DE2310041A1

DE2310041A1 - Verfahren zur abtrennung von bakterienzellen aus einem fluessigen medium

Info

Publication number: DE2310041A1
Application number: DE19732310041
Authority: DE
Inventors: Diamond Pirbhai Kanani; Peter John Sherrington; David Charles Steer
Original assignee: Imperial Chemical Industries Ltd
Current assignee: Imperial Chemical Industries Ltd
Priority date: 1972-03-03
Filing date: 1973-02-28
Publication date: 1973-09-13
Also published as: BE796033A; FR2174930A1; DK140559B; US3878093A; NL173541C; NL7302701A; JPS5623594B2; IT981085B; GB1381306A; AU470701B2; NZ169919A; IE37310B1; FR2174930B1; DE2310041C2; IE37310L; LU67140A1; AU5283873A; JPS4899381A; DK140559C; NL173541B

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren um Balterienzellen aus einem flüssigen Medium, worin sie e*ithalten sind, abzutrennexi.

Bei einem Verfahren zur Herstellung einer Proteinzusammensetzung durch Züchten von Bakterien auf oder in einem wässrigen Medium, dar. eine Quelle für assimilierbaren Kohlenstoff enthält, ist das erste Produkt eine wässrige Suspension, die Bakterienzellen enthält.

Man kann verschiedene Feststoff-Flüssißkoitstrennverfahren verwenden, um die Bakterienzellen von der Suspension abzutrennen. In einigen Fällen kann man beispielsweise die Suspension durch Zugabe eines Ausflockungsmittels ausflocken oder koagulieren und dann können sich die koagulierten

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Zellen von der Flüssigkeit in Absetztankvorrichtungen trennen, rfech dem sich die Zellen abgesetzt haben, können sie durch Zentrifugieren weiter konzentriert und dann getrocknet v/erden, wobei man als Endprodukt getrocknete Bakterienzellen erhält.

In vielen Fällen ist die Absetzgenchwindigkeit der ausgeflockten Zellen, die bei dem oben beschriebenen 'irennverfahren möglich ist, extrem niedrig. Dies ist darauf zur'ickzufuhren, daß die Flocken, die man erhält, oft klein und lose sind, d.h. die Menge an flüssigem Medium, die innerhalb der Flocken zurückgehalten wird, ist hoch und der Unterschied zwischen den Dichten der Flocken und dem Medium ist gering. Die Festigkeit der Flocken ist ebenfalls nicht ausreichend, um eine Trennung durch ein anderes Trennverfahren, v/ie durch Filtration oder Flotation, durchzuführen und ihr Verhalten während der anschließenden Zentrifugation bringt verglichen mit der ursprünglichen Suspension nur eine geringfügige Verbesserung mit sich*. In der Praxis ist daher in vielen Fällen der einzige Vorteil, der mit einem solchen trennverfahren erreicht wird, daß ein Teil des Mediums durch Absetzen entfernt wird. Im Hinblick auf die niedrigen .\bsetzgcschwindigkeiten,die erreicht v/erden können, ist es schwierig, diese Stufe bei dem Trennverfahren, wenn man in großem Maßstab arbeitet, auf wirtschaftliche Weise durchzuführen.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Abtrennung von Bakterienzellen aus einem wässrigen hedium, in dem die Zellen ausgeflockt sind (der Ausdruck aucgeflockt wird in der vorliegenden Anmeldung auch im Sinne von koagu-

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liert verwendet), wobei mit dem Medium mindestens eine der folgenden Stufen durchgeführt wird:

(A) Der pH-Wert des Mediums wird auf einen Wert innerhalb des Bereiches von 8 bis 11 durch Behandlung mit einem Alkali erhöht und

(B) das Medium v/ird auf eine Temperatur innerhalb des Bereiches von 50 bis 20.0⁰G erwärmt

und anschließend v/ird eine Stufe durchgeführt, bei der der pH-i'/ert cuf einen Wert innerhalb des Bereiches von 2 bis 5 durch Behandlung mit einer Säure erniedrigt wird. Die ausgeflockten Zellen werden dann von dem Medium abgetrennt.

