DE1795407B2 - Verfahren zur enzymatischen Entfettung von Knochen - Google Patents

Description

Die Extraktion von Gelatinen erfolgt an entfetteten Knochen. Wenn die Knochen von Schlachthöfen stammen, haben sie einen erhöhten Lipidgehalt, der vor der Extraktion von Gelatinen wesentlich vermindert werden muß.

Es ist an sich bereits bekannt, daß Lipasen zur Spaltung von Fetten verwendet werden können (vergleiche Kirk-Othmer, Encyclopedia of Chemical Technology, Bd. 8 (1965), S. 196 und »The Enzymes«, Academic Press, Inc., Publishers, New York, Bd. 2, 2 [1952], S. 1332, Z. 7 bis 3 von unten). In der letztgenannten Literaturstelle (Bd. I, 1 [1950], S. 400, Z. 8) ist auch die aktivierende Wirkung von Calciumionen bei der enHymatischen Fettspaltung bereits beschrieben worden.

Aus C. A. (1959), Bd. 53, Sp. 14559 bis 14560 ist jedoch beispielsweise bekannt, daß sowohl enthaarte als auch nicht enthaarte Schaffelle mit Lipase nur zu einem kleinen Teil entfettet werden können. Die Felle verloren etwa 10% Fett, wenn sie enzymatisch enthaart wurden, und etwa weitere 8% Fett, wenn sie anschließend mit Rizinus-Lipase bei einem pH von 4,8 behandelt wurden. Bei der Behandlung von nicht enthaarten Schaf feilen mit Lipase verloren sie 18% des ursprünglichen Fettgehaltes.

Obwohl sich die Hautpmenge des Fettes von Schaffellen an der Oberfläche befindet und daher leicht von Enzymen angegriffen werden kann ist also bei dem bekannten Verfahren eine vollständige Entfettung nicht möglich.

Des weiteren ist bekannt, daß das Fett in Knochen schwammartig vom Knochengewebe umschlossen und

ίο daher für den Angriff der Lipase nur sehr schwer zugänglich ist. Es hätte daher auch für einen Fachmann die Annahme nahe gelegen, daß die Entfettung von Knochen, die zudem praktisch vollständig erfolgen soll, noch wesentlich schwieriger und somit nu· mit schlechteren Ergebnissen durchgeführt werden kann als die Entfettung von Schaffellen.

Zur Entfettung von Knochen sind weiterhin noch Verfahren anderer Art bekannt. Die einen bestehen in der Eliminierung der Fette mit Hilfe organischer Lösungsmittel, wie Alkohol, Aceton usw.; dabei treten die folgenden Nachteile auf: Handhabung wesentlicher Mengen an Lösungsmittel, Entzündlichkeit, Materialverlust (Ossein) durch Hydrolyse von Collagen. Die anderen Verfahren verwenden Ultraschall zur »Freisetzung« der auf den Knochenstücken fixierten Lipide. Die technischen Ergebnisse sind zufriedenstellend, der Preis ist jedoch, wie im vorhergehenden Fall, hoch.
Auf der vorliegenden Erfindung ist die Schaffung eines Verfahrens zur Entfettung von Knochen, insbesondere von Knochen von Haustieren bei dem einerseits eine praktisch vollständige Entfettung möglich ist, das andererseits in der Handhabung einfach, ungefährlich und wenig aufwendig ist.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Knochen bei einem pH-Wert von 5 bis 8 und einer Temperatur vorzugsweise zwischen etwa 20 bis 45° C in Anwesenheit eines löslichen Calciumsalzes ein- oder mehrmals der Einwirkung einer mikrobiologischen Lipase unterwirft und die Knochen nach jeder Enzymbehandlung mit heißem Wasser mit einem pH-Wert zwischen 7 und 8,5 wäscht.
Es werden erfindungsgemäß mikrobiologische Lipasen verwendet, da sie unter großtechnisch befriedigenden Bedingungen erhalten werden können und Triglyceride mit langkettigen Fettsäuren, wie man sie in auf Knochen befindlichen Lipiden antrifft, hydrolysieren und in Diglyceride, Monoglyceride, Glycerin und FeItsäuren umwandeln können.

Man kann insbesondere die Lipase von Rhizopus arrhizus, var. Delemar (R a. D.), die Lipase von Rhizopus nigricans, die Lipase von Aspergillus niger, die Lipase von Candida cylindracea verwenden. Weiterhin verwendbar sind z. B. die Lipasen von Mucor mucedo, Rhizopus oryzae, Cnadida lipolytica und Aspergillus luchuensis.

