DE1670625C3

DE1670625C3 - y-alpha-Aminobenzyl-S-methylcephalosporinanaloge und ihre Herstellung

Info

Publication number: DE1670625C3
Application number: DE1670625A
Authority: DE
Inventors: Billy Grinnell Jackson; Robert Bennett Morin
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1966-09-14
Filing date: 1967-03-28
Publication date: 1975-05-28
Also published as: ES338498A1; JPS4921155B1; DK123104B; DE1670625A1; SE359841B; CH501011A; NL141515B; DE1670625B2; NO133804C; BE696026A; NL6704294A; FR6294M; US3507861A; NO133804B

Description

NH,

R'—NH-CH- CH CH,

O==C·

C—CH,-O—C—CH,

COOH

(U)

worin R' ein Wasserstoffatom oder die Gruppe der allgemeinen Formel R — CHNH₂-CiO, worin R wie im Anspruch 1 definiert ist, bedeutet, in an sich bekannter Weise in Gegenwart eines Edelmetallhydrierungskatalysators einer Hydrogenolyse unterwirft und wenn R' ein Wassersloffatom bedeutet, die so erhaltene 7-Amino-3-methy< /l³-cephem-4-carbonsäure in an sich bekannter Weise mit einem die Gruppe der allgemeiner! Formel R -CHNH₂-C: O— enthaltenden Acylierungsmittel acylierl, oder ein Penicillinsulfoxid der allgemeinen Formel

45

50 Gegenstand der Erfindung sind neue, amibiolisch wirksame Verbindungen der allgemeinen Fc -öl

O = C N C-CH, ίο

COOH

worin R eine Phenylgruppe, eine 3-Chlorphenylgruppe, eine 3-Hydroxyphenylgruppe oder eine 3-Alkoxyphenylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylgruppe bedeutet, und deren Salze

2. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der in Anspruch 1 angegebenen allgemeinen Formel, dadurch gekennzeichnet, daß man entweder eine Verbindung der allgemeinen Formel

/ \
R — CH- CO-NH-CH- CH ChU

I III'

NH, O = C N C CH,

COOH

30-

35

40 worin R eine Phenylgruppe, eine 3-Chlorphenylgruppe, 3-Hydroxyphenyl- oder 3-Alkoxyphcnylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylgruppe bedeutet, und deren Salze.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man entweder eine Verbindung der allgemeinen Formel

/ \
R' —NH-/"Η —CH CH,

0=-C N C-CH, O C CH,

COOH

(II)

CH-C -NH- CH-CH C

CH

worin R' ein Wasserstoffatom oder die Gruppe der allgemeinen Formel R — CHNH₂—C : O, worin R wie im Anspruch 1 definiert ist, bedeutet, in an sich bekannter Weise in Gegenwart eines Edelmctallhydrierungskatalysators einer Hydrogenolyse unterwirft und wenn R' ein Wasserstoffatom bedeutet, die so erhaltene 7-Amino-3-methyl-.l³-cephem-4-carbonsäure in an sich bekannter Weise mit einem die Gruppe der allgemeinen Formel R-CHNH₂-C: O
enthaltenden Acylierungsmiltel acyliert, oder ein Penicillinsulfoxid der allgemeinen Formel

NH, O

= C N CH

CH,

COOII

55

60

worin R die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat und die NH₂-Gruppe und die Carboxylgruppe in 3-Slellung in an sich bekannter Weise geschützt sind, in an sich bekannter Weise unter sauren Bedingungen erwärmt und anschließend die Schutzgruppe!! entfern! und

NH, O

C^-H

NH CH (Il

OC

I CH,
CH

COOII

worin R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung

I 670

hat und die NH₂-Gruppe und die Carboxylgruppe in 3-Stellung in an sich bekannter Weise geschützt sind, in an sich bekannter Weise unter sauren Bedingungen erwärmt und anschließend die Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls das erhaltene Produkt mit einer Base oder einem basischen Salz oder mit einer Säure in ein Salz überführt.