Man nimmt an, daß bei den Stufen (A) und (B) strukturelle Änderungen in den Wänden der Bakterienzollen auftreten, was bewirkt ^ daß die Zellen durch das o_-iindun3S-geinäße Verfahren ausgeflockt v/erden können. Das Verfahren ist besonders geeignet, um Bakterienzellen der Stämme der Genera Pseudomonas, Alcaligenes, Arthrobacter und Bacillus, beispielsweise Stämme der Specien Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aeroginosa, Pseudomonas diminuta, Alcaligenes faecalis, Bacillus cereus und insbesondere Pseudomonas methylotropha (ein Species, dessen Eigenschaften in den britischen Patentanmeldungen 53466/70 und 58938/71 entsprechend der US-Patentanmeldung Serial No.205061 und der französischen Patentschrift 7 14-4- 042 beschrieben sind) abzutrennen. Kulturen einer Anzahl von Stämmen dieser letzten Species wurden in Tbc National Collection of Industrial Bacteria, Torrey Hesearch Stöbion, Aberdeen,

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Scotland, UK hinterlegt und entsprechende Hinterlegungen erfolgten bei the Collections of the US Department of Agriculture at Beoria, Illinois und dem Fermentation Research Institute, Japan. Die Zahlenbezeichnungen, die diese Kulturen erhielten, sind die folgenden:

NGlB NOS. 10503-15 und 10592-6 NRIiL NOS. B. 5552-64

'FUI NOS. 1215-27

Das erfindungsgemäße Verfahren ist besonders· geeignet, um Zellen dieser Stämme und natürliche oder künstliche sich davon ableitende Mutanten, aus v/ässrigen Medien abzutrennen.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren kann das Medium entweder einer der Stufen (A) und (B) unterworfen v/crden, ohne daß die andere Stufe durchgeführt ist, oder das Medium kann beiden Stufen unterworfen werden. In diesem letzteren Falle ist es bevorzugt, daß die Stufe (A) der Stufe (B) vorhergeht, ./ird nur eine der beiden Stufen (A) und (B) durchgeführt, so wird bevorzugt die Stufe (B) durchgeführt.

Obgleich das erfindungsgemäße Verfahren allgemein für die Trennung von Bakterienzellen aus Suspension in flüssigen Medien verwendet v/erden kann und obgleich es bei ansatzweise:" Arbeitsweise oder kontinuierlichen Ver-

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fahren eingesetzt werden kann, ist es besonders für die kontinuierliche Trennung von Bakterienzellen als eine Stufe in einem "Biomassen"(einzelliges Protein-Herstellungsverfahren, d.h. einem sog. "biomass-'-process" _y

wie es in den britischen Patentanmeldungen Nr. 584-66/70 und 58933/71 beschrieben ist, geeignet. Wird das Verfahren als eine Stufe bei einem kontinuierlichen Biomassen-Produktionsverfahren verwendet, so wird das Verfahren zweckdienlich durchgeführt, indem man das zuerst erhaltene Produkt des Verfahrens, dessen pH-V/ert im allgemeinen ungefähr 6,8 betragt, durch ein System leitet, das nacheinander die folgenden Einrichtungen enthalt: Eine Einrichtung, um Alkali zuzufügen, ein Wärmeaustauscher, um die Temperatur zu erhöhen, ein Kühler und eine Einrichtung, um Säure in einen Rührtank zuzugeben. Er, ist nicht erforderlich, daß alle Elemente des Systems bei einor besonderen Trennung in Betrieb sind.

Verwendet man die illkalibehandlungsstufe (A), so wird der pH-Wert bevorzugt auf einen Wert innerhalb des Bereiches von 8 bis 9> beispielsweise auf 3,5, erhöht. V/ird auf die Erwärmung stufe (B) verzichtet, so ist ein höherer pH-Wert bevorzugt. Die Zeit, während der das Medium bei einem alkalischen pil-V/ert vor der Behandlung mit Säure gehalten v/ird, kann innerhalb eines großen Bereichs variiere^. Sie beträgt oevorzugt jedoch bis zu '}0 Minuten, besonders 0,5 bis 10 Minuten. Die Zeit kann sehr kurz sein, z.B. wird sie bei dem oben beschriebenen Medium die Zeit

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sein, die erforderlich ist, um das Medium von der Alkalizugabestufe zu der Säurezugabestufe zu transportieren.

