DE1617469B2

DE1617469B2 - Verfahren zur gewinnung eines basischen inhaltsstoffes aus cabucala madagascariensis

Info

Publication number: DE1617469B2
Application number: DE1967F0051540
Authority: DE
Inventors: Alfred Dr.rer.nat. 6232 Bad Soden; Lindner Ernst Prof. Dr.med. 6230 Frankfurt Groebel
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1967-02-16
Filing date: 1967-02-16
Publication date: 1976-07-22
Also published as: FR7438M; SE338399B; NL6801863A; AT275026B; BE710860A; GB1211564A; FR1585888A; DE1617469A1; US3565990A; CA961484A

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung eines basischen Inhaltsstoffes aus Cabucala madagascariensis.

Cabucala madagascariensis ist ein zur Familie Apocynaceae gehörender Strauch, der in den sklerophilen Wäldern der Westküste von Madagaskar vorkommt.

Die aus der Pflanze gewonnene kristalline Substanz bewirkt eine lang anhaltende Blutdrucksenkung bei nur geringfügiger Änderung des Venendrucks, des EKG, der Atmung und der Herzfrequenz.

So ruft sie zum Beispiel am Hund in einer Dosierung von 0,5 mg/kg eine mittlere Blutdrucksenkung von 75 mm hervor, die nach 30 Minuten noch nicht wieder auf den Ausgangswert zurückgegangen ist. Bei einer Dosierung von 1 mg/kg beträgt die Senkung 70 mm und hält 45 Minuten an. 2 mg/kg rufen eine mittlere Senkung von 60 mm hervor, die nach 3 Stunden noch nicht wieder ausgeglichen ist. Venendruck, EKG und Atemfrequenz werden nicht, die Herzfrequenz nur unwesentlich beeinflußt.

Die DL50 beträgt 25 mg/kg. Die Substanz eignet sich für intravenöse, intraperitoneale, perorale und intramuskuläre Applikation.

Man erhält die Substanz, indem man getrocknetes Material von Cabucala madagascariensis, vorzugsweise Stengel, gegebenenfalls nach Entfernung von Fetten, Wachsen und Sterinen durch Vorextraktion, mit einem niederen Alkohol, vorzugsweise Methanol oder Äthanol, extrahiert, die Alkohollösung, gegebenenfalls nach Einengen und Entfernung von Fetten, Wachsen und Sterinen durch Extraktion mit Petroläther, zur Trockne eindampft, den trockenen Rückstand des alkoholischen Extrakts mit verdünnten Säuren auszieht, die saure Lösung alkalisch stellt, den ausgefallenen Niederschlag nacheinander mit Äther oder einem aliphatischen Halogenkohlenwasserstoff und einem niederen Alkohol extrahiert, die alkoholische Lösung einer chromatographischen Reinigung an Kieselgel oder neutralem Aluminiumoxyd unterwirft und durch Eindampfen des Eluats zur Trockne den Wirkstoff isoliert.

Die aktive Substanz befindet sich in erster Linie in den Stengeln von Cabucala madagascariensis; der Wirkstoffgehalt der Blätter und Wurzeln ist erheblicl geringer. Es empfiehlt sich, durch eine Vorextraktion beispielsweise mit Petroläther, zunächst die Hauptmen ge der vorhandenen Pflanzenfette, Wachse und Sterine zu beseitigen. Für die eigentliche Extraktion dei Wirkstoffes verwendet man niedere Alkohole, Vorzugs weise Methanol oder Äthanol. Anschließend befren man in an sich bekannter Weise den Extrakt von: Lösungsmittel durch Abdestillation des Lösungsmittels im Vakuum oder unter Normaldruck. Die letzter Lösungsmittelspuren können durch Trocknen im Hoch vakuum oder im Trockenschrank beseitigt werden. Aus dem festen Rückstand wird der Wirkstoff anschließend durch Behandlung mit einer verdünnten Säure extrahiert. Als solche eignen sich beispielsweise Salzsäure. Schwefelsäure oder Essigsäure, insbesondere verwendet man Salzsäure oder Schwefelsäure. Die Säuren sind vorzugsweise· 0,1 -2-normal; höhere Konzentrationen haben zur Folge, daß die Extrakte einen höheren Anteil an Zersetzungsproduktion und damit an Verunreinigungen enthalten.