Wie ersichtlich, kann das Produkt in Form des inneren Salzes oder als ein Salz einer pharmazeutisch annehmbaren Säure oder als ein Salz mit einem phartnazeutisch annehmbaren Kation vorliegen. Zu geeigneten Kationen gehören Natrium, Kalium, Ammonium und substituiertes Ammonium, z. B. Procain und Trimethylamraonium. Zu geeigneten Säuren gehören Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure. Schwefelsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Zitronensäure, Trichloressigsäure und Thiocyansäure. Wie weiter ersichtlich, kann das Produkt in optisch aktiven Formen vorliegen, und solche Formen gehören genauso wie racemische oder andere Gemische daraus zum Gegenstand der Erfindung.

Die ersten Antibiotica, die entdeckt wurden, waren die Penicilline, die das Penamgerüst, einen Thiazolidinring mit einem ankondensierten //-Lactam, enthalten. In neuerer Zeit wurden die Cephalosporine gefunden, die das /1³-Cephemgerüst, einen Dihydrothiazinring mit ankondensiertem /Ϊ-Lactam, enthalten.

Diese beiden Gruppen von Anlibiotica zeigen eine gewisse Verwandtschaft ihrer Strukturen, wie aus den folgenden allgemeinen Formeln zu ersehen ist:

S C¹H,

Q — CO - NH CH — CH C 3s

CH.,

O = C- N CH

COOM
Penicilline

40

Q-CO-NH CHCH CH₂

O -C N CCH, O Ac

COOM
Cephalosporine

55

In diesen Formeln bedeutet Q einen beliebigen organischen Rest, für den es hunderte von bekannten Beispielen gibt, und M ein pharmazeutisch annehmbares Kation. Die Pcnam-Nomenklatur Für Penicilline ist von Sh cch an, H enery- Logan und .1 ο h η s ο η in J. Am. Chem. Soc. 75, 3293, Fußnote 2 (1953), beschrieben und von Mori η, Jackson, Flynn und Roeskc in J. Am. Chem. Soc, 84. 3400 (1962), an die Cephalosporine angepaßt worden. Nach diesen Nomenklatursystemcn beziehen sich Penam und Cepham auf die folgenden gesättigten Ringstrukturen.

1
S

CH,

O = C-

5/
CH

N-

Penam

CH₂
CH₂

1
S

7 ₆/ X₂

CH₂-CH CH₂

O = C-

-N

5\

CH₂

Cephdtn

Cephem bezieht sich auf das Cephamgerüst, das eine Doppelbindung enthält, deren Stellung durch ein vorgestelltes »1« mit einer hochgestellten Zahl bezeichnet wird, die das Kohlenstoffatom mit der niedrigsten Nummer angibt, von dem die Doppelbindung ausgeht.

Die den erfindungsgemäßen Verbindungen am nächsten stehende Verbindung des Standes der Technik ist die in der britischen Patentschrift 985 747 beschriebene 7-(a-Aminophenylacetamido)-cephalosporansäure, die unter der Bezeichnung Cephaloglycin bekanntgeworden ist. Cephaloglycin zeigt nicht nur eine beachtliche antibiotische Aktivität, sondern hat gegenüber anderen bekannten Cephalosporinantibiotica, wie Cephalolin und Cephaloridin, den Vorteil, daß es nicht injiziert zu werden braucht, da es nach oraler Verabreichung resorbiert wird. Andererseits hat es den Nachteil, daß es im Organismus einen teilweisen Abbau zu Desacetylcephaloglycin erleidet und nicht unverändert mit dem Urin ausgeschieden wird. Es besteht daher weiterhin ein Bedarl an anderen und verbesserten Antibiotika.