Für pH-Werte im Bereich von 8 bis 9 ist das bevorzugte Alkali/Ammoniak in wässriger Lösung beispielsweise eine 1:6 All JDtIiEpO Lösung. Für pH-«/erte im Bereich von 9 bis 11 ist Natriumhydroxyd bevorzugt. Andere alkalische Vorbindungen, die verwendet werden können, sind beispielsweise Kalium- und Galciumhydroxyde.

Während der Erwärmungsstufe (B) wird die Temperatur des Mediums bevorzugt auf 70 bis 90⁰C erhöht. Bei einem kontinuierlichen Vorfall., -ri sind SO bis 35 O besonders geeignet. Die Zeit, während der das Medium bei der höheren Temperatur vor der Säurebehandlung gehalten wird, kann innerhalb eines weiten Bereichs variieren. Bevorzugt beträgt sie bis zu 30 Minuten, insbesondere 0,5 bis 5 Minuten. Die Zeit kann sehr kurz sein. Das Medium kann einem, "flash"-Erwärmen unterworfen v/erden, d.h. es kann schnell auf die erforderliche Temperatur erwärmt werden, indem man es durch einen Wärmeaustauscher leitet und dann kann es bei dieser Temperatur während einer sehr kurzen Zeitperiode, beispielsweise weniger als 0,5 Minuten, gehalten werden. Bei dem oben beschriebenen kontinuierlichen Verfahren kann man eine Reihe von anderen V/egen für das Medium, nachdem· es den 'Järmeaustauscher verläßt, vorsehen. Man kann es direkt in die Säurebehandlungsstufe führen oder man kann es auf Umwegen dahin führen, was bewirkt, daß das Medium während ausgewählter Zeiten

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von beispielsweise 1,2 oder 3 Minuten bei einer höheren Temperatur gehalten wird. Wird das Medium auf diese V/eise während seinem Weg zwischen der Wärmebehandlung und der Säurebehandlungsstufe verzögert, so wird die Temperatur in gewissem Ausmaße,nachdem es den Wärmeaustauscher verläßt, fallen, beispielsweise von 80° auf 73⁰C.

Nach der· Wärmebehandlung kann das Medium vor der Säurebehandlung gekühlt werden. Dies ist bevorzugt, wenn die ausgeflockten Zellen gegebenenfalls durch Absitzen abgetrennt werden, aber nicht, wenn ein Flotationsverfahren verwendet wird. Wird eine Kühlstufe verwendet, so wird das Medium bevorzugt auf Umgebungstemperatur, d.h. auf Zimmertempcx^atur, abgekühlt. Jedoch sind Temperaturen innerhalb des weiten Bereichs von 20 bis 50 C,insbesondere von 20 bis 3O°C, geeignet.

Während der Säurebehandlungsstufe wird der pH-Wert bevorzugt auf einen Wert im Bereich von 2,5 bis 4,5 vermindert, um zu bewirken, daß sich die Bakterienzellen von dem Medium in großen Flocken abtrennen. Ein besonders geeigneter pH-Wert liegt in Bereich von 3 bis 3,5» wenn die ausgeflockten Zellen schließlich durch Absetzen abgetrennt v/erden und im BereichΛοη 3»5 bis 4,5» wenn die Zellen schließlich durch Flotation abgetrennt werden. Als Säure kann man geeigneter weise Schwefel-,Chlorwasserstoff- oder Phosphorsäure verwenden oder ein Säuregas wie Kohlcndioxyd oder Schwefeldioxyd. Wenn

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das Verfahren eine Stufe bei einem Biomassen-Produktionsverfahren bildet, verwendet man als Säure bevorzugt eine Mischung aus Phosphor-Schwefelsäure in geeigneten Teilen um zu ermöglichen, daß das Medium nach der Abtrennung der ausgeflockten Zellen in die Fermentationsstufe des Verfahrens rezirkuliert werden kann. Nach der Behandlung mit Säure wird das Medium bevorzugt gerührt, während sich die Flocken bilden.

Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht die Bildung von großen stai.:e*i !''locken und man kann eine gute Absetzgeschwindigkeit erreichen. Die gebildeten Flocken können in ihrer Größe innerhalb' eines großen Bereichs variieren, abhängig von der Rührgeschwindigkeit und von dem Bakterienstamm, beispielsweise können die Durchmesser im Bereich von 0,1 mm bis 1,0 cm liegen.

Auf die SäurebelxTudlungsstufe können folgende Stufen folgen: Absetzen oder Flotation, Zentrifugieren, Filtration oder Verdampfen und Trocknen, wobei man getrocknete Zellen als Endprodukt des Ferraentationsverfahrens erhält. Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglidit eine Verminderung der Größe der Absetztankvorrichtun.:-en und außerdem kann die Anzahl der Zentrifugen, die zum Trennen der Bakterienzellen, die bei dem Ferraentationsverfahren gebildet werden, verwendet werden, vermindert werden.

Während der Herstellung von Bakterienzellen durch Fermentationsverfahren geht ein Teil des Proteingehalts der

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Gebildeten Zellen in Lösung in dem flüssigen Medium. V/erden die Zellen von dem Medium durch übliche Ausflockungsverfahren getrennt, so verbleibt das gelöste Protein in der überstehenden Flüssigkeit in dem Absetztank und geht verloren. Verwendet man das erfindungsgemäße Verfahren, so wird ein Teil des Proteins in dem Medium durch die Süurebehandlungsstufe in unlöslichem Zustand überführt und kann wiedergewonnen v/erden.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie zu beschränken.

Beispiel 1

6 1 einer Suspension, die 8 g /1 Trockengewicht an Pseudomonas methylotropha Stamm NGIB 10593 enthält, wird aus einer kontinuierlichen Kultur mit beschränktem Kohlenstoff in stetigem Zustand entnommen. Die Suspension wurde in sechs ge.tr.ennte 1 1 Proben (A bis F) geteilt und der pH-Wert von fünf da? Proben (A. und G bis F) wurden durch Zugabe von wässrigem Ammoniak auf 3,5 erhöht. Die Proben B bis ¹F-wurden auf ausgewühlte Temperaturen erwärmt und dabei für ausgewählte Zeiten gehalten. Anschließend wurden sie auf 22°C gekühlt. Der pH-Wert aller Proben wurde durch Zugabe von Schwefelsäure auf 3,5 vermindert, wodurch ein Ausflocken der Zellen auftrat. Nach der Säurebehandlung wurden die Proben in 1 1 graduierte Zylinder auf solche Weise überführt, daß ein vollständiges Vermischen erreicht vmrde. Die

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Anfangsabsetzgeschwindigkeit der Grenzschicht zwischen den ausgeflockten Material und der überstehenden Flüssigkeit wurde bestimmt und die Konzentration des Materials, das sich am Boden des Zylinders nach 16 Stunden angesammelt hatte, wurde gemessen.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 aufgeführt.

In Versuchen in kleinem Maßstab ist die Renroduzierbarkeit der Absetzgeschwindigkeiten, bedingt durch die Unterschiede in den spezifischen Gewichten der Kulturmedien und der Bildung von Gasblasen, die die Absetzgeschwindigkeit der Flocken vermindert, verschlechtert. Daher gibv die Absetzgeschwindigkeit in einigen Fällen ein ungenügendes Anzeichen für das Ausmaß der Ausflockung. In den Beispielen 1 und 2 wurde daher eine qualitative Beschreibung der Ausflockung verwendet, die auf der visuellen Bewertung der Größe und der Stärke der gebildeten Flocken basiert. in den Tabellen 1 und 2 ist das Ausmaß der Ausflockung durch die folgenden Symbole dargestellt: -

O keine Ausflockung

+ eine geringe Ausflockung

++ starke Bildung von hauptsächlich kleinen leichten Flocken mit zufriedenstellenden

Absetzeigenschaften
+++ eine ausgeprägt^ Eildung von großen starken

Flocken mit sehr guten Absetzeigenschaften.

