DE2318638B2 - Kulturmedium zum zuechten von bakterien - Google Patents

Kulturmedium zum zuechten von bakterien

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DE2318638B2 DE19732318638 DE2318638A DE2318638B2 DE 2318638 B2 DE2318638 B2 DE 2318638B2 DE 19732318638 DE19732318638 DE 19732318638 DE 2318638 A DE2318638 A DE 2318638A DE 2318638 B2 DE2318638 B2 DE 2318638B2
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Description

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Die Erfindung bezieht sich auf ein Kulturmedium zur Züchtung von Bakterien.
Bisher wurden Herzinfusionskulturmedien (abgekürzt »HIB-Kulturmedium«) und Hirn-Herz-Infusionskulturmedien (abgekürzt »Hßl-Kulturmedium«) usw. weitgehend als Kulturmedium zur Züchtung von Bakterien in Forschungs- oder Kliniklaboratorien der Medizin und zur Feststellung von Bakterien in Untersuchungszimmern von Krankenhäusern verwendet; diese Kulturmedien waren zweckmäßig durch eine tierische Körperflüssigkeit, wie Blut und Serum, für die Züchtung von Bakterien verstärkt, die bestimmte Anforderungen bezüglich ihrer Ernährung stellen. Die HIB- und BHI-Kulturmedien haben jedoch die Nachteile, daß die zur Herstellung der Infusionsbrühe verwendeten Tierorgane schwer zu beschaffen sind; weiterhin ist die Erzielung der Einheitlichkeit und Massenherstellung des Kulturmediums aufgrund der Qualitätsunterschiede von Rinderherzen oder Kalbshirnen schwierig, so daß die Kulturmedien sehr kostspielig sind. Außerdem ist das Arbeiten im Fall einer Verstärkung mit tierischer Körperflüssigkeit komplizierter und auch daher wurden die Kulturmedien teurer.
Im »Chemischen Zentralblatt«, 1956. Seite 1340, Ref. 4310. ist beschrieben, daß Pepton im Endo-Kulturmedium durch ein preiswertes Fischproteinhydrolysat ersetzt werden kann; diesen Ausführungen kann jedoch nicht entnommen werden, daß dieses Fischproteinhydrolysat einen ausgezeichneten Wachstumsfaktor für pathogene Bakterien enthält und als Ersatz für ein BHl- oder HIB-Kulturmedium verwendet werden kann.
Die Feststellung von Bakterien ist ein wesentliches Verfahren zur Verhütung von Erkrankungen, so daß das Auffinden eines wirksamen und billigen Kulturmediums eindringendes Problem ist.
Erfindungsgemäß wird nun ein billiger Ersatz für die kostspieligen Bestandteile im HIB- oder BHI-Kulturmedium geschaffen, so daß diese in der Verwendung zweckmäßiger, bei der großtechnischen Herstellung billiger und in der Qualität einheitlicher im Vergleich zu den üblichen, oben beschriebenen Kulturmedien sind.
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65 Die vorliegende Erfindung schafft nun ein neues Kulturmedium zur Züchtung von Bakterien, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es unter Verwendung eines getrockneten Hydrolysats, das durch Hydrolyse von Fischprotein mit Pancreatin oder einer aus den Gattungen Aspergillus, Streptomyces, Bacillus oder Rhizopus gewonnenen Protease, wobei die Protease eine optimale Aktivität bei pH um 7 zeigt und wobei das Fischprotein bis zu einem Hydrolysegrad, bei dem die Menge von in 10%iger Trichloressigsäure löslichem Stickstoff 80% der Menge des gesamten Stickstoffs in der Reaktionsmischung übersteigt, hydrolysiert wird und wobei zur Hydrolyse 0,1 bis 0,6 Gew.% Enzym pro Volumen Rohmaterial eingesetzt werden, Abfiltrieren der unlöslichen Substanzen aus dem Hydrolysat, Entfetten und Trocknen des Filtrats erhalten worden ist, in einer Menge von über 0,5 bis 3,0 Gew./Vol.% anstelle des Infusionsmaierials aus tierischen Organen und Körperflüssigkeiten im üblichen Kulturmedium hergestellt wurde.