Bei einer Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens zur Herstellung der oben definierten Verbindungen wird die entsprechende 7-(«-Amino-u-phenylacetamidoj-cephalosporansäure-Verbindung (mil einer Acetoxymethylgruppe in 3-Stellung)einer Hydrogenolyse unterworfen, indem man sie zweckmäßigerweise bei erhöhten Drücken in Gegenwart eines selektiv wirkenden Platin- oder anderen Edelmetallhydrierungskatalysators mit Wasserstoff in Berührung bringt. Für diesen Zweck ist ein Palladium auf Barium sulfat enthaltender Katalysator bevorzugt. Der Aus gangsstoff wird in Wasser, Äthanol, Dimethylformamid. Äthylenglykolmonomethyläther oder einerr anderen inerten organischen Lösungsmittel oder einen wäßrigen Gemisch davon gelöst,und nach Zugabe de: Katalysators wird Wasserstoff bei gewöhnlichen ode erhöhten Drücken, vorzugsweise 0,7 atü oder darüber bei gewöhnlichen oder erhöhten Temperaturen (ζ. Β etwa 20 bis IOO C) in das Gemisch geleitet, bis dii Wasserstoffabsorption aufhört. Die Hydrierungsdaue ändert sich selbstverständlich im umgekehrten Ver hällnis mit Temperatur und Druck. Diese Behandlunj bewirkt die Hydrogenolyse der Aceloxygruppe unte

Hydrierung der Methylengruppe und Bildung einer Methylgruppe in 3-Stellung und damit die Bildung der gewünschten Substanz, die in einfacher Weise aus der Lösung gewonnen werden kann. Im allgemeinen werden die besten Ergebnisse unter schwachbasischen Bedingungen (pH 7,5 bis 9) unter Verwendung eines Überschusses an Katalysator erhalten. In sauren Lösungen neigt die ^-Doppelbindung zur Anlagerung von Wasserstoff, wohingegen in schwach alkalischen Lösungen die Wasserstoffaufnahme aufhört, wenn die Hydrogenolyse beendet ist, mit dem Ergebnis, daß die Doppelbindung erhalten bleibt.

Bei einer anderen Ausfuhrungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens zur Herstellung der oben definierten Verbindungen wird das sogenannte Cephalosporingeriist, 7-Aminocephalosporansäure, der Hydrogenolyse unter Bildung von 7-Amino-3-melhyl-J³-ccphem-4-carbonsäure unterworfen, die dam durch Acylierung der 7-Aminogruppe in an sich bekannter Weise in die Produkte des erfindungsgemäßen Verfahrens übergeführt wird. Für die Acylierung verwendet man vorzugsweise ein carboxylaktiviertes. am Stickstoff geschütztes Phenylglycin oder ein am Stickstoff geschütztes Phenylglycinsäurechloridhydrochlorid. Die Aktivierung der Carboxylgruppe wird über ein gemischtes Anhydrid, Dicyclohexylcarbodiimid oder Woodwards Reagens erzielt. Die Schutzgruppe am Stickstoff kann eine Carbo-tert.-butoxy-, Carbotert.-butylmercapto- oder Carbobenzoxy-Gruppe sein

Bei einer weiteren Ausführungsform des erfindungs- 3c gemäßen Verfahrens zur Herstellung der oben definierten Verbindungen wird ein Penicillin mit einem 6-(a-Amino-a-phenylacetamido)-Substituenten, der dem des gewünschten Cephalosporinprodukts entspricht, der folgenden Reaktionsfolge unterworfen: (1) Die a-Aminogruppe des Penicillins wird mit einer geeigneten Gruppe, z. B. einer Carbo-2,2,2-trichloräthoxy-, Carbobenzhydryloxy- oder Trityl-Gruppe geschützt. (2) Die Penicillincarboxygruppe wird mit einer geeigneten Schutzgruppe, z. B. einer Trichloräthyl-, Benzhydryl-, p-Methoxybenzyl- oder p-Methoxyphenyl-Gruppe verestert. (3) Das so geschützte Penicillin wird dann in an sich bekannter Weise durch Umsetzung mit einem Oxydationsmittel, z. B. Wasserstoffperoxid in Essigsäure, Metaperjodsäure oder Perbenzoesäure in das Sulfoxid übergeführt. (4) Das geschützte Penicillinsulfoxid wird in Gegenwart einer Säure (z. B. Schwefelsäure oder Phosphorsäure), vorzugsweise in Gegenwart eines inerten organischen Lösungsmittels, so kurz wie möglich zur Vermeidung von Nebenreaktionen (etwa 0,1 bis 1 Stunde oder weniger) aui irhöhte Temperatur (etwa 100 bis 175 C) gebracht. Dadurch wird der Penicillinthiazolring zum Cephalosporinthiazinring erweitert, der in 3-Stellung eine Methylgruppe trägt. (5) Das Reaktionsprodukt wird dann für die Entfernung der Schutzgruppen von der a-Aminogruppe und der Carboxylgruppe an sich bekannten Maßnahmen unterworfen. (6) Das erhaltene Cephalosporin mit der gewünschten Struktur wird durch Chromatographie oder andere an sich bekannte Maßnahmen gereinigt.

