JPS58209984A - 粒子状重合体よりなる担体 - Google Patents

粒子状重合体よりなる担体

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JPS58209984A
JPS58209984A JP57089707A JP8970782A JPS58209984A JP S58209984 A JPS58209984 A JP S58209984A JP 57089707 A JP57089707 A JP 57089707A JP 8970782 A JP8970782 A JP 8970782A JP S58209984 A JPS58209984 A JP S58209984A
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    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12N11/082Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫反応性物質、酵素、細胞、細胞識別性物質
などの生物学的物質を担持するに好適な担体に関する。
抗体または抗原などの免疫反応性物質を担体に担持し、
免疫反応によって対応する抗原まだは抗体などの免疫反
応性物質を検出測定することは、臨床検査の重要な手段
となっている。また、特定の細胞と選択的に結合する物
質、すなわち細胞識別性物質を粒子状担体に担持して、
それに対応する細胞を識別、分離をすることもしばしば
行なわれている。さらに酵素を粒子状担体に担持して酵
素反応を行なったり、細胞を粒子状担体に担持して、粒
子状担体表面を細胞培養床として細胞を培養することも
よく行なわれている技術である。
このような目的に使用される粒子状担体としては、従来
、人、羊、ニワトリ、ワニなどの赤血球や、ポリスチレ
ン、ヌチレンー(メタ)アクリル酸共重合体などの重合
体の微粒子が用いられてきた。例えば免疫反応性物質を
担持した担体の液体媒体分散液(以下このものを感作ラ
テツクスという)を用いて免疫反応を行なうと感作ラテ
ツクスの状態変化、−すなわち感作ラテツクスの凝集状
態、沈降伏態あるいは分散状態などを観測することによ
り、対応する免疫反応性物質の存在を測定することがで
きる。
また、エンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセ
イなどのように標識化被検出物質を検液に加えておけば
粒子を分離することにより粒子と反応した被゛検出物質
の量を測定することができる。さらに細胞に抗原性基ま
・、たけ抗体性基がある場合、担体にこの抗原性基まだ
は抗体性基に対応する抗体または抗原を担持しておけば
その細胞のみを選択的に捕集することができる。
これらの方法において生物学的物質などを担持する粒子
状担体に要求されるのけ非特異的反応、非特異的凝集な
どを起こさず安定なこと、粒子状担体を液体媒体から容
易に分離できること、まだ感作ラテツクスとして被検出
物質と反応することにょる感作ラテツクスの状態変化を
簡便に検出測定できることなどである。
赤血球からなる担体を用いた感作ラテツクスは被検出物
質と反応することによっては比較的短時間で感作ラテツ
クスの状態変化を観測しやすいため、スライド法、マイ
クロタイター法などの簡便な検出測定方法における感作
ラテツクスとして使用されてきたが赤血球奪用いるため
忙感作ラテックスの品質のバラツキが大きいこと、非特
異的凝集が起こり易いこと、保存が困難であることなど
の理由により、安定な担体への変換が求められている。
このためにポリスチレンなどの重合体の微粒子が、安定
性、品質の一定性が優れているとの理由によって赤血球
からなる担体の代りに担体として免疫反応性物質などを
物理的に吸着させて、あるいは化学的に結合させて担持
し、使用されている。
しかしポリスチレンなどの重合体からなる担体は、感作
ラテツクスとして被検出物質を凝集状態や沈降伏態の勧
察により、検出測定しようとすると数時間から数十時間
と長時間を要するという欠点がある。
本発明の目的は赤血球からなる担体を用いた感作ラテツ
クスのように被検出物質との反応による状態変化が観測
しやすく、ポリスチレンなどの重合体からなる担体のよ
うに安定性及び品質の一定性を兼ね備えた特定の重合体
粒子よりなる生物学的物質などを担持するに好適な担体
を提供することにある。
本発明に従って、 一般式(I) (式中R1およびR1は 同−又は異なり、水素原子又
は低級アルキル基、R3は炭素数2または3の直鎖又は
分枝鎖のアルキレン基であり、ヒドロキシル基で置換さ
れていてもよく、Xは同−又は異なるハロケ゛ン原子で
あり、mは0または1〜10の整数であり、nは1〜5
