DE1668965B2

DE1668965B2 - Asparaginsäuredipeptidalkylester

Info

Publication number: DE1668965B2
Application number: DE1668965A
Authority: DE
Inventors: Arthur H. Winnetka Goldkamp; Robert H. Deerfield Mazur; James M. Glenview Schlatter
Original assignee: GD Searle LLC
Current assignee: GD Searle LLC
Priority date: 1967-01-20
Filing date: 1968-01-12
Publication date: 1974-04-11
Also published as: DK130133C; DK130133B; ES349560A1; IT1045112B; DE1668965A1; IL29350A; NL6800870A; FR1554088A; IE31814B1; GB1206233A; DE1668965C3; IE31814L; NO120795B; US3475403A; SE358384B; ES349559A1; CH516519A; BE709655A

Description

C-OH

Il ο

in welcher X einer der folgenden Reste

—CH

-CH

-CH-CH₃ OH

Hai,

-(CH₂)„S(O)„,R"

sein kann, Hai Fluor, Chlor, Brom oder Jod, m die Zahl O oder 2, η die Zahl 1 oder 2, R Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen und R' und R" Alkylresle mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen darstellen und deren stereochemische Konfiguration l-l, dl-dl, l-dl oder dl-l ist.

2. L-Asparagyl-L-tyrosinmethylester.

3. L-Asparagyl-L-tyrosmäthylester.

4. i.-Asparagyl-L-0-methyltyrosinmethylester. ₄

5. L-Asparagyl-L-O-äthyltyrosinmethylester.

6. L-Asparagyl-i.-threoninmethylester.

7. L-Asparagyl-L-methioninmethylester.

8. L-Asparagyl-L-S-methylcysteinmethylester.

9. L-Asparagyl-L-S-äthylcysteinmethylester.

10. L-Asparagyl-L-methioninsulfonmelhylester.

11. L-Asparagyl-L-S-methylcysteinsulfonmethylester.

12. L-Asparagyl-DL-p-fluorphenylalanjnmethylester.

13. L-Asparagyl-DL-p-chlorphenylalaninmethylester.

14. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

a) von ejper Verbindung der Formel

Z—NH- CH- CNH-CH- COR'

CH₂
/~<

(B)

und Z eine die Aminogruppe schützende Tntyl-, p-Nitrobenzyloxycarbonyl-, p-Brombenzyloxycarbonyl-, Benzyloxycarbonyl- oder Alkoxycarbonylgruppe darstellt, die die Aminogruppe und die /?-Carboxygruppe schützenden Gruppen abspaltet oder
b) L-2,5-Oxazo1idindion-4-essigsäure mit einem Aminosäureester der Formel

O
NH,-CH-COR'

(C)

in der X und R' die obige Bedeutung besitzen, in Berührung bringt.

Die Erfindung betrifft neue Verbindungen der Formel

H₂N-CH-CNFi-CH-COR'
CH₂ X

COH
O
in welcher X einer der folgenden Reste

in der X und R' die obige Bedeutung besitzen (CH₂J_nS(O)₁₁₁R'

sein kann, Hai Fluor, Chlor, Brom oder Jod, m die Zahl O oder 2, « die Zahl 1 oder 2, R Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen und R' und R" Alkylreste mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen darstellen, und deren stereochemische Konfiguration l-l, dl-dl, l-dl oder dl-l ist. Beispiele für Alkylreste R, R' und R" sind der Methyl-, Äthyl-, Propyl-,' Butyl-, Pentyl-, Hexyl-, Hepty]-Rest und deren verzweiglkettigen Isomeren.
Die Dipeptid-Dcrivate der vorliegenden Erfindung haben die überraschende und völlig unerwartete Eigenschaft, daß sie einen süßen Geschmack besitzen. Wegen dieser Eigenschaft können diese Derivate dazu verwendet werden, ihre Süße einer Vielzahl von Lebensmitteln mitzuteilen. Beispiele für solche Nahrungsmittel sind Früchte, Gemüse, Säfte, Flcischprodukte wie Schinken oder Speck, gesüßte Milchprodukte, Salatsoßen, Eiscreme, Fruchteis, Gelatine, Zuckergüsse, Sirupe, Kuchengemische und Getränke,

wie mit CO₂ versetzte Erfrischungsgetränke und Weine.

