DE1212981B - Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides - Google Patents

Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides

Info

Publication number
DE1212981B
DE1212981B DEC32152A DEC0032152A DE1212981B DE 1212981 B DE1212981 B DE 1212981B DE C32152 A DEC32152 A DE C32152A DE C0032152 A DEC0032152 A DE C0032152A DE 1212981 B DE1212981 B DE 1212981B
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
tert
seryl
butyloxycarbonyl
methyl ester
tyrosyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DEC32152A
Other languages
English (en)
Inventor
Dr Robert Schwyzer
Dr Heini Kappeler
Dr Beat Iselin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Ciba Geigy AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from CH640060A external-priority patent/CH408948A/de
Application filed by Ciba Geigy AG filed Critical Ciba Geigy AG
Publication of DE1212981B publication Critical patent/DE1212981B/de
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/695—Corticotropin [ACTH]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/68—Melanocyte-stimulating hormone [MSH]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND
DEUTSCHES
PATENTAMT
AUSLEGESCHRIFT
Int. α.:
C07c
Deutsche Kl 12 q-6/01
Nummer: 1212981
Aktenzeichen: C 32152IV b/12 q
Anmeldetag: 15. Februar 1964
Auslegetag: 24. März 1966
In der Hauptpatentanmeldung C 24191 IVb/12 q (deutsche Auslegeschrift 1 205 546) ist die Herstellung eines neuen Dekapeptides der Formel L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutarninyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin sowie der entsprechenden Verbindung, die statt des Glutaminrestes den Rest der Glutaminsäure aufweist, beschrieben. Diese Verbingungen weisen eine die Abscheidung des adrenocorticotropen Hormons (ACTH) aus der Antehypophyse stimulierende Wirkung (CRF-Wirkung) auf. Die Verbindungen und vor allem ihre Derivate mit geschützten Amino- oder Carboxylgruppen können auch als Zwischenprodukte zur Herstellung von Heilmitteln, die eine längere Kette von Aminosäuren aufweisen, ζ. B. des ACTH oder des Peptids, das die ersten 24 Aminosäuren des ACTH umfaßt und wie dieses eine adrenocorticotrope Wirkung aufweist, verwendet werden.
Es wurde nun gefunden, daß das Verfahren zur Herstellung der genannten Dekapeptide, bei dem man das Tetrapeptid der Aminosäuren 1 bis 4 mit dem Hexapeptid der Aminosäuren 5 bis 10 kondensiert, verbessert werden kann. Das bei diesem Verfahren verwendete Tetrapeptidderivat tert.-Butyloxycarbonyl-L - seryl - l - tyrosyl - l - seryl - L- methionin - methylester kann mit Vorteil hergestellt werden, indem man
a) tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin mit L-Methioninmethylester kondensiert, aus dem erhaltenen Dipeptidderivat die tert.-Butyloxycarbonylgruppe abspaltet, den freien Dipeptidester mit tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosin kondensiert, aus dem erhaltenen tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-L-seryl-L - methionin - methylester die tert. - Butyloxycarbonylgruppe abspaltet und den freien Tripeptidester mit tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin zum tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-methylester kondensiert (vgl. F i g. 1) oder Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides
Zusatz zur Anmeldung: C 24191 IVb /12 q— Auslegeschrift 1205 546
Anmelder:
CIBA Aktiengesellschaft, Basel (Schweiz)
Vertreter:
Dr.-Ing. Dr. jur. F. Redies,
Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. B. Redies und Dr. rer. nat. D. Türk, Patentanwälte, Opladen, Rennbaumstr. 27
Als Erfinder benannt:
Dr. Robert Schwyzer, Riehen;
Dr. Heini Kappeier, Birsfelden; Dr. Beat Iselin, Riehen (Schweiz)
Beanspruchte Priorität:
Schweiz vom 21. Februar 1963 (2206)
b) tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin mit L-Tyrosin-methylester kondensiert, den geschützten Dipeptidester in das Hydrazid überführt und dieses mit dem unter a) erwähnten L-Seryl-L-methionin-methylester zum tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-methylester kondensiert (vgl. Fig. 2).
In den Formelschemen bedeutet BOC eine tert.-Butyloxycarbonylgruppe.
