DE2638067C2

DE2638067C2 - Penicilline und Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE2638067C2
Application number: DE2638067A
Authority: DE
Inventors: Mitsutaka Kawazu; Toshikazu Wako Saitama Miyagishima; Satoshi Iwatsuki Saitama Ohshima; Masahiko Asaka Saitama Seto; Mitsuyoshi Urawa Saitama Wagatsuma; Totaro Yono Saitama Yamaguchi
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1975-09-12
Filing date: 1976-08-24
Publication date: 1982-11-11
Also published as: FI63413B; NL7610151A; FI63413C; SE7609909L; SE430337B; AU1769776A; DK411076A; DK144301B; US4053609A; NL176677B; NL176677C; DE2638067A1; BE846094A; CA1081211A; FR2323384B1; FI762576A; FR2323384A1; DK144301C

Description

(V)

3. Arzneimittelj gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Verbindung gemäß Anspruch 1 neben pharmakologisch annehmbaren Trägerstoffen.

Die Erfindung betrifft B-iD^-Acylamino^-phenylacetamidoJpenicillansäuren der allgemeinen Formel

HO

NH
CO-CH(NHj)-CH₂COR

worin R Niedrigalkylamino bedeutet

Auch die pharmazeutisch annehmbaren Salze der Verbindungen (I) sind in der Erfindung eingeschlossen.

In den US-Patentschriften 32 6C 513 und 33 40 252 ist die Herstellung von 6-[D-2-(DL-2-Amini ilutaramido)-2-phenylacetamido]-penicillansäure durch Umsetzung von 6-(D-2-Amino-2-phenylacetamido)-penicillansäure mit DL-Glutamin beschrieben, wobei das Glutaramidoderivat sowohl gegenüber grampositiven als auch gegenüber gramnegativen Bakterien eine anti-mikrobielle Wirkung zeigt. Andererseits ist in der deutschen Patentanmeldung Nr. 19 34 783 die Herstellung von 6-[D-2-(L-2-Amino-3-carbamoyl-propionamido)-2-phenylacetamidoj-penicillansäure durch Kondensation von 6-Aminobenzylpenicillin mit Biphenylisopropyloxy-carbonyl-L-asparagin und nachfolgende Entfernung der Schutzgruppe hiervon beschrieben.

Gemäß der Erfindung werden neue Penicilline geschaffen, die als antibakterielle Substanzen und als Chemotherapeutika bei Geflügel und Säugetieren sowie beim Menschen bei der Behandlung von Infektionskrankheiten, die durch grampositive und gramnegative Bakterien hervorgerufen werden, verwendbar sind. Insbesondere zeigten die Penicillansäureverbindungen (I) gemäß der Erfindung eine potente antimikrobielle Wirkung gegenüber einem breiten Spektrum von Mikroorganismen, wobei es sowohl bei oraler wie parenteraler Verabreichung an Menschen oder Tiere wirksam absorbiert werden kann. Insbesondere zeigten die Penicillansäureverbindungen (I) eine potente antimikrobielle Wirkung gegenüber Bakterien der Gattung Pseudomonas und Staphylococcus. Beispielsweise zeigt 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamiⁱ do)-2-p-hydroxy-phenylacetamido]-penicillansäure eine minimale Inhibitorkonzentration (M.I.C.) (Agarverdün· nungsmethodik, Herzinfusionsagar) von etwa 12,5 μg/ml gegenüber Pseudomonas aeruginosa A3. Andererseits ist die M.I.C, von Sulbenicillin (d, h.

(D

Dinatrium 6-(D-2-SuifonyI-2-phenylacetamido)-penicillanat), 6-[D-2-(DL-2-Aminoglutaramido)-2-phenylacetamidoj-penicillansäure und 6-[D-2-(L-2-Amino-3-carbamoyl-propionamido^-phenylacetamidoj-penicillan- säure gegenüber diesem Mikroorganismus jeweils 12,5, 50 und mehr als 100 μg/ml. Die antimikrobielle Wirkung von6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicilIansäure gemäß der Erfindung gegenüber Staphylococcus aureus ATCC 6538P und St. epidermidis 10131R Ut auch etwa 2- bis 4fach höher als jene von Sulbenicillin und 6-[D-2-(L-2-Amino-3-carbamoyl-propionamido)-2-phenylacetamido]-penicillansäure. Die erfindungsgemäßen Penicillansäureverbindungen (I) können weiter potente antimikrobielle Wirkung gegenüber anderen grampositiven und gramnegativen Bakterien, wie solche der Gattung Streptococcus, Escherichia, Klebsie'ia, Salmonella, und Bacillus, zeigen. Darüber hinaus besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen (I) eine ausgeprägt niedrige Toxizität Wenn beispielsweise 6-[D-2-(D-2-

Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamidoj-penicillansäure Mäusen in einer Dosis von 10.000 mg/kg intravenös verabreicht wird, stirbt keine der Mäuse während eines Zeitraums von 14 Tagen nach Verabreichung.

Die Penicillansäureverbindungen (I) der Erfindung können entweder als freie Säuren oder als Salze hiervon für pharmazeutische Zwecke eingesetzt werden. Pharmazeutisch annehmbare, nicht-toxische Salze der Verbindungen (I) schließen beispielsweise nicht-toxisehe Metallsalze, v/ie Natrium-, Kalium«! Kalzium- und AluminiunvSalze; Ammonium und substituierte Ammo' niumsalze, d. h. Salze mit nicht-toxischen Aminen, wie Trialkylaminen, unter Einschluß von Triäthylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-jS-phenäthylamin, L'Ephenamin, Ν,Ν'-Dibenzyläthylendiamin, Dehydroabiäthylamin, Ν,Ν'-Bis-Dehydroabiäthyläthylendiamin Und andere Amine, die zur Salzbildung mit Benzylpeni-

• ciillin verwendet worden sind, ein. Die Penicillansäureverbindungen (I) sind in Wasser sehr gut löslich und können entweder oral oder parenteral (ζ, Β. intravenös, intramuskulär, subkutan) verabreicht werden. Eine Tagesdosis einer Verbindung (I) kann etwa 0,25 bis etwa 20 g, insbesondere 0,5 bis 10 g, und vorzugsweise etwa 1 bis etwa 4 g, bezogen auf den erwachsenen Patienten, betragen. Darüber hinaus können die Verbindungen (I) in Form einer pharmazeutischen Zubereitung verwendet werden, dio die gleichen Verbindungen im Gemisch mit pharmazeutischen Exzipienzsubstanzen enthält, welche für die enterale oder parenteral Verabreichung geeignet sind. Geeignete Exzipienzsubstanzen sind beispielsweise Gelatine, Lactose, Glucose, Natriumchlorid, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliches öl und andere für diesen Zweck bekannte Substanzen, Die pharmazeutischen Zubereitungen können in fester Form, wie in Tabletten, beschichteten Tabletten, Pillen oder Kapseln, oder in flüssiger Form, wie Lösungen,

Suspensionen oder Emulsionen, vorliegen. Sie können sterilisiert sein und/oder zusätzlich Hilfsstoffe, wie Stabilisierungsmittel, Netzmittel oder Emulgatorsubstanzen enthalten.

Die Penicillansäureverbindungen (I) gemäß der Erfindung können gewonnen werden durch die Stufen der

(i) Kondensation einer6-(-D-2-Amino-2-phenylacetatamido)-penicillansäureverbindung der Formel

15

HO

f X— CH- CONH

NH,

(ID

COOY¹

worin R¹ Wasserstoff oder eine Schutzgruppe darstellt, mit einer N-geschützten Aminosäure der Formel

R2--0H cm)

worin R²' eine Gruppe der Formel

— C0 — CH(NHZ)—CH₂C0R

darstellt, Z eine Schutzgruppe ist und R Niedrigalkylamino ist, oder eines reaktiven Derivates hiervon unter Erhalt einer 6-(D-2-Acylamidc-2-phenylacetamido)-penicillansäureverbindung der Formel

\—CH-CONH

(IV)

worin R-²' und Y¹ die vorstehende Bedeutung besitzen, oder (ii) Kondensation einer D-2-Acylamido-phenylessigsäure der Formel

HO

(V)

NH

R²'

worin R²' die vorstehende Bedeutung besitzt oder eiees reaktiven Derivates hiervon, mit einer 6-Aminopenicillansäureverbindung

CH₃
/^S\Z

oJ N I (VI)

COOY¹

Worin Y¹ die vorstehende Bedeutung besitzt, unter Erhalt der 6-(D-2*Ac;^-iatnido-2-phenylacetamido)- penicil lansäureverbindung (IV) und sodann
(iii) Entfernung der Ächutzgruppe(n) von der Verbindung (IV).

