DE2518256A1 - Verfahren zur herstellung eines peptids - Google Patents
Verfahren zur herstellung eines peptidsInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Peptids der Formel
X-A-B-C-Y (III)
wobei A Ala., GIn., Asn., öJ-BOC-Lys., Leu., GIy., GIu.,
GIu. oder Pro.; bedeutet oder wobei
A A1-Ap ist, wobei A1 einen hydrophilen Aminosäurerest bedeutet
und Ap VaI.J Met., Leu. oder GIn. bedeutet und wobei
B Phe., Tyr., Leu., Met., GIu., Asp., Gin., Asn. oder
Trp. bedeutet und wobei C Phe., Leu., Heu., Tyr., Cys-SBzl., Ser-OBzl., Trp., oder
Met. bedeutet und wobei X eine α-Aminosäure-Schutzgruppe, einen am N-Ende eine
Schutzgruppe tragenden Aminosäurerest oder einen am N-Ende eine Schutzgruppe tragenden Peptidrest bedeutet und wobei
Y eine Carboxyl-Schutzgruppe oder einen am C-Ende eine Schutzgruppe tragenden Aminosäurerest oder einen am C-Ende eine
Schutzgruppe tragenden Peptidrest bedeutet, wobei der hydrophile Aminosäurerest A1 vorzugsweise Ala., GIn., Asn., t^
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Leu., GIy., G-Iu., GIu. oder Pro. ist.
OMe
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren wird ein Peptid der Formel
X-A-B-OH (I)
mit einer Aminosäure oder einem Peptid der Formel
H-C-Y (II)
in Gegenwart des Enzyms Pepsin umgesetzt.
Es sind in jüngster Zeit verschiedenste Peptide mit physiologischer
Aktivität untersucht worden und es besteht ein großes Interesse, solche Peptide zu synthetisieren. Typische herkömmliche
Verfahren zur Peptidsynthese sind die Azidmethode; die mit gemischten Säureanhydriden arbeitende Methode;
die Dicyclohexyl-carbodiimidmethode und die mit aktivem Ester arbeitende Methode. Bei den herkömmlichen Verfahren
treten jedoch verschiedenste Schwierigkeiten auf, z. B. Racemisierungen, Nebenreaktionen, komplizierte Temperatursteuerung,
lange Reaktionsdauer usw.. Insbesondere bei der Methode der Fragmentkondensation fällt der Nachteil der
nicht-vermeidbaren Racemisierung stark ins Gewicht. Das Racemisierungsproblem ist bei Peptid-Synthesen allgemein
schwerwiegend. Wenn Racemisierung eintritt, so ist die Reinheit des gebildeten Produkts herabgesetzt und die Abtrennung
des verunreinigenden Isomeren ist mit großen Schwierigkeiten verbunden und bei der industriellen Durchführung des Verfahrens
nachteilig.
Neben den rein organisch-chemischen Verfahren sind bereits Peptidsynthesen bekannt, bei denen das Enzym Papain eingesetzt
wird (z. B. O.K. Behrens und M. Bergmann; J. Biol. Chem., 129, 587 (1939) und H.B. Milne und Warren Kilday; J. Org.
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Chem., 30, 64 (1965)). Der hier verwendete Ausdruck "Peptid" folgtder Definition von Harry D. Law; "The Org. Chem. of
Peptides" (Willy Interscience 1970), Seite 6. Es ist bevorzugt, Peptide (einschließlich Polypeptide und Oligopeptide)
als Ausgangsmaterial einzusetzen, welche in dem Medium eine mindestens geringe Löslichkeit aufweisen, da Peptide ohne
Löslichkeit in dem Medium inaktiv sind. Der Ausdruck "Pepsin" und insbesondere der Pepsintiter sind in Anson, M. "J. Gen.
Physiol.", Band 22, Seite 79, 1938 erläutert. Mit diesem bekannten Verfahren wird das Racemisierungsproblem gelöst. Es
werden jedoch nur Di-peptide oder Tri-peptide erhalten.
Bei der Synthese von Tetra-peptiden oder höheren Peptiden unter Verwendung von Papain mit verschiedener Substratspezifität
treten Nebenreaktionen ein (Hydrolyse des Peptids; Transpeptidisierung; Bildung von Plastein). Daher eignet sich
dieses Verfahren nicht zur industriellen Peptid-Synthese.
Den Erfindern ist es nun gelungen, Polypeptide und insbesondere höhere Peptide als Tri-peptide durch Verwendung des Enzyms
Pepsin herzustellen. Die proteolytischen Enzyme (Protease) üben auf Peptide eine hydrolysierende Wirkung aus und zwar mit
guter Reproduzierbarkeit und bei Anwendung milder Bedingungen ohne Nebenreaktionen. Daher werden proteolytische Enzyme
zur Strukturaufklärung von Polypeptiden und Proteinen eingesetzt. Unter Verwendung solcher Enzyme wurden die Primärstrukturen
verschiedener natürlicher Polypeptide, wie Insulin, aufgeklärt. Das Pepsin (Verdauungsenzym) gehört zu den
proteolytischen Enzymen und speziell zu den Endopeptidasen (Enzyme, welche an einer inneren Bindung der Peptidkette angreifen).
Es wurde festgestellt, daß Pepsin sich zur Synthese von Peptiden eignet und bei einfacher Arbeitsweise zu hohen
Ausbeuten führt. Insbesondere eignet sich das erfindungsgemäße Verfahren für die Methode der sequentiellen Peptidsynthese und
für die Methode der mit Fragmentkondensation arbeitenden Peptidsynthese.
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Gegenüber der sequentiellen Methode weist die Fragmentkondensationsmethode
erhebliche Vorteile auf. Das erfindungsgemäße
Verfahren ist nun insbesondere von Bedeutung für die Fragmentkondensationsmethode.
Bei der erfindungsgemäßen Peptidsynthese wird ein Peptid der
Formel (I) (im folgenden als C-Komponente bezeichnet) als Ausgangsmaterial eingesetzt. Die C-Komponente sollte eine
Partiaistruktur haben, bei der zwei oder drei spezifische Aminosäuren
in spezifischer Verknüpfung kondensiert sind, d. h. die Bindung -A-B- sollte in der Formel (i) in der reaktiven
Position vorliegen. Es können die verschiedensten Peptide eingesetzt werden, solange nur diese spezifische Partialstruktur
vorliegt. Die End-Gruppe der C-Komponente, d. h. die Aminogruppe in α-Position, sollte durch eine Schutzgruppe für
die Aminogruppe geschützt sein, z. B. durch eine Carbobenzoxygruppe (Z); eine substituierte Carbobenzoxygruppe, wie p-Methoxybenzyloyycarbonyl
(pMZ); t-Butyloxycarbonyl (BOC) oder Tosyl (TOS) oder dgl..
