DE2552510B2 - Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung - Google Patents
Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer HerstellungInfo
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Description
Die Erfindung betrifft neue Verbindungen aus einem Copolymeren des Vinylenglykols und einer daran
chemisch gebundenen biologisch aktiven Substanz, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
vorzugsweise bei der Affinitätschromatographie.
In den letzten Jahren hat sich eine neue Technik innerhalb der biochemischen Arbeitsmethoden mehr
und mehr durchgesetzt, deren primäres Merkmal darin besteht, die Affinität von trägergebundenen, biologisch
aktiven Substanzen zu selektiv durchzuführenden Reaktionen einzusetzen.
Ober eine spezifische Komplexbildung der trägergebundeneu Substanz mit einer zweiten, die in einem
Gemisch vorliegt, kann die betreffende Substanz aus dem Gemisch entfernt und gewünschtenfalls anschließend durch Desorption isoliert werden.
Trägergebuadene Enzyme bieten den Vorteil, Stoffumwandlungen in präparativen, kontinuierlichen Prozessen durchzuführen und die Reaktionsprodukte
enzymfrei zu erhalten.
In der biochemischen, enzymatischen Analytik stehen
trägergebundene wasserunlösliche Enzyme als mehrfach verwendbare Reagenzien zur Verfügung.
Auf Grund der Eigenschaft der Enzyme, Affinitäten nicht nur gegenüber den Substraten, sondern auch
gegenüber den spezifischen Inhibitoren aufzuweisen, hat sich die Gewinnung von Enzyminhibitoren mit Hilfe
der Affinitätschromatographie an trägergebundenen Enzymen besonders günstig erwiesen. Andererseits
erlaubt die Bindung von Inhibitoren an wasserunlösliche Matrizen die präparative Gewinnung der entsprechenden Enzyme.
Als sogenannte Immunadsorbentien werden Antigene oder Antikörper an wasserunlösliche Matrizen
gebunden und erlauben danach die Isolierung der korrespondierenden Antikörper bzw. Antigene.
Als biologisch aktive Substanzen werden entsprechend den vorhergehenden Ausführungen in vivo und in
vitro wirksame natürliche und künstlich hergestellte Stoffe verstanden, die im weitesten Sinne als Enzyme,
Aktivatoren, Inhibitoren, Antigene oder Antikörper, Vitamine und Hormone bezeichnet werden können. Für
diese biologisch aktiven Substanzen hat sich, da sie die Wirkprinzipien der wasserunlöslichen Systeme darstellen, die Bezeichnung Effektoren eingeführt.
Die meisten der bisher beschriebenen trägergebundenen Effektoren sind wesentlich stabiler als die
entsprechenden biologisch aktiven Substanzen in Lösung.
Als Trägermaterialien, sogenannte Matrizen, sind vorteilhaft solche Stoffe einzusetzen, die neben der
Unlöslichkeit in wäßrigen Systemen eine möglichst niedrige unspezifische Adsorption aufweisen. Dazu
müssen hydrophobe, hydrophile und ionische Wechselwirkungen zwischen Matrize und dem Reaktionspartner des Effektors weitgehend unterbunden werden.
Mit Substanzen, deren Bindung an den Effektor unerwünscht ist, z. B. solchen, die keine spezifischen
Reaktionspartner des Effektors sind, sollte eine Bindung ausgeschlossen sein.
Die bislang verwendeten Matrizen als Träger für biologisch aktive Substanzen können unterteilt werden
in diejenigen, die die Effektoren durch physikalische Adsorption binden, dazu gehören beispielsweise Polystyrol, Aktivkohle und Glasperlen und diejenigen, die
mit den Effektoren über eine kovalente Bindung miteinander verknüpft sind. Die Letztgenannten schließen Vinylpolymere als Homo- und Copolymerisate, ζ. Β.
Polyacrylsäuren, Polyacrylsäureamide und Amino-,
Carboxy- oder Sulfony.'-substituiertes Polystyrol, ferner
die Zellulose und ihre Abkömmlinge und schließlich natürliche und synthetische Polypeptide und Proteine
ein. Wegen der ausgeglichenen Wechselwirkung zwischen Matrize und Effektor hat die Verwendung von
Kohlenhydraten, insbesondere der Zellulose, des Dextrans, der Stärke, des Agars bzw. deren Abkömmlingen,
als Matrize in wäßrigen Systemen die höchste
ίο Verbreitung gefunden, wenn auch die in diesen
Naturstoffen häufig enthaltenen Carboxylgruppen wegen ihren unspezifischen Affinitäten als störend
empfunden werden. Daneben weisen diese Stoffe eine relativ geringe thermische und chemische Stabilität auf.
Viele dieser Nachteile konnten durch Verwendung von Polyvinylenglykol, einem synthetischen Polymeren,
als Matrize weitgehend beseitigt werden (DE-OS 24 21 789). Polyvinylglykol, auch Polyhydroximethylen
genannt, wird durch saure oder basische Hydrolyse aus
Polyvinylencarbonat hergestellt. Jedes Kohlenstoffatom
trägt eine Hydroxylgruppe und ein Wasserstoffatom. Die durchgehende -C-C-Bindung verleiht dem
Träger ein£ besonders hohe Stabilität
2> carbonate sind ebenfalls bereits als Träger für
verschiedene Effektoren, insbesondere Proteine, verwendet worden (DE-OS 24 07 340). Diese bekannten
Verbindungen besitzen aber — sofern überhaupt aktive Gruppen der Vinylencarbonat-Monomereneinheiten
«ι nicht an den Effektor gebunden sind — intakte
Carbonat-Gruppen, die dem System Träger-Effektor keine hydrophilen Eigenschaften verleihen.
Es wurde nun gefunden, daß man statt Polyvinylenglykol vorteilhaft Vinylenglykol-Copolymere als
r. Trägermatrix verwenden kann. Durch Einpolymerisieren von geeigneten Comonomeren in Polyvinylencarbonat können die physikalischen und chemischen
Eigenschaften des daraus hergestellten Polyvinylglykols weitgehend variiert werden.