H- Ser -OH H- Tyr BOC- Tyr -OCH3 H- Ser -OH H- Met
BOC- Ser -OH BOC- Tyr H- Tyr -OCH3 BOC- Ser -OH
BOC- Tyr Tyr -OH BOC- Ser Met
H- Ser Met
Ser Met
Ser Met
BOC- Ser Ser Met
-OCH3
-OCH3 -OCH3 -OCH3 -OCH3 -OCH,
Fig.l
609 539/416
Ser 3 H-Tyr -OCH: , H- 4
BOC- Ser -OH Tyr -OCH 3 Ser Met
BOC- Ser Tyr -NH- NH2(N3)
BOC- Ser Tyr
BOC- Ser Met
-OCH3
- OCH,
Das beschriebene Tetrapeptidderivat kann, wie in das Hauptpatentanmeldung C 24191 IVb/12 q (Deutsche Auslegeschrift 1205 546) gezeigt, in das Hydrazid und Azid übergeführt und dieses mit y-tert.-Butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin zum Dekapeptidderivat tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-y-tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin kondensiert werden. Aus diesem kann das freie Dekapeptid, wie in der Hauptpatentanmeldung beschrieben, hergestellt werden, oder das Derivat kann als Ausgangsmaterial für die Herstellung des oben erwähnten Tetrakosapeptids verwendet werden.
Die Erfindung wird in den nachfolgenden Beispielen beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.
Beispiel 1
Stufe 1. tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin-hydrat
105 g (1 Mol) L-Serin werden in 500 ml 2 n-Natronlauge gelöst und mit einer Lösung von 157 g (1,1 Mol) tert-Butyloxycarbonylazid in 400 ml Methanol versetzt. Unter Rühren bei 40° wird eine Lösung von 111 g Triäthylamin in 500 ml Methanol innerhalb 4 Stunden zugetropft; das Reaktionsgemisch wird anschließend weitere 2 Stunden bei 40° gerührt und über Nacht bei Zimmertemperatur stehen gelassen. Unter Eiskühlung und Rühren wird die Lösung durch Zugabe von 80 ml konzentrierter Salzsäure auf pH 6 bis 7 gestellt und darauf im "Vakuum bei maximal 40° Badtemperatur auf etwa 700 ml eingeengt. Das erhaltene Konzentrat wird mit 21 auf 0° gekühltem Essigester überschichtet und unter Eiskühlung und starkem Rühren sofort mit 100 ml konzentrierter Salzsäure auf pH 1 bis 2 gestellt. Die Essigesterphase wird rasch abgetrennt und die wäßrige Lösung nach Zugabe von 300 g Natriumchlorid noch zweimal mit je 500 ml Essigester extrahiert. Die Essigesterlösungen werden durch zweimaliges Waschen mit je 50 ml kalter gesättigter Natriumchloridlösung von Salzsäure befreit, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Das erhaltene Öl (200 g) wird in 150 ml Wasser unter leichtem Erwärmen gelöst, auf 0° gekühlt und angeimpft. Nach 2 Stunden wird das kristalline Hydrat des tert.-Butyloxycarbonyl-L-serins abfiltriert, mit wenig kaltem Wasser gewaschen und im Vakuum bei Zimmertemperatur getrocknet. Man erhält 162 g tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin-hydrat vom F. 46 bis 48° und nach Einengen der Mutterlauge weitere 21 g vom F. 42 bis 46°, total: 183 g = 82°/0 der Theorie. Beide Fraktionen sind genügend rein für weitere Umsetzungen. Nach nochmaligem Umkristallisieren aus Wasser: F. 47 bis 49°; [a]f = -^ 8,1° (c = 2,0 in Wasser); +1,9° (c = 2,0 in Methanol); —2,5 (c·= 2,0 in Essigsäure).