Die Aminosäure oder das Peptid der Formel (II) (im folgenden als N-Komponente bezeichnet), welche bzw. welches als weiteres
Ausgangsmaterial dient, sollte in der reaktiven Position eine spezifische Aminosäure tragen, wie Phenylalanin, Leucin, Isoleucin,
Tyrosin, S-Benzyl-cystein, O-Benzyl-serin,
Tryptophan oder Methionin. Die endständige Carboxylgruppe der N-Komponente sollte durch eine Schutzgruppe für die Carboxylgruppe
geschützt sein, z. B. in Form einer Estergruppe (Methylester, Ä'thylester, Benzylester, t-Butylester oder
p-Nitrobenzylester); in Form einer Amidgruppe oder einer substituierten
Amidgruppe, wie der 2,4,6-Trimethylbenzylamidgruppe
(TMB), der Hydrazidgruppe oder einem Derivat derselben.
Die N-Komponente kann in freier Form eingesetzt werden oder als Salz (vom Typ des Hydrochlorids, des Hydrobromids, des
Trifluoracetats, des p-Toluolsulfonats oder eines anderen
anorganischen oder organischen Salzes).
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_ 5 —
Die N-Komponente und die C-Komponente können innerhalb des
angegebenen Rahmens als Struktureinheiten des angestrebten Peptids ausgewählt werden. Die gewünschten Peptide können
somit nach der Fragmentkondensationsmethode erhalten werden. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren können die "beiden Komponenten
(die C-Komponente und die N-Komponente) in äquivalenter Menge eingesetzt werden oder eine der Komponenten kann im
Überschuß eingesetzt werden. Das Molverhältnis der N-Komponente zur C-Komponente liegt gewöhnlich im Bereich von 1:5 bis
etwa 5'-1 und vorzugsweise im Bereich von 1:2 bis etwa 2:1.
Bei Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist es bevorzugt,
die N-Komponente in einem alkalischen Medium aufzulösen, welches als Alkali z. B. ein Alkalimetallhydroxid oder
ein Erdalkalimetallhydroxid enthalten kann. Es ist erforderlich, die Umsetzung in einer Pufferlösung bei einem pH von
etwa 2 bis etwa 6 und bei einer Temperatur von etwa 20 bis
etwa 50 0C durchzuführen. Als Pufferlösungen kommen Zitronensäure-Pufferlösung,
Michaelis-Pufferlösung, Mcllvaine-Pufferlösung oder andere Pufferlösungen für den pH-Bereich von
2 - 6 in Frage. Es ist nicht bevorzugt, eine Pufferlösung mit einem pH unterhalb 2 oder oberhalb 6 einzusetzen, da in
diesem Falle die Ausbeute gering ist. Bevorzugt ist ein pH-Bereich von etwa. 3 bis etwa 5 und optimal ist ein pH-Wert von
etwa 4. Wenn die Temperatur unterhalb 20 C liegt, so bedarf es bis zur Vervollständigung der Umsetzung einer langen Zeitdauer.
Wenn die Temperatur oberhalb 50 0C liegt, so ist die Aktivität des Pepsins merklich herabgesetzt, und die Ausbeute
ist gering. Die bevorzugte Temperatur beträgt 30 bis 40 0C.
Das erfindungsgemäß eingesetzte Pepsin ist ein Verdauungsenzym vom Typ der Endopeptidasen. Pepsin mit einem Pepsintiter
von 1: 5 000; 1: 10 000; und 1: 60 000 kann leicht erhalten
werden. Man kann auch Rohpepsin einsetzen, solange die Aktivität hoch ist. Pepsin wird in katalytischen Mengen eingesetzt.
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*■■ O ""~
Vorzugsweise verwendet man 0,4 - 400 mg Pepsin pro 1 mmol
der Ausgangsmaterialien. Die Umsetzung findet glatt in einem wässrigen Medium statt oder in einem mit Wasser mischbaren
Medium, wie Methanol, Äthanol, Dioxan, Dimethylformamid oder dgl.. Das Produkt ist in Wasser oder in dem mit Wasser mischbaren
Medium schwäch löslich und es fällt somit aus dem Reaktionssystem in Kristallform aus. Die ausgeschiedenen
Kristalle werden abfiltriert und mit einer erwünschten schwachalkalischen wässrigen Lösung, schwach-sauren v/ässrigen Lösung
und Wasser gewaschen, wobei das reine Produkt erhalten wird. Die endständige Schutzgruppe der N-Komponente und die endständige
Schutzgruppe der C-Komponente des Produkts werden, falls erwünscht, in herkömmlicher Weise entfernt.
Im folgenden wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen
näher erläutert.
Eine Lösung von 0,753 g (1,5 mmol) Hcl^H-Phe-Gly-Leu-Met-NH
(Molekulargewicht 502,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4,0) wird zu einer Lösung von 1,26 g (2,5 mmol) α ,w-Boc-Lys-Phe-OH
(Molekulargewicht 505,6) in 5 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Danach gibt
man 0,2 g Pepsin (1:5 000, hergestellt durch Mikuni Kagaku Sangyo K.K.) zu der Mischung (unter Rühren bei 40 0C während
24 h), wobei die Umsetzung stattfindet. Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und
mit 5^-igem Ammoniakwasser, 5%-iger wässriger Zitronensäurelösung
und Wasser nacheinander gewaschen und dann unter vermindertem Druck bei 50 0C über P2 0R getrocknet, wobei 1,25 g
a,&KBoc-Lys-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2 in einer Ausbeute von
88,2 % erhalten werden (Fp. 207 - 216 0C (Zersetzung) und
[α] |5 = -38,8 (c = 0,5 DMF)).
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Elementaranalyse: (C47H72O10NgS = 941,210)
H N
berechnet (%) 59,98 7,71 11,91 3,41 gefunden (%) 59,74 7,71 11,74 3,42
4,0 g α, o;-Boe-Lys-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH? werden in 100 ml
Eisessig aufgelöst und HCl-Gas wird unter Rühren während 40 min eingeleitet, um die Schutzgruppe (Boc) zu entfernen. Nach der
Umsetzung wird die Reaktionsmischung in 500 ml gekühlten Äther gegossen, wobei ein Niederschlag gebildet wird. Der Niederschlag
wird abfiltriert und bei vermindertem Druck über NaOH getrocknet, wobei man 2,70 g 2HC1-H-Lys-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2
in einer Ausbeute von 78,0 # erhält(Fp. 168 - 170°C (Zersetzung); [a]j5 = -16,0 (C = 0,5 50 % MeOH)).