4(i So kann z. B. die »Hydrophilie« bzw. »Quellung« des
Polyvinylenglykols durch Einpolymerisieren von hydrophoben Monomeren, wie Äthylen, Vinylchlorid oder
Styrol in das Polyvinylencarbonat verändert werden. Durch die Copolymerisation von Vinylacetat wird im
•π verseiften Endprodukt eine Vinylenglykolgruppe durch
eine Vinylalkoholgruppe ersetzt, was eine erhöhte Quellbarkeit in wäßrigem Medium zur Folge hat.
Es ist möglich, mit Hilfe von Comonomeren, wie z. B. Diäthylenglykoldivinyläther und Divinylbenzol eine
>ii Vernetzung und damit eine Verbesserung der mechanischen Eigenschaften des Trägers zu erhalten. Durch
Einpolymerisieren von elektrophilen Funktionen, z. B. Oxirangruppen (Epoxigruppen) aus Vinylglycidyläther-Comonomeren, ist eine direkte Umsetzung der
V) Matrix mit nucleophilen Funktionen (-NH2, -OH
usw.) möglich. Carboxylgruppen können durch Acrylsäureester-Comonomere eingeführt werden. Nach erfolgter Copolymerisation werden die Estergruppen zu
Carboxylgruppen verseift. Die Einführung von -NH2-
W) oder — COOH-Gruppen erlaubt die Aktivierung mit
Hilfe von Carbodiimiden, Isoxasoliumsalzen, Glutaraldehyd usw. Copolymerisate-Vinylenglykol/Vinylalkohol haben eine höhere spezifische Oberfläche und damit
eine höhere Bindungskapazität für ζ B. Proteine an der
b5 Oberfläche des Polymerpulvers im Vergleich zu
Vinylenglykol-Homopolymerisat.
Gegenstand der Erfindung sind demnach Verbindungen aus einem Copolymeren des Vinylenglykols und
einer daran unter Erhaltung ihrer biologischen Aktivität chemisch gebundenen biologisch aktiven Substanz,
worin nur ein Teil der aktiven Gruppen der Vinylenglykol-Einheiten
des Polymeren an die biologisch aktive Substanz gebunden ist und der Rest als freie
Hydroxylgruppen vorliegt.
In diesen Verbindungen ist die Trägermatrix ein Polyvinylenglykol-Copolymerisat enthaltend bis zu
45%, vorzugsweise 5-20%, eines Comonomeren. Die biologisch aktiven Substanzen sind Stoffe wie Enzyme,
Aktivatoren, Inhibitoren, Antigene oder Antikörper, andere Plasmaproteine, Blutgruppensubstanzen, Phytämagglutinine,
Antibiotika, Vitamine oder Hormone, Peptide oder Aminosäuren oder synthetisch hergestellte
Effektoren.
Der polymere Träger und die biologisch aktive Substanz sind entweder direkt oder über eine
Seitenkette (Spacer) kovalent miteinander verknüpft
Die biologisch aktiven Verbindungen über eine Seitenkette (Spacer) zu binden ist von Vorteil, wenn die
Molekulargewichte ihrer affinen Partner sehr unterschiedlich sind, oder wenn bei der Verwendung in einem
biospezifischen Prozeß sehr hochmolekulare oder aus mehreren Untereinheiten aufgebaute Proteine teilnehmen.
Spacer sind an der polymeren Matrix verankerte Seitenketten bestimmter Länge, die durch Einpolymerisieren
durch An- oder Einbau (Bindung von bi- oder polyfunktionellen Verbindungen — z. B. einem Tripeptid
— an die Matrix) oder durch Einbau von funktionellen Gruppen und schrittweise Verlängerung
an diesen erhalten werden können.
Gegenstand der Erfindung sind ferner Verfahren zur kovalenten Verbindung der biologisch aktiven Substanzen
mit dem Träger.
Hierzu steht eine Reihe von allgemein bekannten Reaktionen zur Verfügung.
Sie betreffen zunächst die Verfahren zur Herstellung des Polyvinylenglykol-Copolymeren. Sie sind dadurch
gekennzeichnet, daß Vinylencarbonat mit Comonomeren, insbesondere solchen der der allgemeinen
Formeln:
Ri
H2C = C
Ri
H2C = C
(OCH2-CH2)„-O-CH =
Ri
H2C = C CH2
H2C = C CH2
N (CH2),,
OC
CH2
H2C = C
(CH2),,-CH CH2
R.
H2C = C
—CH CH2
R,
H2C = C
H2C =
R1
^COOR3
R.
R.
H2C = C
CO-CH3
H2C = C
R.
Cl
H2C = C
O O
Il
in denen Ri Wasserstoff, Methyl, Äthyl, R3 Methyl,
Äthyl, Propyl und η eine ganze Zahl zwischen 1 und 4
5i bedeuten, polymerisiert wird.
Die Polymerisation des Polyvinylencarbonats erfolgt mit bis zu 45% Comonomeren, vorzugsweise mii
5-20%.
Die Bindung des Effektors an den polymeren Träger
Die Bindung des Effektors an den polymeren Träger
ω kann — unter Berücksichtigung der Fähigkeit des
Polyvinylencarbonats zur Hydrolyse und dem Bestreben, einen Teil der im Polymeren verbundenen
Hydroxylgruppen zu erhalten — auf verschiedene Weise erfolgen.
b5 So kann man:
(A) ein Copolymeres des Vinylcarbonats mit einer biologisch aktiven Substanz umsetzen und danach
die noch vorhandenen Cyclocarbonatgruppen in Hydroxygruppen überführen oder
(B) die Cyclocarbonatgruppen eines Copolymeren des Vinylencarbonats in Hydroxygruppen überführen und
(B) die Cyclocarbonatgruppen eines Copolymeren des Vinylencarbonats in Hydroxygruppen überführen und
(a) im Copolymerisat vorhandene oder in dieses eingeführte elektrophile Gruppen mit einer
biologisch aktiven Substanz umsetzen oder
(b) diese Hydroxygruppen
(1) entweder zuerst mit einer elektrophile Gruppen enthaltenden Verbindung und
sodann mit einer biologisch aktiven Substanz
(2) oder unmittelbar mit einer elektrophilen Gruppen tragenden biologisch aktiven Substanzumsetzen.