Von allen Lipasen mikrobiologischen Ursprungs werden erfindungsgemäß die fungischen Lipasen, ins-

besondere die Lipase von Rhizopus arrhizus var. Delemar (R. a. D.) bevorzugt, da sie bei einem pH-Wert und einer Temperatur, die für ein Arbeiten optimal sind, sehr stabil ist, wodurch eine besonders wirksame Entfettung der Knochen möglich wird.

Wenn die Behandlung durch äußerliche Extraktion der Knochengelatine durchgeführt wird, so sind verschiedene Faktoren besonders zu beachten, die die Qualität beeinflussen. Der pH-Wert liegt zweckmäßig

17 9S407

zwitchen S bit 8, die Temperatur zwitchen 23 bii 45 C. wobei die Behoadlunpdeuer die atwiiehcn 3 bi* 20 Stunden betragen kann, enuprochend dem Lipidgehalt und der Wirksamkeit der verwendeten Upste ttuige- wfthlt wird. M der Upaeo von R. β. D. liegt die» β Zeit für einen Bnzymwert von etwa 100(10 u/g «wttehen

6 bit 12 Stunden (wobei u/g die npezifiiche Wirkgomkeit de« En*ymiiirt; vergleiche Dull. Sue. Chimie Biolü_BiHUC. IJd, 48 Nr. 6 (1966}, S. 747 bi» 77U).

E» int rattern, die zu behandelnden, »ogcnanntcn to »grünen Knochen«, die /weckmalttg /cretoUcn »ind, für eine Dauer «wischen 15 bi« 90 Minuten einer Vorbehandlung mit heißem Warner *u unterwerfen. So wird ein Teil der auf den Knochenfragmenten f.iicricn Lipide »owie i lcmchabfall eliminiert. die Behandlung »5 kann wiederholt werden.

!·.» 1*1 zweckmäßig, die Knochen in möglich*! fein /erteilter turm zu verwenden, um die hinwirkung vier l.ipase /u erleichtern. 80 kann man t H Kin.< It^ngtUckchen verwenden, die durch ein Sieb nut vier- »0 eckigen öffnungen von 16 · 19 mm Seitenlang hindurchgehen

Dann bringt man die KnochenittUckc und die wftüfigc I.ipiueloftung, die gewöhnlich einen Ciehiilt von 0,2 bt» IU g/l lipnnc, miteinander in Berührung, wobei aft die verwendete IJpancmcngc abhängig i»t von ihrer »pc/ifiuhcn WirkMtmkeit

!•rakliuh behandelt ims η jede» kg Knochen mit 0,2 bi» 10 g l.ipiuc, wobei du* Volumen der Lösung gewöhnlich /wuchen 0Λ bi* \ l/k μ Knochen liegt. Man fügt der 1 ipu»clö»ung cmc Menge eine* lonlichcti CuI-cunnul/c». vor/ug»weuc Calciumchlorid, /u. die im allgemeinen /wwchcn 0,2 hi» 10 g ('ulciumufil/ pro kg Knochen liegt. Dan Calcium »picll eint- dreifache Rolle

I b bcgun*llgl die Miminierung tier I ettefturen nun der I in wirkung der I ipn»c. indem c* mit ihnen Verbindungen eingeht, die »ic nun dem Kukliowtmedium eliminieren, wodurch die luiwirkuiti* dc* Ln/ym» be-Uli π mi ill wird.

I* tritt in die Konnlitiilion dc» I n/yininiilckuli ein. e» ist »omit ftir »eine Wirkutnikcil notwendig und knnii al» »pe/ifinher Aktivator der l.ipuw- uuge»ehen werden

l-.t »ihul/l da* I.n/ym und vcihe««crl damit die Wirksamkeit und Wirtuchafllichkeit tie* Verfuhren*

Wahrend der llchnndlung kann koutinuicrluli oder in Abfanden gerührt werden

NihIi der Itehaiullung wird die en/ymitiuclic Ioiung von den Knochen abgetrennt, und diese werden, voi /ugHwei<ic mit hciUctn Wu**cr grwuiichen, um die tut- 3" haftenden Kcuktlonnproduklc /u entfernen, von denen beeiiinmle die l'inwirkung der I ipiiic wahrend einer erneuten aulkrlichen Behandlung inhibieren konnten Da» Witkchen erfolgt lici einem pll-Wert /wikcheu

