DE2304971A1 - Geraet zum isolieren und nachweisen von barbitursaeurederivaten und glutethimiden in biologischen fluessigkeiten - Google Patents

Description

München, den 1. Februar 1973

Orion-yhtymä Oy Helsinki (Finnland)

Gerät zum Isolieren und Nachweisen von Barbitursaurederivaten und Glutethimiden In biologischen Flüssigkeiten

Die Erfindung bezieht sich auf ein Gerät zum Isolieren und Nachweisen von Barbitursaurederivaten (Barbituraten) una Glutethimiden in biologischen Flüssigkeiten bei solchen Verfahren, in denen man eine Quecksilberverbindung, ein Quecksilbernachweisreagens und Lösungsmittel verwendet. Bei zur Behandlung eingelieferten Vergiftungsfällen liegt verhältnismäßig of Schlafmittelvergiftung vor, dabei normalerweise Vergiftungen durch übermäßige Einnahme von Barbituraten. Es ist für den behandelnden Arzt in derartigen Fällen sehr wichtig, schnell ergründen zu können, ob der Patient Barbiturate eingenommen hat oder nicht, damit er die richtigen Behandlungsmaßnahmen ergreifen kann.

Die bisher bekannten Analyseverfahren zum Feststellen von Barbituraten in biologischen Flüssigkeiten, wie z.B.

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in Harn, Serum oder Blut, sind zeitraubend oder sonstwie umständlich. Sie beruhen auf Extraktion der Barbiturate aus den Körperflüssigkeiten und anschließendem Nachweis auf chemischem Weg. Diese bisher bekannten Verfahren erfordern in der Regel die Einrichtungen eines gut ausgerüsteten Laboratoriums .

Es ist auch ein Verfahren bekannt, das zur schnellen Feststellung und Bestimmung von Barbituraten in Harn oder Serum an sich für außerhalb eines Labors vorgeschlagen wurde (USA-Patentschrift No. 3 275 416). Dieses Verfahren basiert auf der Bildung eines Barbiturat-Quecksilberkomplexes und auf Nachweis und Bestimmung des Quecksilbers in diesem Komplex. Die Vorrichtungen, mittels derer der Nachweis des Barbiturats erfolgt, sind jedoch konstruktionsmäßig derart kompliziert, daß deren Anwendung kostspielig wird, falls sie im einmaligen Einsatz verwendet werden. Wird die Vorrichtung wiederholt verwendet, dann ist ihre Beschikkung umständlich und zeitraubend.

Aufgabe der Erfindung ist daher, ein billiges und einfaches sowie rasches und zuverlässiges Gerät zum einmaligen Gebrauch für den Nachweis von Barbituraten zu schaffen. Die Erfindung liegt darin, daß das Gerät aus einem aus porösem Material, beispielsweise aus Papier, hergestellten Streifen besteht, der an dem einen Ende beginnend aufgezählt

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folgende mit Chemikalien imprägnierte Zonen hat: in der ersten Zone ein die zu untersuchende Flüssigkeit ansäuerndes Reagens, z.B. Kaliumdihydrogenphosphat, in der zweiten Zone eine Quecksilberverbindung, z.B. gepuffertes Merkuriacetat, und in der dritten Zone ein Reagens zum Nachweis von Quecksilber, z.B. Diphenylcarbazon; weiterhin ist ein Tubus vorhanden, aus dem von dem darin eingebrachten porösen Streifen ein Lösungsmittel aufgesaugt wird, worin die Barbitursäurederivate und Glutethimide sowie deren Quecksilberverbindungen löslich sind.

Die vorstehend genannten Zonen sind voneinander durch nicht mit Chemikalien behandelte Zonen getrennt. Der Streifen besteht vorzugsweise aus Filtrierpapier. Die Zone 1 im Papierstreifen kann mit einer Lösung von o,4 % Kaliumdihydrogenphosphat in Wasser imprägniert sein, Zone 2 mit einer Lösung enthaltend o,6 % Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan als Puffer in Methanol, zu der o,2 % Merkuriacetat zugesetzt worden ist, und die dritte Zone mit einer Lösung von o,o2 % Diphenylcarbazon in Chloroform.

Da das erfindungsgemäße Gerät aus einem Papierstreifen besteht, der mit bestimmten Chemikalien imprägnierte Zonen hat, ist das Gerät denkbar einfach und kostengünstig und daher als Gerät zum einmaligen Gebrauch vorzüglich geeignet. Ferner ist die Ausführung der untersuchung leicht

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und schnell. Die Untersuchung findet so statt, daß man in die an dem einen Ende des Papierstreifens befindliche ansäuernde Zone die zu untersuchende Flüssigkeit einbringt und die mittlere basische Quecksilbersalzzone mit Wasser anfeuchtet. Der Papierstreifen wird dann mit dem mit der zu untersuchenden Flüssigkeit getränkten Ende nach unten in den Tubus eingebracht. Der Tubus enthält eine kleine Menge Lösungsmittel. Nachdem das Lösungsmittel im Streifen bis in die oberste Zone heraufgestiegen ist, prüft man, ob die Farbe dieser Zone ins Blaue umgeschlagen ist. Ist dies der Fall, dann enthält die untersuchte Flüssigkeit Barbiturate.