Die Herstellung der an den Träger gebundenen biologisch aktiven Verbindungen ist beispielsweise
dadurch möglich, daß eine eiektrophile Gruppe entweder in die biologisch aktive Substanz oder in das
Polyvinylenglykolcopolymer eingeführt wird und über diese die biologisch aktive Substanz mit den Polyvinylenglykolcopolymeren
umgesetzt wird.
Die Einführung der elektrophilen Gruppen in die Trägermatrix erfolgt entweder durch Copolymerisieren
von Vinylencarbonat mit elektrophile Gruppen enthaltenden Comonomeren oder durch Umsetzung der
Trägermatrix mit aktivierenden, elektrophile Gruppen tragenden niedermolekularen Verbindungen.
Allgemein ist die chemische Kupplung eines Reaktionspartners an die Trägermatrix einfach, wenn auf der
einen Seite nucleophile und auf der anderen elektrophile Funktionen vorhanden sind. Als reaktive nucleophile
Funktionen kommen vor allem Amino-, Sulfhydryl- und Hydroxylgruppen in Betracht, die gewöhnlich entweder
in der Matrix oder im Reaktionspartner bereits enthalten sind. Elektrophile Funktionen müssen erst
eingeführt werden. Dazu können Carboxylgruppen in Säurehalogenide, Säureazide, Säureanhydride, Imidazoüde
übergeführt oder direkt mit Carbodiimiden aktiviert werden. Als reaktive elektrophile Gruppen
werden auch Isocyanat-, Isothiocyanat-, Diazonium-Gruppen oder cyclische Imidocarbonatester
benutzt. Besonders günstig ist die Einführung reaktive Gruppen mit Hilfe der Copolymerisation.
Durch Einpolymerisieren von Monomeren mi Epoxy-Gruppen, z. B. mit Epoxyalkylvinyläthern in da
') Polyvinylencarbonat und durch die sehr große Unterschiede in der Verseifungsgeschwindigkeit zwi
sehen cyclischen Carbonat- und Epoxy-Gruppen, erhäl man leicht eine Polyvinylenglykol-Matrix mit reaktivei
Epoxy-Gruppen, die mit nucleophilen Funktionei
ι» umgesetzt werden können. So ist die direkte Bindung
einer biologisch aktiven Substanz und/oder die Einfüh rung (Verlängerung) einer Seitenkette (Spacer) möglich
Ein weiterer Vorteil ist demnach bei der Verwendunj
von Copolymeren auch die Möglichkeit der direkter Einführung (Einpolyrncrisäcrcn) von cicktrophilet
Funktionen, die eine Umsetzung nach bekannter Methoden erlauben.
Durch Copolymerisieren von Vinylencarbonat mi Äthyl-Acrylat und nachfolgender Verseifung der Poly
meren erhält man eine Matrix mit -OH- unc
— COOH-Funktionen. Die Carboxylgruppen könnet mit Hilfe von Carbodiimiden aktiviert werden um
sodann eine Amidbindung mit Aminogruppen de Effektors eingehen. Carboxylgruppen lassen ferner di<
2> Ausbildung von Amidbindungen mit Hilfe der vor
Woodward eingeführten Isoxazoliumsaize zu.
Eine weitere Methode zur Kupplung von biologiscf aktiven Verbindungen an Carboxylgruppen-haltiger
Polymeren wird mit Hilfe von N-äthoxycarbonyl-2-äth
in oxy-1,2-dihydrochinolin (EEDQ) ausgeführt.
Die Carboxylgruppen können nach bekannten Me thode verestert, danach der Ester in das Hydrazic
überführt und schließlich das in der Folge resultierende Azid mit der Aminogruppe des Effektorproteins mit dei
i'> Polyvinylglykol-Matrix verknüpft werden.
Besitzt das in die Matrix einpolymerisierte Comono mere durch nachfolgende Umsetzungen frei verfügbare
Aminogruppen, so ist mit Arylaminogruppen enthalten den Vinylsulfonderivaten oder Schwefelsäureestern vor
0-Hydroxyäthylsulfonen die Einführung von Arylamino
gruppen möglich, wobei die Arylaminogruppen sodann nach bekannten Methoden diazotiert und anschließenc
mit entsprechend reaktiven Gruppen eines Effektors verbunden werden können, z. B.
H H
C-C-
OH OH
HHHH
I I I I
-c—c—c—c
OH H 0 H
CH2
HO-CH
HO-CH
CH2-NH-(CH2)6—NH-CH2- CH2-SO2-^ >— NH2
Auf diese Weise kann auch eine »Verlängerung« eines Spacers vorgenommen werden.
Ein anderer Weg zur Bindung von Proteinen über die Aminogruppen erfolgt mit Hilfe von Glutardialdehyd
Einfach ist die Verknüpfung des Effektors an die Matrix nach einer Aktivierung der Hydroxyl- oder
Aminogruppen des Polyvinylenglykol-Copolymeren mittels Cyanhalogeniden, vorteilhaft mit Bromcyan und
einer nachfolgenden Umsetzung der Aminogruppen enthaltenden biologisch aktiven Effektoren über diese
aktivierten Gruppen.
Eine weitere Möglichkeit zur Verknüpfung des Effektors mit einer Polyvinylenglykol- oder Polyvinylenglykol-Copolymerisat-Matrix
besteht in der Acylierung der Hydroxylgruppen mit Bromacetylbromid,
gefolgt von der Alkylierung der Aminogruppen des Effektors.
