DE1643327A1

DE1643327A1 - Verfahren zur Herstellung tyrosinhaltiger Peptide

Info

Publication number: DE1643327A1
Application number: DE19671643327
Authority: DE
Inventors: Geiger Rolf Dipl-Chem Dr; Jaeger Georg Dipl-Chem Dr; Siedel Walter Prof Dipl-Che Dr
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1967-03-02
Filing date: 1967-07-07
Publication date: 1971-05-27
Also published as: GB1201121A; CH496668A; NL6802947A; US3538070A; DE1593858A1

Description

5335 a
Verfahren zur Herstellung tyrosinhaltiger Peptide

Zusatz zu Patent * ».« ... (Patentanmeldung F 5I IVb/12 q (Fw 5335))

Gegenstand des Hauptpatentes ist ein Verfahren zur Herstellung tyrosinhaltiger Peptide, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man ein Peptid mit wenigstens eine» Tyrosin-Baustein der allgemeinen Formel I

- CO- OR

(I) CH,

- NH - CH - CO -

worin OR einen von »Isieia prisaäron oder sekundären Alkohol Abgeleiteten Alkoxyrest oder einen Aralkoxyreet mit ■indesten* 2 Kohlenstoffatomen »wischen dem PhenyIring

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und dem Sauerstoff bedeutet, entweder mit. Ammoniak, Aminen, Hydrazinen oder Mono-acylhydrazinen behandelt., wobei in den Aminen oder Hydrazinderivaten mindestens eine NH-Bindung vorhanden sein muß, oder das tyrosinhaltige Peptid der alkalischen Verseifung unterwirft.

In weiterer Ausgestaltung dieses Verfahrens wurde nun gefunden, daß man tyrosinhaltige Peptide auch vorteilhaft herstellen kann, wenn in dem Tyrosinbaustein der Formel I anstelle des Restes OR eine NHR.,-Gruppe steht, worin R₁ ein Wasserstoffatom oder einen Alkyl-, Aralkyl- bzw. Arylrest darstellt, und man die Abspaltung der Schutzgruppe mit den im Hauptpatent genannten Reagentien mit Ausnahme von Monoacylhydrazinen vornimmt.

Die zur Herstellung der erfindungsgemäß verwendeten Tyrosinpeptide benötigten Tyrosinderivate erhält man nach an sich bekannten Verfahren durch Umsetzung von N-Acyl-tyrosinestern mit N-Carbonyl-sulfamidsäure-chlorid /vgl. DBP 931 225, DBP 931 467, Chem. Ber. jB9_, 1071 (1956), Chem. Ber. _9_6, 56 (1963^7, mit Harnstoffchlorid vgl. Liebigs Ann. Chem. 244, 29 (I888) bzw. mit Alkyl- oder Arylisocyanaten.

Als Alkylreste R. der Gruppe NHR₁ in der allgemeinen Formel I

0-CONHR

NH-CH-CO

dienen insbesondere niedere aliphatische Alkylreste Z₄ Methyl-, Äthyl-, n-Propyl-, Isopropyl—, Isobutylreste oder cycloaliphatische Reste wie Cyclohexylreste. Als Aralkylreste der Aralkylamidogruppen kommen z.B. ß-Phenyläthyl- sowie ^-Phenylpropyl-,

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4-Phenylcyclohexyl- oder Dibenzylmethylreste infrage. Ale Arylreste R werden vor allem der Phenylrest und substituierte Phenylreste sowie der Naphthylrest verwendet. ¹V

Auch in tyrosinhaltige Peptide können, wenn keine weiteren acylierbaren Gruppen vorhanden sind, nach den genannten Methoden die neuen Schutzgruppen eingeführt werden.