の整数を示す) で表わされる単量体又はこれらの単量体と共重合可能な
他の単量体とを(共)重合して得られる重合体粒子より
なる担体が提供される。
本発明に用いられる一般式(I)で表わされる単量体の
R1およびR2としては水素原子まだはメチル基が、R
3としてはエチレン基まだはゾロピレン基が好ましく、
またXとしては塩素原子または臭素原子が、mとしては
0また1が、nとしては3〜5が好ましい一般式(I)
で表わされる単量体の具体例としてVi(メタ)アクリ
ル酸モノフルオロフェニル、(メタ)アクリル酸モノク
ロロフェニル、(メタ)アクリル酸トリクロロフェニル
、(メタ)アクリル酸ペンタクロロフェニル、(メタ)
アクリル酸モノブロモフェニル、(メタ−)アクリル酸
トリブロモフェニル、(メタ)アクリル酸モノイオドフ
ェニル、(メタ)アクリル酸ペンタクロロフェニル、(
メタ)アクリル酸被ンタブロモフェニル、(メタ)アク
リル酸−2−(1−リプロモフエノキシ)エチル、(メ
タ)アクリル酸−2−()リグロモフエノキシエトキシ
)エチル、(メタ)アクリル酸−2−(−eンタクロロ
フエノキシ)プロピル、(メタ)アクリル酸−1−(ト
リブロモフェノキシ)−2−ヒドロキシエチルなどを挙
げることができる。
これらの単量体は他の単量体と共に共重合することによ
り得られる重合体粒子表面の親水度、疎水度、官能度、
電荷の程度などの担体としての特性を変化させ、また得
られる重合体粒子の比重を調整することができる。
上記他の単量体としては例えばスチレン、クロルスチレ
ン、α−メチルスチレン、ジビニルベンゼン、スチレン
スルホン酸すlJウム、(メタ)アクリル酸、(メタ)
アクリル酸メチル、(メタ)アクリル酸エチル、(メタ
)アクリル酸−2−ヒドロキシエチル、(メタ)アクリ
ル酸グリシジル、エチレングリコール−ジー(メタ)ア
クリル酸エステル、(メタ)アクリロニトリル、(メタ
)アクロレイン、(メタ)アクリルアミド、N−メチロ
ール−(メタ)アクリルアミド、メチレンビヌ(メタ)
アクリルアミド、ブタジェン、イソプレン、酢酸ビニル
、ビニルピリジン、N−ビニルピロリドン、塩化ビニル
、塩化ビニリデン、臭化ビニルなどの芳香族ビニル化合
物、α、β−不飽和カルボジ酸まだはそのエステル類も
しくは了ミド類、α、β−不飽和二トリル化合物、ハロ
ダン化ビニル化合物、共役ジエン化合物、低級脂肪酸ビ
ニルエステル類などを挙けることができる。   ゛本
発明の重合体を得るだめの重合方法としては例えばラジ
カル重合法、具体的には乳化重合法、乳化剤を使用しな
い乳化重合法(ソープフリー重合法)、懸濁−合法、溶
液重合法、溶液沈殿重合法などをあげることができるが
、得られる重合体が、けじめから微粒子の形で得られる
こと、きよう雑物の除去が容易であることなどから、ソ
ープフリー重合法まだは溶液沈殿重合法が有利である、 ソープフリー重合法では単量体の添加方法、単量体の種
類、量、重合開始剤の量などを変えることにより、例え
ば0.05〜1μmの範囲で粒径の調整されだ粒径分布
の狭い球形の形状が一定な重合体粒子を得ることができ
る。また、溶液沈殿重合法では溶媒の種類、量などを変
えることにより、例えば0.1〜10μmの範囲の粒径
の重合体粒子を得ることができる。
この場合に使用する溶媒は、低級アルコール、エーテル
、ケトン、ハロダン化炭化水素などから、単量体は溶解
するが、重合体は溶解しない溶媒が選ばれるが、単量体
の溶解性は厳密なものでなく、熱時溶解すればよいし、
また、スチレン−スルホン酸ナトリウムなどイオン性単
量体は溶媒に溶解しないまま重合させる場合がある。
特に好ましい重合方法は、−ト記ンープフリー重合法で
あり、得られる重合体粒子の粒径分布が狭いこと、得ら
れる重合体粒子の形状が一定であるなどの利点を有する
一般式(I)で表わされる単量体とこれと共重合可能な
単量体とを共重合する場合、一般式(Dで表わされる単
量体は10モル係以上、特に15モル係以上共重合する
ことが好せしい。
一般式(I)で表わされる単量体の共重合が少ない場合
は担体としての担持能力が低下し、また担体としての比
重を顕著に高めることができない。また得られる重合体
を本発明の担体として使用するうえにおいて好ましい粒
径は0、1〜10μm、特に好ましくは0.3〜1 t
mであり、好凍しい比重tj: 1.2〜29/ea 
、  %に好寸しくは1.3〜1.89.伺である。担
体の粒径まだは比重が小さすぎたり、大きすぎだりする
と感作ラテツクスとして使用する場合に被検出物質との
反応による状態変化を観測しにくくなる。
本発明の担体は感作ラテツクスとして使用するにさいし
、被検出物質との反応による状態変化を観測しやすく、
また安定性及び品質の一定性にすぐれ、かつ共重合する
単量体の種類によって担体の表面特性を変化させること
も容易である。
特に本発明の担体は生物学的物質などを担持する場合、