Stufe 4. tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosin-
methylester
100 g (0,51 Mol) L-Tyrosin-methylester werden in 300 ml trockenem Pyridin gelöst und mit 86 g (0,6 Mol) tert.- Butyloxycarbonylazid versetzt. Die Lösung wird 48 Stunden im Dunkeln bei Zimmertemperatur stehengelassen und darauf im Vakuum bei 40° zum Sirup eingedampft. Der Rückstand wird in 500 ml Essigester
zo aufgenommen, die Lösung bei 0° mehrmals mit 2 η-Salzsäure extrahiert, mit kalter gesättigter Natriumbicarbonat- und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum bei 30 bis 35° eingedampft. Der ölige Rück-
z5 stand kristallisiert bei Zugabe von Äther; man erhält 89 g tert.-Butyloxycabonyl-L-tyrosin-methylester vom F. 100 bis 102°; aus der Mutterlauge werden weitere 27 g vom F. 98 bis 100°, total 116 g = 77 °/0 der Theorie gewonnen. Das Produkt kann direkt weiter umgesetzt werden. Nach nochmaligem Umkristallisieren aus Äther-Hexan schmilzt die Substanz bei 106 bis 108°; [«]ff = +12,1° (c = 3,8 in Äthanol).
Stufe 5. tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosin
110 g (0,37 Mol) des obigen Esters werden bei 0° in 900 ml 1 η-Natronlauge suspendiert und 30 Minuten bei 0° gerührt. Die klare Lösung wird mit 700 ml vorgekühltem Essigester überschichtet und unter Eiskühlung und Rühren innerhalb 5 Minuten mit 500 ml 2 η-Salzsäure versetzt. Man trennt die Essigesterphase rasch ab und extrahiert die wäßrige Lösung nochmals mit Essigester. Die vereinigten organischen Lösungen werden zweimal mit je 50 ml gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Zur weiteren Reinigung extrahiert man das im Essigester gelöste tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosin mit 2 n-Kaliumbicarbonatlösung (1 · 300 und 1 · 200 ml). Die wäßrigen Kaliumbicarbonatextrakte werden bei 0° mit 700 ml kaltem Essigester überschichtet und unter Rühren und Eiskühlung mit 500 ml 2 η-Salzsäure schwach angesäuert. Die abgetrennte Essigesterphase wird mit konzentrierter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum bei 35 bis 40° ein-
gedampft. Die Kristallisation des als Öl erhaltenen Rückstands aus 150 ml Essigester und 150 ml Petroläther ergibt 92 g farblose Substanz vom F. 134 bis 136°; aus der Mutterlauge werden nach Einengen und Zugabe von Petroläther noch 5,6 g Substanz vom
F. 131 bis 135° erhalten, total 97,6 g = 94% der Theorie. Das Material ist genügend rein für weitere Umsetzungen. >
Stufe 2. tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-
-g_ L-methionin-methylester
168 g (0,75 Mol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin-hydrat werden in 21 Acetonitril gelöst und mit einer Lösung von-122 g (0,75 Mol) L-Methionin-methylester
5 6
in 500 ml Acetonitril versetzt; nach Kühlen auf —5° —5° vorgekühlte Lösung von 45,5 g (0,22 Mol) Diwerden unter Rühren 170 g Dicyclohexylcarbodiimid cyclohexyl-carbodiimid in 500 ml Acetonitril zugegein 150 ml Acetonitril zugegeben. Das Reaktionsgemisch ben. Das Reaktionsgemisch wird 1 Stunde bei —5°- wird 1 Stunde bei —5° und 2 Stunden bei 0° gerührt, und über Nacht bei 0° gerührt, wobei sich Dicycloüber Nacht bei 0° stehengelassen und darauf unter 5 hexylharnstoff und ein kleiner Teil des Reaktions-Rühren mit 5 ml Eisessig versetzt. Nach weiterem produkte in kristalliner Form abscheiden. Nach Zugabe Rühren bei 0° während 1 Stunde wird der ausgeschie- von 1,2 ml Eisessig wird weitere 30 Minuten bei 0° dene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Filtrat gerührt und darauf etwa 15 Minuten auf 35° erwärmt, wird im Vakuum bei maximal 35° zum Sirup einge- bis das Reaktionsprodukt in Lösung gegangen ist. dampft und der ölige Rückstand in 11 Essigester io Nach Kühlen auf 20° wird vom