DE1800129B2 - Biologisch aktive Polypeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung - Google Patents

Description

SO₃H

3. Boc-Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH,

SO,H
I

4. Tyr-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH₂

, · ι · u

5. Verfahren zur Herstellung von biologisch

aktiven Polypeptiden gemäß den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß eine Am.nosäure oder ein Polypeptid in an sich bekannter Weise mit einer anderen Aminosäure oder Poly- *5 peptid kondensiert wird, wobei die bei der Bildung der Peptidbindung nicht beteiligten Ammo- und Carboxylgruppen durch eine geeignete Schutzgruppe blockiert sind, wobei Polypeptide erhalten

aJÄT£³ Die Polypeptide der vorliegenden Erfindung können gemäß der in der Polypeptidchemie bekannten Sy_nt hergestellt werden, die hauptsachlich m der Sukzessiven Kondensation der Aminosäuren oder iSzten Polypeptide besteht, so daß das erhaltene Polypeptid die gewünschte Sequenz von Aminosäuren

J£iZt

D^;e Aminosäuren und die Polypeptide, die nach und _nach* kondensiert werden, sind mit deren Amino- und Carboxylgruppen an der Bildung der Peptidbindung _nicht beteiligt, die durch eine Schutzgruppe, c 'jurch Acidolyse oder Hydrogenolyse oder andere mannte Verfahren entfernt werden kann, blockiert sind. Die folgenden Schutzgruppen können zum Schutz _der Aminogruppe verwendet werden: ζ B. Tosyl (p-Toluolsulfonyl), Carbobenzoxy (Carbobenzyloxy), Carbo-t.-butoxy, p-Nitrocarbobenzoxy, Tntyl (Triphenylmethyl). Formyl, Trifluoracctyl und andere gewohnlich in der Polypeptidchem.e verwendete Schutz-

Schutzeruppen können zum Schutz fSSi werden: z. B. Methjl. -Nitrophenyl und andere

auf diesem

^^Kondensation zwischen der Aminogruppe des

.°'^e J^l/und der Carboxylgruppe eines anderen einer MolefcufaundW«^/_ρ ^{8 1}^ _findet ^"lekuls zwecks bii S £

nach^ »b^hen m der Polyp ρ>

estett wird, wobei diese Umsetzung vor oder nach Kondensat d„ Aminosäuren durchführt w.rd. „ und der freien

Die vorliegende ^ndungjetritft die bio.ogisch .küven Polypept.de der Formeln

carbodiimid, l-Cyclohexyl-3-moφhollnyl-carbodιlmld und andere in der Literatur bekannte. Die Kondensation kann in einem geeigneten

Boc-Tyr-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH,

öO₃H

Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NHa

SO₃H

I
Boc-Tyr-Thr-Gly-Tip-Nle-Asp-Phe-NHj

SO₃H

I
Tyr-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH,

45

_5o

55

6o

und ein Verfahren zu ihrer Herstellung.

Überraschend wurde gefunden, daß die für eine hohe biologische Aktivität notwendige Bedingung die Anwesenheit von Tyrosinsulfat in der 7-Stellung von der Endkohlenstoffgruppe des Moleküls ist.

Die Produkte der vorliegenden Erfindung zeigen eine stimulierende Aktivität auf die Gallenblase, die

^{ί d h d} hch, z. B. Dimethylformamid, Acetonitril und Pyridin, durchgeführt werden; die Reaktion beginnt bei einer Temperatur von — 20i°C bis Raumtemperatur und wird bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 35⁰C während eines Zeitraumes von 12 Stunden bis 10 Tagen vollendet.

Die Schwefelsäuregruppe, die in den Polypeptiden der vorliegenden Erfindung vorhanden ist, kann auf bekannte Art am Ende der Kondensation eingeführt werden.

Andererseits kann die Kondensation durch Verwendung eines geeigneten Derivats von Tyrosin, das diese schon enthält, durchgeführt werden.