Ähnliche Reaktionsverläufe sind beispielsweise durch
ίο
Umsetzung der Hydroxylgruppen des Trägers mit reaktiven Triazinen zu erreichen, wobei ein Teil der
reaktiven Gruppen des Triazins mit der Polyvinylenglykol-Verbindung,
ein anderer mit Aminogruppen des Effektors in Reaktion tritt.
Diazotierbare aromatische Amine, die über eine weitere reaktive Gruppe mit den Hydroxylgruppen des
Trägers einerseits in Verbindung treten können, erlauben auf der anderen Seite die Kupplung mit dazu
befähigten, aktivierten Aminosäuren, beispielsweise den Tyrosin- oder Histidinresten der Proteineffektors.
Arylaminogruppen enthaltende Vinylsulfonderivate und Schwefelsäurehalbester von j9-Hydroxyäthylsulfonen
können mit den Hydroxylgruppen des Trägers zur Reaktion gebracht werden. Sie ermöglichen die
Bindung des Effektors nach der vorbeschriebenen Diazotierungsreaktion.
Besonders stabile Ätherverbindungen entstehen bei der Umsetzung der Hydroxylgruppen des Polyvinylenglykol-Copolymerisats
mit nicht ionenbildenden Epoxiden, die mindestens 2 reaktive Gruppen enthalten, wie
die Epihalohydrine oder die Polyepoxide, beispielsweise Epichlorhydrin oder Bisepoxide.
Eine weitere Art der Modifizierung ist die Einpolymerisation
von Comonomeren in die Polyvinylencarbonat-Kette (wie z. B. von Vinylpyrrolidon) mit anschlie-Bender
partieller Umsetzung der Zyklocarbonatringe des Polyvinylencarbonats mit einem Amin, z. B. mit
Hexamethylendiamin, zu einem über eine Urethanbindung mit einem Spacer oder Effektor substituierten
Polyvinyleucarbonat-Copolymerisat. Die restlichen Zyklocarbonatgruppen werden dann zu Hydroxylgruppen
verseift:
CH-CH"
/
C
O
\
\
CH-CH"
O O
Il
ο
Poly vinylencarbonat
— CH- CH
OH O
C = O
NH
NH
M-I I
— CH-CH2-
CH-CH
OH OH
OH OH
CH ι |
-CH I |
I OH |
I O |
NH ι |
|
I R |
Neben den hier beispielhaft angeführten Verfahren zur Herstellung der kovalenten Verbindung zwischen
der Trägermatrix und dem Proteineffektor oder anderen Effektoren, existieren noch weitere Methoden,
die zur Reaktion der Hydroxylgruppen oder bestimmter Gruppen des Copolymeren mit einem Effektor führen
und dadurch die kovalente Verbindung zwischen beiden herstellen; so die bekannte Umsetzung mit komplexbildenden
Metallverbindungen, z. B. Titanverbindungen. Alle diese Methoden sind dem Fachmann bekannt Bei
der Bindung niedermolekularer biologisch aktiver Verbindungen ist es oft von Vorteil, nicht den Träger,
sondern den Effektor zu aktivieren.
Im Prinzip können alle Verfahren verwendet werden,
die in der makromolekularen Chemie bei der Modifizierung von synthetischen oder natürlichen makromolekularen
Verbindungen bekannt sind.
Die Polyvinylenglykol-Polymerisate zeichnen sich neben der chemischen und thermischen Stabilität durch
vorteilhafte verarbeitungstechnische Eigenschaften aus und führen damit zu einer Überlegenheit gegenüber den
bisher als optimal gefundenen Trägermatrizen auf der Basis von natürlichen Kohlenhydraten. Sie sind z. B. in
Form von Fasern, Fäden, Folien oder sphärischen Partikeln herstellbar, so daß je nach dem Anwendungszweck des daran zu bindenden Effektors die geeignetste
bO
b5
Form gewählt werden kann. Vorzugsweise werden diese Copolymerisate in Form von feinteiligen Pulvern
mit hoher spezifischer Oberfläche angewendet
Durch die produktionstechnisch lenkbare Größe der für die Bindung der Effektoren bzw. der Spacer
zugänglichen Oberfläche zeigt sich ein weiterer Vorzug der Polyvinylenglykol-Copolymerisate gegenüber den
bekannten Trägermaterialien.
Die erfindungsgemäßen biologisch aktiven Verbindungen eignen sich für die meisten Anwendungsverfahren,
die bisher für andere an hydrophile, wasserunlösliche Träger gebundene Effektoren bekannt geworden
sind. Es können demnach Enzyme wasserunlöslich gemacht werden. Die unlöslichen Enzyme werden
zunehmend zur Bestimmung von Substraten in Analysenautomaten und als sogenannte Enzymelektroden
verwendet Wegen der erhöhten Stabilität eignet sich eine Reihe trägergebundener Enzyme für die Durchführung
technisch enzymatischer Umsetzungen.
Trägergebundene, biologisch aktive Substanzen haben wegen ihrer Eigenschaft als spezifische Adsorbentien
eine breite Anwendung in der Affinitätschromatographie gefunden. Mit Hilfe von trägergebundenen
natürlichen oder synthetischen Enzyminhibitoren gelingt die Hochreinigung von Enzymen, während die
Enzyme als Effektoren insbesondere zur Gewinnung
natürlicher Enzyminhibitoren aus Rohextrakten hervorragend geeignet gefunden wurden. Trägergebundene
wasserunlösliche Antigene werden zur Isolierung der zugehörigen Antikörper verwendet, die auf diese Weise
frei von anderen Serumbestandteilen und frei von anderen Antigenen erhalten werden. Affinitätschromatographisch
können auch nicht präzipitierbaren Antikörper sowie solche, die wegen ihrer geringen
Konzentration im Serum nicht fällbar sind, isoliert und auch quantitativ bestimmt werden.
