DE1493877B1

DE1493877B1 - L-Tryptophenyl-L-methionyl-L-aspartyl-L-phenylalaninamid und Verfahren zu dessen Herstellung

Info

Publication number: DE1493877B1
Application number: DE19651493877
Authority: DE
Inventors: Sheppard Robert Charles; Hardy Paul Martin; Morley John Selwyn; Kenner George Wallace
Original assignee: Imperial Chemical Industries Ltd
Current assignee: Imperial Chemical Industries Ltd
Priority date: 1964-06-25
Filing date: 1965-06-24
Publication date: 1972-05-31
Also published as: CH453380A; GB1042484A; DE1493877C2; NL6508229A; SE313573B; FR1455176A

Description

NH₂ — CH · CO ■ NH · CH · CO ■ NH · CH · CO · NH · CH · CO ■ NH₂

und dessen Salze mit pharmakologisch verträglichen Säuren.

2. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man bei einer Verbindung der Formel

CH₂ · SCH₃ COOR

CH₂

C₆H₅
CH₂

X — NH·CH·CO·NH·CH·CO■NH·CH·CO·NH·CH·CO·NH₂

wobei X eine Schutzgruppe und R ein Wasserstoffatom oder ein Alkylradikal darstellt, die Schutzgruppen X und die Gruppe R in an sich bekannter Weise abspaltet, wobei X insbesondere das tert.- 30

Butyloxycarbonyl- oder p-Methoxybenzyloxycarbonylradikal und R ein Alkylradikal mit höchstens 4 Kohlenstoffatomen darstellt und man das Verfahren unter sauren Bedingungen durchführt.

Die Erfindung betrifft L-Tryptophanyl-L-methionyl-L-aspartyl-L-phenylalaninamid der Formel

HN

C₆H₅

CH₂SCH₃ COOH

\ I I I

CH₂ CH₂ CH₂ CH₂
NH₂ ·CH·CO·NH·CH·CO■NH·CH·CO·NH■CH·CO·NH₂

und dessen Salze mit pharmakologisch verträglichen Säuren und ein Verfahren zur Herstellung derselben.
Als geeignete Salze des Tetrapeptidderivats kann man z. B. das Trifluoracetat oder Hydrochlorid erwähnen. Das Verfahren der Erfindung besteht darin, daß bei einer Verbindung

HN

CH,

CH₂ · SCH₃ COOR CH₂ CH₂

C₆H₅
CH₂

NH·CH■CO·NH·CH·CO·NH■CH·CO·NH·CH·CO■NH,

wobei X eine Schutzgruppe und R ein Wasserstoff- das ter.-Butyloxycarbonyl- oder p-Methoxybenzyl-

atom oder ein Alkylradikal darstellt, die Schutz- 65 oxycarbonylradikal erwähnen,

gruppe X und gegebenenfalls auch die Gruppe R je- Stellt R ein Alkylradikal dar, so kann dieses z. B.

weils durch ein Wasserstoffatom ersetzt wird. ein solches mit höchstens 4 Kohlenstoffatomen, wie

Als eine geeignete Schutzgruppe X kann man z. B. z. B. das tert-Butylradikal sein.

OWGINAL INSPECTED

Die Substitution von X und gegebenenfalls auch von R kann zweckmäßig unter sauren Bedingungen, z. B. in Gegenwart von Chlorwasserstoff oder Trifiuoressigsäure, und in Gegenwart von einem Verdün-

Die Verbindungen der Formel

nungs- oder Lösungsmittel, wie z. B. Äthylacetat, Essigsäure oder Wasser, bei einer zwischen 0⁰C und der Umgebungstemperatur liegenden Temperatur erfolgen.

