DE1593858A1

DE1593858A1 - Verfahren zur Herstellung tyrosinhaltiger Peptide und deren Derivaten

Info

Publication number: DE1593858A1
Application number: DE19671593858
Authority: DE
Inventors: Jaeger Dipl-Chem Dr Georg; Geiger Dipl-Chem Dr Rolf; Seidel Dipl-Chem Walter
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1967-03-02
Filing date: 1967-03-02
Publication date: 1970-10-29
Also published as: DE1643327A1; US3538070A; GB1201121A; CH496668A; NL6802947A

Description

27. Februar I967 zur Patentanmeldung Fw Dr.Hg/fe

Verfahren zur Herstellung tyroeinhaltiger Peptid· und deren Derivaten

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung tyroeinhaltiger Peptide, da· dadurch gekennzeichnet let, daß man ein Peptid mit wenigstens e4nem Tyrp&in-Bauateln der allgemeinen Formel I

ü - CO - Ott

(D

- Ah"-

- NH - CiI - CO -

worin OR einen von einem primären oder sekunderen Alkohol abgeleiteten Alkoxyrest oder einen Aralkoxyre*st mit mindestens 2 Kohlenstoffatomen zwischen dem Phenylring und dem Sauerstoff bedeutet, entweder mit Ammoniak, Aminen, Hydraeinen oder Mono-acylhydrasinon behandelt, wobei in den Aminen oder HydraEinderiraten mindestens eine NH-Bindung vorhanden ■•in muß,oder das tyrosinhaltige Peptid der alkalischen Verseifung unterwirft.

009844/ 1 772 bad original

- 2 - Fw 5335

Zur Synthese tyrosinhaltiger Peptide bleibt die Hydroxygruppe des Tyrosine oft ungeschützt, oder sie wird in einen Benzylather, tert.-Butyläther oder in die Benzyloxycarbonylverbindung überführt /vgl. E. Schröder und K. Liibke, "The Peptides", New York und London, Band I, (I965) Seite 220-2267. ^Bei ungeschützter OII-Gruppe laufen oft Nebenreaktionen ab, beim Aufbau höherer Peptide unter Verwendung der genannten Schutzgruppen wirkt sich die Empfindlichkeit gegen Säure oder gegen katalytisch erregten Wasserstoff bei den Benzylderivaten oft störend aus.

Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Oll-Schutzgruppen des Tyrosine besitzen diese Nachteile nicht, da sie weder acidolytiach noch hydrogenolytisch abspaltbar sind.

So ist unter Anwendung der neuen 0-S_ohutχgruppe der stufenweise Aufbau tyrosinhaltiger Peptide vom Carboxylende her unter Erhaltung der O-Schutzgruppe möglich, was bei den bisher verwendeten Schutzgruppen oft auf Schwierigkeiten stieß, woil mit der Abspaltung der N-Schutzgruppe oft auch die Abspaltung der O-Schutzgruppe hingenommen werden mußte.

Die zur Herstellung tier erf indungsgeniiiß verwendeten Tyrosin— peptide benötigten substituierten Tyroainderivate erhält man durch Reaktion Von N-Acyl-tyronin mit Chloraineisensaurealkylestern in Anwesenheit eines säurebindenden Mittels»

Als Alkylreste R der Alkoxyjjrupp» OR in der allgemeinen Formel (1) kommen inabesouiiero niedere aliphatische Alkylr*ste S.D. Methyl-, Äthyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, laobutyl» reste oder cycloaliphatische Reste wie Cyclohexylreete Infrage. Ale Aralkylreste der Aralkoxygruppen werden sum Beispiel ß -Phenyl K thy I- «owl« j'-Phenyl-propyl-, ^l-Phenyl-

0098AA/1772 bad original

- 3 - Fw 5335

cyclohexyl- oder Dibenzylmethyl-reste verwendet.

Auch in N-Acyl-tyroein-ester und in tyroainhaltige Peptide können, wenn keine weiteren acylierboren Gruppen vorhanden sind, durch Reaktion mit Chloramoisensnure-alkylestern die neuen Sehutzgruppen eingeführt werden.

