DE2548196A1

DE2548196A1 - Antigene auf basis von methaqualon- hapten sowie deren verwendung

Info

Publication number: DE2548196A1
Application number: DE19752548196
Authority: DE
Inventors: James Gordon Christenson
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1975-09-24
Filing date: 1975-10-28
Publication date: 1977-04-07
Also published as: DE2548196C2; US4107285A; US4053459A

Description

F. Hoffmann-La Koche 8- Co. Aktiengesellschaft, Basel / Schweiz

Antigene auf Basis von Methaqualon-Hapten sowie deren Verwendung.

Methaqualon ist ein Beruhigungs- und Schlafmittel und besitzt die chemische Bezeichnung 2-Methyl-3-o-tolyl-4(3H)-ehinazolinon. Es ist im Jahre 1965 in den Vereinigten Staaten von Nordamerika auf den Markt gebracht worden. Wie kürzlich berichtet worden ist, wird mit dieser Verbindung ein erheblicher Mißbrauch getrieben (Smith und Wesson in Ann.Rev.Pharmacol, H (1974), 513).

Methaqualon wird offensichtlich sehr stark im Körper abgebaut, so daß nur sehr geringe Mengen unverändertes Methaqualon im Urin aufgefunden werden. Die Stoffwechselprodukte sind größtenteils Grlucuronide von monohydroxylierten Derivaten (Bonnichsen und Mit-

· 7 0 9 8 1 A /. 1 0 2 7

arbeiter in Clin.Chlm.Acta 40 (1972), 309). Die Hydroxylierung tritt hauptsächlich in den 3- und 4-Stellungen und an der Methylgruppe des Tolyl-Hinges auf. Offensichtlich ist das Chinazolin-Ringsystem in den StoffWechselprodukten weitgehend unverändert.

Ein Antigen, das für Methaqualon und seine StoffWechselprodukte spezifische Antikörper zu erzeugen vermag, wenn es Wirtssäugern injiziert wird, wird in einfacher Weise aus dem bekannten 2-Methyl-3-(2-methyl-4-aminophenyl)-3,4-dihydro-4-ehinazolinon unter Bildung eines N-Carbonyl-(nieder)alkylen-carboxy-Analogon von Methaqualon hergestellt. Anschließend wird das Hapten an ein immunisierendes Trägermaterial mittels der Carboxy-Gruppe des Haptens und der reaktionsfähigen Amino- oder Hydroxylgruppen des Trägermaterials kovalent.gekoppelt. Außerdem wird ein radioaktiv markiertes Methaqualon-Derivat, das bei der Durchführung einer Untersuchung auf Unempfindlichkeit gegen Bestrahlung wertvoll ist, unter Verwendung des 4-Hydroxy-phenyl-Derivats (ein bekanntes StoffWechselprodukt des Methaqualons) als Substrat hergestellt.

Gegenstand vorliegender Erfindung sind einmal neue Antigene, die Methaqualon enthalten, das an ein immunisierendes Trägermaterial über ein Garbonyl-(nieder)alkylen-carboxy-Brückenglied gekoppelt ist. Derartige Antigene werden üblicherweise durch Umsetzen der primären Aminogruppe des 4-Aminophenyl-Methaqualonanalogons mit einer niederen Alkylendicarbonsäure oder deren aktivierten funktionellen Derivaten hergestellt, zum Beispiel dem Anhydrid, dem Mono-p-nitrophenyl-ester oder Carbonylhalogenid. Das erhaltene N-Carbonyl-(nieder)alkylen-earboxy-Derivat (Hapten) wird dann

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über die freie Oarboxy-Gruppe an die freien Amino- oder Hydroxylgruppen des immunisierenden Trägermaterials unter Bildung des gewünschten Antigens !covalent gekoppelt. Auf diese Weise werden die wichtigen entscheidenden als Antigen wirkenden Stellen am Chinazolin-Eingsystem des Methaqualone nicht beeinträchtigt.