In alternativer Weise kann die Verbindung (I) gemäß der Erfindung durch die Stufen der Reaktion eines an der Carboxylgruppe geschützten natürlichen Penicillins der Formel

E-CH₂CONH-O =

CH₃

(VID

COOY²

worin A Alkyl, Alkenyl, Phenyl öder substituiertes Phenyl darstellt, E eine Einfachbindung, ein Schwefelatom oder Sauerstoffatom ist, und Y² eine Schutzgruppe darstellt, mit einer Phosphorhalogenidverbindung unter Erhalt einer Iminohalogenidverbindung der Formel

s /^CH3

A—E— CH₂C=N-, ( V-CH₃

(VIiD

worin X Halogen darstellt und A, E und Y² die vorstehende Bedeutung besitzen, Umsetzung der minohalogenid^ verbindung (VHI) mit einem niedrigen Alkanol unter Erhalt einer Iminoätherverbindung der Formel

worin R⁴ Niedrigalkyl ist und A, E und Y² die vorstehende Bedeutung besitzen, gegebenenfalls bzw., sofern erforderlich, Behandlung der Iminoätherverbindung (IX) mit Wasser unter Erhalt der entsprechenden Imidatverbindung, Umsetzung der Verbindung (IX) (IX)

oder ihrer entsprechenden Imidatverbfndung mit einem Niedrigalkoxycarbonylester der D-2-Acylamido-phenylessigsäure (V) unter Erhalt einer 6-(D-2-Acylamido-2-phenylacetamidoj-penicillansäureverbindung der Formel

HO

(X)

worin R²' und Y² die vorstehende Bedeutung besitzen, und anschließende Entfernung der Schutzgruppen von der Verbindung (X) hergestellt werden.

Geeignete Beispiele der Schutzgruppe, die durch das Symbol Y¹ oder Y² dargestellt ist, schließen Benzyl-, Succinimidomethyl-, Phthalimidomethyl-, Phenacyl-, Trimethylsilyl- und 2,2,2-TrichIoräthylgruppen ein. Geeignete Beispiele der Schutzgruppe Z schließen o-Nitrophenylsulfenyl, Benzyloxycarbonyl und 1-Methyl-2-niedrigalkoxycarbonylvinyl ein. Die Penicillansäureverbindungen (II) und (VI), worin Y¹ Wasserstoff darstellt, können für die Reaktionen gemäß der Erfindung in Form von entweder einer freien Säure oder eines Salzes hiervon verwendet werden. Geeignete Beispiele derartiger Salze sind Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze und Niedrigtrialkylaminsalze, wie Trimethylamin- und Triäthylaminsalze. Darüber hinaus schließt die Ausgangsverbindung (IX) beispielsweise Phenacyl-, Benzyl-, Trimethylsilyl-, Trichloräthyl-, Phthalimidomethyl- und Succimidomethylestergruppen verschiedener natürlicher Penicilline ein. Penicillin G (Benzylpenicillin), Penicillin K (n-Heptyl-penicillin), Penicillin X (p-Hydroxybenzylpenicillin), Penicillin F (2-PentenyI-penicillin), Dihydro-Penicillin F (n-Amylpenicillin), Penicillin AT (Allylmercaptomethyipenicillin), Penicillin BT (Butylthiomethylpenictllin), Penicillin S (y-Chlorcrotylsnercaptomethylpenicillh.y und Penicillin V (Phenoxymethylpenicillin) können vorzugsweise als natürliche Penicilline verwendet werden. Geeignete Beispiele der Gruppe A können Alkyl mit 4 bis 6 Kohlenstoffatomen (ζ. B. Butyl, Hexyl), Alkenyl oder Halogenalkenyl mit 2 bis 4 Kohlenstoff-

■ atomen (z.B. Vinyl, 1-PropenyI, 2-Chlor-l-propenyl, 1-ButenyI), Phenyl und Monohydroxyphenyl darstellen.

Die Kondensationsreaktion der Penicillansäureverbindung (II) mit den Aminosäuren (III) sowie der Kondensationsreaktion der Phenylessigsäure (V) mit der Penicillansäureverbindung (VI) kann leicht durchgeführt werden. Beispielsweise werden diese Kondensationsreaktionen vorzugsweise in Gegenwart von Diphenylphosphorsäureacid (d.h. N₂PO(OC₅Hs)₂) in einem Lösungsmittel durchgeführt Die Reaktion wird geeignet bei -20 bis 20⁰C, insbesondere -10 bis 5° C durchgeführt. Die Reaktionen können, was besonders

bevorzugt ist, in Gegenwart eines organischen tertiären Amines, wie Trimethylamin oder Triäthylamin, durchgeführt werden. Als Reaktionslösungsmittel sind Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Chloroform und Methylenchlorid geeignet. In alternativer Weise können die Säuren (III) und (V) vor den vorstehend angeführten Kondensationsreaktionen in deren reaktive Derivate über^führt werden. Geeignete Beispiele der reaktiven Derivate dieser Säuren umfassen die entsprechenden gemischter] Anhydride (z. B. Niedrigalkoxycarbonylester, wie Äthoxycarbonyl, Isobutoxycarbonyl, teft-Bütoxycarbonyl und tert.-Amyloxycarbonyl; Niedrigalkanoylester, wie Pivaloylester), aktive Ester (z. B. Ester mit p-NitrophenoI und N-Hydroxysuccinimid) und Azide. Die gemischten Anhydride der Säuren (III) und (V) können in herkömmlicher Weise, beispielsweise durch Reaktion dieser Säuren mit einem Niedrigalkoxycarbonylhalogenid (z. B. Bromid. Chlorid) oder einem Niedrigalkanoylhalogenid (ζ. Β Bromid. Chlorid), bei -5 bis 40⁰C in Gegenwart eines Säureakzeptors in einem Lösungsmittel hergestellt werden. Chloroform, Methylenchlorid, Dimethylsulfoxid, Tetrahydrofuran und Dimethylformamid werden in geeigneter Weise als Lösungsmittel eingesetzt während als Beispiele des Säure-akzeptors Ν,Ν-Dimethylanilin, N-Methylmorpholin und Pyridin angeführt werden können. Andererseits können die aktiven Ester der Säuren (III) und (V) durch Umsetzung dieser Säure mit p-Hydroxyphenol oder N-Hydroxysuccinimid bei -10 bis 3O⁰C in Gegenwart eines Dehydratisierungsmittels (z. B. DicycIoHxylcarbodiimid) in einem Lösungsmittel (z. B. Tetrahydrofuran, Dioxan, Diglyme) hergestellt werden. Darüber hinaus kann das Azid durch Umsetzung des Hydrazides dieser Säure mit Natriumhydrid in einer verdünnten Mineralsäure (z. B. Schwefelsäure) erzeugt werden. Die Kondensationsreaktionen der Penicillansäureverbindung (II) mit den somit erhaltenen reaktiven Derivaten der Aminosäuren (III) werden bei einer Temperatur von 40 bis -30°C, insbesondere bei 5 bis — 15° C in einem Lösungsmittel durchgeführt. Dimethylformamid, Chloroform, Tetrahydrofuran und Methylenchlorid sind als Reaktionslösungsmittel geeignet. Die Kondensationsreaktion der Penicillansäureverbindung (VI) mit dem reaktiven Derivat der Phenylessigsäure (V) kann auch unter gleichen Bedingungen, wie sie vorstehend angeführt sind, durchgeführt werden.

Die Reaktion des an der Carboxylgruppe geschützten, natürlichen Penicillins (VII) mit der Phosphorhalogenidverbindung wird in einem Lösungsmittel leicht durchgeführt Geeignete Beispiele der Phosphorhalogenidverbindung sind Phosphorpentachlorid, Phosphorpentabromid, Phosphorylchlorid und Phosphortribromid. Die Reaktion kann geeigneterweise bei -10 bis —40⁰C in Gegenwart eines organischen tertiären Amines durchgeführt werden. Als Reaktionslösungsmittel sind 1,2-Dichloräthan und Chloroform geeignet Dimethylanilin, N-Methyl-morpholin und Pyridin können als tertiäres, organisches Amin verwendet werden. Nach der vorstehend angeführten Reaktion wird dem hierdurch erhaltenen Reaktionslösungsmittel (d. h. einer Lösung die die Iminohalogenidverbindung (VlI) enthält) ein Niedrigalkanol hinzugeben, und das Gemisch wird bei —10 bis —45° C weitergeführt, wodurch die Iminoätherverbindung (IX) erhalten wird. Methanol, ÄthanoL Propanol und Butanol können geeigneterweise als Niedrigaikanoi eingesetzt werden. Die somit erhaltene Iminoätherverbindung (IX) kann direkt für die nachfolgende Kupplungsreaktion mit dem Niedrigalkoxycarbonylester der D-2-Acylamido-phenylessigsäure (V) eingesetzt werden. Sofern erforderlich, kann jedoch die Iminoätherverbindung (IX) vor der Kupplungsreaktion mit Wasser bei 0 bis -5⁰C unter Erhalt der entsprechenden Imidatverbindung behandelt werden. Die nachfolgende Kupplungsreaktion der Iminoätherverbindung (IX) oder ihrer entsprechenden Imidatverbindung mit dem Niedrigalkoxycafbonylester der D-2-Acylamido-phenylessigsäure (V) wird vorzugsweise bei einer Temperatur von 0 bis -30⁰C, insbesondere —5 bis —15° C in einem Lösungsmittel durchgeführt. 1,2-Dichloräthan und Chloroform sind als Reaktionslösungsmittel geeignet.