Diese Verbindungen können nun nach den allgemeinen Methoden der Peptidchemie zur Herstellung tyroeinhaltiger Peptide verwendet werden. Durch Abepaltung der N-Acylgruppe entstehen O-Carbamyl-tyrosin-ester, die mit N-Acyl-aminosäuren oder -peptiden zu neuen Peptiden unter Kettenverlängerung am Aminoendβ des Tyrosine umgesetzt werden können, Durch Freisetzen der Carboxylgruppe, z.B. durch katalytische Hydrierung von N-t-Butyloxycarbonyl-0-phenylcarbamyl-tyrosin-benzylester und anschließende Kondensation des entstandenen N-t-Butyloxycarbonyl-O-phenyl-carbamyl-tyrosins mit einem Aminosäure- oder Peptid-ester erhält man umgekehrt Peptide unter Kettenverlängerung am Carboxylende des Tyrosine.

Die Abspaltung der neuen O-Schutzgruppen gelingt erfindungsgemäß durch Behandeln mit nucleophilen Reagent ien wie Hydrazin und seinen Alkyl- und Arylderivaten, die noch mindestens eine N-H-Bindung besitzen, z.B. Methylhydrazin und Phenylhydrazin, ferner mit Ammoniak, primären und sekundären vorwiegend niederen aliphatischen Aminen, z.B. Methylamin, Äthylamin, Propylamin, Zsopropylamin, Butylamin, Isobutylamin, Dimethylamin oder Dibutylamin oder mit cyclo-

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£ Λ Ή

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aliphatischen Aminen wie Cyclohexylamin. Acylhydrazine, wie sie nach dem Hauptpatent verwendet werden können, sind hier jedoch nicht geeignet, da die Carbamylschutzgruppe schwerer spaltbar ist als die Carbalkoxyschutzgruppe. Die alkalische Verseifung wird mit wässriger oder *)

Die Abspaltungsbedingungen hängen vom verwendeten Reagens und von der Natur des Peptide ab. Mit Hydrazin ist die Abspaltung der Schutzgruppen meist schon nach wenigen Stunden beendet, wobei die unsubstituierte Carbamylgruppe am schnellsten entfernt wird. 2n Natronlauge erfordert Einwirkungezeiten von 1-2 Stunden.

In den nachstehenden Beispielen werden die in der Peptidchemie üblichen Abkürzungen für die einzelnen Aminosäuren und Schutzgruppen verwendet:

Z a Carbobenzoxy BOC a tert.-Butyloxycarbonyl TCP * 2.4.5-Trichlorphenyl

BzI » Benzyl

Für die neuen 0-Schutzgruppen des Tyrosine werden folgende Abkürzungen eingeführt:

AC m Carbamyl
i-BAC μ ieo-Butyl-carbamyl

PAC s Phenyl-carbamyl NPAC » Nitrophenyl-carbamyl

*) alkoholischer Alkali- oder Erdalkalilauge, z.B, Natronlauge, wässrig-methanolischem Bariumhydroxyd oder Lithiumhydroxyd, mit Alkalialkoholaten, z.B. Natriummethylat in Methanol durchgeführt. Auch beim Behandeln des Peptide mit einem Alkalimetall, z.B. Natrium, Kalium oder Calcium,in flüssigem Ammoniak werden gleichzeitig die neuen Schutzgruppen abgespalten.

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ORiGiNAL iNSPECTEÖ

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Beispiel 1

a) Z-Tyr-(AC)-OCH

3»29 g ( 10 mMol) Z-Tyr-OCH- werden in k ecm Acetonitril gelöst und unter Kühlung mit 0,89 ecm (10 mMol) N-Carbonyl sulfamidsäureChlorid versetzt* Nach vierstündigem Stehen bei Raumtemperatur wird in 500 ecm Wasser eingegossen, 15 Minuten auf 70° erhitzt und anschließend auf 5° abgekühlt. Die abgesaugten Kristalle werden mit Wasser säurefrei gewaschen, getrocknet und zweimal aus Chloroform/ Äther umkristallisiert.

