DE2518256B2

DE2518256B2 - Verfahren zur Herstellung von Pepüden

Info

Publication number: DE2518256B2
Application number: DE2518256A
Authority: DE
Inventors: Yoshikazu Tokio Isowa; Fukushima Koriyama; Katsumasa Kuroiwa; Takeshi Nagasawa; Koichi Narita
Original assignee: Nitto Boseki Co Ltd; Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Nitto Boseki Co Ltd; Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1974-04-24
Filing date: 1975-04-24
Publication date: 1980-03-13
Also published as: FR2268792A1; NL173183C; DE2518256C3; JPS50140686A; NL7504254A; FR2268792B1; JPS5443076B2; CA1046441A; DE2518256A1

Description

— A — B muß in der Formel (I) in der reaktiven Position vorliegen. Es können die verschiedensten Peptide eingesetzt werden, solange nur diese spezifische Partialstruktur vorliegt Die End-Gruppe der C-Komponente, d. h. die Aminogruppe in «-Position, muß durch eine Schutzgruppe für die Aminogruppe geschützt sein, z. B. durch eine Carbobenzoxygruppe (Z); eine substituierte Carbobenzoxygruppe, wie p-Methoxybenzyloxycarbonyl (pMZ); t-Butyloxycarbonyl (Boc) oder Tosyl (TOS) od. dgl.

Die Aminosäure oder das Peptid der Formel (II) (im folgenden als N-Komponente bezeichnet), welche bzw. welches als weiteres Ausgangsmatenal dient, muß in der reaktiven Position eine spezifische Aminosäure tragen, wie Phenylalanin, Leucin, Isoleucin, Tyrosin, S-Benzylcystein, O-Benzyl-serin, Tryptophan oder Methionin. Die endständige Carboxylgruppe der N-Komponente muß durch eine Schutzgruppe für die Carboxylgruppe geschützt sein, z. B. in Form einer Estergruppe (Methylester, Äthylester, Benzylester, t-Butylester oder p-Nitrobenzylester); in Form einer Amidgruppe oder einer substituierten Amidgruppe, wie der 2,4,6-Trimethylbenzylamidgruppe (TMB), der Hydrazidgruppe oder einem Derivat derselben. Die N-Komponente kann in freier Form eingesetzt werden oder als Salz (vom Typ des Hydrochlorids, des Hydrobromids, des Trifluoracetats, des p-Toluolsulfonats oder eines anderen anorganischen oder organischen Salzes).

Die N-Komponente und die C-Komponente können innerhalb des angegebenen Rahmens als Struktureinheiten des angestrebten Peptids ausgewählt werden. Die gewünschten Peptide können somit nach der Fragmentkondensationsmethode erhalten werden. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren können die beiden Komponenten (die C-Komponente und die N-Komponente) in äquivalenter Menge eingesetzt werden oder eine der Komponenten kann im Überschuß eingesetzt werden. Das Molverhältnis der N-Komponente zur C-Komponente liegt gewöhnlich im Bereich von 1 :5 bis etwa 5 :1 und vorzugsweise im Bereich von 1 :2 bis etwa 2 : 1.

Bei Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist es bevorzugt, die N-Komponente in einem alkalischen Medium aufzulösen, welches als Alkali z. B. ein Alkalimetallhydroxid oder ein Erdalkalimetallhydroxid enthalten kann. Es ist erforderlich, die Umsetzung in einer Pufferlösung bei einem pH von etwa 2 bis etwa 6 und bei einer Temperatur von etwa 20 bis etwa 50° C durchzuführen. Als Pufferlösungen kommen Zitronensäure-Pufferlösung, Michaelis-Pufferlösung, Mcllvaine-Pufferlösung oder andere Pufferlösungen für den pH-Bereich von 2 bis 6 in Frage. Bevorzugt ist ein pH-Bereich von etwa 3 bis etwa 5 und optimal ist ein pH-Wert von etwa 4. Wenn die Temperatur unterhalb 20° C liegt, so bedarf es bis zur Vervollständigung der Umsetzung einer langen Zeitdauer. Wenn die Temperatur oberhalb 50° C liegt, so ist die Aktivität des Pepsins merklich herabgesetzt, und die Ausbeute ist gering. Die bevorzugte Temperatur beträgt 30 bis 40° C. Das erfindungsgemäß eingesetzte Pepsin ist ein Verdauungsenzym vom Typ der Endopeptidasen. Pepsin mit einem Pepsintiter von 1:5000; 1:10 000 und 1 :60 000 kann leicht erhalten werden. Man kann auch Rohpepsin einsetzen, solange die Aktivität hoch ist. Pepsin wird in katalytischen Mengen eingesetzt. Vorzugsweise verwendet man 0,4 bis 400 mg Pepsin pro Immol der Ausgangsmaterialien. Die Umsetzung findet glatt in einem wäßrigen Medium statt oder in einem mit

Wasser mischbaren Medium, wie Methanol, Äthanol, Dioxan, Dimethylformamid. Das Produkt ist in Wasser oder in dem mit Wasser mischbaren Medium schwach löslich, und es fällt somit aus dem Reaktionssystem in Kristallform aus. Die ausgeschiedenen Kristalle werden abfiltriert und mit einer erwünschten schwach-alkalischen wäßrigen Lösung, schwach-sauren wäßrigen Lösung und Wasser gewaschen, wobei das reine Produkt erhalten wird. Die endständige Schutzgruppe

ίο der N-Komponente und die endständige Schutzgruppe der C-Komponente des Produkts werden, falls erwünscht, in herkömmlicher Weise entfernt

Im folgenden wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert

Beispiel 1
a) Fragmentkondensation
Eine I .ösung von 0,753 g (1,5 mmol)
HC) · H-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂

(Molekulargewicht 502,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH 4,0) wird zu einer Lösung von 1,26 g (2,5 mmol)

" α,ω-Boc-Lys-Phe —OH

(Molekulargewicht 505,6) in 5 ml INNaOH gegeben, und dann gibt man 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Danach gibt man 0,2 g Pepsin (I : 5000) zu der Mischung

«ι (unter Rühren bei 40° C während 24 h), wobei die Umsetzung stattfindet. Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit 5%igem Ammoniakwasser, 5%iger wäßriger Zitronensäurelösung und Wasser nacheinander gewaschen und

r, dann unter vermindertem Druck bei 50°C über P2O5 getrocknet, wobei 1,25 g

α,ω-Boc-Lys-Phe-Phe-GIy-Leu-Met-NH₂

in einer Ausbeute von 88,2% erhalten werden (Fp. 207 bis 216° C (Zersetzung) und [α] /■ - 38,8 (c = 0,5 DM F)).