X-HN

CH₂ · SCH₃ COOR C₆H₅

CH₂ CH₂ CH₂ CH₂

CH·CO·NH·CH■CO·NH·CH·CO·NH·CH·CONH₂

bei welchen X und R die oben angegebenen Bedeutungen haben und welche als Ausgangsstoffe beim Verfahren nach der Erfindung verwendet werden, werden nachstehend als die Verbindungen der Formel I bezeichnet. Solche Verbindungen können dadurch hergestellt werden, daß ein geschütztes Derivat des L-Tryptophans der Formel

HN

CH,

X·NH·CH·COOH

bei dem X die oben angegebene Bedeutung hat und die Carboxylgruppe in an sich bekannter Weise aktiviert worden ist, mit L-Methionyl-L-aspartyl-L-phenylalaninamid oder einem Ester davon mit der Formel

CH₂ · SCH₃ COOR

CH₇

CH₂ C₆H₅

CH,

H₂N · CH · CO · NH · CH · CO · NH · CH · CONH₂

wobei R die oben angegebene Bedeutung hat, oder mit einem Salz davon zur Reaktion gebracht wird.

Diese Reaktion kann zweckmäßig in Gegenwart von einem Verdünnungs- oder Lösungsmittel, wie z.B. Dimethylformamid, bei etwa O bis 5°C durchgeführt werden. Wird der Phenylalanin-Reaktionsteilnehmer in Form eines Salzes, z. B. des Hydrochloride, verwendet, so erfolgt die Reaktion vorzugsweise in Gegenwart von einer tertiären Base, wie z. B. Tnäthylamin.

Die Carboxylfunktion des L-Tryptophan-Reaktionsteilnehmers kann z. B. dadurch aktiviert werden, daß ein gemischtes Anhydrid durch Reaktion mit einem Derivat einer sterisch gehinderten organischen Säure, wie z. B. Pivaloylchlorid, oder durch Reaktion mit einem Derivat einer Kohlensäure, wie z. B. Äthylchlorformat, gebildet wird oder daß ein aktives Ester, wie z. B. ein Nitrophenylester oder Chlorphenylester wie ein p-Nitrophenylester oder 2,4,5-Trichlorphenylester, gebildet wird oder daß ein Äzid gebildet wird oder ein Kondensierungsmittel, wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid oder Ν,Ν'-Carbonyl-bis-imidazol, verwendet wird.

Die Art der Aktivierung einer Carboxylgruppe hängt bekannterweise von der Struktur der Aminosäure selbst und von der Struktur der vorhandenen Schutzgruppe ab. Ist die Carboxylgruppe also nicht an einem asymmetrischen Kohlenstoffatom einer Aminosäure angebunden, oder ist sie doch an einem asymmetrisehen Kohlenstoffatom einer Aminosäure angebunden, bei der aber die Aminogruppe durch Acylierung mit einem die Oxycarbonylgruppe (—O-CO—) enthaltenden Radikal geschützt wird, derart, daß eine Gruppe der Formel

45 — O CO NH-

gebildet wird, so kann jede der erwähnten Methoden angewandt werden. Ist aber die Carboxylgruppe an einem asymmetrischen Kohlenstoffatom einer Aminosäure angebunden, bei welcher die Aminogruppe durch eine Gruppe geschützt wird, die ein die Gruppe

— OCO-NH-

enthaltendes Radikal nicht bildet, so wird die Carboxylgruppe vorzugsweise durch Bildung eines Azids aktiviert.

Der beim Verfahren nach der Erfindung als Ausgangsstoff verwendete L-Methionyl-L-aspartyl-L-phenylalanin-Reaktionsteilnehmer kann — wie in der deutschen Offenlegungsschrift 1 493 884 beschrieben — dadurch erzeugt werden, daß ein geschütztes Derivat des L-Methionins mit L-Aspartyl-L-phenylalaninamid oder einem Ester davon zur Reaktion gebracht und die Schutzgruppe nachträglich vom Produkt entfernt wird.

Die Verbindungen der Formel I können aber auch dadurch hergestellt werden, daß ein geschütztes Deri-

vat des L-Tryptophanyl-L-methionins der Formel

HN

CH, · SCH,

CH₂ CH₂

X·NH·CH·CO·NH■CH■ COOH

wobei X die oben angegebene Bedeutung hat und die Carboxylgruppe in an sich bekannter Weise aktiviert worden ist, mit L-Aspartyl-L-phenylalaninamid oder einem Ester davon mit der Formel

COOR C₆H₅

CH₂ CH₂

I I

H₂N ■ CH ■ CO · NH · CH CONH₂

Die Reaktionsbedingungen und die Methoden zur Aktivierung der Carboxylgruppe bei der Reaktion von einem geschützten Derivat des L-Tryptophans, das eine aktivierte Carboxylgruppe enthält, mit L-Methionyl - L - aspartyl - l - phenylalaninamid oder einem Ester davon oder einem Salz davon können mit den nötigen Abänderungen auch beim letztgenannten Verfahren für zwei Dipeptid-Reaktionsteilnehmer angewandt werden.