Die Erfindung wird nachstehend anhand der Zeichnung näher erläutert. In der Zeichnung stellen dar:

Fig. 1 ein Gerät in einer Ausführungsform

gemäß der Erfindung in der Ansicht von vorn;

Fig. 2 den in der Untersuchung angewendeten Tubus von vorn gesehen;

Fig. 3 den Querschnitt des in Fig. 2 gezeigten Tubus.

Der in Fig. 1 gezeigte Papierstreifen 6 weist eine

Größe von z.B. 77 mm χ Io mm auf. Der Streifen 6 hat die

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folgenden Zonen, die die verschiedenen Chemikalien enthalten: Die unterste Zone 1 hat eine Länge von etwa 13 mm. Sie ist mit einer Lösung von o,4 % Kaliumdxhydrogenphosphat (KH₂PO.) in Wasser imprägniert. Oberhalb dieser Zone befindet sich eine etwa Io mm lange Zwischenzone 4, die unimprägniert ist. Oberhalb dieser Zwischenzone befindet sich eine etwa 6 mm lange Zone 2. Diese ist mit alkalischer Merkuriacetatlösung imprägniert. Diese Imprägnierlösung enthält o,2 % Merkuriacetat und o,6 % Tris-(hydroxymethyI)-aminomethan in Methanol als Puffer. Oberhalb der Zone 2 befindet sich eine etwa Io mm lange Zone 5, die unimprägniert ist. Oberhalb dieser befindet sich eine etwa 33 mm lange Zone 3, die mit einer Lösung von o,o2 % Diphenylcarbazon in Chloroform imprägniert ist. Nach Abdunsten der Lösungsmittel aus dem Streifen ist dieser zur Verwendung bereit. Die Prüfstreifen können im Großen vorfabriziert werden.

Der in Fig. 2 und 3 dargestellte Tubus ist aus durchsichtigem Material, beispielsweise aus Glas, gefertigt; seine Höhe beträgt etwa 6o mm und sein Durchmesser etwa 25 mm. Dieser Tubus 7 ist für Lösungsmittel vorgesehen.

Der Nachweis von Barbituraten im Harn findet folgendermaßen statt: Die Zone 1 des Streifens 6, die mit Kaliumdihydrogenphosphat imprägniert ist, wird mit der zu untersuchenden Probe befeuchtet. Es ist wichtig, daß die Befeuchtung über

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die gesamte Streifenbreite erfolgt.

Die den Puffer und das Merkuriacetat enthaltende Zone 2 wird mit reinem Wasser befeuchtet. Auch in diesem Fall ist es wichtig, daß die Befeuchtung über die gesamte Streifenbreite stattfindet.

Anschließend wird der Streifen 6 stehend in den kleinen Tubus 7 eingesetzt, auf dessen Boden zuvor eine etwa 5 mm hohe Schicht Lösungsmittel gegeben worden war. Dieses Lösungsmittel kann z.B. eine Mischung sein, die 8o Vol.-Teile Chloroform und 2o Vol.-Teile Benzylalkohol enthält. Beim Hochsteigen der Chloroform-Benzylalkohol-Mischung im Streifen 6 löst sich das Barbiturat darin und wandert mit dem Lösungsmittel in die basische, Merkuriacetat enthaltende Zone 2, wobei sich eine Quecksilberverbindung des Barbiturats bildet. Diese ist in der Chloroform-Benzylalkohol-Mischung löslich und wandert mit dem Lösungsmittel in die Diphenylcarbazon enthaltende Zone 3 des Streifens 6. Hier entsteht eine Diphenylcarbazonverbindung des Quecksilbers,die anhand ihrer blauen Farbe zu erkennen ist.

Wenn man Barbiturate in Blut oder Serum nachweisen will, führt man die Untersuchung auf die gleiche Weise aus, mit der Ausnähme jedoch, daß die Blut- bzw. Serumprobe, die man auf die mit Kaliumdihydrogenphosphat imprägnierte Zone

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1 des Prüfstreifens aufbringt, anschließend mit Aceton befeuchtet wird. Das Aceton wird bei Zimmertemperatur aus dem Streifen verdunstet; danach läuft die Untersuchung in der vorstehend beschriebenen Weise weiter. Die Acetonbehandlung fällt Proteine des Bluts bzw. Serums aus und erhöht zugleich die Spezifität der Untersuchung.