Elementaranalyse: (C₄₇II₇₂Oi₁₁N₁(S; 941,210)

berechnet (%)
τ,,, gefunden (%)

59,98
59,74

7,71
7,71

11,91
11,74

b) Abspaltung der Boc-Schutzgruppen

τ, 4,0 g

α,ω-Boc-Lys-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂

werden in 100 ml Eisessig aufgelöst und HCI-Gas wird unter Rühren während 40 min eingeleitet, um die Schutzgruppe (Boc) zu entfernen. Nach der Umsetzung wird die Reaktionsmischung in 500 ml gekühlten Äther gegossen, wobei ein Niederschlag gebildet wird. Der Niederschlag wird abfiltriert und" bei vermindertem Druck über NaOH getrocknet, wobei man 2,70 g

2HCI · H-Lys-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂

in einer Ausbeute von 78,0% erhält (Fp. 168 bis 170°C (Zersetzung);[α] : - 16,0 (c = 0,5 50% MeOH)).

Elementaranalyse: (C₃₇H₅₆O₆N₈S · 2 HCl · 1 '/> H₂O;
841,915)

Cl

berechnet (%) 52,97 7,04 13,31 3,52 8,66

gefunden (%) 52,84 7,33 13,33 3,81 8,42

Beispiel 2

Eine Lösung von 0,753 g (1,5 mmol)
HCl · H-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂

(Molekulargt.-wicht 502,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 1,0 g (2,5 mmol) pMZ - AIa - Phe - OH (Molekulargewicht 400,4) in 5 ml IN NaOH gegeben und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu, worauf man 0,2 g Pepsin (1 :5000) unter Rühren in einem Inkubator bei 40° C hinzugibt. Die Umsetzung findet während 24 h statt. Der erhaltene weiße Niederschlag wird abfiltriert und mit 5%igem wäßrigen NH₄OH, 5%iger wäßriger Zitronensäurelösung und Wasser nacheinander gewaschen, und dann wird das Produkt bei vermindertem Druck bei 50° C über P₂O₅ getrocknet Man erhält 1,14 g

pMZ-AIa-Phe-Phe-GIy-Leu- MeI-NH₂

mit dem Schmelzpunkt 229 bis 233°C in einer Ausbeute vor. 89,2% ([«] -55,0 (c = 0,5 DMF)).

40° C während 24 h umgesetzt, wobei 1,05 g pMZ-GIn-Phe-Phe- GIy- Leu-Met- NH₂

mit dem Schmelzpunkt 236 bis 237° C und [λ] -22,8 (c = 1, DMSO) in einer Ausöeute von 77,5% erhalten werden.

Elementaranalyse: (C₄₅H₆₀Oi₀N₈S = 905,092)

berechnet (%)
gefunden (%)

59,71
59,89

6,68 6,58

12,38 12,31

3,54 3,46

20

JO Beispiel 4 Gemäß Beispiel 1 werden 1 g (2,5 mmol)

pMZ-Ala-Phe-OH
(Molekulargewicht 400,4) und 0,93 g( 1,5 mmol)

HCl · H-lle-Gly-Leu-Niet-NHDmB (Molekulargewicht 618,2) umgesetzt, wobei 1.30 g pMZ-AIa-Phe-Ue-GIy-Leu-Met-NHDmB

mit dem Schmelzpunkt 225 bis 227°C und [α] -25,4 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute von 82,2% erhalten werden. Bei diesem Beispiel werden 0,4 g Pepsin eingesetzt. DmB bedeutet 2,4-Dimethoxybenzyl.

Elementaranalyse: (C₄₃H₅₇O₁)S; 847,031)

	C	H	N	S	3">	Elementaranalyse:	(C H N	O₁₁S;	964,192)	S
	60,81 60,90	6,92 6,77	11,43 11,56	3,92 3,78	40		C	H	N	3,33 3,33
berechnet (%) gefunden (%)	berechnet (%) gefunden (%)	61,04 61,17	7,21 7,35	10,17 10,09

Beispiel 3

1,14 g (2,5 mmol) pMZ-Gln-Phe-OH (Molekulargewicht 457,5) und 0,75 g (1,5 mmol)

HCl ■ H-Phe-GIy-Leu-Met-NH₂
(Molekulargewicht 502,1) werden gemäß Beispiel 1 bei Beispiele 5 bis 11

Gemäß Beispiel 1 werden 2,5 mmol der C-Komponente und 2,5 mmol der N-Komponente gemäß Tabelle 1 umgesetzt, wobei die entsprechenden Peptide erhalten werden. Die Ergebnisse sind ir Tabelle 1 zusammengestellt.

Tabelle

Bsp. C-Komponente

N-Komponente Produkt

α,ο-BPc-Lys-Phe-OH H-Ile-G!y-Leu-Met-NH₂

Bc'c-Ala-Phe-OH desgl.

pMZ-~Leu-Met-OH desgl.

B(>c-⁽ily-Ala-Phe-OH desgl.

