DE1262512B - Stabilisierte germicide Massen auf der Basis von Halogensalicylaniliden - Google Patents

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. Cl.:

A 611

Deutsche Kl.: 3Oi-3

Nummer: 1262 512

Aktenzeichen: St 23271IV a/30 i

Anmeldetag: 27. Januar 1965

Auslegetag: 7. März 1968

Die Erfindung betrifft germicide Massen aus direkt halogenierten Halogensalicylanilid-Germiciden unter Zugabe eines kleineren Anteils von Halogensalicylanilid-Germiciden, die Trifluormethylgruppen enthalten. Bekannt sind baktericide Mittel, die aus einer Kombination eines halogenierten Salicylanilids und einer halogenierten Trifluormethyl-diphenylharnstoff-Verbindung bestehen. Diese haben die Eigenschaft, ihre Wirksamkeit zu verlieren, wenn der Inkubationszeitraum ansteigt. Wenn beispielsweise 3,5,4'-Tribromsalicylanilid in germicidwirksamen Mengen in eine z. B. E. coli enthaltende Nährlösung eingebracht wird, kann der Hemmindex nach 6tägiger Inkubierung auf nur etwa 70% der ursprünglichen Wirksamkeit abfallen. Dasselbe ist der Fall bei den mit Trifluormethyl substituierten Salicylaniliden, beispielsweise dem 3,5-Dibrom-3'-trifluormethylsalicylanilid. Offensichtlich erleiden diese beiden Verbindungsarten dieselbe Art von Zersetzung während des Inkubationszeitraums, so daß sich ein signifikanter Verlust der Aktivität ergibt.

Es wurde gefunden, daß die Zugabe von mit Trifluormethyl substituierten Halogensalicylaniliden in Mengen von 5 bis 45% zu direkt halogenierten Salicylaniliden eine ausgeprägte Stabilisierung der letzteren bewirkt, so daß diese letztere Verbindungen ihre Aktivität während längerer Inkubationszeiträume stärker beibehalten.

Die direkt halogenierten Salicylanilide, die erfindungsgemäß in Betracht kommen, sind die 3,5,4'-Trihalogensalicylanilide in synergistischem Gemisch mit 5,4'-Dihalogensalicylaniliden, dem in der USA.-Patentschrift 2 906 711 beschriebenen Gemisch. Die Trihalogensalicylanilide entsprechen der allgemeinen Formel

OH

worin X eines der Halogene Chlor, Brom oder Jod bedeutet. Die Dihalogensalicylanilide, die in synergistischem Gemisch mit den vorstehend aufgeführten Trihalogenverbindungen vorliegen, entsprechen der allgemeinen Formel
OH ₀

Stabilisierte germicide Massen auf der Basis
von Halogensalicylaniliden

Anmelder:

Stecker International S. p. A., Mailand (Italien)

Vertreter:

Dr. K. Th. Hegel, Patentanwalt,

2000 Hamburg 50, Große Bergstr. 223

Als Erfinder benannt:

Dr. Herbert Christian Stecker, Ho-Ho-Kus, N. J.

(V. St. A.)

Beanspruchte Priorität:

V. St. v. Amerika vom 29. Januar 1964 (341029)

worin X eines der Halogene Chlor, Brom oder Jod bedeutet. Derartige Verbindungen sind in der USA.-Patentschrift 3.041 236 beschrieben.

Als Beispiele für Trihalogensalicylanilide seien 3,5,4'-Tribromsalicylanilid, 3,5,4'-Trijodsalicylanilid u. ä. aufgeführt. Als Beispiele für in synergistischem Gemisch verwendbare Dihalogensalicylanilide seien S^'-Dichlorsalicylanilid, 5-Chlor-4'-bromsalicylanilid, 5-Brom-4'-chlorsalicylanilid, 5-Jod-4'-bromsalicylanilid u. ä. erwähnt.