Unter dem in der Beschreibung und den Ansprüchen verwendeten Ausdruck "immunisierendes Trägermaterial" wird eine solche Substanz verstanden, die die Eigenschaft besitzt, unabhängig einen immunisierenden Reiz beim Wirtstier hervorzurufen, wenn die Substanz injiziert wird, und die mittels einer kovalenten Bindung an das Methaqualon-Hapten gekoppelt werden kann. Beispiele geeigneter Trägermaterialien sind Proteine, natürliche oder synthetische polymere Verbindungen, wie Polypeptide, zum Beispiel Polylysin, ferner Polysaccharide und dergleichen. Für die Durchführung vorliegender Erfindung ist Protein ein besonders bevorzugtes Trägermaterial.

Die Art des bei der Herstellung des unmittelbaren Antigens eingesetzten Protein-Trägermaterials ist nicht in engen Grenzen kritisch. Beispiele von bevorzugten Proteinen, die bei der Durchführung vorliegender Erfindung wertvoll sind, sind Serumproteine, vorzugsweise solche von Säugern, zum Beispiel V -Globuline von Menschen und Rindern oder Serumalbumine von Menschen, Rindern und Kaninchen. Andere geeignete Proteine können je nach Empfehlung des Fachmanns eingesetzt werden. Gewöhnlich bevorzugt man die Verwendung von Proteinen, die gegenüber dem Wirtstier fremd sind, in dem das erhaltene Antigen Verwendung findet.

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•ν

Die erste Stufe bei der Herstellung des Antigens besteht darin, daß man 2-Methyl-3-(2-methyl-*4-aminophenyl)-3,4-dihydro-4-ehinazolinon mit einer niederen Alkylendicarbonsäure oder deren vorstehend genannten Derivaten umsetzt. Vorzugsweise ist der niedere Alkylen-Rest geradkettig und weist 1 bis 6 Kohlenstoffatome auf. Außerdem wird bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung das Anhydrid der Dicarbonsäure verwendet. Besonders bevorzugt ist Bernsteinsäureanhydrid.

Die Umsetzung zwischen der niederen Alkylendiearbonsäure oder deren Derivat und der 4-Aminophenyl-Verbindung kann in üblicher Weise durchgeführt werden. Zum Beispiel kann Bernsteinsäureanhydrid mit der 4-Aminophenyl-Verbindung in einem organischen Lösungsmittel, wie ^:einem aromatischen Kohlenwasserstoff, zum Beispiel Benzol,.Xylol oder Toluol, durch Erhitzen unter Rückfluß zur Erzeugung des N-Sucednamidsäure-Derivats umgesetzt werden.

Die Verwendung des Succdnamidsäure-Derivats ist bei vorliegender Erfindung besonders zweckmäßig. Andere Mittel zur Einführung der Brückenglieder zwischen den wichtigen entscheidenden Haptenen und dem immunisierenden Trägermaterial sind wohlbekannt. Beispielsweise würde eine Alkylierung des"Methaqualone nach Friedel-Crafts mit einem Halogenalkansäureester oder eine Alkylierung eines Alkylimetallsalzes eines phenolischen Methaqualon-Derivats mit einem Halogenalkansäureester nach einer Hydrolyse der Ester Verbindungen liefern, die mit den hier beschriebenen Haptenen vergleichbar sind. Eine andere Alternative besteht in der direkten Synthese des Methaqualon-Haptens aus N-Acetyl-anthranil-

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säure und einem Ester eines 4-(nieder)Alkylcarboxy-2-methylanilins mit anschließender Esterhydrolyse.

Vorzugsweise besitzen die erfindungsgemäß eingesetzten Brücken-

in der verbindenden Kette glieder 2 bis 7 Kohlenstoffatome /1 3s ist von Vorteil, daß die Brückenglieder in dem Methaqualon-Molekül den Tolyl-Ring in der p-Stellung zum tertiären Stickstoffatom substituieren.