Ausbeute 1,75 S <*7 # d.Th.), Schmp. 131,5 - 132°. C₁₉H₂₀N₂O₆ (372,39) Ber.; C 61,28 H 5,41 N 7,52

Gef.: C 61,2 H 5,5 N 7,4

ß) 3,29 g (10 mMol) Z-Tyr-OCH- werden in 10 ecm Methylenchlorid gelöst, 0,87 g (11. mMol) Harnstoff chlori d zugefügt und die Lösung 4 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach den Eindampfen zur Trockne wird der feste Rückstand mit Wasser verrieben, abgesaugt und mit Wasser neutral gewaschen. Das getrocknete Rohprodukt wird dreimal aus Chloroform/Äther umkristallisiert. Ausbeute 1,82 g (49 % d.Th.) Schep. 131,5°.

b) H-Tyr-(AC)-OCH₃ «HCl

1,86 g (5 mMol) Z-Tyr-(AC)-OCH werden in 30 ecm Methanol gelöst und nach Zugabe von 0,8 ecm (5,8 mMol) 7,3 η methanolischer HCl 2 Stunden in Gegenwart von Palladiunschwarz hydriert. Der entstandene Niederschlag wird durch Zufügen von Dimethylformamid in Lösung gebracht und vom

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Γ' I

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Katalysator abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum bei Raumtemperatur vom Lösungsmittel befreit«

Ausbeute 1,25 g (91 % d.Th.) Schmp. 214,5 - 215,5° (Zersetzung).

C₁₁H N₂O^Cl (274,71) Ber.rC 48,09 H 5,50 N 10,20 Cl 12,91

Gef.:C 47,6 H 5,5 N 10,0 Cl 13,6

c) Z-Phe-Tyr-(AC)-OCH

Die Mischung au« 0,82 g (3 mMol) H-Tyr-(AC)-OCH »HCl und 1,^3 g (3 mMol) Z-Phe-OTCP in 50 ecm Dimethylformamid wird bei -5° mit 0,43 ecm (3 mMol) Triäthylamin versetzt und 65 Stunden bei Raumtemperatur aufbewahrt. Die Lösung wird dann im Hochvakuum in der Kälte eingedampft, der feste Rückstand in viel Chloroform gelöst und die Lösung fünfmal mit Natriumbicarbonatlösung, zweimal mit 1 η Salzsäure und zweimal mit Wasser gewaschen. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert und der kristalline Rückstand in Äther verrieben, einige Stunden bei 5° stehengelassen und abgesaugt. Ausbeute 1,03 g (66 % d.Th.) Schmp. I87-I88⁰. Eine Probe wurde aus Methanol zur Analyse umkristallisiert. Keine Schmp.-Erhöhung.

C₃₈H₃₉N₃O₇ (519,56) Ber.: C 64,73 H 5,63 N 8,09

Gef.: C 64,5 H 5,7 N 8,3

d) Z-Phe-Tyr-NHNH-

0,52 g (1 mMol) Z-Phe-Tyr-(AC)-OCH werden in 4 ecm Dimethylacetamid gelöst und mit 0,32 ecm (5 mMol) 80 proz. Hydrazinhydrat l8 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen* Der nach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum bei Raumtemperatur

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ORiGfNAL

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erhaltene feste Rückstand wird mit Methanol verrieben und abgesaugt. Das bei 210 - 212° schmelzende Rohprodukt (0,37 S ^β 78 % d.Th.) wird aus Methanol unkristallisiert.
Ausbeute 0,28 g (59 % d.Th.), Schmp. 224,5-225° (Zersetzung).

C₂₆H₂₈N₄O₅ (476,54) Ber.:·C 65,53 H 5,92 N 11,76

Fef.: C 65,2 H 6,0 N 12,4

Beispiel 2 {

a) Z-Tyr-(i-BAC)-OCH

3,29 g (10 mMol) Z-Tyr-OCH werden in 10 ecm i-Butylieocyanat gelöst und 2 Stunden auf 60° erwärmt. Nach dem Abkühlen auf wird dreimal hintereinander mit Ligroin verrieben und abdekantiert. Die Kristalle werden mit Ligroin gewaschen und aus Chloroform/Ligroin umkristallisiert. Ausbeute 3,28 g (76 % d.Th.), Schmp. 108,5°

C₂₃H₂₈N₂O₆ (428,497 Ber.: C 64,47 H 6,59 N 6,54

Gef.: C 64,2 H 6,6 N 6,7

b) H-Tyr-(i-BAC)-OCH .HBr

4,28 g (10 mMol) Z-Tyr-(i-BAC)-OCH werden in 25 ecm HBr/ Eisessig gelöst und 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach dem Eingießen in 500 ecm absol. Äther und 30-minütigem Aufbewahren bei 5 werden die Kristalle abgesaugt, nochmals in abs. Äther verrieben, abgesaugt und mit Äther gewaschen. Ausbeute 3,28 g (87,5 % d.Th.) Schmp. 210,5 - 211,5° (Zera.)