単位面積当りの担持量が優れており、しかも生物学的物
質などを担持しても非特異的凝集を起こしK<<かつ分
散安定性が優れたものである。
また本発明の担体は、比重が大きいので水などの液体媒
体からの分離が容易であり、感作ラテツクスなどとして
被検出物の検出、測定において沈降が伴なう場合極めて
有利である。例えば本発明の担尊を感作ラテツクスとし
てマイクロタイター法に用いれば従来、数時間から数十
時間、測定に要していたのが、数分から30分程度で終
了し、遠心分離などによる粒子の分離もきわめて短時間
ですむ、なお本発明の担体に担持される生物学的物質の
例としては、B型肝炎表面抗原(HBs抗原)、抗HB
g抗体、人じゆう電性ゴナドトロピン(HCG抗原)、
抗HCG抗体、イムノグロブリンG、マイコゾラズマ抗
原、核酸、核タン白、ニストロダン、抗ニストロダン抗
体すどの免疫反応性物質、グルコースイソメラーゼ、グ
ルコースオキシダーゼ、α−アミラーセ、ノソノソイン
、アミノアシラーゼ−1トノ酵素、胎児肺細胞、腎細胞
、繊維芽細胞などの生育に固体表面を必要とする細胞な
どが挙げられるが、目的に応じて適宜選択することがで
きる。
次に本発明を実施例によって説明する。
実施例1〔重合例〕 (1)  ンープフリー重合 アクリル酸ヘンタクロロフェニル      649ス
チレン            329メタクリル酸 
          32t−ドデシルメルカゾタン 
         1fの混合液を過硫醪力IJ 1 
tを含む80℃の水600d中に4時間かけて連続的に
滴下する。
滴下終了後さらに2時間かきまぜを続け、重合率98%
で平均粒子径04μmの重合体粒子をラテックス状で得
る。洗浄によって精製し、濃度を調整して、担体として
使用する。なお、との担体の上記単量体の共重合比t−
tアクリル酸ペンタクロロフェニル/スチレン/メタク
リル酸=0.3710.55 10.8(モル比)であ
った。
(2)沈殿重合 アクリル酸トリブロモフェニル       72tヌ
チレン             26tノビニルベン
ゼン         22をエタノール2tに溶解し
、了ゾビスインプチロニトリル2fを加え75℃で重合
すると、重合体が微粒子状に析出する。4時間かきまぜ
を続けると、重合率93%で平均粒子径1.0μmの重
合体粒子を分散液として得る。粒子は直ちに沈降するの
で、傾斜でエタノールから分離し、精製抜水分散液の形
で担体として使用する、なお、この担体の上記単量体の
共重合比はアクIJ/し酸トリブロモフェニル/スチレ
ン/ジビニルベンゼン= 0.4110.5510.0
3  (モル比)であった。
実施例2〔粒子の特性〕 実施例1で得た担体の特性を以Fのようにして調べる。
(1)沈降時間 担体濃度0.1重量%の水分散液を、マイクロタイター
用セルに入れ、丸いスポットが鮮明に観察できるまでの
時間を測定する。
(2)  タン白質吸着量 担体濃度0.5重量%の水分散液2 、tを500μt
/wtの牛血清γ−グロブリンのリン酸塩緩衝溶液2−
を加え、1時間混合する。次いで上澄液中のr−グロブ
リン濃度を分光光度計を用い280nm  の波長で測
定し、ブランクとの吸光度の差から担体の単位面積当り
のγ−グロブリン吸着量を求める。
(3)平均粒子径 電子顕微鏡により観察して求める。
(4)  比重 密度勾配管法により求める。
結果を表1に示す。
実施例3〔免疫反応性物質の測定〕 実施例1で得た担体を用いだ担体濃度0.25取敏チの
水分散液1−に熱変性イムノグロブリンGO,025■
を含むリン酸塩緩衝溶液1ゴを加え室温で1時間混合し
、熱変性イムノグロブリンGを担持する。これにリウマ
チ因子ポジティブの血清稀釈液を加え、かきまぜて、マ
イクロタイター用セルに入れる。
表2に示すように、本発明の担体を用いると、測定に要
する時間がいちぢるしく短縮され、感度も良好であるこ
とがわかる、

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 一般式(I) (式中R1およびR2は 同−又は異なり、水素原子又
    は低級アルキル基、R3は炭素数2″!。 たは3の直鎖又は分枝鎖のアルキレン基テアリ、ヒドロ
    キシル基で置換されていてもよく、Xは同−又は異なる
    ハロダン原子であり、mは0または1〜10の整数であ
    り、nは1〜5の整数を示す) で表わされる単量体又はこれらの単量体と共重合可能な
    他の単量体とを(共)重合して得られる重合体粒子より
    なる担体。
JP57089707A 1982-05-28 1982-05-28 粒子状重合体よりなる担体 Granted JPS58209984A (ja)

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