Beispiele von hier als Haptene wertvollen Verbindungen sind 2-Methyl-3-/"2-methyl-4-(2-carboxyäthyl)-phenyl_7-3,4-dihydro- -4-chinazolinon und 2-Methyl-3-/~2-methyl-4-(2-carboxyäthoxy)- -phenyl_7-3,4-dihydro-4-chinazolinon.

Demgemäß werden ganz allgemein die Haptene vorliegender Erfindung so betrachtet, daß sie einen Methaqualon-Eest mit einem Brückenglied aufweisen, das an den Tolyl-Eing gebunden ist, wobei das Brückenglied aus einem Amino-carbonyl-alkylen-carboxy-, einem niederen Hydroxyalkylen-carboxy- oder einem niederen Alkylencarboxy-Eest besteht.

Die erhaltenen Haptene können an die immunisierende Trägermaterialien nach beliebigen und verschiedenen an sich bekannten Verfahren gekoppelt werden.

Eines dieser Verfahren sieht die Verwendung eines Kopplungsmittels, wie eines wasserlöslichen Carbodiimids, zum Beispiel 1-Athyl-3- -(3-dimethylaminopropyl)-earbodiimid, vor. Das erhaltene Antigen kann durch Abtrennen von nicht umgesetzten Ausgangssubstanzen und niedermolekularen Nebenprodukten nach üblichen Trennverfahren, wie einer Dialyse, gereinigt werden.

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Ein anderes bekanntes Verfahren besteht in der Verwendung eines gemischten Anhydrids. Bei diesem Verfahren werden niedere Trialkylamine, wie Triäthylamin, und niedere Alkylfluorformiate unter Bildung der gewünschten Reaktionslösung mit dem Hapten in einem cyclischen Äther, wie Dioxan, als lösungsmittel verwendet. Diese lösung wird dann zu einer wäßrigen lösung des immunisierenden Trägermaterials gegeben, die ebenfalls einen cyclischen Äther als lösungsmittel enthalten kann, um die löslichkeit des aktivierten Haptens zu verbessern. Diese Reaktion wird vorzugsweise bei Temperaturen unterhalb Raumtemperatur, das heißt bei etwa 8⁰C, durchgeführt. Für diese Reaktion ist ein basischer pH-V/ert, wie ein pH-Wert von etwa 9> erwünscht. Das Antigen kann, wie vorstehend angegeben, nach üblichen Verfahren gewonnen werden.

Die Kopplung des Methaqualon-Haptens mittels der Carbodiimid-Methode an Rinderserumalbumin als representatives immunisierendes Trägermaterial hat ergeben, daß etwa 18 bis 25 Moläquivalente auf ein Mol Protein kommen.

Das Antigen vorliegender Erfindung kann dann zur Herbeiführung einer Bildung von für Methaqualon und Methaqualon-Stoffwechselprodukte spezifischen Antikörpern im Serum der Wirtstiere durch Injizieren des Antigens in diese 7/irtstiere eingesetzt werden. Das gesammelte uerum kann als solches als methaqualon-spezifisches Antiserum verwendet werden, oder es können gegebenenfalls die Antikörper im Serum noch gereinigt werden, zum Beispiel durch Ausfällen mit einer neutralen Salzlösung mit anschließender Dialyse und Säulen-Chromatographie oder durch andere bekannte

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Maßnahmen«

Geeignete Wirtstiere zur Erzeugung von Antiserum gegen Methaqualon sind Säugetiere, wie Kaninchen, Pferde, Ziegen, Meerschweinchen, Hatten, Kühe, Schafe und dergleichen. Die erhaltenen Antikörper besitzen eine Vielzahl von aktiven Stellen, die selektiv mit Methaqualon, mit dem Methaqualon-Antigen vorliegender Erfindung oder mit nahe verwandten Derivaten des Methaqualons, wie den hauptsächlichen Stoffwechselprodukten des Methaqualone Komplexe zu bilden vermögen. ·