Die Entfernung der Schutzgruppe oder -gruppen von den 6-(D-2-Acylamido-2-phenylacetamido)-penicillansäureverbindungen (IV) und X kann wirksam durch jegliche geeigneten Methodiken in Abhängigkeit von den Arten der Schutzgruppe oder -gruppen, die Verwendung finden, bewirkt werden. Wenn beispielsweise o-NitrophenylsuUenyl als Schutzgruppe Z verwendet wird, so kann diese Gruppe durch Umsetzung der Verbindung (IV) oder (X) mit etwa 2 bis 3 molaren Äquivalenten eines Thioamides in einem Lösungsmittel entfernt werden. Geeignete Beispiele des Thioamides sind Thioacetamid, Thiobenzamid, Thioharnstoff und 2-Mercapto-5-methyl-l,3,5-thiadiazol. Es ist bevorzugt, die Reaktion bei einer Temperatur von 40 bis 0⁰C, insbesondere 20 bis 10⁰C durchzuführen. Als Reaktionslösungsmittel sind Äthyläther, Tetrahydrofuran, Dioxan, niedrige Alkenole (z. B. Methanol, Äthanol) oder ein Gemisch dieser Lösungsmittel geeignet. Wenn die Schutzgruppe Z Benzyloxycarbonyl und/oder jede der Schutzgruppen Y¹ und Y² Benzyl ist, kann die Entfernung der Schutzgruppe oder -gruppen durch Schüttelung der Verbindung (IV) oder (X) in Wasserstoffgas in Gegenwart eines Katalysators durchgeführt werden. Diese katalytische Hydrierung wird vorzugsweise bei einer Temperatur von 40 bis O⁰C, insbesondere 20 bis 10⁰C unter Atmosphärendruck durchgeführt. Bevorzugte Beispiele des Katalysators sind Palladium-BaCO3, Palladium-Aktivkohle und Palladium-Mohr. Niedrigalkanole, wie Methanol und Äthanol sind als Reaktionslösungsmittel geeignet. Wenn andererseits die Schutzgruppe Z l-Methyl-2-niedrigalkoxycarbonylvinyl und/oder eine der Schutzgruppen Y¹ oder Y² Trimethyl· silyl darstellt, kann bzw. können diese Gruppe(n) durch Behandlung mit einer verdünnten Mineralsäure (z. B. 0,5 bis 1 %iger Chlorwasserstoffsäure) bei einer Temperatur von 5 bis 10⁰C in einem Lösungsmittel (z.B. Methyläthylketon, Methylisobutylketon, Dioxan) entfernt werden. Wenn Phenacyl, Phthalimidomethyl oder S.iccinimidomethyl als Schutzgruppe Y¹ oder Y² angewandt werden, so kann diese Gruppe durch Umsetzung mit einem Alkalimetallsalz einer Thiolverbindung oder Thiophenol entfernt werden. Diese Reaktion wird vorzugsweise bei 10 bis - 10⁰C in einem Lösungsmittel (z. B. Tetrahydrofuran, Isopropanol) durchgeführt 2-ÄthylhexyIester von 2-Mercaptoessigsäure wird geeigneterweise als Thiolverbindung angewandt Wenn die Schutzgruppe Y¹ oder Y² 2,2^-Trichlor-äthyl darstellt, wird diese durch Reduktion der Verbindung (IV) oder (X) mit 90% Ameisensäure-Zinkpulver in herkömmlicher Weise entfernt Die Reaktion kann vorzugsweise bei einer Temperatur von 10 bis - 5° C durchgeführt werden.

Die Aüsgangsverbindungen (III) und (V) gemäß der Erfindung können leicht durch an sich bekannte Methodiken erhalten werden. Beispielsweise wird die

N-geschützte Aminosäure (111) durch Umsetzung einer Aminosäure der Formel

R-COCH₂-CH(NH₂)-COOH

worin R die vorstehend angeführte Bedeutung besitzt, mit einer Verbindung der Formel Z-X₁ worin Z und X die vorstehend angeführte Bedeutung besitzen, hergestellt. Die Reaktion kann mit Vorzug bei 0 bis 40°C in Gegenwart eines Säureakzeptors (z. B. Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Natriumhydroxid) in einem Lösungsmittel, wie Wasser, Tetrahydrofuran, Dioxan oder eines Gemisches hiervon durchgeführt werden. Darüber hinaus kann die D-2-Acylamidophenylessigsäure (V) durch Kondensation einer Phenylessigsäureverbindung der Formel

HO

CH-COOH

NH₂

(o-NitrophenylsulfenylaminoJ-S-N-methylcarbamoylpropionyloxy]-succinimid als Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 133 bis 135° C.

(3)450 mg(l,13 mmol)N-[DL-2-(o-Nitro-phenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyUpropionyloxy]-succi- nimid und 6,05 mg (1,3 mmol) 6-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäuretriäthylaminsalz werden in einem Gemisch von 10 ml Chloroform und 15 ml Dimethylformamid aufgelöst. Die Lösung wird bei 0 bis 5⁰C während 16 Stünden gerührt Nach der Reaktion wird die Lösung bei etwa 3O⁰C unter verringertem Druck zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft. Zu dem Rückstand wird Äther hinzugegeben, und die hierdurch erhaltenen Niederschläge IS werden durch Filtration gesammelt. Es werden 700 mg

6-[D-2-(DL-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methyl-carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure als gelber Karamel erhalten.

mit einem reaktiven Derivat(z. B.N-Hydroxysuccinimidester) der N-geschützten Aminosäure der Formel: R2'_OH, worin R²' die vorstehende Bedeutung besitzt, hergestellt werden. Diese Kondensationsreaktion wird bei 40 bis -30⁰C in einem Lösungsmittel (z.B. Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Methylenchlorid) durchgeführt.

Praktische und derzeit bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung werden durch die nachfolgenden Beispiele veranschaulicht. In der Beschreibung und den Ansprüchen bedeuten die Begriffe »Niedrigalkyl« und »Niedrigalkoxy« geradkettige oder verzweigte Alkyl- und Alkoxygruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen.

Beispiel 1

(1) Eine Lösung von 1,5 g (11,8 mmol) von DL-2-Ami-ιιο-3-N-methyIcarbanioyl-propionsäurehydrochlorid

(d.h. DL-N'-Methylasparagin ■ HCl) in 16ml Wasser wird mit Kaliumcarbonat neutralisiert, und 5 ml Tetrahydrofuran werden hier hinzugegeben. 2,5 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid werden zu der Lösung bei 5 bis 10⁰C hinzugefügt. Sodann wird das Gemisch bei der gleichen Temperatur während 2 Stunden gerührt. Während der Reaktion wird das Gemisch bei einem schwach alkalischen pH-Wert (pH 8) mit Kaliumcarbonat gehalten. Es werden 10 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch hinzugegeben und die unlöslichen Materialien abfiltriert. Sodann wird das Filtrat zweimal mit Äthylacetat gewaschen, mit Zitronensäure angesäuert und sodann dreimal mit 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatextrakte werden mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft 2,8 g DL-2-(o-NitrophenylsulfenyIamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionsäure werden erhalten. Schmelzpunkt 151 bis 152° C.

(2) 1,5 g (5 mmol) DL-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcairbamoyl-propionsäure werden in 30 ml Tetrahydrofuran aufgelöst 1,14 g (5,5 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid und 632 mg (5,5 mmol) N-Hydroxysuccinimid werden zu der Lösung bei 0 bis 5° C hinzugegeben, und das Gemisch wird bei der gleichen Temperatur während 16 Stunden gerührt Die unlöslichen Materialien werden abfiltriert Sodann wird das Filtrat bei 20⁰C unter verringertem Druck zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft, und die hierdurch erhaltenen kristallinen Ausfällungen werden mit Benzol-Äther gewaschen. Es werden 1,2 g N-[DL-2-ir.frarctsbscrptiop.sEpektrum:
V ^^Ol::3270,1775,1720,1645 cm·

(4) 710 mg (1,1 mmol) 6-[D-2-(DL-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)- 2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure und 450 mg (3,3 mmol) Thiobenzamid werden in einem Gemisch von 20 ml Äthanol und 5 ml Tetrahydrofuran aufgelöst. Die Lösung wird bei Raumtemperatur während 30 Minuten gerührt Die Reaktionslösung wird bei etwa 30⁰C unter verringertem Druck zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft Der hierdurch erhaltene Rückstand wird mit 20 ml Tetrahydrofuran gemischt, und die Niederschläge werden durch Filtration gesammelt Die erhaltenen Niederschläge werden in 10 ml wäßrigem Tetrahydrofuran aufgelöst Es

werden 30 ml Äthylacetat hinzugegeben, und sodann wird die wäßrige Schicht hiervon abgetrennt. Nach zweimaligem Waschen mit einem Gemisch aus Tetrahydrofuran und Äthylacetat wird die wäßrige Schicht gefriergetrocknet. Es werden 450 mg 6-[D-2-(DL-2-

Amino-3-N-methylcarbamoyI-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamid]-penicillansäure als farbloses Pulver erhalten. Schmelzpunkt 195 bis 198° C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

ν Ja":: 3280.1760.1650,1595 cm-¹.