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N.B. Bei der Probe Λ wurde auf die Stufe (B) verzichtet, während bei der Probe B auf die Stufe (A) verzichtet wurde. Die Proben C bis F wurden beiden Stufen (A) und (3) unterworfen.

Probe	Temperatur nach dem Erwärmen (⁰O)	Zeit bei der Tempe ratur in Minuten	Anfangs- absetz- seschwin- di^kcit (cm/h)	Endkonzen tration nach 16 h (ε/ι)	Ausflockungs grad	i
A		_{r m}	2		₊
3	70	5 ■	93	48	₊₊
G	70	2	372 ·	84	₊₊₊
D	70	5	392	55	₊₊₊
E	85	2	450	52	₊₊₊
1?	85	5	554	65

Beispiel 2

In getrennten Versuchen wurden Suspensionsproben, die ungefähr 2,5 g/l Trockengewicht ah Pseudomonac fluorcccens Stamm IJCIB 9046, Pseudomonas diminuta Stamm NCIB 9393» Bacillus cereus Stamm NGIB 9373 und Acaligenes faecalis Stamm NCIB 8156 enthielten aus ansatzweisen Kulturen entnommen. Ii jedem Fall

wurden vier 5 ml Proben (A bis D) genommen und folgendermaßen behandelt:

A keine Behandlung

B Der pH-VJorte wurde unter Verwendung von TICl

auf 3,5 eingestellt. • 309837/1081

C Der pH-Werte wurde unter Verwendung von

NaOH-Lösung auf 10 eingestellt und unter Verwendung von HCl nach 15 Minuten auf ;5,5 eingestellt.

D Der pH-Wert wurde unter Verwendung von NaOH-Lösung auf 8,5 eingestellt. Die Probe wurde auf 80⁰C während einer Minute erwärmt und dann auf Umgebungstemperatur abgekühlt und dann wurde der pH-Wert unter Verwendung von HCl auf 3,5 eingestellt.

Die Absetzgeschwindigkeiten zu Beginn und der Ausflockungsgrad, bestimmt wie in Beispiel 1, sind in der folgenden Tabelle 2 aufgeführt.

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Tabelle 2

Bakterium	Beispiel	Setzgeschwin digkeit zu Beginn (cm/h)	Ausflockungs grad	pH des Mediums nach der ersten Probe entnahme
	A	O	0
Pseudomonas Pluorescens	B G D	"60 einige Flotation 110	+ ++ +++	7Λ
	A	0	0
Pseudomonas diminuta	B C	0 o ■	+ +	7,9
	D	einige Flotation	++
	A	O	0
Bacillus Gereus	B G	0 150	0 ++
	D	140	++
	^	0	0
Alcaligenes Faecalis	B G	70 100	+ ++
	D	110	++

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Beispiel 3

Eine Anzahl von Suspensionen, die einen Pseudomonas methylotropha Stamm enthielten, wurden unter Verwendung verschiedener Bedingungen in einer kontinuierlichen Ausflockungsvorriciitung ausgeflockt. In der Vorrichtung wurde Medium aus einem Beschickungstank in einen Rührtank durch ein System gepumpt, das enthielt:

(a) Eine Alkalieinführungsstelle;

(b) einen Wärmeaustauscher, bei dem die liöhrc, die das Medium transportierte, durch ein ölbad geleitet wurde;

(c) ein System, das verschiedene Strömungswege enthielt, die ermöglichten, daß das Medium bei erhöhter Temperatur v/ährend verschiedener Zeiten, gehalten wurde, beispielsv/eise v/ährend einer sehr kurzen Zeit (IntervallzeitO} 1 Minute, 2 Minuten und 3 Minuten;

(d) einen Kühler;

(e) eine Säureeinleitungsstelle.