(375,28) Ber.: C 48,01 H 6,18 N 7,46 Br 21,29 Gef.: C 48,1 H 6,0 N 7,0 Br 21,3

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ORIGINAL IhISPEQTED

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c) Z-Phe-Tyr-(XtBAC)-OCH

0,75 S (2 inMol) H-Tyr-(1-BAC)-OCH 'HBr und 0,95 g (2 mMol) Z-Phe-OTCP werden in 10 ecm Dimethylformamid gelöst und nach dem Abkühlen auf -5° mit 0,28 ecm (2 mMol) Triethylamin versetzt. Nach 60 Stunden Stehen bei Raumtemperatur wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand in Chloroform gelöst und wie im Beispiel Ic) aufgearbeitet. Auebeute 0,98 g (85 % d.Th.), Schmp. I96-I98⁰.

C₃₂H₃₇N₃O₇ (575,68) Ber.: C 66,77 H 6,48 N 7,30

Qef.: C 66,9 H 6,5 N 7,6

d) Z-Phe-Tyr-OH

O,58 g (1 mMol) Z-Phe-Tyr-(i-BAC)-OCH werden in 7 ecm Dimethylacetamid und 5 ecm Dioxan gelöst und nach Zusatz von 1,5 ecm (3 mMol) 2n Natronlaug· 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird die mit 100 ecm Wasser verdünnte Lösung mit 1,75 ^ccm 2n Salzsäure versetzt, der ausgefallene Niederschlag in Essigester aufgenommen und mit drei Portionen Natriumhydrogencarbonatlösung extrahiert. Auf Zusatz von 2 η Salzsäure fällt das kristalline Z-Peptid aus, das mit Wasser gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute 0,36 g (78 % d.Th.), Schmp. I87 - 188°. Eine Probe wurde zur Analyse aus Essigester/Petroläther umkristallisiert, wobei der Schmp. auf 189-189,5° stieg. Lit.-Schmp. 184 - I85⁰ /tiebigs Ann.Chem. 652, 79 (196227·

C₂₆H₂₆N₂O₆ (462,51) Ber.: C 67,52 H 5,67 N 6,06

Gef.! C 67,7 H5,8 N6,0

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ORIGINAL INSPECTED

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Beispiel 3

Z-Phe-Tyr-

1,15 g (2 mMol) Z-Phe-Tyr-(1-BAC)-OCH /hergestellt nach Beispiel 2 c}7 werden in 8 ecm Dimethylacetamid mit 0,64 ecm (10 mMol) 80 proz. Hydrazinhydrat nach Beispiel 1 d) 36 Stunden bei Raumtemperatur umgesetzt. Auebeute 0,84. g (88 % d.Th.), Schmp. 224 - 225°. Das Hydrazid zeigt die gleichen Eigenschaften wie das unter 1 d) erhaltene Produkt.

C₂₆H₂₈N₄O₅ (476,54) Ber.: C 65,53 H 5,92 N 11,76

Gef.: C 65,2 H5,9 N 12,0

Beispiel 4

a) Z-Tyr-(PAC)-OCH

3,29 g (10 mMol) Z-Tyr-OCH_ werden in 20 ecm Dimethylformamid gelöst. Nach dem Abkühlen auf 0° wird 1,31 g (11 mMol) Phenylisocyanat zugegeben und 50 Stunden stehen gelassen. Dann wird im Hochvakuum eingedampft. Der Rückstand kristallisiert beim Verreiben mit Ligroin aus. Die abgesaugten Kristalle werden mit abs. Äthanol verrieben, 12 Stunden stehen»gelassen, abgesaugt und mit Äthanol gewaschen. Ausbeute 3,22 g (72 % d.Th.) Schrap. l40 - l4l°.