Dünnschichtchromatografie:

RF = 0,43 (Silicagelplatte, Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4 :1 :1)).

„ Infrarotabsorptionsspektrum des Kaliumsalzes: N^:: 3300,1760,1650,1595 cm-'.

Beispiel 2

(1) 3 g (23,6 mmol) D^-Amino-S-N-methylcarbamoyl-propionsäurehydrochlorid (d.h. D-N'-Methylasparagin · HCl). 5 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid, 30 g Wasser, 10 ml Tetrahydrofuran und 12 g Kaliumcarbonat werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1-(1) beschrieben, behandelt 5 g D-2-(o-NitrophenyIsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionsäure werden erhalten. Schmelzpunkt 134 bis 136° Q

(2) 1,57 g (52 mmol) D-2-(o-NitrophenylsulfenyIamino)-3-N-methyIcarbamoyl-propionsäure, 13 g Dicyclohexylcarbodiimid, 788 mg N-Hydroxysuccinimid und 15 ml Tetrahydrofuran werden in gleicher Weise wie in Beispiel l-(2) besehrieben, behandelt Es werden 1,8 g N-jO^-io-NitrophenylsulfenylaminoJ-S-N-methylcarbamoyl-propionyloxyj-succinimid erhalten. Schmelz-

punktl26bisI28°C.

(3) 800 mg (2 mmol) N-[D-2· (o-Nitrophenyl-sulfenylamino)'3-N-methylcarbamoyl-propionyloxy]-succin-

imid und 932 mg (2 mmol) von 6-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäuretriäthylamin- salz werden in 15 ml Dimethylformamid aufgelöst. Die Lösung wird bei 0 bis 5°C während 16 Stunden gerührt. Nach der Reaktion wird die Lösung in gleicher Weise wie in Beispiel l-(3) beschrieben behandelt. Es werden 1,15 g 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido^-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure als gelbes Pulver erhalten. Schmelzpunkt 165 bis 167° C (Zersetzung).

(4) 1,10 g (1,7 mmol) 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenylsulfenylaminoJ-S-N-methylcarbamoyl-propionamidoj^-phydroxyphenylacetamido]-penicillansäure und 830 mg (6,0 mmol) Thiobenzamid werden in einem Gemisch von 15 ml Methanol und 5 ml Tetrahydrofuran aufgelöst. Di? Lösung wird bei Raumtemperatur während 45 Minuten gerührt Sndann wird die Reaktionslösung in gleicher Weise wie in Beispiel l-(4) beschrieben behandelt 2s werden 700 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamidoj-penicillansäure als farbloses Pulver erhalten. Schmelzpunkt 198 bis 200° C (Zersetzung)

Infrarotabsorptionsspektrum:
ν 2S":: 3280,1760,1660 cm-'.

Dünnschichtchromatografie:

RF = 0,43 (Kieselgelplatte Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4 :1 :1)).

Infrarotabsorptionsspektrum des Kaliumsalzes: ν £**:: 3300,1760,1660,1600 cm -'.

Beispiel 3

(1)4,5 g(36 mmol) L^-Amino-S-N-Methylcarbamoylpropionsäurehydrochlorid, (d. h. L-N'-Methyl-asparagin · HCl), 7,6 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid, 40 g Wasser, 20 ml Tetrahydrofuran und 18 g Kaliumcarbonat werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1-(1) beschrieben behandelt Es werden 7 g L-2-(o-Nitrophenylsu]fenylarnino)-3-N-methylcarbamoyl-propionsäure erhalten. Schmelzpunkt 132 bis 135° C.

(2) 3,2 g (11 mmol) L-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methyIcarbamoyl-propionsäure, 2,6 g Dicyclohexylcarbodiimid, 1,6 g N-Hydroxysuccinimid und 35 ml Tetrahydrofuran werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1 -(2) beschrieben behandelt 3,5 g N-[L-2-(o-NitrophenylsulfenylaminoJ-S-N-methylcarbamoyl-propionyloxy}-succinimid werden erhalten. Schmelzpunkt 127 bis 129" C

(3) 792 mg (2 mmol) N-[L-2-(o-NitrophenylsulfenylaminoJ-S-N-methylcarbamoyl-propionyloxyJ-succin-

imid und 932 mg (2 mmol) 6-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenylacetamidoPpenicillansäuretriäthylaminsalz werden in 15 ml Dimethylformamid aufgelöst Die Lösung wird bei 0 bis 5° C während 16 Stunden gerührt Nach der Reaktion wird die Lösung in gleicher Weise wie in Beispiel l-(3) beschrieben behandelt 1,05 g 6-[D-2-(L-2-(o-NitrophenyIsulfenylamino)-3-N-methyl-

carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure werden als Karamel erhalten.

Infrarotabsorptionsspektrum:

v£**: :3260,1775,1720,1635 cm-·.

(4) 1,00 g (1,55 mmol) 6-[D-2-(L-2-(o-NitrophenyIsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p- hydroxyphenylacetamido]-penicillansäur6 Und 740 mg (5,4 mmol) Thiobenzamid werden in einem Gemisch von 40 ml Methanol und 10 ml Tetrahydrofuran aufgelöst. Die Lösung wird bei Raumtemperatur während 40 40 Minuten gerührt Sodann wird die Reaktionslösung in gleicher Weise wie in Beispiel l-(4) beschrieben behandelt. Es werden 620 mg 6-[D-2-(L-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenyl- acetamido]-penicillansäure erhalten. Schmelzpunkt 197 bis 200⁰C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

V^:: 3250,1760,1650 cm-'.

Dünnschichtchromatografie:
RF = 0,43 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4 :1 :1)).

Beispiel 4

(1) 210 g (10 mmol) D^-Amino-S-N-isopropylcarbamoyl-propionsäure (d. h. D-N'-Isopropyl-asparagin), 22 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid, 20 ml V/asser, 20 ml Tetrahydrofuran, 2,0 g Kaliumcarbonat werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1-(1) beschrieben behandelt. Es werden 2,3 g D-2-(o-NitrophenylsuIfenylamino)-3-N-isopropylcarbamoyl-propionsäure erhalten. Schmelzpunkt 146 bis 147⁰C (Zersetzung).

(2) 981 mg (3 mmol) D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-isopropylcarbamoyl-propionsäure, 639 mg Di-

cyclohexylcarbodiimid, 356 mg H-Hydroxysuccinimid und 20 ml Tetrahydrofuran werden in gleicher Weise wie in Beispiel l-(2) beschrieben behandelt 1,13 g

N-[D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-isopropyI-carbamoyl-propionyloxyj-succinimid werden als Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 144 bis 145° C (Zersetzung).

(3) 699 mg (1,5 mmol) 6-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäuretriäthylaminsalz

werden in 10 ml Dimethylformamid bei 3 bis 5° C aufgelöst 636 mg (1,5 mmol) N-[D-2-(o-Nitrophenyl-

sulfenylamino^-N-isopropylcarbamoyl-propionyloxy]-succinimid werden zu der Lösung hinzugegeben und das Gemisch wird bei der gleichen Temperatur während 2 Stunden gerührt Nach der Reaktion wird das Gemisch in 50 ml Eiswasser gegossen. Sodann wird das wäßrige Gemisch zweimal mit 30 ml Äthylacetat gewaschen, mit Zitronensäure angesäuert und dreimal mit 30 ml Äthylacetat extrahiert Die kombinierten Extrakte werden dreimal mit 20 ml Wasser gewaschen, getrocknet und unter 25° C bei verringertem Druck zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft Es werden 950 mg 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-isopropylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxy- phenylacetamidoj-penicillansäure als Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 152 bis 154° C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

„Νφΐ. -3275,1780,1730,1640,1620 cm"¹.

(4) 920 mg (1,36 mmol) 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-isopropylcarbamoyI-propionami- do)-2-p-hydroxyphenyIacetamido]-penicilIansäure werden in einem Gemisch von 20 ml Äthanol und 5 ml Tetrahydrofuran aufgelöst 616 mg (4,5 mmol)Thiobenzamid werden zu der Lösung bei Raumtemperatur hinzugegeben, und die Lösung wird bei der gleichen Temperatur während einer Stunde gerührt Die Reaktionslösung wird bei unter 25° C unter verringer-

tem Druck zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft Zu dem Rückstand wird Äther hinzugegeben, und die kristallinen Niederschläge werden durch Filtration gesammelt Nach Waschen mit Tetrahydrofuran werden die Niederschläge in 50 ml Wasser aufgelöst Sodann wird die wäßrige Lösung zweimal mit Tetrahydrofuran-Äthylacetat (3:1) und sodann mit Äther gewaschen und gefriergetrocknet Zu dem gefriergetrockneten Pulver wird Ätheir hinzugegeben, und die kristallinen Niederschläge werden durch Filtration gewonnen. Es werden 620 mg 6-[D-2-(D-2-

Amino-S-N-isopropylcarbamoyl-propionamidoJ-i-phydroxyphenylacetamido]-penicillansäure als Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 198 bis 200°C erhalten (Zerset7ung).