Die Erweiterung des Penicillinthiazolidinrings zum Cephalosporinthiazinring wurde erstmalig in J. Amer. ehem. Soc, 85 (1963), S. 1896 und 1897, beschrieben.

Die erfindungsgemäß erhältlichen neuen Verbindüngen sind chemisch und metabolisch stabiler als die entsprechenden 3-Acetoxymethylanalogen. Die Säuren und Salze vermögen zahlreiche Mikroorganismen, unter anderen Staphylococc:, Streptococci und Enter obacilli zu zerstören oder ihr Wachstum zu inhibieren und eignen sich daher für die Behandlung einer großen Anzahl verschiedener Infektionskrankheiten.

Die S<rukturen der erfindungsgemäß erhältlichen Verbindungen sind durch Infrarot-, Ultraviolett- und kernmagnetische Resonanzspektren bestätigt worden. Für ihre Analyse wendet man zweckmäßigerweise die Methode von Ford, Analytical Chemistry, 19, 1004 (1946), an, die auf der quantitativen Bestimmung des /3-Lactamteils des Moleküls durch Umsetzung mit Hydroxylamin beruht. Die antibiotischen Wirkungsstärken werden in einfacher Weise gegen einen Standardorganismus, wie Staphylococcus aureus 209 P, durch entsprechende Modifikation der Papierscheiben-Plattenmethoden von H i g g e η s et al., Antibiotics Chemotherapy, 3, 40 bis 54 (1963), und L ο ο et al., Journal of Bacteriology, 50, 701 bis 709 (1945), ermittelt.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

Eine Lösung von 2 g 7-(D-a-Amino-«-phenylacelamido)-cephalosporansäure in 100 ml 2%iger Natriumbicarbonatlösung wird mit 5 g eines 5% Palladium auf Bariumsulfat enthaltenden Katalysators in einer Parr-Schüttelvorrichtung 1 Stunde bei Zimmertemperatur und 3,5 atü Wasserstoffdruck geschüttelt. Nach Abfiltrieren vom Katalysator wird das Filtrat mit Trifluoressigsäure angesäuert, und die Lösung wird filtriert. Das farblose Filtrat wird zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 15 ml Wasser gelöst, und die Lösung wird mit Trifluoressigsäure bis zu einem pH-Wert von 1 angesäuert. Die Lösung wird dreimal mit Methylisobutylketon extrahiert, und die vereinigten Extrakte werden zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Äther verrieben, und die feste Substanz wird abfiltriert und im Vakuum getrocknet. Das Produkt, das in einer Menge von 1,52 g erhalten wird, erweist sich auf Grund der Ergebnisse der Titration, der Ultraviolett-Analyse und der Moore-Stein-Analyse als 7-(D-u-Amino-a-phenylacetamido)-3-methyl-.1³-cephem-4-carbonsäure in Form des Trifluoracetatsalzes.