Der L - Tryptophanyl -L- methionin - Reaktionsteilnehmer kann durch Reaktion eines geschützten Derivats des L-Tryptophans mit einem Ester des Methionins mit nachträglicher Umsetzung der Estergruppe im Produkt in die Hydrazidgruppe mit nachträglicher Umsetzung der Hydrazidgruppe in an sich bekannter Weise in die Azidgruppe hergestellt werden. Der L - Aspartyl - L - phenylalanin - Reaktionsteilnehmer kann gemäß der deutschen Offenlegungsschrift 1 493 875 hergestellt werden.

Die Verbindungen der Formel I, bei denen R Wasserstoff darstellt, können auch durch Reaktion von Ammoniak mit einem geschützten L-Tryptophanyl-L - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninester der Formel

HN

CH₂

CH, · SCH,

CH, COOH
CH,

CH,

X·HN■CH·CO■NH·CH■CO·NH■CH■CO·NH·CH■COOR'

wobei R' ein Alkyl- oder Aralkylradikal darstellt und X die oben angegebene Bedeutung hat, hergestellt werden.

Der Substituent R' kann ein Alkylradikal mit höchstens 6 Kohlenstoffatomen, wie z. B. das Methyl-, Äthyl- oder tert.-Butylradikal, oder das Benzylradikal sein. Die Reaktion kann zweckmäßig in einem Verdünnungs- oder Lösungsmittel, wie z. B. Methanol, erfolgen.

Das beim letztgenannten Verfahren als Ausgangsstoff verwendete geschützte Ester kann dadurch erzeugt werden, daß ein geschütztes Derivat des L-Tryptophanyl-L-methionins der Formel

HN

CH₂ · SCH₃

CH₂ CH₂

X-HN-CH-CO-NH-CH-COOH

wobei X die oben angegebene Bedeutung hat und die Carboxylgruppe in an sich bekannter Weise aktiviert worden ist, mit einem Ester des L-Aspartyl-L-phenylalanins der Formel

COOH C₆H₅

CH₂ CH₂

H₂N ■ CH · CO · NH ■ CH ■ COOR'
wobei R' die oben angegebene Bedeutung hat, oder mit einem Salz davon zur Reaktion gebracht wird.

Die Reaktionsbedingungen und die Methoden zur

Aktivierung der Carboxylgruppe bei der Reaktion von einem geschützten Derivat des L-Tryptophans, das eine aktivierte Carboxylgruppe enthält, mit L-Methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamid oder einem Ester davon oder einem Salz davon können mit den nötigen Abänderungen auch beim letztgenannten Verfahren angewandt werden.
Wie oben angegeben, sind die Tetrapeptidderivate nach der Erfindung als Zwischenprodukte und auch als therapeutische Mittel verwendbar. Sie können z. B. als Ausgangsstoffe bei der Synthese von Tetrapeptidderivaten, die als diagnostische und therapeutische Mittel verwendbar sind und Gegenstand der deutschen Offenlegungsschrift 1 493 878 sind, verwendet werden. Weiterhin haben die Tetrapeptidderivate nach der Erfindung therapeutische Eigenschaften, indem sie die Sekretion von Säure im Magen hemmen und dadurch zur Behandlung von Magen- und Duodenalgeschwüren bei Menschen verwendbar sind.