C₂₅Il₂₄N₂O₆ (448,49) Der.: C 66,95 H 5,39 N 6,25

Qef.: C 67,0 H5,0 N6,0

b) H-Tyr-(PAC)-OCH «HBr

4,48 g (10 mMol) Z-Tyr-(PAC)-OCH werden mit 10 ecm HBr/

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Eisessig 1 Stunde bei Raumtemperatur umgesetzt. Nach der Zugabe von 100 ecm abs. Äther und kurzem Stehen wird abgesaugt und mit Äther gewaschen« Das Rohprodukt wird in heißen Essigester verrieben. Ausbeute 3»64 g (92 % d.Th.) Schmp. 205,5° (Zersetzung).

C₁₇H₁₉N₂O₄Br (395,26) Ber.: C 51,66 H 4,85 N 7,09 Br 20,22

Gef.: C 51,5 H5,0 N7,0 Br 20,'i

c) Z-Phe-Tyr-(PAC)-OCH

od) 1,49 g (5 mMol) Z-Phe-OH werden in 20 ecm Tetrahydrofuran gelöst. Nach Zusatz von 0,7 ecm (5 mMol) Triethylamin werden bei -10° unter Rühren 0,48 ecm (5 mMol) Chlorameisensäureäthylester zugetropft. Der ausgefallene Niederschlag wird durch Zugabe von 20 ecm Dimethyl formamid und 50 ecm Chloroform in Lösung gebracht. Man rührt 5 Hinuten bei -5 nach und gibt dann die auf -5° vorgekühlte Lösung von 1,98 g (5 mMol) H-Tyr-(PAC)-OCH₃ UIBr und 0,7 ecm Triethylamin in 40 ecm Dime thy !acetamid und 60 ecm Chloroform zu* Man läßt den Ansatz langsam auf Raumtemperatur kommen und rührt noch 1 Stunde nach. Nahh dem Abdestillieren der Lösungsmittel im Vakuum wird der Rückstand in 2,5 1 Chloroform aufgenommen und die Lösung mit Natriumbicarbonatlösung, In Salzsäure und Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Das Rohprodukt (2,8l g s 95 % d.Th.) vom Schmp. 182,5· )l£5 g (62.% d.Th.) Schmp. 193 - 195°.

C₃₄H₃₃N₃O₇ (595,67) Ber.: C 68,56 H 5,58 N 7,05

Gef.: C 67,9 H 5,5 N 6,8

ß) 3,95 g (10 mMol) H-Tyr-(PAC)-OCH₃«HBr und 4,77 g (10 raMol) Z-Phe-OTCP werden in 30 ecm Dimethylformamid nach Beispiel 1 c) umgesetzt. Ausbeute 5,20 g (87 % d.Th.), Schmp. I95 - I96⁰.

wird aus Chloroform/Petroläther umkristallisiert. Ausbeute

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ORfQiNAL INSPECTEO /H

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tf) Einführung der PAC-Schutzgruppe in Z-Phe-Tyr-OCH :

2,39 g (5 mMol) Z-Phe-Tyr-OCH £iargestellt nach der gem-Anhydridmethode* Schmp. 143 - 1*4° /Ext.-Schmp. 137 - 138° Rec. Trav. Chim. Pays Bas JgL (1959), Seit·

(476,54) Ber.: C 68,05 H 5,93 N 5,88 Fef.: Q 68,3 H 6,1 N 5

werden in 20 ecm aba. Dimethyirormanid gelöst, die Lösung

auf -5° abgekühlt und mit O,66 g (5,5 mMol) Phenylisoeyanat t

versetzt. Nach 65stündigem Stehen bei Raumtemperatur wird im Hochvakuum zur Trockne eingedampft, der feste Rückstand mit Ligroin verrieben und abgesaugt. Das Rohprodukt wird zweimal aus Chloroform/Oimethylacetamid/Petroläther um-

kristallisiert.