Dicyclohexylharnstoff gelöst. Man wäscht die Lösung bei 0° zuerst mit einer abfiltriert und das Filtrat im Vakuum bei maximal 40° Mischung von 50 ml 1 η-Salzsäure und 30 ml gesät- auf etwa 500 ml eingeengt. Beim Kühlen auf 0° kristallitigter Natriumchloridlösung, dann mit 50 ml 1 n-Na- sieren 62 g des Tripeptidderivats vom F. 112 bis 120° triumbicarbonatlösung und 30 ml gesättigter Natrium- aus; die Mutterlauge ergibt nach weiterem Einengen chloridlösung und schließlich mit 50 ml gesättigter 15 28 g Material vom gleichen Schmelzpunkt; beide Natriumchloridlösung, trocknet über Magnesiumsulfat Fraktionen enthalten etwas Triäthylaminhydrochlorid, und dampft bei höchstens 40° im Vakuum ein. Der das durch Verrühren mit Wasser entfernt wird. Die so ölige Rückstand wird aus 150 ml Äther und 100 ml gereinigte Substanz zeigt den F. 134 bis 136°. Die Petroläther kristallisiert. Man erhält 188 g tert- ursprüngliche Acetonitrilmutterlauge wird im Vakuum Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-methionin-methylester vom 20 zum Sirup eingedampft, der teilweise kristalline Rück-F. 67 bis 69° und aus der Mutterlauge weitere 22 g vom stand in 300 ml Essigester und 100 ml Wasser gelöst, F. 64 bis 66°, total 210 g = 80% der Theorie. die abgetrennte Essigesterphase bei 0° mit 1 n-Salz-
säure, 1 n-Natriumbicarbonatlösung und Wasser ge-
Stufe 3. L-Seryl-L-methionin-methylester waschen> getrocknet und im Vakuum auf etwa 50 ml
25 eingeengt. Es kristallisieren bei Zimmertemperatur
a\ HvHrnrhinrir! noch 11,7 g Tripeptidderivat vom F. 132 bis 135°.
; y Gesamtausbeute: 83,7 g = 81% der Theorie. Die
175 g (0,5 Mol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-me- vereinigten Fraktionen liefern nach Umkristallisieren thionin-methylester werden in 11 einer 2,5 η-Lösung aus der 20fachen Menge Essigester das reine Tripeptidvon Chlorwasserstoff in Essigester gelöst und unter 30 derivat vom F. 137 bis 139°; [a]ff = —15,3° (c = 2 in Feuchtigkeitsausschluß 75 Minuten bei 20° gehalten. Methanol); einheitlich im Dünnschichtchromato-Die Lösung wird darauf im Vakuum bei höchstens gramm.
35° eingedampft, der ölige Rückstand zweimal mit
je 200 ml Essigester extrahiert, im Vakuum von Essig- Stufe 7. L-Tyrosyl-L-seryl-L-methionin-methylester
ester befreit und 3 Stunden bei 0,1 mm und 30° ge- 35
trocknet. Man erhält 151 g (berechnet 144 g) Hydro- Ά> Hydrocnlorid
chlorid des L-Seryl-L-methionin-methylesters in Form 200 g (0,39 Mol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-
eines zähen Schaumes. Dieses Rohprodukt kann für L-seryl-L-methionin-methylester werden in 41 Essigdie weitere Kondensation verwendet werden. ester heiß gelöst; die Lösung wird rasch auf etwa 25°
40 gekühlt und sofort unter Rühren mit 21 einer 4 n-Lö-
b) Freier Ester sun8 von Chlorwasserstoff in Essigester versetzt; nach
15 Minuten Rühren bei 20° beginnt sich das Reak-
23 g (etwa 75 mMol) rohes Hydrochlorid werden tionsprodukt in flockiger Form auszuscheiden. Nach mit 200 ml trockenem Essigester Übergossen und unter 75 Minuten wird die Suspension unter Rühren im Rühren mit 20 ml einer 5 η-Lösung von Ammoniak in 45 Vakuum bei höchstens 40° auf 1,51 eingeengt, die Methanol versetzt; nach 5 Minuten ist das Ausgangs- überstehende Lösung abdekantiert und der amorphe material gelöst, und das ausgeschiedene Ammonium- Rückstand zweimal mit je 11 frischem Essigester verchlorid wird abfiltriert. Das Filtrat wird sofort mit rührt. Das rohe Hydrochlorid läßt sich direkt für den 150 ml Petroläther versetzt, auf 0° gekühlt und ange- Umsatz zu BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-OCHsj verwenden impft, worauf sich der freie Ester in Form von feinen 50 oder in den freien Ester überführen.