Die Erfindung wird nachstehend an Hand von Ausführungsbeispielen beispielsweise näher erläutert, wobei alle Mengenangaben auf das Gewicht bezogen sind:

60

Beispiel 1

Es werden 500 Teile N^a-(tert.-Butyloxycarbonyl)-L - tryptophanyl - L - methionyl - (ß - tert. - butyl)-L-aspartyl-L-phenylalaninamid in eine gerührte Mischung von 2450 Teilen Trifluoressigsäure und 400 Teilen Wasser bei O⁰C hineingegeben. Die entstehende Lösung wird 2 Stunden bei 18 bis 2O⁰C gerührt, worauf 12000 Teile Äther zugegeben werden.

Die Mischung wird auf 0° C während 10 Minuten gehalten und dann gefiltert. Der feste Rückstand wird 3mal mit Äther gewaschen un d anschließend bei 50⁰C unter einem Druck von 20 mm Quecksilbersäule getrocknet. Somit erhält man L-Tryptophanyl-L-methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamidtrifluoracetat, (Schmp. 185 bis 19O⁰C mit Aufsprudeln).

Das als Ausgangsstoff verwendete N^a-(tert.-Butyloxycarbonyl) -L- tryptophanyl - L - methionyl- {ß - tert. - butyl) - L - aspartyl - L - phenylalaninamid kann wie folgt hergestellt werden: Eine Lösung von 251 Teilen l - Methionyl - (ß - tert. - butyl) - L - aspartyl-L - phenylalaninamidhydrochlorid in 2000 Teilen Dimethylformamid wird auf 10⁰C gekühlt und dann mit 50,5 Teilen Triäthylamin behandelt. Dann werden 241 Teile N" - (tert. - Butyloxycarbonyl) - l - tryptophan - 2,4,5 - trichlorphenylester unter Rührung bei O⁰C zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird 16 Stunden auf O⁰C gehalten, worauf 10000 Teile Äther und 10000 Teile Wasser zugegeben werden. Die Mischung wird gefiltert, und der feste Rückstand wird aus Äthanol umkristallisiert. Somit erhält man N^a-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl - l - methionyl- (ß - tert. - butyl) - L - aspartyl - L - phenylalaninamid (Schmp. 175 bis 1'76⁰C).

Bei Wiederholung des beschriebenen Verfahrens werden die 241 Teile N" - (tert. - Butyloxycarbonyl)-L - tryptophanyl - 2,4,5 - trichlorphenylester durch 213 Teile N^a - (tert. - Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl - ρ - nitrophenylester ersetzt, wobei man auch das erwünschte Produkt (Schmp. 175 bis 176° C) erhält.

Das als Ausgangsstoff verwendete N^a-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophan - 2,4,5 - trichlorphenylester kann wie folgt hergestellt werden: Eine gerührte Lösung von 608 Teilen N^a - (tert. - Butyloxycarbonyl) - L - tryptophan und 434 Teilen 2,4,5 - Trichlorphenol in 6000 Teilen Äthylacetat wird mit 412 Teilen HN'-Dicyclohexylcarbodiimid bei 0 bis 5° C behandelt. Das Reaktionsgemisch wird noch 4 Stunden bei 0 bis 5° C gerührt und anschließend gefiltert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft, und der Verdampfungsrückstand wird aus Äthanol umkristallisiert. Somit erhält man N^a-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophan - 2,4,5 - trichlorphenylester (Schmp. 125 bis 126°C).

In ähnlicher Weise erhält man N°4tert.-Butyloxycarbonyl) -L- tryptophan - ρ - nitrophenylester (Schmp. 116 bis 117° C), wenn die 345 Teile 2,4,5-Trichlorphenol durch 306 Teile p-Nitrophenol ersetzt werden.

Das als Ausgangsstoff verwendete L-Methionyl- (ß - tert. - butyl) -L- aspartyl - L - phenylalaninamidhydrochlorid kann wie folgt hergestellt werden: Eine Lösung von 323 Teilen N-Carbobenzoxy-(/?-tert.-butyl)-L-asparaginsäure in 2000 Teilen Tetrahydrofuran wird auf -10⁰C gekühlt, worauf 101 Teile Triäthylamin und dann 108 Teile Äthylchlorformat bei —15 bis — 10⁰C zugegeben werden. Die Mischung wird weitere 20 Minuten bei —15 bis — 10⁰C gerührt, worauf eine Lösung von 224 Teilen L-Phenylalaninamidacetat in 4000 Teilen Chloroform und 101 Teilen Triäthylamin anteilsweise bei —10 bis —5° C zugegeben wird. Das Reaktionsgemisch wird noch 2 Stunden bei 0 bis 5° C gerührt und dann 16 Stunden auf 18 bis 22⁰C gehalten. Die Lösungsmittel werden dann unter vermindertem Druck abgedampft, worauf der Verdampfungsrückstand mit einer Mischung von