Die in kleineren Anteilen zu den vorstehenden Verbindungen zuzugebenden Stabilisierverbindungen entsprechen der allgemeinen Formel

O H

C-N

worin X Chlor, Brom, Jod oder Wasserstoff bedeutet und α eine Zahl zwischen 0 und 2 darstellt, wobei mindestens eines und nicht mehr als drei direkt gebundene Halogenatome, d. h. direkt an einen aromatischen Ring gebunden, vorhanden sind, wovon keines zu einem anderen oder zur CFe-Gruppe benachbart steht. Beispiele für derartige Stabilisierverbindungen sind 3,5-DibrOm-3'-trifluorrnethylsalicylanilid, 5 - Chlor - 3' - trifluormethylsalicylanilid, 5 - Jod - 3' - trifluormethylsalicylanilid, 3,5 - Dichlor-

809 S17/646

3' - trifluormethylsalicylanilid, 5 - Chlor - 3' - trifluormethyl-5'-chlorsalicylanilid u. ä. Diese Stabilisierverbindungen werden in etwa 5 bis etwa 45 Gewichtsprozent, bezogen auf das gesamte germicide Gemisch, zu den direktgebundenen halogenierten SaIicylaniliden, die keine Trifluormethylgruppen aufweisen, zugegeben.

Die folgenden Beispiele, die bevorzugte Ausführungsformen beschreiben, dienen zur weiteren Erläuterung der Erfindung, ohne sie zu begrenzen.

Beispiel 1

100 mg eines synergistischen Gemisches aus erstens 80 Gewichtsprozent 3,5,4'-Tribromsalicylanilid und 20 Gewichtsprozent von 5,4'-Dibromsalicylanilid (anschließend als Syn. SA bezeichnet) und zweitens von S^-Dibrom-S'-trifluormethylsalicylanilid (anschließend als TFSA bezeichnet) wurden in jeweils 10 ml Aceton gelöst. Jede Lösung in Aceton wurde mit ausreichend Gehirn-Herz-Infusionsbrühe vermischt, so daß sich zwei getrennte Anteile von 1000 ml ergaben. Jeder stellte eine Verdünnung von 1 : 10 000 dar und bestand aus klarer Lösung. Zwei Tropfen eines Antischaummittels wurden zugegeben, um ein anschließendes Schäumen beim Schütteln zu verhüten. Aus jedem Gemisch wurden Verdünnungen in 10-ml-Mengen in sterilen Kulturrohren hergestellt, die bis zu Konzentrationen von 1 : 250 000 gingen. Es wurden vierzehn solche Verdünnungen hergestellt.

Es wurden drei Kombinationen von Syn. SA und TFSA hergestellt, indem die Verdünnungen von 1 : 10 000 in folgenden Verhältnissen vermischt wurden:

A. 95 ml Syn. SA 1

5 ml TFSA 1

B. 90 ml Syn. SA 1

10 ml TFSA 1

C. 75 ml Syn. SA 1

25 ml TFSA 1

10 000
10 000
10 000
10 000
10 000
10 000

Es wurden vierzehn Verdünnungen jeder dieser Kombinationen in gleichen Konzentrationen wie bei Syn. SA und TFSA hergestellt. -Vioml einer 24 Stunden alten Kulturbrühe von E. coli wurde in sämtliche Rohre und ebenso zu einer Kontrollprobe der Infusionslösung zugegeben. Die Dichten sämtlicher Kulturen wurden vor der Inkubierung bestimmt und nach 2 Tagen, 3 Tagen und 6 Tagen Inkubierung bei 37° C. Der Hemmindex (LI.) wurde aus jeder der fünf'Reihen von Verdünnungen für jeden Zeitraum errechnet und Vergleiche angestellt. Die bei diesen Versuchen erhaltenen Werte sind in Tabelle I aufgeführt.

Tabelle I
Dichte-Meßaufzeichnungen

Syn. SA

TFSA

Tage Inkubierung
6 2

Gesamtanstieg sämtlicher Ablesungen Durchschnittsanstieg je Kultur (ADA Hemmindex (I. I.)