Einrichtungen waren vorgesehen, um den pH-v/ert nach der Alkali- und Säurezugabe zu messen und um die Temperatur des Mediums beim Verlassen des Wärmeaustauschers und nach der Säurezugabe zu bestimmen. Die Alkalizugabe erfolgt, indem man eine 1:6 NH^OfI:H₂O Lösung in das System einleitet. Die Säurezugabe erfolgt, indem man eine 1:1 Mischung aus 0,5 η 30^ und 0,5n H-JO^ Lösung in das System leitete.

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Das Ausmaß der Ausflockung und die Klarheit der überstehenden Flüssigkeit, die durch das Verfahren erreichbar waren, wurden visuell gewertet.

.Abhängig von dem pH-Y/ert und der Wärmebehandlung nahmen die Flocken verschiedene Formen an. Die folgenden Arten wurden identifiziert: (i) sehr klein,(ii) Fasern, wie feine Asbestfasern, (iii) größere Fasxn, (iv)etwas granular, (ν) granular, (vi) Gelkügelchen.

Unter bestimmten Bedingungen wurden die Flocken in stärker gelartigern Zustand gebildet, wobei sie jedoch ihre Form beibehielten. Fand in dem Rührtank eine schlechte Vermischung statt, so bildeten sich Gelkügelchen und Flocken. Ein stärkeres Rühren gab eine volle Ausflockung, während- übermäßiges Rühren ein Abbrechen der Flocken bewirkte.

Ideale Flocken sind groß und besitzen eine schnelle Absetzgeschwindigkeit (Geschwindigkeiten übor 3000 cm/h wurden erhalten).

Die idealsten Flocken sind die oben erwähnten Flocken (iii), (iv) und (v). Feine Flocken besitzen die Neigung, daß sie in der überstehenden Flüssigkeit hängen bleiben und relativ langsame Absetsgeschwindigkeiten ergeben, während Gclkügelchen aus nicht ausgeflockter Kultur bestehen und somit nicht ideal sind. Beispiele der bei den verschiedenen Bedingungen erhaltenen Ergebnisse sind in

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der folgenden Tabelle 3 aufgeführt.

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Tabelle

Trocken gewicht der Bak- terien im Medium (s/i)	^ H nach der :llkali- zugabe	Tempera tur nach dem Er- VJ armen (^bc)	Verv/eil- seit der erhöhten Tempera tur (Min.)	Kühl-' wasser	pH-'.· crt nach der Säure zugabe	Temperatur im R LJ.hr- tank	Bemerkungen
2,4	keine Zugabe	25	0	abbe stellt	3,5	25	ke ine Aus f1οckung, eine gewisse Koagu lation von Teil
							chen , die überstehende i'lüssiskeit ist trübe
10,4	8,4	81,5	3	an	3,3	- 41	große Flocken, gutes Absetzen
4,75	keine Zugabe	50	0	an	3,5	nicht bestimmt	feine Flocken, gutes Absetzen
4,75	keine Zugabe	60	0	.an	3,5	nicht bestimmt	granuläre Flocken, klar überstehende Lösung
5,5	8,7	85	3	an	3,4	32	Flocken und Gelkügel- choii, die sich schnell absetzen

OJ O (D OO

O OD

Trocken- 3 CV/ic lit dor Bak terien, in I! si ium (S/D	pH nach der Alkalizu- gabe	Tempera tur nach dem Er-. wärmen (^δσ)	Verweil zeit der erhöhten Tempera tur . (Min.)	Kühl wasser	pH-V/ert nach der Säure- zusabe	Temperatur im Rühr tank	Bemerkungei
6,5	8,7	85	O	an	3, 'ι-'	32	Flocken und GeI- kügelchen, die sich schnell absetzen
6,0	8,5	80	3	an	3,5	32	große Gelflockai, sine klare über stehende Lösung
6,0	8,5	75	O	an	3,0	32,5	große Flocke^ schnelles Absetzen

Οΰ I

Eeispiel 4-

Beispiel 2 wurde wiederholt, wobei man 4- χ 200 ml Proben einer Suspension verwendete, die ungefähr 1 g/1 Trockengewicht an Pseudomonas aeroginosa Stamm HCIB 950 enthielt und aus einer ansätsreifen Kultur stammt. Der pH-Wert zur Zeit der Probenentnahme betrug 7)1· Die Ergebnisse sind in Tabelle 4- aufgeführt.