Die spezifischen Antikörper vorliegender Erfindung sind wertvoll als Eeagentien bei biochemischen Untersuchungen zur Bestimmung
des Vorliegens von Methaqualon und seinen Stoffwechselprodukten in biologischen Flüssigkeiten. Ein besonders bevorzugtes Untersuchungsverfahren ist das in der US-PS 3 709 868 beschriebene
Unempfindlichkeitsuntersuchungsverfahren. Bevorzugte markierte Methaqualon-Derivate zum Gebrauch bei diesen Unempfindlichkeitsuntersuchungen umfassen die mit Isotopen markierten Methaqualon-

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Derivate, insbesondere ^Jod-2-methyl-3-(2-methyl-4-hydroxy-

phenyl)-4(3H)-chinazolinon, sowie solche Methaqualone, die mit
einer Eletronenspinresonanzgruppe markiert sind. Beispiele von verschiedenen einsetzbaren mit Elektronenspinresonanzgruppen markierten Molekülen in biologischen Untersuchungen sind in den US-Patentschriften 3 453 288, 3 481 952 und 3 '507 876 aufgeführt.

Das Unempfindlichkeitsuntersuchungsverfahren mit radioaktiv markierten Verbindungen wird bevorzugt zur Bestimmung von Methaqualon und seinen Stoffwechselprodukten angewendet. Es ist ein empfindliches, einfaches, schnelles und reproduzierbares Verfahren«

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ΛΛ

Beispiel 1. Herstellung des Antigens.

Zu 100 mg Hinderserumalbumin ("kristallisiert"; 1,47 x 10 Mol) in 10 ml Wasser werden 29,8 mg (8 χ 10"⁵ Mol) N-/~3-Methyl-4- -(2-methyl-4-oxo-3 ^-dihydrochinäzolin-rJ-yl) -phenyl__7-suceinamidsäure in 0,5 ml N-Methyl-pyrrolidon gegeben. Die erhaltene Lösung wird mittels 0,1-n Salzsäure oder 0,1-n Natronlauge auf pH 5,5 eingestellt. Zu dieser Lösung werden 15,4 mg (8 χ 10 Mol) 1-Äthyl-3-(3-dimethylamino-propyl)-carbodiimid-hydroehlorid auf einmal unter Rühren mit einem magnetischen Rührer zugegeben. Diese Lösung wird 4 Stunden gerührt, währenddessen der pH-Wert mittels 0,1-n Salzsäure zwischen 5,5 und 6,0 gehalten wird. Dann läßt man das Reaktionsgemisch über Nacht bei 4°C stehen und dialysiert über Nacht gegen 1 Liter entsalztes ?/asser. Das Dialysat wird dann ausgetauscht, und die Dialyse wird mehrere Stunden fortgesetzt. Das gewünschte Antigen wird aus dem Dialysegefäß gewonnen.

Das Ausmaß einer Kopplung des Haptens bei 2 immunisierenden Präparaten beträgt 18 bis 25 Moläquivalente Methaqualon auf ein Mol Rinderserumalbumin.

Beispiel 2. ■ ·

Immunisierung und Blutentnahme.

Zur Immunisierung von Ziegen wird das dialysierte Antigen des Beispiels 1 mit phosphat-gepufferter physiologischer Kochsalzlösung auf eine Protein-Konzentration von annähernd 2 mg/ml verdünnt· Die verdünnte Antigenlösung wird danach mit dem gleichen Volumen Freund¹s Adjuvans emulgiert. Die ersten drei Imp-

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fungen (unter Verwendung des vollständigen Adjuvans) werden in wöchentlichen Abständen, die vierte nach weiteren drei Wochen und dann in monatlichen Abständen verabreicht (ab der vierten Impfung mit dem unvollständigen Adjuvans). Jede Impfung besteht aus zwei subkutanen Injektionen von jeweils 0,5 ml.