Diese Verbindungen können nun nach den allgemeinen Methoden der Peptidchemie zur Herstellung tyrosinhaltiger Peptide verwendet werden. Durch direkte Umsetzung der N~Acyl-0-alky3-oxycarbonyl-tyrosine mit z.H. Aminosäure- oder Peptidestern oder «amiden in Gegenwart eines Kondensationsmittels wie i.D. Dlcyclohexyl-carbodiimid (DCC) entstehen Peptide unter I stten· Verlängerung am Carboxyl end« dec Tyrosine. Durch Ahspai * ■?«'. dmr P-Aeylgruppe, z.B. durch katalytisch^ Hydrierung voi N-Carba "tzoxy- 0~KthyloxycarbonyJ -1 yrosin-eethyl ester , eat-•tfiht r ^-Äthyloxycarbonyl-tyrosin-methyleeter_f der

mit N-Aeyl-asfinosäuren oder -peptlden bu

neuen Peptlden unter Kette^rsz'läii* ir^ am Amino ende des Tyrosine umgesetzt werden kann.

Es können auch andere Kondensationsmethoden der Peptidchemie verwendet werden,z.B. die gemischte Anhydridmethode oder die Peptidsynthese Über aktive Ester. Aktive Ester sind z.B. aus N-Acyl-O-alkyl-oxycerbonyl-tyrosin und der aktivierenden Komponente, meist {t-Nitrophenol, 2 .4 .5-Tr i chi or phenol , Pentachlorphenol oder N-IIydroxy-succinimid, in Anwesenheit von Dlcyclohexylcarbodlimid zugänglich.

Als weitere Bausteiae der die Tyrosinderivate der allgemeinen Formel I enthaltenden Peptide kommen alle in natürlich vorkommenden Peptiden anzutreffenden Aminosäuren in ihrer L- oder D-Form infrage-

uch der Einsatz von fi-Aminoaäure.n wie z.B. ß-Alanin oder anderer nur synthetisch oder halbsynthetisch zugänglicher Aminosäuren, z.B. ot-Methyl-alanin, oC-Methyl-3 ,k-dihydroxy-

009844/1772 *

BAD ORIGINAL '

- k - Fw 5335

L-phenylalanin oder ß-Chlor-alanin ist möglich. Weitere funktioneile Gruppen der Aminosäuren werden zweckmäßig entsprechend den in der Peptidchemie üblichen Regeln geschützt (vgl. E. Schröder und K. Liibke, "The Peptides", New York und London 1965t Bd. I. insbes. Seiten 3-75)·

Die Abspaltung der neuen O-Schutzgruppe gelingt erfindungsgemäß durch Behandeln mit nucleophilen Rengentien wie Hydrazin und seinen Alkyl-, Aryl- und Hono-acylderivaten, dia noch Bindesten· eine N-H-Blndung besitzen, z.B. Methyl-, hydrazin. Phenyl-hydrazin, Methyl- oder tert.-Butyloxycarbonyl-hydrazid, ferner »it Ammoniak, primären und sekundären vorwiegend niederen aliphatischen Aminen, z.B. Methylamin, Äthylamin, Propylamin, Isopropylamin, Butylamin, Iaobutylamin, Dimethylamin oder Dibutylamin oder mit cycloaliphatischen Aminen wie Cyclohexylamin. Die Abspaltung gelingt auch mit den Salzen von Hydrazinen oder Aminen bzw. Ammoniak mit schwachen organischen Säuren, bevorzugt Essigsäure»

Die alkalische Verseifung wird mit wässriger oder alkoholischer Alkali- oder Erdalkalilauge, z.B« Natronlauge, wässrigmethanolischem Bariumhydroxyd oder Lithiumhydroxyd, mit Alkalialkoholaten, z.B. Natriummethylat in Methanol durchgeführt. Auch bei Behandeln des Peptides mit einem Alkalimetall, z.B. Natrium, Kalium oder Calcium, in flüssigem Ammoniak werden gleichzeitig dia neuen Schutzgruppen abgespalten .