Infrarotabsorptionsspektrum:
ν SS": :3250,1760,1650 cm-'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf=038 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4 :1 :1)).

Beispiel 5

(1) 25 g (llmmoi) D-2-Amino-3-N-n-butylcarbamoyl-propionsäurehydrochlorid (d. h. D-N'-n-Butylasparagin · HCl), 2,2 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid, 25 ml Wasser, 25 ml Tetrahydrofuran und 1,2 g Natriumhydroxid werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1-{1) beschrieben behandelt Es werden 2,6 g D-2-(o-Ni-

trophenylsulfenylaminoJ-S-N-n-butylcarbamoyl-propionsäure erhalten. Schmelzpunkt 143 bis 144° C (Zersetzung).

(2) 1,023 g (3 mmol) D-2-(o-NitrophenyIsulfenylamino)-3-N-n-butylcarbamoyl-propionsäure, 639 mg (3,1 mmol) Dicyclohexylcarbodümid, 356 mg (3,1 mmol) N-Hydroxysuccinimid und 20 ml Tetrahydrofuran werden in gleicher Weise wie in Beispiel l-(2) beschrieben behandelt 1,04 g (N-[D-2-(o-Nitrophenylsulfenylami-

noJ-S-N-n-butylcarbamoyl-propionyl-oxyJ-succinimid werden erhalten. Schmelzpunkt 135 bis 136°C (Zersetzung).

(3) 699 mg (15 mmol) 6-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-penicillansäuretriäthylaminsalz,

657 mg (1,5 mmol) N-[D-2-(o-NitrophenylsuIfenylami-

no)-3-N-n-butylcarbamoyI-propionyloxy]-succinimid und 10 ml Dimethylformaid werden in gleicher Weise w'e in Beispiel 4-(3) beschrieben behandelt. 1010 mg 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenylsulfenyIamino)-3-N-n-butylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydro>.yphenylacetamido]-penicillansäure werden als Karamel erhalten.

Infrarotabsorptionsspektrum:

vSS":3275,1770.1725.1640 cm-'.

(4) 980 mg (1.42 mmol) 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-n-butylcarbamoyl-propionamido)- 2-p-hydroxyphenylacetamido]-peniciIlansäure, 616 mg (45 mmol) Thiobenzamid und 15 ml Äthanol werden in gleicher Weise wie in Beispiel 4-(4) beschrieben behandelt. 570 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-n-butylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure werden als Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 188 bis 191⁰C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

0,1760,1650 cm-'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf = 0,45 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: n-Butanol-Essigsäure-Wasser(4 :1 :1)).

Beispiel 6

(1) 2,7g (llmmoi) D^-Amino-S-N-n-hexylcarbamoyl-propionsäurehydrochlorid (d. h. D-N'-Hexyl-

ϊ asparagin · HCl), 2,2 g o-Nitrophenylsulfenylchlorid, 30 ml Wasser, 25 ml Tetrahydrofuran und 1,2 g Natriumhydroxid werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1-(1) beschrieben behandelt Es werden 2,8 g D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-n-hexyl-η carbamoyl-propionsäure erhalten. Schmelzpunkt 115 bis 116° C (Zersetzung).

(2) 1,11g (3 mmol) D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-n-hexyIcarbamoyl-propionsäure, 639 mg (3,1 mmol) Dicyclohexylcarbodümid, 356 mg N-Hydro-

It xysuccinimid und 20 ml Tetrahydrofuran werden in gleicher Weise wie in Beispiel l-(2) beschrieben behandelt 1,23 g N-[D-2-(o-Nitrophenyl-sulfenylami-

noJ-S-N-n-hexylcarbamoyl-propionyloxyJ-succinimid werden erhalten. Schmelzpunkt 128 bis 129° C (Zersetzung).

(3) 699 mg (15 mmol) 6-[D-2-Amino-2-(p-hydroxyphenyi)-aceianiido]-penieilian5äureiriäihyläminsa!z,

699 mg (15 mmol) N-[D-2-(o-NitrophenyIsulfenyIami-

no)-3-N-n-hexylcarbamoyI-propionyIoxy]-succinimid -i und 10 ml Dimethylformamid werden in gleicher Weise wie in Beispiel 4-(3) beschrieben behandelt. Es werden 980 mg 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenylsuIfenyIamino)-3-N-n-hexylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphe- nylacetamidoj-penicillansäure als Karamel erhalten.

^J0 Infrarotabsorptionsspektrum:

ν £*": 3275,1770,1725,1635 cm - >.

(4) 714 mg (1 mmol) 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenyI-suifenylamino)-3-N-n-hexylcarbamoyl-propionamid)-

n 2-p-hydroxy-phenyIai:etamido]-penicillansäure, 472 mg

(35 mmol) Thiobenzamid und 10 ml Äthanol werden in gleicher Weise wie in Beispiel 4-(4) beschrieben behandelt. 390 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-n-hexyIcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetami- do]-penicillansäure werden als Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 186 bis 189° C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:
ν %**: 3250.1770.1655 cm -'.

■45 Dünnschichtchromatografie:

Rf = 053 (Kieselgelplatte. Lösungsmittel: n-ButanoI-Essigsäure-Wasser(4 : 1 :1)).

ίο B e i s ρ i e 1 7

(1) 3 g (23.6 mmol) D^-Amino-S-N-methyl-carbamoyl-propionsäurehydrochlorid (d. h. D-N'-Methylasparagin ■ HCI), 4,5 g Benzyloxycarbonylchlorid, 30 g

η Wasser. 30 ml Tetrahydrofuran und 12 g Kaliumcarbonat werden in gleicher Weise wie in Beispiel 1-(1) beschrieben behandelt. 5,1 g D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionsäure werden erhalten. Schmelzpunkt 142 bis 143°C.

f.0 (2) 2,8 g (10 mmol) D^-Benzyloxycarbonylamino-S-N-methylcarbamoyl-propionsäure. 2,27 g Dicyclohexylcarbodiimid, 1,27 g N-Hydroxysüccinimid und 120 ml Tetrahydrofuran werden in gleicher Weise wie in Beispiel l-(2) beschrieben behandelt Es werden 2,6 g

N-iD^Betlzyloxycarbonylamino^'N-methylcarbamoyl*propiony!oxy)-succinimid erhalten. Schmelzpunkt 132 bis 134°G
(3) 3,75 g N-(D-2-Benzyloxycarbonyiamino'3'N*me·

230 245/283

thylcarbamoyl-propionyloxyj-succinimid werden in 50 ml Tetrahydrofuran aufgelöst 12,5 ml einer wäßrigen 1-n Natriumhydroxidlösung, die 2,3 g p-Hydroxy-D-phenylglucin enthält, werden der Lösung hinzugefügt Das Gemisch wird bei Raumtemperatur während 24 Stunden gerührt 20 ml Äthylacetat und 20 ml Wasser wurden zu dem Reaktionsgemisch zugegeben und das genannte Gemisch geschüttelt Daraufhin wird die wäßrige Schicht davon abgetrennt, mit Zitronensäure auf pH 3 eingestellt und mit einem Gemisch aus 20 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft Der auf diese Weise erhaltene Rückstand wird mit Äther gewaschen. Es werden 3,0 g D-2-(D-2-Benzyloxycarbo-

nylamino-3-N-methyIcarbamoyI-propionamido)-2-phydroxyphenylessigsäure als farbloses kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt 154 bis 156° C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

ν «**: 3300,1790,1650,1640 cm - ·.

Γν··.«Μΐ<:Λ»Λΐ».ΛΜη>Λ»ι-ηΠα.

Lvuiiiiat*iiiviivwii wiiiwtwgi aii^.

Rf = 037 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: Äthylacetat-Äthanol-Essigsäure (10 :1 :1)).

(4) 429 mg D-2-(D-2-BenzyIoxycarbonyIamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenyI- essigsäure und 382 mg 6-Aminopenicillansäuretriäthylamin in 10 ml Dimethylformamid aufgelöst 303 mg Diphenylphosphorsäureazid [N₃PO(OC₆Hs)I] und 110 mg Triäthylamin werden zu der Lösung bei -5°C hinzugegeben und das Gemisch wird bei —5° C während 15 Stunden gerührt Nach der Reaktion wird das Gemisch auf pH 3 mit wäßriger 5%iger Zitronensäurelösung eingestellt und mit einem Gemisch von 15 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacelat extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und sodann unter 4O⁰C zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft Zu dem erhaltenen Rückstand wird Äther hinzugegeben, und die Niederschläge werden durch Filtration gesammeltEswerden 509 mg6-[D-2-(D-2-Ben.zyloxycarbonyl-

amino-3-N-methylcarbamoylpropionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-peniciHansäure als farbloses Pulver erhalten.