Als Beispiel sei nachstehend die Zubereitung eines typischen gesüßten Orange-Soda-Getränkes beschrieben: Ein Vorrat von Getränkesirup wird zubereitet, indem 5,5 ml einer 60%igen wäßrigen Zitronensäurelösung mit 150 ml Wasser vermischt werden, 2 g L-Asparagyl-L-tyrosinmethylester in dieser Lösung aufgelöst werden, nacheinander 7,02 ml Orangegeschmack FO-78 der A. E. Illes Company, Dallas/ Texas, und 2,5 g Nytriumbenzoat zugesetzt werden und dieses Gemisch mit Wasser auf 200 ml verdünnt wird. 28-g-Proben dieses Sirups werden in 180-ml-Flaschen übergeführt, und 110 ml kaltes Leitungswasser werden jeder Flasche zugesetzt. In jede Flasche werden dann 42 ml kaltes Abfüllwasser (5 Vol. Kohlendioxyd) gegeben, um das Getränk mit CO₂ zu versetzen. Jede Flasche wird verschlossen und ihr Inhalt vermischt.

Ein Vergleich dieser Proben mit einem Orangc-Soda-Getränk, welches eine Zuckermenge enthielt, die das 50fache der Menge des genannten Dipeptid-Derivats beträgt, ergab keinen bemerkenswerten Unterschied in der Süße.

Die erfindungsgemäßen Dipeptid-Süßmittel sind wasserlösliche, beständige Substanzen, die in verschiedenster physikalischer Form, z. B. als Pulver, Tabletten Sirupe usw., verwendet werden können. Auch flüssige oder feste Trägerstoffe, wie Wasser, Glycerin, Stärke, Sorbit, Salz, Zitronensäure und andere geeignete, nichttoxische Substanzen können verwendet werden.

Es wurde gefunden, daß die Süße durch die Stcreochemie der einzelnen Aminosäureeinheiten beeinflußt wird, welche die Dipeptidstruktur ausmachen. Die L-L-lsomeren, z. B. L-Asparagyl-L-tyiOsinmcthylester, sind besonders süß. Es ist daher offensichtlich, daß Gemische, welche die L-L-Isomeren enthalten, d. h. DL-DL, L-DL oder DL-L, diese Eigenschaft ebenfalls haben.

Die erfindungsgemäßen Süßmittel sind als Ersatz für Zucker besonders für Diabetiker geeignet. Außerdem fehlt ihnen der unangenehme Nachgeschmack, den solche synthetischen Süßmitte!, wie Saccharin oder Cyclamat, aufweisen. Das Fehlen giftiger Eigenschaften beruht auf ihrer Herkunft aus natürlichen Quellen, d. h. den natürlich vorkommenden Aminosäuren, die vom tierischen Körper zum Aufbau der essentiellen Proteine verwendet werden.

Die neuen Verbindungen der Formel I werden bequem hergestellt, indem man ein L-Asparaginsäurederivat der Formel

Il

Z—NH-CH-C—Ο—Α (II)

CH₂
COB

Il ο

in welcher Z eine Aminoschutzgruppe, wie eine Trityl-, p-Nitrobenzyloxycarbonyl-, p-Brombenzyloxycarbonyl-, Benzyloxycarbonyl- oder Alkoxycarbonylgruppe, B ein Benzylrest, welcher eine schützende Estergruppe bildet, und A ein p-Nitrophenyl- oder Alkoxycarbonylrest, welcher eine labile oxydierte Funktion bildet, ist, mit einem passenden Aminosäureester in Berührung bringt. Die schützenden Gruppen werden dann auf geeignete Weise vom Asparaginsäureteil des entstandenen Zwischenprodukts abgespalten. Wenn die Aminogruppe durch eine Benzyloxycarbonylfunktion und die /f-Carboxygruppe durch eine Benzylestergruppe geschützt ist, dann ist die katalytische Hydrierung bzw. Hydrogenolyse die bevorzugte Methode für diese Abspaltung. Zeit und Temperatur sind keine kritischen Faktoren, hängen jedoch, wie. der Fachmann weiß, von

ίο dem verwendeten Lösungsmittel ab. Der Druck ist nicht kritisch, jedoch werden die Umsetzungen zweckmäßigerweise bei atmosphärischem oder leicht erhöhtem Druck durchgeführt.