In den Zeichnungen zeigt
F i g. 1 Wachstumskurven von Diplococcus pneumoniae im erfindungsgemäßen, mit FLP-I bezeichnetem Kulturmedium und BHI-Kulturmedium, ausgedrückt durch d-e Trübung des Kulturmediums.
F i g. 2 zeigt Wachstumskurven von Salmonella paratyphi B in einem erfindungsgemäßen, mit FLP-2 bezeichneten Kulturmedium und HIB-Kulturmedium. ausgedrückt als Trübung des Kulturmediums.
F i g. 3 zeigt Wachstumskurven von Streptococcus faecalis als Funktion der Konzentrationen des getrockneten Produktes im Kulturmedium, und
F i g. 4 zeigt Wachstumskurven von Shigella sonnei als Funktion der Konzentrationen des getrockneten Produktes im Kulturmedium.
In der Erfindung umfaßt die Bezeichnung »Bakterien« Bakterien, die zur Forschung und klinischen Untersuchung in medizinischen Forschungslaboratorien und in den Bakterienuntersuchungsabteilungen von Krankenhäusern gezüchtet werden.
Die Herstellung eines getrockneten Produktes des Hydrolysates aus Fischprotein (im folgenden als »getrocknetes Produkt« bezeichnet) wird anschließend beschrieben.
Als Roh- bzw. Ausgangsmaterial werden Fische verwendet, wie Thunfisch, Bonito, Kabeljau, Dorsch Haifisch, Makreie, Sardine, Roßmakrele, Makrelenhecht usw. Es können alle Körperteile dieser Fische ebenso wie auch Walfleisch verwendet werden.
Bei der Verwendung eines getrockneten Produktes als Bestandteil für das Kulturmedium wird als Rohmaterial frisches Fischfleisch oder sofort nach dem Fang eingefrorenes Fischfleisch verwendet, da jeglicher Geruch oder Verfärbung unerwünscht sind. Die Fische werden vermählen, in lauwarmem Wasser dispergierl und einer enzymatischen Behandlung unterworfen.
Die zum Hydrolysieren des Fischproteins verwendete Protease muß aus Pancreatin und von Aspergillus Bacillus, Streptmyces, Rhizopus hergeleiteten Enzymer stamme und einen für die Aktivität optimalen pH-Wen Um 7 zeigen. Eine Reaktionstemperatur von 35 —55°C ist für die Proteaseaktivität optimal, obgleich sie von dei verwendeten Proteasespezies abhängt. Die Protease menge sollte in Abhängigkeit vom Autolyseausmaß de; Fisches, der spezifischen Aktivität der Protease und dei Dauer der Hydrolyse variiert werden, sie beträgt jedoch 0,1 -0,6% (GewyVol.) der Rohmaterialmenge. Die Dauer der Hydrolyse liegt gewöhnlich zwischer
1 —6 Stunden. Bei Verwendung von Fischen, die bereits fange gelagert worden sind, sollte die Hydrolyse jedoch innerhalb einer Stunde beendet werden, da solche Fische durch bakterielle Verunreinigung im Fall einer Reaktionsdauer über 6 Stunden zersetzt werden könnten. Das enzymatisch hydrolysierte Fischprotein erhält man nach einer solchen Enzymbehandlung in flüssiger Form mit einem Feststoffgehalt von 9 -16%. Etwa °0°/o dieses Feststoffgehaltes bestehen aus Proiein, Peptid, Aminosäuren usw. Die Ausbeute des verflüssigten Proteins betagt 80-90% des als Rohmaterial verwendeten Fischproteins. Die Hydrolyse ist beendet, wenn die Menge von in 10%igerTrichloressigsäure löslichem Stickstoff (im folgenden aus »Hydrolyseausmaß« bezeichnet) 80% der Menge des gesamten Stickstoffs in der Reaktionsmischung übersteigt. Sofort nach beendeter Hydrolyse wird das Hydrolysat ΊΟ Minuten auf 800C erhitzt, um das Enzym zu inaktivieren und gleichzeitig die Reaktionsmischung zu pasteurisieren. Nach dem Pasteurisieren wird das Hydrolysat durch ein 30 — 40 mesh-Sieb aus rostfreiem Stahl filtriert und zur Entfernung von Fett und unlöslichem Material zentrifugiert, die in der flüssigkeitshaltigen Hydrolyse enthalten sind. Dann wird die Flüssigkeit konzentriert und in üblicher Weise zu einem getrockneten Produkt getrocknet.
