DE1617892C

DE1617892C - Stabilisierte Samenpraparate zur kunst liehen Befruchtung von Tieren

Info

Publication number: DE1617892C
Authority: DE
Inventors: Yoshimasi Ashiya Hayami Toshio Tokio Nishikawa, (Japan)
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Publication date: 1971-09-02

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Erhöhung und Aufrechterhaltung der Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen in Samenpräparaten für die künstliche Befruchtung von Tieren und auf stabilisierte Samenpräparate sowie die hierbei erhaltenen stabilisierten Samenpräparate für die künstliche Befruchtung von Tieren.

In den letzten Jahren hat die künstliche Befruchtung in der Viehzucht, z. B. bei Rindern, Ziegen und Schafen, in weitem Umfange Eingang gefunden. Das Ziel hierbei ist natürlich nicht nur die wirksame Erzeugung von Vieh, sondern auch die volle Ausnutzung von ausgewählten Samen von bewährten männlichen Zuchttieren für die genetische Verbesserung der Zucht. Zur wirksamen künstlichen Befruchtung wird der vom männlichen Tier gewonnene Samen zuerst außerhalb des Körpers gelagert und dann zur Befruchtung des ausgewählten weiblichen Tieres verwendet. Die Zuverlässigkeit der künstlichen Befruchtung hängt somit vollständig von der einwandfreien Aufbewahrung des Samens für längere Zeit außerhalb des Körpers ab.

Im allgemeinen wird das Tiersperma für die künstliche Befruchtung aufbewahrt, nachdem es mit einem geeigneten Samenverdünner verdünnt worden ist. Die Art des Verdünnungsmittels und die Temperatur bei der Aufbewahrung haben einen engen Zusammenhang mit der Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen im verdünnten Sperma und demzufolge mit dessen Befruchtungsvermögen.

Für die Aufbewahrung des verdünnten Samens muß der Stoffwechsel der Spermatozoen in geeigneter Weise unterdrückt werden. Im allgemeinen wird zu diesem Zweck die Lagertemperatur gesenkt. In dieser Hinsicht können die bisher angewendeten Methoden der Lagerung von Samen für die künstliche Befruchtung in zwei Gruppen eingeteilt werden, nämlich die sogenannte Flüssigsamenmethode und die sogenannte Tiefkühlmethode. Die Flüssigsamenmethode besteht darin, daß man das von männlichen Tieren gewonnene Sperma auf ungefähr das 5- bis 20fache ursprüngliche Volumen mit einem Samenverdünner verdünnt und anschließend den verdünnten Samen bei niedriger Temperatur von etwa 4°C bis zum Gebrauch aufbewahrt.

Die Tiefkühlmethode besteht darin, daß man den von männlichen Tieren abgenommenen Samen auf ungefähr das 3- bis lOfache seines ursprünglichen Volumens mit einem Samenverdünner verdünnt (primäre Verdünnung), den erhaltenen verdünnten Samen allmählich innerhalb etwa I Stunde auf etwa 4°C kühlt, den verdünnten Samen auf etwa das doppelte Volumen mit dem Samenverdünner verdünnt, dem Glycerin als Gefrierschutzmittel zugesetzt worden ist (sekundäre Verdünnung), den verdünnten Samen etwa 6 bis 18 Stunden bei etwa 4° C hält, um das Glycerin in die Spermienzellen eindringen zu lassen (Glyceringleichgewicht), anschließend gefriert und bei Tiefsttemperaturen von etwa —80 oder etwa —196°C lagert und den gefrorenen Samen vor dem Gebrauch bei einer Temperatur von etwa 4 oder von etwa 37° C auftaut.

Die Flüssigsamenmethode hat jedoch den Nachteil, daß die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen im verdünnten Samen während der Lagerzeit geringer wird, da der Stoffwechsel der Spermatozoen nicht ausreichend verhindert werden kann. Die Konzeptionsrate bei der künstlichen Befruchtung unter Verwendung des verdünnten Samens, der für eine verhältnismäßig lange Zeit von mehr als 5 Tagen gelagert worden ist, ist daher gering. Die Tiefkühlmethode hat ebenfalls den Nachteil, daß die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen nach dem Auftauen des gefrorenen Samens mit der Zeit geringer wird, obwohl die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen im gefrorenen Samen während der gesamten Lagerung im tiefgekühlten Zustand ziemlich stabil bleiben.

Die Entwicklung einer Methode, die es ermöglicht, die Spermatozoen im verdünnten Samen und im aufgetauten Samen aus dem gefrorenen Samen über eine lange Zeit lebensfähig zu halten, ist daher in der Viehzucht äußerst erwünscht.

Ein solches Verfahren zur Erhöhung und Aufrechterhaltung der Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen in Samenpräparaten für die künstliche Befruchtung von Vieh ist Gegenstand der Erfindung. Die Erfindung betrifft ferner stabilisierte Samehpräparate, die sich zur Lagerung für lange Zeit eignen.

Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung wurde gefunden, daß die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen von Vieh, insbesondere von Wiederkäuern, wie Rindern, Schafen und Ziegen, im Samenpräparat, z. B. im verdünnten Samen und im aufgetauten Samen, erhöht und aufrechterhalten werden , kann, so daß das Befruchtungsvermögen der Spermatozoen erhöht und lange Zeit aufrechterhalten werden kann, wenn dem Samenpräparat eine geringe Menge bestimmter Thiaminderivate vom Thioltyp zugesetzt wird. Als Thiaminderivate vom Thioltyp eignen sich zu diesem Zweck asymmetrische organische Thiamindisulfidderivate, S-Acyithiaminderivate und Bisthiamin-disulfidderivate.

Beispiele der asymmetrischen organischen Thiamindisulfidderivate sind die folgenden Verbindungen:

HjC _M NH₂ CH S —S—R

\ N / ^l ι ι

N C-C₂H₄OH

CH₂ C

CH₃

3	CH₂	R .	CH(CH₂UCOOCHj SCOCH₃	4	Literatur	•
		CH₂ CH₂ I I ·
			Patent
Thiamintetrahydrofurfuryldi- sulfid	-CH₂CH = CH	deutsches	Patent	1 110 648
Thiaminallyldisülfid	-C₂H₄ (	deutsches	Patent	1 042 590
Thiamin-2-hydroxyäthyldisulfid	-CH₂	deutsches	Patent	1 042 590
Thiamin-(7-methoxycarbonyl- 3-acetylthioheptyl)-disulfid	-C₃H₇	britisches	Patent	925 586
Thiaminpropyldisulfid	OH :h₂	deutsches	1 042 596

Beispiele von S-Acylthiaminderivaten sind die folgenden Verbindungen:

O H₃C NH₂ CH S-R₁

N C-C₂H₄O-R,

CH, C

" I

CH₃

	R₁	__C0__</^\	ι Literatur
O,S-Dibenzoyl-thiamin	-co-^>	— CO — CHj	deutsches Patent 929 551
O.S-Diacetyl-thiamin	— CO —CH₃	' O ι	deutsches Patent 929 551
		— Ρ—OH OH
S-Benzoyl-thiamin- o-monophosphat	— CO —CHj	-COOC₂H₅	französisches Patent 1300 719
O,S-Dicarbäthoxy-thiamin	-COOC₂H₅ ρ	C=O	französisches Patent BSM 2457 M
O,S-Cyclocarbo-thiamin	\ /'	französisches Patent BSM 5119 M

Beispiele von Bisthiamin-disulfidderivaten sind die folgenden Verbindungen:

H₃C

O.

B '

NH₂ CH S-

. / \ s CH, C

C-C₂H₄O-R

CHj

.·	5	Literatur
	R	Ber. 73, II, 941 Franz. BSM 1480M
Thiamindisülfid O-Benzoyl- thiamindisulfid	H — C0^~^%

15

30

Die vorstehend genannten Thiaminderivate vom Thioltyp können als freie Verbindungen oder als entsprechende Salze mit einer geeigneten ,Säure, ζ. Β. Salzsäure und Salpetersäure, verwendet werden. Beim Verfahren gemäß der Erfindung gibt man eine Verbindung oder ein Gemisch von mehreren dieser Thiaminderivate vom Thioltyp zum Samenpräparat für die künstliche Befruchtung. Vom Standpunkt der Erhöhung und Aufrechterhaltung der Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen im Samenpräparat wird das Thiamin vom Thiollyp im allgemeinen in einer Menge von etwa 0,001 bis etwa 0,1 Gewichtsprozent, vorzugsweise von etwa 0,006 bis .0,01 Gewichtsprozent, bezogen auf das Gesamtvolumen des Samenpräparats, verwendet.