Solche Umsetzungen werden am besten erläutert

is am Beispiel der Reaktion von N-Benzyloxycarbonyl-L - asparaginsäure - α - ρ -nitrophenyl, β - benzyldiester (beschrieben von S. Guttmann, HeIv. Chim. Acta, 44, 721 [1961]) mit L-Tyrosinmethylester unter Bildung von /i-Benzyl-N-Benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-L-tyrosinmethylestcr, welcher unter Verwendung von Palladiumschwarz-Katalysator in wäßriger Essigsäure zu L-Asparagyl-L-tyrosintnethylester hydrogenolysiert wird.
Die eine Sulfongruppe enthaltenden Dipeptide gemaß der vorliegenden Erfindung werden durch Umsetzung des geschützten Asparaginsaurederivats mit dem die Sulfongruppe enthaltenden, entsprechenden Aminosäureester hergestellt. Die letzteren Substanzen werden leicht durch Veresterung der entsprechenden Aminosulfonsäure erhalten. Zum Beispiel wird L-Methioninsulfon durch Umsetzung mit einer Lösung von Thionylchlorid in Methanol in sein Methylester-Hydrochlorid umgewandelt. Man läßt den freien Ester mit dem obengenannten N-Benzyloxycarbonyl-L-Asparaginsäure-α-p-Nitrophenyl, ß-benzyldiester zu β - Benzyl - N - benzyloxycarbonyl -1. - Asparagy 1 - L - methioninmethylestersulfon sich umsetzen, welches mit Palladium zu i.-Asparagyl-L-methioninmethylestersulfon hydrogenolysiert wird.

Auf andere Weise können die Verbindungen der Formel I hergestellt werden, indem eine Verbindung der allgemeinen Formel

Il

Z—NH—CH-COH (III)

C-OB

ι,

in welcher Z und B die oben angegebene Bedeutung haben, mit einem geeigneten Aminoester in Gegcnwart eines brauchbaren Dehydratisierungsmittels in Berührung gebracht wird und dann die schützenden Gruppen auf geeignete Weise entfernt werden. Besonders bevorzugte Dehydratisierungsmittel sind Alkylaminoacetylene und insbesondere Dicyclohexylcarbodiimid. Wenn die Aminogruppe durch eine Benzyloxycarbonylfunktion und die /i-Carboxygruppe durch eine Benzylestergruppe geschützt ist, dann ist die katalytische Hydrierung eine bevorzugte Methode für diese Abspaltung. Zeit und Temperatur sind keine kritischen Faktoren, hängen jedoch, wie der Fachmann weiß, von dem verwendeten Lösungsmittel ab. Der Druck ist nicht kritisch, jedoch werden die Umsetzungen zweckmäßigerweise bei atmosphärischem

oder leicht erhöhtem Druck durchgeführt. So wird z. B., wenn N-Benzyloxycarbonyl-L-Asparaginsäure-/3-benzylester mit L-TyrosinmethylesteT in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid umgesetzt wird, ^-Benzyl - N - benzyloxycarbonyl - L - asparagyl - L - tyrosinmethylester erhalten, welcher dann in verdünnter Essigsäure unter Verwendung von Palladiumschwarz-Katalysator zu L- Asparagyl - l - Tyr osinmethylester hydrogenolysiert wird.

Auf andere Weise können die Verbindungen der Formel I hergestellt werden, indem !,-Asparaginsäure mit Phosgen zum N-Carboxyanhydrid von L-Asparuginsäure umgesetzt und dann die letztere Substanz mit einem geeigneten Aminoester umgesetzt wird. Zeit und Temperatur sind keine kritischen Faktoren, hängen jedoch von dem verwendeten Lösungsmittel ab. So wird, wenn N-Carboxyanhydrid von L-Asparaginsäure, hergestellt durch Umsetzung von L-Asparaginsäure mit Phosgen, mit L-Tyrosinmethylester umgesetzt wird, L-Asparagyl-L-tyrosinmethylester erhalten.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. In diesen Beispielen sind Temperaturen in ⁰C und Materialmengen in Gewichtsteilen angegeben, wen η nichts anderes vermerkt ist. Die doppelten Schmelzpunkte im Falle der Dipeptidester beruhen auf einer wärmekatalysierten Cyclisierung dieser Substanzen unter Bildung der entsprechenden Diketopiperazine.

Beispiel 1

Ein Gemisch aus 10,05 Teilen N-Benzyloxycarbonyl - L - asparaginsäure - α - ρ - nitrophenyl,/3 - benzyldiester,L - tyrosinmethylester und 45 Teilen Äthylacetat wird für angenähert 24 Stunden bei etwa 65° abgestellt, danach gekühlt und nacheinander mit 50%igem, wäßrigem Kaliumcarbonat, Wasser, verdünnter Salzsäure und Wasser gewaschen. Durch Trocknen dieser Lösung über Magnesiumsulfat und anschließendes Abdestillieren des Lösungsmittels unter vermindertem Druck erhält man einen gummiartigen Rückstand, welcher durch Kristallisation aus Äther/ Äthylacetat gereinigt wird; es wird /i-Benzyl-N-Benzyloxycarbonyl - l - asparagyl - l - tyrosinmethylester mit einem Schmp. bei etwa 125 bis 127,5° und einer optischen Drehung in Methanol von —5° erhalten.