Um die Wirkung dieses getrockneten Produktes auf das Wachstum von Bakterien zu untersuchen, wurde zuerst eine vergleichende Studie des Wachstums von Diplococcus pneumoniae durchgeführt; dieser ist ein die Lungenentzündung hervorrufendes Bakterium und zeigt im BHI-Kulturmedium und im erfindungsgemäßen Medium genaue Anforderungen bezüglich seiner Nährstoffe. Das erfindungsgemäße Kulturmedium wurde hergestellt durch Ersetzen von Kalbshirn- und Rinderherzextrakt sowie Pepton im BHI-Kulturmedium durch das oben beschriebene getrocknete Produkt nach einem im folgenden beschriebenen Verfahren (nachfolgend »FLP-1« genannt).
Tabelle 1
Zusammensetzung und pH-Wert des zur Züchtung von Diplococcus pneumoniae verwendeten Kulturmediums
FLP-I Kulturmedium 30.0 g 7,0 BHI-Kulturmedium 200 ecm
Getrocknetes Π Extrakt aus
Fischprotein- Kalbshirn
hydrolysat 5.0 g 250 ecm
Natriumchlorid Extrakt aus
Rinderherz 10,0 g
Pepton 5.0 g
2,0 g Nail 2,0 g
Dextrose Dikaliumphosphat 2,5 g Dextrose 2.5 g
Dikalium
pH-Wert phosphat 7,0
Dest Wasser auf pH-Wert auf 1 1
dest. Wasser
einer Wellenlänge von 660 πιμ, berechnet Die Trübung des Mediums auf der Ordinate ist als Funktion der meubationsdauer auf der Abszisse ausgedrückt (a) bedeutet die Wachstumskurve der Bakterien im FLP-I
S Kulturmedium, und (b) bedeutet die Wachstumskurve der Bakterien im BHI-Kulturmedium. Aus den in F i g. 1 gezeigten Ergebnissen geht deutlich hervor, daß das FLP-I Kulturmedium eine bemerkenswerte Wirkung auf das Bakterienwachstum zeigt und wirksamer als das
ίο BHI-Kulturmedium ist
Ein ähnlicher Versuch wurde mit Salmonella paratyphi B durchgeführt, die u. a. für Paratyphus B verantwortlich sind, im Vergleich zum oben beschriebenen Diplococcus pneumoniae nicht so strikte Anforderungen bezüglich Ernährung stellen und nicht nur für den Menschen, sondern auch für Tiere gefährlich werden. Zusammensetzung und pH-Wert der Kulturmedium zur Züchtung von Salmonella paratyphi B sind in Tabelle 2 aufgeführt.
Tabelle 2
Zusammensetzung und pH-Wert des Kulturmediums zur Züchtung von Salmonella paratyphi B
FLP-2 Kulturmedium
HIB-Kulturmedium
Getrockn. Fisch- 30.0 g
proteinhydrolysat
Natriumchlorid 5,0 g
pH-Wert 7,2
Dest. Wasser auf 1 1
Extrakt aus 500 ecm
Rinderher?
Pepton 10.0 g
Natriumchlorid 5.0 g
pH-Wert 7.2
dest. Wasser auf 1 I
Zusammensetzung und pH-Wert der zur Züchtung von Diplococcus pneumoniae verwendeten Kulturmedien sind in Tabelle 1 gezeigt. Die Bakterien wurden gezüchtet, indem man 0,5 ecm des Inoculums zu 50 ecm jedes Kulturmediums zugab Und bei 37°C züchtete. Das Bakterienwachstum wurde nach üblichen Verfahren durchgeführt und durch Trübung (O. D.), bestimmt bei Die Versuchsergebnisse sind in F i g. 2 aufgeführt, (a) bedeutet die Wachstumskurve von Salmonella paratyphi B im FLP-2 Kulturmedium und (b) diejenige im HIB-Kulturmedium. Wiederum hat das FLP-2 Kulturmedium eine günstigere Wirkung auf das Bakterienwachstum als das HIB-Kulturmedium.