Als Samenpräparatc, denen die Thiaminderivate des Thioltyps zugesetzt werden, kommen beliebige übliche Samenpräparate für die künstliche Befruchtung von Vieh in Frage. Mit anderen Worten, durch das Verfahren gemäß der Erfindung kann die Lebensfähigkeit und Motilitäl der Spermatozoen im verdünnten Samen bei der vorstehend genannten Flüssigsamenmethode oder im aufgetauten Samen, der durch Auftauen des gefrorenen Samens bei der obengenannten Tiefkühlmethode erhallen worden ist, erhöht und hoch gehalten werden. Diese Wirkung der Erhöhung und Aufrechlcrhallung der Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen kann erreicht werden, indem man das Thiaminderivat vom Thioltyp beliebigen üblichen Samenpräparaten vordem Gebrauch zusetzt. I m Falle des verdünnten Samens bei der Flüssigsamenmethode kann das Thiaminderivat vom Thioltyp dem Samenverdünncr, mit dem der Samen verdünnt wird. dem verdünnten Samen unmittelbar nach der Verdünnung oder dem verdünnten Samen während der. Lagerung bei etwa 4 C zugesetzt werden. Im Falle des aufgetauten Samens bei der Tiefkühlmethode kann das Thiaminderivat vom Thioltyp dem Samen in jeder beliebigen Stufe, d. h. bei der sekundären Verdünnung, bei der Stufe des Glyceringleichgewichts und während der Lagerung bei etwa 4⁰C zugesetzt werden. Am zweckmäßigsten kann das Ziel der Erfindung erreicht werden, indem man den Samen mit einem Samenvcrdünncr verdünnt, der das Thiaminderival vom Thioltyp enthält und durch Zusatz des Derivats zu beliebigen bekannten Verdünnungsmitteln erhalten worden ist. In diesem Fall beträgt die Konzentration des Thiamindcrivats vom Thioltyp im Samen-Verdünner vorzugsweise etwa 0,001 bis 0,1 Gewichtsprozent, insbesondere etwa 0,006 bis 0,01 Gewichtsprozent, bezogen auf das Volumen des Verdünnungsmittels.

Im Rahmen der Erfindung können beliebige bekannte Verdünner verwendet werden. Im allgemeinen können die Verdünner als Basalkomponcntc Eigelb, Higclbprodukte, wie Lecithin, MiIcIi oder Milchprodukte, z. B. Magermilch oder Kasein, und zusätzlich anorganische und organische Puffersalze, Energie- <>5 quellen, z. B. Fructose und Aminosäuren, enthalten.* die sämtlich in der Veterinärmedizin und in der Viehzucht bekannt sind. Sie werden üblicherweise in Abhängigkeit von Faktoren, wie Art des Viehes, gewählt. Beispiele eines solchen Samenverdünners sind ein Eigelbverdünner, z. B. Eigelbcitratpufferlösung, Eigclbphosphatpufferlösung, ein Milchverdünner, der durch Erhitzen von Vollmilch oder Magermilch hergestellt worden ist.

Die Spermatozoen in einem so hergestellten Samenpräparat, daß das Thiaminderivat vom Thioltyp enthält, haben eine sehr hohe Lebensfähigkeit und Motilität, so daß das Befruchtungsvermögen der Spermatozoen im Samenpräparat für viele Tage der Lagerung aufrechterhalten wird.

Zur Zeit bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung und erfindungsgemäßc Präparate werden in den folgenden Beispielen beschrieben. Die Prozentsätze darin beziehen sich auf Gewicht/Volumen, falls nicht anders angegeben.

In den Beispielen sind die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen wie folgt angegeben:

+ + + : Spermatozoen mit sehr lebhafter

Vorwärtsbewegung.

+ + : Spermatozoen mit lebhafter Vorwärtsbewegung.

+ : Spermatozoen mit Vorwärtsbewegung.

± : Spermatozoen mit Drehbewegung oder pendelartiger Bewegung. ■

+ + H l· + : Spermatozoen mit einer Bewegung, die in der Mitte zwischen + + + und + + liegt. + H h: Spermatozoen mit einer Bewegung, die in der Mitte zwischen + + und + liegt.

+ - ± : Spermatozoen mit einer Bewegung, die in der Mitte zwischen + und ± liegt.

Die vor diesen Zeichen angegebenen Prozentsätze bedeuten den Anteil von Spermatozoen mit dieser Bewegung, bezogen auf alle Spermatozoen im Samenpräparat. Beispielsweise bedeutet <-1_ , , daß der

Anteil von Spermatozoen mit sehr lebhafter Vorwärtsbewegung 85% und der Anteil der Spermatozoen mit lebhafter Vorwärtsbewegung 5% beträgt, bezogen auf alle Spermatozoen im Samenpräparal. .·

Die Indizes der Lebensfähigkeit der Spermalozoen im Samenpräparat werden durch Zahlen ausgedrückt, die aus der folgenden Gleichung berechnet werden:

, , _r., · , .. . , 100a+ 75 b+ 50c +25d

Lcbensfahigkeilsindex = ——777).

100

Hierin bedeuten

a: Prozentsatz von + + +,bezogen auf alle Spermatozoen im Samenpräparat,
b: Prozentsatz von ++.
c: Prozentsatz von +.
d: Prozentsatz von ±.

B e i s ρ i e I I

Von zwei Stieren abgenommenes Rinderspernia wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidoller-Citratpufferlösung, die 2,4% Natritmicitral und 20% frisches Eidotter enthält, und mit den erlindungsgemäßen Sanienverdünnern. die durch Zusatz von 0,0156250, 0,0078125 bzw. 0.0020000% Thiamin-

propyldisulfid zur Eidotter-Citratpufferlösung hergestellt worden waren, auf das lOfache verdünnt. Die verdünnten Spermaproben werden auf 4⁰C gekühlt und 7 Tage bei gleichmäßiger Temperatur gehalten.

Die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen in einem Tropfen jeder verdünnten Spermaprobe wird unter dem Mikroskop bei etwa 4° C untersucht. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 1 aufgeführt.

sofort nach Verdünnung

4

Tabelle 1

t (Tage)
2

80 + + +

■75 + + +

80 + + +

75 + + +

(Fortsetzung)

t (Tage)
. 6

. 65 + + + + +

50 + + + - + +

40 + + - +

20 + - ±

3

*

Konzentration von
Thiaminpropyldisulfid
im Samenverdünner

Lagerzei
1

Slier A ·■

5 +

■ 5 +

Lagerzei
5

Stier A

5 +

■ et

85 + + +

65 + + +

80 + + +

75 + + +

80 + + +

75 + + +

60 + + + -.+ +

50 + + + - + +

60 + + +

50 + + + - + +

70 + + +

40 + +

0,0156250

5 +

5 +

10+ .

5 +

5 +

80 + + +

65 + + +

70 + + +

65 + + +

70 + + +

70 + + +

40 + + - +

30 +

20 +

65 + + +

0,0078125

5 +

5 +

5 +

5 +

10 ±,

10 i

5 +

20 1:

75 + + +

50 + + + - + +

70 + + +

'40 + + + - + +

40 + +

30+ + ~ +

30 + ~ ± .

■ 55 + + +

20. ± '

0,0020000

5 +

5+ '

10 +

•5 +

10

5 +

10 +

10 i

5 +

70 + + +

50 + + +

Stier B

55 + + +

0 (Kontrolle)

5 +

85 + + +

50 + + + - + +

75 + + +

0,0156250

5 +

85 + + +

•65 + + +

70 + + +

0,0078125

5 + + +

5 +

70 + + +

40 + +

55 + + +

0,0020000

5 +

70 + + +

40 + + + - + +

' 50 + + +

0 (Kontrolle)

5-

5 +

5 + ·

7

Konzentration von
Thiaminpropyldisulfid
im Samenverdünner

30 + + - +

0,0156250

5 +

. 40 + +

0,0078125

10 +

30 +

0,0020000

5i

30 + + - +

0 (Kontrolle)

5 +

0,0156250

0,0078125 ■

0,0020000

0 (Kontrolle) ·

im *:'beweglich, aber nicht pc/ülill.

109 636'216

ίο

' Beispiel 2

Von einem Stier abgenommenes Sperma wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumeitrat und 20% frisches Eidotter enthält, auf das lOfache verdünnt. Das verdünnte Sperma wird bei 4° C gelagert. Nach einer Lagerzeit von 2 Tagen werden Thiamintetrahydrofurfuryldisulfid, Thiamintetrahydrofurfuryldisulfid-

hydrochlorid, Thiaminpropyldisulfid und Thiaminpropyldisulfklhydrochlorid dem verdünnten Samen bis zu einer Endkonzentration von 1,0,5 bzw. 0,125% zugesetzt. Das verdünnte Sperma wird weitere 5 Tage bei 4° C gelagert. Während der gesamten Lagerdauer wird die Lebensfähigkeit und die. Motilität der Spermatozoen im verdünnten Samen unter dem Mikroskop untersucht. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 2 zusammengestellt.