Beispiel 2

45

Zu einer Lösung aus 20 Teilen /8-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl -L- asparagyl -L- tyrosinmethylester in 250 Teilen 75%iger wäßriger Essigsäure werden 2 Teile Palladiumschwarz gegeben, und das entstandene Gemisch wird mit Wasserstoff bei Atmosphärendruck und Raumtemperatur geschüttelt, bis die Wasserstoffaufnahme aufhört. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und das Filtrat unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt. Der erhaltene Rückstand wird aus wäßrigem Äthanol kristallisiert, wobei L-Asparagyl-L-tyrosinmethylester erhalten wird, der einen Doppelschmelzpunkt bei etwa 180 bis 185° und 230 bis 235° unter Zersetzung aufweist. Diese Verbindung zeigt eine optische Drehung in Wasser von + 4".

Beispiel 3

3,4 Teile N-Benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäure-/?-benzylester werden in 5 Volumteilen Tetrahydrofuran gelöst. 1 Teil Triäthylamin wird zugesetzt und die Lösung unter Rühren auf —10° gekühlt; danach wird 1 Teil Äthylchloroformat zugesetzt, wobei die Temperatur unter 0^D gehalten wird. Nach etwa 10 Minuten werden 2 Teile L-Tyrosinmethylestcr in 5 Volumteilen Tetrahydrofuran der Lösung zugesetzt, wobei die Temperatur unter 0^u gehalten wird. Die Lösung wird etwa 16 Stunden bei 5° stehengelassen. Das Triäthylamin-Hydrochlorid wird durch Filtrieren entfernt und das Filtrat durch Destillation unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit, wobei ein gummiartiger Rückstand erhalten wird, der aus Äther/Äthylacetat zu /ϊ-Benzyl-N-benzyJoxycarbonyl-L-asparagyl-L-tyrosinmethylester, identisch mit dem Produkt vom Beispiel 1, umkristallisiert wird.

Bei Verwendung einer äquivalenten Menge von β - Benzyl - N - benzyloxycarbonyl - l - asparagyl- l - ty rosinraethylester wird nach dem Verfahren vom Beispiel 2 L-Asparagyl-L-tyrosmmethylcster, identisch mit dem Produkt vom Beispiel 2, erhalten.

Beispiel 4

Der Ersatz der Verbindung vom Beispiel 1 durch 4,62 Teile r.-Tyrosinäthylester und die anschließende Umkristallisation des Rohprodukts aus Äthcr/Isopropylacetat führt zu /J-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagy)-L-tyrosinäthylester mit einem Schmp. von etwa 122 bis 124° und einer optischen Drehung in Methanol von -9°.

Wenn 5 Teile dieses /f-Benzyl-N -benzyloxycarbonyl -L-asparagyl-i.-tyrosinäthylesters bei dem Verfahren vom Beispiel 2 eingesetzt werden, dann wird L-Asparagyl-i.-tyrosinäthylester mit einem Schmp. von 188 bis 190° unter Aufschäumen und einer optischen Drehung in Wasser von +6° erhalten.

Beispiel 5

Zu einer Lösung von 5,73 Teilen L-O-Methyltyrosinmethylester-hydrochlorid in 50 Teilen Wasser wird genügend Kaliumbicarbonat zur Neutralisation gegeben und das entstandene wäßrige Gemisch mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet.

Wenn diese organische Lösung an Stelle des L-Tyrosinmethylesters bei dem Verfahren vom Beispiel 1 verwendet wird, dann wird /f-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl -1. - asparagyl - L - O -methyltyr osinmethylester gebildet, welcher nach Umkristallisation aus Äther/ Äthylacetat bei etwa 114 bis 115° schmilzt und eine optische Drehung in Methanol von —4,5° hat.

Durch Einsatz von 5 Teilen dieses /f-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl - L - asparagyl - L - O - methyltyrosinmethylesters bei dem Verfahren vom Beispiel 2 wird L -Asparagyl - l - O - methyltyrosinmethylester gebildet, welcher einen Doppelschmelzpunkt bei etwa 138 bis 140° und 185 bis 235° unter Zersetzung und eine optische Drehung von -0,5° hat.

Beispiel 6

Werden 7,65 Teile L-O-Äthyltyrosinmethylester-Hydrochlorid bei dem Verfahren vom Beispiel 5 b) eingesetzt, dann wird /i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L - asparagyl - L - O - äthyltyrosinmethy lester mit einem Schmp. von etwa 115 bis 116° und einer optischen Drehung in Methanol von -6° gebildet.