20000 Teilen Äthylacetat und 2000 Teilen Wasser verrührt wird. Die Äthylacetatschicht wird vom Gemisch abgetrennt und dann nacheinander mit 2000 Teilen einer 10%igen wässerigen Zitronensäurelösung, 2000 Teilen Wasser, 2000 Teilen n-Kaliumbicarbonatlösung und schließlich 3mal mit je 2000 Teilen Wasser gewaschen. Sie wird dann über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und bis auf ein Viertel ihres Volumens eingedampft. Dabei scheiden farblose Kristalle aus, die bei 10⁰C abgefiltert und anschließend aus Isopropanol umkristallisiert werden. Somit erhält man N - Carbobenzoxy - (ß - tert. - butyl) - L - aspartyl-L-phenylalaninamid (Schmp. 158,5 bis 159⁰C). Eine Lösung von 235 Teilen dieser Verbindung in 7500 Teilen Methanol wird mit 25 Teilen eines 5%igen Palladium-auf-Holzkohle-Katalysators vermengt, worauf Wasserstoff bei 18 bis 22° C unter normalem Druck 5 Stunden in die Mischung eingeblasen wird. Das Reaktionsgemisch wird zum Entfernen des Katalysators gefiltert, und das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird mit 1000 Teilen Äther verrührt. Die Mischung wird gefiltert, und der feste Rückstand wird aus Benzol umkristallisiert. Somit erhält man (ß-tert.-Butyl)-L-aspartyl-L-phenylalaninamid (Schmp. 123 bis 124° C). Frisch hergestelltes N - (o - Nitrophenylsulfenyl)-L-methionin (aus 678 Teilen des Dicyclohexylammoniumsalzes) wird in 15000 Teilen Chloroform gelöst, worauf470 Teile (ß - tert. - Butyl) - L - aspartyl - l - phenylalaninamid zugegeben werden. Die Mischung wird auf 0°C gekühlt, 317 Teile Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid werden zugesetzt, und das Reaktionsgemisch wird 18 Stunden auf 0⁰C gehalten. Es wird dann genügend Essigsäure zugegeben, um das überschüssige HN'-Dicyclohexylcarbodiimid zu zersetzen, worauf die so erhaltene Mischung gefiltert wird. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft, und der Verdampfungsrückstand wird mit 7500 Teilen Tetrahydrofuran verrührt. Die Mischung wird gefiltert, und das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird dann mit 2000 Teilen Äther verrührt, und diese Mischung wird gefiltert. Der feste Rückstand wird aus Äthanol umkristallisiert. Somit erhält man N-(o-Nitrophenylsulfenyl) - L - methionyl - (ß - tert. - butyl) -L- aspartyl-L-phenylalaninamid als gelbes kristallförmiges Produkt (Schmp. 168 bis 169° C). Eine Lösung von 310 Teilen dieser Verbindung in 7500 Teilen kochenden Chloroforms wird rasch auf 15⁰C gebracht. Dann werden 300 Teile Äther, die 36,5 Teile trockenen Chlorwasserstoff enthalten, anteilsweise bei 10 bis 15⁰C unter Rührung zugegeben. Die Mischung wird noch 5 Minuten bei 15 bis 20⁰C gerührt und anschließend gefiltert. Der feste Rückstand wird mit Äther gewaschen und dann in 2000 Teilen kalten Äthanols aufgelöst. Die Lösung wird 1 Stunde auf 20⁰C gehalten, worauf das ausscheidende farblose Produkt abgefiltert wird. Somit erhält man das Hydrochlorid des L-Methionyl-(/J-tert.-butyl)-L-aspartyl-L-phenylalaninamid (Schmp. 202 bis 203° C mit Aufsprudeln).