Nadeln abzuscheiden beginnt; nach 30 Minuten werden .
weitere 200 ml Petroläther zugegeben, und nach °) tmier hster
1 Stunde wird das kristalline Material isoliert. Man Das oben beschriebene essigester-feuchte Hydro-
erhält 15,4 g L-Seryl-L-methionin-methylester — 82 % chlorid wird in 21 absolutem Essigester suspendiert und der Theorie; F. 72 bis 74°. Die Substanz ist papier- 55 unter Rühren mit 400 ml einer 1,25 η-Lösung von chromatographisch rein, enthält aber noch etwas Ammoniak in Methanol versetzt. Das Ausgangs-Ammoniumchlorid. Durch vorsichtiges Lösen in material geht rasch in Lösung, und Ammoniumchlorid Essigester, Filtrieren und Ausfällen mit Petroläther scheidet sich aus; nach 10 Minuten wird filtriert, mit wird der reine Ester vom F. 81 bis 83° erhalten. Essigester-Methanol 5:1 nachgewaschen und das
60 Filtrat im Vakuum auf ein kleines Volumen einge-
Stufe 6. tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-L-seryl dampft. Der amorphe, essigester-feuchte Rückstand
methionin-methylester wird unter Rühren in 350 ml Acetonitril bei 55 bis 60°
rasch gelöst; bei langsamer Kühlung der Lösung
56,2 g {0,2 Mol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosin scheidet sich (nach Animpfen) der freie Ester kristallin und 60 g (etwa 0,2 Mol) rohes L-Seryl-L-metbionin- 65 ab; nach 5 Stunden bei Zimmertemperatur und methylesterhydrochlorid werden in 11 Acetonitril 15 Stunden bei 0° wird das feste Material abfiltriert, gelöst und mit 20,2 g Triäthylamin versetzt. Nach mit kaltem Acetonitril gewaschen und im Vakuum bei Kühlung auf —5° wird unter Rühren eine ebenfalls auf 30 bis 35° getrocknet. Nan erhält 94 g L-Tyrosyl-L-se-
ryl-L-methionin-methylester vom F. 144 bis 146°; aus der Mutterlauge werden nach vorsichtigem Einengen weitere 21 g gewonnen; Gesamtausbeute 115 g = 71 % der Theorie. Nach nochmaligem Umkristallisieren aus WasseristderF.147bisl49°; .[«]f = -28,1° (c = 1,1 in Methanol).
Stufe 8. tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-methionin-methylester
103 g (0,25 Mol) L-Tyrosyl-L-seryl-L-methionin-methylester werden unter Rühren und Erwärmen auf 60 bis 65° in einem Gemisch von 1,71 Acetonitril und 100 ml Dimethylformamid gelöst und nach Kühlen auf Zimmertemperatur mit 56 g (0,25 Mol) tert-Butyloxycarbonyl-L-serin-hydrat versetzt. Die Lösung wird auf —5° gekühlt, unter Rühren mit einer ebenfalls auf —5° vorgekühlten Lösung von 57 g (0,275MoI) Dicyclohexylcarbodiimid in 200 ml Acetonitril versetzt und 1 Stunde bei —5° und über Nacht bei 0° gerührt. Nach Zugabe von 2 ml Eisessig wird das Reaktionsgemisch weitere 30 Minuten bei 0° gerührt und der Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum bei höchstens 40° vollständig eingedampft und bei 0,1 mm und 40° von Dimethylformamid befreit. Das erhaltene Öl wird mit 300 ml Wasser verrührt. Man läßt (nach Animpfen) 1 bis 2 Stunden bei Zimmertemperatur und 1 Stunde bei 0° stehen und filtriert dann das ausgeschiedene Tetrapeptidderivat ab, wäscht mit Eiswasser und trocknet im Vakuum bei 30 bis 35°: 132 g vom F. 85 bis 95°. Die Mutterlauge wird im Vakuum auf etwa 50 ml eingeengt, mit 250 ml Essigester extrahiert und die Essigesterphase unter guter Kühlung mit wenig · 1 n-Salzsäure, 1 n-Natriumbicarbonatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der als Gallerte erhaltene Rückstand wird mit 50 ml Wasser verrührt und das feste Produkt isoliert wie oben: 12,7 g vom F. 81 . bis 89°. Beim Umkristallisieren aus 40 %igeni Methanol erhält man das Produkt in Form feiner Nadeln vom F. 94 bis 96°. Es ist im Dünnschichtchromatogramm einheitlich, enthält aber noch etwas Dicyclohexylharnstoff, der jedoch weitere Umsetzungen nicht stört. Eine mehrmals aus Essigester und Methanol umkristallisierte Substanzprobe schmolz bei 118 bis 122°; [«]!? = -29,8 ±1° (c = 2,1 in Methanol).