Die Hydrogenolyse von 5 Teilen dieses /i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-L-O-äthyltyrosin-

methylesters nach dem im Beispiel 2 beschriebenen Verfahren führt zu L-Asparagyl-L-O-äthyltyrosinmethylester, der einen Schmelzpunkt unter Zersetzung bei etwa 185 bis 240" und eine optische Drehung in Methanol von —1,5° hat.

Beispiel 7

Zu einem Gemisch aus 6 Teilen L-Methioninmethylester-Hydrochlorid, 15,3 Teilen N - Benzyloxycarbonyl - l - Asparaginsäure - α - ρ - Nitrophenyl,/? - Benzyldiester und 38 Teilen Dimethylformamid werden unter Kühlen und Rühren 3,3 Teile Triäthylamin gegeben. Das Rühren wird etwa 2 Stunden fortgesetzt; das Gemisch wird ungefähr 16 Stunden bei etwa 8° abgestellt, und das Rühren wird 3 bis 4 Stunden bei Raumtemperatur fortgesetzt. Das Gemisch wird dann mit Äthylacetat verdünnt und nacheinander mit verdünnter Salzsäure, verdünntem wäßrigem Kaliumcarbonat und Wasser gewaschen. Die wäßrigen Waschflüssigkeiten werden mit Äthylacetat extrahiert und die organischen Extrakte mit der ursprünglichen organischen Lösung vereinigt. Die vereinigten Lösungen werden durch Natriumsulfat filtriert, und das Lösungsmittel wird bei Raumtemperatur verdampfen gelassen. Der Rückstand wird durch Umkristallisieren aus Isopropylalkohol, Waschen mit Äther und Trocknen an der Luft gereinigt, wobei p-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl - L - asparagyl - L - methioninmethylester mit einem Schmp. von etwa 78 bis 78,5° und einer optischen Drehung in Chloroform von +26,5° erhalten wird.

Zu einer Lösung von 10 Teilen dieses /?-Benzyl-N - benzyloxycarbonyl - L - asparagyl - L - methioninmethylesters in 120 Volumteilen 75%iger wäßriger Essigsäure werden 3 Teile Palladiumschwarz-Katalysator gegeben, und das Gemisch wird mit Wasserstoff bei Atmosphärendruck und Raumtemperatur geschüttelt, bis die Wasserstoffaufnahme aufhört. Durch Abtrennen des Katalysators durch Filtration und Abdestülieren des Lösungsmittels unter vermindertem Druck wird als Rückstand das Rohprodukt erhalten, welches zunächst durch Verreiben mit Äther und dann durch Umkristallisieren aus Methanol/Äther gereinigt wird, wobei reiner L-Asparagyl-L-methioninmethylester erhalten wird, der einen dreifachen Schmelzpunkt bei etwa 111°, 136,5 bis 145° unter Zersetzung und 200-bis 213,5° hat und eine optische Drehung in Wasser von —19,5° zeigt.

Beispiel 8

Zu einem Gemisch aus 5,1 Teilen L-Threoninmethylester-Hydrochlorid, 15,1 Teilen N-Benzyloxycarbonyl - L - asparaginsäure - α - ρ - nitrophenyl,^ - Benzyldiester und 38 Teilen Dimethylformamid werden unter Kühlung 3,3 Teile Triäthylamin gegeben, und das Gemisch wird etwa 1 Stunde gerührt und dann etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann werden 0,5 Teile Imidazol zugesetzt, und das Gemisch wird etwa 1 Stunde gerührt, danach mit Äthylacetat verdünnt und nacheinander mit verdünnter Salzsäure, verdünntem wäßrigem Kaliumbicarbonat und verdünntem wäßrigem Natriumsulfat gewaschen. Die organische Lösung wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel bei Raumtemperatur verdampfen gelassen, wobei β - Benzyl - N - benzyloxycarbonyl -1. - asparagyl-L-threoninmcthylester erhalten wird.

Zu einer Lösung aus 11 Teilen dieses /i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-L-threoninmethylesters in 200 Volumteilen 75%iger wäßriger Essigsäure wird 1 Teil Palladiumschwarz-Katalysator gegeben und das Gemisch mit Wasserstoff bei Atmosphärendruck und Raumtemperatur geschüttelt, bis die Wasserstoffaufnahme abgeschlossen ist. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und das Filtrat unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird in wäßrigem Methanol gelöst und das

ίο Rohprodukt durch Zugabe von Äther ausgefällt. Die Reinigung dieses ausgefällten Rohprodukts erfolgt durch Umkristallisieren aus wäßrigem Isopropylalkohol, wobei reiner L-Asparagyl-l.-threoninmethylester mit einem Schmelzpunkt von 159,5 bis 160,5° unter Zcrset2ung und einer optischen Drehung in Wasser von —6° erhalten wird.