Die saure Lösung wird alsdann, beispielsweise mit Ätzkali oder Ätznatron, alkalisch gestellt, wobei das pH-Optimum bei 8 bis 9 liegt. Der dabei ausfallende gelbbraune Niederschlag wird gesammelt und zunächst durch Extraktion mit Äther oder einem aliphatischen Halogenkohlenwasserstoff wie Chloroform oder Methylenchlorid, vorzugsweise Chloroform, vom größten Teil der noch vorhandenen Begleitstoffe befreit und anschließend mit einem niederen Alkohol, wie Methanol oder Äthanol, extrahiert. Die Extraktionen können beispielsweise in einem Soxhlet-Extraktor vorgenommen werden. Aus dem alkoholischen Extrakt erhält man beim Eindampfen einen amorphen Rückstand, der der Träger der starken blutdrucksenkenden Wirkung ist. Die weitere Reinigung wird auf adsorptions-chromatographischem Wege durchgeführt. Als Adsorptionsmittel verwendet man Kieselgel oder neutrales Aluminiumoxyd; als Elutionsmittel haben sich die Systeme Chloroform/Aceton oder Benzol/Methanol bewährt.

Beispiel 1

700 g getrocknete und gemahlene Stengel wurden im Soxhlet-Extraktor nacheinander mit je 2 1 Petroläther und Methanol extrahiert. Die Methanollösung wurde filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (34,2 g) wurde mit 200 cm³ 0,5 n-Schwefelsäure bei 35 - 40° kräftig gerührt. Dann wurde durch ein Klärschichtfilter abgesaugt. Das tief rotbraune klare Filtrat wurde unter Rühren durch langsame Zugabe von festem Ätznatron auf pH 8 —8,5 eingestellt. Dabei fiel ein gelbbrauner Niederschlag aus, der abgesaugt, mit wenig Wasser gewaschen und im Vakuum bei 40° 4 Stunden lang getrocknet wurde. Ausbeute: 0,769 g.

Die Fraktion wurde im Soxhlet-Extraktor nacheinander mit Chloroform und Äthanol extrahiert.

Aus dem Alkoholextrakt resultierte beim Eindampfen ein braunes amorphes Pulver mit starker, lang anhaltender blutdrucksenkender Wirkung. Ausbeute:

305 mg.

Zur Isolierung der reinen Wirksubstanz wurde das Pulver in 10 ml Methanol gelöst und durch Zusatz von 1 g Aluminiumoxyd (neutral, Aktivitätsstufe I) und Eindampfen der Aufschlämmung am Rotationsverdämpfer an Aluminiumoxyd adsorbiert. Das Adsorbat wurde auf eine Säule gegeben, welche durch Einschlämmen von 9 g desselben Adsorbens mit absolutem Chloroform bereitet worden war.

Zunächst wurden durch Waschen mit Chloroform unerwünschte Begleitsubstanzen eluiert. Danach wurde die Wirksubstanz mit Chloroform/Aceton 1 :1 von der Säule gelöst. Beim Eindampfen des Eluats fiel das Produkt in kristalliner Form an. Nach Umkristallisation aus absolutem Äthanol erhielt man hellgelbe rechteckige Plättchen.

F.: 268—270⁰C; Ausbeute: 41,4 mg.

Die os'mometrische Bestimmung in Methanol ergab ein Molekulargewicht von 252, die quantitative Analyse ergab folgende Werte:

C: 58,3-58,6%
H: 5,8-6,0%
0:28,9-29,2%
N: 6,5-6,7%

Die Substanz ist weiter durch folgende physikalische Daten charakterisiert:

Dünnschichtchromatographie:
Rf-Wert:

0,76 (Adsorbens: SiC>2, System: Essigester/Butanon/ Ameisensäure/Wasser 5 :3 :1 :1) 0,82 (Adsorbens: S1O2, System: i-Propanol/Wasser/ 2 n-HCL25:5:1)

UV-Spektrum (in Methanol):

AMaxi=244 ηιμ

(1 g ///o = O,98; 1 ge = 5,3927)