Elementaranalyse: (C57H56O6NgS♦2HCl·1 1/2 H3O = 841,915)
2 | C | 97 84 |
H | 04 33 |
N | 31 33 |
S | ,52 ,81 |
Cl | 66 42 |
|
berechnet gefunden |
52, 52, |
7, 7, |
13, 13, |
to to | 8, 8, |
||||||
Beispiel | |||||||||||
Eine Lösung von 0,753 g (1,5 mmol) HC1*H-Phe-Gly-Leu-Met-NH2
(Molekulargewicht 502,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4,0) wird zu einer Lösung von 1,0 g (2,5 mmol) pMZ-Ala-Phe-OH
(Molekulargewicht 400,4) in 5 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu, worauf
man 0,2 g Pepsin (1:5 000, hergestellt durch Mikuni Kagaku Sangyo K.K.) unter Rühren in einem Inkubator bei 400C
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hinzugibt. Die Umsetzung findet während 24 h statt. Der erhaltene weiße Niederschlag wird abfiltriert und mit 5$-igem
wässrigen NH.OH, 5%-iger wässriger Zitronensäurelösung und
Wasser nacheinander gewaschen und dann wird das Produkt bei vermindertem Druck, bei 50 0G über P2°5 getrocknet.
Man erhält 1,14 g pMZ-Ala-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-WH2 mit dem
Schmelzpunkt 229 - 233 0C in einer Ausbeute von 89,2 %
£5 = -55,0 (c = 0,5 DMP)).
Elementaranalyse: | G | «H57 | o9s | = 847 | ,031 | ) | S | ,92 ,78 |
60 60 |
H | N | 3 3 |
|||||
berechnet (56) gefunden ($) |
,81 ,90 |
VD VD | ,92 ,77 |
11, 11, |
43 56 |
|||
Beispiel 3 | ||||||||
1,14 g (2,5 mmol) pMZ-Gln-Phe-OH (Molekulargewicht 457,5)
und 0,75 g (1,5 mmol) HCl-H-Phe-Gly-Leu-Met-HHg (Molekulargewicht
502,1) werden gemäß Beispiel 1 bei 400C während 24 h
umgesetzt, wobei 1,05 g pMZ-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2 mit
dem Schmelzpunkt 236 - 237 0G und Γα] S5 = -22,8 (c = 1, DMSO)
D
in einer Ausbeute von 77,5 $ erhalten werden.
in einer Ausbeute von 77,5 $ erhalten werden.
Elementaranalyse: (C45Hg0O10FgS = 905,092)
C HNS
berechnet {%) 59,71 6,68 12,38 3,54
gefunden (%) 59,89 6,58 12,31 3,46
Gemäß Beispiel 1 werden 1 g (2,5 mmol) pMZ-Ala-Phe-OH (Molekulargewicht
400,4) und 0,93 g (1,5 mmol) HCl'H-Ileu-Gly-
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Leu-Met-NHDmB (Molekulargewicht 618,2) umgesetzt, wobei 1,30 g pMZ-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NHDmB mit dem Schmelzpunkt
225 - 227 0C und [α] ψ = -25,4 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute
von 82,2 % erhalten werden. Bei diesem Beispiel werden 0,4 g Pepsin eingesetzt. DmB bedeutet 2,4-Dimethoxybenzyl.
Elementaranalyse: (C.QH69N7O1 ^S = 964,192)
C HNS
berechnet (#) 61,04 7,21 10,17 3,33 gefunden (%) 61,17 7,35 10,09 3,33
Beispiele 5-11
Gemäß Beispiel 1 werden 2,5 mmol der C-Komponente und 2,5 mmol
der N-Komponente gemäß Tabelle 1 umgesetzt, wobei die entsprechenden
Peptide erhalten werden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengestellt.
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Bsp. | C-Komponente | N-Komponente | tt | Tabelle | 1 | 65 | ,4 | Schmelz punkt rc) |
opti sche Drehung /al25 |
Elementaranalyse {$>) | N | os | S | to | |
5 | α, CJ-Bo c-Lys- Phe-OH |
H-Ileu-Gly- Leu-Met-NHO |
It | 242 bis etwa |
-25,6° (c=0,5 |
C H | ,25 | cn OO |
|||||||
6 | Bo c-Ala- Phe-OH |
d. | Produkt | Ausbeute | pMZ-Leu-Met- Ileu-Gly- 96 |
246 | DMP) | °44H74 berechnet: |
12 | ,24 | 3,53 | 256 | |||
7 | pMZ-Leu-Met- OH |
α ,cC^-Boc Lys-Phe- |
i- 94 | Leu-Met- | 58,26 8,22 gefunden: |
12 | /3 H | 3,41 | |||||||
Ileu-Gly- Leu-Met- |
,3 | 231 ~ 238 |
-26,6° (c=0,5 |
58,29 8,37 | ,97 | 2° | |||||||||
5098 | NH2 | -HH2 | 247 — 250 |
DMP) | C36H59N7° berechnet: |
12 | ,80 | 4,23 | |||||||
en "ν. |
,9 | 57,20 7,96 gefunden: |
12 | 4,12 | |||||||||||
100/ | Boc-Ala-Phe- Ileu-Gly-Leu- |
-39,2° (c=0,5 |
57,16 8,05 | 9S5 | ,67 | ||||||||||
Met-HH2 | DMP) | 39 65 7 berechnet: |
11 | ,57 | 7,63 | ||||||||||
55,76 7,80 gefunden: |
11 | 7,84 | |||||||||||||
55,58 7,83 | |||||||||||||||
CX) -C--CJl
Bsp. | C-Komponente | N-Komponente | Produkt | Ausb. | Schmelz punkt (0C) |
opti sche Drehung |
Elementaranalyse ($) |
8 | Boc-Gly-Ala- Phe-OH |
H-Ileu-Gly- Leu-Met-NH2 |
Boc-Gly-j Phe-Ileu GIy-Leu- Met-NH2 |
Qa- 83,7 |
260 - 265 |
-30,0° (c=0,5 DMF) |
CHNS |
9 | Boc-Gln-Gln- Phe-OH |
H-Phe-Gly- Leu-Met-NH2 |
Boc-Gln- Phe-Phe- Gly-Leu- Met-NH2 |
62,0 | 249 - 252 |
-19,6° (c=1 DMSO) |
π τι η w Q C38H62°9N8S ber.: 56,56 7,74 13,88 3,97 gef.: 56,46 7,78 13,57 4,12 |
10 | Boc-Ala-Phe- OH |
H-Phe-Gly- Leu-Met-NH2 |
Boc-Ala- Phe-Phe- Leu-Met-1 |
47,9 .T I "V^w 1 Xi Λ |
240 - 245 |
-53,4° (c=0.5 DMF) |
C46-H68H10O11S'H20 ber.: 55,97 7,15 14,19 3,52 gef.: 55,90 7,10 14,21 3,48 |
11 | Boc-Pro-Ala- Phe-OH |
H-Ileu-Gly- Leu-Met-NH2 |
Boc-Pro- Ala-Phe- Ileu-Gly- Met-NH2 |
81,2 -Leu- |
243 - 247 |
-45,3° (c=0.5 DMSO) |
C39H57O8N7S ber.: 59,75 7,33 12,50 4,09 gef.: 59,49 7,33 12,24 4,18 |
C41H66N8°9S'H2° ber.: 56,92 7,92 12,95 3,71 gef.: 56,80 7,68 13,00 3,46 |
oo ro cn
- 12 Beispiel 12
Eine lösung von 0,539 g (2,5 mmol) HCl·H-PlIe-OCH5 (Molekulargewicht
215,67) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4,0) wird zu einer Lösung von 1,00 g (2,5 mmol) pMZ-Ala-Phe-OH
(Molekulargewicht = 400,42) in 5 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man noch 20 ml Wasser unter Rühren hinzu. Danach gibt
man 0,2 g Pepsin (1:5000) unter Rühren bei 40 0C zu der
Mischung und die Umsetzung wird bei 40 0C während 24 h durchgeführt.
Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit 5$-igem Ammoniakwasser,
und danach mit Wasser gewaschen. Dann wird das Produkt unter vermindertem Druck getrocknet und aus Methanol umkristallisiert.
Man erhält pMZ-Ala-Phe-Phe-OCH^ mit dem Schmelzpunkt
189-192 0C und Γα]^0 = -17,2 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute
von 59,3 i°.
Elementaranalyse: (C, .H^55N5O7 = 561,641)
CHN
berechnet | (*) | 66, | 30 | 6 | ,28 | 7, | 48 |
gefunden | (*) | 66, | 23 | 6 | ,23 | 7, | 53 |
Beispiele 15 - 21
Gemäß Beispiel 12 werden 2,5 mmol der C-Komponente und
2,5 mmol der N-Komponente gemäß der Tabelle 2 umgesetzt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt.
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- 13 Tabelle 2
Bsp. C-Komponente | pMZ-Ala-Phe- OH |
N-Componente | Produkt |
I 13 i |
tt | HC1'H-Tyr-OCH3 | pMZ-Ala-Phe-Tyr-OC^ |
t 14 |
Il | HCl-H-Cy8-OCH3 S-BzI |
pMZ-Ala-Phe-Cys-OC^ S-BzI |
15 | Il | HCl-H-IIeU-OCH3. | pMZ-Ala-Phe-Ileu-OCH3 |
16 | Il | HCl-H-Ser-OCH3 OCH2/ |
pMZ-Ala-Phe-Ser-OCHs OCH2 φ |
17 | Il | Tos-OH-H-Phe- OCH2/ |
pMZ-Ala-Phe-Phe-OCH^ |
18 | Il | HBr-H-Phe-NH2 | ρ MZ- Ala- Phe - Phe -NH2 |
!9 | Il | TFA-H-Phe - NHOCH2/ |
pMZ-Ala-Phe-Phe- NHOCH2/ |
20 | Il | 2HBr-H-Phe-NHNI | I2 pMZ-Ala-Phe-Phe- NHNH2 |
21 | HCl-H-Phe-Gly- NH2 |
pMZ-Ala-Phe-Phe-Gly- NH2 |
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Fortsetzung Tabelle
Ausbeu
te
te
(0C) Elementar analyse
CHN
CHN
umkristallisiert aus
45.6
179— 183
+3.7° (c=0. DMF) C 63.80 6.16 7.70 F 63.87 6.13 7.19
DMF-MeOH-
H2O
48.4
164-166
-27.8" ( ")
C 63.24 F 63.09 6.14
5.98
5.98
6.91 5.28 6.97 5.15
MeOH
7.0
170-175
-14.2°
(c=l
DMF)
C 64.15 F 63.99 6.98
7.00
7.00
8.08 8.22
Athylacetat-Petroläther
18.8
158-163
-23.0°
(c=l
MeOH)
C 64.9.6 F 65.09 6.30
6.45
6.45
7.10 7.41
AcOEt-
Petrol-
äther
90.4
158-163
55.6
241-w 242
-14.6°
(c=l
DMF)
C 69.69 F 69.76 6.16
5.99
5.99
6.59 6.49
-3
C 65.92 F 65.64 6.27 10.25 6.23 10.14
DMF-AHier -Petroläther
DMF-MeOH
13.9
242-244
-14.8° (c=0.5 DMF)
C 68.08 F 68.00 6.18
6.29
6.29
8.58 8. 79
DMF-MeOH -H2O
52.9
228-230
-21.8'
(c=l
DMF)
C 64.16 F 63.93 6.28
6.29
6.29
12.47 12.29
DMF-MeOH
51.4
232-233
-34.1° ( ")
C 63.69 F 63.43 6.18 11.60 6.14 11.43
DMF-MeOIi -Äther
BzI = Benzylgruppe ; jf = Phenylgruppe
C = "berechnet F = gefunden
509845/1007
Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 30 ml
Wasser und 0,1 g Pepsin ( 1 : 10 000) eingesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt während 18 h. Man erhält pMZ-Ala-Phe-Phe-OCfU
mit dem Schmelzpunkt 189 - 193 0O in einer Ausbeute von
51,3 Ιο.
Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 30 ml Wasser eingesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt während 18 h.
Man erhält pMZ-Ala-Phe-Phe-OCH, mit dem Schmelzpunkt von
187 - 192 0C in einer Ausbeute von 59 %.
187 - 192 0C in einer Ausbeute von 59 %.
Das Verfahren gemäß Beispiel 22 wird wiederholt, wobei 0,2 g Pepsin (1 : 1000) eingesetzt werden. Man erhält pMZ-Ala-Phe-Phe-OCH,
mit dem Schmelzpunkt 188 - 193 0C in einer Ausbeute
von 65,8 5^.
Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 30 ml Wasser eingesetzt werden und wobei die Umsetzung während 10 h
durchgeführt wird. Man erhält das gleiche Produkt in einer Ausbeute von 50,0 $>.
Eine Lösung von 2,5 mmol HCl*H-Leu-Met-NHp in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung
(pH =4,0) wird zu einer Lösung von 2,5 mmol pMZ-Ala-Phe-OH in 5 ml 1N-NaOH und dann gibt man 0,2 g Pepsin
gemäß Beispiel 8 hinzu. Die Umsetzung findet bei 40 0C während
24 h statt. Der erhaltene weiße Niederschlag wird gemäß Beispiel 8 gewaschen und getrocknet und aus MeOH-HpO umkristalli-
509845/1007
siert, wobei man 1,02 g pMZ-Ala-Phe-Leu-Met-NH2 mit dem
Schmelzpunkt 218 - 219 0G und [ocj^0 = 31,6 (c=0,5;DMF)
in einer Ausbeute von 63,3 % erhält.