Ausbeute 1,66 g (56 56 d.Th.), Schmp. 195 - 196,5°.

d) Z-Phe-Tyr-OH

1,19 g (2 mMol) Z-Phe-Tyr-(PAC)-OCH werden in 14 ecm Dimethylace t amid und 10 ecm Pioxan mit 3 ecm (6 mMol) 2n Natronlauge wie im Beispiel 2 d) verseift. Ausbeute 0,72 g (78% d.Th.), Schmp. 185 - I87⁰. Die beiden Z-Peptide sind identisch.

Beispiel 5 Z-Phe-Tyr-NHNH₂

Die Umsetzung von 0,60 g (1 mMol) Z-Phe-Tyr-(PAC)-OCH /fiergestellt nach Beispiel 4 c)? mit 0,32 ecm (5 mMol) 80 #iges Hydrazinhydrat in 4 ecm Dimethylacetamid erfolgt nach Beispiel 1 d). Di· Reaktionszeit beträgt 38 Stunden Ausbeute 0,34 g (7I * d.Th.), Schmp. 224-224,5°. Die beiden Hydrazide zeigen die gleichen Eigenschaften.

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Beispiel 6

a) BOC-Tyr-OBzl

60 g (0,22 Mol) H-Tyr-OBzl werden «it BOC-Azid in Pyridin 2 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Ausbeute 62,5 £ (77 % d.Th.) Schmp. 126 - 127°.

C₂₁H₂₅NO₅ (371,24) Ber.: C 67,9% H 6,79 N 3,77

Gef .s C 68,0 H6,8 N 3.7

b) BOC-Tyr-(PAC)-OBzI

7,4:2 g (20 mMol) BOC-Tyr-OBzl werden in 50 ecm abs. Dimethylformamid gelöst und nach dem Abkühlen auf 0 mit 2,62 g (22 mMol) Phenylisocyanat versetzt. Nach 50stündigem Stehen bei Raumtemperatur wird das Lösungsmittel im Hochvakuum abdeetilliert und der ölige Rückstand zweimal mit Ligroin verrieben, wobei teilweise Kristallisation eintritt. Beim Auflösen in kaltem Methanol und Fällen mit Wasser kristallisiert das Produkt durch, das aus heißem Äthanol/Wasser umkristallisiert wird. Ausbeute 7,1p g (72 % d.Th.) Schmp. I08 - 108,5°.

^C28	H₃₀N₂O₆ U₉O	,57)	Ber. :	C	68	,55	H	6	,16	N	5	,71
			Gef. :	C	68	,5	H	6	,3	N	5	,8
c)	BOC-Tyr-(PAC)	-OH

3,8 g (7,75 mMol) BOC-Tyr-(PAC)-OBzl werden in 120 ecm Methanol gelöst und 30 Minuten in Gegenwart von Palladiumschwarz hydriert. Dann wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in Essigester gelöst und das Produkt durch Zugabe von Petroläther ausgefällt. Ausbeute 2,6 g (84 % d.Th.), Schmp. 125 - I3O⁰.

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/13

1 C / t U H

- 13 - Fw 5335 a

C₂₁H₂₄N₃O₆ (400,44) Ber.: C 62,99 H 6,04 N 7,00

Gef.: C 63,1 H 6,2 N 7,2

d) BOC-Tyr-(PAC)-OTCP

2,00 g (5 mMol) BQC-Tyr-(PAC)-OH und 1,19 g (6 mMol) 2,4,5-Trichlorphenol werden in 45 ecm Essigester gelöst und bei 0° mit 1,05 g (5,1 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Nach 16stündigem Stehen bei 5 wird vom Harn- f

stoff abgesaugt, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft und der kristalline Rückstand aus Isopropanöl umkristallisiert. Ausbeute 0,94 g (32 % d.Th.) Schmp. 162°,