Tabelle 4

Proben	Absetzteschwindigkeit zu Beginn (cm/h)	Ausfloclcungsgrad
Λ	0	0
B	0	0
C	0	+
D	etwas Flotation	++

Beispiel 5

Vier 200 ml Proben einer Suspension, die ungefähr 5 g/l Trockengewicht an Arthrobacter Nov. Stamm NRBL B3728 enthielt, wurden aus einer ansatzreifen Kultur entnommen. Der p^-Wert zur Zeit der Probenentnahme betrug 6,9- Die vier Proben wurden folgenderraaßen behandelt:

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A keine Behandlung

B Einstellung des pH-Werts auf 3,5 unter Verwendung von Chlorwasserstoffsäure

C Einstellung des pH-Werts auf 10 unter Verwendung von Natriumhydroxydlösung, Erwärmen während 5 Minuten auf 85 C und Einstellen des pH-V/erts

auf 3i5 roit Chlorwasserstoffsäure.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 aufgeführt.

Tabelle 5

Probe	ursprüngliche Absetzgeschwin digkeit (cm/h)	Ausflockungsgrad
A- B C.	O 0 O	O 0 ++

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Claims

Patentansprüche

1. Verfahren zur Abtrennung von Bakterienzellen aus einem wässrigen Medium durch Ausflocken der Zellen und Abtrennung der ausseilockten Zellen aus dem Medium, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen ausgeflockt werden, indem man das Medium mindestens einer der folgenden Stufen unterv/irf t:

(A) Erhöhung des pH-Werts des Mediums auf einen Wert innerhalb des Bereiches von 8 bis 11 durch Behandlung mit einem Alkali und

(B) Erwärmen des Mediums auf eine Temperatur innerhalb des Bereichs von 50 bis 200°C,

und anschließend den pH-Wert auf dnen V/ert innerhalb des Bereiches von 2 bis 5 durch Behandlung mit Säure erniedrigt.

2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Medium der Stufe (A) und anschließend der Stufe (B) unterworfen wird.

3. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Medium der Stufe (B) ohne Stufe (A) unterworfen wird.

4. Verfahren gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Bakterienzellen zu einem Stamm der Species Pseudomonas fluorescens, Pseu- domonas aeroginosa, Pseudomonas diminuta, Alcaligenes faecalis,

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Bacillus cereus, Pseudomonas methylotropha oder Arthrobacter Nov NRRL B 3728 gehören.

5. Verfahren gemäß Anspruch 4-, dadurch gekennzeichnet,- daß der Stamm zu der Gruppe gehört, die die Stämme NGIB 10508 bis 10515 und 10592 bis 10596 und natürliche und künstliche Mutanten, die sich von diesen Stämmen ableiten, enthält.

6. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1, 2, 4- und 5i dadurch gekennzeichnet, daß während der Stufe (A) der pH-V'ert auf einen Wert innerhalb des Bereiches von

8 bis 9 erhöht .wird.

7· Verfahren gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß während der Stufe (B) das Medium auf eine Temperatur innerhalb des Bereiches von 70° bis 90⁰C erwärmt wird.

8. Verfahren gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß nach der Stufe (B) das Medium auf eine Temperatur innerhalb des Bereiches von 20 bis 30⁰G , bevor es mit Säure behandelt wird, abgekühlt wird.

9. Verfahren gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß während der Säurebehandlung s stufe der pH-Wert auf einen Wert innerhalb des Bereiches von 2,5 bis 4,5 erniedrigt wird.

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10. Verfahren gemüiß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Stufe bei einem Verfahren zur kontinuierlichen Herstellung einer einzelligen Proteinzusammensetsung bildet.

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