Elementaranalyse: (C52H45N5O7S = 643,809)
C HNS
berechnet gefunden
59, | 70 | 7 | ,05 | 10 | ,88 | 4, | 98 |
59, | 94 | 7 | ,19 | 10 | ,78 | 4, | 92 |
Eine Lösung von 0,995 g (2,5 mmol) 2HBr'H-2
(Molekulargewicht = 398,105) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung gemäß Beispiel 12 wird zu einer Lösung von 1,50 g (3,75
mmol) pMZ-Ala-Phe-OH in 7,5 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Die Reaktion wird
gemäß Beispiel 12 durchgeführt. Der erhaltene Niederschlag wird gewaschen und getrocknet und aus DMF-MeOH-Et2O umkristallisiert.
Man erhält 0,945 g pMZ-Ala-Phe-Phe-Gly-NHNH2 mit dem Schmelzpunkt 208 - 210 0G und der optischen Drehung
P = -31,8 (c=1, DMF) in einer Ausbeute von 61,2 $>.
Elementaranalyse: (C52H58N6O7* 1/3 H3O = 624,701)
CH N
berechnet (#) 61,52 6,23 13,45
gefunden (#) 61,38 6,25 13,38
Eine Lösung von 2,5 mmol HCl-H-Phe-OCH- in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung
gemäß Beispiel 8 wird zu einer Lösung von 1,47 g (40 mmol) pMZ-Ala-Leu-OH (Molekulargewicht = 366,4) in 5 ml
1N-NaOH gegeben und dann wird die Umsetzung gemäß Beispiel durchgeführt. Der erhaltene Niederschlag wird gewaschen und
getrocknet und man erhält 0,302 g pMZ-Ala-Leu-Phe-OCH
5098A5/1007
mit dem Schmelzpunkt 187 - 191 0G und der optischen Drehung
F0OlP = ~18'0 (c=0»5>
DM]p) in einer Ausbeute von 22,9 $>.
Elementaranalyse: (C28H, N3O7* 1/3 H3O = 533,628)
CHN
"berechnet (#) 63,02 7,11 7,87
gefunden (#) 62,90 6,97 7,97
Eine Lösung von 0,793 g (2,5 mmol) HBr-H-Phe-Gly-OCH, (Molekulargewicht
= 317,18) in Zitronensäure-Pufferlösung gemäß Beispiel 8 wird zu einer Lösung von 1,50 g (3,75 mmol) pMZ-Ala-Phe-OH
in 5 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man noch 20 ml
Wasser hinzu. Die Umsetzung wird gemäß Beispiel 8 durchgeführt. Der erhaltene Niederschlag wird gewaschen, getrocknet und
umkristallisiert, wobei man 1,46 g pMZ-Ala-Phe-Phe-Gly-OCE,
mit dem Schmelzpunkt 227 - 229 0C und der optischen Drehung
L0G D = ~26»7 (c = 1, DMF) in einer Ausbeute von 94,9 1° erhält.
Elementaranalyse: (C55H55N4O8 = 618,693)
CHN
berechnet gefunden
Gemäß Beispiel 28 wird die Umsetzung mit 4,0 mmol pMZ-Ala-Met-OH
und 2,5 mmol HCl-H-Phe-OCH, durchgeführt, wobei man 0,3413 g
pMZ-Ala-Met-Phe-OCH5 mit einem Schmelzpunkt von 153 - 167 0C
64 | ,07 | 6 | ,19 | 9, | 06 |
63 | ,79 | 6 | ,32 | 8, | 96 |
509845/1007
23
und der optischen Drehung jV|^ = -17,4 (c=0,5 , DMF) in einer Ausbeute von 24,6 % erhält.
und der optischen Drehung jV|^ = -17,4 (c=0,5 , DMF) in einer Ausbeute von 24,6 % erhält.
Elementaranalyse: (C2 H55N3O7S = 545,660)
C HNS
berechnet gefunden
59, | 43 | 6 | ,47 | 7 | ,70 | 5 | ,88 |
59, | 82 | 6 | ,38 | 7 | ,78 | 5 | ,54 |
Die Umsetzung gemäß Beispiel 28 wird wiederholt, wobei man 2,5 mmol HCl-H-Phe-GIy-OEt anstelle von HCl-H-Phe-OC^ (2,5
mmol) einsetzt. Das Produkt wird mit 5/°-igen Ammoniakwasser
gewaschen und dann mit Wasser gewaschen und dann über Pp^c Se'
trocknet. Man erhält 0,8153 g pMZ-Ala-Leu-Phe-Gly-OEt mit
dem Schmelzpunkt 175 - 192 0C und der optischen Drehung
p = -23,4 (c = 0,5, DMG) in einer Ausbeute von 54,5 1°.
Elementaranalyse: (C3iH42N4°8 = 598,703)
CHN
berechnet gefunden
62, | 19 | 7 | ,07 | 9, | 36 |
62, | 06 | 7 | ,01 | 9, | 20 |
Eine Lösung von 1,5 mmol HCl'H-Ileu-Gly-Leu-Met-NHp (Molekulargewi
ent=468,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung gemäß
Beispiel 12 wird zu einer Lösung von 2,5 mmol pMZ-Ala-Phe-OH in 5 ml 1N-NaOH gegeben und die Umsetzung wird während 48 h
bei 40 0C in Gegenwart von 0,2 g Pepsin gemäß Beispiel 12
durchgeführt. Der erhaltene Niederschlag wird über PpO1. bei
60 0C während 18 h getrocknet und man erhält 1,10 g
509845/1007
pMZ-Ala-Phe~Ileu-Gly-Leu-Met-NHo mit dem Schmelzpunkt 253, 5 255
°C und der optischen Drehung [cc] ^ = -42,4 (c=1, AcOH) in einer Ausbeute von 90 %.
Eine Lösung von 0,702 g (1,5 mmol) HCl*H-Ileu-Gly-Leu-Met-N^
(Molekulargewicht = 468,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung gemäß Beispiel 12 wird zu einer Lösung von 1,15 g (2,5 mmol)
BOC-Asn-Ala-Phe-OH (Molekulargewicht = 450,5) in 5 ml 1N-NaOH gemäß Beispiel 22 gegeben und der Niederschlag wird mit
5$-igem Ammoniakwasser, 5%-iger wässriger Zitronensäurelösung
und Wasser nacheinander gewaschen und dann über ^<S>c getrocknet,
wobei man 1,052 g BOC-Asn-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NHg mit
dem Schmelzpunkt 256 - 260 0C und [a]^3 = -56,2 (c=0,5, DMP)
in einer Ausbeute von 81,0 % erhält.