Tabelle 2

Thiaminderivat vom Thioltyp •	Konzentration %	sofort nach Verdünnung	Lagerdau 1	er in Tagen vor Zusatz	2 ^: . sofort nach Zusatz
TTFD*)	1,0000	85 + + +	80 + + +	■ 70+ + + 5 +	85 + + +
	0,5000	85 + + +	«0 + + +	70 + + + ⁵ +	85 + + +
	0,0625	85 + + +	80 + + + .	70 + + + 5 +	75 + + + 5 +
TTFD*)-hydrochlorid	1,0000	85 + + +	80 + + +	70 + + + ■ 5 + + +	85 + + +
	0,50000	85 + + +	80 + + +	70 + + + • 5 + + +	80 + + +
	¹0,0625	85 + + +	80 + + +	70 + + + 5 + + +	75 + + + 5 +
TPD**)	1,0000	85 + + +	80 + + +	70 + + + 5 + + +	90 + + +
	0,5000	85 + + +	80 + + +	70 + + + 5 + + +'	85 + + +
	0,0625				80 + + +
TPD**Hiydrochlorid	1,0000	85 + + +	80 + + +	70 + + + 5 + + +	85 + + +
	■; 0,5000	85 + + +	80 + + +	70 + + + ^ 5 + + +	80 + + + 5 +
	0,0625	85 + + +	80 + + +	70 + + + . 5 + + +	75 + + + 5 +
Kontrolle A	0	85 + + +	80 + + +	■70 + + + 5 + + +	70 + + + 5+·
Kontrolle B	0	85 + + +	80 + + +	70 + + + 5 + + +	70 + + + 5+ ■

Fortsetzung

Thiaminderivat vom Thioltyp

TTFD*)

Lagerdauer in Tagen

20+.~ .fc

KO + + +

70 + + + 5 +

55+ + +
5 +

40 + +~+
5 +

35+

5Ί-

.TlFI) ·: Thiumintulrahydrofurfuryldisuind.

ITI)'*♦: ThiaminpropyldiMillUI.

I 617892

Fortsetzung

	3	4	0	5	6	7
TTFD*)-hydrochIorid	et +	0
	30 + ~ ±	60 + +· + 10 +
	75 + + + 5 +		40 + + ~ + 10 +	40 + + + 5 +	35 + + - + 5 +
TPD**)	0	0
	io± ■	75 + + + 5 +
	90 + +		70 + + + 10 +	60 + + + ~ + + ■ 5 +	50++ + ~ + 5 +
TPD**)-hydrochlorid	0	0
	10 + ~±	75 + + + 5 +
	90 + + +	60+ ++ ~ + + 5 +	70 + + + 5 +	65 + + + 5 +	60 + + + 5 +
Kontrolle A	70 + + + 5 +	55+ + + ~ + + 10 +	45 + + ~ + 5 +	40+ + 5 +	40+ ■ ■ 5±
Kontrolle B	70 + + + 5 +	45 + + - + 5 +	40 + 5 +	20 + ~ ±

TTFD*: Thiamintetrahydrofurfuryldisulfid. TPD**: Thiaminpropyldisulfid.

Beispiel 3

Von einem Stier abgenommenes Sperma wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumeitrat und 20% frisches Eidotter enthält, auf das lOfache verdünnt. Der verdünnte Samen wird bei 4' C gelagert. Nach einer Lagerzeit von 4 Tagen werden Thiamintetrahydrofurfuryldisulfid, Thiamintetrahydrofurfuryldisulfidhy-

drochlörid, Thiaminpropyldisulfid und Thiaminpro- 4° gestellt.

pyldisulfidhydrochlorid dem verdünnten Samen in den in Tabelle 3 angegebenen Konzentrationen zugesetzt. Der verdünnte Samen wird weitere 3 Tage bei 4° C gelagert. Während der gesamten Lagerzeit wird die Lebensfähigkeit und Motilität der Spennatozoen im verdünnten Samen mikroskopisch untersucht. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 3 zusammen-

	• Konzentralion der Testverbindung im verdünnten Samen %	Tabelle 3	Lagerdaue I	in Tagen 2	3
Thiaminderivat vom Thioltyp	0,062500	sofort nach Verdünnung	85 + + +	75 + + +	65 + + +
TTFD*)	0,031250	85 + + + '	85 + + +	75 + + + ,	65 + + +
	. 0,015625	85 + + + .	85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0,125000	85 + + +	85 + + +	75 + + + .	65 + + +
TTFD*)-hydrochlorid	0,062500	■ 85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0,031250	85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0,015625	85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0,0625(X)	. 85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
TPD**).	0,031250	85 + + +	. 85 + + +.	75 + + +	65 + + +
	0,015625	85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0,0625(X)	85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
TPD**)-hydrochlorid	0,031250 ,	85 + + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0,015625	85 + + +	. 85 + + +	75 + + +	65 + + +
	0	85 I- + +	85 + + +	75 + + +	65 + + +
Kontrolle A	0	85 + + +	85 + + +	75 + + \-	65 + + +
Kontrolle B	85 + + +

*) Thiamiiitetrahydrofiiiliiryldisulful

*·) Thiiiminpropyldisullid.

(Fortsetzung)

Thiaminderivat vom Thiollyp	4 vor Zusatz	sofort nach Zusatz	. Lagerdauer i 5	η Tagen 6	■ 7
TTFD*)	60 + + + 5 +	65 + + + 5 +	75 + + + 5 +	75 + + +	60 + + + ~ + + '5 +
	60 + + + 5 +	60 + + + 10 +	70 + + + 5 +	65 + + + - + + 5 +	65 + + + ~ + + 5 +
TTFD*)-hydrochlorid	60 + + + 5 +	60 + + + 10 +	60 + + + ~ + + 10 +	55 + + +~ + + 5 +	55 + + 5 +
	60 + + + 5 +	70 + + + 5 +	80 + + + 5 +	40 + 5±	0
	60 + + + 5 +	65 + + + 5 +	75 + + + 5 +	75 + + +	70 + + + ~ + + 5 +
	60 + + + 5 +	65 + + + 5 +	65 + + + 5 +	60 + + + 5 +	60 + + + ~ + + 5 +
TPD**)	60 + + + 5 +	60 + + + 5 +	60 + + + 10 +	60 + + + 5 +	60 + + + ~ + + '5 +
	60 + + + 5 +	65 + + + 5 +	80 + + + 5 +	75 + + +	65 + + + - + + 5 +
	60 + + + 5 +	65 + + + 5 +	70 + + + 5 +	70 + + + 5 +	70 + + + - + + 5 +
TPD**)-hydrochlorid	60 + + + 5 +	60+ + + 5 +	65 + + + - + + 5 +	60 + + + ~ + + 5 +	50 + + 5 +
	60 + + + 5 +	65 + + + ■5 +	80 + + + 5 +	80 + + +	75 + + +
	60 + + + 5 +	60 + + + 10 +	70 + + + 5 +	65 + + + . .10 +	60 + + + - + + 5 +
Kontrolle A	60 + + + 5 +	■ 60 + + + 5 +	60 + + + - + + 5 +	•55 + + + - + + 5+"	50 + + 10 +
Kontrolle B	60 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 10 +	50 + + 5 +	50 + + - + 5 +
60 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 10 +	50 + + 5 +	50 + + ~ + 5 +

♦) ThiamintctrahydrofurfuryldisuHid.
*♦) Thiaminpropyldisulfid.

Beispiel 4

Das Sperma eines Ziegenbocks wird bei der Körpertemperatur mit einer physiologischen Salzlösung auf das Fünffache verdünnt. Das Gemisch wird zur Abtrennung des Spermaplasmas zentrifugiert. Die obenstehende Flüssigkeil wird dekantiert und die abgesetz-' ten Spermatozoon erneut in einer Eidoltcr-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumcilral und 20% frisches Eidotter enthält, im gleichen Volumen wie das ursprüngliche Sperma .suspendiert.