Beispiel 2

Eine Lösung von 25 g (0,05 Mol) des Natriumsalzes der 7-(D-a-carbo-tert.-butoxyamido-o:-phenylacetamido)-cephalosporansäure wird hergestellt, indem man 5 g Natriumbicarbonat zu einer Suspension der freien Säure in 750 ml Wasser gibt uied dann mit Wasser auf einen Liter verdünnt Die Lösung wird dann bei 3,5 atü und Zimmertemperatur in einer großen Parr-Flasche 1 Stunde in Gegenwart von 50 g eines 5% Palladium auf Bariumsulfat enthaltenden Katalysators mit Wasserstoff behandelt. Nach Zugabe weiterer 25 g des Katalysators wird die Wassenstoffbehandlung noch 30 Minuten fortgesetzt. Der Katalysator wird abfiltriert. Das Filtrat wird mit Äthylacetat überschichtet, in einem Eisbad gekühlt und mit konzentrierter Salzsäure auf pH 2,5 angesäuert. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Auf diese Weise erhält man 18,7 g Rückstand. Die Carbo-tert.-butoxyschutzgruppe wird durch Zugabe von 100 g eiskalter Trifluoressigsäure abgespalten. Nach 15 Minuten v/ird die nichtumgesetzle Trifluoressigsäure im Vakuum entfernt.

Der Rückstand wird mit Äther verrieben und im Vakuum getrocknet. Man erhält 16,9 g des rohen trifluoressigsaurcn Salzes der 7-(i)-«-Amino-u-phenylacetamido) - 3 - methyl - Ι^Λ - cephem - 4 - carbonsäure.

Das so erhaltene Rohprodukt läßt sich leicht durch Auflösen in 150 ml Wasser und Versetzen mit 150 ml einer 25%igen Lösung eines Flüssigphasenanionenaustauscherharzes (Acetatform) in Methylisobutylketon in die freie Säure (in der Form des inneren Salzes) überführen. Die so behandelte wäßrige Phase wird mit 400 ml Acetonitril verdünnt und über Nacht in der Kälte stehengelassen. Die erhaltene feste Substanz wird mit wäßrigem Acetonitril (1:1) gewaschen und bei 45 C im Vakuum getrocknet. Man erhält 8,22 g der zu 99% reinen 7-(D-«-Amino-«-pheny!- acetamido) - 3 - methyl - I³ - cephem - 4 - carbonsäure (Moore-Stein-Analyse).

UV λ_ιηαχ 260 mix (_t 7750).

pKa-Werte 5,2; 73.

Mittleres Molekulargewicht.... 365 Formelmolekulargewicht 365 (+ 1 H₂O)

Analyse C₁₆H₁₇N₃O₄S:
Berechnet ... C 55,31;
gefunden .... C 54,73.

Beispiel 3

Eine Lösung von 22,7 g (15OmMoI) d-«- glycin in 300 ml Wasser wird mit 160 ml 1-n wäßrigem Natriumhydroxyd und 150 ml Äther vermischt _J0 und in einem Eis-Alkohol-Bad gekühlt Unter Ruhren werden gleichzeitig 42,5 g (200 mMol) 2Ä2-Tnch oräthylchlorformiat in 200 ml trockenem Dioxan und 200 ml 1-n wäßriger Natronlauge innerhalb von einei Stunde tropfenweise zugegeben. Die Mischung wird noch eine weitere Stunde bei etwa O^ stehengelassen. Danach wird sie mit einem großen Volumen kalten Äthers gewaschen, mit kaltem Äthylacetat überschichtet und auf pH 2,5 angesäuert. Die organische Schicht wird abgetrennt mit kaltem Wasser lewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Man erhalt 45 g eines kristallinen festen Ruckstands der in 150 ml Benzol gelöst wird. Die Lösung wird filtn>n und mit 40 ml Petroläther verdünnt. NW-Tnchloräthylcarbonyl-D-a-phenylglycin fallt aus und wird in einer Menge von 30,2 g gewonnen. F. - 14-bis 144°C