Die Abspaltungsbedingungen hängen vom verwendeten Reagens und von der Natur des Peptlds ab. Mit Hydrazin ist die Abspaltung der Schutzgruppen meist schon nach 30 Minuten beendet, mit In NaOH riefeh 30-60 Min., während Ammoniak und Amine längere Einwirkungezeiten benötigen. Erwärmen ist im allgemeinen nicht notwendig, falls nicht Schwerlöalichkeit der Peptide in kalten Lösungsmitteln ein Erwärmen erforderlich macht. Als Lösungsmittel kommen alle in der Peptidchemie gebräuchlichen Lösungsmittel infrage, sofern sie unter den Re-

009844/1772

OR|Qi_NAL ^/5

- 5 - Fw 5335

aktionsbedingungen gegenüber den Abspaltungsreagentien stabil sind, also z.B. Wasser, Alkohole, Oloxan, Dim·thy1-acetamid und Pyridin, gegebenenfalls auch in Mischung eiteinander.

Die Isolierung der aus der Schutzgruppenabspaltung henrorgehejidan Peptide kann, wenn diese Peptide z.B. in Essigester löslich sind, durch Verteilen zwischen Essigester und schwach angesäuertem Wasser erfolgen. Im Falle der Unlöelichkeit in Lösungsmitteln wie Essigester, Aceton oder Äther wird das Peptid einfach mit einem dieser Lösungsmittel, bevorzugt Aceton, allein oder in Mischung mit Essigester oder Äther, aus seiner Lösung gefüllt. Vorteilhaft wird zuvor ein Teil des Lösungsmittels, in dem die Abspaltung vorgenommen wurde, abdestilliert.

Die Verfahrensprodukte können als Therapeutika Verwendung finden oder zur Herstellung anderer therapeutisch wertvoller Peptide als Zwischenprodukte eingesetzt werden.

Durch die nachstehenden Beispiele wird die Erfindung näher erläutert. Es werden die in der Peptidchemie üblichen Abkürzungen für die einzelnen AminosKuren und ^chutzgruppen verwendet.

Z ■ Carbobenzoxy

For » Formyl

ONP m p-Nitrophenyl BOC m .**rt..«-Btttyiojty«Ärbonyl

Bei den neuen 0-3_chutzgruppen des Tyrosine wird für die häufiger verwendete Äthyl-oxycarbonylgrupp· die Abkiirsung AtOC eingeführt.

BAD ORIGINAL

009844/1772

- 6 - Fw 5335

Beispiel 1

a) Z-Tyr(XtOC)-OH

._Λ·,.. _ίί:

31,5 g (0,1 Mol) Z-Tyr-OH werden in 150 ccd In NaOH gelöst. Zur Lösung gibt man 15 g Natriunearbonat und tropft bei höchstens 10°C 11 ecm (0,115 Mol) Chlorameisensaure-äthyleater unter starkem Rühren zu. Nach kurser Zeit bildet sich ein dicker Niederschlag. Man verdünnt mit 300 cca Wasser und rührt 1 Stunde bei Raumtemperatur nach. Dann wird mit halbkonz. HCl auf pH 2 gestellt und der ausgefallene Niederschlag in 300 ecm Esaigester aufgenommen. Die Essigesterlösung wird mit In HCl und Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Abdestillieren des Essigesters hinterbleibt ein kristalliner Rückstand, der aus 150 ecm 60-pros. Methanol umkristalliaiart wird. Ausbeute 36,1 g (93 % d.Th.) Schmp. II7-II9⁰ C₂₀H₂jNO₇(387,37) Bar. C 62,1 H 5,47 N 3,61

