DE2318638C3 - Kulturmedium zum Züchten von Bakterien - Google Patents
Kulturmedium zum Züchten von BakterienInfo
- Publication number
- DE2318638C3 DE2318638C3 DE19732318638 DE2318638A DE2318638C3 DE 2318638 C3 DE2318638 C3 DE 2318638C3 DE 19732318638 DE19732318638 DE 19732318638 DE 2318638 A DE2318638 A DE 2318638A DE 2318638 C3 DE2318638 C3 DE 2318638C3
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- culture medium
- bacteria
- hydrolysis
- growth
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 239000001963 growth media Substances 0.000 title claims description 96
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims description 29
- 102000033767 Fish Proteins Human genes 0.000 claims description 13
- 108010028690 Fish Proteins Proteins 0.000 claims description 13
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 claims description 9
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 claims description 9
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 210000001124 Body Fluids Anatomy 0.000 claims description 4
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 claims description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 229940055695 Pancreatin Drugs 0.000 claims description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 3
- 229960004319 Trichloroacetic Acid Drugs 0.000 claims description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N Trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 claims description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 230000003301 hydrolyzing Effects 0.000 claims 1
- 229910052813 nitrogen oxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 239000002609 media Substances 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000005429 turbidity Methods 0.000 description 9
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 8
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 241000577483 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi B Species 0.000 description 5
- 229940075615 Bacillus subtilis Drugs 0.000 description 4
- 240000008371 Bacillus subtilis Species 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 4
- 241000606124 Bacteroides fragilis Species 0.000 description 4
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 4
- 229940007042 Proteus vulgaris Drugs 0.000 description 4
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 4
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- 230000001488 breeding Effects 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 3
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 3
- 229940055023 Pseudomonas aeruginosa Drugs 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 3
- 229940098362 Serratia marcescens Drugs 0.000 description 3
- 229940115939 Shigella sonnei Drugs 0.000 description 3
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 210000001557 animal structures Anatomy 0.000 description 3
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000276438 Gadus morhua Species 0.000 description 2
- 241000588772 Morganella morganii Species 0.000 description 2
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 2
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 2
- 241000269821 Scombridae Species 0.000 description 2
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 2
- 241000607766 Shigella boydii Species 0.000 description 2
- 241001467018 Typhis Species 0.000 description 2
- 235000019516 cod Nutrition 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000020640 mackerel Nutrition 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 206010018746 Growth accelerated Diseases 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 210000000282 Nails Anatomy 0.000 description 1
- 101710018420 PTPN18 Proteins 0.000 description 1
- 206010033971 Paratyphoid fever Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 206010039447 Salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 1
- 241001125046 Sardina pilchardus Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 229940007046 Shigella dysenteriae Drugs 0.000 description 1
- 241000607764 Shigella dysenteriae Species 0.000 description 1
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 1
- 206010040550 Shigella infection Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229940037645 Staphylococcus epidermidis Drugs 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 241001504592 Trachurus trachurus Species 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000018867 autolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large scale production Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting Effects 0.000 description 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000009958 sewing Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Description
25
Die Erfindung bezieht sich auf ein Kulturmedium zur Züchtung von Bakterien.
Bisher wurden Herzinfusionskulturmedien (abgekürzt »HIB-Kulturmedium«) und Hirn-Herz-Infusionskulturmedien (abgekürzt »HBI-Kulturmedium«) usw.
weitgehend als Kulturmedium zur Züchtung von Bakterien in Forschungs- oder Kliniklaboratorien der
Medizin und zur Feststellung von Bakterien in Untersuchungszimmern von Krankenhäusern verwendet; diese Kulturmedien waren zweckmäßig durch eine
tierische Körperflüssigkeit, wie Blut und Serum, für die
Züchtung von Bakterien verstärkt, die bestimmte Anforderungen bezüglich ihrer Ernährung stellen. Die
HIB- und BHI-Kuiturmedien haben jedoch die Nachteile, daß die zur Herstellung der Infusionsbrühe
verwendeten Tierorgane schwer zu beschaffen sind; weiterhin ist die Erzielung der Einheitlichkeit und
Massenherstellung des Kulturmediums aufgrund der Qualitätsunterschiede von Rinderherzen oder Kalbshirnen schwierig, so daß die Kulturmedien sehr kostspielig
sind. Außerdem ist das Arbeiten im Fall einer Verstärkung mit tierischer Körperflüssigkeit komplizierter und auch daher wurden die Kulturmedien t eurer.
