DE1569849A1

DE1569849A1 - Verfahren zur Gewinnung des im Johanniskraut vorkommenden,wasserloeslichen Hypericins in Form eines angereicherten Trockenproduktes oder als Reinsubstanz

Info

Publication number: DE1569849A1
Application number: DE19671569849
Authority: DE
Inventors: Dr Rer Nat Otto-Bernd Genius
Original assignee: Steigerwald Arzneimittelwerk GmbH
Current assignee: Steigerwald Arzneimittelwerk GmbH
Priority date: 1967-07-26
Filing date: 1967-07-26
Publication date: 1971-01-21
Also published as: DE1569849B2; DE1569849C3

Description

Verfahren zur Gewinnung des im Johanniskraut vorkommenden, wasserlöslichen Hypericins in Form eines angereicherten Trockenproduktes oder als Reinsubstanz Gegenstand der Erfindung ist die Gewinnung des im Johanniskraut (Hypericum) vorkommenden photodynarnisch wirksamen Inhaltsstoffes Hypericin in seiner natürlichen, wasserlöslichen Form als angereicherte Trockensubstanz oder als Reinsubstanz.
Bekannt sind Verfahren zur Abscheidung eines wasserunlöslichen, nur in pyridinhaltigen Alkoholen, z. B.
Methanol, äthanol, Propanol, Butanol oder in Pyridin allein löslichen Hypericins durch Hydrolyse von Johanniskrautextrakten mit methanolischer Salzsäure. Dieses Hypericin entspricht nicht dem in der Pflanze enthaltenen wasserlöslichen Hypericin, da ihm die zur Wasserlöslichkeit notwendien Gruppen durch die Hydrolyse abgespalten wurden.
Bekannt ist auch ein Verfahren zur Gewinnung von natürliehem, wasserlöslichem Hypericin, bei dem Johanniskraut mit äther; Petroläther und (oder) Chloroform vorextrahiert wird und die Hauptextraktion mit Methanol erfolgt. Das nach diesem Verfahren gewonnene Trockenprodukt hat jedoch nur ein Gehalt an Hypericin von unter 0,5 0 Es wurde nun gefunden, daß Aceton oder Methyläthylketon Extraktionsmittel von außerordentlich hoher Selektivität sind. Mit diesen gelingt es, in einem einzigen Extraktionsvorgang zu einem Trockenprodukt mit einem Gehalt an natürlichen, wasserlöslichen Hypericin von über 5 ß zu gelangen.
Bei der weiteren Reinigung dieses Trockenproduktes zur Reindarstellung des natürlichen, wasserlöslichen Hypericins erweist sich nur die Chromatographie in wässrigen Alkoholmischungen, z. B. io % wässrigen Methanol, über ein vernetztes Dextran (Sephadex LH-20) erfolgreich. Das so gewonnene, durch Eindampfen und vorsichtiges Trocknen im Hochvakuum von Lösungsmitteln befreite, amorph anfallende natürliche Hypericin ist löslich in Wasser, Methanol, Aceton, Pyridin, unlöslich in Äther, chloroform und Kohlenwasserstoffen. Es hat bis 350 cc keinen definierten Schmelzpunkt. Dünnschichtchromatographisch wird nach Hydrolyse des Hypericins nur Glucose als Spaltprodukt im Hydrolysat nachgewiesen. Die CH-Elementaranalyse ergibt, daß pro Molekül Hypericin 2 Moleküle Glucose gebunden sein können.
Das natürliche, wasserlösliche Hypericin stellt also ein Glucosid dar. In methanolischer Lösung zeigt das Hypericin ein Spektrum mit einem Verhältnis der Maxima bei 590 m 546 m , 328 m , 286 m , von 1,0:0,49:0,60:0,80 und eine Extinktion bei 590 m von 70, 0+0, 5 im Mittel bei einer Konzentration von 1 mg/ml, gemessen in einer 1 cm-Küvette (Zeiß-Spektral-Photometer PMQ II). Das IR-Spektrum (KBr-PreBlin) des natürlichen, wasserlöslichen Hypericins ist identisch mit dem IR-Spektrumrdes wasserunlöslichen, hydrolysierten Hypericins mit Ausnahme einer deutlichen, breiten, nicht näher zu charakterisierenden Absorption um 35000 (cm" die auf den OH-Anteil der beiden GlucosemoleküIe zurückzuführen ist.
Beispiel 1 1 kg getrocknetes Pflanzenmaterial (z. B. a) Grus, b) Blüten) von Johanniskraut werden - 3 Tage mit 5 1 Aceton mazeriert. Es wird vom Ungelösten filtriert und das Aceton im Rotationsverdampfer zum größten Teil abdestilliert. Nach Versetzen mit 200-300 ml Wasser wird dann das restli he Aceton entfernt und vom Ausgefallenen scharf abzentrifugiert. Der Uberstand, der eine dunkelrote, vollkommen klare Lösung darstellt, wird im Rotationsverdampfer eingedampft und im Hochvakuum getrocknet, vornehmlich bei Temperaturen nicht über 40 - 50 °C. Die Ausbeute beträgt bei Verwendung von Grus 20 g und von Blüten 50 g Trockenprodukt, jeweils mit einem Gehalt an Hypericin von mindestens 5 %.
Beispiel 2 Zur chromatographischen Reinigung werden von dem oben dargestellten Trockenprodukt 5 g in 25 ml 10 % wässrigen Methanol aufgenommen (entsprechend einem Hypericingehalt von ca. 10 ing/ml) und sooft über eine Säule (2,5 x 20 cm) mit Sephadex LH-20 chromatographiert, bis eine einheitliche Hauptfraktion mit einem konstanten Verhältnis der Absorptionsmaxima, wie oben beschrieben, abgetrennt werden kann. Diese Fraktion wird dann wider im Rotationsverdampfer eingedampft und im Hochvakuum getrocknet, vornehmlich bei Temperaturen nicht über 40-50 °G. Die Ausbeute beträgt:-180- 200mg reines Hypericin (ca.- 70-80 % des eingesetzten Hypericins).

Claims

Patentans rüche 1)) Verfahren zur Gewinnung des natürlich in Johanniskraut orkommenden, wasserlöslichen Hypericinsin Form eines weitgehend angereicherten Trockenproduktes, aus getrocknetem Pf lanzenmaterial des Johanniskraut, vorwi-egend Grus oder Blüten, dadurch gekennzeichnet, daß Extraktionsmittel von hoher Selektivität, z. B. Aceton oder Methyläthylketon, verwendet werden, 2) Verfahren zur Gewinnung des natürlich in Johanniskraut vorkommenden, wasserlöslichen Hypericins als Reinsubstanz, dadurch gekennzeichnet, daß die Abtrennung unter Vermeidung der zersetzenden Hydrolyse durch Chromatographie über ein vernetztes Dextran Sephadex LH-20) in wässrigen Alkoholmischungen erfolgt.