Elementaranalyse: (C40Hg5N9 0-]-|S = 864,082)
C HNS
berechnet {%) 55,60 7,58 14,59 5,71
gefunden (%) 55,45 7,69 14,51 5,65
Das Verfahren gemäß Beispiel 28 wird wiederholt, wobei man 1,52 g (2,5 mmol) pMZ-Gln-Ala-Phe-OH (Molekulargewicht = 528,5)
und 0,702 g (1,5 mmol) 2HC1«H-Ileu-Gly-Leu-Met-NH2 (Molekulargewicht
= 468,1) anstelle von pMZ-Ala-Leu-OH und HC1«H-Phe-OCH5
einsetzt. Man erhält 1,04 g pMZ-Gln-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH2
mit dem Schmelzpunkt von 258 - 260 0C (Zersetzung) in einer Ausbeute von 74,5 %.
Elementaranalyse: (C74Hg7N7O11S) = 950,142)
C H NS.
berechnet OJ 56,82 TT^ 15,55 3745
gefunden (#) 56,56 7,16 15,49 5,25
509845/1007
25Ί8256
1,60 g (4 mmol) pMZ-Ala-Phe-OH werden in 1N-NaOH aufgelöst
und andererseits werden 0,54 g (2,5 mmol) HCl-H-Phe-OCH^
jeweils in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung mit verschiedenen pH-Werten aufgelöst. Beide Lösungen werden jeweils vermischt
und mit 30 ml Wasser versetzt und danach mit 0,2 g Pepsin gemäß Beispiel 12 und die Mischung wird "bei 40 0C während
24 h umgesetzt. Der erhaltene Niederschlag wird mit 5^-igem Ammoniakwasser und danach mit 5^-iger wässriger
7Λ !,ronensäurelösung und danach mit Wasser gewaschen und
ucta Produkt wird über PpOc bei 50 0C getrocknet, wo "bei
aazi pMZ-Ala-Phe-Phe-OCH, erhält. Die nachstehende Tabelle
zeigt die Ausbeuten und den pH-Wert der eingesetzten Zitronensäure-Pufferlösung.
pH | Ausbeute ($>) | Pp. | (c= 1, DMP) |
(0C) | -18,4° | ||
2,38 | 61,1 | 170-173 | -16,7° |
3,28 | 74,6 | 185-189 | -18,0° |
4,08 | 99,9 | 186-189 | -17,2° |
5,02 | 64,0 | 189-190 | |
Eine Lösung von 2 mmol 2HBr·H-Phe-Gln-NHNHp in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung
(pH = 4,0) wird zu einer Lösung von 3,75 mmol pMZ-Ala-Tyr-OH in 1N-NaOH gegeben und dann gibt
man noch 0,2 g Pepsin bei 25 °C während 48 h zu der Mischung und die Umsetzung erfolgt gemäß Beispiel 8, wobei man
pMZ-Ala-Tyr-Phe-Gln-NHNH2 mit dem Schmelzpunkt 245 - 248 0C
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(Zersetzung) und jVjD = -4,6 (c=1, DMSO) in einer Ausbeute
von 57,8 % erhält.
Elementaranalyse: (C55H45N7Og-H2O = 725,806)
H N
berechnet
gefunden
gefunden
57, | 92 | 6 | ,52 | 13, | 52 |
57, | 98 | 6 | ,35 | 13, | 54 |
Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 2,5 mmol
pMZ-Ala-Phe-Ala-Phe-OH und 2,5 mmol HCl'H-Leu-Met-NH-DMB eingesetzt
werden. Die Umsetzung erfolgt während 14 h. Man erhält pMZ-Ala-Phe-Ala-Phe-Leu-Met-NH-DMB mit einem Schmelzpunkt von
250 -2 68 0C und |a]jp = -21,0 (c=0,4, DMP) in einer Ausbeute
von 70 56.
Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird wiederholt, wobei 2,5 mmol pMZ-Ala-Phe-Ala-Phe-OH und 2,5 mmol HCl-H-IIeU-GIy-OEt während
9 h umgesetzt werden. Man erhält pMZ-Ala-Phe-Ala-Phe-Ileu-GIy-OEt
mit dem Schmelzpunkt 248 - 252 0C in einer Ausbeute von 63 1°.
Eine Lösung von 0,216 g (10 mmol) HCl-H-PlIe-OCH5 (Molekulargewicht
215,5) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4,0) wird zu einer Lösung von 0,495 g (10 mmol) Z-Pro-Val-Phe-OH
(Molekulargewicht 495) in 10 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu und dann 0,1 g Pepsin
(1 : 10 OOO). Die Mischung wird während 24 h bei 40 0C unter
Rühren umgesetzt. Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit
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einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit 5%-igem Ammoniakwasser,
5$-iger wässriger Zitronensäurelösung und Wasser nacheinander gewaschen und dann wird das Produkt unter vermindertem
Druck bei 50 0C über Pp0C getrocknet, wobei man 0,244 g
Z^Pro-Val-Phe-Phe-OCH, mit dem Schmelzpunkt 199 - 201 0C und
° = ~55»2 (c=1t DMF) in einer Ausbeute von 37,2 # erhält.
Eine Lösung von 0,216 g (10 mmol) HCl'H-Phe-OCH- (Molekulargewicht
215,5) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4,0) wird zu einer.Lösung von 0,421 g BOC-Gly-Val-Phe-OH (Molekulargewicht
421) in 10 ml 1N-NaOH gegeben und dann gibt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Sodann gibt man zu
der Mischung unter Rühren in einem Inkubator bei 40 C
0,1 g Pepsin (1:10000) und die Umsetzung erfolgt während 24 h. 0,414 g BOC-Gly-Val-Phe-Phe-OCEL mit dem Schmelzpunkt 193 196
0C undjccj^0 = -14,8 Cc=I1 DMF) in einer Ausbeute von
71,2 % werden erhalten.
.Das Verfahren gemäß Beispiel 39 wird wiederholt, wobei das
Molverhältnis Z-Pro-Val-Phe-OH : HCl*H-Phe-0CH- mit 2 : 1
gewählt wird. Man erhält 0,297 g des Produkts gemäß Beispiel in einer Ausbeute von 51 i°.
Das Verfahren gemäß Beispiel 40 wird wiederholt, wobei Weinsäure-Pufferlösung
CpH=4) anstelle von Zitronensäure-Pufferlösung eingesetzt wird. Man erhält 0,426 g des Produkts gemäß Beispiel
40 in einer Ausbeute von 73,3 Ί°.