Nach zwei, drei und vier Wochen nach der ersten Impfung wird jeweils Blut entnommen. Nach fünf Wochen und danch in zweiwöchigen Abständen werden 300 ml Blut entnommen. Daraus wird nach Standardverfahren das Serum hergestellt.

Beispiel 3.

N-/^3-Methyl-4-(2-methyl-4-oxo-3,4-dihydrocMnazolin-3-yl)-phe-

nyl_7-succinamidsäure.

In einen mit einer Wasserfalle ausgerüsteten 1-Ltr.-Kolben werden unter Stickstoff 12,0 g (0,045 Mol) 2-Methyl-3-(2-methyl-3- -aminophenyl)-3j4-dihydro-4-chinazolinon und 300 ml Benzol gegeben. Nach dreistündigem Erhitzen unter Rückfluß haben sich Spuren Wasser in der Wasserfalle angesammelt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur werden 4,8 g (0,048 Hol) Bernsteinsäureanhydrid zugesetzt, und das G-emisch wird unter Rühren über Nacht unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen und Filtrieren wird der erhaltene Feststoff mit Benzol gewaschen und unter vermindertem Druck bei 50°0 getrocknet. Man erhält 13,1 g eines Peststoffes vom Schmelzpunkt 202,5 - 203,5⁰G (Zera). Der Feststoff wird danach 30 Minuten bei 60⁰O in 150 ml Wasser aufgeschlämmt, filtriert, mit wenig Wasser gewaschen und dann unter vermindertem Druck bei 50⁰G getrocknet. Anschließend v/ird der Feststoff 40 Minuten in 1 Liter Acetonitril unter Rückfluß erhitzt, auf Raum-

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temperatur abkühlen gelassen und filtriert. Man erhält nach dem Trocknen unter vermindertem Druck bei 50 G 9,1 g der in der Überschrift genannten Verbindung vom Fp. 228,5 - 229,5°C. Ausbeute:

55 Prozent der Theorie.	65	G	5	H	11	N
Analyse für C₂₀H₁QN^O.:	65	,75 io	5	,24 io	11	,50
berechnet:		,67 io		,11 io		,70
gefunden:
Beispiel 4.			125 Herstellung eines ^Jod-markierten Methaqualon-Derivats.

2-Methyl-3-(2-methyl-4-hydroxyphenyl)-4(3H)-chinazolinon wird in Dimethylsulfoxid gelöst, bis eine Konzentration von 2 mg/ml erreicht ist, und dann mit dem gleichen Volumen Wasser verdünnt.

125 Diese Lösung wird dann unter Verwendung von Na J und dem Natriumsalz des p-Toluolsulfonsäure-chloramins unter üblichen Bedingungen jodiert.

Untersuchungsverfahren.

Das Untersuchungsverfahren ist ähnlich dem, das bei dem "Abuscreen"-Untersuchungsverfahren mit radioaktiv markierten Verbindungen für Morphin angewendet wird. Die für die Untersuchung erforderliche Volumenmenge beträgt 0,1 ml. Für eine quantitative Bewertung werden Standardkurven in rechtwinklig zueinander angeordneten Koordinaten unter Verwendung von 1000, 500, 250, 100, 50, 25 und 10 ng Methaqualon je ml normalem menschlichen Urin vorbereitet.

Durchführung der Untersuchung.