Die Einführung dieser Gruppen wird vorzugsweise bei niedriger Temperatur mit einem Sulfatisierungsmittel, wie Chlorsulfonsäure oder Schwefelsäureanhydrid in Pyridin, durchgeführt.

Die Produkte der vorliegenden Erfindung zeigen eine hohe mehrwertige: biologische Wirkung und insbesondere eine stimulierende Wirkung auf die Gallenblase, die Gallen-, Magen- und Pankreassekretion und überdies eine hypotensive Aktivität.

Insbesondere können sie bei der Stimulierung der Magen- und Pankreassekretion, bei der Cholecystographie und bei Zwölffingerdarmgeschwüreii ange-

Verbindungen wurden mit

18 OO

item aus dem Stand der Technik bekannten Dekapeptid Caerulein (beschrieben in Experientia, 23, [1967], S. 699/700) verglichen. Hierbei wurden die mit der VergleichsverbLndung erhaltenen Werte jeweils gleich 100 gesetzt. Untersucht wurden folgende Wirkungsrichtungen:

1. Hypotensive Aktivität durch Prüfung des Blutdrucks bei Hunden gemäß der von B e r t a c c i η i et. al., Br. J. Pharmac. Chemother. (1968), 33, S. 59 bis 71, beschriebenen Methodik und Arbeitsweise.

2. Stimulierung der Säuresekretion am entnervten Hundemagen und Rattenmagenpräparaten gemäß der Methode von Bertaccini et al., Br. J. Pharmac. (1968), 34, S. 311 bis 329, beschriebenen Untersuchungsmethode.

3. Stimulierung der exokrinen Pankreassskretion an Hundepankreas nach Bertaccini et al., Br. J. Pharmac. (1969), 37, S. 185 bis 197.

4. Stimulierende Aktivität auf die Gallenblase bei Meerschweinchengallenblase gemäß der Methodik von Bertaccini et al., Br. J. Pharmac. (1968), 34, S. 291 bis 310.

Die Ergebnisse der gemäß den obigen Methoden durchgeführten Vergleichsversuche sind in der nachfolgenden Tabelle zusammengestellt:

Bei- Verbindung
ipiel

Hundeblut- Entnervter Ratten- Hunde- Meerschweindruck Hunde- präparat pankreas chen-

magen gallenblase

SO₃H

Pyr-Glu-Asp-Tyr-Thr-Gly-Trp-Met-Asp- 100 100 100 100 100

Phe-NH₂ (Vergleichssubstanz Caerulein)

SO₃H

1 BoC-TVr-NIe-GIy-TrP-MeI-ASp-PlIe-NH₂ 65 bis 80 30 bis 60 70 bis 80 60 bis 70 110 bis 150 SO₃H

2 Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NHj 140 bis 150 100 bis 130 120 bis 150 90 bis 120 125 bis 155

SO₃H

2 Boc-Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH₂ 110 120 bis 140 130 130 bis 140 130 bis 140 SO₃H

3 Tyr-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phc-NHj 70 bis 140 10 bis 20 60 bis 100 65 bis 70 80 bis 150

Den in der Tabelle aufgeführten relativen Aktivitäten bei den verschiedenen Wirkungsbereichen ist zu entnehmen, daß sämtliche erfindungsgemäßen Verbindungen hinsichtlich ihrer stimulierenden Wirkung auf die Gallenblase der Vergleichsverbindung Caerulein überlegen sind. Diese gallenblasenkontrahierende Wirkung erlaubt die Verwendung der Verbindungen nach der Erfindung bei der Cholecystographie und zur Aktivierung der Gallenfunktion. Darüber hinaus besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen interessante pharmakologische Eigenschaften als hypotensive Mittel sowie als Stimulanzien für Gallen-, Magen- und Pankreassekretion.

Beispiel 1

SO₃H

Boc-Tyr-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH₂

Zuerst werden 3,94 g n-Tributylamin und anschließend 2,31 g Äthylchlorformiat einer Lösung von 4,91g Boc-Nle- in 45 ml wasserfreiem, auf — 10⁰C gekühltem Tetrahydrofuran zugesetzt.