Das Verfahren gemäß Beispiel 40 wird wiederholt, wobei man
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Dinatriumhydrogenphosphat-Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4)
anstelle der Zitronensäure-Pufferlösung einsetzt. Man erhält 0,396 g des Produkts gemäß Beispiel 40 in einer Ausbeute von
68 Io.
Das Verfahren gemäß Beispiel 39 wird wiederholt, wobei man 0,2 g Pepsin (1:5000) einsetzt. Die Umsetzung wird während 20 h
durchgeführt. Man erhält 0,230 g des Produkts gemäß Beispiel 35 in einer Ausbeute von 35 i°.
Beispiele 45 - 65
Das Verfahren gemäß Beispiel 39 wird wiederholt, wobei 10 mmol der C-Komponente und 10 mmol der N-Komponente gemäß
Tabelle 4 eingesetzt werden und wobei die entsprechenden Peptide erhalten werden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4
zusammengestellt.
509845/1007
Bsp
C-Komponente
N-Komponente Produkt
45
pMZ-Gly-Val-Phe-OH
HGe-H-PlIe-OCH3
pMZ-Gly-Val-Phe-Phe-OCH3
-15.1° (c=l, DMF)
co
oo
-c^-
cn
oo
-c^-
cn
46
Z-Pro-Val-Phe-OH
HCi · H-Phe-Gly-OC2H5
Z-Pro-Val-Phe-Phe
GIy-OC2H5
GIy-OC2H5
67.2
j -31.2° _>
: (c=0. 5,DMF) OO K) ' cn
-46.8° CD
(c-0.5,DMF)
47
BOC-Pro-Val-Phe-OH
H-Phe-Gly-OC2H5
BOC-Pro-Val-Phe-Phe
GIy-OC2H5
GIy-OC2H5
34.4
208 210
48
BOC-Gly-Val-Phe-OH
HCi · H-PlIe-GIy-OC2H5
BOC-Gly-Val-Phe-Phe
GIy-OC2H5
GIy-OC2H5
45.1
185 187
-14..40 V.
(c=0. 5,DMF) ^
49
pMZ-Gly-Val-Phe-OH
HCi-H-Phe-Gly-OC2H5
pMZ-GIy-VaI-Phe-Phe-GIy-OC2H5
75.0
200 212
-18.6° (c=0.5,DMF)
50
pMZ-Gly-Leu-Phe-OH
HCi-H-Phe-OCH3
pMZ-Gly-Leu-Phe
Phe-OCH3
Phe-OCH3
77.0
181
-26.4° (c=l, DMF)
BO€-Pro-Leu-Phe-OH
HCi-H-PlIe-GIy-OC2H5
BOC-Pro-Leu-Phe-Phe- | 62.9
GIy-OC2H5
GIy-OC2H5
219
-48.2° (c=l, DMF)
CD CO OO
Bsp. | C-Komponente | N-Komponente | Produkt | BOC-GIy-Leu-Phe-Phe- GIy-OC2H5 |
Ausbeu- te(tf) |
Fp. (0C) |
-34.8° (c=0.5,DMF) |
52 | BOC-Gly-Leu-Phe-OH | HC?-H-Ph^-GIy-OC2H5 | pMZ-Gly-Leu-Phe-Phe- GIy-OC2H5- |
54.5 | ' 160 - 164. |
-29.2° (c=0. 5,DMF) |
|
53 | pMZ-Gly-Leu-Phe-OH | HC£-H-Phe-Gly-OC2H5 | BOC-Pro-Met-Phe-Phe- OCH3 |
59.0 | 170 - 172 |
-39.4° (c=0.5,DMF) |
|
54 | BOC-Pro-Met-Phe-OH | HCi-H-Phe-OCH3 | BOC-Gly-Met-Phe-Phe- OCH3 |
45.7 | 145 - 149 |
-12.6° (C=O1S1DMF) |
|
55 | BOC-Gly-Met-Phe-OH | HGCH-PhLe-OCH3 | pMZ-GIy-M et-Phe-Phe- OCH3 |
44.3 | 153 - 154 |
-17.2° (c=l,DMF) |
|
56 | PMZ-Gly-Met-Phe-OH | HCi-H-Phe-OCH3 | BOC-Pro-Met-Phe-Phe- GIy-OC2H5 |
69.6 | 175 - 179 |
-33.2° (c=0.5,DMF) |
|
57 | BOC-Pro-Met-Phe-OH | HCi-H-PlIe-GIy-OC2H5 | pMZ -Gly-Met-Phe-Phe- GIy-OC2H5 |
51.2 ■ |
208 - 210 |
-27.0° (c=l, DMF) |
|
58 | pMZ-Gly-Met-Phe-OH | HCi.H-Phe-Gly-OC2H5 | 61.9 | 175 - 177 |
|||
Fortsetzung Tabelle 4
Bs | p. C-Komponente | N-Komponente | Produkt \AusbeuX Pp. V W V3C) |
60.8 ! 211 - j 214.5 |
-25.1° (c=l, DMF) |
-25.0° (c=l, DMF) |
59 | BOC-AIa-M et-Phe-OH | HC£-H-Phe-Gly-OC2H5 | BOC-Ala-Met-Phe-Phe- GIy-OC2H5 |
71.8 | 216 - -60.0° 220 (C=I, DMF) i |
|
60 | BOC-Asn-Met-Phe-OH | HO«. H-Phe-Gly-OC2H5 | BOC-Asn-Met-Phe-Phe- GIy-OC2H5 |
72.0 | 220 - 222 |
|
51 | BOC-Gln-Met-Phe-OH | HCi-H-PlIe-GIy-OC2H5 | BOC-Gln-Met-Phe-Phe- GIy-OC2H5 |
•C-CTI
Bs | D. C-Komponente | N-Komponente | Produkt | Ausb. | Fp. (0C) |
Π24 |
62 | BOC-Ala-Leu-Tyr-OH | H-LeU-VaI-OCH3 | BOC-Ala-Leu-Tyr- Leu- VaI-OCH3 |
37.1 | 199 - 201 |
-40.6° (C=I1DMF) |
63 | BOC-Ala-Leu-Tyr-OH | H-Leu-Val- CyS-GIy-NHNH2 SPMBzI |
BOC-Ala-Leu-Tyr-Leu- VaI-CyS-GIy-NHNH2 SPMBzI |
76. 5 | >250 (dec.) |
-50.1° (c = l, DMF) |
64 | BOC-Arg-Gly-Phe-OH NO2 |
H-Phe-Tyr-NHNH2 OBzI |
BOC-Arg-Gly-Phe-Phe- NO2 Tyr-NHNH2 OBzI |
87.3 | 205 - 207 |
-19.6° (c=l, DMF) |
65 | BOC-Arg-Gly-Phe-OH NO2 |
H-Phe-Tyr-Thr-NHNH2 I OBzI |
BOC-Arg-Gly-Phe-Phe- NO2 Tyr-Thr-NHNH2 OBzI |
85.2 | 219 - 220 |
-16.0° (c=l, DMF) |
Bemerkung: -SPMBzI = -S-Para-methoxybenzyl
- 28 Beispiel 66
Eine lösung von 0,47 g (10 mmol) HCl-H-Ileu-Gly-Leu-Met-NHp
(Molekulargewicht 468,1) in 40 ml Zitronensäure-Pufferlösung
wird zu einer Lösung von 0,38 g (10 mmol) pMZ-Ala-Glu-OH
OH
(Molekulargewicht 382,4) in 10 ml 1N-NaOH gegeben und dann gi"bt man noch 30 ml Wasser unter Rühren hinzu. Dann gibt
man 0,1 g Pepsin (1 : 10000) unter Rühren "bei 40 0C während
24 h zu der Mischung. Der erhaltene weiße Niederschlag wird mit einem Glasfilter (G-3) abfiltriert und mit
5/&-igem Ammoniakwasser und dann mit 5$-iger wässriger Zitronensäurelösung
und dann mit Wasser gewaschen und dann wird das Produkt über PpOp. unter vermindertem Druck bei 50 0C getrocknet,
wobei man 0,48 g pMZ-Ala-Glu-Ileu-Gly-Leu-Met-NHo
OH
mit dem Schmelzpunkt 214 - 217 0C und [a] ^0 = -23,8° (c=0,5,
DMP) in einer Ausbeute von 60,3 1° erhält. Die Elementaranalyse des Produkts entspricht innerhalb der Toleranz
dem theoretischen Wert.