Gef. C 61,7 H 5,5 N 3,9

Analog Beispiel la) werden hergestellt 1

N-Carbobansoxy-0-methyl-oxycarbonyl-L-tyrosin N-Carbobenzoxy-O-ieobuty1-oxycarbonyl-L-tyrosin N-Carbobenzoxy-O-isopropyl-oxycarbonyl-L-tyrosin N-tert.-Butyl-O-äthyl-oxycarbonyl-L-tyrosin

b) Z-Tyr-(XtOC)-ONP

7174 % (20 «Mol) Z-TyHXtOC)-OH und 3,34 % (24 «Mol) 4-Nitrophenol werden in «ins« Gemisch aus 70 cc« Essigester und 30 esa Dimethylformamid gelöst und bei 0° «it 4,3 g (20,4 «MoH Dlcyclo-*)

Fp.	120-	122°
Fp.	103-	105°
Fp.	119-	121,
Fp.	165-	166°

▼ersetzt. Nach 15 Stunden Stehen bei 5° wird auf 0° abgekühlt und torn Harnstoff abgesaugt) das Filtrat wird i« Vakuum eur Trockene eingedampft. Es bleibt ein öliger Rückstand zurück, der bei« Verreiben mit Isopropanol kristallisiert. Die Aus-

)hexylcarbodiimid 0 0 9 8 A A / 1 ? 7 2

_{BAD 0R|Q1NAL}

- 7 - Fw 5335

beute beträgt nach dreimaligem Umkristallisieren aus Isopro panol 6,28 g (62 % d.Th.), Schmp. 111-112°

C₂₆H₂₄N₂O₉ (508.5) Ber. C 61,41 H 4,76 N 5,51

Gef. C 61,5 H 4,7 N 6,2

ö) Z-Tyr-(ÄtüC)-Phe-OCH

1,08 g (5 mMol) H-Phe-OCH ,HCl und 2,54 g (5 mMol) Z-Tyr(XtOC)-ONP werden in I5 ecm Dimethylformamid gelöst und nach Abkühlen auf -5° mit 0,69 ecm (5 mMol) Triethylamin versetzt. Nach 60 Stunden Stehen bei Raumtemperatur wird im Vakuum eingedampft, der feste Rückstand wird in Essigester gelöst und I5 mal mit gesättigter Natriumbicarfconatlösung sowie je einaal mit In HCl und Wasser gewesenem, Die Lösung wird Über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit Äther verrieben, nach einigem Stehen unter Äther abgesaugt und mit Äther gewaschen. Ausb. 2,40 g (87,6 % d.Th.), Schmp.

^C3O^H32^N2°8 ⁽548,60) Ber. C 65,68 H 5,88 N 5,11

Gef. C 65,7 H 5,9 N 5,2

Die Verbindung kann auch durch Acylierung des Tyrosinpeptide hergestellt werden 1

4,76 s (10 bMoI) Z-Tyr-Ph*-0CH-, hergestellt analog J.Aner. ehe«.Soc. £2 (1961), Seite 723, löst man in 25 cc« Tetrahydrofuran und 60 ecm Chloroform und tropft nach Zusatz von 1,67 CCK (12 «Mol) Triäthylamin unter RUhren bei 0° 1,09 ecm (12 «Mol) Chlorameisensäure-Kthylester ein. Die Lösung bleibt 12 Stunden bei Raumtemperatur, stehen. Dann destilliert Ban die Lösungsmittel lsi Vakuum ab und nimmt den Rückstand in feuchte« Essigester auf. Die Essigesterlösung wird nacheinander mit 2n HCl, In NaOH und Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockene gebracht. Der

BAD ORIGINAL

009844/1772

- 8 - Fw 5335

Rücketand wird aus Methanol/Wasser urakristalliaiert. Auab. 3,6 g (66 % d.Th.) Schmp. 175 - 175,5°

d) Z-Tyr-Phe-Ν,,Η,

1.37 g (2,5 mMol) Z-Tyr-(ÄtOC)-Phe-OCH warden in 100 ecm Methanol gelöst und mit 0,95 ccd (15 mMol) 00 proz. Hydrazin· hydrat 70 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelaasen. Der kristalline Niederschlag wird abfiltriert und mit Methanol gewaschen« Ausb. 0,97 g (8*,5 % d.Th,). Zur Analyse wird aus 500 ecm 80 proz. Äthanol umkriatallisiert. Ausb. 0,79 g (66,5 % d.Th.), Sclimp. 241,5°