Beispiele
Herstellung von Vinylencarbonat-Copolymeren
Herstellung von Vinylencarbonat-Copolymeren
Das bei der Herstellung der Copolymeren (CP) eingesetzte Vinylencarbonat wurde vor dem Einsatz
eine Stunde über Natriumborhydrid (100 Gewichtsteile Vinylencarbonat auf 2 Gewichtsteile NaBH^ bei einem
Druck von 33 mm am Rückfluß gekocht, dann bei 75°/33 mm über eine 50 cm lange, mit Raschig-Glasringen
gefüllte Silbermantel-Kolonne destilliert und möglichst umgehend für die Copolymerisation eingesetzt.
Ebenso wurden die eingesetzten Comonomeren zuvor noch durch Destillation gereinigt.
1.) Copolymerisat-Vinylenglykol/Vinylalkohol
aus verseiftem Copolymerisat-Vinylencarbonat/Vinylacetat
aus verseiftem Copolymerisat-Vinylencarbonat/Vinylacetat
a) In 9 Gewichtsteilen Vinylencarbonat und 1 Gewichtsteil Vinylacetat werden 0,05 Gewichtsteile Azobisisobutyronitril unter Stickstoff gelöst.
Das Monomerengemisch wird unter Stickstoff in
eine flachgedrückte (4 mm dicke, 60 mm breite, 150 mm lange) Aluminiumtube mit Schraubverschluß
eingefüllt (Gesamtfüllvolumen etwa 35 ml), unter N2 verschlossen und 48 h in ein 50° warmes
Wasserbad eingehängt. Es werden harte, spröde Kunststoffplatten erhalten, die in einer Schlagmühle
vorzerkleinert werden. Anschließend wird das Granulat bei 1 -2 mm Druck 5 h lang auf 120°
erwärmt, um das nicht polymerisierte Rest-Monomere abzutrennen. Das entmonomerisierte Granulat
wird in einer Mühle weiter auf eine Korngröße <0,l mm gemahlen, in 500 Gewichtsteilen 0,5 N
Natronlauge eingetragen, bei 20° mit einem schnellaufenden Rührer eine Stunde lang gemischt,
wobei die Carbonat- und Acetyl-Gruppen verseift werden. Das wasserunlösliche CP-VinylenglykoI/Vinylalkohol
wird abgesaugt, gut mit Wasser von anorganische Salzen freigewaschen und gefriergetrocknet
Ausbeute: 4,7 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol
mit einer spezifischen Oberfläche gemessen nach BET von 34 m2 g-·.
b) Wie unter 1.) a) beschrieben, nur daß auf 7 Gewichtsteile Vinylencarbonat 3 Gewichtsteile
Vinylacetat eingesetzt werden.
Ausbeute: 4,1 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol
mit einer spezifischen Oberfläche des gefriergetrockneten Polymerpulvers von
c) Vergleichsversuch wie unter 1.) a) beschrieben, nur daß 10 Gewichtsteile Vinylencarbonat und kein
Comonomer eingesetzt werden.
Ausbeute: 4,7 Gewichtsteile Homopolymerisat-Vinylenglykol mit einer spezifischen Oberfläche des gefriergetrockneten Polymerpulvers von 204 m2 g-'.
Ausbeute: 4,7 Gewichtsteile Homopolymerisat-Vinylenglykol mit einer spezifischen Oberfläche des gefriergetrockneten Polymerpulvers von 204 m2 g-'.
2.) Copolymerisat-Vinylenglykol/ Vinylglycidyläther
Ein Gemisch von 7 Gewichtsteilen Vinylencarbonat, 3 j Gewichtsteilen Vinylglycidyläther und 0,1 Gewichtsteil
Azobisisobutyronitril wird wie unter 1.) a) beschrieben in flachen Aluminiumtuben unter N2 3 Tage auf 50°
erwärmt. Die erhaltenen Kunststoffplatten werden wie unter 1.) a) beschrieben zerkleinert, entmonomerisiert,
auf eine Korngröße <0,1 mm gemahlen, in 500 Gewichtsteilen eiskalter, 0,5 η NaOH mit einem
schnellaufenden Rührer 30 Minuten suspendiert, anschließend das verseifte Polymere sofort abzentrifugiert,
in Eiswasser aufgeschlämmt, unter Eiskühlung mit
r> 2 η H2SO4 auf pH 7 neutralisiert, abgesaugt, mit
Eiswasser ausgewaschen und gefriergetrocknet. Ausbeute: 3,9 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol (Vinylglycidyläther
enthaltend 1,3 Milliäquivalenten Oxirangruppen/g (bestimmt nach: »Praktikum der makro-
2» molekularen organischen Chemie«, S. 221, von Braun, D., Cherdron, HM Kern, W., Müthig Verlag, Heidelberg
1966).
3.) Aminosubstituierte Copolymerisat-,Γ)
Trägermaterial
3,9 Gewichtsteile CP-Vinylglykol/Vinylglycidyläther
(aus Beispiel 2.)) werden mit einem Ultra-Turrax-Rührer in 100 Gewichtsteilen H2O suspendiert und mit 10 ml
30%igem Ammoniak versetzt. Mit einem kleinen
j» Magnetrührer wird anschließend noch 10 h bei 50°
gerührt, schließlich abgesaugt und gut mit Wasser ausgewaschen und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 3,5 Gewichtsteile Copolymerisat-Trägermaterial
enthaltend 0,9 m äquivalente Aminogruppen
j-, pro Gramm, in Form von 3-Amino-2-hydroxy-propyl-Gruppen
(aus der Umsetzung von Ammoniak mit Glycidylgruppen entstanden).