Im »Chemischen Zentralblatt«, 1956, Seite 1340,
Ref. 43t0, ist beschrieben, daß Pepton im Endo-Kulturmedium durch ein preiswertes Fischproteinhydrolysat
ersetzt werden kann; diesen Ausführungen kann jedoch nicht entnommen werden, daß dieses Fischproteinhydrolysat einen ausgezeichneten Wachstumsfaktor für
pathogene Bakterien enthält und als Ersatz für ein BHl- oder HIB-Kulturmedium verwendet werden kann.
Die Feststellung von Bakterien ist ein wesentliches Verfahren zur Verhütung von Erkrankungen, so daß das
Auffinden eines wirksamen und billigen Kulturmediums ein dringendes Problem ist.
Erfindungsgemäß wird nun ein billiger L· satz für die
kostspieligen Bestandteile im HIB- oder BHI-Kulturmedium geschaffen, so daß diese in der Verwendung 6s
zweckmäßiger, bei der großtechnischen Herstellung billiger und in der Qualität einheitlicher im Vergleich zu
den üblichen, oben beschriebenen Kulturmedien sind.
Die vorliegende Erfindung schafft nun ein neues Kulturmedium zur Züchtungvon Bakterien, das dadurch
«kennzeichnet ist. daß es unter Verwendung eines
fetrockneten Hydrolysat* das durch Hydrolyse von
Fischprotein mit Pancreatin oder einer aus den Gattungen AspergiUus. Streptomyces, Bacillus oder
Rfozopus gewonnenen Protease wobei die Protease
Se optimale Aktivität bei pH um 7 zeigt und wöbe, das
Fischprotein bis zu einem Hydrolysegrad, bei dem die
Menge von in 10%iger Trichloressigsäure löslichem
Stickstoff 80% der Menge des gesamten Stickstoffs in
der Reaktionsmischung übersteigt, hydrolysiert wird
Sd wobei zur Hydrolyse 0,1 bis 0,6 Gew.« Enzym pro
Volumen Rohmaterial eingesetzt werden, AbfUtneren
der unlöslichen Substanzen aus dem Hydrolysat, Entfetten und Trocknen des Filtrats erhalten worden ist,
m einer Menge von über 0,5 bis 3,0 GewJVoL« anstelle
des Infusionsmaterials aus tierischen Organen und Körperflüssigkeiten im üblichen Kulturmedium hergestellt wurde.
Fiel Wachstumskurven von Diplococcus pneumoniae im erfindungsgemäßen, mit FLP-I bezeichnetem
Kulturmedium und BHI-Kulturmedium, ausgedruckt
durch die Trübung des Kulturmediums.
FiB 2 zeigt Wachstumskurven von Salmonella
paratyphi B in einem erfindungsgemäßen mit FLP-2 bezeichneten Kulturmedium und HIB-Kulturmedium,
ausgedrückt als Trübung des Kulturmediums.
Fie 3 zeigt Wachstumskurven von Streptococcus faecalis als Funktion der Konzentrationen des getrockneten Produktes im Kulturmedium, und
Fig 4 zeigt Wachstumskurven von Shigella sonnei
als Funktion der Konzentrationen des getrockneten Produktes im Kulturmedium.
In der Erfindung umfaßt die Bezeichnung »Bakterien« Bakterien, die zur Forschung und klinischen
Untersuchung in medizinischen Forschungslaboratonen
und in den Bakterienuntersuchungsabteilungen von Krankenhäusern gezüchtet werden.
Die Herstellung eines getrockneten Produktes des Hydrolysates aus Fischprotein (im folgenden als
»getrocknetes Produkt« bezeichnet) wird anschließend
i.
Ais Kon- bzw. Ausgangsmaterial werden Fische verwendet, wie Thunfisch, Bonito, Kabeljau, Dorsch,
Haifisch. Makrele, Sardine, Roßmakrele, Makrelenhecht usw. Es können alle Körperteile dieser Fische ebenso
wie auch Walfleisch verwendet werden.
Bei der Verwendung eines getrockneten Produktes als Bestandteil für das Kulturmedium wird als
Rohmaterial frisches Fischfleisch oder sofort nach derr Fang eingefrorenes Fischfleisch verwendet, da jeglichei
Geruch oder Verfärbung unerwünscht sind. Die Fische werden vermählen, in lauwarmem Wasser dispergier
und einer enzymatischen Behandlung unterworfen.