In allen Versuchen wurde die Trübung des Mediums als Index tür das Bakterienwachstum verwendet, und zwar weil bereits festgestellt wurde, daß die erhöhte Trübung des Mediums parallel zur Vermehrung der Bakterienzellen ist.
Es wurden weiterhin Versuche zur Bestimmung des Konzentrationsbereiches an Fischproteinhydrolysat gemacht, das dem Kulturmedium zugefügt werden sollte. Das Testverfahren war wie folgt:
Es wurden Kulturmedien hergestellt, indem man Kalbshirn- und Rinderherzextrakt sowie Pepton im BHI-Kulturmedium durch das getrocknete Produkt bis zu einer Konzentration von 5,3,1 und 0,5% (Gew7Vol.) ersetzte, um so Streptococcus faecalis zu züchten; ein ähnliches Kulturmedium wurde hergestellt, indem man Rinderherzextrakt und Pepton im HIB-Kulturmedium durch das getrocknete Produkt bis zu einer Konzentration von 5, 3,1 und 0,5% (Gew./Vol.) zur Züchtung von Shigella sonnei ersetzte, Str. faecalis und Sh. sonnei
wurden nach demselben Verfahren wie die oben beschriebenen Bakterien gezüchtet.
Die Versuchsergebnisse sind in Fig.3 und 4 gezeigt. F i g. 3 zeigt Wachstumskurven von Str. faecalis in den Kulturmedien, die das getrocknete Produkt in einer Konzentration von 5, 3, 1 und 0,5% (GewyVol.) sowie weiter 0,5% (Gew/Vol.) Natriumchlorid, 0,2% (Gew./ Vol.) Dextrose und 0,25% (Gew./Vol.) Dikaliumphosphat enthielten; der pH-Wert wurde auf 7,0 eingestellt.
Fi g, 3 zeigt weiterhin Wachstumskurven im BHI-Kulturmedium, ebenfalls ausgedrückt als Zählung der lebenden Bakterienzellen. Fig.4 zeigt Wachstumskurven von Sh. sqnnei in den Kulturmedien, die das getrocknete Produkt in einer Konzentration von 5, 3,1 und 0,5% (GewVVol.). sowie 0,5% (Gew./Vol.) Natriumchlorid enthielten und auf einen pH-Wert von 7,2 eingestellt waren. Ebenfalls aufgeführt sind die Wachstumskurven im HIB-Kulturmedium. ausgedrückt als Zählung der lebenden Bakterienzellen. Die Ordinate zeigt jeweils die Zählung der lebenden Bakterienzellen, während die Abszisse die lncubationszeit angibt In jeder F i g. bedeuten (a), (b), (c) und (d) die Wachstumskurven der Bakterien im erfindungsgemäßen Kulturmedium, das das getrocknete Produkt in einer Konzentration von 5, 3, 1 bzw. 03% (Gew./Vol.) enthält, während (e) die Bakterienwachstumskurve im BHI- und HIB-Kulturmedium bedeutet
Aus den Ergebnissen dieser Versuche kann geschlossen werden, daß ein Unterschied zwischen den erfindungsgemäßen Kulturmedien und dem BHI- und HIB-Kulturmedium nur schwer feststellbar ist. Die Anzahl der lebenden Bakterienzellen nimmt während der Incubation über längere Dauer im Kulturmedium, das das getrocknete Produkt in einer Konzentration unter 0,5% (Gew7Vol.) enthält schnell ab, während die Bakterien in einem 0,5 bis 3% Produkt enthaltenden Medium eine zufriedenstellende Verbreitung zeigen und wobei weiterhin die Verbreitung der Bakterien in einem Kulturmedium mit einer Konzentration über 3% ähnlich ist wie im Medium mit 3%.