4.) CP-Vinylenglykol/Arylsäure
4(i 9 Gewichtsteile Vinylencarbonat, 1 Gewichtsteil
Acrylsäureäthylester und 0,05 Gewichtsteile Azobisisobutyronitril werden unter N2 wie bei Beispiel 1.) a)
polymerisiert, zerkleinert, entmonomerisiert und auf eine Korngröße <0,l mm gemahlen, verseift, abgej
saugt, ausgewaschen und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 5,0 Gewichtsteile hydrophiles Polymerpulver, enthaltend 4,1 Milliäquivalente Carboxylgruppen pro
Gramm Träger mit einer spezifischen Oberfläche nach BET von 27,2 m2g-'.
5.) ω-Aminohexyl-Gruppen-substituiertes
Poly-Vinylglykol
5 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol/Acrylsäure aus
Beispiel 4.) werden mit dem Ultra-Turrax in 100 ml H2O
« suspendiert, auf 5° gekühlt, mit 2,5 g N-Cyclohexyl-N'-iN-methylmorpholinoJ-äthylJ-carbodiimido-
p-toluol-sulfonat versetzt, 30 Minuten bei pH 5 und 5°
gerührt, abfiltriert und schnell mit Eiswasser gewaschen.
Der aktivierte Träger wird anschließend sofort in eine
bo mit 2 η HCl auf pH 7,5 gestellte und auf 5° gekühlte
Lösung von 5 g Hexamethylendiamin in 100 ml Wasser suspendiert und noch weitere 24 Stunden unter diesen
Bedingungen mit einem Magnetrührer gerührt, abgesaugt,
gut mit Wasser ausgewaschen und gefriergetrocknet
Ausbeute: 4,5 Gewichtsteile ω-Aminohexyl-Gruppen-substituiertes
Poly-Vinylenglykol mit 0,7 Milliäquivalenten
Aminogruppen pro Gramm Träger.
6.) Umsetzung von CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol
aus Beispiel 1.) a) mit einer spezifischen Oberfläche nach BET von 34 m2 g-'
a) mit Epichlorhydrin
50 g eines CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol, hergestellt nach Beispiel 1.) a) werden in 1 Liter 2 η
NaOH suspendiert, mit 250 ml Epichlorhydrin versetzt und 2 Stunden bei 55-60° gerührt. Der
pH-Wert der Suspension sinkt nach kurzer Zeit auf 10—11. Durch Zugabe von NaOH wird noch 1
Stunde dieser pH-Wert gehalten. Nach 2 Stunden Reaktionszeit wird der Feststoff abgesaugt, mit
Wasser, Aceton und zum Schluß wieder mit Wasser gewaschen.
b) mit Hexamethylendiamin
50 g Hexamethylendiamin werden in 1,51 Wasser gelöst und mit HCl bis pH 10 versetzt. Zu der
Lösung wird das nach 6.) a) aktivierte CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol gegeben und bei 50 — 55°
6 Stunden gerührt. Danach wird das Produkt abgesaugt und mit Wasser frei von Hexamethylendiamin
gewaschen.
c) mit l-Aminobenzol-'l-ß-hydroxyäthylsulfonschwefelsäureester
Das unter Beispiel 6.) b) erhaltene Produkt wird mit 50 g l-Aminobenzol-4-jJ-hydroxyäthylsulfonschwefelsäureester
bei 55° und pH 10 eine Stunde lang gerührt. Anschließend wird der Feststoff abfütriert, mit Wasser, Aceton und wieder mit
Wasser gewaschen.
d) Diazotierung
10 g des unter Beispiel 6.) c) erhaltenen Produktes
werden auf einer Nutsche mit 200 ml η HCl gewaschen und danach in 300 ml 0,5 η HCl
suspendiert Die Suspension wird unter Rühren mit 0,1 η NaNO2-Lösung bei 0-4° versetzt, bis bei der
Diazotierung mit KJ-Stärkepapier ein geringer Nitrit-Überschuß festzustellen ist. Nach 10 Min.
wird über eine Nutsche abfiltriert und der Rückstand mit Eiswasser und anschließend mit
0,15 M Natriumphosphat-Puffer pH 7,5 von 0-4° gewaschen.
e) Kovalente Bindung mit Protein
0,8 g Albumin werden in 350 ml Phosphatpuffer pH 7,5 gelöst auf 4° abgekühlt und das unter 6.) d)
hergestellte Produkt zugegeben. Die Suspension wird 20 Stunden bei 4° gerührt danach abfiltriert
und der Feststoff mit 1 M NaCl und phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) (wäßrige
0,9%ige NaCl-Lösung mit einem Gehalt an 1/15MoI Na2HPO4-KH2PO4-Puffer von pH 7,2)
gewaschen.
Filtrat und Waschlauge werden nach der Methode der radialen Immundiffusion auf Albumin untersucht
Es werden 60 mg Albumin an 1 g des so hergestellten Trägers gebunden.
7.) Umsetzung von CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol aus Beispiel 1.) b) mit einer spezifischen
Oberfläche nach BET von 62,5 m2 g-'
Nach analogen Umsetzungen wie unter 6.) a) bis e) beschrieben können 1 g aktivierten Träger 80 mg
Albumin quantitativ gebunden werden.
8.) Umsetzung von Homopolymerisat-Vinylenglykol aus Beispiel 1.) c) mit einer spezifischen
Oberfläche nach BET von 20,5 m2 g-'
Nach analogen Umsetzungen wie unter 6.) a) bis e) beschrieben können an 1 g aktivierten Träger 45 mg
Albumin quantitativ gebunden werden.
9.)ü>-Aminohexylgruppen-substituiertes
Vinylenglykol(Vinylpyrrolidon-Copolymerisat
In 9 Gewichtsteilen Vinylencarbonat und 1 Gewichtsteil Vinylpyrrolidon werden 0,05 Gewichtsteilen Azobisisobutyrolnitril
unter Stickstoff gelöst und analog Beispiel 1.) a) polymerisiert und aufgearbeitet.
Nach dem Entmonomerisieren wird das Granulat zu einer 12gewichtsprozentigen Dimethylform-
amid-Lösung gelöst, und mit einem Druck von 15 Atü wird diese Lösung in ein Methanol-Fallbad hineingedüst.