Die Reaktionsmischung wird 30 Minuten lang gerührt und danach in eine Lösung von 2,98 g Äthylglycinhydrochlorid und 2,16 g Triäthylamin in 30 ml

4b wasserfreiem auf —10°C gekühltem Chloroform gegossen.

Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden lang bei dieser Temperatur, 2 Stunden lang bei etwa 0^cC und schließlich über Nacht bei Raumtemperatur gehalten.

Nach Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum wird der in Äthylacetat und ein wenig Wasser gelöste und in einer Kühlmischung gekühlte Rückstand mit 0,5 n-HCl, 5°/_oigem NaHCO₃ und schließlich mit Wasser gewaschen.

Nach dem Trocknen dampft man das Lösungsmittel unter Vakuum ab.

Den Rückstand (Boc-Nle-Gly-OEt) löst man in 40 ml Äthanol und 16 ml Wasser, setzt 22,4 ml n-NaOH zu und läßt das Ganze 1 Stunde lang stehen.

Der größte Teil des Äthanols wird im Vakuum abgedampft, und nach Verdünnen mit 80 ml H₂O werden die Verunreinigungen mit Äthylacetat aus der Reaktionsmischung extrahiert.

Nach Kühlen der alkalischen Lösung säuert man

mit 5 n-HCl an und extrahiert das Boc-Nle-Gly mit Äthylacetat; die vereinigten Extrakte werden getrocknet, un-1 das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft.

18 OO

3,255 g Dicyclohexylcarbodiimid werden einer Lösund von 4,830 g Boc-Nle-Gly und 1,815 g N-Hydroxysuccinimid in 7 ml wasserfreie, auf —10°C gekühltem Dimethylformamid zugesetzt.

Nach 30minütigem Rühren bei — 10⁰C, 2stündigem Rühren bei 0⁰C und lstündigem Rühren bei Raumtemperatur wird der Überschuß an Dicyclohexylcarbodiimid mit einigen Tropfen Essigsäure entfernt.

Der Dicyclohexylharnstoff wird abfiJtnert; das Dimethylformaiiiid wird im Vakuum entfernt, und der Rückstand, gelöst in sehr wenig Äthylacetat, läßt letzte Spuren von Dicyclohexylharnstoff, die sich abscheiden, ungelöst zurück.

Schließlich wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft.

Der ölige Rückstand, gelöst in der kleinsten Menge Dimethylformamid, wird in eine auf 0"C gekühlte Lösung von 5,970 g Trp-Met-Asp-Phe-NH₂ (vgl. /.M. Da vey und Mitarbeiter, J. Chem. Soc, 1966, S. 555) und 1,015 g N-Methylmorpholin in 60 ml Dimethylformamid gegossen.

Die Mischung wird 30 Minuten lang bei 0' C und dann 2 Tage bei Raumtemperatur stehen gelassen.

Nach Zersetzung des Überschusses an aktiviertem Ester mit 0,5 ml Diäthylaminoäthylamin wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft, und eine Lösung von 3,0 g Zitronensäure in 10 ml Wasser und dann 200 ml Wasser werden auf den öligen Rückstand Die Reaktionsmischung wird 30 Minuten lang bei 0⁰C und 2 Tage lang bei Raumtemperatur gehalten.

Nach Zersetzung des Überschusses an aktiviertem Ester mit 0,1 ml Diätbylaminoathylamin w.rd das Dimethylformamid im Vakuum abgedampft, und eine L&S von 1,5 g Zitronensäure in 5 ml Wasser sow.e mff Wasser werden auf den öligen Rückstand gegossen. Man erhält eine flockige Masse, die mn Wasser bis zur Neutralität gewaschen wird.

Nach Trocknen wird der Feststoff to der Warme Hrpimal mit Äther, dreimal mit Athylacetat und schlSich mit Äth;_r gewaschen. Es werden 1,450g Boc-Tyr-Nle-Phe-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH, erhalten, Fp. 165 bis 168^CC (Zers.); [*]f = -26 (c = 0,6 in Dimethylformamid).

