DK147007B - Fremgangsmaade til paavisning af mikroorganismer og apparat til anvendelse ved fremgangsmaaden - Google Patents

Description

147007

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til påvisning af mikroorganismer i en prøve, fx af legemsvæsker, og et apparat til anvendelse ved fremgangsmåden.

Til påvisning af mikroorganismer i legemsvæsker, især af bakterier i 5 blod, er det nødvendigt at pode på et flydende næringsmedium og derefter at videreføre væksten på et fast næringsmedium. I flere år har der eksisteret systemer, ved hvilke de to næringsmedier er kombineret i den samme beholder, for at man kan undgå den besværlige og eventuelt risikofyldte overføring af forkulturerne i det 10 flydende næringsmedium til et fast næringsmedium uden for beholderen .

De kendte apparater, i hvilke der kombineres et fast og et flydende næringsmedium, er imidlertid af mange grunde ikke tilfredsstillende.

Især kan der på grund af risikoen for eliminering af bestanddele af 15 det faste næringsmedium i den flydende næringsbouillon oftest kun anvendes et med den flydende næringsbouillon kompatibelt fast næringsmedium. Dette har bl.a. den væsentlige ulempe, at en differentiering af sygdomsfremkalderen ikke er mulig.

De hidtil foreslåede løsninger til separering af det faste næringsmedi-20 um og det flydende næringsmedium under inkubationstiden og transporten er komplicerede og dyre og/eller sikrer en separering af de to medier under inkubationen, men ikke under transporten.

Ved opfindelsen søges tilvejebragt en fremgangsmåde, ved hvilken transporten af det faste næringsmedium - til brugeren før inkubatio-25 nen eller til et sted for viderebehandling efter inkubationen - sker adskilt fra det flydende næringsmedium, idet indpodningen på det faste næringsmedium alligevel ligesom ved de konventionelle dobbelt-kulturflasker kan foretages i et lukket apparat ved en simpel rystning og oversvømning af det faste næringsmediums overflade med det 30 flydende næringsmedium.

Fra tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.215.551 kendes endvidere et apparat til kombineret prøveudtagning og dyrkning af mikroorganismer.

Dette kendte apparat har en bægerformet beholder, der tjener til op- 147007 2 tagelse og opbevaring af en væskeprøve. Denne beholder står i forbindelse med et fra sin overside udragende, reagensglasformet dyrkningsrør, hvis inderside i et bestemt område er dækket med et egnet, fast næringsmedium. Næringsmediet kan da bringes i kontakt med 5 væskeprøven derved, at man vender beholderen, så at væskeprøven løber ned i det reagensglasformede rør og kommer i kontakt med næringsmediet. Beholderen kan straks derefter føres tilbage til sin udgangsstilling, og efter afdrypning kan det reagensglasformede rør fjernes fra beholderen, forsynes med et lukke og inkuberes.

10 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er af den sidstnævnte kendte art, ved hvilken man a) indfører prøven i en første beholder, b) forbinder den første beholder således med en anden beholder, der indeholder mindst ét fast næringsmedium, at de to 15 beholderes indre rum er i kontakt med hinanden, men prak tisk taget ikke rager ind i hinanden, c) bringer overfladen af det faste næringsmedium i den anden beholder i berøring med indholdet af den første beholder, d) inkuberer, og 20 e) undersøger tilstedeværelsen af kolonier på overfladen af det faste næringsmedium, og fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at den første beholder indeholder et flydende næringsmedium, og at der i denne første beholder eventuelt foretages en inkubation, før denne 25 forbindes med den anden beholder.

Medens den første beholder i det apparat, der kendes fra det nævnte tyske offentliggørelsesskrift udelukkende tjener til optagelse og opbevaring af væskeprøven, indeholder den første beholder i henhold til fremgangsmåden ifølge opfindelsen et flydende næringsmedium og tje- 30 ner således foruden til optagelse af en væskeprøve til anlæggelse af en forkultur, der sædvanligvis, men ikke nødvendigvis, anlægges ved hjælp af en forinkubation.