Das erhaltene Sperma wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotter-Citratpufferlösung der vorstehend genannten Zusammensetzung auf das lOfache

verdünnt. Das Präparat wird bei 4 C gelagert. Nach 2 Tagen werden Thiamintetrahydrofurfuryldisulfid, Thiamintetraliydrofurfuryldisulfidhydrochlorid, ThiaminpropyldisuKid und Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid dem verdünnten Sperma in den Mengen zugesetzt,die nachstehend in Tabelle 4 angegeben sind.
Das verdünnte Sperma wird weitere 5 Tage bei 4'⁵C gehalten. Während der gesamten Lagerzeit werden ' Lebensfähigkeit und Motilität der Sperinatozoen im verdünnten Samen mikroskopisch untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 zusammen}

Tabelle 4

Thiamindcrival vom Thioltyp	Konzentration der Testverbindungen im verdünnten Samen %	1	Lagerzeil in Tagen ■ . ι vor Zugabe der Testverbindung	■ sofort nach Zugabe der Testverbindung
TTFD*)	1,0000	55 + + + 5 +	50 + + + 5 +	75 + + + ■ 5 +
	0,5000	55 + + + 5 +	50 + + + . 5 +	75 + + + 5+ - .
	0,0625	55 + + + · 5 +	50 + + + 5 +	60 + + + 5 +
TPD**)	1,0000	55 + + + 5 +	50 + + + 5 +	75 + + + 5+ ■
	0,5000	55 + + + 5 +	50 + + + 5 +	; 75 + + + 5 +
	0,0625	■ 55 + + + . 5 +	50 + + + 5 +	60 + + + 5 +
TPD**)-hydrochlorid	1,0000	55 + + + 5 +	50 + + + 5 +	75 + + + 5 +
Kontrolle A	0,5000	55 + + +· 5 +	50 + + + 5 +	75 + + + . 5 +
Kontrolle B	0,0625	55 + + + 5 +	50 + + + 5 +	60 + + + 5+ .
0	55 + + + 5 +	50 + + + 5 +	50 + + + 5 +
0	55 + + + 5 + ·	50 + + + 5 +	50 + + + 5 +

(Fortsetzung)

Thiamindcrival vom Thiollyp	■ 0	4	0	Lagerteil in Tagen 5	6 · :	0	7	0
TTFD*)	0	0	0	0	0
	65 + + + 5 +	60 + + + ~ + + 5 +	0 .	45 + + 5 +	25 + + 10 +
	o	0	55 + + +~ + + 5+ '	0	0
TPD**)	0	0	0	0	0
	75 + + +· 5+ '	70 + + + 5 +	0	60 + + + ~ + + 5 +	55 + + + - + + 5+ .
	0	0	65 + + + 5 +	0	0
TPD**)-hydro-	0	0	0	0	0
chlorid	75 + H- + 5 +	70 + + + 5 +	0	60 + + + - + + 5 +	■ 50 + + + - H- + 5 +
	45 f + + ~ + + 5 +	40 H- + + 5+ ■	■ 65 + + + 5 +	30 + + 5 +	20 + H- - H- 5 +
Kontrolle A	45 + H I- - -t + 5 H-	40 + +·· ' 5 +	35 + + 5 +	30 + H- 5 I- ■	20 -]■-] - + 5 I
Kontrolle B	35 + + 5 +

TTH)*) rhiaminli-iialiydrorurliii.vldisullUI.
TI¹I)**) Thiaminprop.vidiMillid ^:

Beispiel 5

Das Sperma von drei Stieren wird bei der Körpertemperatur mit einem Milchverdünner auf das lOfache verdünnt. Das Verdünnungsmittel war hergestellt worden, indem Frischmilch zur Deaktivierung von Stoffen, die die Lebensfähigkeit der Spermatozoen beeinträchtigen, 10 Minuten bei 92°C gehalten wurde und anschließend das Milchfett durch '/₂stündiges

Zentrifugieren bei 3000 UpM entfernt wurde. Diesem verdünnten Samen wird Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid in Konzentrationen von 0,00313 und 0,00156% zugesetzt. Die verdünnten Samenpräparate werden 7 Tage bei 4°C gehalten. Die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen im verdünnten Präparat werden mikroskopisch untersucht. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 5 zusammengestellt.

Tabelle 5

Stier	Konzentration von Thiumin- propyldisullid- hydrochlorid im verdünnten Samen %	0	Lagerzeit 1	in Tagen 2	3
A	0 (Kontrolle)	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 10 +	40 + + + ~ + + 5 +	40 + + + ~ + + 5 +
	0,00313	65 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 5 +	40 + + + ~ + + 5 +
B -	0,00156	65 + + + 5 +	55 + + + 10 +	50 + + + ~ + + 5 +	45 + + + ~ + + ⁵ +
	0 (Kontrolle)	65 + + + 5 +	60 + + + 5 +	40 + + + ~ + + . 10 +	40 + + + ~ + + 16 +
C.	0,00313	70 + + + 5 +	65 + + + 5 +	55 + + + 10 +	50 + + + 10 +
0,00156	70 + + + 5 +	*60 + + + 10 +	• 55 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 10 +
0 (Kontrolle)	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 5 +	40 + + 5 +
0,00313	70 + + + 5 +	65 + + + . 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 5 +
0,00156	70 + + + 5 +	65 + + + 5 +	60 + + + 5 +	45 + + + ~ + + 5 +

(Fortsetzung)

„■*. Stier	Konzentralion von Thiamin- propyldisulfid- hydrochlorid im verdünnten Samen · %	4	35 + + 5 +	Lagerzeit in Tagei ' 5	1 6	7	0
	0 (Kontrolle)	40 + + 5 +	20 + H fc 5 +	15 H 1	0
A	0,00313	35+ + 5 +	10 + 10 ±	5:t	·()
	0,(X)156	30+ + 5 +	15 + ~ :fc	5 fc	20 + - Jr
	0 (Kontrolle)	40 + + + ~ + + 5 +	25 + + 10 +	20 fcfc^fc 10 +	Ct*):fc ,., ,
B	0,00313	30 + + . 5 fc	25 + + 10 +	15+ t- - i .10 +	et*).fc
	0,(K)156	20 + + ~ + 10 +	25 + + 5+ ■	20 + - 5 +	■ 0
	0 (Konirolle)	30 + + IO fc	10 + .10 fc	et) \ ■*	et*) 1:
C	0,00313	30 + + • 10 fc	l5 + + ~ + 10 +	10 + ~ :fc	ctM fc
	0,(K) 156	20 t: - + 5 1	15 fc.- t.

et *■ beweglich aber nithl «c/lihll.

Beispiel 6

Der Samen von drei Stieren wird bei der Körpertemperatur mit einem Milchverdünner auf das lOfache verdünnt, der auf die im Beispiel 5 beschriebene Weise hergestellt worden war. Das verdünnte Sperma wird bei 4° C gelagert. Nach 2 Tagen wird Thiaminpropyl-

disulfidhydrochlorid der verdünnten Lösung in Konzentrationen von 0,01250, 0,00625, 0,00313 und 0,00156% zugesetzt. Die verdünnten Samenproben werden weitere 5 Tage bei 4° C gehalten. Die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen in den verdünnten Samenproben sind nachstehend in der Tabelle 6 angegeben.

Tabelle 6.

Stier	Konzentration von Thiaminpropyldisulfid- hydrochlorid im verdünnten Samen %	0	Lagerzeit in 1 I	agen vor der Zugabe	sofort nach der Zugabe
	0 (Kontrolle)	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	55 + + + 5 +	55 + + + 5 +
A	0,00313	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	55 + + + 5 +	55.+ + + 5 +
	0,00156	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	55+'+ + 5 +	55 + + + 5 +
B '	0 (Kontrolle)	60 + + + 5 +	55 + + + 5 +	50 + + + 10 +	50 + + + 10 +
C	0,00313 ■	60 + + + 5 +	55 + + + 5 +	50 + + + 10 +	55 + + + 5 +
0,00156	60 + + + · 5 +	55 + + + 5 +	50 + + + 10 +	50 + + + 10 +
0 (Kontrolle)	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	45 + + + ~ + + 10 +	45 + + + ~ + + 10 +
0,00313	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	45 + + + ~ + + 10 +	45 + + + ~ + + 10 +
0,00156	70 + + + . 5 +	60 + + + 5 +	45 + + + ~ + + 10 +	45 + + + ~ + + 10 +

	Konzentration von Thiaminpropyldisulfid- hydrochlorid im verdünnten Samen	3	-+ +	(Fortsetzung)	erzeit	in Tagen 5	6	⁺	7-
Slier	0 (Kontrolle)	55 + + + 5 +		Lag 4	40 10	+++-++	30 + + 10 +		2()._{+ +} -J ₊ ■5±
A	0,00313	70 + + + 5 r-		50 + + + - + + 5 +	45 K)	+++-++	20 + + - 10 +	⁺	20 + + ~ + 5-t
B	0,00156	70 h r· + 5 I- ■		60 + + + 5 +	40 IO	+++-++	20 + + 10 +		IO + K) t
	0 (Kontrolle)	45 + + + - 5 +		50 + + + 10 +	20 K)	+ h - +	20 + + - • 5 h	⁺	20 + I- - + 5 I:
C	.0,00313	55 + + + 5 +		30 + + 5 +	35 10		20 r +- 10 +	⁺	20+ + ^f- 5 :L·
	0,00156	55 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 10 +	40 5	f + ■	30 I- f - .5 +		20 + I - + 10 +
	0 (Kontrolle*)	40 + + + - 10 1-	40 + +.+— H + 10 +	30 K)	I I "Γ Γ	25 f + - K) h	⁺	15 + + - -f- 10 t
0,00313	60 + f- f K) +	40 + + + - + + 5 +	IO Vi Vl	+ r - ■(·	15 I + - 10 +		10 + 10 t .
0,00156	60 + + K ■5 +	55 f + + 5 +	20 K)		20 l· + - 10 t	K) Γ 10 l
		40 + + + - + + 10 I-

Beispiel·?