Bdc- <jln-Gln-Phe-OH H-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂

Boc- A'a-Phe-OH H-Phe-Gly-Leu-Met-NH,

Boe Pi'o-Ala-Phc-OH H-lle-Gly-Leu-Met-NH:

ff.w-Boc-Lys-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH:

Boc-Ala-Phe-lie-Gly-Leu-Met-NH;, pMZ-Leu-Met-lle-Gly-Leu-Met-NH, Boc-Gly-Ala-Phe-He-Gly-Leu-Met-HN, Boc-Gln-Gln-Phc-Phe-Gly-Leu-Met-NH, Boc-Ala-Phe-Phe-Giy-Leu-Met-Nllj Boc-Pro-Ala-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH,

Tabelle 1 (Fortsetzung)

Bsp. Ausbeute Schmelzpunkt
(%) ( O

Optische Drehung \a\)]

Llemenlaranalyse (%)
C Il

5 94,4 242 bis etwa 246

6 63,3

7 96,9

8 83,7

9 62,0

10 47,9

81.2

231-238

247-250

260 - 265

249-252

240 - 245

243 - 247

-25,6°(c = 0,5 DMF)

	berechnet:	8,22	7,15	12,25	3,53
	58,26
	gefunden:	8,37	7,10	12,24	3,41
	58,29	,-¹AH₂O
- 26,6° (C= 0,5 DMF)	C₃₆H₅₉N₇O₈A
	berechnet:	7,96	7,33	12,97	4,23
	57,20
	gefunden:	8,05	7,33	12,80	4,12
	57,16		H_?O
-39,2° (C= 0,5 DMF)	C₃₉H₆₅N₇O₉S
	berechnet:	7,80	7,92	11,67	7,63
	55,76
	gefunden:	7.83	7,68	1L57	7,84
	55.58
-30,0° (c= 0,5 DMF)	C₃₈H₆₂O₉N₈S
	berechnet:	7,74	13,88	3,97
	56,56
	gefunden:	7,78	13,57	4,12
	56,46	C₄. H₆₈H₁₀O₁ ,S H₂O
- 19,6° (C= I DMSO)		berechnet:
	55,97	14,19	3,52
	gefunden:
	55,90	14,21	3,48
	C₃₉H₅₇O₈N₇S
-53,4° (c= 0,5 DMF)	berechnet:
	59,75	12,50	4,09
	gefunden:
	59,49	12,24	4,18
	C₄₁H₆₆N₈O₉S
-45,3° (c= 0,5 DMSO)	berechnet:
	56,92	12,95	3,71
	gefunden:
	56,80	13,00	3,46

Beispiel 12

Eine Lösung von 0,539 g{Z5 mmol) HCl · H-Phe-OCH₃

(Molekulargewicht 215,67) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 1,00 g (Z5 mmol)

pMZ-Ala-Phe-OH

(Molekulargewicht 400,42) in 5 ml INNaOH gegeben und dann gibt man noch 20 ml Wasser unter Rühren hinzu. Danach gibt man 0,2 g Pepsin (1 :5000) unter Rühren bei 40° C zu der Mischung, und die Umsetzung wird bei 40° C während 24 h durchgeführt Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit 5%igem Ammoniakwasser und danach mit Wasser gewaschen. Dann wird das Produkt unter vermindertem Druck getrocknet und aus Methanol umkristallisiert Man erhält

pMZ - AIa - Phe - Phe - OCH₃

mit dem Schmelzpunkt 189 bis 192°C und [a]F-17,2 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute von 593%-

Elementaranalyse: (C₃iH₃₅NjO₇;561,64])

65

berechnet (%)
gefunden (%)

66,30
66,23

6,28
6,23

Beispiele 13 bis 21

10

Gemäß Beispiel 12 werden 23 mmol der C-Komponente und 2,5 mmol der N-Komponente gemäß der Tabeiie 2 umgesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt

Tabelle 2 Bsp. C-Komponente N-Komponente

Produkt

13 pMZ—AIa-Phe—OH

14 pMZ—Ala—Phc—OH

15 pMZ—Ala —Phc—OH

16 pMZ—Ala—Phe—OH

17 pMZ—Ala—Phe—OH

18 pMZ—AIa-Phe -OH

19 pMZ—Ala—Phc—OH

20 pMZ—AIa-Phc-OH

21 pMZ—AIa-Phc-OH

Tabelle 2 (Fortsetzung)

HClH-Tyr—OCH,	Cys -OCH, S-Bz!	pMZ-	-AIa-	Ala —	Phc	-Tyr-	OCH,	f
HCl-H-	-lic —OCHj	pMZ-	Ala	-AIa-	Phc	C vs — *LJ LMl*	-OCH,	OCHj I
	Scr -OCH,			-AIa-		-lic —	d	I
HCIH-	OBzI	pMZ-	Ala-	Phc	Scr ι	1
HCIH-	— H —Phc—OBzI	pMZ	-Ala —	Phc	OBz	Li NH, I
	Phc-NH,				Phc	-NHOBzI
Tos OH	Phc—NHOBzI	pMZ—Ala —	Phc	Phc	NIlNIl, :·
HBr-H-	Phc-NHNH,	pMZ—Ala —	Phc	Phc-	-GIy-NH, 1 1
TFA-H-	Phc- GIy NH₂	pMZ-	Phc	Phc
2HBr-H	pMZ-	Phc	Phc
HCI H-	pMZ-	Phc

Bsp. Aus- F. beute

Elcmcntaranalysc C Il

UmkrisUiliisicrl aus

13 45.6 179-183 +3.7° a) 63.80 6.16 7.70

(f=0.5DMF) b) 63.87 6.13 7.19

14 48.4 164-166 -27.8° a) 63.24 6.14 6.91

(i·= 0,5 DMF) b) 63.09 5.98 6.97

15 7.0 170-175 -14.2° a) 64.15 6.98 8.08

(i·= I DMF) b) 63.99 7.00 8.22

16 18.8 158—163 -23,0° a) 64.96 6.30 7.10

(c= 1 MeOH) b) 65.09 6.45 7.41

17 90.4 158—163 -!4.6° a) 69.69 6.16 6.59

(C= 1 DMF) b) 69.76 5.99 6.49

18 55.6 241-242 -36.1° a) 65.92 6.27 10.25

(C=IDMF) b) 65.64 6.23 10.14

19 13.9 242-244 -14.8° a) 68.08 6.18 8.58

(c= 0.5 DMF) b) 68.00 6.29 8.79

20 52.9 228-230 -21.8° a) 64.16 6.28 12.47

(C=IDMF) b) 63.93 6.29 12J29

21 51.4 232-233 -34.1° a) 63.69 6.18 11.60

(C=IDMF) b) 63.43 6.14 11.43

Bemerkungen:

BzI = Benzylgrupp«;

a) = her.

b) =gef.