7 bt» ΚΛ voi/ugkweikc /wimhen H Im H.V l>ic lipiioebehitndlung muh dem Witkchen der Knochen kiinn /wo, drei oder mehrere MnI cnuprcihciut der gewtlnkchlen I rgebniiwc wiederholt weiden

lleiin cifindungNgemAUen Vcrfnlnni kmin mtin im Verlauf der verachiedenen Hchiindlungen konmiinle, ^Λ" lieh erhöhende oder abnehmende IJonen nn l.ipiue verwenden, I)Ie Wahl hftngi ab vom Unprung der Knochen, ihrem üpldgeliüli und der Ar) und den Eigentchafien der verwendeten l.lpiucn,

Im Verlauf der verscliietlenen Hcluindlungcn kann ·* man mich die Menge des Caiciutmnl/e* in Itc/ug ituf die zu behundelnde Knochenmenge variieren, denn e» bctilclH ein optimale« Verhflltnl» /,wUchen der /11 bydrolyvierenden Upidmentte. der Lipaiemenge und der Caleiummenge; dennoch itt die Anwesenheit eine» CalciuMubertchuiwe* nicht ichadlich bzw. un·

tu möglich, die Lipanelöiunaen erneut tu verwenden, wenn ihre verbleibende Wirkiamkeit al· ausreichend angeiehen wird.

Fall» notwendig, kann man dee erfindungigemaü> Verfahren mit tintfcUungnverfahren füi Knochen durch Ldiunpmittel oder Ultra»chall Kombinieren.

Da» erfindungigemftße Verfahren hat den besonderen Vorteil. daU die Knochcnprcicine unvcnehrt bleiben, kein Verlukt oder keine Veränderung an Protein- »ubmanAcn eintritt und hochwertige CJclutine in »ehr witikchaftlicher Weine erhalten wird.

Die folgenden Bcikpicle verankchaulichen die vorliegende irfindung, ohne »ic /u bewhrankcn.

Ücupicl I

Verwendet wurden Knochen au» dem Schlachthof mit einem tiptdgehait von 23,2",., bezogen auf Knochen mn einem Wmtkcrgclmlt von 10%. Die Knochen wurden /rrntoUcn und durch ein Kleb mit Lochern von l*> mm Seitenlange geklebt, Dicke Knochen wurden 30 Minuten der l'inwirkung von »ledcndem Wiiucr unterworfen Dunn wurde die nut Lipidcn und I lciw.lire«ten angereicherte llu**igkcit eliminiert und da« Verfuhren ein /weile» MnI wiederholt.

Nach der llimimerung anhaftender Mcinchabfallc und Abtropfcnlakkcn erhielt man tcllwemc entfettete Knochen, die /ur I ipu»cbehandlung bereit waren

Man führte I kg diener K uneben in I I einer walJrigen l-flkung von I ipitkc von K A D, mit einem (iehult von O₁S g/l I ipnkc mil '«MM) u/g, wan4¹SOO u/kg Knochen enldprm.li. miwic 1 g C it( I_n ein. Diene l.Okung wurde 6 Stunden bei V7 t unter »t.iiidigcm Hlihien bewegt

Der pH-Wert wurde durch Zugabe einer waUrigcn I)₁S M-NnOII-I okung »tilndig nur 7,2 t 0,2 gehalten.

Nuch beendeter crktcr I ipit*ebehnndlung wurde die l.Okung ahge/ogcn, und die Knochen wurden IS Minulen bei TS C in Wa»»rr gerührt b/w. behandelt. Darauf wurde wie oben um einer neuen !.ipancbchundlung unter Verwendung von O.S g I ipimc mil 0000 u/g I 6 g CaI¹I, pro kg Knochen begonnen

Nuch die»ei /weiten Hehandlung und einem an-HchlieUemlen, einciilcn Verrühren mil heiUcin Wa»»tr wie oben wurde eine diiile I ipii»ebcnundliing mil O₁S g Upa»e nut '«MM) u/g I V n CiU \ durchgeftihrl, worauf ein lcl/ic» MnI mit Wiusei von IS C gcwiuclien wurde.

I ipidgchull, bc/ogen ituf Knoihen mit einem Wa*»ergehalt von IO"„

unfftiitilii h 2X2%

nach der Vorbehandlung . , Ι4.Κ";,

nach der I I ipimebehandliing H,i%

nach der 2 I ipiuebeliundlung 4,6%

mich der ? I ipimebeluindlung I,V*/„

Verfahreiikiiiikheuie etwa 94,i%

llrupirl ?