Beispiel 2

Einer gerührten Mischung von 612 Teilen Trifluoressigsäure und 100 Teilen Wasser werden 174 Teile N - (tert. - Butyloxycarbonyl) -L- tryptophanyl - l - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamid bei 10⁰C zugegeben. Die entstehende Lösung wird 1 Stunde bei

209 523/496

18 bis 20°C gerührt, worauf 3000 Teile Äther zugegeben werden. Die Mischung wird auf 0°C während 10 Minuten gehalten und dann gefiltert. Der feste Rückstand wird 3mal mit Äther gewaschen und anschließend bei 50° C unter einem Druck von 20 mm Quecksilbersäule getrocknet. Somit erhält man L-Tryptophanyl - L - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamidtrifluoracetat (Schmp. 185 bis 190⁰C mit Aufsprudeln). Bei der Analyse mittels Dünnschichtchromatographie unter Anwendung von Silikagel als Absorbens und von einem Lösungssystem, bestehend aus 7 Teilen n-Butanol, 1 Teil Essigsäure und 2 Teilen Wasser, ließ Ninhydrin einen einzigen Fleck von R_F 0,61 erscheinen.

Das als Ausgangsstoff verwendete N-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl - L - methionyl-L-aspartyl-L-phenylalaninamid kann nach einem der folgenden Verfahren hergestellt werden.

(a) Es werden 218 Teile N-(tert.-Butyloxycarbonyl)-

L - tryptophan - 2,4,5 - trichlorphenylester, 185 Teile L - Methionyl -L- aspartyl - L - phenylalaninamid, 45,6 Teile Triäthylamin, 4000 Teile Dimethylformamid und 500 Teile Wasser 48 Stunden bei 0°C verrührt, worauf die Mischung 24 Stunden bei 20 bis 25° C gerührt wird. Der pH-Wert der Mischung wird durch sorgfältiges Zugeben von 2 n-Salzsäurelösung bei 0⁰C auf 2 eingestellt, und dann werden 15000 Teile Eiswasser unter Rührung zugegeben. Der Feststoff wird abgefiltert, mit Wasser gewaschen und dann, in Mischung mit 8000 Teilen kochenden Äthanols, schwach erhitzt. Die Mischung wird abgekühlt und gefiltert, worauf der feste Rückstand mit Äthanol gewaschen und anschließend unter vermindertem Druck bei 40 bis 5O⁰C getrocknet. Somit erhält man N-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl -L- methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamid (Schmp. 209 bis 210⁰C mit Aufsprudeln).

Das L - Methionyl - L - aspartyl -L- phenylalaninamid (Schmp. 223 bis 225⁰C mit Aufsprudeln) kann gemäß Beispiel 1 der britischen Patentanmeldung 35985/64 hergestellt werden.

(b) Eine Suspension von 225 Teilen N-tert.-Butyloxycarbonyl -L- tryptophanyl -L- methioninhydrazid in 500 Teilen Tetrahydrofuran wird auf — 20⁰C gekühlt, worauf 500 Teile trockenen Tetrahydrofurans, die 36,5 Teilen trockenen Chlorwasserstoffs enthalten, unter starker Rührung bei —20 bis —25° C zugegeben werden. Die entstehende Lösung wird dann mit 61 Teilen n-Butylnitrit behandelt und dann noch 6 Minuten bei —20 bis —25° C gerührt. Die mattgrüne Lösung wird dann einer Lösung von 140 Teilen L-Aspartyl-L-phenylalaninamid in 2000 Teilen Dimethylformamid, 100 Teilen Wasser und 151,5 Teilen Triäthylamin bei 0⁰C zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird 2 Tage auf 0°C gehalten, worauf 10000 Teile Eiswasser zugegeben werden. Die Mischung wird gefiltert, und der feste Rückstand wird mit Wasser gewaschen und aus Äthanol umkristallisiert. Somit erhält man N - (tert. - Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl-L - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamid (Schmp. 209 bis 210⁰C mit Aufsprudeln).