5.28 5.15

DMF-MeOH-H₂O MeOlI

Äthylacetat-Petroläther AcOEt-Petroläther DMF-Äther-Petroläthcr DMF-MeOH-Äther DMF-MeOH-H₂O DMF-MeOH-Äther DMF-MeOH-Äther

berechnet (%)
gefunden (%)

59,70
59,94

7,05 7,19

10,88 10,78

4,98 4,92

Beispiel 27

Eine Lösung von 0395 g (£5 mmol) 2 HBr · H-Phe-Gly-NHNH₂ (Molekulargewicht 398,105) in 40 ml Zitronensäure-Puf-

IO

20

Beispiel 22

Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 30 mi Wasser und 0,1g Pepsin (1:10 000) eingesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt während 18 h. Man erhält

pMZ - AIa - Phe - Phe - OCH₃

mit dem Schmelzpunkt 189 bis 193°C in einer Ausbeute von 51,3%.

Beispiel 23

Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 30 ml Wasser eingesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt während 18 h. Man erhält

pMZ-AIa-Phe-Phe-OCHj

mit dem Schmelzpunkt von 187 bis 192'C in einer Ausbeute von 59%.

Beispiel 24

Das Verfahren gemäß Beispiel 22 wird wiederholt, wobei 0,2 g Pepsin (1 :1000) eingesetzt werden. Man erhält

pMZ-AIa-Phe-Phe-OCH₃

mit dem Schmelzpunkt 188 bis 193°C in einer Ausbeute

ve 165,8%.

Beispiel 25

Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 30 ml Wasser eingesetzt werden und wobei die Umsetzung während 10 h durchgeführt wird. Man erhält das gleiche Produkt in einer Ausbeute von 50,0%.

Beispiel 26 Eine Lösung von 2,5 mmol
HCI - H-Leu-Met-NH₂

in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 2,5 mmol

pMZ-Ala-Phe-OH

in 5 ml 1N NaOH und dann gibt man 02 g Pepsin gemäß Beispiel 8 hinzu. Die Umsetzung findet bei 40⁰C 4^ri während 24 h statt Der erhaltene weiße Niederschlag wird gemäß Beispiel 8 gewaschen und getrocknet und aus MeOH - H₂O imkristallisiert, wobei man 1,02 g

pMZ-Ala-Phe-Leu-Met-NH₂

mit dem Schmelzpunkt 218 bis 219°C und [λ]/"31,6 (c = 0,5, DMF) in einer Ausbeute von 633% erhält

Elementaranalyse: (C₁₂Hi₅N₅O₇S = 643,809) ferlösung gemäß Beispiel 12 wird zu einer Lösung von 1,50 g (3,75 mmol)

pMZ-Ala-Phe-OH

in 7,5 ml 1N NaOH gegeben und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Die Reaktion wird gemäß Beispiel 12 durchgeführt Der erhaltene Niederschlag wird gewaschen und getrocknet und aus

DMF-MeOH-Et₂O
umkristallisiert Man erhält 0,945 g

pMZ-Ala-Phe-Phe-Gly-NHNH₂

mit dem Schmelzpunkt 208 bis 210°C und der optischen Drehung [λ]ο³—31,8 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute

Elementaranalyse: (Q₁₂H₃SN₆O₇-¹AH₂O = 624,701)

berechnet (%)
gefunden (%)

61,52
61,38

6,23 6.25

il)

Beispiel 28 Eine Lösung von 2,5 mmol
HCl ■ H-PhC-OCH₃

in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung gemäß Beispiel 8 wird zu einer Lösung von 1,47 g(40 mmol)

pMZ-Ala-Leu-OH

(Molekulargewicht 366,4) in 5 ml INNaOH gegeben, und dann wird die Umsetzung gemäß Beispiel 26 durchgeführt Der erhaltene Niederschlag wird gewaschen und getrocknet, und man erhält 0,302 g

pMZ-AIa-Leu-Phe-OCH₃

mit dem Schmelzpunkt 187 bis 191°Cund der optischen Drehung [α]?-18,0 (c = 0,5, DMF) in einer Ausbeute von 22,9%.

Elcmentaranalysc: (C₂₈Hj₇NjO₇-¹AH₂O = 533,62S)

"50

berechnet (%)
gefunden (%)

63,02
62,90

7,11 6,97

55 Beispiel 29 Eine Lösung von 0,793 g (2J mmol) HBr - H-Phe-GIy-OCH₃

(Molekulargewicht 317,18) in Zitronensäure-Pufferlösung gemäß Beispiel 8 wird zu einer Lösung von 1,50 g (3,75 mmol)

pMZ-Ala-Phe-OH

in 5 ml INNaOH gegeben, und dann gibt man noch 20 ml Wasser hinzu. Die Umsetzung wird gemäß Beispiel 8 durchgeführt Der erhaltene Niederschlag wird gewaschen, getrocknet und umkristallisiert, wobei

13 14

^manM6g Beispiel 32

PMZ-AIa-PHe-PHe-Cy-OCH₃ Eine Lösung von 1,5 mmol

mit dem Schmelzpunkt 227 bis 229° C und der optischen ,,™ „ ,. „. , ... _ML,

r-. i_ r τ κ Xr-, / . i-Mjr-\ · · al HCl · H —lie —GIy-Leu —Met —NH2

Drehung [<x]?;-26,7 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute ■-. ^J

von 94,9% erhält. (Molekulargewicht 468,1) in 40 ml Zitronensäure-Puf

ferlösung gemäB Beispiel 12 wird zu einer Lösung von 2,5 mmol

Elementaranalyse: (C₃₃H,,N₄O₈;618,693) nMZ-Ala-Phe-OH

in 5 ml INNaOH gegeben, und die Umsetzung wird während 48 h bei 40°C in Gegenwart von 0,2 g Pepsin gemäß Beispiel 12 durchgeführt Der erhaltene Niederschlag wird über P2O5 bei 6O⁰C während 18 h

15 getrocknet, und man erhält 1,10g

pMZ-Ala-Phe-He-GIy-Leu-Met-NH₂

mit dem Schmelzpunkt 253,5 bis 255° C und der optischen Drehung [<x]"-42,4 (c = 1, AcOH) in einer 20 Ausbeute von 90%.