Man erhält einen feinfaserigen Niederschlag Vinylencarbonat/Vinylpyrrol idon-Copolymerisat, der
abgesaugt, mit Methanol nachgewaschen und in 200 Gewichtsteilen Methanol resuspendiert wird. Es werden
6 Gewichtsteile Hexamethylendiamin, gelöst in 50 Gewichtsteilen Methanol, zugegeben, die Suspension 2
Tage bei Raumtemperatur gerührt, abgesaugt und mit Methanol ausgewaschen. Der gewaschene Filterrückstand
wird jetzt in einer Lösung von 10 Gewichtsteilen Natriummethylat in 300 Gewichtsteilen 96%igem
Methanol 4 Tage bei Raumtemperatur suspendiert, mit Methanol und dann sehr intensiv mit Wasser ausgewaschen
und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 5,0 Gewichtsteile eines über Urethan-Bindungen mit ω-Aminohexyl-Gruppen substituierten VinylglykoJ/Vinylpyrrolidon-Copolymerisats enthaltend 1,6 m Äquivalent NH2-Grippen/g Träger.
Ausbeute: 5,0 Gewichtsteile eines über Urethan-Bindungen mit ω-Aminohexyl-Gruppen substituierten VinylglykoJ/Vinylpyrrolidon-Copolymerisats enthaltend 1,6 m Äquivalent NH2-Grippen/g Träger.
10.) Bindung von IgG an ω-Aminohexyl-Gruppensubstituiertes
Copolymerisat aus Beispiel 9.) mit Hilfe von Bernsteinsäureanhydrid und
wasserlöslichen Carbodiimid
5 Gewichtsteile von nach Beispiel 9.) hergestelltem ω-Aminohexylsubstituierten Träger werden bei 10° und
pH 6 mit 2,5 Gewichtsteilen Bernsteinsäureanhydrid, die in 200 Gewichtsteilen Wasser suspendiert sind, 4
•45 Stunden succinyliert. Der pH-Wert wird mit 2 η NaOH
einreguliert Nadti der Waschung des Feststoffes mit
Wasser wird das Produkt mit 1,25 Gewichtsteilen N-Cyclohexyl-N'-iN-methymorpholinoJ-äthylJ-carbodiimid-p-toluol-sulfonat
bei pH 5 und 5° 30 Min. gerührt abfiltriert und schnell mit Eiswasser gewaschen.
0,5 Gewichtsteile IgG werden in 150 Gewichtsteilen Phosphat-Puffer pH 7,5 gelöst und mit dem aktivierten
Träger 24 Stunden bei 4° gerührt Nach Filtration wird das Produkt mit 1 M Kochsalz und mit PBS gewaschen.
An 1 g des Trägers werden 75 mg IgG kovalent gebunden.
11.) Copolymerisat- Vinylenglykol Diäthylenglykoldivinyläther
In 9 Gewichtsteilen Vinylencarbonat und 1 Gewichtsteil Diäthylenglykoldivinyläther wird 0,1 Gewichtsteil
Azobisisobutyrolnitril unter Stickstoff gelöst und wie unter 1.) a) beschrieben in flachen Aluminiumtuben
unter N2 3 Tage auf 50° erwärmt und polymerisiert Nach Aufarbeitung und Verseifung wie unter 1.) a)
beschrieben werden 3,5 Gewichtsteilen CP-Vinylenglykol/Diäthylenglykoldivinyläther
erhalten.
12.) Co polymerisat- Vinylen »lykol/N-Acryloylaminoacetaldehyddimethylacetal
a) In 9 Gewichtsteilen Vinylencarbonat und 1 Gewichtsteil N-Acyloylaminoacetaldchyddimethylacetal
werden 0,05 Gewichtsteile Azolisisobutyronitril unter Stickstoff gelöst. Das Monomerengemisch
wird wie unter 1.) a) beschrieben polymerisiert, aufgearbeitet und verseift zu 4,1
Gewichtsteilen N-Acryloylaminoacetaldehyddimethylacetal/Vinylenglykol-Copolymer.
10 Gewichtsteilen N-Acryloylaminoacetaldehyddi-
10 Gewichtsteilen N-Acryloylaminoacetaldehyddi-
methylacetal/VinylenglykoI-Copolymere wurden in 100 Gewichtsteilen 1N HCl 4-5 Stunden
gerührt Der aktivierte Träger wurde mit Wasser und Phosphatpuffer pH 7,5 gewaschen,
b) 0,5 g Albumin wurden in 200 ml PBS gelöst und mit dem unter a) hergestellten Produkt 14 Stunden bei 4° gerührt Nach Filtration wurde das trägergebundene Protein mit 1 M Kochsalz und mit PBS gewaschen.
b) 0,5 g Albumin wurden in 200 ml PBS gelöst und mit dem unter a) hergestellten Produkt 14 Stunden bei 4° gerührt Nach Filtration wurde das trägergebundene Protein mit 1 M Kochsalz und mit PBS gewaschen.
1 g des so hergestellten Trägers bindet 40 mg Albumin.
030 123/230
Claims (5)
1. Verbindung aus einem Copolymeren des Vinylenglykols und einer daran chemisch gebundenen
biologisch aktiven Substanz, worin nur ein Teil der aktiven Gruppen der Vinylenglykol-Einheitcn
des Polymeren an die biologisch aktive Substanz gebunden ist und der Rest als freie Hydroxylgruppen
vorliegt
2. Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Copolymere mindestens
55% Monomereneinheiten des Vinylenglycols enthält und höchstens 45% Monomereneinheiten
mindestens einer Verbindung der allgemeinen Formeln:
H3C== C
H2C = C
COOR3
R,
O —CO-CH3
2r>
H2C = C
Cl
R,
R,
H2C =
•Γι
H2C = C
Ri
H2C = C
H2C = C
(OCH2-CHj)„-O-CH =
<
R1
/
H,C = C CH2
H,C = C CH2
N (CHj)n
H2C=C
(CHj)0-CH CH2
H2C =
O — CH CH2
Ri
H2C = C
CH-CH2
O O
in denen Rt Wasserstoff, Methyl, Äthyl, R3 Methyl,
Äthyl, Propyl und η eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten.
3. Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biologisch aktive Substanz
ein Enzym, Aktivator, Inhibitor, Antigen oder Antikörper, ein Plasmaprotein, eine Blutgruppensubstanz,
ein Phythämagglutinin, ein Antibiotikum, Vitamin oder Hormon, ein Peptid oder eine
Aminosäure, ein natürlicher oder synthetisch hergestellter Effektor ist.
4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
man
(A) ein Copolymeres des Vinylcarbonats mit einer biologisch aktiven Substanz umsetzt und danach
die noch vorhandenen Cyclocarbonatgruppen in Hydroxygruppen überführt oder
(B) die Cyclocarbonatgruppen eines Copolymeren des Vinylencarbonats in Hydroxygruppen überführt
und
(a) im Copolymerisat vorhandene oder in dieses eingeführte elektrophile Gruppen mit einer
biologisch aktiven Substanz umsetzt oder
(b) diese Hydroxygruppen
(1) entweder zuerst mit einer elektrophile Gruppen enthaltenden Verbindung und
sodann mit einer biologisch aktiven Substanz
(2) oder unmittelbar mit einer elektrophilen Gruppen tragenden biologisch aktiven
Substanz umsetzt.
5. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 zur Affinitätschromatographie,,zur Durchführung
von Immunreaktionen oder zur Durchführung von Enzymreaktionen.
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NL7612771A NL7612771A (nl) | 1975-11-22 | 1976-11-17 | Biologisch actieve verbindingen en werkwijze voor de bereiding daarvan. |
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Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4210722A (en) * | 1977-11-14 | 1980-07-01 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Protein immobilizer |
DE2757206A1 (de) * | 1977-12-22 | 1979-07-05 | Basf Ag | Polyamidacetale |
GB2043996B (en) * | 1978-12-27 | 1983-09-07 | Nihon Dempa Kogyo Co | Thickness shear quartz crystal oscillator |
FR2450263A1 (fr) * | 1979-02-28 | 1980-09-26 | Dow Chemical Co | Procede pour coupler une proteine sur un latex portant des groupes epoxyde et produits obtenus par ce procede |
EP0015473A1 (de) * | 1979-02-28 | 1980-09-17 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Verfahren zum Immobilisieren von Zellen |
DE3145082A1 (de) * | 1981-11-13 | 1983-05-19 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "ein latex, biologisch aktive latexkonjugate und verfahren zu ihrer herstellung" |
JPS58209984A (ja) * | 1982-05-28 | 1983-12-07 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 粒子状重合体よりなる担体 |
DE3243591A1 (de) * | 1982-11-25 | 1984-05-30 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Vinylencarbonat-polymerysate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
DE3344912A1 (de) * | 1983-12-13 | 1985-06-20 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Vernetzte polymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
SE8401437D0 (sv) * | 1984-03-14 | 1984-03-14 | Sven Gothe | Ytmodifierade plastytor och dess tillempningar for immunoassays (ia) |
DE3413904A1 (de) * | 1984-04-13 | 1985-10-24 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Polymerisate auf basis von polyvinylencarbonat und/oder polyhydroxymethylen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
GB8423228D0 (en) * | 1984-09-14 | 1984-10-17 | Unilever Plc | Specific binding materials |
US4780409A (en) * | 1985-05-02 | 1988-10-25 | Genetic Systems Corporation | Thermally induced phase separation immunoassay |
DE3637421C1 (de) * | 1986-11-03 | 1987-10-29 | Nerbe Plus Ges Fuer Medizinisc | Reaktionsgefaess fuer die Blutgerinnungsreaktion |
DE3811042A1 (de) * | 1988-03-31 | 1989-10-19 | Merck Patent Gmbh | Ionenaustauscher |
DE19715504C2 (de) | 1997-04-14 | 2000-10-26 | Max Planck Gesellschaft | PMMA-Membranen mit Polyethylenglykol-gekoppelten Wirksubstanzen |
JP2001247738A (ja) * | 2000-03-06 | 2001-09-11 | Unitika Chem Co Ltd | ポリビニルアルコール系樹脂組成物およびそれを主成分とする紙コート剤 |
JP6405669B2 (ja) * | 2014-03-31 | 2018-10-17 | 東ソー株式会社 | 新規重合体、およびそれを有する細胞培養基材 |
CN108264604B (zh) * | 2016-12-30 | 2020-08-11 | 北京爱普聚合科技有限公司 | 一种干法压裂液减阻增稠剂及其制备方法 |
EP3502274A1 (de) * | 2017-12-22 | 2019-06-26 | Attomol GmbH | Probenträger und verfahren zu dessen herstellung |
CN110504452B (zh) * | 2019-09-04 | 2022-06-21 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高剥离强度的聚合物粘结剂及其在二次锂电池中的应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE810605A (fr) * | 1973-03-01 | 1974-05-29 | Enzymes et autres proteines liees a des supports polymeriques contenant des unites de carbonate de vinylene | |
ES437153A1 (es) * | 1974-05-06 | 1977-04-16 | Marburgnlahn | Procedimiento para la preparacion de un compuesto biologica-mente activo a base de poli(hidroximetileno) o poli(carbona-to de vinileno). |
-
1975
- 1975-11-22 DE DE2552510A patent/DE2552510C3/de not_active Expired
-
1976
- 1976-11-16 ES ES453362A patent/ES453362A1/es not_active Expired
- 1976-11-17 NL NL7612771A patent/NL7612771A/xx not_active Application Discontinuation
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- 1976-11-18 CH CH1453676A patent/CH636628A5/de not_active IP Right Cessation
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