0 14 ml Chlorsulfonsäure werden langsam und unter heftigem Rühren zu 10 ml wasserfreiem Pyridin, gekühlt auf -10⁰C, zugesetzt. Die Suspension wird unter Rühren 15 Minuten stehengelassen und nachher wird eine Lösung von 0,325 g Boc-Tyr-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH₂ in 3,5 ml Dimethylformamid zu-

gegossen.

Man erhält eine flockige Masse, die mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen wird.

Nach dem Trocknen wird der Feststoff in der Wärme dreimal mit Äther, dreimal mit Äthylacetat und schließlich wieder mit Äther gewaschen.

Den Rückstand kristallisiert man aus Methanol-Äther. Es werden 6,790 g Boc-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHj! erhalten, Fp. 179 bis 180⁰C (Zers.); [<x]f = -31,1° (c = 0,6 in Dimethylformamid).

3,46 g Boc-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH₂ werden in 100 ml 99°/_oiger Ameisensäure gelöst, und die Lösung wird 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gehalten.

Nach dem Abdampfen des Lösungsrr ttels im Vakuum wird der Rückstand aus Methanol-Äther kristallisiert.

Es werden 2,90 g Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHj erhalten, Fp. 184 bis 187°C (Zers.); E_ui = 0,43 Leu.

Eine Lösung von 0,845 g Boc-Tyr und 0,363 g N-Hydroxysuccinimid in 9 ml Dimethylformamid wird in einer Kühlmischung gekühlt, und 0,650 g Dicyclohexylcarbodiimid werden zugesetzt. Nach 30minütigem Schütteln bei —10°C, 2stündigem Schütteln bei 0⁰C und lstündigem Schütteln bei Raumtemperatur wird der Überschuß an Dicyclohexylcarbodiimid mit wenigen Tropfen Essigsäure zerstört.

Der Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert; das Dimethylformamid wird im Vakuum entfernt, und der Rückstand, gelöst in sehr wenig Äthylacetat, löst nicht die letzten Spuren von Dicyclohexylharnstoff, die sich abscheiden.

Zum Schluß wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft.

Der ölige Rückstand, gelöst in der kleinsten Menge Dimethylformamid, wird in eine Lösung von 1,53 g Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHj und 0,2023 g Methylmorpholin in 15 ml auf 0°C gekühltem Dimethylformamid gegoren

dS Kühlbad wird entfernt, und die Lösung wird unter Rühren bei Raumtemperatur 5 Stunden lang stehengelassen. .

Die so erhaltene gelbe Lösung wird sodann im Vakuum zur Trockne eingedampft und der halbfeste Rückstand mit 5 ml 2 M KHCO₃ aufgenommen.

Nach Beendigung der Bildung von Kohlenstoffdioxyd wird die Mischung mit 10 ml Wasser verdünnt, die Lösung auf O⁰C abgekühlt und mit 6n-HCl so lange angesäuert, bis sie gegen den Kongorot-Indikator sauer ist Der pH-Wert wird durch Zusetzen von Triethylamin auf 7,5 bis 8 eingestellt und die so erhaltene Lösung im Vakuum (4O⁰C) zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird mit ein wenig Dimethylformamid aufgenommen und zerrieben, und die unlöslichen anorganischen Salze werden durch erne poröse Scheidewand filtriert und dann gui: mit Dimethylformamid gewaschen.

Das gelbliche Filtrat dampft man im Vakuum zur Trockne ein und nimmt den Rückstand mit Chloroform auf, zerreibt gut, filtriert durch eine poröse Scheidewand, wäscht mit Chloroform und schließlich mit wasserfreiem Äther.
Nach Trocknen im Vakuum bei Raumtemperatur

werden 0,33 g

SO₃H

Boc-Tyr-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH.,

erhalten.

SO₃H

£₅,₈ = 0,52Tyr.