Das Untersuchungsverfahren besteht im allgemeinen aus einem Vermischen einer Probe, die Methaqualon und/oder seine Stoffwechel-

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produkte enthält, mit einer bekannten Menge eines markierten Methaqualon-Derivats und einem methaqualon-selektiven Antikörper, Messen des Bindungsgrades des markierten Methaqualon-Derivats und Bestimmen der Menge des in dieser Probe vorliegenden Methaqualon und/oder seiner Stoffwechselprodukte durch Vergleich dieses Bindungsgrades gegen die Standardkurve, die durch Vermischen bekannter Mengen von Methaqualon und/oder seiner Stoff-Wechselprodukte mit festgelegten Mengen dieses markierten Methaqualon-Derivats und dieses Antikörpers und Bestimmen des Bindungsgrades für jede bekannte Menge Methaqualon und/oder seiner

erhalten worden ist./ StoffWechselproduktey. Für die Normierung wird Methaqualon trotz der Tatsache ausgewählt, daß sehr wenig dieses Arzneimittels per se im Urin ausgeschieden wird, und·zwar wegen der quantitativen und qualitativen Änderungen bei den Ausscheidungsproben der StoffWechselprodukte unter den Individuen. · Wegen dieser Änderungen ist es unwahrscheinlich, daß die Gültigkeit der Untersuchung durch Auswahl eines Stoffwechselproduktes oder einer bestimmten Kombination von Stoffwechselprodukten für die Normierung verbessert werden könnte. Die auf die genannte Weise erhaltenen Ergebnisse werden als "Methaqualon-Äquivalente" in ng je ml Urin augedrückt.

Methaqualon-Standardwerte werden durch Verdünnen einer 1 mg Methaqualon in 1. ml enthaltenden Lösung in 50 % Dimethylsulf oxid auf die erforderliche Konzentration mittels normalen menschlichen Urins-hergestellt (die erforderliche Mindestverdünnung ist 2000-fach, so daß die Menge des in den Standardproben vorhandenen Dimethylsulfoxids vernachlässigt werden kann)·

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«Τ

Aus der erhaltenen Standardkurve ist ersichtlich, daß die Untersuchung in einfacher Weise ' - Methaqualon-Mengen in der Größenordnung von 10 ng Methaqualon in 0,1 ml Urin (100 ng/ml) feststellen kann.

Absichtlich wird eine Studie durchgeführt, um die Durchführbarkeit der Methaqualon-Untersuchung unter praxisnahen Bedingungen zu prüfen. Gesunden männlichen und weiblichen Freiwilligen werden oral Einzeldosen von entweder Methaqualon oder eines von fünfzehn Arzneimitteln verabreicht, von denen man annimmt, daß sie aufgrund ihrer chemischen oder pharmakologischen Eigenschaften potentielle Eeaktibnspartner sein könnten. Die Gesamtmenge des ausgeschiedenen Urins wird fünf Tage lang in verschiedenen Zeitabständen gesammelt. Proben werden auf das Vorhandensein von Methaqualon, seiner Stoffwechselprodukte bzw. der anderen Eeaktionspartner untersucht. Die in der Tabelle I angegebenen Ergebnisse zeigen an, daß keine der Urinproben, die vor der Arzneimitteleinnahme oder nach der Einnahme eines anderen Arzneimittels als Methaqualon erhalten worden sind, einen höheren Wert als 39 ng/ml Methaqualon-lquivalente nennen. Die Urinproben von denjenigen Personen jedoch, die Methaqualon erhalten haben, zeigen einen höheren Wert als 500 ng/ml innerhalb der ersten Stunde nach der Arzneimitteleinnahme an und behalten diesen Wert während der Dauer des Experiments bei.

In der nachstehenden Tabelle I sind die Hethaqualon-Äquivalente (ng/ml) im Urin angegeben, der während des angegebenen Zeitintervalls (Stunden) gesammelt worden ist.