Beispiel 33

Eine Lösung von 0,702 g (1,5 mmol) ²⁵ HCl-H-Ile-Gly-Leu-Met-NHj

(Molekulargewicht 468,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung gemäB Beispiel 12 wird zu einer Lösung von mit einem Schmelzpunkt von 153 bis 167^CC und der 1,15g(2,5mmol) optischen Drehung [α]?-17,4 (c = OA DMF) in einer jo _Rnr . .. _p. _OH

α l_ ι *\a ent i_--i* DVyV.— Mil! — f\\a — IiIL—ν/Π

Ausbeute von 24,6% erhalt.

(Molekulargewicht 450,5) in 5 ml INNaOH gemäß Beispiel 22 gegeben, und der Niederschlag wird mit

Elementaranalyse: (C₂₇H₃₅N₃O₇S; 545,660) 5%igem Ammoniakwasser. 5%iger wäßriger Zitronen-

j5 säurelösung und Wasser nacheinander gewaschen und

r κ ν s dann über P2O5 getrocknet, wobei man 1,052 g

IiOC-Asn-AIa-Phe-lie-GIy-Leu-Met-N H₂

berechnet (%) 59,43 6,47 7,70 5,88 mit dem Schmelzpunkt 256 bis 260⁰C und [a]?-36,2

gefunden(%) 59,82 6,38 7,78 5,54 40 (c == 0,5, DMF) in einer Ausbeute von 81,0% erhält.

^elSple Elcmentaranalyse: (C₄₀H₆SNqO_nS = 864,082)

Die Umsetzung gemäß Beispiel 28 wird wiederholt,

wobei man 2,5 mmol 45 „

C	H	N
berechnet (%) 64,07	6,19	9,06
gefunden (%) 63,79	6,32	8,96
Beispiel 30
Gemäß Beispiel 28 wird die Umsetzung mit 4,0 mmol
pMZ-Ala-Met-OH
und 2,5 mmol
HCl · H-PhC-OCH₃
durchgeführt, wobei man 0,3413 g
pMZ - AIa - Met - Phe - OCH₃

" C 1! HCl · H-Phe-Gly-OEt

anstelle von berechnet (%) 55,60 7,58 14,59 3,71

gefunden (%) 55,43 7,69 14,31 3,65

HCl- H-Phe-OCH₃

(2,5 mmol) einsetzt Das Produkt wird mit 5%igem

Ammoniakwasser gewaschen und dann mit Wasser .

gewaschen und dann über P₂O₅ getrocknet Man erhält Beispiel 34

0,8153 g Das Verfahren gemäß Beispiel 28 wird wiederholt,

pMZ-Ala-Leu-Phe-Gly-OEt ⁵⁵ wobei man 132 g(Z5 mmol)

mit dem Schmelzpunkt 175 bis 192°C und der optischen pMZ-Gin-Ala-Phe-OH

Drehung [α] "-23,4 (c = OA DMG) in einer Ausbeute (Molekulargewicht 528,5) und 0,702 g (1,5 mmol) von54,5%. 2Ha-H-He-Gly-Leu-Met-NH₂

(Molekulargewicht 468,1) anstelle von Elementaranalyse: (C₃₁H₄₂N₄O₈; 598,703) pMZ-Ala-Leu-OHundHCl - H-Phe-OCH₃

_c HN einsetzt Man erhält 1,04 g ⁶⁵ PMZ-GIn-AIa-PhC-IIe-GIy-LeU-MeI-NH₂

berechnet (%) 62,19 7,07 9,36 mit dem Schmelzpunkt von 258 bis 260⁰C (Zersetzung)

gefunden (%) 62,06 7,01 9,20 in einer Ausbeute von 74,5%.

	15	iS =	930,142)	25 18	K)	256 16
Elementaranalyse:	(C₇₄H₆₇N₇O₁		N		Beispiel 37
	C H	26 16	13.55 13,49	S	Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 2,5 mmol
berechnet (%) gefunden (%)	56,82 7, 56,56 7,			3,45 3,25	pMZ-AIa-Phe-AIa-Phe-OH und 2,5 mmol
		35			HCl · H-Leu-Met-NH-DMB
	Beispiel		eingesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt während

1,60 g (4 mmol) pMZ-Ala-Phe-OH werden in 1N NaOH aufgelöst und andererseits werden 0,54 g (2,5 mmol) HCl · H-Phe-OCH₃ jeweils in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung mit verschiedenen pH-Werten aufgelöst. Beide Lösungen werden jeweils vermischt und mit 30 ml Wasser versetzt und danach mit 0,2 g Pepsin gemäß Beispiel 12, und die Mischung wird bei 40°C während 24 h umgesetzt. Der erhaltene Niederschlag wird mit 5°/oigem Ammoniakwasser und danach mit 5%iger wäßriger Zitronensäurelösung und dnach mit Wasser gewaschen, und das Produkt wird über P2O5 bei 50°C getrocknet, wobei man

pMZ-Ala-Phe-Phe-OCHi

erhält. Die nachstehende Tabelle 3 zeigt die Ausbeuten und den pH-Wert der eingesetzten Zitronensäure-Pufferlösung.

Tabclk 3

pH	Ausbeute	Bc	Fp.	IaI
			(C= l.DMl·)
	(%)	( O
2.38	61,1	170-173	-18.4°
3.28	74,6	185-189	-16,7°
4,08	99.9	186-189	-18.0°
5,02	64,0	189-190	-17.2°
	i s ρ i e I 36

14 h. Man erhält
pMZ-Ala-Phe-Ala-Pne-Leu-Met-NH-DmB

mit einem Schmelzpunkt von 250 bis 268° C und [λ] -21,0 (c = 0,4, DMF) in einer Ausbeute von 70%.

Beispiel 38
ο

Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 2,5 mmol

pMZ-Ala-Phe-AIa-Phe-OH
j und 2,5 mmol

HCl · H-Ue-GIy-OEt
während 9 h umgesetzt werden. Man erhält

pMZ - AIa - Phe - AIa - Phe - He - GIy - OEt

mit dem Schmelzpunkt 248 bis 252⁰C in einer Ausbeute von 63%.