3 147007

Den første og den anden beholder kan forbindes med hinanden på en hvilken som helst passende måde, fx ved sammenskydning. Imidlertid forbindes den første og den anden beholder fortrinsvis ved sammenskruning. De på beholderne udformede gevind, der anvendes ved 5 sammenskruningen, kan da før sammenskruningen anvendes til fastholdelse af skruelukker for de enkelte beholdere.

Opfindelsen angår også et apparat til anvendelse ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåde og med en første beholder og en anden beholder, der indeholder mindst ét fast næringsmedium, idet de to be-10 holderes indre rum er i kontakt med hinanden, men praktisk taget ikke rager ind i hinanden, ligesom disse beholdere er således forbundet, at de igen kan adskilles, og apparatet ifølge opfindelsen er ejendommeligt ved, at den første beholder indeholder et flydende næringsmedium, og at den anden beholder har form af et ved begge 15 ender med et lukke forsynet, gennemsigtigt rør, og at der på ét af de to lukker er fikseret en med næringsmediet eller næringsmedierne belagt bærer, der rager ind i røret. Bæreren kan fordelagtigt have form af en objektbærer, idet den da direkte kan anbringes i et mikroskop.

20 Yderligere detaljer og ejendommeligheder ved fremgangsmåden og apparatet ifølge opfindelsen vil fremgå af den efterfølgende detaljerede beskrivelse af en foretrukken udførelsesform for et apparat til udøvelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen. På tegningen viser fig. 1 et længdesnit i en første beholder med en flydende nærings-25 bouillon, fig. 2 et længdesnit i en anden beholder med fast næringsmedium, og fig. 3 set i længdesnit en ved kombination af de to beholdere dannet enhed.

På tegningen er der vist en første beholder 1, der består af en 30 flaske 2, som fortrinsvis er fremstillet af et transparent materiale såsom glas eller plast. Flasken 1 er lukket ved hjælp af en prop 6, fortrinsvis en gummiprop, der kan perforeres med en kanyle for indføring af en legemsvæske såsom blod. Proppen 6 er således indeklemt i en på flaskehalsen fastskruet, fortrinsvis metallisk kapsel 4, 147007 4 at proppen 6 ved afskruning af kapslen 4 automatisk medtages. For at en kanyle uden problemer kan stikkes gennem proppen 6, har kapslen 4 en aftagelig del 5. Beholderen 1, der indeholder et flydende næringsmedium 7, står fortrinsvis under CC^-atmosfære og partielt . 5 vakuum.

En anden beholder 10 består af et gennemsigtigt rør 11 af glas eller plast og har ved sin nederste ende på indersiden af en cylindrisk begrænsning 14 et skruegevind 12 og på ydersiden af sin øverste ende et skruegevind 13. Skruegevindet 12 svarer til et på halsen af flas-10 ken 2 værende skruegevind og muliggør forbindelse af de to beholdere. Røret 11 er ved sin nederste ende lukket ved hjælp af et skruelukke 16.

For at muliggøre opnåelse af en tæt forbindelse mellem de to beholdere er røret 11 inde i den nederste cylindriske begrænsning 14 forsynet 15 med en tætningsring 17, fortrinsvis af polyethylen. Beholderen 10 er ved sin øverste ende forsynet med et på skruegevindet 13 skruet lukke 15. Med lukket 15 er der fast forbundet en objektbærer 18, der fortrinsvis er af glas eller plast, og som på den ene eller begge sider er belagt med et næringsmedium eller med forskelligartede nærings-20 medier.

Når apparatet skal bruges, føres blod fra en patient ind i beholderen 1 ved hjælp af et med en kanyle forsynet overføringsapparat. Med dette formål stikkes overføringsapparatets kanyle gennem proppen 6, efter at delen 5 er blevet fjernet. Indføringen af blodet i flasken 2 25 lettes fortrinsvis ved hjælp af et i denne flaske herskende partielt vakuum.

Når flasken 2 indeholder den ønskede mængde blod, fjernes nålen, hvorefter det i proppen 6 af nålen frembragte hul let lukker sig af sig selv. Blodkulturflasken 2 inkuberes i fra ca. 1 time til ca. 10 30 dage ved 20-37°C.