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	Bei spiel	Mittel	Dosis (mg)	0	7	0-1	TABELLE	I	8-12	12-24	24-48	48-72	72-96	96-120	I
	A	Methaqualon·	150	39	>500	1-4	4-8	>500	>500	>500	>500	>500	>500	I
	B	Methaqualon	150	8	>500	>500	>500	>500	>500	>500	>500	>500 *	>500
	C	Methaqualon^	300	5	>500	>500	>500 .	>500	>500	>500	>500 ·	>500	. >500
	D	Methaqualon	300	20	>500	>500	>500	>500	>500	>500	>500	>500	>500
	E	Methyprylon	300	0	0	>500	>500	12	10	0	0	0	7
	F	Methyprylon	300	11 9	• o	20	0	0	0	. 0	0	0	0	cn
	G H	AprobaΛital Aprobarbital	40 AO	17	7 11	0	0	·" "0 9	0 0	Ό 0	0	0	σ ο	op
70981	I	Phenobarbital Na-SaIz	64	0 .	0	υ 0 ·	"0· • 0	0 ·	0 .	0	1	0	6	CD CO
	J	Phenobarbital Na-SaIz , ·	.64	0	0	0	0	0	"0	0	10	. 3	11
co	K	Secobarbital Na-SaIz	100	0	' 0	0	0	0	22	20	.16 '	16	2
	L ι ,	Secobarbital Na-SaIz	100	15	0	0	0	0	0	0	17	0	0
	M	Glutethimidi	500	0	0	.0	0	24	14 ·	30	32	15-	3
	N	Glutethiroid	500	0	0	14	24	7	11	7	18	26	13
	0	Diplienylhydantoin Na-SaIz	100	0 .	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	P	Diphenylhydantoin Na-SaIz·	100	0	0	0	0	0	0	o'	0	2	17
	α '	PrJmadon·	250		0	0	5	0	0 "	12	0	0 .	0
				0	0

TABELLE.I (Fortsetzung)

	-α O	•	Mittel	Dosis (mg)	0 .	0-1	1-4	■ ■	8-12	12-24	24-48*	48-72	72-96	96-120	•	*	*
	co OO	Bei spiel	Primadon	250	0	0	1	4-8	15	. 0	0	0	6	3
	IA/ 1027	R .	Diazepam	10	0	0	0	0	0	0	0	0 ■	0	0
		S	Diazepam	10	4	0	0	0	0	• . ο	0	2	2	• 0		,
		T	Oxtriphyllini	200	3	0	0	0	0	0	0	0	4	0		cn
		U	Oxtriphyllim	200	1	0	0	0	0	5	0	4	1	0		■Ρ α?
		V	COffein -citra·* -	250	0	.0	0	0	0	0	' 0	0	, °	10.	196
		W	Cof fein·-τθ-itrat -\	250	4	0	0	0	. 1	3	10	10	6 ■, ■ /	5
		X	Thioridaziw·· Hydrochlorid Thioridazin-f Hydrochlorid ι	25" 25 325	15" 4 1	23 0 0	4· 0 0	1	10 8 2	11 2 4	11 ; 6 0	14 " 10 0	;13 14 1	11 14 • 0
	y ζ AA	öhlnia-sulrfiat	325	3	0	0	5 8 0	0	2	1	2	' 0	0
O	BB	lmipramin-r-HCl	25	3	- 4	2	3	4	-3	1	"-	-
Z	CC	Imipramin<—HCl	25	0	0	.0	4	0	0	0	2	3	• 0
	DD	Phenylbutazon'	100	0	0	0	0	, 0	"ι	1	1	0	0
Z co τα FTl	EE	Phenylbutazon«	100	0	0	0	Ό	3	0	3	1	■ 4	3
Ml O	FF-	Flurazepam-HCl Flurazepan-HCl .	30 30	0 0	0 0	0 0	1	0 ■ 0	^: ο 0	0 0	1 0	1 0	1 0
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Claims

Patent an spräche

1). Antigene, dadurch gekennzeichnet, daß sie im wesentlichen aus einem Methaqualon-Hapten mit einem Methaqualon-Rest bestehen, der mit seinem Tolyl-Ring an ein Brükkenglied eines Aminocarbonyl-alkylen-carboxy-, eines niederen Hydroxyalkylen-carboxy- oder eines niederen Alkylen-carboxy-Eestes mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen gebunden ist, wobei das Hapten mit der Carboxy-Gruppe des Brückengliedes kovalent an ein immunisierendes Trägermaterial gekoppelt ist.