Weiterhin erfolgte eine Vergleichsuntersuchung des Bakterienwachstums anderer Arten als der oben beschriebenen im erfindungsgemäßen Kulturmedium, wobei diese anderen Bakterienarten häufig in medizinischen Laboratorien und Forschungsabteilungen von Krankenhäusern festgestellt und gezüchtet werden. Die Ergebnisse sind als relative Trübung des FLP-I und FLP-2 Kulturmediums der vorliegenden Erfindung sowie der üblichen HIB- und BHI-Kulturmedium nach einer Incubation von 8, 24 und 48 Stunden ausgedrückt und in Tabelle 3 und 4 dargestellt
Tabelle 3
Vergleichs des Bakterienwachstums im FLP-I Medium mit demjenigen im BHI-Kulturmedium
Bakterium Relative Trübung der nach
Bakterienkultur in FLP-I 24stündiger
gegenüber dem Incubation
BHI-Medium: % 100
nach 84
Sstündiger
Incubation 112
Lysteria monocyrogenes 84 105
Corynebacterium 143 103
diphtheriae 281*)
Str. faecalis 109 143
Str. haemolyticus 92
Str. viridans 194
Bacteroides fragilis —
Diplococcus pneumoniae 148
In der folgenden Tabelle ist die Zusammensetzung von FLP-2.und HIB-Kulturmediümwie in Täbelle2.
Tabelle 4 Relative Trübung der nach
Bakterienkultur 111 FLP-2 : 24stundiger
gegenüber einem Incubation
Vergleich des Bakterienwachstums ini FLP-2 Medium HIB-Kuluirmedium: % 113
und HIB-Kulturmedium nach 148
3aktenum Sstündiger 135
Incubation 100
115 106
117 184
152 7b
108 82
105 98
Shigella dysenteriae 53 116
Shigella flexneri 95 170
Shigella boydii 66 108
Shigella sonnei 160 90
Bacillus subtilis 105 103
Staphylococcus aureus 181 127
Staphylococcus sp.*) 67 277
Staphylococcus epidermidis 86 126
Escherichia coli B**) 90 114
Escherichia coli Oi 24***) 126 143
Pseudomonas aeruginosa 124 130
Serratia marcescens 133 149
Aeromonas hydrophila 126
Salmonella typhi 135
Salmonella paratyphi A 150
Salmonella paratyphi B 160
Salmonella typhimurium
Salmonella enteritidis
Proteus vulgaris
Proteus mirabilis
Proteus morganii
*) = dies ist der Wert nach 48slündiger Züchtung.
In der obigen Tabelle war die Zusammensetzung des FLP-I und BHI-Kulturmediums wie in Tabelle 1.
In der obigen Tabelle bedeutet:
*) = Mannit zersetzendes Bakterium, das keine koagulierende Aktivität zeigt.
**) = Lactose zersetzender, nicht-pathogener Typ von
Escherichia coli.
***) = pathogener Typ von Escherichia coli, der Lactose nicht zersetzt
Die Ergebnisse der Tabellen 3 und 4 zeigen, daß Shigella boydii, Escherichia coli B, Pseudomonas aeruginosa, Salm, paratyphi A, Salm, paratyphi B, Salm, enteritidis, Salm, typhimurium, Proteus vulgaris, P. mirabilis, P. morganii, Corynebacterium diphtheriae, Str.
viridans und Diplococcus pneumoniae nach 8stündiger Züchtung ein ausgezeichnetes Wachstum in dem erfindungsgemäßen Nährmedium zeigen.
Das Wachstum von Shig. flexneri, Sh. boydii. Staph. aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salm, paratyphi A,
Salm, paratyphi B, Salm, typhimurium Proteus vulgaris. P. mirabilis, P. morganii und Diplococcus pneumoniae sowie Bacteroides fragilis im erfindungsgemäßen Kulturmedium überstieg nach 24- bzw. 48stündiger Züchtung dasjenige im HIB- und BHI-Medium.
Bakterien, die nach 8- und 24stündiger Incubation dasselbe Wachstum im erfindungsgemäßen Kulturmedium und in den üblichen Medien zeigen, sind Sh. dysenteriae, Sh. flexneri, Sh. sonnei, Staph. sp-Escherichia coü O124, Aeromonas hydrophila, Salm.
typhi. Bacillus subtilis, Lysteria monocytogenes, Str. faficalis und Str. haemolyticus bzw. Sh. dysenteriae, Staph. epidermidis. Escherichia coli B, E. coli On*, Serratia marcescens. Sh. sonnei. Aeromonas hydrophila.
Salm, lyphi, Salm, enteritidis, Lysteria monocytogenes, Corynebacterium diphtheriae, Str. haemolyticus, Str. faecalis, Str. viridansund Bacillus subtilis.