Die zum Hydrolysieren des Fischproteins verwendet«
Protease muß aus Pancreatin und von AspergiUus Bacillus, Streptmyces, Rhizopus hergeleiteten Enzymei
stamme und einen für die Aktivität optimalen pH-Wer um 7 zeigen. Eine Reaktionstemperatur von 35-55°(
ist für die Proteaseaktivität optimal, obgleich sie von de verwendeten Proteasespezies abhängt. Die Protease
menge sollte in Abhängigkeit vom Autolyseausmaß de Fisches, der spezifischen Aktivität der Protease und de
Dauer der Hydrolyse variiert werden, sie beträgt jedoc 0,1 -0,6% (Gew/Vol.) der Rohmaterialmenge. Di
Dauer der Hydrolyse liegt gewöhnlich zwische
1 „6 Stunden. Bei Verwendung von Fischen, die bereits
lange gelagert worden sind, sollte die Hydrolyse jedoch innerhalb einer Stunde beendet werden, da solche
Fische durch bakterielle Verunreinigung im Fall einer Reaktionsdauer über 6 Stunden zersetzt werden könntea
Das enzymatisch hydrolysierte Fischprotein erhält man nach einer solchen Enzymbehandlung in flüssiger
Form mit einem Feststoffgehalt von 9 -16%. Etwa 90% dieses Fcststoffgehahes bestehen aus Protein, Peptid,
Aminosäuren usw. Die Ausbeute des verflüssigten Proteins betagt 80—90% des als Rohmaterial verwendeten
Fischproteins. Die Hydrolyse ist beendet, wenn die Menge von in 10%igerTrichloressigsäure löslichem
Stickstoff (im folgenden aus »Hydrolyseausmaß« bezeichnet) 80% der Menge des gesamten Stickstoffs in
der Reaktionsmischung übersteigt Sofort nach beendeter Hydrolyse wird das Hydrolysat 10 Minuten auf 80" C
erhitzt, um das Enzym zu inaktivieren und gleichzeitig die Reaktionsmischung zu pasteurisieren. Nach dem
Pasteurisieren wird das Hydrolysat durch ein 30-40 mesh-Sieb aus rostfreiem Stahl filtriert und zur
Entfernung von Fett und unlöslichem Material zentrifugiert, die in der flüssigkeitshaltigen Hydrolyse enthalten
sind. Dann wird die Flüssigkeit konzentriert und in üblicher Weise zu einem getrockneten Produkt
getrocknet.
Um die Wirkung dieses getrockneten Produktes auf das Wachstum von Bakterien zu untersuchen wurde
zuerst eine vergleichende Studie des Wachstums von Diplococcus pneumoniae durchgeführt; dieser ist ein die
Lungenentzündung hervorrufendes Bakterium und zeigt im BHl-Kulturmedium und im erfindungsgemäßen
Medium genaue Anforderungen bezüglich seiner Nährstoffe. Das erfindungsgemäße Kulturmedium wurde
hergestellt durch Ersetzen von Kalbshirn- und Ruiderherzextrakt sowie Pepton im BHI-Kulturmedium
durch das oben beschriebene getrocknete Produkt nach einem im folgenden beschriebenen Verfahren (nachfolgend
» FLP-1« genannt).
Zusammensetzung und pH-Wert des zur Züchtung von Diplococcus pneumoniae verwendeten
Kulturmediums
| FLP-I Kulturmedium | 30,0 g | 7,0 | BHI-Kulturmedium | 200 ecm |
| Getrocknetes | Π | Extrakt aus | ||
| Fischprotein- hydrolysat Natriumchlorid |
5,0 g | Kalbshirn | 250 ecm | |
| Extrakt aus | ||||
| Rinderherz | 10,0 g | |||
| Pepton | 5,0 g | |||
| Dextrose | 2,0 g | Nail | 2,0 g | |
| Dikaliumphosphat 2,5 g | Dextrose | 2,5 g | ||
| Dikalium | ||||
| pH-Wert | phosphat | 7,0 | ||
| Dest. Wasser auf | pH-Wert | auf 1 I | ||
| dest. Wasser |
Zusammensetzung und pH-Wert der zur Züchtung von Diplococcus pneumoniae verwendeten Kulturmedien
sind in Tabelle 1 gezeigt Die Bakterien wurden gezüchtet, indem man 03 ecm des Inoculums zu 50 ecm
jedes Kulturmediums zugab und bei 370C züchtete. Das
Bakterienwachstum wurde nach üblichen Verfahren durcheeführt und durch Trübung (O. Ό.\ bestimmt bei
einer Wellenlänge von 660 mu, berechnet Die Trübung des Mediums auf der Ordinate ist als Funktion der
Incubationsdauer auf der Abszisse ausgedrückt (a)
bedeutet die Wachstumskurve der Bakterien im FLP-I Kulturmedium, und (b) bedeutet die Wachstumskurve
der Bakterien im BHI-Kulturmedium. Aus den in F i g. 1
gezeigten Ergebnissen geht deutlich hervor, daß das FLP-I Kulturmedium eine bemerkenswerte Wirkung
auf das Bakterienwachstum zeigt und wirksamer als das BHI-Kulturmedium ist
Ein ähnlicher 'Versuch wurde mit Salmonella paratyphi B durchgeführt, die α a. für Paratyphus B verantwortlich
sind, im Vergleich zum oben beschriebenen Diplococcus pneumoniae nicht so strikte Anforderungen
bezüglich Ernährung stellen und nicht nur für den Menschen, sondern auch für Tiere gefährlich werden.