Infrarotabsorptionsspektrum:

ν £*": 3280,1770,1720.1640 cm-'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf = 0,663 (Kieselgelplatte. Lösungsmittel: Tetrahydrofuran-Methanol-Essigsäure (50 : 3 :3)).

(5) 627 mg 6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphe- nylücetamido]-penicillansäure und 400 mg 3O°/oiges Palladium-BaCO3 werden in 10 ml Methanol suspendiert Die Suspension wird bei Raumtemperatur während 30 Minuten geschüttelt. Diese Schüttelungsstufe wird in Wasserstoffgasatmosphäre unter Atmosphärendruck durchgeführt. Nach der Reaktion werden die Katalysatoren durch Filtration entfernt. Das Filtrat wird bei unter 40"C zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft, und zu dem Rückstand wird Äther zugegeben. Sodann wird das farblose, kristalline Pulver durch Filtration gesammelt und mit Tetrahydrofuran gewaschen. Es werden 443 mg 6-[D-2-(D-'2ⁱAmino-3-N-meihylcarbamoyl-propionamido^p-hydroxy-phenylacetamido^penicillansäure erhalten. Schmelzpunkt 198 bis 201°C(Zersetzüng).

Beispiel 8

(1) 3,96 g N-[D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionyloxy]-succinimid werden in

■5 20 ml Dimethylformamid aufgelöst Es werden 12,5 ml einer wäßrigen 1-n Natriumhydroxidlösung, die 2,3 g p-Hydroxy-D-phenylglycin enthält, zu einer Lösung hinzugegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur während 10 Stunden gerührt Es werden 10 ml in Äthylacetat zu dem Reaktionsgemisch hinzugegeben, und das Gemisch wird geschüttelt Sodann wird die wäßrige Schicht hiervon abgetrennt, auf pH 3 mit Zitronensäure eingestellt und mit einem Gemisch aus Tetrahydrofuran und Äthylaicetat behandelt Das Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft Der Rückstand wird Äther gewaschen.

Es werden 3,80 g D-2-(D-2-(o-NitrophenylsulfenyI-amino-S-N-methylcarbamoyl-propionamido^-p-hydroxyphenylessigsäure als gelbe Nadeln erhalten. Schmelzin punkt 111 bis 113° C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

ν £*·: 3370,3250,1705,1650,1625 cm -'.

Dünnschichtchromatografie:
' 25 Rf=0,36 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel:

Äthylacetat-Methanol-Essigsäure(10 :1 :1)).

(2) 897 mg D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxy-

in phenylessigsäure, 655 mg 6-Aminopenicillansäuresuccinimidomethylester und 230 mg N-Hydroxysuccinimid werden in 10 ml Dimethylformamid aufgelöst 412 mg Dicyclohexylcarbodiimid werden zu der Lösung bei -5⁰C unter Rührung hinzugegeben, und das Gemisch wird bei der gleichen Temperatur während 5 Stunden gerührt Zu dem Reaktionsgemisch werden 10 ml Wasser hinzugegeben, und das wäßrige Gemisch wird mit einem Gemisch von 20 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert Der Extrakt wird mit 5%iger wäßriger Zitronensäurelösung, einer wäßrigen Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser jeweils sukkzessive gewaschen. Der Extrakt wird sodann getrocknet und bei unter 4O⁰C unter Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Zu dem Rückstand

v, wird Äther hinzugegeben, und die Niederschläge werden durch Filtration gesammelt. Es werden 1200 mg 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenyl-suIfenylamino)-3-N-me-

thylcarbamoylpropionamid)-2-p-hydroxyphenylacetamidoj-penicillansäuresuccinimidomethylester als gelbes kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt 143 bis 144°C (Zersetzung).

Inirarotabsorptionsspektrum:

v^':3290.1780.1760.1730,1715,1650 cm-'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf = 0.17 (Kieselgelplatte. Lösungsmittel:
Äthylacetat-Tetrahydrofuran(2 :1)).

(3) 755 mg 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamibn no)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxy-

phenylacetamidoj-penicillansäuresuccinimidomethylester Werden Jn 5 ml Dimethylformamid aufgelöst. 25Ö mg 2-Äthylhexyl'2^mercaptoacetatnatriumsalz werden zu der Lösung hinzugegeben, Und das Gemisch f>5 wird bei 0 bis 5°C während 40 Minuten stehengelassen. Es Werden 10 ml Wasser und 10 ml Äthylacetat zu dem Reaktionsgemisch hinzugegeben, und das Gemisch wird geschüttelt Sodann wird die wäßrige Schicht hiervon

abgetrennt, auf pH 3 mit wäßriger 5%iger Zitronensäurelösung eingestellt und mit einem Gemisch von 20 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat extrahiert Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und sodann bei unter 40° C zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Es werden 590 mg 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenyIsuIfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-pro- pionamido^-p-hydroxyphenylacetamidol-penicülansäure als gelbes kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt 165 bis 167° C (Zersetzung).

In f raro tabsorptionsspektrum:

': 3400,3250,1780,1730,1640 cm -'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf=0.59 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel:

Tetrahydrofuran-Methanol-Essigsäure (5:0.3:0,3)).

(4) 1,1 g 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenyIsulfenylamino)-3-N-methyIcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxy- phenylacetamido jpenicillansäure und 830 mg Thiobenzarnid werden in gleicher Weise wie in Beispie! l-(4) beschrieben behandelt 700 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido^-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure werden als farbloses Pulver erhalten. Schmelzpunkt 198 bis 201⁰C (Zersetzung).

Beispiel 9

(1) 897 mg D-2-(D-2-(o-NitrophenyIsuIfenylamino)-3-N-Methylcarbamoyl-propionariiido)-2-p-hydroxy-

phenylessigsäure und 202 mg N-Methylmorpholin werden in 10 ml Dimethylformamid aufgelöst. Eine Lösung von 217 mg Äthylchlorcarbonat in 2 ml Tetrahydrofuran wird zu der Lösung bei —25 bis —20° C unter Rühren hinzugegeben, tine Minute später wird eine Lösung von 764 mg 6-Aminop^nicillansäure-triäthylaminsalz in 4 ml Wasser zu dem Gemisch bei -10 bis -8° C hinzugegeben, und sodann wird das Gemisch 40 Min. lang bei -10 bis -5°C gerührt sowie daraufhin 30 Min. lang bei -5 bis 0⁰C. Nach der Reaktion wird das Gemisch mit einer wäßrigen, 5%igen Zitronensäurelösung auf pH 3 eingestellt und mit einem Gemisch aus 10 ml Tetrahydrofuran und 5 ml Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, getrocknet und dann unterhalb 40⁰C zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft Zu dem erhaltenen Rückstand wird Äther zugegeben; der kristalline Niederschlag wird durch Filtration gesammelt. 133 g 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methyl-carbamoyl-propionamido)-2-p-hy- droxy-phenylacetamidol-penicillansäure werden als gel be Nadeln erhalten. Schmelzpunkt 165 bis 167 C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

JJ*": 3400,3250,1780,1730,1640 cm -'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf = 0,59 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: Tetrahydrofuran-Methanol-Essigsäure (5 : 0.3 : 0.3)).

(2) 646 mg 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenylsuIfeny1' aminoJ'S-N'methylcarbarnoyi^propionämidoj-^p'hy-

dröxyphenylacetamtdo]-penicillansäure und 274 mg Thiobenzamid werden in einem Gemisch Von 8 ml Methanol und 2 ml Tetrahydrofuran aufgelöst Die Lösung wird bei Raumtemperatur Während 40 Min/ gerührt. Die Reaktionslösüng wird zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft Zu dem Rückstand werden 5 ml Tetrahydrofuran hinzugegeben, und die blaßgelben, kristallinen Niederschläge werden durch Filtration gesammelt Nach zweimaligem Waschen mit Tetrahy-ί drofuran werden die Niederschläge in 10 ml Wasser aufgelöst und die unlöslichen Materialien durch Filtration entfernt Das Filtrat wird zweimal mit 4 ml Tetrahydrofuran-Äthylacetat (2:1) gewaschen und gefriergetrocknet 437 mg 6-[D-2-(D-2-Ar\)ino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido^-p-hydroxypenyl- acetamido]-penicillansäure werden als farbloses kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt 189 bis 201⁰C (Zersetzung).

Beispiel 10 ι ϊ

Π) 13 g D-2-(D-2-BenzyloxycarbonyIamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäure und 1,01 g 6-Aminopenicillansäurebenzylester werden in 20 ml Dimethylformamid aufgelöst

in 575 mg N-Hydroxysuccinimid und 680 mg Dicyclohexylcarbodiimid werden zu der Lösung bei —15° C hinzugegeben, und das Gemisch wird bei 0⁰C während 20 Stunden gerührt Sodann wird das Reaktionsgemisch in gleicher Weise wie in Beispiel 8-(2) beschrieben, behandelt Es werden 1,80 g 6-[D-2-(D-2-BenzyloxycarbonyIamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p- hydroxyphenylacetamido]-penicillansäurebenzylester als farblose Nadeln erhalten. Schmelzpunkt 107 bis 110⁰C (Zersetzung).

in (2) 1,44 g 6-[D-2-(D-2-BenzyloxycarbonyIamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenyl- acetamidoj-penicillansäurebenzylester, 1,5 g 30%iges PalIadium-BaCO₃ und 30 ml 95°/oiges wäßriges Methanol werden in gleicher Weise behandelt, wie dies in Beispiel 7-(5) beschrieben worden ist Es werden 620 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methyIcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure als farbloses kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt ¹98 bis201°C(Zersetzung).

