinrichtung 16 aufgesetzt, so daß der Stopfen von der Nadel der Belüftungseinrichtung durchstochen wird. Die Belüftungseinrichtung ist mit der Schutzkappe 28 versehen, um
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Sterilität zu bewahren und einen Gasaustausch zwischen der Umgebung und dem Inneren des Rohres 12 aufrecht zu erhalten. Der Stopfen des Rohres 12 wird also aseptisch gehalten, um zu verhindern, daß er von außen mit Bakterien infiziert wird. Wenn aerobe oder anerobe und aerobe Züchtung erfolgen soll, so besteht die erwärmte Umgebung aus Luft.
Nachdem die so vorbereitete Vorrichtung in aufrechter Stellung in einen Inkubator der richtigen Temperatur und Atmosphäre für 12 bis 24 Stunden gehalten wurde, wird das Rohr visuell untersucht, um festzustellen, ob ein Wachstum stattgefunden hat. Ist dies der Fall, so ist dies ein Zeichen für die Anwesenheit anerober Organismen und es sollten dann für die weitere Untersuchung Teilproben entnommen werden. Hierfür kann eines der Verfahren verwendet werden, wie es oben anhand der Fig. 4 bis 7 beschrieben wurde. Es ist jedoch zu beachten, daß jedes dieser Verfahren unter aseptischen Bedingungen durchgeführt werden muß, um ein Infizieren von außen zu vermeiden.
Natürlich muß bei der Untersuchung anderer Körperflüssigkeiten als Blut das Kulturmedium bzw. der Nährboden leicht abgewandelt werden, insbesondere wenn eine spezifische Art von Organismen vorhanden ist.
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Claims (1)

  1. 3.11.1972 - 13 -
    Patentansprüche
    1) Vorrichtung zum Aufnehmen, Züchten und Identifizieren von in einer Probe einer Körperflüssigkeit enthaltenen Mikroorganismen mit einem evakuierten, einseitig geschlossenen Rohr, dessen anderes Ende mit einem durchstechbaren Stopfen versehen ist, dadurch gekennzeichnet, daß das Rohr (12) einen zum Züchten von in der Flüssigkeitsprobe enthaltenen Mikroorganismen geeigneten Nährboden (30) enthält und in diesem Rohr die Flüssigkeitsprobe in gesteuerten Anteilen aufnehmbar und automatisch ein vorbestimmtes Verhältnis von Körperflüssigkeit zu Nährboden herstellbar ist, und daß dem Rohr (12) eine auf dieses aufsetzbare Belüftungseinrichtung (16) zugeordnet ist, die einen Strömungsweg (24,29) zwischen dem Inneren des Rohres (12) und seiner Umgebung offen hält.
    2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Belüftungseinrichtung (16) eine auf das mit Stopfen (14) versehene Ende des Rohres (12) aufsetzbare, flexible Kappe (18) aufweist, deren Boden (19) mit einer eine axiale Bohrung (21) aufweisenden Nabe (20) versehen ist, und daß in der Bohrung eine doppelendigeNadel (24) fest angebracht ist, deren Länge so bemessen ist, daß bei auf das Rohr (12) aufgesetzter Kappe (18) das untere Ende (25) der Nadel (24) sich durch den Stopfen (14) hindurch erstreckt und in geringem Abstand von der Oberfläche des Nährbodens (30) endet.
    - Anspruch 3 -
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    Vorrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß auf die Nabe (20) der Kappe (18) eine Schutzhülse (28), das freie Ende der Nadel (24) umgebend, aufgesetzt ist und daß über die Innenfläche der Schutzhülse eine Anzahl radialer Rippen (29) verteilt vorgesehen ist, die, gegen die Nabe (20) anliegend, eine Anzahl von Belüftungskanälen bilden, welche das Innere des Rohrs (12) mit seiner Umgebung verbinden. ,
    4. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gelömzeichnet, daß in dem Rohr (12) ein Nährboden (30) für die Untersuchung von Mikroorganismen in Blut enthalten ist.
    5. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Rohr (12) eine inerte Atmosphäre aus Kohlendioxyd und Stickstoff enthält mit einem derart bemessenen Unterdruck, daß ein vorbestimmtes Flüssigkeitsvolumen aufgenommen wird, wodurch das vorbestimmte Verhältnis von Körperflüssigkeit und Nährboden (30) herstellbar ist.
    Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß für die Aufnahme von Blut als Flüssigkeitsprobe der Unterdruck und die Menge des Nährbodens (30) im Rohr (12) so eingestellt sind, daß ein Verhältnis von Blut zu Nährboden zwischen 1 : 8 und 1 : 10 erzielbar ist.
    7. Vorrichtung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Atmosphäre und der
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    Nährboden (30) im Rohr (12) für die Züchtung anerober Mikroorganismen eingestellt sind.
    8. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß Atmosphäre und Nährboden im Rohr (12) zum Züchten aerober Mikroorganismen eingerichtet sind.
    9. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß.-Atmosphäre und Nährboden im Rohr (12) zum gleichzeitigen Züchten aerober und anerober Mikroorganismen eingerichtet sind.
    10. . Verfahren zum gleichzeitigen Züchten aerober und
    anerober Mikroorganismen in einem geschlossenen System, dadurch gekennzeichnet, daß ein Nährboden mit einer in gesteuertem Verhältnis bemessenen Probe einer Körperflüssigkeit derart geimpft wird, daß ein vorbestimmtes Verhältnis von Körperflüssigkeit und Nährboden automatisch erhalten wird, daß innerhalb des geschlossenen Systems ein Gefäß mit dem Nährboden vorgesehen wird, der zum Züchten aerober und anerober Mikroorganismen gleichzeitig geeignet ist; daß eine Verbindung zwischen dör das Gefäß umgebenden Atmosphäre und der Atmosphäre im Inneren des Gefäßes herstellt und der geimpfte Nährboden der für das Wachstum der Mikroorganismen geeigneten Atmosphäre und Temperatur ausgesetzt wird.
    11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß nach einem von verschiedenen vorgesehenen Verfahren für die aseptische Übertragung einer-Teilprobe des
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    Nährbodens eine solche Teilprobe auf ein für das Wachstum der darin enthaltenen Mikroorganismen geeignetes Substrat übertragen wird.
    12. Verfahren nach Anspruch 10 für eine aus Blut bestehende Flüssigkeitsprobe, dadurch gekennzeichnet, daß ein vorbestimmtes Volumen an Blut automatisch dem Nährboden so zugeführt wird, daß sich ein endgültiges Verhältnis von Blut zu Nährboden zwischen 1 : 8 und 1 : 10 ergibt.
    Patentanwalt :
    3 0 9 8 3 0/1165
    Leerseite
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