Der aus den Tabellen 3 und 4 ersichtliche hohe Wert der relativen Trübung nach 8stündiger Incubation im erfindungsgemäßen Kulturmedium gegenüber dem PHl- und HIB-Kulturmedium macht deutlich, daß das Bäkterienwachstum durch das erfindungsgemäße Kulturmedium beschleunigt und die zur Feststellung des Bakteriums notwendige Züchtungszeit verkürzt wird.
Die im erfindungsgemäßen Kulturmedium züchtbaren Bakterien umfassen Arten von Shigella, Salmonella. Proteus, Staphylococcus und Streptococcus sowie Diplococcus pneumoniae, Escherichia coli, Serratia marcescens, Aeromonas hydrophila, Bacteroides fragilis, Pseudomonas aeroginosa, Lysteria monocytogenes, Corynebacterium diphtheriae und Bacillus subtilis usw. Die dem Kulturmedium zuzufügende Natriumchloridkonzentration beträgt etwa 0,5% (Gew7VoL). was ähnlich der in üblichen Kulturmedium verwendeten Konzentration ist. Bei der Züchtung von Bakterien mit besonderen Anforderungen an die Nährstoffe, wie Streptococcus und Diplococcus, sollten Glucose und Dikaliumphosphat zugegeben werden, obgleich ein wesentliches Wachstum sogar ohne deren Zugabe festgestellt werden kann.
Zur Konservierung eines Stammes, Bestimmung der Zählung lebender Bakterienzellen, Sensibilitätstests gegenüber Antibiotika, Isolierung und Identifizierung usw. kann das erfindungsgemäße Kulturmedium selbstverständlich durch Zugabe einer solchen Agrarmenge verfestigt werden, wie sie gewöhnlich in einem festen Kulturmedium verwendet wird.
Das erfindungsgemäße Kulturmedium wird einer Einstellung des pH-Wertes auf 7,2 ±0,2 unterworfen und nach üblichen Verfahren sterilisiert. Das gewünschte Bakterium wird aufgeimpft und für entsprechende Zeit bei einer für das Bakterienwachstum optimalen Temperatur gezüchtet
Das erfindungsgemäße Kulturmedium eignet sich zur Massenherstellung und ist in seiner Qualität beständiger und einheitlicher als die üblichen Kulturmedien, da die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Kulturmedien verwendeten Fische billiger sind und in großen Mengen lieferbar sind. Weiterhin brauchen im erfindungsgemäßen Kulturmedium keine kostspieligen Extrakte tierischer Organe, Blutserum usw. verwendet zu werden, da das erfindungsgemäße Medium auch ohne sie ein ausgezeichnetes Wachstum für viele Arten von Bakterien im Vergleich zu HIB- und BHI-Kulturmedien ergibt und außerdem die Incubationszeit, die zur Feststellung der Bakterien erforderlich ist, verkürzt
Beispiel 1
500 g Makrelenfleisch wurden in einer Zerkleinerungsvorrichtung zerkleinert und in ein Gefäß gegeben. Dazu wurde dieselbe Menge Wasser zugefügt Nach Erhitzen der Mischung auf 500C wurde Protease, hergestellt aus Streptomyces griseus (50 000 [PU] Cas. F. R. B. γ tyr) in einer Menge von 0,6% des Rohmaterials Zugegeben, und die enzymatische Hydrolyse wurde 4 Stunden bei 500C durchgeführt. Danach wurde die hydrolysierte Flüssigkeit auf 80°C erhitzt und zur Inaktivierung des Enzyms 10 Minuten bei dieser Temperatur stehen gelassen.
Nach Filtrieren durch ein 30 — 40 mesh-Sieb aus rostfreiem Stahl wurde das Hydrolysat mit einer Zentrifuge zur Entfernung von Fett und löslichem Materia! zentrifugiert; so erhielt man 930 g enzymatisch
ίο hydrolysierte Fischproteinflüssigkeit mit einem Proteingehalt von 8,85%, deren Hydrolysegrad 95% betrug. Die überstehende Fraktion wurde mit einem Verdampfer auf einen Feststoffgehalt von 35% konzentriert und dann sprühgetrocknet; so erhielt man 82 g getrocknetes Hydrolysat aus Fischprotein. Das FLP-2 Kulturmedium mit der in Tabelle 2 angegebenen Zusammensetzung wurde unter Verwendung dieses getrockneten Produktes hergestellt.