Zusammensetzung und pH-Wert der Kulturmedium zur Züchtung von Salmonella paratyphi B sind in Tabelle 2
aufgeführt.
Zusammensetzung und pH-Wert des Kultiirmed-ums
zur Züchtung von Salmonella paratyphi B
Getrockn. Fisch- 30,0 g
proteinhydrolysat
proteinhydrolysat
Natriumchlorid 5,0 g
pH-Wert 7,2
pH-Wert 7,2
Dest. Wasser auf 1 1
Extrakt aus 500 ecm
Rinderherz
Pepton 10,0 g
Natriumchlorid 5,0 g
pH-Wert 7.2
dest. Wasser auf 1 I
Die Versuchsergebnisse sind in F i g. 2 aufgeführt, (a)
bedeutet die Wachstumskurve von Salmonella paratyphi B im FLP-2 Kulturmedium und (b) diejenige im
HIB-Kulturmedium. Wiederum hat das FLP-2 Kulturmedium eine günstigere Wirkung auf das Bakterienwachstum
als das HIB-Kulturmedium.
In allen Versuchen wurde die Trübung des Mediums als Index für das Bakterienwachstum verwendet, und
zwar weil bereits festgestellt wurde, daß die erhöhte Trübung des Mediums parallel zur Vermehrung der
Bakterienzellen ist
Es wurden weiterhin Versuche zur Bestimmung des Konzentrationsbereiches an Fischproteinhydrolysat gemacht,
das dem Kulturmedium zugefügt werden sollte Das Testverfahren war wie folgt:
Es wurden Kulturmedien hergestellt, indem man Kalbshirn- und Rinderherzextrakt sowie Pepton irr
BHI-Kulturmedium durch das getrocknete Produkt bis zu einer Konzentration von 5,3,1 und 0,5% (GewVVol.'
ersetzte, um so Streptococcus faecaiis zu züchten; eir ähnliches Kulturmedium wurde hergestellt, indem mar
Rinderherzextrakt und Pepton im HIB-Kulturmediurr durch das getrocknete Produkt bis zu einer Konzentra
tion von 5, 3,1 und 0,5% (Gew/VoL) zur Züchtung vor
Shigella sonnei ersetzte. Str. faecaiis und Sh. sonne wurden nach demselben Verfahren wie die obei
beschriebenen Bakterien gezüchtet
Die Versuchsergebnisse sind in F i g. 3 und 4 gezeigt F i g. 3 zeigt Wachstumskurven von Str. faecaiis in dei
Kulturmedien, die das getrocknete Produkt in eine
Konzentration von 5, 3, 1 und 0,5% (Gew7Vol.) sowii
weiter 0,5% (GewyVol.) Natriumchlorid, 0,2% (Gew. Vol.) Dextrose und 0,25% (Gew/Vol.) Dikaliumphos
phat enthielten; der pH-Wert wurde auf 7,0 eingestell·
Fig.3 zeigt weiterhin Wachstumskurven im BHI-KuI-lurmedium, ebenfalls ausgedrückt als Zählung der
lebenden Bakterienzellen. Fig.4 zeigt Wachstumskurven von Sh. sonnei in den Kulturmedien, die das
getrocknete Produkt in einer Konzentration von 5,3, 1
und 0,5% (Gew/Vol.) sowie 0,5% (Gew7Vol.) Natriumchlorid enthielten und auf einen pH-Wert von 7,2
eingestellt waren. Ebenfalls aufgeführt sind die Wachstumskurven im HIB-Kulturmedium, ausgedrückt als
Zählung der lebenden Bakterienzellen. Die Ordinate zeigt jeweils die Zählung der lebenden Bakterienzellen,
während die Abszisse die Incubalionszeit angibt. In jeder F i g. bedeuten (a), (b), (c) und (d) die Wachstumskurven der Bakterien im erfindungsgemäßen Kulturmedium, das das getrocknete Produkt in einer Konzentration von 5, 3, 1 bzw. 0,5% (Gew7Vol.) enthält, während
(e) die Bakterienwachstumskurve im BHI- und HIB-Kulturmedium bedeutet.