Beispiel 9

Ein Gemisch aus 7,45 Teilen L-S-Methylcysteinmethylester-Hydrochlorid, 20,1 Teilen N-Benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäure-a-p-nitrophenyl.ß-benzyldicster und 47,5 Teilen Dimethylformamid wird gerührt und dann gekühlt, während 4,3 Teile Triäthylamin tropfenweise zugesetzt werden. Das Rühren bei Raumtemperatur wird für etwa IV2 Stunden fortgesetzt, dann wird das Gemisch etwa 20 Stunden abgestellt. Etwa 0,5 Teile Imidazol werden zugesetzt, und das Gemisch wird etwa 1 Stunde gerührt, danach mit Athylacetat verdünnt. Die entstandene organische Lösung wird nacheinander mit verdünnter Salzsäure, verdünntem wäßrigem Kaliumcarbonat und verdünntem wäßrigem Natriumsulfat gewaschen. Die gewaschene Lösung wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und dann durch Destillation unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit, wobei als Rückstand das Rohprodukt erhalten wird, welches nach Umkristallisieren aus Äther als reiner (i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-i.-S-methylcysteinmethylester einen Doppelschmelzpunkt von etwa 55 bis 62° und 76 bis 82° und eine optische Drehung in Chloroform von +15,5° hat.

Ein Gemisch aus 7,3 Teilen dieses /i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-L-S-methylcysteinmethylesters, 120 Teilen (Vol.) 75%iger wäßriger Essigsäure und 1,4 Teilen Palladiumschwarz-Katalysator wird mit Wasserstoff bei Atmosphärendruck und Raumtemperatur geschüttelt, bis die Wasserstoffaufnahme aufhört, wonach der Katalysator durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert wird. Das zurückbleibende Rohprodukt wird mit Äther verrieben und dann durch Umkristallisieren aus Methanol/Isopropylalkohol und durch Waschen mit Äther gereinigt, wobei reiner L-Asparagyl-L-S-methylcysteinmethylester mit einem Schmp. von etwa 146,5 bis 149° unter Zersetzung und einer optischen Drehung unter Wasser von —26" erhalten wird.

Beispiel 10

Wird eine äquivalente Menge an L-S-Äthylcysteinmethylester-Hydrochlorid bei dem Verfahren vom Beispiel 9 eingesetzt, dann wird /i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl -1. - asparagyl -L-S- äthylcysteinmethylester erhalten.

Der Einsatz einer äquivalenten Menge an /<-Benzyl-N - benzyloxycarbonyl - l - asparagyl- l - S - ä thy leys teinmethylester bei dem Verfahren vom Beispiel 9 b) führt 7U L-Asparagyl-L-S-äthylcysteinmethylester,

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Beispiel It Beispiel 14

Zu 40 Teilen kaltem Methanol werden tropfenweise 4,9 Teile Thionylchlorid gegeben, und 6 Teile L-Mcthioninsulfon werden der Lösung zugesetzt. Dieses s Reaktionsgemisch wird bei Rückflußtemperatur 2V₂ Stunden gerührt, danach abgekühlt und etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur abgestellt. Entfärben der Lösung mit Aktivkohle und Verdünnen mit Äther bewirkt Ausfällung des Produkts, welches durch FiI-trieren gewonnen und mit Äther gewaschen wird, wobei L-Methioninsulfonmethylester-Hydrochlorid mit einem Schmp. von etwa 164 bis 167° unter Zersetzung und einer optischen Drehung in Wasser von +25^C erhalten wird.

Beispiel 12

Ein Gemisch aus 4,65 Teilen L-Methioninsulfonmethylester-Hydrochlorid, 10,05 Teilen N-Benzyloxycarbonyl - l - asparaginsäure - α - ρ -nitrophcnyl,/» - Benzyldiester und 23,8 Teilen Dimethylformamid wird gerührt, während 2,15 Teile Triethylamin tropfenweise zugesetzt werden. Das Rühren bei Raumtemperatur wird für weitere l^l/₂ Stunden fortgesetzt, worauf das Gemisch etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur abgestellt wird. Nach dieser Zeit wird Äthylacetat zugesetzt und die entstandene organische Lösung nacheinander mit verdünnter Salzsäure, verdünntem, wäßrigem Kaliumcarbonat und verdünntem, wäßrigem Natriumacetat gewaschen. Die wäßrigen Waschlaugen werden mit Äthylacetat extrahiert und die vereinigten organischen Lösungen über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und danach stehengelassen, damit das Lösungsmittel verdampfen kann. Das zurückbleibende Rohprodukt wird durch Umkristallisieren aus Isopropylalkohol gereinigt, wobei reiner ,?-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-L-methionin· methylsulfonester mit einem Schmp. von etwa 84 bis 112° und einer optischen Drehung in Chloroform von + 30° erhalten wird.