Das Sperma von zwei Stieren wird bei der Körpertemperatur mit einem Milchverdünner auf das lOfache verdünnt, der auf die im Beispiel 5 beschriebene Weise hergestellt worden war. Das verdünnte Sperma wird bei 4⁰C gelagert. Nach 4 Tagen wird Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid der verdünnten Lösung in Konzentrationen, von 0,00313 und 0,00156% zugesetzt. Die verdünnten Spermaproben werden weitere 3 Tage bei 4" C gehalten. Die Lebensfähigkeit und Motilität der Spcrmatozoen in den verdünnten Spermaproben sind nachstehend in Tabelle 7 angegeben.

	Konzentration von Thiaminpropyldisulfid- hydrochlorid im verdünnten Samen %	0	Tabelle 7	in Tagen 2	3
Stier	0 (Kontrolle)	70 + + + 5 +	Lagerzeil 1	45 + + + - + + 10 +	40 + + + - + + 10 +
	0,00313	70 + + + -5 +	60 + + + 5 +	45 + + + - + + io +	40 + + + - + + 10 +
A	0,00156	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	45 + + + - + + 10 +	40 + + + - + + 10 +
	0 (Kontrolle)	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 10 +	50 + + + 5 +
	0,00313	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 10 +	50 + + + 5 +
B	0,00156	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 10 +	50 + + + 5 +
		60 + + + 5+'

(Fortsetzung)

Stier	KonzcDiration von. Thiaminpropyldisulfid- hydrochlorid im verdünnten Samen %	4 vor dem Zusatz	sofort nach dem Zusatz	Lagerzeit in Tagen 5	6	7	10 + 10±
	0 (Kontrolle)	40 + + + - + + 5 +	40 + + + - + + 5 +	40 + + + - + + 5 +	20 + + - + 10±	10 + + - + 10±
A	0,00313	40 + + + - + + 5 +	40 + + + - + + 5 +	40 + + + - + + 10 +	25 + + 10 +	20 + + - + 5± .
	0,00156	40 + + + - + + 5 +	40 + + + - + + 5 +	40 + + + ~ + + 5+ ■ ·	30 + + 5 +	30 + + ' 5 +
	0 (Kontrolle)	50 + + + 5 +	50 + + + 5 +	45 + + + - + + 5 +	40 + + + - + + 5 +	30 + + 5 +
B	0,00313	50 + + + 5 +	50 + + + 5 +	50 + + + 10 +	40+'+ + - + + 5 +	30 + + 5 +
	0,00156	50 + + + 5 +	50 + + + ■ 5 +	50 + + + 10 +	40 + + + - + + ■ 5 +

Beispiel 8

Das Sperma von zwei Stiercn'wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotler-Citratpufferlösung, die 2,4% Nalriumciträl und 20% frisches Eigelb enthält, auf das Stäche.verdünnt.'Das verdünnte Sperma wird allmählich innerhalb einer Stunde auf 4 C gekühlt und dann mit einer Eidottcr-Citralpuffcrlösung, die 2,4% Natriumeitrat, 20% frisches Eidotter und 14,0% . Glycerin enthält, bei 4 C weiter auf das 2fache ver- ft.s dünnt. Zum erhaltenen verdünnten Sperma werden , ThiaminpropyldisuHid und Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid in den in Tabelle 8,genannten Konzentrationen gegeben. Das verdünnte Sperma wird dann 10 Stunden bei 4 C gehalten. Jc 1 ml jeder verdünnten Spermaprobe wird in Ampullen von 2 ml Fassungsvermögen abgefüllt, worauf die Ampullen verschlossen werden. Die Proben werden eingefroren und in einem mit flüssigen Stickstoff gekühlten Kühlschrank 3 Tage bei — 196°C gehalten, worauf die Proben bei 4:C aufgetaut und 24. Stunden bei dieser Temperatur gehalten werden. Die Änderung des Lebcnsfähigkeilsindexes der aufgetauten Samenproben ist nachstehend in Tabelle 8 angegeben.

	Slier	Thiamindcrivat	B e i s ρ i e	Konzen- .	1 617 892	Zusatz der	24	nach dem	Auftauen	24 Stunden
		Vi)IiI Thioltyp		trillion der		Test				nach dem
23				Testverbin		verbindung	Lebensfähigkeitsindex	4 Stunden	12 Stunden .	Auftauen
				dung im aufgetauten	Tabelle 8	80,0		nach dem	nach dem	33,3
		Thiaminpropyl-			75,0		Auflauen	Auftauen '	48,3
		disulfid	0,04545		. 75,0	sofort.	57,5	52,9	48,3
			0,02270	vor Tiefkühlung	75,0	nach dem	62,5	52,9 '	52,9
		0,01136		75,0	Auftauen	67,5	62,5	48,3
A		0,00568	vor Zusatz	75,0	62,5	67,5	62,5	48,3
		0,08284	der Test	80,0	62,5	57,5	52,9	■ 35,8
	Thiaminpropytdi-	0,00142	verbindung	75,0	67,5	57,5	48,3	44,2
	sulfidhydrochlorid	0,04545	75,0	75,0	67,5	52,9	.52,9	48,3
		0,02270	75,0	75,0	57,5	52,9	52,9	43,8
		0,01136	75,0	75,0	57,5	62,5	62,5	48,3
		0,00568	75,0	75,0	62,5	62,5 '	57,5	48,3
		0,00284 ·	75,0		62,5	57,5	52,9	. 33,3
	. Kontrolle	0,00142	75,0	80,0	62,5	57,5	52,9	48,3
	Thiaminpropyt-	0	75,0	80,0	62,5	52,9	40,0	52,9
	disulfid	0.04545	75,0	80,0	62,5	62,5	52,9	62,5
		0,02270	75,0	80,0	57,5	67,5	62,5	62,5
		0,001136	75,0	80,0	57,5	67,5	67,5	52,9
R		0.00568	75,0	80,0	62,5	67,5	67,5	52,9
		O.(K)284	75,0	80,0	62,5	52,9	62,5	48,3
	Thiaminpropyldi-	0,00142	75,0	80,0	62,5	52,9'	52,9	48,3
	sulfidhydrochlorid	0.04545	80,0	80,0	57,5	67,5	48,3	. 57.5
		0,02270	80,0	80,0	57,5	87,5	62.5	57,5
		0,01136	80,0	80,0	57,5	67,5	67,5	52,5
		0,00568	80,0	80,0	62,5	62,5	62,5	50,4
		0,00284	80,0	—	. 62,5	52,9	57,9	30.4
	Kontrolle	0,00142	80,0		62,5	52,9	52,9	itriumritfat
	0	80,0		57,5	52,9	52.9
	f 9	80,0		57,5		dotter-Citratpufferfösung, die 2,4% N;
80,0		57,5
80,0	57,5'
80,0
80,0
mst

per Samen von zwei Ziegenböcken wird bei der Körpertemperatur mit einer physiologischen Salzlösung auf das 5fache verdünnt. Das erhaltene Gemisch wird zentrifugiert, um das Pfasma des Spermas abzutrennen. Die obenstehende Flüssigkeit wird dekantiert, und die abgesetzten Spermatozocn werden erneut in einer Eidotlcr-Citrafpufferlösung suspendiert, die 2.4% Natriumeitrat und 20% frisches Erdoffer enthält, wobei das Volumen¹ des ursprünglichen Spermas eingestellt wird. Das erhaltene Sperma wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotter-CitrafptrfferKisung der gleichen Zusammensetzurtg. wie vorstehend beschrieben, auf das 5faehe verdünnt. EXf verdünnte Saniert wird innerhalb' einer Stunde alimSihfrch auf 4 C geküliff untf dann mit einer Ki-

20% frisches Eidotter und 1'4% Glycerin enthält, auf das 2fache Vofumen weiter verdünnt. Zum¹ verdünnten Sperma werden Thiaminpropyldisülfid und Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid in den Konzentrationen gegeben, die nachstehend in Tabelle 9 angegeben sind. Das verdünnte Sperma wird dann tO Stunden bei 4° C gehalten. L· ί mf der verdünnten Spermaproben werden in Ampullen, von^; 2 ml Fasstmgsvcrmögert abgefülFt, worauf die Ampullen verschlossen werden. Die Proben irt den Ampullen¹ werden eingefroren und in einem mit Trockeneis gekühfterf Kühlschrank 3 Tage bei -79X gehiffien, worauf sie auf 4° C »ufgetaur. und 24 Stunden' bei gleicher Temperatur gcfiittfcn¹ Werden¹. Die Änderung des Lebcnsfiihigkeitsindexes det* atifgctawfen Spermaproben ist . in der folgenden Tabelfe '> zttsamrnengesteHf.