Aus den Ergebnissen dieser Versuche kann geschlossen werden, daß ein Unterschied zwischen den
erfindungsgemäßen Kulturmedien und dem BHI- und HIB-Kulturmedium nur schwer feststellbar ist. Die
Anzahl der lebenden Bakterienzellen nimmt während der Incubation über längere Dauer im Kulturmedium,
das das getrocknete Produkt in einer Konzentration unter 0,5% (Gew/Vol.) enthält, schnell ab, während die
Bakterien in einem 0,5 bis 3% Produkt enthaltenden Medium eine zufriedenstellende Verbreitung zeigen und
wobei weiterhin die Verbreitung der Bakterien in einem Kulturmedium mit einer Konzentration über 3%
ähnlich ist wie im Medium mit 3%.
Weiterhin erfolgte eine Vergleichsuntersuchung des Bakterienwachstums anderer Arten als der oben
beschriebenen im erfindungsgemäßen Kulturmedium, wobei diese anderen Bakterienarten häufig in medizinischen Laboratorien und Forschungsabteilungen von
Krankenhäusern festgestellt und gezüchtet werden. Die Ergebnisse sind als relative Trübung des FLP-I und
FLP-2 Kulturmediums der vorliegenden Erfindung sowie der üblichen HIB- und BHI-Kulturmedium nach
einer Incubation von 8, 24 und 48 Stunden ausgedrückt und in Tabelle 3 und 4 dargestellt.
Vergleichs des Bakterienwachstums im FLP-I Medium
mit demjenigen im BHI-Kulturmedium
| Bakterium | Relative Trübung der | nach |
| Bakterienkultur in FLP-I | 24stündiger | |
| gegenüber dem | Incubation | |
| BHI-Medium; % | 100 | |
| nach | 84 | |
| 8stündiger | ||
| Incubation | 112 | |
| Lysteria monocyrogenes | 84 | 105 |
| Corynebacterium | 143 | 103 |
| iiphtheriae | 281*) | |
| Str. faecalis | 109 | 143 |
| Str. haemolyticus | 92 | |
| Str. viridans | 194 | |
| Sacteroides fragilis | — | |
| Diplococcus pneumoniae | 148 |
In der folgenden Tabelle ist die Zusammensetzung von FLP-2 und HIB-Kulturmedium wie in Tabelle 2.
Vergleich des Bakterienwachstums im FLP-2 Medium und HIB-Kulturmedium
Bakterium
25
30
40
45
Shigella dysenteriae
Shigella flexneri
Shigella boydii
Shigella sonnei
Bacillus subtilis
Staphylococcus aureus
Siaphylococcus sp.#)
Staphylococcus epidermidis
Escherichia coli B**)
Escherichia coli Oi24···)
Pseudomonas aeruginosa
Serratia marcescens
Aeromonas hydrophila
Salmonella typhi
Salmonella paratyphi A
Salmonella paratyphi B
Salmonella typhimurium
Salmonella enteritidis
Proteus vulgaris
Proteus mirabilis
Proteus morganii
In der obigen Tabelle bedeutet:
*) = Mannit zersetzendes Bakterium, das keine koagulie-
rende Aktivität zeigt
**) = Lactose zersetzender, nicht-pathogener Typ von
Escherichia coli.
***) = pathogener Typ von Escherichia coli, der Lactose nicht
zersetzt.
| Relative Trübung der | nach |
| Bakterienkultur in FLP-2 | 24stündiger |
| gegenüber einem | Incubation |
| HIB-Kulturmediuni; % | 113 |
| nach | 148 |
| Sstündiger | 135 |
| Incubation | 100 |
| 115 | 106 |
| 117 | 184 |
| 152 | 76 |
| 108 | 82 |
| 105 | 98 |
| 53 | 116 |
| 95 | 170 |
| 66 | 108 |
| 160 | 90 |
| 105 | 103 |
| 181 | 127 |
| 67 | 277 |
| 86 | 126 |
| 90 | 114 |
| 126 | 143 |
| 124 | 130 |
| 133 | 149 |
| 126 | |
| 135 | |
| 150 | |
| 160 |
') = dies ist der Wert nach 48stündiger Züchtung.