Wellenlänge

Frequenz
cm-'

Durchlässigkeit
%

(1 g ///0 =	0,57;lge = 5,1581)	Frequenz	Durchlässigkeit
AMax3 = ;	366 πιμ	cm-'	%
(1 g I/Jo ■■	= 0,045; IgE = 4,0569)	3600	36
IR-Spektrum (in KBr)	3045	27
Wellenlänge	2970	23
μ	1790	10
2,94	1622	6
3,29	1570	36
3,36	1510	33
5,88	1430	22
6,19	1380	43
6,38	1350	26
6,62	1320	27
6,99	1285	9
7,26	1240	26
7,48	1180	16
7,58
7,79
8,09
8,40

1155

1100

915

845

759

38 8

60 64 30

Die Reaktionen mit Dragendorff-Reagenz (Wismutcarbonat + Natriumjodid in Eisessig und Essigester, Zusatz von Weinsäure), Jod und Reinecke-Salz sind positiv.

Beispiel 2

800 g Stengel wurden, wie in Beispiel 1 beschrieben, aufgearbeitet. Die Alkalifällung wurde mit Chloroform und Methanol extrahiert.

Der Alkoholextrakt wurde in analoger Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, aufgearbeitet, wobei jedoch das Chloroform durch Benzol und das Aluminiumoxyd durch Kieselgel ersetzt wurden (die Adsorption erfolgte an 3 g Kieselgel, und die Säule wurde mit 27 g Kieselgel bereitet). Die erhaltene Substanz war identisch mit dem gemäß Beispiel 1 isolierten Produkt.

Ausbeute: 43,7 mg.

Beispiel 3

80 kg Stengel wurden im Großextraktor mit 50 1 Methanol extrahiert. Die Lösung wurde bis auf 101 eingedampft, der Rückstand wurde zur Entfernung von Fetten, Wachsen und Sterinen viermal mit je 31 Petroläther kräftig durchgerührt. Die Methanollösung wurde abgesaugt und im Vakuum eingedampft; sie ergab ein amorphes braunes Pulver (1721 g). Dieses wurde mit 10 10,5 η-Salzsäure unter kräftigem Rühren 3 Stunden bei 40—50° extrahiert. Dann wurde filtriert und das Filtrat zur weiteren Reinigung durch eine Klärschicht abgesaugt. In die tiefrote Lösung wurde allmählich Ätznatron zugegeben, bis ein pH-Wert von 8,5 erreicht war. Dabei fiel ein gelbbrauner Niederschlag aus, der abfiltriert und getrocknet wurde. Ausbeute 45 g. Die Fällung wurde wie in Beispiel 1 beschrieben, mit Chloroform und Methanol extrahiert. Der Methanolextrakt, der die Wirkfraktion enthält, wurde eingedampft. Ausbeute: 2,69 g.

Zur Reinigung wurde die Substanz an 200 g Aluminiumoxyd (neutral, Aktivitätsstufe I), wie im Beispiel 1 beschrieben, chromatographiert. Die Wirkfraktion ließ sich mit Chloroform/Aceton 1 :1 eluieren und kristallisierte aus 96%igem Äthanol in hellgelben Rechtecken. Ausbeute: 1,108 g.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Gewinnung eines basischen Inhaltsstoffes aus Cabucala madagascariensis, dadurch gekennzeichnet, daß man getrocknetes Pflanzenmaterial, gegebenenfalls nach Entfernung von Fetten, Wachsen und Sterinen durch Vorextraktion, mit einem niederen Alkohol extrahiert, die Alkohollösung, gegebenenfalls nach Einengen und Entfernung von Fetten, Wachsen und Sterinen durch Extraktion mit Petroläther, zur Trockne eindampft, den trockenen Rückstand des alkoholischen Extraktes mit verdünnten Säuren auszieht, die saure Lösung alkalisch stellt, den ausgefallenen Niederschlag nacheinander mit Äther oder einem aliphatischen Halogenkohlenwasserstoff und einem niederen Alkohol extrahiert, die alkoholische Lösung einer chromatographischen Reinigung an Kieselgel oder neutralem Aluminiumoxyd unterwirft und durch Eindampfen des Eluats zur Trockne den Wirkstoff isoliert.