Das Verfahren gemäß Beispiel 66 wird wiederholt, wobei das Molverhältnis pMZ-Ala-Glu-OH : HCl-H-Ileu-Gly-Leu-Met-NH9
OH
mit 2:1 gewählt wird. Man erhält 0,68 g des Produkts gemäß Beispiel 66, in einer Ausbeute von 85,3 ί°.
Das Verfahren gemäß Beispiel 67 wird wiederholt, wobei
Dinatriumhydrogenphosphat-Zitronensäure-Pufferlösung (pH=4)
anstelle der Zitronensäure-Pufferlösung eingesetzt wird. Man erhält das Produkt gemäß Beispiel 67 in einer Ausbeute von
84 io.
509845/10 07
- 29 Beispiele 69 - 75
Das Verfahren gemäß Beispiel 66 wird wiederholt, wobei 10 mmol der G-Komponente und 10 mmol der N-Komponente
gemäß Tabelle 5 eingesetzt werden. Man erhält die entsprechenden
Peptide. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 zusammengestellt.
509845/1007
cn
CD
co
CX)
cn
CD CD
Bsp. | C-Komponente | N-Komponente | Produkt Ai O |
0.Sb. 0 , |
Pp. 0C) |
-15.4° (C=I1DMF) |
69 | pMZ-Glu-Phe-OH OCH3 |
HCi-H-Phe-OCH3 | pMZ-Glu-Phe-Phe-OCH3 OCH3 |
59.9 | 183 - 187 |
-41.8° (C = I1DMSO) |
70 | pMZ-Ala-Asn-OH | HCi-H-Ileu-Gly-Leii- Met-NH2 |
pMZ-Ala-Asn-Ileu- Gly-Leu-Met-NH2 |
31.0 | 252 - 255 |
-32.0° (C-0.5.DMF) |
71 | pMZ-Ala-Trp-OH | HC£-H-Ph^-VaI-OCH3 | pMZ-Ala-Trp-Phe -VaI- OCH3 |
60.0 | 210 - 216 |
- |
72 | pMZ-Ala-Trp-OH | HCi-H-Met-Gly-OCH3 | pMZ-Ala-Trp-Met-Gly- OCH3 |
21.7 | 163 - 167 |
-1.4° (c = 0. 5,DMF) |
73 | pMZ-Ala-Phe-OH | HCi-H-Trp-OCH3 | PMZ-AIa-PhIe-TrP-OCH3 | 65.7 | 186 - 187 |
-30.1° (C = I1-DMF) |
74 | Z-Glu-Phe-OH | HOe-H-Ileu-Gly-Leu- Met-NH2 |
Z-Glu-Phe-Ileu-Gly- Leu-Met-NH2 |
84 | 245 - 248 |
-19.7° (c=l, DMF) |
75 | Z-Glu-Phe-OH | HCi-H-Phe-OCH3 | Z-Glu-Phe-Phe-OCH3 | 63 | 181 - 184 |
|
OD ro cn
Claims (6)
- - 31 PATENTANSPRÜCHEwobei A die Formel A.-Ap haben kann, wobei A1 einen hydrophilen Aminosäurerest und A? VaI., Met., Leu. oder GIn. bedeutet;wobei B Phe., Tyr., Leu., Met., GIu., Asp., Gin., Asn. oder Trp. bedeutet; wobei C Phe., Leu., Heu., Tyr., Cys-SBzl., Ser-OBzl., Trp. oder Met. bedeutet; wobei X eine α-Aminosäure-Schutzgruppe;einen am N-Ende eine Schutzgruppe tragenden Aminosäurerest oder einen am N-Ende eine Schutzgruppe tragenden Peptidrest bedeutet;und wobei Y eine Carboxyl-Schutzgruppe oder einen am C—Ende eine Schutzgruppe tragenden Aminosäurerest oder einen am C-Ende eine Schutzgruppe tragenden Peptidrest bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid der FormelX-A-B-OH ■ mit einer Aminosäure oder einem Peptid der FormelH-C-Y in Gegenwart des Enzyms Pepsin umsetzt.509845/1007
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid der FormelX-A-B-OHwobei A Ala., GIn., Asn., td-BOC-Lys., Leu. oder G-Iy. "bedeutet und wobeiB Phe., Tyr., Leu. oder Met. "bedeutet und wobei X die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat.
- 3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid der FormelX-A-B-OHeinsetzt, wobei A GIu., GIu. oder Pro. bedeutet und wobeiOMe.
B und X die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben. - 4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid der FormelX-A1 - A2 - B -OHeinsetzt, wobei A. einen hydrophilen Aminosäurerest und A« VaI., Met., Leu. oder GIn. bedeutet und wobei B und X die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben.
- 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Aminosäure oder ein Peptidder FormelH-G-Yeinsetzt, wobei C Phe., Leu., Heu., Tyr., Cys-SBzl. oder Ser-OBzl. bedeutet und wobeiY die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat.50984 5/1007
- 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß man die Umsetzung bei 20 - 50 0C in einer Pufferlösung von pH 2 - 6 durchfuhrt.509845/1007
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