^C26ⁿ28^N4°5 **76,54) ^ΒβΓ· ^{c 6}5,53 H 5,92 N 11,76

Qef. C 65,9 H 6,0 N J 1,6

Bei spiel 2

a) Z-Tyr-(XtOC)-OCH

6,60 g (20 mMol) Z~Tyr-OCHL warden in 50 ecm Chloroform gelöst. Nach Zusatz von 3,22 ecm (23 mMol? Triethylamin läßt man bei 0° unter Rühren 2,17 ecm (23 mMol) Chlorameisenseure-Mthylester zutropfen. Nach dreistündigem Stehen bei Räumt «aperatür wird jeweils zweimal mit ges. Natriumbicarbonatltisung, In HCl und Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Aueb. 7,2 g (90 % d.Th.) vom Schmp. 94-95°. Nach Umkristalliaieren aus DiisopropylMther werden 6,5 g (81 % d.Th.) vom Schmp. 95-95,5,° erhalten.

^{C 62}«^Ö3 H 5,78 N 3,49 Gef. C 62,7 H 5,7 N 3,5

b) H-Tyr-(ÄtOC)-OCH,, HCl

4,01 g C¹O «Mol) Z-Tyr-(ÄtOC)-OCH- werden in 100 ecm Methanol

009844/1772 ^b*d ori_GINal

- 9 - Fw 5335

gelöst und nach Zugabe von 2,09 ecm 4,97n HCl (10,3 mMol) 2 Stunden In Gegenwart von Palladiunschwer as hydriert. Nach Abfiltrieren des Katalysator« wird das Filtrat im Vakuum zur Trockene gebracht und die zurückbleibende Krlstallsiasse mit Äther und heißem Essigester verrieben und abgesaugt. Ausb. 1,9 g (62 % d.Th.), Schmp. 162-163°.

C H₁₈C1NO₅(3O3,75) Ber. C 51,4o H 5,97 N 4,61 Cl 11,67

Gef. C 51,8 H 6,0 ΝΊ,9 Cl 12,0

θ) Z-Phe-Tyr<-ÄtOC)-OCH

1,^9 g (5 mMol) Z-Phe-OH werden in 15 ,ecm Tetrahydrofuran gelbst. Nach Zusatz von 0,7 ecm (5 mMol) Triethylamin gibt man bei -10° unter Rühren tropfenweise O₁W ecm (5 mMol) Chloramaissnsäureüthylestsr zu. Man rührt 5 Minuten bei -5° nach und gibt dann die attf -5° vorgekühlte Lösung von 1,52 g (5 mMol) H-Tyr^AtOC)-OCH₃,HCl und 0,7 ecm Triethylamin in 20 ecm Dimethyl*cetamid zu. Man läßt den Ansatz langsam auf Raumtemperatur kommen und rührt bei dieser Temperatur noch 2 Stunden. Dann werden die Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert, dar Rückstand in Essigsstsr aufgenommen und die Essigesterlösung Je dreimal mit gesättigter NatrfrumbicarbonatlUsung, In HCl und Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Man erhält 2,3 g (84 % d.Th.) vom Schmp. 163-166⁰. Nach Umkristallisieren aus Aceton/Vasser werden 1,88 g (69 % d.Th.) vom Schmp. 170,5-171,5° erhalten.

C Hj₂N₂O₈ (548,60) Der. C 65·68 II 5,β8 N 5,H

Gef. C 65,7 H 5,9 N 5,2

d) Z-Phe-Tyr-OH

2,75 f (5 mMol) Z-Ph*-Tyr(-AtOC)-OCH. werden in kO ecm Dioxan g«löst^und mit I5 ecm In NaOH 2 Stunden bei Reu»temper*tur *" gerührt. Danach verdünnt man mit 250 ecm Wasser und fällt durch Zugabe von I5 ecm In HCl einen halbfesten Niederschlag aus, der

009844/1772 _ßAD original /ip

- 10 - Fw 5335

in Essigester gelöst und aus der Essigeaterlösung mit Natriujnbicarbonatlöaung extrahiert wird. Auf Zusatz von In HCl fällt ein kristalliner Niederschlag aus, der im Vakuum Über P„0» getrocknet wird. Die Verbindung schmilzt bei 181,5 - 183 und ist mit einer nach A. 652 ( I962), Seite 76 hergestellten authentischen Probe identisch.