C₂₇H₂₅N₂O₆Cl₃ (579,89) Ber.: C 55,93 H 4,35 N 4,83 Cl 18,34

Gef.: C 56,0 H 4,5 N 4,8 Cl l8,1

e) BOC-Tyr-(PAC)-PHe-OCH

0,58 g (1 mMol) BOC-Tyr-(PAC)-OTCP und 0,22 g (1 mMol) H-Phe-OCH *HC1 werden in 3 ecm Dimethylformamid gelöst und bei -5° mit 0,l4 ecm (1 mMol) Triethylamin versetzt. Nach (

30 Stunden Stehen bei Raumtemperatur wird im Vakuum eingedampft, der halbfeste Rückstand in Chloroform -5- Essigester gelöst und nach Beispiel 1 c) gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird mit Äther/Petrolather verrieben, abgesaugt und mit Petroläther gewaschen. ^Husbeute 0,39 g (7O % d.Th.) Schmp. I52 - I53⁰ (Sintern ab 115°).

C₃₁H N₃O₇ (561,64) Ber.: C 66,30 H 6,28 N 7,48

Gef. : C 66,5 II 6,3 N 7,5

f ) BOC -Tyr -Ph e -NHNII _o

BOC-Tyr-(PAC)-Phe-OCH wird wie i« Beispiel 1 d) der Hydra-

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ORIGINAL. INSPECTED /^i;*

16 4-32·⁷

- 14 - Pw 5335 a

zinolyse unterworfen.

Ausbeute 60 % d.Th., Schmp. 208°.

Beispiel 7

Einführung und Abspaltung der NPAC-Gruppe

a) Z-Tyr-(NPAC)-QCH

6,6 g (20 mMol) Z-Tyr-OCH werden in 25 cc« Dimethylformamid gelöst und auf -5° abgekühlt, Hierzu wird die auf -5° vorgekühlte Lösung von 3,6 g (22 mMol) p-Nitrophenylisocyanat *n 60 ecm Dimethylformamid gegeben und die "Gesamtlösung 2k Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Es wird vom ausgefallenen Harnstoff abgesaugt und das Filtrat im Hochvakuum eingedampft. Der Rückstand wird zweimal mit Ligroin verrieben und abdekantiert. Das Rohprodukt wird in Aceton gelöst, auf eine mit neutralem Aluminiumoxyd gefüllte Säule gegeben und mit einem Gemisch aus n-Hexan-Essigester-Eisessig (20:10:1") eluiert. Die Lösung mit der zuerst erscheinenden Substanz wird im Vakuum eingedampft und der feste Rückstand aus heißem Methanol umkristallisiert. Ausbeute 3,22 g (33 % d.Th.) Schmp. I79 - i80°.

C₂₅II₂₃N₃O₈ ('193,7*9) Ber.: C 60,85 H k, ?0 N 8,52

Gef.: C 60,6 H 4,7 N 8,6

b) Z-Tyr-NHNH₂

0,^9 g (1 mMol) Z-Tyr-(NPAC)-OCH werden in 3 ecm Dimethylacetamid gelöst und mit 0,32 ecm (5 mMol) 8O jiigem Ilydrazinhydrat 22 Stunden bei Raumtemperatur reagieren lassen. Nach dem Eindampfen wird mit Methanol verrieben und abgesaugt. Das

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ORfGfNAL INSPECTED

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rohe Hydrazid wird aus Methanol umkristallisiert. Ausbeute 0,21 g (64t % d.Th.) Schmp. 220,5 - 221° (Zer*.) Die Substanz ist mit Z-Tyr-NHNH_O identisch.

/16

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Claims

- 16 - Fw 5335 a

Patentanspruch

Verfahren zur Herstellung von tyrosinhaltigen Peptiden,

nach Patent (Patentanmeldung F 5I 685 IVb/12 q,

(Fw 5335))» dadurch gekennzeichnet, daß in dem Tyrosinbaustein der Formel I anstelle des Restes OR eine NHR₁-Gruppe vorhanden ist, in der R₁ ein Wasserstoffatorn, einen Alkyl-, Aralkyl- oder Arylrest bedeutet, und man die Abspaltung der Schutzgruppe mit den im Hauptpatent genannten Reagentien mit Ausnahme von Monoacylhydrazinen vornimmt 1

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