Eine Lösung von 2 mmol
2HBr- H-Phe-Gln-NHNH₂

in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 3,75 mmol

pMZ-Ala-Tyr-OH

in IN NaOH gegeben, und dann gibt man noch 0,2 g Pepsin bei 25°C während 48 h zu der Mischung, und die Umsetzung erfolgt gemäß Beispiel 8, wobei man

pMZ-AIa-Tyr-Phe-Gin-NHNH₂

mit dem Schmelzpunkt 245 bis 248°C (Zersetzung) und [«]?-4,6 (c=l, DMSO) in einer Ausbeute von 57,8% erhält.

Beispiel 39

Eine Lösung von 0,216 g (10 mmol)
HCl · H-PhC-OCH₃

(Molekulargewicht 215,5) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 0,495 g (10 mmol)

Z-Pro-VaI-Phe-OH

(Motekulargewicht 495) in 10 ml INNaOH gegeben, und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu und dann 0,1 g Pepsin (1 : 10 000). Die Mischung wird während 24 h bei 40⁰C unter Rühren umgesetzt. Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit 5%igem Ammoniakwasser, 5%iger wäßriger Zitronensäurelösung und Wasser nacheinander gewaschen, und dann wird das Produkt unter vermindertem Druck bei 50° C über P₂O₅ getrocknet, wobei man 0,244 g

Z - Pro - VaI - Phe - Phe -OCH₃

mit dem Schmelzpunkt 199 bis 20!°C und [α] -33,2 (c = 1,DMI⁷) in einer Ausbeute von 3/,2% erhält.

ElemenUiranalyse: (C₁JIj₅N^VIIjO = 752,806)

berechnet ("/„)
i'efundün (%)

5 / .Vi
57.98

6.52
6.35

Beispiel 40

Eine Lösung von 0.216 g (10 mmol)

HCI ■ H-Phe-OCHi
(Molekulargewicht 215,5) in 40 ml Zitronensäure-Puf-

030 111/216

fer!ösung(pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 0,421 g
BOC-GIy-VaI-Phe-OH

(Molekulargewicht 421) in 10 ml INNaOH gegeben, und dann gibt man noch .30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Sodann gibt man zu der Mischung unter Rühren in einem Inkubator bei 40°C 0,1 g Pepsin (1 :10 000), und die Umsetzung erfolgt während 24 h. 0,414 g

IU

BOC - GIy - VaI - Phe - Phe - OCH₃

mit dem Schmelzpunkt 193 bis 196° C und [λ] .,"-14,8 (c — 1, DMF) in einer Ausbeute von 71,2% werden erhalten.

Beispiel 41

Das Verfahren gemäß Beispiel 39 wird wiederholt, wobei das Molverhältnis

Z-Pro-VaI-Phe-OH zu HCI - H-Phe-OCH₃

mit 2 :1 gewählt wird. Man erhält 0,297 g des Produkts r> gemäß Beispiel 39 in einer Ausbeute von 51 %.

Beispiel 42

Das Verfahren gemäß Beispiel 40 wird wiederholt, wobei Weinsäure-Pufferlösung (pH = 4) anstelle von Zitronensäure-Pufferlösung eingesetzt wird. Man erhält 0,426 g des Produkts gemäß Beispiel 40 in einer Ausbeute von 73,3%.

Beispiel 43

Das Verfahren gemäß Beispiel 40 wird wiederholt, wobei man Dinatriumhydrogenphosphat-Pufferlösung (pH = 4) anstelle der Zitronensäure-Pufferlösung ein- 4-, setzt. Man erhält 0,396 g des Produkts gemäß Beispiel 40 in einer Ausbeute von 68%.

Beispiel 44

Das Verfahren gemäß Beispiel 39 wird wiederholt, wobei man 0,2 g Pepsin (1 :5000) einsetzt. Die Umsetzung wird während 20 h durchgeführt. Man erhält 0,230 g des Produkts gemäß Beispiel 35 in einer Ausbeute von 35%.

fill

Beispiele 45 bis 65

Das Verfahren gemäß Beispiel 39 wird wiederholt, wobei 10 mmol der C-Komponente und 10 mmol der N-Koniponente gemäß Tabelle 4 eingesetzt werden und wobei die entsprechenden Peptide erhalten werden. Die PrnokniiiH rinrl In ToKoIIq Λ /ι ic -οι» ro <Mi π«it r> 111

L-I ^WLJIII.J.JL. U III · UIJbIIV I ..Ll..1...I. . . W-, v. .* . ~ . . . .

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U	CU	I	Ι	(U	CL	QJ	JZ
Cu	I	Sl	(U f—	Cu	I	.C	CU
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I	I	I	ι	j	JZ	ι	ι
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sz	jr	JZ	.C	JZ	ι	SZ	SZ
CU	Cu	ο	α.	ο	X	CU	Cu
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X	X	X	*π		χ	χ

HO-·	*■χ.*	X O	Ό	X O I	HO-'	X O I	HO-=
χ: Cu I	e-0	I QJ SZ Cu	I sz	■Phe	-Ph	Phe	-Ph
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	CU		I		QJ	D	OJ
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Q.	M	CQ	03			ca	03

Fort mm z uns:

Bsp.	C-Komponente	N-Komponente	Produkt	Ausbeute	Fp. (C)	- 29.2°	KJ	ö
53	pMZ-Gly-Leu-Phe-OH	HCl · H-Phe-Gly-OC₂H₅	pMZ-Gly-Leu-Phe-Phe-Gly-OC₂H₅	59.0	170-172	(c= 0.5, DMF)	QJi
						- 39,4°
54	BOC-Pro-Met-Phe-OH	HCIH-Phe-OCH:,	BOC-Pro-Met-Phe-Phe-OCH₃	45.7	145-149	(c= 0.5, DMF)	OO
						- 12.6°	Kj
55	BOC-G!y-Met-Phe-OH	HCI-H-Phe-OCHj	BOC-Gly-Met-Phc-Phe-OCH.,	44.3	153-154	(C= 0.5, DMF)	Ol
						- 17.2°
56	pMZ-Gly-Met-Phe-OH	HCIH-Phe-OCH,	pMZ-Gly-Met-Pht:-Phe-OCH₃	69.6	175-179	(c= 1, DMF)
						-33.2°
57	BOC-Pro-Met-Phe-OH	HCl-H-PhC-GIy-OC₂H₅	BOC-Pro-Met-Phe-Phe-Gly-OC^s	51.2	208-210	(c= 0.5, DMF)
						-27.0°
58	pMZ-Gly-Met-Phe-OH	HCl-H-PtIe-GIy-OC₂H₅	pMZ-Gly-Met-Phc-Phe-Gly-OC^H.i	61.9	175-177	(C=I₁DMF)
						-25.1°
59	BOC-Ala-Met-Phe-OH	HCl H-PhB-GIy-OC₂H₅	BOC-Ala-Met-Ph£-Phe-Gly-OC₂H₅	60.8	211-214.5	(C=I₁DMF)
						- 60.0°
60	BOC-Asn-Met-Phe-OH	HCl ■ H-Phe-Gly-OC₂H₅	BOC-Asn-Met-Phe-Phe-GIy-OC₂H₅	71.8	216-220	(C= 1, DMF)
						- 25.0 C
61	BOC-Gln-Met-Phe-OH	HC1H-Phe-Gly-OC₂H₅	BOC-Gln-Met-Phi:-Phe-Gly-OC₂H₅	72.0	220-222	(c= 1, DMF)
						-40,6"
62	BOC-Ala—Leu—Tyr—OH	H—Leu—Val—OCH₃	BOC-Ala—Leu—Tyr—Leu—VaI-OCH₃	37,1	199—201	(c-1, DMF)
						-50,1°
63	BOC-Ala—Leu—Tyr—OH	H—Leu—Val—Cys—Gly—NHNH₂	BOC—Ala—Leu—Tvr—Leu—Val—Cys—Gly—NHNH₂	76,5	>25O	(c = 1,DMF)
		I	I		(dec.)
		SMOB	SMOB			-19,6° ic — 1 DMFi
64	BOC-Arg—Gly—Phe—OH I	H—Phe—Tvr—NHNH₂	BOC-Arg—Gly— Phe— Phe—Tvr—NHNH₂	87,3	205—207	**\L· — 1 } LJVfA* J***
	NO₂	OBzI	NO₂ OBzI			-16,0^c
05	BOC-Arg—Gly—Phe—OH	H—Phe—Tyr—Thr—NHNH₂	BOC-Arg—GIy-Phe—Phe—Tvr—Thr—NHNH₂	85,2	219—220	(c = I₁DMF)
	I	I	NO₂ OBzI
	NO₂	OBzI
	Bemerkung: MOB = 4-methoxybenzyl.

22

Beispiel 66

Eine Lösung von 0,47 g(lOmmol)
HCl ■ H-IIe-GIy-LeU-MeI-NH₂

(Molekulargewicht 468,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung wird zu einer Lösung von 0,38 g (10 mmol)

pMZ—Ala—Glu — OH iu

OH

(Molekulargewicht 382,4) in 10 ml IN NaOH gegeben, und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Dann gibt man 0,1 g Pepsin (1 :10 000) unter Rühren bei 40° C während 24 h zu der Mischung. Der erhaltene weiße Niederschlag wird m^:t einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit 5%igem Ammoniakwasser und dann mit 5%iger wäßriger Zitronensäurelösung und dann mit Wasser gewaschen, und dann wird das Produkt über P2O5 unter vermindertem Druck bei 5O⁰C getrocknet, wobei man 0,48 g

pMZ—Ala—Glu — lie— GIy Leu Met—NH₂ OH

mit dem Schmelzpunkt 214 bis 217°C und [α] -23,8° (c = 0,5, DMF) in einer Ausbeute von 60,3% erhält. Die Elementaranalyse des Produkts entspricht innerhalb der Toleranz dem theoretischen Wert.

Beispiel 67

Das Verfahren gemäß Beispiel 66 wird wiederholt, wobei das Molverhältnis

pMZ—Ala— GIu -OH

OH
zu HCl ■ H—lic —Gly—Leu —Met —NH,

mit 2 : 1 gewählt wird. Man erhält 0,68 g des Produkts gemäß Beispiel 66, in einer Ausbeute von 85,3%.

Beispiel 68

Das Verfahren gemäß Beispiel 67 wird wiederholt, wobei Dinatriumhydrogenphosphat-Zitronensäure-Pufferlösung(pH = 4) anstelle der Zitronensäure-Pufferlösung eingesetzt Wird. Man erhält das Produkt gemäß Beispiel 67 in eir";C Ausbeute von 84%.

Beispiele 69bis75

Das Verfahn-ri gemsIJ Beispiel 66 wird wiederholt, wobei 10 mmol der C-komponente und 10 mmol der N-Komponente gernäß Tabelle 5 eingesetzt werden. Man erhält die entsprechenden Peptide. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 eusilm^engestellt.

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X O

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N N

S S

α α

X O

23

Eine Lösung von 2 mmol

Z(OMe)-Ala-Asp-OH wird gemäß Beispiel 1 mit 1 mmol

H · Ile-Gly-Leu-Met-NH₂

Beispiel 76

bei pH 4,0 und 40⁰C während 24 h in Gegenwart voi Pepsin umgesetzt. Man erhält

Z(OMe) - AIa - Asp — He —GIy- Leu -Met -NH;

mit einem Schmelzpunkt von 280⁰C (Zersetzung) it einer Ausbeute von 17%.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel

X-A-B-C-Y,

in der die Symbole A, B, C, X und Y folgende Bedeutungen haben:

A: Ala, GIn, Asn, co-tert-Butoxycarbonyl-Lys, Leu, GIy, GIu, GIu(OCH₃), Pro oder Ai-A₂, wobei Ai dieselben Bedeutungen wie A hat und A₂ VaI, Met, Leu oder GIn bedeutet,

B: Phe, Tyr, Leu, Met, GIu, Asp, Asn oder Trp,

C: Phe, Leu, He, Tyr, Cys-(S-Benzyl), Ser-(O-Benzyl), Trp oder Met,

X: eine oc-Amino-Schutzgruppe, ein N-terminal eine Schutzgruppe tragender Aminosäurerest oder ein N-terminal eine Schutzgruppe tragender Peptidrest,

Y: eine Carboxyl-Schutzgruppe, ein C-terminal eine Schutzgruppe tragender Aminosäurerest oder ein C-lerminal eine Schutzgruppe tragender Peptidrest,

dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid der allgemeinen Formel

X-A-B-OH

mit einer Aminosäure oder einem Peⁿtid Her allgemeinen Formel

H-C-Y

in Gegenwart des Enzyms Pepsin in wäßrigem Medium bei 20 bis 50⁰C in einer Pufferlösung von pH 2 bis 6 umsetzt.