Durch Säurehydrolyse mit Trifluoressigsäure bei 0° C während 20 Minuten wird das entsprechende

SO_aH

Tyr-Me-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH₂ erhalten;

SO₃H

E_5-8 =0,16Tyr.

18 OO 129

Beispiel 2

SO₃H

Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NHs

Durch Verestern von 5,06 g L-Norleucin mit SOCl_a in wasserfreiem Methanol auf übliche Weise erhält man 6,fO g des gewünschten Methylesterhydrochlorids NIe-OMe-HCl, Fp. 141⁰C, [&)f +18,1° (c = 1 in DMF); Ε_1Λ = 1,35 GIu, 1,21 Leu.

Man setzt 11,34 g Boc-Trp über gemischtem Anhydrid, wie im Beispiel 1 beschrieben, mit 6,77 g NIe-OMe · HCl um, wobei man 14,65 g amorphes Boc-Trp-Nle-OMe erhält, Fp. 57 bis 59°C.

Dieses Produkt löst man in 100 ml Methanol und läßt es 18 Stunden bei Raumtemperatur mit 42 ml 85°/_oigem Hydrazinhydrat reagieren. Durch Umkristallisation aus Methanol erhält man 14,35 g Boc-Trp-NIe-NH-NH₂, Fp. 194 bis 195°C, [«]? -22,3° (c = 1 in Dimethylformamid).

Man löst 3,40 g Boc-Trp-Nle-N H-NH₂ in 15 ml Dimethylformamid und läßt es bei —25° C mit 7,5 ml 2,32 η-trockenem HCl in wasserfreiem Tetrahydrofuran reagieren, wonach man 0,95 ml tert.-Butylnitrit zugibt. Nach lOminütigem Rühren bei —25°C gibt man 2,45 ml Triäthylamin zu und anschließend eine vorgekühlte Lösung von 2,20 g Asp-Phe-NH₂ (J. Chem. Soc. [C], 555 [1966]) und 1,10 ml Triäthylamin in 40 ml Dimethylformamid.

Die Reaktionsmischung wird 2 Stunden bei —15°C gerührt, dann 2 Tage bei OC gehalten und dann wie üblich aufgearbeitet.

Nach Umkristallisation aus Methanol erhält man 4,03 g Boc-Trp-Nle-Asp-Phe-NH* Fp. 202⁰C (Zers.).

Eine Lösung von 4,17 g Boc-Trp-Nle-Asp-Phe-NH., in 150 ml 99°/_oiger Ameisensäure wird 3 Stunden lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Lösungsmittel wird sodann bei 3O⁰C unter vermindertem Druck abgedampft, der Rückstand wird in wasserfreiem Äther aufgenommen und aus Methanol umkristallisiert.

Man erhält 3,58gTrp-Nle-Asp-Phe-NH₂, Fp. 238°C (Zers.), E_Ui = 0,62 GIu, 0,57 Leu.

Die aus Dimethylformamid umkristallisierte analytische Probe hat einen Fp. von 220⁰C (Zers.).

Aus 4,33 g Boc-Thr erhält man, wenn man wie in dem obigen Beispielen arbeitet, durch Kristallisation aus Äther-PetToläther 4,02 g Boc-Thr-Gly-OC_SH₅, Fp. 87 bis 88°C, [α]? = -17,4° (c = 1 in Methanol).

Durch Hydrazinolyse von 3,74 g Boc-Thr-Gly-OCjH₅ in 35 ml Äthanol und 15 ml 85°/oigem Hydrazinhydrat während 20 Stunden bei Raumtemperatur erhält man nach Umkristallisieren aus Äthanol-Äther 3,47 g Boc-Thr-Gly-NH-NH₂, Fp. 129 bis 130° C, [λ]? = —7,6° (c = 1 in Dimethylformamid).

0,58 g Boc-Thr-Gly-NH-NHj werden in 4 ml Dimethylformamid gelöst, auf -25° C abgekühlt und zu 2,5 ml einer 2,1 η-Lösung von wasserfreier HCl in wasserfreiem Tetrahydrofuran zugesetzt, worauf 0,24 m 1 tert.-Butylnitrit zugegeben werden.