Beispiel 3

a) For-Tyr£ÄtOC)-OH

20,9 g For-Tyr-OH (0,1 Mol) werden in I50 ecm in HaOH gelöst. Man gibt 15 fi Natriumcarbonat zu und läßt bei höchstens 10 unter kräftigem Ruhren 11,0 ecm (0,115 Mol) Chlorameisensäure-äthylester isutropfen. Man rührt noch 2 Stunden bei Raumtemperatur und fällt dann mit 2n HCl einen weißen, kristallinen Niederschlag aus. Die Kristall« werden in Essigestar gelöst, das Filtrat wird zweimal mit Sssigester extrahiert, die vereinigten Essigasterlösungen werden mit In HCl und Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Ei hinterbleibt ein kristalliner Rückstand, der aus 25 Sproz, Methanol ujukrls tallisiert wird. Ausb. 23,Og (81,5 Hd.Th.), Schmp. 172-173°

C₁₃II₁₅NO₆ (281,26) Her. C 55,55 II 5,30. N k,9k

Gef. C 55,6 H 5,3 N 5,1

b) For-Tyri-ÄtOCj-Ser-Met-OCH

7,0 g (20 mMol) DOC-Sar-Met-OCH , hergestellt nach DAS 1 212 981, werden in 5^ ecm O,55n HCl in Methanol gelöst. MAn läßt 1 Stund· bei Raumtemperatur stehen, destilliert das Lösungsmittel im Vakuum ab und digeriert den öligen Rückstand «ehrmal· mit trockenem Äther. Überschüssiger Äther wird im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in k0 ecm Dimethylacetamid/Acetonitril gelöst. Man gibt 9,62 g For-Tyr(ÄtOC)-OH (20 mMol) und 2,8 ecm

9 84 4 M 77 2 ^QAD original

- 11 - Fw 5335

(20 m Mol) Triethylamin zu und versetzt bei -15° mit 4,3 g (21 BaMoI) DCC, gelöst in wenig Acetonitril. Dann läßt man langsam auf Haumtemjjerattir kommen und saugt nac h Stehen über Nacht vom auegefallenen Harnstoff ab (4,5 g) . Das ^Filtrat wird im Vakuum zur Trockene gebracht, der Rückstand in feuchtem Essigester aufgenommen, die Easigesterlosung nach* Filtration mit In HCl, gesättigter Natrium-IjJ carbonatlösung und Veeser gewaschen (wobei die wässrige Phase stets 10 % NaCl enthält) und vmter Zusati von Toluol zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird aus Eealgeeter umkrirtallleiert, wobei von etwas Ungelöstem abfiltriert wird. Auebeute 7,6 g (7*t H d.Th.) Schmp. 1(Wi-166°

C^_nH₁-H-O_nS (513*56) Ber, C 51,4 H 6,09 N 8,18 £2 j« 3 9

Gef. C 51,3 H 6,3 N 8,3

c) For-Tyr Ser-Het-N„H\,

It 5^ g (3 «Mol) For-Tyr( XtOC)-Ser-Met-OCH werden in 20 cc« Methanol geltSst. Man gibt 1,1 cc* (l8 mMoJ) 80 proz. Hydrar··"-hydrat «u und laut 12 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Dann saugt man rom ausgefalleneri Niederschlag ab (1,22 g), den man aus 60 ecm 80 proz. Methanol uekristalIieiert. Ausbeute 0,98 g (7*1 S d.Th.) Schmp. 200-210°