359 25,5 1,61

351
25,1
1,71

558
39,9
1,15

397
28,3
1,44

407
29,0
1,48

589
42,1
1,09

A. 95% Syn. SA 5% TFSA

B. 90% Syn. SA
10% TFSA

Tage Inkubierung
2 3

e. 75% Syn. SA
25% TFSA

Gesamtanstieg sämtlicher
Ablesungen

Durchschnittsanstieg je
Kultur(ADA)

Hemmindex (I. I.)

334

23,9 1,71

353

25,2 1,70

558

343

24,5
1,67

342

24,4
1,76

531 ·

38,0
1,21

328

23,5
1,74

338

24,1
1,78

473

33,8
1,33

Falls die Hemmindizes von Syn. SA nach 2, 3 und' sieraktivität Vergleiche zwischen den drei Gemischen 6 Tagen Inkubierung als 100% angenommen werden, A, B und C anstellen, und ein derartiger Vergleich lassen sich zum Zweck der Bestimmung der Stabili- ist in Tabelle II wiedergegeben:

Tabelle II

Tage	Syn. SA	TFSA	Prozent an Syn. SA Vergleich A 95:5	Vergleich B 90:10	Vergleich C ■ .75:25
2 3 6	100 100 100	89,4 86,5 94,7	106,2 99,4 100	103,7 102,8 104,2	1084 104,0 114,7

Da das Produkt TFSA ein schwächeres Germicid hinsichtlich E. coli als Syn. SA ist, ergibt es sich aus den letzten vier Spalten,- daß ein Synergismus zwischen den beiden Produkten vorliegt, da sonst die letzten drei Spalten des 2-Tage-Zeitraums niedrigere Werte als 100 hätten. Es ist jedoch auf

die bedeutsame Tatsache hinzuweisen, daß das Produkt TFSA ein starker Stabilisator für Syn. SA ist, wie sich aus den Werten für den 6-Tage-Zeitraum ergibt, worin sich, trotz der Tatsache, daß beide Germicide einen Teil ihrer Hemmwirkung verloren haben und obwohl TFSA im allgemeinen schwächer als Syn. SA ist, für das Gemisch C mit 25% eine Wirksamkeit ergibt, die etwa 15% größer als bei Syn. SA allein ist. Daraus zeigt sich, daß das TFSA in irgendeiner Weise die Inaktivierung ίο von Syn. SA stört oder in diese eingreift.

Beispiel 2

Die Arbeitsweise in diesem Beispiel war ähnlich derjenigen im Beispiel 1 mit der Ausnahme, daß zwanzig Verdünnungen für jedes Mittel vorgenommen wurden, so daß sich Konzentrationen zwischen 1 : 833 000 und 1:8 000 000 ergaben. Dichtebestimmungen wurden nach 1, 2, 5, 7 und 9 Tagen Inkubierung vorgenommen. Zur Kontrolle wurden fünf Organismenkulturen von Staph. aureus inokuliert, und der Durchschnitt ihrer Dichtemeßwerte wurde zum Berechnen des Hemmindex verwendet. Die Ablesungen der Kontrollkulturen sind in Tabelle III aufgeführt.

Tabelle III

Tage	1	Kultur Nr.	88	3	4	5	Durch schnitt
	96		91	90	95	90
1	95	72	93	94	93	92
2	65	57	70	74	*)	93
5	60	56	64	68	*)	70
7	59	60	67	*)	62
9		60

*) Verworfen auf Grund von Verunreinigung mit einem
unbekannten Organismus.

Es ist zu ersehen, daß ein scharfer Abfall der Dichte nach 5tägiger Inkubierung erfolgt. Da die Kulturen viele tote Organismen enthalten, könnten die Unterschiedlichkeiten der optischen Dichten zwischen lebenden und toten Organismen diese Erscheinung erklären. Da jedoch der Hemmindex einen Vergleich von Aktivität des Mittels und Bekämpfung des Organismenwachstums darstellt, dürfte diese Erscheinung die Interpretierung der Ergebnisse nicht beeinflussen. Wenn, wie bei Tabelle II, die vorstehenden Ergebnisse auf die Basis von Syn. SA als 100% umgerechnet werden, erhält man die in Tabelle IV aufgeführten Ergebnisse:

	Tabelle IV	I. I.	% Syn. SA
Tage	Durchschnitts dichte	Syn. SA
			100
1	14,0		100
2	22,4		100
5	25,0		100
7	26,4		100
9	28,6	6,57
	4,15
2,80
2,38
2,10

	13,8	TFSA	6,66	101,3
1	20,9		4,45	107,3
2	23,2		3,01	107,5
5	16,9		3,70	156,2
7	18,6		3,22	153,3
9		A 95 : 5
	Vergleich	6,62	100,7
1	13,9	4,51	108,6
2	20,6	2,72	96,5
5	25,7	3,12	131,1
7	19,9	2,15	126,3
9	22,6	B 90 : 10
		7,86	119,6
1		4,72	113,7
2		2,90	103,6
5		2,92	122,6
7		2,86	136,2
9	Vergleich	C 75 : 25
	11,7	6,40	97,4
1	19,7	4,25	102,4
2	24,1	3,21	111,1
5	21,2	3,26	137,0
7	21,0	3,11	148,1
9
Vergleich
14,4
21,9
21,8
19,0
19,3

Im Fall von Staph. aureus ist TFSA stärker wirksam als Syn. SA, insbesondere nach 5 Tagen Inkubierung. Die Stabilisierwirkung von TFSA auf Syn. SA ergibt sich sehr deutlich bei den höheren Konzentrationen von TFSA während der längeren Inkubierungszeiträume. Zum Beispiel hatte eine 25%ige Konzentration von TFSA in Syn. SA nach 9tägiger Inkubierung eine germicide Aktivität von etwa 150% gegenüber 100% von Syn. SA allein, was einen deutlichen Beweis dafür darstellt, daß Syn. SA in einem wäßrigen Medium während längerer Inkubierung bei 37° C nicht stabil ist und daß TFSA einen wirksamen Stabilisator unter diesen Bedingungen darstellt. Selbst in einer Konzentration von 5% steigert TFSA die Wirksamkeit von Syn. SA um über 26% bei den Versuchen während 9 Tagen. Aus den weiteren Untersuchungen ergibt sich, daß diese Stabilisierung selbst bei 30%igen Konzentrationen von TFSA in Syn. SA auftritt.

Die Werte am 9. Tag aus der Tabelle IV wurden in der Zeichnung als Kurve aufgetragen. Es zeigt sich, daß eine glatte Kurve erhalten wird, was zeigt, daß TFSA bei Zugabe in kleineren Mengen zu Syn. SA erheblich die Stabilität nach 9 Tagen steigert. Beispielsweise ergibt eine 5%ige Zugabe von TFSA eine mehr als 125%ige Wirksamkeit,

falls 0% TFSA (oder reines Syn. SA) als 100% angenommen wird. Bei einer 45%igen Konzentration von TFSA hat das Gemisch praktisch dieselbe Wirksamkeit wie reines TFSA.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Germicide Masse, gekennzeichnet durch einen Gehalt von etwa 55 bis etwa 95 Gewichtsprozent eines synergistischen Gemisches, welches als einen Bestandteil eine Verbindung der allgemeinen Formel

   OH

   IO

   worin X eines der Halogenatome Chlor, Brom oder Jod bedeutet, und als anderen Bestandteil eine Verbindung der allgemeinen Formel

   OH

   20

   worin X eines der Halogenatome Chlor, Brom oder Jod bedeutet, enthält, und von etwa 5 bis etwa 45% einer Stabilisierverbindung der allgemeinen Formel

   C-N

   worin X Chlor, Brom, Jod oder Wasserstoff bedeutet und α eine Zahl zwischen O und 2 darstellt, wobei mindestens eines und nicht mehr als drei direkt gebundene Halogenatome vorhanden sind, wovon keines zu einem anderen oder zu der CF3-Gruppe benachbart steht.

   In Betracht gezogene Druckschriften:
   Deutsche Auslegeschrift Nr. 1 158216.

   Bei der Bekanntmachung der Anmeldung ist der Bericht über einen Vergleichsversuch ausgelegt worden.

   Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

   809 517/646 2.68 © Bundesdruckerei Berlin