Verwendet wurden Schluchthofknoehcn mit einem Upidgehiili von 1·)%, bezogen nuf Knochen mit einem Wiiüiiergehrtli von 10%. Die Knochen benlunden zur llfllfic nun Stückchen von elw« 16 mm, /,ur anderen Mlllfte iius Sillckchcn von etw» 19 mm. Sie wurden 40 Minuten mit iledendcm WitiMtr behandelt, unhcliliclkml wurde die Lipide und Floischnbflille enthitltetule l.oNung eliminiert.

100 leg dieser vorbehandelten Knochen wurden in 100 ) einer wäßrigen Lipaselösung von R. a. D. mit einem Gehalt von 0,8 g/l Lipase mit 7500 u/g gleich 6000 u/kg Knochen sowie 6 g/l CaCl₈ gegeben. Die Behandlung erfolgte 12 Stunden bei 37" C, wobei der pH-Wert durch eine 0,5 M-NaOH-Lösung auf 7,2 ± 0,2 gehalten wurde.

Nach der ersten Lipasebehandlung wurde die Lösung abgezogen, und die Knochen wurden 20 Minuten mit Wasser von 70⁰C gerührt bzw. behandelt, wobei lieses zugeführte Wasser durch Zugabe einer wäßrigen, verdünnten NaOH-Lösung auf einem pH-Wert von 8,5 gehalten wurde.

Nach Eliminierung dieser Waschlösung erfolgte eine zweite Behandlung mit einer neuen wäßrigen Lipaselösung von R. a. D. mit einem Gehalt von 2,5 g Lipase mit 7500 u/g pro kg Knochen, was etwa 18000 u/kg Knochen entsprach, sowie 9 g/l CaCIj; die verwendete Menge an Lösung war, bezogen auf das Gewicht der Knochen, die gleiche wie bei der ersten Behandlung,

Diese zweite Behandlung erfolgte 12 Stunden bei 37⁰C, wobei der pH-Wert, wie bei der ersten Behandlung, durch eine 0,5 M-NaOH-Lösung auf 7,2 ± 0,2 gehalten wurde.

Nach dieser zweiten Behandlung wurde wie oben gewaschen.

Lipidgehalt, bzw. auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%:

anfänglich 19%

nach der Vorbehandlung 11 %

nach der 1. Lipasebehandlung 5,8 %

nach der 2. Lipasebehandlung 1,5%

Ausbeute etwa 92%

Beispiel 3

Verwendet wurden Schlachthofknochen, die auf eine Größe von etwa 19 mm Seitenlänge zerstoßen waren und einen Lipidgehalt von 35,3%, bezogen auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%, hatten. Diese Knochen wurden als Vorbehandlung 30 Minuten der Einwirkung von siedendem Wasser unterworfen; dann wurde diese Lipide und Fleischabfälle enthaltende Lösung eliminiert.

Dann wurden diese Knochen als zweite Vorbehandlung 60 Minuten der Einwirkung \ >n siedendem Wasser unterworfen.

2000 kg der so vorbehandelten Knochen wurden in 1700 I einer Lösung mit einem Gehalt von 3,5 g/l Lipase von R. a. D. mit 12000 u/g gleich etwa 31000 u/kg Knochen und 10,6 g CaCl₂ pro 1 Lösung gegeben.

Die Behandlung erfolgte 8 Stunden bei 37°C, wobei der pH-Wert durch 0,5 M-KOH auf 7,2 i 0,2 gehalten wurde.

Nach dieser ersten Behandlung wurde die Lipaselösung abgezogen, worauf 30 Minuten mit Wasser von 80" C und einem pH-Wert von 8,4 durch Zugabe einer verdünnten KOH-Lösung gerührt wurde.

Nach Eliminierung dieser alkalischen Waschlösung wurde ein zweites Mal mit Wasser von 75 C unter heftigem Rühren gewaschen.

Nach Eliminierung dieser zweiten Waschlösung erfolgte die zweite Lipasebehandlung mit 2000 1 einer Lipaselösung mit einem Gehalt von 1 g/l Lipase von R. a. D. mit 12000 u/g gleich 12000 u/kg Knochen und 6 g/l CaCI,. Die Behandlung erfolgte 10 Stunden bei 37''C, wobei der pH-Wert durch Zugabc einer wäßrigen 0,5 M-KOH-Lösung auf 7,2 ± 0,2 gehalten wurde.