Beispiel 2
Stufe 1. tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosin- _0 methylester
Eine Lösung von 22,3 g (0,1 Mol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin-hydrat und 19,5 g (0,1 Mol) L-Tyrosinmethylester, in einem Gemisch von 600 ml Acetonitril und 150 ml Dimethylformamid, wird unter Rühren bei —5° mit 22,7 g (0,11 Mol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt, 1 Stunde bei —5° weitergerührt und über Nach bei 0° stehengelassen. Nach Zugabe von 3 ml Eisessig filtriert man den ausgeschiedenen Dicyclohexylharnstoff ab, dampft das Filtrat im Vakuum ein und nimmt den Rückstand in Essigester auf. Die Essigesterlösung wird, wie im Beispiel 1 beschrieben, neutral gewaschen, -getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der ölige Rückstand liefert beim Verreiben mit Äther 31,9 g (83%) kristallines Dipeptidderivat vom F. 116 bis 119°; nach Umkristallisieren aus Essigester ist der F. 120 bis 122°; [«]!? = —1,8°. (c = 4 in Methanol).
Stufe 2. tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosin-
hydrazid
27,8 g (70 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosin-methylester werden in 250 ml Methanol gelöst und mit 17,5 ml Hydrazinhydrat versetzt. Nach Stehen über Nacht bei Zimmertemperatur wird das ausgeschiedene kristalline Produkt abfiltriert und mit Methanol gewaschen, darauf während 15 Minuten mit 100 ml Wasser verrührt, wiederum abfiltriert und mit Wasser und Methanol gewaschen. Man erhält 27,5 g tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosin-hydrazid ■ 1Z2 H2N-NH2 vom F. 215 bis 216°. Es wird bei 0° rasch in 300 ml 1 η-Salzsäure gelöst und die Lösung mit 170 ml eisgekühlter 2 n-Natriumcarbonatlösung versetzt. Nach 1 Stunde bei 0° wird das ausgeschiedene kristalline Dipeptidhydrazid abfiltriert und mit Wasser und Methanol gewaschen: 21g (75% der Theorie), F. 192 bis 193°; nach Umkristallisieren aus 50%igem Methanol schmilzt das Produkt bei 197 bis 199°; [«]» = —11,6° (c = 2 in Dimethylformamid), —16° (c = 2 in Eisessig).
Stufe 3. tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-methylester
17,2 g (45 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosin-hydrazid werden rasch in einem auf —10° vorgekühlten Gemisch von 90 ml 2n-Salzsäure und 60 ml Dimethylformamid gelöst und tropfenweise unter Rühren mit 10 ml kalter 5 n-Natriumnitritlösung versetzt. Nach weiterem Rühren während 5 Minuten bei —15° wird die Lösung durch Zugabe von kalter 2 n-Natriumbicarbonatlösung neutral gestellt und zweimal mit je 200 ml auf —10° vorgekühltem Essigester extrahiert. Die Essigesterextrakte werden mit kalter gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, kurz bei 0° über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum bei höchstens 20° auf etwa 150 ml eingeengt. Die Lösung des Azids wird bei 0° mit einer Lösung von 11,2 g(45 mMol) L-Seryl-L-methionin-methylester in 250 ml eines Gemisches von Essigester-Tetrahydrofuran 1: 2 versetzt, 20 Stunden bei 0° stehengelassen und darauf im Vakuum eingedampft. Der bei 0,1 mm Hg getrocknete Rückstand liefert beim Verrühren mit Wasser 18,4 g (68%) Tetrapeptidderivat vom F. 95 bis 105°, das nach Umfallen aus Methanol vollständig identisch mit dem im Beispiel 1 beschriebenen Produkt ist.