Beispiel 11

(1) 2,14 g D-2-(D-2-BenzyloxycavDonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäure und 610 mg Dimethylanilin werden in 20 ml Dimethylformamid aufgelöst und es wird eine Lösung von 690 mg Isobutylchlorcarbonat in 10 ml Chloroform hierzu bei -40⁰C unter Rührung hinzugegeben. 10 ml einer Lösung von D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphe- nylessigsäureisobutyloxycarbonylester werden erhalten. Andererseits werden 2.12 g 6-(-2-Phenylacetamido)-penicillansäurebenzylester (d. h. Penicillin G Benzylester) und 5,0 ml Dimethylanilin in 1.2-DichIoräthan aufgelöst, und es werden 1,15 g Phosphorpentachlorid hierzu bei -25°C hinzugegeben. Die Penicillansäureester-Lösung wird bei -30 bis -20⁰C während 1,5 Stunden gerührt, sodann werden 20 ml Äthanol tropfenweise bei der gleichen Temperatur hinzugegeben, wonach während weiteren 2 Stunden gerührt wird. 10 ml der Lösung von D-2-(D-2-BenzyloxycarbonyIamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäureisobutylöxycarbonylester werden tropfenweise zu der Penicillansäureester-Lösung bei -30 bis -20⁰C während 10 Minuten hinzugegeben, und sodann wird das

f>5 Gemisch bei der gleichen Temperatur während 3,5 Stunden und bei Raumtemperatur während 6 Stunden gerührt Nach der Reaktion wird das Gemisch bei unter 3O⁰C Unter verringertem Druck konzentriert Es werden

20 ml Wasser und 25 ml Tetrahydrofuran zu dem Rückstand hinzugegeben, und das wäßrige Gemisch wird geschüttelt Die organische Lösungsmittelschicht wird von dem wäßrigen Gemisch abgetrennt Die organische Lösungsmittelschicht wird mit 10 ml wäßriger 5°/oiger Zitronensäurelösung, 10 ml wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung und 10 ml wäßriger gesättigter Natriumchloridlösung sukzessive gewaschen. Sodann wird die organische Lösungsmittelschicht getrocknet und unter 40° C unter Entfernung des Lösungsmittels eingedampft Zu dem erhaltenen Rückstand wird Äther hinzugegeben, und die kristallinen Niederschläge werden durch Filtration gesammelt Es werden 2,96 g 6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphe- nylacetamidoj-penicillansäurebenzylester als farblose Nadeln erhalten. Schmeizpunkt 107 bis HO⁰C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

Ν«».: 3270,1780,1735,1690,1635 cm -'.

IDlZ

Dünnschichtchromatografie:

RF = 0,38 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel:
Äthylacetat).

2IP

(2) 1,44 g 6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methyIcarbamoyI-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamidoj-penicillansäurebenzylester werden in 30 ml 95%igem wäßrigen Methanol aufgelöst. Es werden 1,5 g 30%iges Palladium-BaCO3 zu der Lösung hinzugege- j» ben, und das Gemisch wird bei Raumtemperatur während einer Stunde geschüttelt. Die Schüttelungsstufe wird in Wasserstoffgasatmosphäre unter Atmosp^ärendruck durchgeführt. Nach der Reaktion werden die Katalysatoren durch Filtration entfernt Das Filtrat wird r. bei unter 4O⁰C unter Entfernung des Lösungsmittels eingedampft Zu dem erhaltenen Rückstand werden 5 ml Wasser hinzugegeben, und die unlöslichen Materialien werden durch Filtration entfernt Sodann wird die wäßrige Schicht des Filtrates gefriergetrocknet Es ·»» werden 620 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]- penicillansäure als farbloses, kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt 198 bis 201⁰C (Zersetzung).

Beispiel 12 ^4>

(1) ?.24g D-2-(D-2-(o-Nitroi.henylsulfenylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäure und 505 mg N-Methylmorpholin werden in 10 ml Chloroform aufgelöst, und eine Lösung von 5» 543 mg Äthylchlorcarbonat in 10 ml Chloroform wird hier bei -20°C unter Rührung hinzugegeben. 20 ml einer Chloroformlösunj von D-2-(D-2-(o-NitrophenylsulfenyIamino)-3-N-methyIcarbamoyl-propionamido)- 2-p-hydroxyphenylessigsäureäthoxycarbonylester wer- 5"-den erhalten. Andererseits werden 2,47 g 6-(2-Phenylacetamido)-penicillinsäurephthalimidomethylester (d. h. PenicillinG-Phthalimidomethylester)und4,5 N-Methylmorpholin in 30 ml Chloroform aufgelöst, und es werden 1.15g Phosphorpentachlorid hierzu bei —25°C e>" hinzugegeben. Die Penicillinesterlösung wird bei -30 bis -2O⁰C während 1,5 Stünden gerührt, bei der gleichen Temperatur Werden 20 ml Äthanol hinzugegeben, und es wird während 2 Stunden weiter gerührt. 10 ml der Chloroformlösung von D-2-(D-2-(o-Nitrophe- tu nylsUlfenylaminOj-S-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydröxyphenylessigsäureäthöxycarbonylester Werden tropfenweis? zu der Penicillansäureester-Lösung bei -30 bis -25⁰C während 10 Minuten hinzugegeben, und sodann wird das Gemisch bei -30 bis -25°C während 3,5 Stunden und bei Raumtemperatur während 5 Stunden gerührt Nach der Reaktion wird das Gemisch in gleicher Weise wie in Beispiel 1l-(l) beschrieben behandelt Es werden 3,07 g 6-[D-2-(D-2(o-NitrophenylsulfenylaminoJ-S-N-methylcarbamoyl-propionamido^-p-hydroxyphenylacetamidoj-penicillan· säurephthalimidomethylester als gelbes Pulver erhalten. Schmelzpunkt 105 bis 107° C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

ν S?: 3250,1780,1725,1640 cm -».

Dünnschichtchromatografie:

Rf=0,72 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: Äthylacetat-Tetrahydrofurna-Essigsäure (10:10:1)).

(2) 1,63 g 6-[D-2-(D-2-(o-NitrophenylsulfenyIamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphe- nylacetamidoj-penicillansäurephthalimidomethylester werden in 10 ml Dimethylformamid aufgelöst 500 mg n-Octyl-2-mercaptoacetatnatriumsaL werden zu der Lösung hinzugegeben, und das Gemisch wird bei 0 bis 5° C während 40 Minuten gerührt Sodann werden 20 ml Wasser und 10 ml Äthylacetat dem Reaktionsgemisch hinzugegeben, und das Gemisch wird geschüttelt. Sodann wird die wäßrige Schicht hiervon abgetrennt mit einer wäßrigen 5%igen Zitronensäurelösung angesäuert und mit 30 ml Tetrahydrof'.iran-Äthylacetat (2:1) extrahiert Der Extrakt wird mit 5 ml einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und sodann bei unter 40⁰C zur Entfernung des Lösungsmittels verdampft Zu dem erhaltenen Rückstand wird Äther hinzugegeben, und die kristallinen Niederschläge werden durch Filtration gesammelt Es werden 1,05 g 6-[D-2-(D-2-(o-Nitro-phenyIsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure als gelbe Nadeln erhalten. Schmelzpunkt 165 bis 167° C (Zersetzung).

(3) 646 mg 6-[D-2-(D-2-(o-Nitrophenylsulfenylamino)-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydro- phenylacetamidoj-penicillansäureund280 mgThiobenzamid werden in 10 ml Methanol-Tetrahydrofuran (4:1) aufgelöst. Die Lösung wird bei Rat mtemperatur während 40 Minuten gerührt. Die Reiktionslösung wird bei unter 40°C unter Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Es werden 5 ml Tetrahydrofuran zu dem Rückstand hinzugegeben, und der blaß-geibe Niederschlag wird durch Filtration gesammelt. Die Niederschläge werden mit Tetrahydrofuran gewaschen. Sodann werden 10 ml Wasser zu den Niederschlägen hinzugegeben und die unlöslichen Materialien durch Filtration entfernt. Die wäßrige Schicht des Filtrates wird zweimal mit 4 ml Tetrahydrofuran-Äthylacetat (2 :1) gewaschen und gefriergetrocknet 410 mg 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-phydroxyphenylacetamidoj-penicillansäure werden als blaß-gelbes, kristallines Pulver erhalten. Schmelzpunkt 198 bis 201⁰C (Zersetzung).