Nach der zweiten Lipasebehandlung wurde unter denselben Bedingungen wie oben gewaschen. Schließlieh wurde ein drittes Mal mit 2000 1 einer Lipaselösung von R. a. D. mit 12000 u/g gleich 3400 u/kg Knochen und 6 g/l CaCI₂ behandelt, worauf wie oben gewaschen wurde.

Lipidgehalt, br-v. auf Knochen mit einem Wasseriv> gehalt von 10%:

anfänglich 35,3 %

nach der (doppelten) Vorbehandlung .24,1 %

nach der I. Lipasebehandlung 11,3 %

nach der 2. Lipasebehandlung 5,4%

nach der 3. Lipasebehandlung 1,1 %

Ausbeute etwa 97%

Beispiel 4

_ao Verwendet wurde eine Mischung von Schlachthofknochen, die zu etwa gleichen Teilen aus Stückchen von 16 mm und 19 mm Seitenlänge bestand und einen Lipidgehalt von 29,3%, bezogen auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%, hatte.

a₅ Die Knochen wurden 30 Minuten der Einwirkung von siedendem Wasser unterworfen, worauf dieses Lipide rnd Fleischabfälle enthaltende Wasser eliminiert wurde.
1000 kg dieser so vorbehandelten Knochen wurden zu 1500 I einer wäßrigen Lipaselösung von Cnadida cylindracea mit einem Lipasegehalt von 1 g/l und einem Wert von 10500 u/g gleich 15750 u/kg Knochen, 4 g/l CaCI₄ und 2 g/l MgCl₂ zugefügt; die Behandlung erfolgte 10 Stunden bei 34 C, wobei der pH-Wert durch eine wäßrige 0,5 M-NaOH-Lösung auf 7 ± 0,2 gehalten wurde. Dieser pH-Wert ist ein Kompromiß zwischen dem optimalen pH-Wert des Enzyms, nämlich 6,7, und dem pK-Wert der Fettsäuren.
Nach der Behandlung wurde die Lösung abgezogen und die Knochen unter Rühren 40 Minuten mit Wasser von 75 C gewaschen, dessen pH-Wert durch Zugabe einer wäßrigen, verdünnten NaOH-Lösung auf 8,5 gebracht und dort gehalten wurde. Nach Eliminierung der Waschlösung erfolgte ein zweites Waschen mit Wasser von 75"C.

Dann wurde ein zweites Mal wie oben, jedoch für die Dauer von 15 Stunden, behandelt, und unter den oben genannten Bedingungen gewaschen.
Lipidgehalt, bzw. auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%:

anfänglich 29,3%

nach der Vorbehandlung 20,1 %

nach der 1. Lipasebehandlung 8,7%

nach der 2. Lipasebehandlung 1,8 %

Ausbeute etwa 94%

Beispiel 5

Verwendet wurden zerk'icincrtc Schlachthofknochen von 16 mm Seitenlänge mit einem Lipidgehalt von 25%, bezogen auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%.

Diese Knochen wurden 60 Minuten der Einwirkung von siedendem Wasser unterworfen. Nach Eliminierung des Wassers wiederholte man das Verfahren ein zweites Mal.

10000 kg der so behandelten Knochen wurden in 10000 I einer wäßrigen Lipaselösung von Rhizopus

^ 8

nigricans mit einem Gehalt von 1 g/l Enzym mit Beispiel 6

5200 u/g gleich 5200 u/kg Knochen und 3 g/l CaCl₂ Verwendet wurden zerkleinerte Schlachthofknochen

gegeben. von 19 mm mit einem Lipidgehalt von 23,4%, bezogen

Die Behandlung erfolgte 8 Stunden bei 28⁰C, wobei _auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%.

der pH-Wert auf 6,9 ± 0,2 gehalten wurde. Dieser 5 _Diese Knochen wurden 45 Minuten der Einwirkung

pH-Wert ist ein Kompromiß zwischen dem optimalen von siedendem Wasser unterworfen. Nach Eliminie-

pH-Wert des Enzyms und dem pK-Wert der Fett- _rung der Flüssigkeit wurde die Behandlung wiederholt.