11,6 g (85 mMol) Isobutylchlorformiat werden in

420 ml Aceton, die einige Tropfen ^}f7^^ amin enthalten, gelöst. Die Lösung wird in einem Eis-Alkohol-Bad gekühlt und dann^tropfenweise unter Rühren mit 28,0 g (85 mMol) N-(2,2,2-Trichlorathyl· carbonyU-D-a-phenylglycin und 87g (8JmMo) Triethylamin in 420 ml Aceton innerhalb von 30 Minuten versetzt, worauf die Mischung noch weitere 16 Minuten in der Kälte gerührt wird. Die erhaltene Lösung des gemischten Anhydrids wird auf einmal mit einer Lösung von 18,6 g (85 ^mMf .^Ammopenicillansäure und 8,7 g (86 mMol) Tnathylamin hT 70 ml kaltem Wasser versetzt Diese Mischung wird in der Kälte 2 Stunden gerührt und dann im Vakuum zur Entfernung des Acetons ^geengt. Die zurückbleibende wäßrige Lösung wird mit Wasser im Verhältnis 1:1 verdünnt, mit Athylaceta überschichtet, abgekühlt und mit 1-n wäßriger.Safesame aur pH 2,5 angesäuert. Die Athylacetatschicht wird abgetrennt, mit kaltem Wasser gewaschen und mit 1-n wäßriger Natriumhydroxydlösung bis pH 6,7 in Wasser rücktitriert. Die wäßrige Phase wird abgetrennt, filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Nach Verreiben des Rückstands mit trockenem Aceton erhält man 24,6 g eines weißen amorphen Pulvers, dessen Infrarot- und kernmagnetisches Resonanzspektrum mit der Struktur der erwarteten Verbindung 6 - [N - (2,2,2 - Trichloräthylcarbonyl)- D-it- amino - α - phenylacetamido] - penicillansäurenatriumsalz übereinstimmt.

18 g (33 mMol) des erhaltenen Produkts werden in 300 ml Wasser gelöst und mit 1-n wäßriger Salzsäure auf pH 5,4 angesäuert. Die Lösung wird portionsweise mit 7,1 g (33 mMol) Natriummetaperjodat versetzt und 2 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird mit Äthylacetat beschichtet, abgekühlt und auf pH 2,5 angesäuert. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit kaltem Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Man erhält 16 g eines rohen Rückstands, der in 64 ml Ν,Ν-Dimethylacetamid gelöst wird. Die Lösung wird mit 640 ml wasserfreiem Äther verdünnt, filtriert und langsam mit 40 ml Petroläther versetzt. Auf diese Weise erhält man 11,6g des gereinigten Produkts, das bei 153 bis 155° C schmilzt. Auf Grund seiner Analyse erweist es sich als 6-[N-(2,2,2-Trichloräthylcarbonyl)-D-a-amino-a-phenylacetamido]-penicillansäuresulfoxyd, das mit 1 Mol Ν,Ν-Dimethylacetamid solvatisiert ist.

7 g (11,2 mMol) des so erhaltenen Sulfoxids werden in 85 ml trockenem Tetrahydrofuran, das 1,77 g (22,3 mMol) Pyridin enthält, gelöst. Die Lösung wird in einem Eis-Alkohol-Bad gekühlt und unter Rühren mit einer Lösung von 3,6 g (16,7 mMol) 2,2,2-Trichloräthylformiat in 20 ml trockenem Tetrahydrofuran versetzt. Die Mischung wird dann 2 Stunden in der Kälte und anschließend 3 Stunden bei Zimmertempel atur gerührt und schließlich 15 Minuten in mäßigem Rückflußsieden gehalten. Das Lösungsmittel wird im Vakuum verdampft. Der Rückstand wird mit kaltem Äthylacetat aufgenommen, und die erhaltene Lösung wird nacheinander mit Wasser, 5%iger wäßriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen. Die gewaschene Lösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Man erhält 5,2 g eines amorphen Rückstands, der aus 7 ml Äthanol umkristallisiert wird. Dadurch gewinnt man 4,5 g des gereinigten Produkts, das bei 180 bis 182° C schmilzt. Weiteres Umkristallisieren aus wäßrigem Äthanol liefert eine Probe des gebildeten 6-[N-(2,2,2-Trichloräthylcarbonyl) - D - α - amino - α - phenylacetamido]-penicillansäuresulfoxid - 2,2,2 - trichloräthylesters vom Schmelzpunkt 185 bis 186° C.