Das N - (tert. - Butyloxycarbonyl) - l - tryptophanyl - L - methioninhydrazid, das als Ausgangsstoff verwendet wird, kann wie folgt hergestellt werden: Eine Suspension von 200 Teilen L-Methioninmethylesterhydrochlorid in 1500 Teilen Chloroform wird bei 0⁰C gerührt und mit 101 Teilen Triäthylamin behandelt. Die Mischung wird bei 0⁰C so lange gerührt, bis der Feststoff gänzlich aufgelöst ist, worauf 304 Teile N - (tert. - Butyloxycarbonyl) -L- tryptophan und dann 206 Teile N,N' - Dicyclohexylcarbodiimid bei 0 bis 5°C zugegeben werden. Das Reaktionsgemisch wird 18 Stunden auf 0⁰C gehalten und dann gefiltert. Das Filtrat wird nacheinander mit einer 10%igen wässerigen Natriumchloridlösung (200 Teilen), einer 10%igen wässerigen Zitronensäurelösung (200 Teilen), einer 10%igen wässerigen Natriumchloridlösung (200 Teilen), einer n-Kaliumbicarbonatlösung (200 Teilen) und einer 10%igen wässerigen Natriumchloridlösung (3mal mit je 200 Teilen). Es wird dann an wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und anschließend unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird in 800 Teilen Diisopropyläther gelöst, und die Lösung wird 1 Stunde auf 0⁰C gehalten. Die Kristalle werden dann abgefiltert und bei 40⁰C getrocknet (unter vermindertem Druck). Somit erhält man N-(tert.-Butyloxycarbonyl)-L - tryptophanyl - l - methioninmethylester (Schmp. 98 bis 99°C) als farblose Nadeln. In 500 Teilen Methanol werden 225 Teile dieses Esters aufgelöst. Die Lösung wird auf 0⁰C gekühlt und dann mit 55 Teilen 100%igen Hydrazinhydrats behandelt. Das Reaktionsgemisch wird 16 Stunden auf 20 bis 22⁰C gehalten und dann gefiltert. Der feste Rückstand wird mit Methanol gewaschen und anschließend bei 40⁰C unter vermindertem Druck getrocknet. Somit erhält man N - (tert. - Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl-L-methioninhydrazid (Schmp. 177 bis 178⁰C mit Aufsprudeln).

Das L - Aspartyl -L- phenylalaninamid (Schmp. 188°C mit Aufsprudeln) kann nach Beispiel 1 oder 2 der britischen Patentanmeldung 26 353/64 hergestellt werden.

(c) Eine Lösung von 360 Teilen N-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl - L - methioninhydrazid in 5200 Teilen Dimethylformamid wird auf -10⁰C gebracht, worauf 2000 Teile n-Salzsäurelösung und dann 4350 Teile 0,2 n-Natriumnitritlösung bei -10°C zugegeben werden. Die Mischung wird 3 Minuten bei -1O⁰C gerührt, worauf 30000 Teile Wasser und anschließend 5800 Teile n-Natriumbicarbonatlösung und 4000 Teile Methylenchlorid zugegeben werden. Die untere organische Schicht wird vom Gemisch abgetrennt, und die wässerige Schicht wird 2mal mit je 4000 Teilen Methylenchlorid extrahiert. Die organische Schicht und die Extrakte werden zusammengebracht und dadurch getrocknet, daß sie 5 Minuten mit wasserfreiem Magnesiumsulfat verrührt werden, worauf die Mischung gefiltert wird. Das Filtrat wird sofort einer Lösung von 274 Teilen L-Aspartyl-L-phenylalaninmethylesterhydrochlorid in 10000 Teilen Dimethylformamid und 162 Teilen Triäthylamin bei — 10⁰C zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird 24 Stunden auf 0⁰C gehalten, worauf das Methylenchlorid unter vermindertem Druck bei 0° C zum größten Teile entfernt wird. Das Reaktionsgemisch wird noch 20 Stunden auf 0⁰C und dann 4 Stunden auf 20 bis 22°C gehalten. Dann werden 40000 Teile Methylenchlorid zugegeben, und die Lösung wird nacheinander mit 20000 Teilen einer 5%igen wässerigen Zitronensäurelösung und 2mal mit je 20000 Teilen Wasser gewaschen. Die Lösung wird dann an wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und gefiltert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft, und der Verdampfungsrückstand wird aus einer wässerigen Methanollösung umkristallisiert. Somit erhält

man N - (tert. - Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl-L - methionyl - L - aspartyl -L- phenylalaninmethylester (Schmp. 167 bis 169° C) als weißen kristallförmigen Feststoff.