109 636/2Ϊ6

. Tabelle 9 ,

	Thiumindcriviit	Kontrolle	Konzcn-	..vor der Tiefkühlung	Zusatz '	Lebensfähigkcitsindex	nach dem	Auftauen	24 Stunden
	vom Thioltyp	tration der						nach dem
		Testverbin	vor Zusatz	verbindung		4 Stunden	12 Stunden	Auftauen
Bück		dung im	der Test	85,0	sofort	nach dem	nach dem	30,0 ·
	Thiaminpropyl-	aufgetauten	verbindung	80,0	nach dem	Auftauen	Auftauen	48,3
	disulfid	Samen	80,0	80,0	Auftauen	57,5	62,5	57,5
		0,02270	80,0	80,0	57,5	57,5	67,5	48,3
		0,01136	80,0	80,0	52,5 ·	52,4	62,5	30,0
		0,00568	80,0	85,0	39,2	47,5	48,3	20,4
	Thiaminpropyldi-	0,00284	80,0	80,0	39,2	39,2	33,3	48,3
A	sulfidhydrochlorid	0,00142	80,0	80,0	. 34,6	- 57,5	57,5	57,5
		0,02270	80,0	80,0	57,5	57,5	57,5	28,8
		0,001136	80,0	80,0	43,7	52,5	57,5	36,3
		0,00568	80,0	80,0	43,7	43,7	31,7	17,5
	Kontrolle	0,00284	80,0	80,0	43,7	43,7	31,7	30,0
	Thiaminpropyl-	0,00142	80,0	80,0	43,7	31,7	31,7	57,5
	disulfid	0	80,0	80,0	31,7	62,5	62,5	44,2
		0,02270	80,0	80,0 ■	62,5	57,5	62,5	44,2
		0,01136	80,0	80,0	57,5	52,9	52,9	30,0
		0,00568	80,0	80,0	52,9	52,9	52,9	44,2
	Thiaminpropyldi-	0,00284	80,0 ·	80,0	52,9	52,9	48,3	57,5
	sulfidhydrochlorid	0,00142	80,0	80,0	52,9 .	62,5 .	62,5.	57,5
B		0,02270	80,0	80,0	57,5	62,5	62,5	44,2
	•	0,01136	80,0	80,0	57,5	62,5	62,5	30,0
		0,00568	80,0	80,0	57,5	. 52,9	52,9	26,7
	0,00284	80,0	57,5	52,9	48,3
	0,00142	80,0	57,5	52,9	40,0
	0		52,9

Beispiel IO

Das Sperma von zwei Stieren wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumeitrat und 20% frisches Eidotter enthält, auf das 5fache verdünnt. Das verdünnte Sperma wird allmählich innerhalb einer Stunde auf 4"C gekühlt. Das verdünnte Sperma wird bei 4°C mit einer Eidotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumcitrat, 20% frisches Eidotter und 14% Glycerin enthält, weiter auf das 2fache Volumen verdünnt. Die verdünnten Spermaproben werden 10 Stunden bei

4°C gehalten und in Ampullen abgefüllt, die verschlossen werden. Die Ampullen werden eingefroren und in einem mit flüssigem Stickstoff gekühlten. Kühlschrank 3 Tage bei -I96"C gehalten, worauf die Proben auf 4° C aufgetaut werden. Zu den aufgetauten Spermaproben wird Thiaminpropyldisulfid und Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid in den in Tabelle 10 genannten Konzentrationen gegeben. Die aufgetauten Spermaproben werden weitere 24 Stunden bei 4°C gehalten. Die Änderung des Lebensfähigkeitsindexes der aufgetauten Proben ist nachstehend in Tabelle 10 aufgeführt.

Tabelle 10

	Thiaminderivat	Konzen	vor der	sofort	Lebensfähigkeitsindex	sofort	4 Stunden	12 Stunden	24 Stunden
	vom Thioltyp	tration der Test verbin	Tiefkühlung	nach dem		nach der	nach der	nach der	nach der
		dung im		Auftauen	nach dem Auflauen	Zugabe	Zugabe	Zugabe	Zugabe
		aufgetauten	. 80,0	52,9 ■	62,5	62,5	52,9	40,4
	Thiaminpropyl·-	Sperma	,80,0	52,9	.62,5	62,5	52,9	• 52,9
A	disulfid	0,04545	80,0	52,9	62,5	67,5	52,9 ,	52,9
		0,02270	80,0	52,9	• 62,5	62,5	62,5;	57,5
		0,01136	80,0	52,9	' 57,5	57,5	52,9 .	48,3 .:-.
		0,00568	80,0	. 52,9	. 57,5	'■ 57,5	40,0	40,0 ^U
		0,00284
	0,00142

Fortsetzung '

	Thiumindcrivut		Thiaminpropyldi-	Konzen	vor der	sofort	Lebensfühigkeitsindex	sofort	4 Stunden	12 Stunden	24 Stunden
	vom Thioltyp		sulfidhydrochlorid	tration der . Testverbin	Tiefkühlung	nach dem		. nach der	nach der	nach der	nach der
Stier		dung im		Auftauen	nach dem Auftauen	Zugabe	Zugabe	Zugabe	Zugabe
		aufgetauten	80,0	52,9	62,5	67,5	57,5	40,4
		Sperma	80,0	52,9	62,5	67,5	57,5	. 48,3
A		0,04545	80,0	52,9	62,5	72,5	62,5	48,3
	"Kontrolle	0,02270	80,0	52,9	57,5	62,5	62,5	57,5
	Thiaminpropyl	0,01136	80,0	52,9	57,5	57,5	57,5	52,9
	disulfid	0,00568	80,0	52,9	57,5	57,5	48,3	43,7
		0,00284	80,0	52,9	52,9	52,9	35,8	35,8
		0,00142	80,0	62,5	67,5	72,5	52,9	48,3
		0	80,0	62,5	67,5	72,5	52,9	52,9
		0,04545	80,0	62,5	67,5	72,5	62,5	62,5
	Thiaminpropyldi-	0,02270	80,0	62,5	57,5	67,5	72,5	62,5
	sulfidhydrochlorid	0,01136	80,0	62,5	57,5	62,5	.62,5	62,5
		0,00568	80,0	62,5	57,5	62,5	57,5	48,3
		0,00284	80,0	62,5	72,5	72,5	62,5	48,3
		0,00142	80,0	62,5	72,5	72,5	67,5	60,0
P		0,04545	80,0	62,5	72,5	72,5	67,5	62,5
	Kontrolle	0,02270	80,0	62,5	67,5	67,5	67,5	62,5
	0,01136	80,0	62,5	67,5	67,5	62,5	57,5
	0,00568	80,0	62,5	62,5	62,5	57,5	48,3
	0,00284	80,0	62,5	62,5	62,5	44,2	40,2
	0,00142
	0

Beispiel 11

Das Sperma von zwei Ziegenböcken wird bei der Körpertemperatur mit einer physiologischen Salzlösung auf das 5fache Volumen verdünnt. Das Gemisch wird zur Entfernung des Spermaplasmas zentrifugiert. Die obenstehende Flüssigkeit wird dekantiert, und die abgesetzten Spermatozoen werden in einer Eidotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriuincitrat und 20% frisches Eidotter enthalt, erneut suspendiert,' wobei das ursprüngliche Volumen des Spermas eingestellt wird. Das erhaltene Sperma wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidotter-Citratpufferlösung der vorstehend genannten Zusammensetzung auf das 5fache Volumen verdünnt und allmählich innerhalb einer Stunde auf 4° C gekühlt. Der verdünnte Samen wird mit einer Eidotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumeitrat, 20% frisches Eidotter und 14% Glycerin enthält, auf.das 2fache Volumen weiter verdünnt. Die verdünnten Spermaproben werden 11 Stunden bei 4^fJC gehalten, worauf je I ml der Proben in Ampullen abgefüllt wird, die verschlossen werden. Die Proben werden eingefroren und in einem mit flüssigem Stickstoff gekühlten Kühlschrank 3 Tage bei —196" C gehalten. Die Proben werden dann auf 4°C aufgetaut. Zu den aufgetauten Proben wird Thiaminpropyldisulfid bzw. Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid in den Konzentrationen gegeben, die in der Tabelle 11 genannt sind. Die aufgetauten Proben werden dann 24 Stunden bei 4°C gehalten. Die Veränderung des Lebensfähigkeitsindexes der einzelnen aufgetauten Proben ist nachstehend in Tabelle 11 angegeben.

	Konzentration	Tabelle 11	Vor der	sofort	80,0	27,5	Lebcnsfahigkcitsindex*)	sofort	4 Stunden	12 Stunden	24 Stunden
	der Test		Tiefkühl urin	nach dem	80,0	27,5		nach der	nach der	nach der	nach der
	verbindung	*I IvI f^ Uli I ·■·^p**	Auftauen .	80,0	27,5 ,	Zugabe	Zugabe	Zugabe	Zugabe
Thiaminderivat vom Thioltyp	im aufgetauten		Bock A	80,0	. 27,5
	Sperma		80,0	27,5	57,5	57,5	57,5	. 22,5
				47,5	52,5	57,5	48,3
	0,02270		39,5	39,5	48,3	48,3
Thiaminpropyldisulfid	0,01136		• 36,7	,36,7	43,7	26,3
	0,00568	36,7	36,7	43,7	26,3.
	0,00284
	, 0,00142

*) Nach dem Auftauen.