In der obigen Tabelle war die Zusammensetzung des
7LP-I und BHI-Kulturmediums wie in Tabelle 1.
Die Ergebnisse der Tabellen 3 und 4 zeigen, daß Shigella boydii, Escherichia coli B, Pseudomonas aeruginosa, Salm, paratyphi A, Salm, paratyphi B, Salm,
enteritidis, Salm, typhimurium, Proteus vulgaris, P.
mirabilis, P. morganii, Corynebacterium diphtheriae, Str.
viridans und Diplococcus pneumoniae nach 8stündiger
Züchtung ein ausgezeichnetes Wachstum in dem erfindungsgemäßen Nähnnedium zeigen.
Das Wachstum von Shig. flexneri, Sh. boydii, Staph.
aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salm, paratyphi A.
Salm, paratyphi B, SaIm. typhimurium Proteus vulgaris,
P. mirabilis, P. morganii und Diplococcus pneumoniae sowie Bacteroides fragilis im erfindungsgemäßen
Kulturmedium überstieg nach 24- bzw. 48stündiger Züchtung dasjenige im HIB- und BHI-Medium.
Bakterien, die nach 8- und 24stündiger Incubation
dasselbe Wachstum im erfindungsgemäßen Kulturmedium und in den üblichen Medien zeigen, sind Sh.
dysenteriae, Sh. flexneri, Sh. sonnei, Staph. sp,
Escherichia coli Ouj, Aeromonas hydrophila, Salm.
typhi. Bacillus subtilis, Lysteria monocytogenes, Str.
faecalis und Str. haemolyticus bzw. Sh. dysenteriae, Staph. epidermidis, Escherichia coli B, E coli Ou*
Serratia marcescens, Sh. sonnei, Aeromonas hvdrorjhila.
Salm, typhi, Salm, enterilidis, Lysteria monocytogenes,
Corynebacterium diphtheriae, Str. haemolyticus, Sir.
faecalis, Str. viridans und Bacillus subtilis.
Der aus den Tabellen 3 und 4 ersichtliche hohe Wert der relativen Trübung nach Sstündiger Incubation im
erfindungsgemäßen Kulturmedium gegenüber dem BHl- und HIB-Kulturmedium macht deutlich, daß das
Bakterienwachstum durch das erfindungsgemäße Kulturmedium beschleunigt und die zur Feststellung des
Bakteriums notwendige Züchtungszeit verkürzt wird.
Die im erfindungsgemäßen Kulturmedium züchtbaren Bakterien umfassen Arten von Shigella, Salmonella,
Proteus, Staphylococcus und Streptococcus sowie Diplococcus pneumoniae, Escherichia coli, Serratia
marcescens, Aeromonas hydrophila, Bacteroides fragilis, Pseudomonas aeroginosa, Lysteria monocytogenes,
Corynebacterium diphtheriae und Bacillus subtilis usw. Die dem Kulturmedium zuzufügende Natriumchloridkonzentration
beträgt etwa 0,5% (GewVVol.), was ähnlich der in üblichen Kulturmedium verwendeten
Konzentration ist. Bei der Züchtung von Bakterien mit besonderen Anforderungen an die Nährstoffe, wie
Streptococcus und Diplococcus. sollten Glucose und Dikaliumphosphat zugegeben werden, obgleich ein
wesentliches Wachstum sogar ohne deren Zugabe festgestellt werden kann.
Zur Konservierung eines Stammes, Bestimmung der Zählung lebender Bakterienzellen. Sensibilitätstests
gegenüber Antibiotika, Isolierung und Identifizierung usw. kann das erfindungsgemäße Kulturmedium selbstverständlich
durch Zugabe einer solchen Agrarmenge verfestigt werden, wie sie gewöhnlich in einem festen
Kulturmedium verwendet wird.
Das erfindungsgemäße Kulturmedium wird einer Einstellung des pH-Wertes auf 7,2 ± 0,2 unterworfen und
nach üblichen Verfahren sterilisiert. Das gewünschte Bakterium wird aufgeimpft und für entsprechende Zeit
bei einer für das Bakterienwachstum optimalen Temperatur gezüchtet.
Das erfindungsgemäße Kulturmedium eignet sich zur Massenherstellung und ist in seiner Qualität beständiger
und einheitlicher als die üblichen Kulturmedien, da die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Kulturmedien
verwendeten Fische billiger sind und in großen Mengen lieferbar sind. Weiterhin brauchen im erfindungsgemäßen
Kulturmedium keine kostspieligen Extrakte tierischer Organe. Blutserum usw. verwendet zu werden, da
das erfindungsgemäße Medium auch ohne sie ein ausgezeichnetes Wachstum für viele Arten von
Bakterien im Vergleich zu HIB- und BHI-Kulturmedien
ergibt und außerdem die Incubationszeit, die zur Feststellung der Bakterien erforderlich ist, verkürzt
500 g Makrelenfleisch wurden in einer Zerkleinerungsvorrichtung zerkleinert und in ein Gefäß gegeben.