Beispiel IJ

(1)2,15 g D-2-(D-2'Benzyloxycarbünylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionarnido^-p-hydroxyphenylessigsäure und 610 mg Dimethylanilin werden in 20 ml 1,2-Dichloräthan aufgelöst, und es wird eine Lösung von 690 mg Isobutylchlorcarbonat in 10 ml 1,2-Dichloräthan bei —25° C unter Rührung hierzu hinzugegeben. Es

werden 30 ml einer Lösung von D-2'(D-2-Benzyloxycafbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäureisobutyloxycarbonylester erhalten. Andererseits werden 2,47 g 6-(2-PhenyIacetamidoj-penicillansäurephthalimidomethylester (d. h. Penicillin G-Phthalimidomethylestef) urtd 2,06 ml Dimethylaniün in 30 ml 1,2-Dichloräthan aufgelöst, und hierzu werden 1,15 g Phosphorpentachlorid bei -25⁰C hinzugegeben. Die Penicillansäureesterlösung wird bei —30 bis -2O⁰C während 1,5 Stunden gerührt, sodann wenden 20 ml Äthanol tropfenweise bei der gleichen Temperatur hinzugegeben, und es wird während weiteren 2 Stunden gerührt. 3,41 g Dimethylanilin werden zu der Penicillansäureesterlösung hinzugegeben. Sodann werden 30 ml der Lösung von D-2-(D-2· Benzyloxycarbonyl-amino-S-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylessigsäureisobutyloxycarbonylester tropfenweise zu der Penicillanesterlösung bei -30 bis -20°C während 10 Minuten hinzugegeben, und das Gemisch wird bei der gleichen Temperatur während 3.5 Stunden gehalten. Nach der Reaktion wird das Gemisch bei unter 30°C unter verringertem Druck konzentriert. 20 ml Wasser. 25 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Äthylacetat werden zu dem Rückstand hinzugegeben. Die organische Lösungsmittelschicht wird von dem Gemisch abgetrennt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und sodann bei unter 40⁰C unter Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Zu dem erhaltenen Rückstand wird Äther hinzugegeben, und die kristalline Ausfällung wird durch Filtration gesammelt. Es werden 3,3 g 6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacet- amido]-penicillansäurephthalimidomethylester als farblose Kristalle erhalten. Schmelzpunkt 120 bis 122°C (Zersetzung).

Infrarotabsorptionsspektrum:

ν £*": 3280.1780,1730,1640 cm -'.

Dünnschichtchromatografie:

Rf=0,41 (Kieselgelplatte, Lösungsmittel: Äthylacetat-Tetrahydrofuran (2 :1)).

(2) 1.76 g 6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methylcarbamoyI-propionamido)-2-p-hydroxyphe- nylacetamido]-penicillansäurephthalimidomethylester werden in 10 ml Dimethylformamid aufgelöst. 500 mg n-OctyI-2-mercaptoacetatnatriumsaIz werden zu der Lösung hinzugegeben, und das Gemisch wird bei 0 bis 5°C während 40 Minuten gerührt. Sodann wird das Reaktionsgemisch in gleicher Weise, wie dies in Beispiel 27-(2) beschrieben worden ist. behandelt Es werden

Tabelle I
In-vitro-Aktivität

1,02 g 6-[D'2-(D-2-BenzyloxycarbonyIamino-3-N-methylcarbamoyl-propionamido)-2-p-hydföxyphenylacetamido]-penicillansäure als farbloser Karamel erhalten.

(3)6-[D-2-(D-2-Benzyloxycarbonylamino-3-N-methyI-carbamoyl-propionamido)-2-p-hydroxyphenylacet- amido]-penicillansäure wird in gleicher Weise, wie dies in Beispiel Il-(2) beschrieben worden ist, behandelt, wodurch 6-[D-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-

propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetamido]-penicillansäure erhalten wird. Schmelzpunkt 198 bis 201⁰C (Zersetzung).

15

zu Versuchsbericht In-vitro-Aktivität

Die minimale Inhibierungskonzentration (MIC: μ/ml) der Verbindungen wurde durch Standrad-Zweifach-Serienverdünnungen unter Verwendung vun Agar (gemäß der Standardmethode The Japan Society of Chemotherapy) durchgeführt. Das bei diesem Versuch verwendete Medium war Herzinfusionsagar.

25 In-vivo-Aktivität

Fünf oder zehn männliche Mäuse vom ddY-Stamm mit einem Oewicht von 18 bis 20 g wurden für jedes Dosierungsniveau verwendet. Den Mäusen wurden intraperitoneal eine solche Menge Bakterien verabreicht, daß alle nichtbehandelten Mäuse innerhalb 24 Stunden starben. Alle Bakterien wurden in einer 5%igen Mucinlösung suspendiert verabreicht Die zu prüfenden Verbindungen wurden etwa 1 Stunde nach der Infektion intramuskulär verabreicht. Der Überlebensgrad wurde 7 Tage nach der Inhibierung bestimmt. Daraus wurde dann die Bestimmung der effektiven Dosis mg/kg) errechnet.

40 Akute Toxizität

Männliche Mäuse vom ddY-Stamm mit einem Gewicht von 18 bis 20 g wurden mit abgestuften Dosierungen der Verbindungen in Lösungen durch die Schwanzvene injiziert Jede der Verbindungen war in destilliertem Wasser gelöst Die akute letale Toxizität (LD50: g/kg) wurde jeweils bestimmt Die Ergebnisse werden in den folgenden Tabellen gezeigt:

Geprüfte Verbindung

Minimale Inhibierangskonzentratk» (pg/ml)

Escherichia Hebsiella Proteus Pseudotnonas

coü pneuiEoniae mirabilis aeruginosa

(Erfindungsgemäße Verbindung)

6-TD-2-(D-2-Amino-3-N-methylcarbamoyl-propioaamido)-2-p-hydroxvphenylacetamido]-penicillansäure 3,13

(Bekannte Verbindungen)

α «»i^n;*^

i-LpOIVlllllJ

Mezlocillin
Azlocillin

100

£0,2

3,13

3,13	6,25	0,2	1
0,78	25	0,39	3
6,25	0J9	25

25

libelle Π In-vivo-Aktivität

26

Geprüfte Verbindung Anümikrobischc Aktivität (ED₅₀, mg/kg) Esche- Kleb· richia Stella coü pneu-

moniae

Aktute Therapeutischer Index

Tbxizitlt

Pseudo- ^LD50 monas ("¹^ aerüginosa

(C) (D) D/A D/B

Erfindungsgemäße Verbindung 6-P-2-(I>2-Amino-3ⁱN-methyl-carbomoyl· propionamido)-2-p-hydroxyphenylacetaminoi-penjcüiansäure

Bekannte Verbindungen Apakülin Mszlccülin Azlocillin

175,0 > 10000 > 18182 >1186 >57

3,8	65,0	50	1010	266	16	20
a 1 "1*	428 0	6950	65QQ	8Q2	!5	9

Claims

Patentansprüche:

I — CONH—i /"N^CH₃

COOY¹

worin Y¹ Wasserstoff oder eine Schutzgruppe bedeutet, mit einer N-geschützten Aminosäure der allgemeinen Formel

R2' —OH (III)

worin R²'eine Gruppe der allgemeinen Formel
— Co-CH(NHZ)-CH₂COR

bedeutet und Z eine Schutzgruppe darstellt und R Niedrigalkylamino ist, oder einem reaktiven Derivat davon kondensiert und die Schutzgruppe oder -gruppen entfernt^ oder (B) eine Verbindung der allgemeinen Formel

HO—<ζ Λ— CH- COOH (V)

•v.

worin R²' die vorstehende Bedeutung hat, oder eines reaktiven Derivates hiervon, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel

CH,
CH₃

N k . (VD

COOY¹

worin Y¹ die vorstehende Bedeutung besitzt, kondensiert und die Schutzgruppe oder -gruppen entfernt, oder (C) ein an der Carboxylgruppe geschütztes natürliches Pencillin der allgemeinen Formel

J₂CONH O=J-—Ν

Α—E=CH₂

(VID COOY²

worin A Alkyl, Alkenyl, Phenyl öder substituiertes Phenyl darstellt, E eine Einfachbindung, ein Schwefel· oder Sauerstoffatom bedeutet und Y² eine Schutzgruppe darstellt, mit einer Phosphorhaiogenidverbin·· dung umsetzt, I

die erhaltene Iminohalogenidverbindung mit einem Niedrigalkanol umsetzt, gegebenenfalls die erhaltene Iminoätherverbindung mit Wasser behandelt, die

HO—<t\— CH—COOH

R2'

worin R²' die vorstehende Bedeutung besitzt, umsetzt und die Schutzgruppe oder -gruppen entfernt und gegebenenfalls das nach (A), (B) oder (C) erhaltene Produkt in ein pharmakologisch annehmbares Salz überführt

erhaltene Imidatverbindung oder die Iminoätherverbindung mit einem Niedrigalkoxycarbonylester einer Verbindung der allgemeinen Formel