29

Fortsetzung

Thiamindcri\at vom Thiollxp

Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid

Kontrolle

Thiaminpropyldisulfid

Konzentration

der TeM-

\crhi lulling

im aufgetauten

Sperma

Vor der Tiefkühlung

l.chcnsRihigkcitsindcx *)

sofort nach dcriv Auftauen

sofort nach der Zugabe

4 Stunden nach der Zugabe

12 Stunden nach der Zugabe

2A Stunden nach der Zugabe

Bock A

Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid

Kontrolle

*) Nach dem Auftauen.

Beispiel

Das Sperma von zwei Stieren wird mit einer EidoUer-Citratpufferlösung. die 2,4% Natriumcitral und 20% Eidotter enthält, auf das t(Hache Volumen verdünnt. Das verdünnte Sperma wird mit den in Tabelle

0,02270	80,0	27,5	80,0	27,5 '	52.5	57,5	57,5	28,3
0,01136	80,0	27,5	80,0	27,5	52,5	52,5	57;5	43.7
0,00568	80,0	27,5	80,0	. 27,5	39,5	57,5	62,5	57,5
0,00284	80.0	27.5	80.0	27,5	39,5	33,3	52,5	25,8
0,(K) 142	80,0	27,5	80.0	27,5	31,7	33,3	43,7	25,8
0	80,0	27.5	80.0	27,5	27,5	27,5	27,5	8,3
	Bock B	80.0	27,5
0,02270	80,0	27,5	57,5	' 62,5	52,5	44,2
0.01136	80.0	27.5	57,5	62.5	57.7	52.9
0,00568	80.0	27,5	57,5	57,5	57,7	52.9
0,00284	80.0	27,5	52,9	57,5	52,9	52.9
0.00142	52,9	52.9	44,2	40,0
0,02270	62,5	62,5	62,5	48.3
0.01136	62,5	62,5	62,5	62.5
0.00568	57,5	62.5	62,5	• 57.5
0.00284	57,5	52,9	48,3	35.8
0,(X)142	52,9	52,9	52,9	35,8
0	48,3	52,9	40,0	26.7

12 genannten Thiaminderivaten vom Thiollyp in einer Konzentration von 0.0125p. 0,0625 bzw. 0.0313% gemischt. Die verdünnten Proben werden 4 Tage bei 4"C gehalten. Die Lebensfähigkeit und Motilität der Spermatozoen im verdünnten Sperma sind nachstehend in Tabelle 12 angegeben.

Tabelle f2

Stier	Thiaminderivat vom Thioltyp	Konzen tration %	sofort nach dem Zusatz	I	Lager/ci	80 + + + 5 +	in Tauen .t 70 + 4- 4- 10 +	' 4
	Thiaminpropyl- disulfidhydro- chlorid	0,01250	85 + + +	80 + + + 5+ '	80 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 10 +
	S-Benzoylthi- amin-O-mono- phosphat	0,00625	80 + + + 5 +	80+ + + 5+ ·.	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	W) + + + 5 +
	O.S-Diaeetyl- thiaminhyd ro ch lorid	0,003 f 3	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	70 + + + 5+ ·	65 + + + 5 +	55 + 4- + 5 + .
	0,01250	80+ + + ' 5 +	75.+ + + 5 +	70 + + + ■ 54-	60 + + + 5 +	60 + + + 5 +
A	0.00625	80 + + + 5 +	75 + + + 10 +	'65 + + + 5 +	55 + + + 5 +	55+.+.+ 5 +
	0.00313	80 + + + 5+ ·'	75 + + + 10 +	65 + + + 5 +	55 + + + 5 +	50·+ + + - + +
	0.01250	80 + + + 5 +	70' + + + 5 +	65 + + + 5+ ·■	55 + + + 5 +	40 + + + - + + 10 +
	0.00625 0.003 kl	80+ + +	75 + + + 5+ ..	60 + + + '5+ ' ■ '	50 + + + 5+'	45 + + + - + + 5 +
	80 + + + 5 +	75. + + + 5· + ■	4(V 4 ■ I- + - + + Ut 4-

Fortsetzung

Slier	Thianiindcrivat vom Tliiollyp	Konzen- lralion %	sofort nach dem Zusal/	1	Lagerzei 2	in Tagen .1	4
	O,S-Cyclo- carbothiamin- hydrochlorid	0,01250	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 5 +
	TATD*)	0,00625	80 + + + 5 +	75 + +.+ 5 +	65 + + + 5 +	50 + + + 10 +	40 + + + ~ + + 10 +
	O-Benzöyl- thiamin- disulfid	0,00313	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	55 + + + 5+-	50 + + + 5 +	40 + + + ~ + + 5 +
	Thiamin-2-hy- droxymethyl- disuliidhydro- chlorid	0,01250	80 + + + 5 +	. 80 + + + 5 +	75 + + + · . 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +
	O,S-Dibenzoyl- thiamin	0,00625	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	■70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + 10 +
	O,S-Dicarbo- äthoxy- thiaminhydro- chlorid	0,00313	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	65 + + + 5 +	55 + + + 5 +	50 + + + ■ 5 +
	Kontrolle	0,01250	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	60 + + + . 10 +	50 + + + ~ + + 10 +
	Thiaminpropyl- . disulfidhydro- chlorid	0,00625	80 + + + . 5+ .	75 + + + 5 +	65 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 10 +
	S-Benzoyl- thiamin- O-mono- phosphal	0,00313	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	55 + + + - + + 10+ ■	50 + + + ~ + + 10 +	50 + + + ~ + + 5 +
A	0,01250	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	65 + + + · 5 +	50 + ++ ~ + + 10 +
	0,00625	80 + + + ■ 5 +	80 + + + 5 +	70 + + + 10 +	65 + + + 5 +	55 + + + ~ + + 5 +
	0,00313	80'+ + + 5+.	75 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + • 5 +
	0,01250	80 + + + 5+ ·	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	60 + + + 10 +	45 + + + ~ + + 10 +
	0,00625	80 + + + ' 5 +	80 + + + 5 +	70 + + + 10 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 5 +
	0,00313	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 5¹+ .
	0,01250	80 + + + 5 +	80 + + + 5 + +	80 + + + 5+ ·	70 + + + 5 +	45 + + + ~ + + 10 +
	0,00625	80 + + + 5 +	80 + + + 5+ '	70 + + + 10 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 5 +
	0,00313	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	60 + + + 5 +	55 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 5 +
	0	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	60 + + + 5 +	50 + + + ~ + + 5 +	35 + + 5 +
	0,01250	80 + + + 5 +	80 + + + 5+ .	80 + + + 5 +	Not observed	20 + + - + 10 +
	0,00625	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	desgl.	65 + + + 5 +
B	0,00313	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	70 + + + 5 +	desgl.	50 + + + - + + 5 +
	0,01250	80 + + + 5+· '	80 + + + 5+ .	75 + + + 5+ ■	desgl.	45 + + + ~ + + •5+ ■
	0.00625	80 I- + + 5 +	80 + + + 5 +	70 + + + 5 +	desgl.	55 + + + 5 +
	O.OO3I3	80 + + + 5 I	70 + + + 5. +	60 + + + 5 +	desgl.	45 + + + - + + 5 +

ΤΛΤΟ*) Tliia

Fortsetzung

34

Stier	Thiaminderival vom Thioltyp	Konzen tration %	sofort nach dem Zusatz	I	Lagerze • "2	l in Tagen 3.	4
	O,S-Diacetyl- thiaminhydro- chlorid .	0,01250	80 + + + 5 +	70 + + + 10 +	60 + + + ~ + + 5 +	Not observed	45 + + + ~ + + 10 +
	O^-Cyclocarbo- thiaminhydro- chlorid	0,00625	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	70+ + + 5 +	desgl.	40 + + + ~ + + 10 +
	TATD*)	0,00313	80 + + + 5 +	70++ + 5 +	60 + + + 10 +	desgl.	40 + + + ~ + + 10 +
	O-Benzoyl- thiamindisulfid	0,01250	80 + +'+ 5 +	75 + + + 5 +	70 + + + 5+ ■	desgl.	40 + + + ~ + + 10 +
	Thiamin-2-hy- droxyäthyl- disulfidhydro- chlorid	0,00625	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	70 + + + 5 +	desgl.	40 + + 10 +
	Kontrolle	0,00313	80 + + + 5 +	70 + + + 10 +	65 + + + 10 +	desgl.	40 + + + ~ + + 10 +
	0,01250	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	desgl.	60 + + + 5 +
	0,00625	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	70 + + + 5 +	desgl.	50 + + + 5 +
B	0,00313	80 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 10 +	desgl.	40 + + + - + + ' 10 +
	0,01250	^O + + + 5 +	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	desgl.	50 + + + 5 +
	0,00625	80 + + + 5+ "	80 + + + 5 +	65 + + + 10 +	desgl.	45 + + + - + + 5 +
	0,00313	80 + + + 5+ .	80 + + + 5 +	65 + + + 10 +	desgl.	40 + + +-+ + 10 +
	0,01250	80 + + + 5 +	80 + + + 5 +	75 + + +- · 5 +	desgl.	30 + + 10 +
	0,00625	80 + + + 5 +	75 + + + 5 +	65 + + + 10 +	desgl. ·	55.+ + + ■ 5+ ■
	0,00313	80 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +	desgl.	50 + + + ~ + + 5+ .
	0	80 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 10 +	desgl:	45 +' + + ~ + + . 5 +

TATD*) Thiiimin-(7-mcthoxyciirbanyl-3-iicciylthiohcptyl)-disulfld.