Bei der Analyse des Produkts mittels Dünnschicht-Chromatographie unter Anwendung von Silikagel als Absorbens und von einem Lösungssystem, bestehend aus 100 Teilen sek.-Butanol und 44 Teilen einer 3%igen wässerigen Ammoniaklösung, erschien ein einziger Fleck von R_F0,61. Bei einer ähnlichen Analyse des Produkts unter Anwendung von einem Lösungssystem, bestehend aus der oberen Schicht einer Mischung von 25 Teilen n-Butanol, 6 Teilen Essigsäure und 25 Teilen Wasser, erschien ein einziger Fleck von R_F 0,50.

Es werden 100 Teile dieses Methylesters mit 10000 Teilen trockenem, mit Ammoniak gesättigtem Methanol 72 Stunden bei 20 bis 22° C verrührt. Das Reaktionsgemisch wird unter vermindertem Druck eingedampft, und der Rückstand wird in 2000 Teilen Methanol gelöst. Eine 5%ige wässerige Zitronensäurelösung wird tropfenweise unter Rührung zugegeben, bei 15 bis 20⁰C, bis der pH-Wert 2 bis 3 beträgt. Der dabei ausgeschiedene Feststoff wird abgefiltert, mit Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck bei 40⁰C getrocknet. Somit erhält man N-(tert.-Butyloxycarbonyl) - L - tryptophanyl - L - methionyl - L - aspartyl - L - phenylalaninamid (Schmp. 209 bis 210°C mit Aufsprudeln).

Das als Ausgangsstoff verwendete L-Aspartyl-L-phenylalaninmethylesterhydrochlorid kann wie folgt hergestellt werden: In 1200Teilen Methylenchlorid werden 465 Teile N-Benzyloxycarbonyl-(/S-benzyl)-L-asparaginsäure und 280 Teile L-Phenylalaninmethylesterhydrochlorid aufgelöst. Es werden 132 Teile Triäthylamin und dann 294 Teile Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid bei 0°C zugegeben, worauf die Mischung 1 Stunde bei 0° C und dann 16 Stunden bei 20 bis 22° C gerührt wird. Die Mischung wird gefiltert, und das Filtrat wird nacheinander mit 500 Teilen n-Salzsäurelösung, 500 Teilen Wasser, 500 Teilen n-Natriumbicarbonatlösung und 500 Teilen Wasser gewaschen und anschließend an wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird aus einem Gemisch von Äthylacetat und Petroläther (Sdp. 60 bis 8O⁰C) umkristallisiert.

Somit erhält man N-Carbobenzoxy-(/?-benzyl)-L - aspartyl - L - phenylalaninmethylester (Schmp. 115 bis 116° C). Eine Mischung von 312 Teilen dieses Esters, 4000 Teilen Methanol und 300 Teilen 2 n-Salzsäurelösung wird mit 50 Teilen eines 10%igen Palladiumauf-Holzkohle-Katalysators verrührt, wobei in die Mischung Wasserstoff 3 Stunden bei 18 bis 22° C unter Atmosphärendruck eingeblasen wird. Das Reaktionsgemisch wird zum Entfernen des Katalysators gefiltert, und das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird bei 40° C unter vermindertem Druck getrocknet. Somit erhält man L - Aspartyl - l - phenylalaninmethylesterhydrochlorid (Schmp. 105 bis HO⁰C).

Claims

Patentansprüche:
1. L-Tryptophanyl-L-methionyl-L-aspartyl-L-phenylalaninamid der Formel

CH₂ · SCH₃

COOH

C₆H

₆H₅

HN