3,2 g (4,5 mMol) des erhaltenen Sulfoxidesters werden in 125 ml Xylol gelöst und mit 0,25 g p-Toluol sulfonsäure versetzt. Die Mischung wird · 1 Stunde zum Sieden unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmitte wird bei vermindertem Druck verdampft. Der Rück stand wird in 50 ml 95%iger Essigsäure aufgenommer und in Eis gekühlt. Nach Zugabe von 10 g (153 mMol Zinkstaub wird die Mischung 3 Stunden in de Kälte gerührt und dann filtriert. Das Zink wird mi Essigsäure gewaschen. Filtrat und Waschflüssigkeitei werd?n vereinigt und im Vakuum zur Trockne ein geengt. Der Rückstand wird in 100 ml Wasser aul genommen, abgekühlt, mit TrifluoressigsäXire au

pH 1 angesäuert und mit Methylisobutylketon extrahiert. Der Extrakt wird mit Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit wasserfreiem Äther verrieben und liefert das trifluoressigsaure Salz der 7 - (D - u - Amino - « - phenyl - acetamido) - 3 - melhyll^J-cephem-4-carbonsäure als rosafarbenes amorphes Pulver. Ein mit Butanol, Essigsäure und Wasser (3:1:1) entwickeltes und gegen eine mit Bacillus subtilis besamte Agarplatte bioaulographiertes Pupierchromatogramm des Produkts zeigt einen einzigen biologisch aktiven Flecken der im R_rWert genau mit dem einer authentischen Probe des nach einer anderen Methode hergestellten Produkts übereinstimmt. Das kernmagnetische Resonazspeklrum zeigt die charakteristische C₃-Methylgruppe als ein Singulett bei τ 7,90.

Beispiel 4

Eine gesättigte wäßrige Lösung von 1 Mol Natriuni-7-amino-cephaIosporanal wird im Verhältnis 1:1 mit Wasser verdünnt, mit einer gesättigten wäßrigen Lösung von Dinatriumorthophosphat urid Triäthylamin (1 : 1 Mol) alkalisch gemacht und bei Zimmertemperatur und 7Oatü in Gegenwart von 5% Palladium auf Bariumsulfat in der gleichen Gewichtsmenge wie das Ausgangsrnnterial hydriert Nach Aufhören der Wasserstoffaufnahme wud die Mischung mit Schwefelsäure angesäuert und vom Katalysator abfiltriert, wobei ein Gemisch aus Aktivkohle, Talkum und Diatomeenerde als Filterhilfe verwendet wird. Das Filtrat wird mit wäßrigem Ammoniak versetzt, wodurch die 7-Amino-3-methyl-3 - cephem - 4 - carbonsäure ausfällt, die abfiliriert und mit wäßrigem Aceton gewaschen wird. Das so erhaltene Produkt und eine äquimolare Menge Triäthylamin werden in Acetonitril gelöst.

Eine Suspension von Natrium-methyl-(o-,i-carboxybenzylamino)-crotonat in Acetonitril wird bei Zimmertemperatur nacheinander mit äquimolaren Mengen Dimethylbenzylamin, Methylchlorformiat und der wie oben beschrieben hergestellten Lösung der 7 - Amino - 3 - methyl - 3 - cephem - 4 - carbonsäure umgesetzt. Nach dem Ende der Umsetzung wird das Reaktionsgemisch mit Triäthylamin und Natriumchlorid versetzt, wodurch sich Schichten ausbilden. Die obere Schicht wird abgetrennt und mit Ameisensäure angesäuert, wodurch die 7-(D-«-Amino- a - phenylacetamido) - 3 - methyl - 3 -cephem -4 - carbonsäure ausfällt. Der Niederschlag wird abfiltriert, mit Acetonitril gewaschen und aus einem Gemisch aus Wasser, Formamid, Methanol und Acetonitril umkristallisiert. Nach dem Waschen mit Acetonitril und Trocknen wird das umkristallisierte Material in ausgezeichneter Ausbeute erhalten.