Beispiel 13 _njil_{t) auf das} iofache Volumen verdünnt: Alle ver-

Das Sperma von zwei Schafböcken wird mit Ei- dünnten Spermaproben werden 4 Tage bei 4"C ge-

dotter-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumeitrat, halten. Die Lebensfähigkeit und tylotilität der Sperma-

20% frisches Eidotter und 0,00625% Thiamintetra- tozoen in den verdünnten Spermaproben sind in der

hydrofurfuryldisulfid und dessen Hydrochlorid ent- 55 folgenden Tabelle 13 angegeben.

Thiaminderivat vom Thioltyp

Kontrolle

I £ ■

S c ^

C 5>Ό η Ξ H|S.S g:§

SS^-H

80 +

Tabelle 13

Lugcr/eil in Tagen

75 + + + 5 +

50 + + + 5 +

30 + + + 10 +

Fortsetzung

Bock	Thiaminderivat vom Thioltyp	Konzentration der Test- i5 verbindung im Sperma verdünner	0	I	Lagerzeit in T; ■ ■)	gen 3	4
A	Thiaminpropyl- disulfidhydro- chlorid	0,00625	80 + + +	80 + + +	75 + + + 5+ .	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +
	Thiamintetra- hydrofurfuryl- "disulfidhydro- chlorid	0,00625	80 + + +	80 + + +	70 + + + 5 +	70 + + + 5 +	60 + + + 5 +
B	Kontrolle	0	85 + + +	80 + + + 5 +	65 + + + ~ + + 5 +	50 + + + - + + 5 +	35 + + + - + + 5 +
	Thiaminpropyl- disulfidhydro- chlorid	0,00625	85 + + +	80 + + + 5 +	80 + + + ' 5 +	75 + + + 10 +	70 + + + 5 +
Thiamintetra- hydrofurfuryl- disulfid	0,00625	85 + + +	80 + + + 5 +	80 + + + 5+ '	75 + + + · 10 +	70 + + + 5 +

Beispiel 14

Das Sperma von zwei Schafböcken wird mit einer Eidottercitratpufferlösung (erster Verdünner), die 2,4% Natriumcitrat und 20% frisches Eidotter enthält, auf das Sfache Volumen verdünnt. Das verdünnte Sperma wird allmählich innerhalb einer Stunde auf 4°C gekühlt. Zum verdünnten Sperma wird eine Eidotter-Citratpufferlösung (zweiter Verdünner) gegegeben, die 2,4% Natriumcitrat, 20% frisches Eidotter, 14% Glycerin und 0,0125% Thiaminpropyldisulfklhydrochlorid oder Thiamintetrahydrofurfuryl-

disullidhydrochlorid enthält. Die verdünnten Spermaproben werden 12 Stunden bei 4 C gehalten, worauf je 1 ml der Proben in ein Kunststoffröhrchen von 1 ml Fassungsvermögen gefüllt wird und die Röhrchen verschlossen werden. Die Proben werden eingefroren und in einem mit Trockeneis gekühlten Kühlschrank 7 Tage bei —79 C gehalten. Die Proben in den Röhrchen werden dann auf 4 C aufgetaut und 12 Tage bei dieser Temperatur gehalten. Die Lebensfähigkeit und Motilität der aufgetauten Sperniaproben sind in der folgenden Tabelle 14 angegeben.

	Thiamiiulerivat vom Thiolijp	Tabelle 14	Vor dem Gefrieren	Sofort nach dem Auftauen	12 Stunden nach dem Auftauen
Bock	Kontrolle	Konzentration der Testverbindung im zweiten Verdünner % ·	80 + + +	35 + + + 10 +	10 + +
	Thiaminpropyldisulfid- hydrochlorid		80 + + +	65 + + + 10 +	45 + + + 10 +
A	Thiamintetrahydro- furfuryldisulfklhydrb- chlorid	0,0125	80 + + +	65 + + + 10 +	45 + + + 10 +
	Kontrolle	0,0125	' ' 85 + + +	40 + + + 5 +	. 20 + + - +
	Thiaminpropyldisulfid- hydrochlorid	Ο'·.·	85 + + +	75 + + + 10 +	45 + + + 5 +
B	Thiamintetrahydro- fui furyldisulfidhydiO- chlorid	0,0125	85 + + +	75 + + + ίο+ :	. 45 + + + 10 +
	0.0125

Beispiel 15

Ein Fcrtilitätstest wird mit einem erfindungsgemäßen Rinderspermapräparat durchgeführt. Das Sperma von vier Stieren wird mit einer Eidoller-Citratpuffcrlösung, die 2,4% Natriumcitral, 20% Eidotter und 0,00625% Thiaminpropyldisulfidhydrochlorid enthält, auf das lOfachc Volumen verdünnt. Das verdünnte Sperma wird 1 bis 5 Tage bei 4 C gehalten und dann zur Befruchtung von Kühen verwendet. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 5 angegeben. Hierbei gill die prozentuale Konzeption für die erste Befruchtung.

Tabelle 15

Verglcichsproben ohne Zusatz von Thiamin- l>ropyldisulfidhydrochlorid)	Konzeption %	I	ro	bcn
Zahl der befruchteten Tiere	59.8	ZaIiI der befruchteten Tiere	Konzeption % .
•1190	56,6	220	64,0
205	55,4	156	69,9
247	57,1	28	60,7
14	16	62,5

IO

hält, weiter verdünnt. Das verdünnte Sperma wird Stunden bei 4"C gehallen. Je 1 ml jeder verdünnten Spermaprobe wird in eine Ampulle von 2 ml Fassungsvermögen gefüllt, worauf die Ampullen verschlossen werden. Die Proben werden eingefroren und in einem mit flüssigem Stickstoff gekühlten Kühlschrank 1 bis Wochen bei — 180'C gehallen. Die Proben in den Ampullen werden auf 4 "C aufgetaut und anschließend zur Befruchtung von Kühen verwendet. Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 16 angegeben. Hierbei gilt die prozentuale Konzeption für die erste Befruchtung.

Tabelle 16

A
B
C
D

B e i s ρ i e I 16

Ein F'ertilitätstest wird mit einem erfindungsgemäßen Rinderspermapräparat durchgeführt. Das Sperma von drei Stieren wird bei der Körpertemperatur mit einer Eidoller-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumcitral und 20% frisches Eigelb enthält, auf das 5fache Volumen verdünnt. Das verdünnte Sperma wird innerhalb einer Stunde allmählich auf 4 C gekühlt und dann bei dieser Temperatur mil einer Eidoller-Citratpufferlösung, die 2,4% Natriumcitrat, 20% frisches Eigelb, 14% Glycerin und 0,0125% Thiaminletrahydrofurfuryldisulfidhydrochlorid enl-Stier

Verglcichsproben

(ohne Thianiintelrahydro-

furfuryldisiiHidhvdrochlorid)

Zahl der

befruchteten

Tiere

181

122

86

Konzeption

49.2
70.5
56,9

Proben

Zahl der

befruchteten

Tiere

35

74

147

Konzeption

68,2 82,4 64,6

Claims

Patentansprüche:

1. Stabilisiertes Samenpräparat zur künstlichen Befruchtung von Tieren, enthaltend den Samen eines Tieres, ein Samenverdünnungsmiltel und etwa 0.001 bis etwa 0.1% (Gew./Vol.) eines Thiaminderivals vom Thioltyp aus der'Gruppe der organischen unsymmet rischenTliiamindisulfid-Dcrivate, der S-Acylthiaminderivate, der Bisthiamindisulfid-Derivate oder deren Gemische.

2. Samenverdünnungsmittcl zur Herstellung der stabilisierten Samenpräparate gemäß Anspruch 1, enthallend einen Basalverdünncr. wie Eigelbverdünner oder Milchverdünner und die Thiamin-Derivalc vom Thioltyp in einer Menge von insbesondere etwa 0,006 bis 0,01% (Gew./Vol.).