2) Antigene nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch einen Gehalt an Rinderserumalbumin als immunisierendes Trägermaterial.

3) Antigene nach den Ansprüchen 1 oder 2, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem N-Garbonyl-(nieder) alkylen-carboxy-Derivat des 2-Methyl-2-(2-methyl-4-aminophenyl)-3,4-dihydro-4-chinazolinons.als Hapten. <

4) Antigene nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Carbonyl-(nieder)alkyle n-c arboxy-Rest die Succinyl-Gruppe ist.

5) Verwendung der Antigene nach den Ansprüchen 1 bis 4 zur Gewinnung von Antikörpern durch Impfen eines Wirtstieres mit den Antigenen, die im wesentlichen aus einem Methaqualon-Hapten mit einem Methaqualon-Rest bestehen, der mit seinem Tolyl-Ring an ein Brückenglied eines Aminocarbonyl-alkylen-carboxy-, eines nierderen Hydroxyalkylen-carboxy- oder eines niederen Alkylen-carboxy-Restes mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen gebunden ist, wobei das Hapten mit der Carboxy-Gruppe des Brückengliedes kovalent an ein

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immunisierendes Trägermaterial gekoppelt'ist.

6) Terwendung der Antigene zur Gewinnung von Antikörpern nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Hapten des Antigens ein N-Carbonyl-(nie der)alkylen-earboxy-Derivat des 2-Methyl-3- -(2-methyl-4-aminophenyl)-3^-dihydro-A-ehinazolinons ist.

7) Verwendung der Antigene zur Gewinnung von Antikörpern nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Carbonyl-(nieder)alkylen-carboxy-Rest die Suce:inyl-Gruppe ist.

8) . Verfahren zur Untersuchung auf Methaqualon und/oder seine Stoff Wechselprodukte in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Probe mit einer bekannten Menge eines markierten Methaqualon-Derivats und einem Antikörper,, der mit diesem Methaqualon und/oder seinen Stoffwechselprodukten und mit dem markierten Methaqualon-Derivat komplexiert ist, vermischt, den Bindungsgrad dieses markierten Methaqualon-Derivats mit dem Antikörper mißt und die in der Probe vorliegende Menge an Methaqualon und/oder seiner Stoffwechselprodukte durch Vergleich dieses Bindungsgrades mit einer Standardkurve bestimmt, die durch Vermischen bekannter Mengen Methaqualon und/oder seiner Stoffwechselprodukte mit festgesetzten Mengen des markierten Methaqualon-Derivats erhalten worden ist.

9) Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß man ein radioaktiv markiertes Methaqualon-Derivat verwendet.

10) Verfahren nach Anspruch 9> dadurch gekennzeichnet, daß man ^Jed-2-methyl-3-(2-methyl-4-hydroxyphenyl)-4(3H)-chinazolinon

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als radioaktiv markiertes Methaqualon-Derivat verwendet.

11) ¹²^Jod-2-methyl-3-(2-methyl-hydroxyphenyl)-4(3H)-ehinazolinon als Zwischenprodukt.

12) Methaqualon-Hapten mit einem Methaqualon-Rest, der mit seinem Tolyl-Ring an ein Brückenglied eines Aminocarbonyl-alkylencarboxy-, eines niederen Hydroxyalkylen-carboxy- oder eines niederen Alkylen-carboxy-Bestes mit 2 "bis 7 Kohlenstoffatomen gebunden ist, als Zwischenprodukt.

13) Hapten nach Anspruch 12, gekennzeichnet durch die Struktur N-/3-Methyl-4-(2-methyl-4-oxo-3,4-'dihydro-chinazolin-3-yl)~ -phenylZ-succsinamidsaure.

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