Bei Untersuchungen mit Wasserlösungen verschiedener Barbiturate wurden für die Reaktion die in der nachstehenden Tabelle angegebenen Empfindlichkeitsgrenzen gefunden:

Tabelle

Barbiturat Konzentration mg/1

5-Allyl-5-(l-methylbutyl)barbitursäure Io - 2o (+) 3o +

5-Allyl-l-methyl-5-(l-methyl-pent-2-

ynyl)barbitursäure (Natriumsalz davon) 2o - 4o (+) 5o +

5-Butyl-5-äthylbarbitursäure Io (+) 2o +

5,5-Diäthylbarbitursäure 2o 3o +

5-Äthyl-5-sek.-butylbarbitursäure

(Natriumsalz davon) 2o (+) 3o +

5-Äthyl-5-phenylbarbitursäure Io (+) 2o

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Barbiturat

Konzentration mg/1

5-Äthyr-5-isoamylbarbitursäure 5-Äthy1-5-(1-methylbutyl)barbitursäure

Io (+) 2o + Io (+) 2o +

5-Äthyl-5-(1-methylbutyl)-2-thiobarbi-

tursäure (Natriumsalz davon) Io - 3o ■{+) 4o +

S-Äthyl-S-phenyl-l-methylbarbitursäure 2o - 3o (+) 4o +

5-Äthy1-5-(1-cyclohexenyl)barbitursäure

Io (+) 2o +

- negatives Ergebnis (+) schwach positives Ergebnis •f positives Ergebnis

iflnhand der aus der vorstehenden Tabelle ersichtlichen Empfindlichkeitsgrenzen kann man feststellen, daß das Nachweisverfahren hinreichend empfindlich zum Nachweis von Barbitüraten in Vergiftungsfällen ist. Wenn man eine negative Reaktion erhält, dann ist erkennbar, daß der Patient in seinen Körperflüssigkeiten keine solche Menge an Barbituraten hat, daß diese eine ernste Vergiftung herbeiführen würden.

Außer auf Barbiturate spricht die Reaktion mit positivem Resultat auch auf als Schlafmittel verwendete Glutethimide

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(2-Äthyl-2-phenyl-glutarsäureimid) bei Konzentrationen an, die 2o mg/1 übersteigen.

Vorstehend ist nur ein Ausführungsbeispiel der Erfindung beschrieben. In weiteren Fällen kann der Papierstreifen z.B. auch andere Größen als vorstehend angegeben haben, er kann auch aus einem anderen für diesen Zweck geeigneten Material bestehen. Ferner kann das Kaliumdihydrogenphosphat durch irgendeine andere acidifizierende Substanz ersetzt werden. Weiterhin kann man als Quecksilberreagens auch ein anderes Quecksilbersalz una als Quecksilbernachweisreagens auch ein anderes Quecksilbernachv/eisreagens als die vorstehend genannten Substanzen anwenden. Ebenso kann als Lösungsmittel auch ein Lösungsmittel verwendet werden, das andere Stoffe als oben angegeben enthält.

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Claims (4)

1. - Io -

   Patentansprüche

   , 1.)Gerät zum Isolieren und Nachweisen von Barbitursäurederivaten und Glutethimiden in biologischen Flüssigkeiten bei solchen Verfahren, in denen eine Quecksilberverbindung, ein Quecksilbernachweisreagens und ein Lösungsmittel verwendet werden, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einem aus porösem Material hergestellten Streifen (6) besteht, der an dem einen Ende beginnend nacheinander folgende, mit Chemikalien imprägnierte Zonen hat: in der ersten Zone (1) ein die zu untersuchende Flüssigkeit acidifizierendes Reagens, wie Kaliumdihydrogenphosphat, in der zweiten Zone (2) eine Quecksilberverbindung, wie gepuffertes Merkuriacetat, in der dritten Zone (3) ein Quecksilbernachweisreagens, wie Diphenylcarbazon, sowie aus einem Tubus (7), aus dem der darin eingebrachte Streifen Lösungsmittel aufsaugt, worin die Barbitursäurederivate und Glutethimide sowie deren Quecksilberverbindungen löslich sind.
2. 2. Gerät nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die mit Chemikalien behandelten Zonen (1, 2, 3) durch Zwischenzonen (4, 5) voneinander getrennt sind.
3. 3. Gerät nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der poröse Streifen (6) aus reinem

   Filtrierpapier besteht.

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4. 4. Gerät nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die an dem einen Ende des Papierstreifens befindliche Zone (1) mit einer Lösung von o,4 % Kaliumäihydrogenphosphat in Wasser imprägniert ist, daß die nach der daran anschließenden Zv/ischenzone (4) folgende Zone (2) mit einer Lösung imprägniert ist, die o,6 % Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan als Puffer und o,2 % Merkuriacetat in Methanol enthält, und daß die nach der daran anschließenden Zwischenzone (5) folgende Zone (3) mit einer Lösung, enthaltend o,o2 % Diphenylcarbazon in Chloroform, imprägniert ist.

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