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel

X-A-B-C-Y,

in der die Symbole A, B, C, X und Y folgende Bedeutungen haben:

A: Ala, GIn₁ Asn, ω-tert-Butoxycarbonyl-Lys, Leu, GIy, GIu, GIu(OCH₃), Pro oder A₁-A₂, wobei A, dieselben Bedeutungen wie A hat und A₂ VaI, Met, Leu oder GIn bedeutet,

B: Phe, Tyr, Leu, Met, GIu, Asp, Asn oder Trp,

C: Phe, Leu, He, Tyr, Cys-(S-Benzyl), Ser-(O-Benzyl), Trp oder Met,

X: eine a-Amino-Schutzgruppe, ein N-terminal eine Schutzgruppe tragender Aminosäurerest oder ein N-terminal eine Schutzgruppe tragender Peptidrest,

Y: eine Carboxyl-Schutzgruppe, ein C-terminal eine Schutzgruppe tragender Aminosäurerest oder ein C-terminal eine Schutzgruppe tragender Peptidrest,

und ist dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid der allgemeinen Formel

X-A-B-OH

mit einer Aminosäure oder einem Peptid der allgemeinen Formel

H-C-Y
in Gegenwart des Enzyms Pepsin in wäßrigem Medium bei 20 b*s 5O⁰C in einer Pufferlösung von pH 2 bis 6 umsetzt

Es sind in jüngster Zeit verschiedenste Peptide mit physiologischer Aktivität untersucht worden, und es besteht ein großes Interesse, solche Peptide zu synthetisieren. Typische herkömmliche Verfahren zur Peptidsynthese sind die Azidmethode; die mit gemischten Säureanhydriden arbeitende Methode; die Dicyclohexyl-carbodümidmethode und die mit aktivem Ester arbeitende Methode. Bei den herkömmlichen Verfahren treten jedoch verschiedenste Schwierigkeiten auf, z. B. Racemisierungen, Nebenreaktionen, komplizierte Temperatursteuerung, lange Reaktionsdauer usw. Insbesondere bei der Methode der Fragmentkondensation fällt der Nachteil der nicht-vermeidbaren Racemisierung stark ins Gewicht Das Racemisierungsproblem ist bei Peptid-Synthesen allgemein schwerwiegend. Wenn Racemisierung eintritt, so ist die Reinheit des gebildeten Produkts herabgesetzt, und die Abtrennung des verunreinigenden Isomeren ist mit großen Schwierigkeiten verbunden und bei der industriellen Durchführung des Verfahrens nachteilig.

Neben den rein organisch-chemischen Verfahren sind bereits Peptidsynthesen bekannt, bei denen das Enzym Papain eingesetzt wird (zum Beispiel O. K. Behrens und M. Bergmann; J. Biol. Chem., 129, 587 [1939], und H. B. Milne und Warren Kolday; J. Org. Chem., 30,64 [1965] ). Der hier verwendete Ausdruck »Peptid« folgt der Definition von Harry D. Law; »The Organic Chemistry

mi of Peptides« (Wiley. Interscience 1970). Seite 6. Es ist bevorzugt, Peptide (einschließlich Polypeptide und Oligopeptide) als Ausgangsmaterial einzusetzen, welche in dem Medium eine mindestens geringe Löslichkeit aufweisen, da Peptide ohne Löslichkeit in dem Medium

r> inaktiv sind. Der Ausdruck »Papain« und insbesondere der Papaintiter sind in Anson, M.; »J. Gen. Physiol.«, Band 22, Seite 79,1938, erläutert. Mit diesem bekannten Verfahren wird das Racemisierungsproblem gelöst. Es werden jedoch nur Di-peptide oder Tri-peptide erhalten.

Bei der Synthese von Tetra-peptiden oder höheren Peptiden unter Verwendung von Papain mit verschiedener Substratspezifität treten Nebenreaktionen ein (Hydrolyse des Peptids; Transpeptidisierung; Bildung von Plastein). Daher eignet sich dieses Verfahren nicht zur industriellen Peptid-Synthese.

Den Erfindern ist es nun gelungen, Polypeptide und insbesondere höhere Peptide als Tri-peptide durch Verwendung des Enzyms Pepsin herzustellen, das zu den proteolytischen Enzymen und speziell zu den Endopeptidasen gehört. Es wurde festgestellt, daß Pepsin sich zur Synthese von Peptiden eignet und bei einfacher Arbeitsweise zu hohen Ausbeuten führt. Insbesondere eignet sich das erfindungsgemäße Verfahren für die Methode der sequentiellen Peptidsynthese und für die Methode der mit Fragmentkondensation arbeitenden Peptidsynthese.

Gegenüber der sequentiellen Methode weist die Fragmentkondensationsmethode erhebliche Vorteile

w) auf. Das erfindungsgemäße Verfahren ist nun insbesondere von Bedeutung für die Fragmentkondensationsmethode.

Bei der erfindungsgemäßen Peptidsynthese wird ein Peptid der Formel (1) (im folgenden als C-koniponente

b5 bezeichnet) als Ausgangsmaterial eingesetzt. Die C-Komponente muß eine Partialstruktur haben, bei der zwei oder drei spezifische Aminosäuren in spezifischer Verknüpfung kondensiert sind, d. h., die Bindung