C₁₈II₂₇N₅O₆S (ί|Ίΐ,50) Ber. C 48,95 H 6,16 N 15,82

Gef. C 48,6 H 6,3 N 16,0

Beispiel 4

a) Z-Tyr(AtOC)-GIy-NH₂

7,7 g Z-Tyr(XtOC)-OH (20 mMol) und 2,8 ecm Triäthylaein werden in kO ecm Tetrahydrofuran gelöst· Man gibt unter Rühren bei -5 tropfenweise 2,6 ecm Chloraneiaensäure-lsobtitylester zu, rührt 10 Minuten bei -5° nach und versetzt dann mit der auf 0° vorge-

009844/1772 bad original ^/12

- 12 - Fw 5335

kühlten Lösung von 3 ,73 g H-GIy-NH₂.HCl (30 mMol) und 4,0 ecm (28,8 BiMoI) Triethylamin in wenig Wasser. Dann rührt man noch 1 Stunde bei Raumtemperatur nach, destilliert die Lösungsmittel im Vakuum ab, nimmt den Rückstand in feuchte« Essigester auf und wäscht die Essigeaterlösung mit In HCl, gesättigter Natriumbicarbonatlösung und.Wasser, dampft den Essigester ab und kristallisiert den Rückstand aus 70 proz. Äthanol um. Man erhält 8,O8 g (91 % d.Th.) gallertige Kristall« vom Schmp. 154-157° (aintern bei I50⁰). Zur Analyse wird aus Diäthylketon umkristallisiert. Schmp. 157-159° C₂₂H₂₅N₃O₇ (443,44) Der. C 59,6 H 5,68 N 9.W

Gef. C 59,4 H 5\6 N 9,5

d) Z-Tyr-Gly-NH₂

4,43 f (10 «Mol) Z-Tyr(XtOC)-GIy-NH₂ werden in 40 ecm 2n MH. in Methanol 12 Stunden bei Raumtemperatur aufbewahrt. Man dampft sur Trockene ein und kristallisiert den Rückstand aus Methanol/Wasser um. Auebeut· 3,42 g (92 % d.Th.). Schmp· 114-116°. Die Verbindung ist mit einem aus dem Äthylester (Chem.Ber. 93 (I960), Seite 2367) hergestellten Amid identisch.

Beispiel 5

Abspaltung der IMXB-Schutzgruppe unter Erhalt der neuen 0-Schutsfjruppet , <*

3,53 g (10 mMol) DOC-Tyr(XtOC)-OH werden mit 50 ecm gesättigtem HCl/Essiiester übergössen. Nach 30 Minuten wird rom Nieserschlag abgesaugt und mit Essigester und Äther gewaschen. Ausb. 2,30 g (79,3 % d.Th.) Schmp. 219-220° (Zers.)

C₁₂H₁₆ClNO₅ (289,72) Ber. C 49,75 H 5,57 N 4,84 Cl 12,24

Gef. C 49,9 H 5.6 N 5,5 Cl 12,3

Durch Lösen des Hydrochloride in 10 ecm heißem Wasser und Versetzen mit 1 ecm Pyridin kann man das 0-Äthyloxycarbonyl-L-tyrosin abscheiden, das abgesaugt und aus Wasser umkristallisiert wird. 0098A4/1772

Claims

- 13 - Fw 5335

Patentanspruch

Verfahren zur Herstellung τοη tyroalnhaltigen Peptiden, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Peptid mit wenig·ten« einem Tyrosin-Baustein der allgeneinen Formel I

-CO-OR

(D

- NH - CH - CO -

worin OR einen von eine« primären oder sekundären Alkohol , abgeleiteten Alkoxyrest oder einen Aralkoxyrest ait mindestem· 2 Kohlenstoffatomen swisehen dem Phenylring und dem Sauerstoff bedeutet, entweder mit Ammoniak, Aminen, Hydrasinen oder Non·- acylhydraalnea behandelt, wobei in den Amine» oder Hydraminder ira ten mindesten· eine NH-Bindung vorhanden «ein muß oder da· tyreeinhaltige Peptid der alkalischen Verseifung unterwirft .

BAD ORIGINAL 009844/1772