Dazu wurde dieselbe Menge Wasser zugefügt Nach Erhitzen der Mischung auf 500C wurde Protease,
hergestellt aus Streptomyces griseus (50 000[PU] Cas. F. R. B. γ tyr) in einer Menge von 0,6% des Rohmaterials
zugegeben, und die enzymatische Hydrolyse wurde 4 Stunden bei 50°C durchgeführt. Danach wurde die
hydrolysierte Flüssigkeit auf 8O0C erhitzt und /ur Inaktivierung des Enzyms 10 Minuten bei dieser
Temperatur stehen gelassen.
Nach Filtrieren durch ein 30 —40 mesh-Sieb aus
rostfreiem Stahl wurde das Hydrolysat mit einer Zentrifuge zur Entfernung von Fett und löslichem
Material zentrifugiert; so erhielt man 930 g enzymatisch
ίο hydrolysierte Fischproteinflüssigkeit mit einem Proteingehalt
von 8,85%, deren Hydrolysegrad 95% betrug. Die überstehende Fraktion wurde mit einem Verdampfer
auf einen Feststoffgehalt von 35% konzentriert und dann sprühgetrocknet; so erhielt man 82 g getrocknetes
Hydrolysat aus Fischprotein. Das FLP-2 Kulturmedium mit der in Tabelle 2 angegebenen Zusammensetzung
wurde unter Verwendung dieses, getrockneten Produktes hergestellt.
FLP-2 und HIB-Kulturmedium wurden in 100-cem-Kolben gegeben und 15 Minuten bei 12'c C sterilisiert.
Jedes Kulturmedium wurde mit 0,5 ecm Inoculum aus Proteus vulgaris in Tryptosoya-Brühe beimpft und
48 Stunden bei 37'C bebrütet. In bestimmten Zeitabständen
wurden 2-ccm-Anteile der Kulturflüssigkeit entnommen und bei einer Wellenlänge von 660 mu
einer Trübungsbestimmung unterworfen, die als optische Dichte (O. D.) ausgedrückt wurde, um in beiden
Kulturmedien den Zustand des Bakterienwachstums /u
vergleichen.
jo Nach 24 und 48 Stunden Wachstum von Proteus
vulgaris im FLP-2 Kulturmedium betrugen die Werte 0,78 bzw. 1,00. Dagegen betrugen sie im HIB-Kuhurmcdium
nur 0.54 bzw. 0,70, was deutlich niedriger als die obigen Werte ist. Daraus ist ersichtlich, daß das
3S erfindungsgemäße Kulturmedium eine ausgezeichnete
Wirkung auf das Bakteriumwachstum hat.
Unter Verwendung des gemäß Beispiel 1 erhaltenen getrockneten Produktes wurde das FLP-I Kulturmedium
mit der in Tabelle 1 genannten Zusammensetzung hergestellt. 10-ccm-Anteile dieses FLP-I Mediums und
eines BHl-Kulturmediums wurden in sechs Testrohre gegeben und 15 Minuten bei 1210C sterilisiert. Dann
wurde jeweils mit 0,1 ecm eines Inoculums aus Bacteroides fragilis, erhalten durch übliche anaerobe
Incubation in Tryptosoya-Brühe, geimpft und anaerob 48 Stunden bei 37CC bebrütet. In bestimmten Zeitabständen
wurden 2-ccm-Anteile der Kulturflüssigkeit entnommen und bei einer Wellenlänge von 660 Γημ
einer Trübungsbestimmung unterworfen, die als optische Dichte ausgedrückt wurde, um den Zustand des
Bakterienwachstums in beiden Kulturmedien zu vergleichen.
Nach 30- und 48stündigem Wachstum von Bacteroi
des fragilis im FLP-I Kulturmedium betrugen die Wertt 0,05 bzw. 030, wobei die entsprechenden Werte in
BHI-Medium von 0,01 bzw. 0,10 deutlich niedriger sine
Somit zeigt das erfindungsgemäße Kulturmedium ein ausgezeichnete Wirkung auf das Bakterienwachstum.