Die Mischung wird 10 Minuten lang bei —25 ⁰C geschüttelt, dann setzt man 1,02 ml Triäthylamin und danach eine Suspension von 0,58 g Trp-Nle-Asp-Phe-NH₈ in 10 ml Dimethylsulfoxyd, das 0,14 ml Triäthylamin enthält, zu. 5 ml Dimethylformamid werden zugesetzt, und die Reaktionsmischung wird danach 3 Tage lang bei -12°C stehengelassen.

Nach Umkristallisation aus Methanol-Äthylacetat erhält man 0,60 g Boc-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NHg, Fp. 194 bis 195°C (Zers.), [«]? = -27,3° (c = 1 in Dimethylformamid).

0,80 g Boc-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NHi werden 3 Stunden lang mit 30 ml 99°/oiger Ameisensäure umgesetzt.

Durch Umkristallisieren aus Dimethylformamid-Äthylacetat erhält man 0,66 g Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH₂, Fp. 198°C (Zers.), [«]? = -12,5° (c = 1 in 99°/_oiger Ameisensäure), £_ltI = 0,56 GIu, 0,51 Leu.

Durch Kondensation dieses Produkts mit dem p-Nitrophenylester von

SO₃H

Boc-Tyr

erhält man das entsprechende
SO₃H

Boc-Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH-j SO₃H

£_5>8 = 0,53 Tyr.

Durch 20minütige Säurehydrolyse mit Trifiuoressigsäure bei 0⁰C erhält man das entsprechende

SO_aH

Tyr-Thr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH* £_5i8 = 0,2 GIu.

Beispiel 3

SO₃H

Tyr-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHa

Zu 1,6 g Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHg, gelöst in 15 ml Dimethylformamid, werden 1 g Carbo-tert.-butoxy-methionin-p-nitrophenylester(Gazz.Chim.ltal., 95, S. 185, 1965) und 0,3 ml Triäthylamin zugesetzt.

Nach 4 Tagen bei Raumtemperatur wird mit 0,1 n-Chlorwasserstoff verdünnt, und der Niederschlag wird

durch Kristallisieren aus Äthanol-Wasser gereinigt.

Der erhaltene Feststoff mit einem Gewicht von 1,2 g, Fp. 198^c C (Zers.) wird 30 Minuten lang mit 1,3 n-Chlorwasserstoff in Essigsäure behandelt, wobei man Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHj-Hydrochlorid erhält, Fp. 195⁰C, £,., = 0,49 GIu.

Zu 0,8 g Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHg, gelöst in 10 ml Dimethylformamid, werden 1,2 g p-Nitrophenylester von p-Nitrocarbobenzoxy-tyrosinsulfat zugesetzt, Nach 7 Tagen wird die Reaktionsmischung zui Trockne eingedampft, und der Rückstand wird in etwas Äthanol zerrieben und filtriert.

Der Rückstand wird in Methanol und Dimethyl formamid gelöst, danach wird in Anwesenheit voi 10°/_oigem Palladium auf Kohle und gegebenenfalli Cyclohexylamin (Acta Chim. Acad. Sei. Ung., 50

509527/40;

18 OO 129

S. 339, 1966) so lange hydriert, bis die Bildung von Kohlendioxyd festgestellt wird. Die Mischung wird zur Trockne eingedampft, und der Rückstand wird durch Gegenstromverteilung im System Butanol-Äthanol-Essigsäure-Wasser (4:8:8:3) gereinigt, wo

bei 0,10 g werden.

des

gewünschten

SO₁H

Produktes erhalt

£_{6 B} = 0,16 Tyr.

Claims (2)

Patentanspruche: SO3H 1 nu vT«

1. Boc-Tyr-Nle-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NHa

SO₃H

I

2 Tyr-Thr-Gly-Tφ-Nle-Asp-Phe-NH₂