säuren. 500 kg der so behandelten Knochen wurden in 500 1

Während der Behandlung wurde in Abständen einer wäßrigen Lipaselösung von AspergiUus niger mit

langsam gerührt. "> einem Gehalt von 10 g/l Enzym mit 2400 u/g gleich

Nach der Behandlung wurde die Lösung eliminiert 24000 u/kg Knochen und 20 g/l CaCl₂ gegeben. Die

und dann mit 10000 1 Wasser von 70⁰C 15 Minuten Behandlung erfolgte 15 Stunden bei 30°C, wobei der

gewaschen. Der pH-Wert des Wassers wurde durch pH-Wert durch Zugabe einer wäßrigen 0,5 M-NaOH-

eine verdünnte NaOH-Lösung auf 8,5 gehalten. Lösung auf 7,2 ± 0,2 gehalten wurde; während der

Die zweite Behandlung erfolgte mit 10000 1 einer »5 15stündigen Behandlung wurde in Abständen gerührt.

Lipaselösung mit einem Gehalt von 1 g/l Lipase von »_ach der Behandlung wurde die Lipaselösung abge-

Rhizopus nigricans mit 5200 u/g gleich 10400 u/kg zogen; dann wurden 50 1 Wasser von 80°C zugefügt,

Knochen und 3 g/l CaCI₂. dessen pH-Wert durch Zugabe einer verdünnten

Die Behandlung erfolgte 10 Stunden bei 28° C unter NaOH-Lösung auf 8,5 gehalten wurde; das Waschen

denselben Bedingungen wie die erste Behandlung, ao dauerte 15 Minuten. Nach Eliminierung der Lösung

worauf wie oben gewaschen wurde. wurde ein zweites Mal unter denselben Bedingungen

Eine letzte Behandlung erfolgte unter den oben an- gewaschen.

gegebenen Bedingungen, wobei jedoch eine Lösung D,_{e ZW}eite Lipasebehandlung erfolgte mit 7501 einer

mit einem Gehalt von 3 g/l Enzym verwendet wurde. wäßrigen Lösung mit einem Gehalt von 2,1 g/l Lipase

Dann wurde mit Wasser eines pH-Wertes von 8,5 und 35 _mj_t 7700 _u/kg Knochen und 2 g/l CaCl₂.

dann mit Wasser einer Temperatur von 8O⁰C ge- Während der 15stündigen Behandlung bei 30° C

waschen. wurde in Abständen gerührt. Der pH-Wert wurde

Lipidgehalt, bzw. auf Knochen mit einem Wasser- durch eine 0,5 M-NaOH-Lösung auf 7,2 ± 0,2 ge-

gehalt von 10%: halten. Dann wurde wie oben zweimal gewaschen.

3° Lipidgehalt, bezogen auf Knochen mit einem

anfänglich 25% Wassergehalt von 10%:

nach der Vorbehandlung 18,5% anfänglich 23,4%

nach der 1. Lipasebehandlung 9,8 % nach der Vorbehandlung 16,8 %

nach der 2. Lipasebehandlung 5,1 % nach der 1. Lipasebehandlung 8,4%

nach der 3. Lipasebehandlung 1,4% ³⁵ nach der 2. Lipasebehandlung 1,3%

Ausbeute etwa 94,4% Ausbeute etwa 94,5%

Claims (6)

Patentansprüche:

1. Verfahren zur enzymalischen Entfettung von Knochen mit einem Lipidgehalt von etwa 15 bis 35%, bezogen auf Knochen mit einem Wassergehalt von 10%, dadur-h gekennzeichnet, daß man die Knochen bei einem pH-Wert von 5 bis 8 und einer Temperatur vorzugsweise zwischen etwa 20 bis 45 C in Anwesenheit eines löslichen Calciumsalzes ein- oder mehrmals der Einwirkung einer mikrobiologischen Lipase unterwirft und die Knochen nach jeder Enzymbehandlung mit heißem Wasser mit einem pH-Wert zwischen 7 und 8,5 wäscht.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Lipasen von Rhizopus arrhizus Delemar, Rhizopus nirgricans, Aspergillus niger, Candida cylindracea, Mucor Mucedo, Rhizopus oryzae, Candida lipolytica oder Aspergillus Juchuensis verwendet.

3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man die Lipasebehandlung für die Dauer von 3 bis 20 Stunden durchführt.

4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man 0,2 bis 10 g Lipase pro kg Knochen verwendet.

5. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man Calciumchlorid in einer Menge von 0,2 bis 10 g pro kg Knochen verwendet.

6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß man die Knochen vor der Lipasebehandlung einer Vorbehandlung mit siedendem Wasser unterwirft.