Derefter skrues kapslen 4 af flasken 2, hvorved proppen 6 samtidigt fjernes. Beholderen 1 skrues på beholderen 10, der er blevet åbnet ved sin nederste ende ved afskruning af lukket 16.

5 147007

Det på denne måde dannede apparat, der indeholder mindst ét fast og et flydende næringsmedium, vippes flere gange, for at man kan sikre en optimal kontakt mellem de to næringsmedier. Efter henstand ved 20-37°C i fra 1 time til 10 dage betragtes og vurderes den eventuelle 5 på det faste næringsmedium værende vækst. Hvis der ikke kan konstateres nogen vækst, kan denne proces gentages flere gange. Ved længere inkubation vippes apparatet mindst dagligt for at sikre en optimal kontakt mellem det flydende og det faste næringsmedium.

Til lukning af beholderne behøver man ikke ubetinget at anvende 10 skruelukker. Også forbindelsen af de to beholdere kan ske på anden måde end ved sammenskruning, som fx ved sammenskydning.

Den ved fremgangsmåden omtalte inkubation i beholderen med det flydende næringsmedium før forbindelsen med den beholder, der indeholder ét fast næringsmedium, er fakultativ.

15 Inkubationen under trin d) er derimod nødvendig og kan ske såvel under aerobe som under anaerobe betingelser. I sidstnævnte tilfælde kan låget for den beholder, der indeholder det faste næringsmedium, være forsynet med en åbning til indføring af en inaktiv gas, som fx kvælstof eller CC^, og til fortrængning af luften. Den inaktive gas, 20 fx CO2, kan også frembringes ved hjælp af en i beholderen med det faste næringsmedium værende eller på beholderens låg anbragt gaskilde.

Den foreliggende opfindelse muliggør påvisning af mikroorganismer, som fx bakterier, svampe, gærceller osv. i en prøve. Denne prøve 25 kan stamme fra en hvilken som helst væske, idet fortrinsvis legemsvæsker som fx blod, liquorcerebrospinalis eller urin undersøges.

Det skal sluttelig nævnes, at den foreliggende opfindelse ikke er begrænset til at angå anvendelsen af et enkelt fast næringsmedium. Således kan der fx til kimidentifikation samtidigt anvendes flere arter af 30 næringsmedier. Endvidere kan næringsmedierne indeholde antibiotika og/eller chemoterapeutika, hvorved det er muligt at foretage en føl -somhedsundersøgelse af mikroorganismer.

Claims (3)

1. Fremgangsmåde til påvisning af mikroorganismer i en prøve, ved hvilken man a) indfører prøven i en første beholder (1), 5 b) forbinder den første beholder således med en anden be holder (10), der indeholder mindst ét fast næringsmedium, at de to beholderes indre rum er i kontakt med hinanden, men praktisk taget ikke rager ind i hinanden, c) bringer overfladen af det faste næringsmedium i den anden 10 beholder i berøring med indholdet af den første beholder, d) inkuberer, og e) undersøger tilstedeværelsen af kolonier på overfladen af det faste næringsmedium, kendetegnet ved, at den første beholder (1) indeholder et 15 flydende næringsmedium (7), og at der i denne første beholder (1) eventuelt foretages en inkubation, før denne forbindes med den anden beholder (10).

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den første og den anden beholder 20 forbindes ved sammenskruning.

3. Apparat til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge krav 1 og med en første beholder (1) og en anden beholder (10), der indeholder mindst ét fast næringsmedium, idet de to beholderes indre rum er i kontakt med hinanden, men praktisk taget ikke rager ind i hinanden, 25 ligesom disse beholdere er således forbundet, at de igen kan adskilles, kendetegnet ved, at den første beholder (1) indeholder et flydende næringsmedium, og at den anden beholder (10) har form af et ved begge ender med et lukke (15, 16) forsynet, gennemsigtigt rør 30 (11), og at der på ét af de to lukker er fikseret en med nærings mediet eller næringsmedierne belagt bærer (18), der rager ind i røret.