Hierzu 3 Blatt Zeichnungen
Claims (1)
- Patentanspruch:Kulturmedium zum Züchten von Bakterien, dadurch gekennzeichnet, daß es unter Verwendung eines getrockneten Hydrolysate, das durch Hydrolyse von Fischprotein mit Pancreatin oder einer aus den Gattungen Aspergülus, Streptomyces, Bacillus oder Rhizopus ge»».^ ase, wobei die Protease eine optimale Aktivität bei pH um 7 zeigt und wobei das Fischprotein bis zu einem Hydrolysegrad, bei dem die Menge: von in tO%iger Trichloressigsäure löslichem Stickstort 80% der Menge des gesamten Stickstoffs in der Reaktionsmischung übersteigt, hydrolysiert_w*d, und wobei zur Hydrolyse 0,1 bis 0,6 Gew.-% Enzym pro Volumen Rohmateria] eingesetzt werden. Abfiltrieren der unlöslichen Substanzen aus dem Hydrolysat. Entfetten und Trocknen des Filtrats erhalten worden ist, in einer Menge von 05 bis 30Gew/Vol.% anstelle des Infusionsmaterials aus tierischen Orangen und Körperflüssigkeiten im üblichen Kulturmedium hergestellt wurde.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12412372 | 1972-12-11 | ||
| JP12412372A JPS5336033B2 (de) | 1972-12-11 | 1972-12-11 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2318638A1 DE2318638A1 (de) | 1974-06-12 |
| DE2318638B2 DE2318638B2 (de) | 1976-08-26 |
| DE2318638C3 true DE2318638C3 (de) | 1977-03-31 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4689226A (en) | Process for the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry | |
| DE2208451A1 (de) | Verfahren zum Zuchten von Sauerteig bakterien | |
| DE2445254A1 (de) | Verfahren zur verminderung des nucleinsaeuregehaltes bei der herstellung von essbaren, protein enthaltenden stoffen | |
| US3856627A (en) | Culture medium for bacteria | |
| DE2904239A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines materials auf der basis von blut, das zur zugabe zu nahrungsmittelprodukten geeignet ist, und das erhaltene material | |
| DE2643834A1 (de) | Verfahren zum herstellen von einzellprotein | |
| DE2318638C3 (de) | Kulturmedium zum Züchten von Bakterien | |
| DE2050945C3 (de) | Züchten lebensfähiger Staphylococcus-Bakterien zur Erzeugung einer Antivirus-Substanz | |
| DE1692313B2 (de) | Verfahren zum herstellen von dickgelegten, gesaeuerten milchprodukten | |
| DE3722044A1 (de) | Mittel zur inaktivierung von sporen sowie verfahren zur verlaengerung der haltbarkeit von produkten, stoffen oder erzeugnissen, die durch bakteriellen sporenbefall verderblich sind | |
| DE2819035C2 (de) | Antimikrobielle Substanz C-3603 und Verfahren zur Herstellung derselben | |
| DE841333C (de) | Verfahren zur Herstellung von Bakterienpraeparaten von Treponema Pallidum | |
| DE946061C (de) | Verfahren zur enzymatischen Hydrolyse von Eiweissstoffen und Autolyse von tierischen Geweben | |
| DE949685C (de) | Abtoeten oder Hemmen von Mikroorganismen | |
| DE1517749C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von bei Raumtemperatur lange haltbaren Trockenpräparaten der Phosphotransacetylase aus Escherichia coli | |
| DE963920C (de) | Verfahren zur Herstellung einer haltbaren waessrigen Gluten-Emulsion | |
| Elek | Studies on the Proteoclast (‘Muller's Phenomenon’) | |
| DE909985C (de) | Wachstumsfoerdernder Zusatz zu Naehrloesungen bei der biologischen Herstellung von Penicillin | |
| DE531017C (de) | Verfahren zur Herstellung eines Beizmittels fuer tierische Haeute | |
| DE446130C (de) | Verfahren zur Haltbarmachung von der Gaerung oder Faeulnis unterworfenen Stoffen | |
| AT309661B (de) | Verfahren zum enzymatischen Enthaaren von geweichten Häuten mit proteolytischen Enzymen in alkalischer Flotte | |
| DE2600323A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines produkts mit biologischer aktivitaet | |
| DE19943488B4 (de) | Mittel zur Behandlung von Tauben | |
| DE2051945C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Enzyms mit etwa gleich großer Glutaminase- und Asparaginase-Aktivität | |
| DE2366505C2 (de) | Verwendung des Stammes Pseudomonas ATCC 21973 zur in situ-Herstellung einer Aminotransferase |