Zu einer Lösung aus 5,35 Teilen dieses /ϊ-Benzyl-N - benzyloxycarbonyl - l - asparagyl -L- methioninsulfonmethylesters in 150 Volumteilen 75%iger wäßriger Essigsäure werden 0,5 Teile Palladiumschwarz-Katalysator gegeben, und das Gemisch wird mit Wasserstoff bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck geschüttelt, bis die Wasserstoffaufnahme aufhört. Entfernen des Katalysators durch Filtrieren und des Lösungsmittels durch Destillation unter vermindertem Druck liefert das Rohprodukt, welches mit Äther verrieben wird und danach durch Umkristallisieren aus Methanol/Isopropylalkohol gereinigt wird, wobei L-Asparagyl-L-methioninsulfonmethykster mit einem Schmp. von etwa 155,5 bis 156° unter Zersetzung und einer optischen Drehung unter Wasser von -2" erhalten wird.

Beispiel 13

Zu 40 Teilen Methanol werden tropfenweise 5,74 Teile Thionylchlorid und danach 4,24 Teile L-S-Methylcysteinsulfon gegeben. Dieses Reaktionsgemisch wird etwa 2 Stunden auf Rückflußtemperatur erhitzt, danach abgekühlt und mit Aktivkohle entfärbt. Verdünnen dieser Lösung mit Äther liefert L-S- Methykysteinsulfonmethylester - Hydrochlorid mit einem Schmp. von etwa 168 bis 170° unter Zersetzung und einer optischen Drehung in Wasser von +6°.

Zu einer Lösung aus 4,35 Teilen L-S-Methylcysteinsulfonmethylester - Hydrochlorid und 10,05 Teilen N - Benzyloxycarbonyl -L- asparaginsäure - α - ρ - nitrophenyl-0-benzyldiester in 23,8 Teilen Dimethylformamid werden unter Rühren und Kühlen 2,15 Teile Triethylamin gegeben. Das Rühren bei Raumtemperatur wird etwa 2 Stunden fortgesetzt, worauf das Gemisch etwa 16 Stunden abgestellt wird. Verdünnen mit Äthylacetat und aufeinanderfolgendes Waschen mit verdünnter Salzsäure, verdünntem wäßrigem Kaliumcarbonat und verdünntem wäßrigem Natriumsulfat führt zu einer organischen Lösung, welche mit Äthylacetatextrakten der wäßrigen Waschlaugen vereinigt wird. Die vereinigte Äthylacetatlösung wird über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und durch Destillation unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit. Der erhaltene Rückstand wird aus Isopropylalkohol kristallisiert, danach mit Cyclohexan und Pentan gewaschen, wobei /f-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-L-S-methylcysteinsulfonmethylester mit einem Schmp. von etwa 96 bis 98° und einer optischen Drehung in Chloroform von +14° erhalten wird.

Zu einer Lösung aus 7,03 Teilen dieses /i-Benzyl-N - benzyloxycarbonyl - l. - asparagyl - L - S - methylcysteinsulfonmethylesters in 150 Volumteilen 75%iger wäßriger Essigsäure werden 0,7 Teile Palladiumschwarz-Katalysator gegeben, und das Reaktionsgemisch wird mit Wasserstoff bei Atmosphärendruck und Raumtemperatur geschüttelt, bis kein Wasserstoff mehr absorbiert wird. Der Katalysator wird durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert, wobei als Rückstand das Rohprodukt erhalten wird. Verreiben mit Äther liefert einen gummiartigen Feststoff, welcher durch Kristallisieren aus wäßrigem Isopropylalkohol gereinigt wird, wobei L-Asparagyl-L-S-methylcysteinsulfonmethylester mit einem Schmp. von etwa 135 bis 136° unter Zersetzung und einer optischen Drehung in Wasser von —9° erhalten wird.

Beispiel 15

Der Einsatz einer äquivalenten Menge von DL-p-Fluorphenylalanin bei dem Verfahren vom Beispiel 11 führt zu DL-p-Fluorphenylalaninmethylester-Hydrochlorid mit einem Schmp. von etwa 176,5 bis 178,5°.

Beispiel 16

Der Einsatz einer äquivalenten Menge von dl - ρ - Fluorphenylalaninmethylester - Hydrochlorid und N-Benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäure-a-p-nitrophenyl,0-Benzyldiester bei dem Verfahren vom Beispiel 12a) ergibt /i-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-L-asparagyl-DL-p-Fluorphenylalaninmethylester.