Beispiele 5 bis 7 Die im folgenden aufgeführten weiteren Verbin- · düngen werden gleichfalls durch Hydrogenolyse des 3-Acetoxymethylanalogons unter den im Beispiel 1 veranschaulichten Bedingungen erhalten. Alle diese Verbindungen haben sich als wirksame Antibiotica gegen penicillinresistente Stämme von Staphylococcus aureus erwiesen:

7-(dl-(/-Amino-m-methoxyphenylacelamido)-3-methvll³-cephem-4-carbonsäure. UV /.„„„

263 (,■ 8050).

7-(D-a-Amino-m-hydroxyphenylacetamido|- 3-methyl- l³-cephcm-4-airbonsüure. LJV ;„„,_v

264 (> 7100).

Für die vorstehend genannten Verbindungen wur den durch Titration pKa-Werte und Molekularge wichte bestimmt. Diese Werte sowie die sich auf Grum der Formel ergebenden Molekulargewichte sind ii der gleichen Reihenfolge wie oben in der folgende! Tabelle zusammengestellt.

Titration

pKn-Werte

5,3; 6,8
5,4; 7,4
5.3; 7,3; 12,7

Molekular-

gCtt ich!

(durch
Tilralioiil

468
440
438

Mnlekukirticwk'hl I Formell

399 ( + 1 H₂O) 413 (+2H₂O) 399 (+2H,O)

Die Unterschiede zwischen den gefundenen un< berechneten Molekulargewichten beruhen auf eine starken Solvatation der Verbindungen.

Die Mindestdosen (in mg/kg) "der erfindungsge

äßpn VprKinHi,«™=« ι ..' /^__u..i -.1....:., _m;

Verbindungen und von Cephaloglycin, mi

denen bei oraler Verabreichung an Mäuse^ein Schut gegen S. pyrogenes C 203 bei 50% der Tiere erziel wird, werden in der folgenden Tabelle mitgeteilt:

Verbindung der l-ormel I	QH₅	ED₅₁,
R	3-ClQH₄	mg kg. υπι
3-CH₃OQH₄	1,7
3-HOQH₄	3.9
Cephaloglycin	1.7
<l.2
4.5

Die erfindungsgemäßen Verbindunaen werden von Jgastrointestinaltrakt ausgezeichnet resorbiert, wes halb damit nach oraler Gabe sehr hohe Blutspiegel werte erreicht werden. Dies zeigt feinender Vergleirf zwischen der Verbindung der allgemeinen Formel 1 tür die R einen Phenylrest bedeutet (A). und Cephalo glycin (B):

Antibioticumkonzentration im Blut nach oraler Verabreichung von 20 mg/kg Maus

7-(dl-ii-Amino-m-chlorphenylacetamido)-3-methyl-.l³-cephem-4-carbonsäure. UV /_Iir(lx 261 (f 6660).

65

Verbin	15	in	!ig/ml	— —
dung	18,0	14,4	n:ich Minuten
	2,0	3.75		W
A				2,7
B			1 ">S
	60
	6,5
I Ο

Im folgenden sollen noch die akuten Toxizitäten der vorstehend mit A und B verzeichneten Verbindi gen mitgeteilt werden:

LD₁₁ mg/kg

Oral
(Rand

>5000 >5000

₅I, subculan

(männl.
Maus)

1600

(wcibl. Maus)

6200

±160 j 2013 ±

LD₅₁, i. p.

(ma'nnl.
Maus)

400 —
541 ±62

Iweibl. Maus)

16(X) 675 ± 60

Diese Werte zeigen, daß die erfindungsgemäße Verbindung A genauso ungiftig ist wie die Verbindi B, Cephaloglycin.

Claims

Patentansprüche: I. Verbindungen der allgemeinen Forme!

gegebenenfalls das erhaltene Produkt mit einer Base oder einem basischen Salz oder mit einer Säure in ein Salz überführt.

R — CH-CO — NH- CH-CH CH,