FLP-2 und HIB-Kulturmedium wurden in 100-ccm-Kolben gegeben und 15 Minuten bei 121°C sterilisiert. Jedes Kulturmedium wurde mit 0,5 ecm Inoculum aus Proteus vulgaris in Tryptosoya-Brühe beimpft und 48 Stunden bei 37° C bebrütet. In bestimmten Zeitabständen wurden 2-ccm-Anteile der Kulturflüssigkeit entnommen und bei einer Wellenlänge von 660 ΐημ einer Trübungsbestimmung unterworfen, die als optische Dichte (O. D.) ausgedrückt wurde, um in beiden Kulturmedien den Zustand des Bakterienwachstums zu vergleichen.
Nach 24 und 48 Stunden Wachstum von Proteus vulgaris im FLP-2 Kulturmedium betrugen die Werte 0,78 bzw. 1,00. Dagegen betrugen sie im HIB-Kulturmedium nur 0,54 bzw. 0,70, was deutlich niedriger als die obigen Werte ist. Daraus ist ersichtlich, daß das erfindungsgemäße Kulturmedium eine ausgezeichnete Wirkung auf das Bakteriumwachstum hat.
Be is pi el 2
Unter Verwendung des gemäß Beispiel 1 erhaltenen getrockneten Produktes wurde das FLP-I Kulturmedium mit der in Tabelle 1 genannten Zusammensetzung hergestellt. 10-ccm-Anteile dieses FLP-I Mediums und eines BHI-Kulturmediums wurden in sechs Testrohre gegeben und 15 Minuten bei 121°C sterilisiert Danr wurde jeweils mit 0,1 ecm eines Inoculums au: Bacteroides fragilis, erhalten durch übliche anaerobe Incubation in Tryptosoya-Brühe, geimpft und anaerot 48 Stunden bei 37° C bebrütet In bestimmten Zeitabständen wurden 2-ccm-Anteile der Kulturflüssigkei entnommen und bei einer Wellenlänge von 660 m\. einer Trübungsbestimmung unterworfen, die als opti sehe Dichte ausgedrückt wurde, um den Zustand de: Bakterienwachstums in beiden Kulturmedien zu verglei chen.
Nach 30- und 48stündigem Wachstum von Bacteroi des fragilis im FLP-I Kulturmedium betrugen die Wert< 0,05 bzw. 030, wobei die entsprechenden Werte in BHI-Medium von 0,01 bzw. 0,10 deutlich niedriger sind Somit zeigt das erfindungsgemäße Kulturmedium eini ausgezeichnete Wirkung auf das Bakterienwachstum.
Hierzu 3 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Kulturmedium zum Züchten von Bakterien, dadurch gekennzeichnet, daß es unter Verwendung eines getrockneten Hydrolysats, das durch Hydrolyse von Fischprotein mit Pancreatin oder einer aus den Gattungen Aspergillus, Streptomyces, Bacillus oder Rhizopus gewonnenen Protease, wobei die Protease eine optimale Aktivität bei pH um 7 zeigt und wobei das Fischprotein bis zu einem Hydrolysegrad, bei dem die Menge von in lO°/oiger Trichloressigsäure löslichem Stickstoff 80% der Menge des gesamten Stickstoffs in der Reaktionsmischung übersteigt, hydrolysiert wird, und wobei zur Hydrolyse 0,1 uis 0,6 Gew.-% Enzym pro Volumen Rohmaterial eingesetzt werden. Abfiltrieren der unlöslichen Substanzen aus dem Hydrolysat, Entfetten und Trocknen des Filtrats erhalten worden ist, in einer Menge von 0,5 bis 3,0 Gew7Vol.°/o anstelle des Infusionsmaterials aus tierischen Orangen und Körperflüssigkeiten
    üblichen Kulturmedium hergestellt wurde.
    im
DE19732318638 1972-12-11 1973-04-13 Kulturmedium zum Züchten von Bakterien Expired DE2318638C3 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP12412372 1972-12-11
JP12412372A JPS5336033B2 (de) 1972-12-11 1972-12-11

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