Bei Verwendung einer äquivalenten Menge dieses β - Benzyl - N - benzyloxycarbonyl - L - asparagyl-Di -p-fluorphenylalaninmethylesters in dem Verfahren vom Beispiel 12 b) erhält man L-Asparagyl-DL-p-fluorphenylalaninmethylester.

Beispiel 17

Der Einsatz einer äquivalenten Menge an DL-p-Chlorphenylalanin bei dem Verfahren vom Beispiel 11 führt zu Di.-p-Chlorphenylalaninmethylester-Hydrochlorid.

Beispiel 18

Verwendung einer äquivalenten Menge an dl - ρ - Chlorphenylalaninmethylester - Hydrochlorid in dem Verfahren vom Beispiel 12 a) führt zu ff-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-i.-asparagyl-DL-p-chlorphenylalaninmethylester.

Der Einsatz einer äquivalenten Menge dieses /<-Benzyl N - benzyloxycarbonyl - l - asparagyl - dl - ρ - chlorphenylalaninmethy !esters bei dem Verfahren vom ι ο Beispiel 12b) fuhrt zu L-Asparagyl-m.-p-chlorphenylalaninmethylester.

Beispiel 19

Bei Verwendung einer entsprechenden Menge an DL-2-Aminoheptansäure erhält man nach dem Verfahren vom Beispiel 11 DL-2-Amino-hcplan-säuremethylester-Hydrochlorid.

Beispiel 20

20

Der Einsatz einer entsprechenden Menge von 2 - Aminoheptansiiuremethy !ester - Ilydrochlorid bei dem Verfahren vom Beispiel 12 a) führt zu p'-Benzyl-N - benzyloxycarbony 1 - l - asparagyl - 2 - aminoheptansäuremethylester.

Die Verwendung einer entsprechenden Menge dieses β - Benzyl - N - benzyloxycarbonyl - l - asparagyl-2-aminoheptansäuremethylesters ergibt nach dem Verfahren vom Beispiel 12b) L-Aspragyl-DL-2-aminoheptansäuremethylester.

Beispiel 21

Eine Suspension aus 1,3 Teilen [.-Asparaginsäure in wasserfreiem Dioxan wird bei Raumtemperatur über Phosgen etwa 30 Minuten gerührt, bis sich alles gelöst hat. Dann wird das Lösungsmittel durch Verdampfen unter vermindertem Druck entfernt und die erhaltene kristalline Substanzdurch Umkristallisieren ausÄthylacetat/Petroläther gereinigt, wobei N-Carboxyanhydrid von l-Asparaginsäure, L-2,5-Oxazolidindion-4-essigsäure) erhalten wird. 1,6 Teile dieser L-2,5-Oxazolidindion-4-essigsäure werden in Methylcnchlorid gelöst und auf — 60° abgekühlt. Dieser Lösung werden 2 Teile L-Tyrosinmethylester, 10 Teile Äthylacetat und 1 Teil Triäthylamin zugesetzt. Die entstandene Lösung wird etwa 24 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wird das Lösungsmittel durch Destillation unter vermindertem Druck entfernt und der erhaltene Rückstand aus wäßrigem Äthanol umkristallisiert, welchem 0,6 Teile Essigsäure zugesetzt worden sind, wobei ein Produkt erhalten wird, das mit dem vom Beispiel 2 identisch ist.

Beispiel 22

Ein Gemisch aus 3,4 Teilen N-Benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäure-/i-benzylester, 1,95 Teilen L-Tyrosinmethylester, 2 Teilen Dicyclohexylcarbodiimid und 10 Teilen Dimethylformamid wird unter Kühlung etwa 2 Stunden gerührt und danach etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Gemisch wird filtriert und das Filtrat durch Destillation unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit, worauf der Rückstand aus Äther/Äthylacetat umkristallisiert wird, wobei /f-Benzyl-N-benzyloxycarbonyl-i.-asparagyl-L-tyrosinmethylester, identisch mit dem Produkt vom Beispie) 1, erhalten wird.

Bei Verwendung einer äquivalenten Menge dieses β - Benzyl - N - benzyloxycarbonyl - L - asparagyl - l- tyr osinmethylestcrs wird nach dem Verfahren vom Beispiel 2 L-Asparagyl-L-tyrosinmethylester, identisch mit dem Produkt vom Beispiel 2, erhalten.

Claims

Patentansprüche: 1. Verbindung der Formel

O O

Il Il

H₂N-CH-CNH-CH-COR' CH₂ X