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides der Formel L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L - glutamyl- l - histidyl -L- phenylalanyl -L- arginyl-L-tryptophyl-glycin durch Kondensation von tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-azid mit y-tert.-Butyl-L-glutam.yl-/S-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin nach dem Verfahren der Hauptpatentanordnung C2419irV/12q (deutsche Auslegeschrift 1205546), dadurch gekennzeichnet, daß man das Tetrapeptidderivat tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-methylester dadurch hergestellt, daß man
    a) tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin mit L-Methionin-methylester kondensiert, aus dem erhaltenen Dipeptidderivat die tert.-Butyloxycarbonylgruppe abspaltet, den freien Dipeptidester mit tert.-Butyloxycarbonyl-L-tyrosin kon-
    I 212 981
    9 10
    densiert, aus dem erhaltenen tert.-Butyloxycar- b) tert.-Butyloxycarbonyl-L-serin mit L-Tyrosin-
    bonyl-L-tyrosyl-L-seryl- l -methionin -methyl- methylester kondensiert, den geschützten
    ester die tert.-Butyloxycarbonylgruppe abspal- Dipeptidester in das Hydrazid überführt und
    tet und den freien Tripeptidester mit tert- dieses mit dem. unter a) erwähnten L-Seryl
    Butyloxycarbonyl-L-serin zum tert.-Butyloxy- 5 L-methionin-methylester zum tert.-Butyloxy~
    carbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-Lmethio- carbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-metbionin-
    nin-methylester kondensiert oder methylester kondensiert.
    609 539/416 3.66 © Bundesdruckerei Berlin
DEC32152A 1960-06-03 1964-02-15 Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides Pending DE1212981B (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH640060A CH408948A (de) 1960-06-03 1960-06-03 Verfahren zur Herstellung neuer Dekapeptide
CH220663A CH497384A (de) 1960-06-03 1963-02-21 Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE1212981B true DE1212981B (de) 1966-03-24

Family

ID=25689790

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DEC24191A Pending DE1205546B (de) 1960-06-03 1961-05-24 Verfahren zur Herstellung neuer Dekapeptide
DEC32152A Pending DE1212981B (de) 1960-06-03 1964-02-15 Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DEC24191A Pending DE1205546B (de) 1960-06-03 1961-05-24 Verfahren zur Herstellung neuer Dekapeptide

Country Status (7)

Country Link
US (1) US3256526A (de)
BE (1) BE644128A (de)
CH (1) CH497384A (de)
DE (2) DE1205546B (de)
GB (2) GB992957A (de)
NL (2) NL6401588A (de)
SE (2) SE307794B (de)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL278010A (de) * 1961-05-04 1900-01-01
NL6509727A (de) * 1965-07-28 1967-01-30
DE2444981C2 (de) * 1974-09-20 1984-11-15 Licentia Patent-Verwaltungs-Gmbh, 6000 Frankfurt Schaltungsanordnung zur Erzeugung einer laufenden Folge von Impulsen, die insbesondere Festmengen des elektrischen Verbrauches darstellen
US4087416A (en) * 1976-11-05 1978-05-02 Parke, Davis & Company New heptapeptides and methods for their production
US4087419A (en) * 1976-11-05 1978-05-02 Parke, Davis & Company Heptapeptides and methods for their production
DE3023813A1 (de) * 1980-06-25 1982-01-21 Akzo N.V., 6826 Arnhem Arzneimittel

Also Published As

Publication number Publication date
GB992957A (en) 1965-05-26
SE332991B (de) 1971-03-01
BE644128A (de) 1964-08-20
NL130980C (de) 1900-01-01
NL6401588A (de) 1964-08-24
SE307794B (de) 1969-01-20
GB1030803A (en) 1966-05-25
CH497384A (de) 1970-10-15
DE1205546B (de) 1965-11-25
US3256526A (en) 1966-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CH634548A5 (de) Verfahren zur herstellung von neuen peptiden.
CH495957A (de) Verfahren zur Herstellung eines antidiuretisch wirksamen Polypeptids
CH650519A5 (de) Auf das zentrale nervensystem wirkende tripeptide und verfahren zur herstellung derselben.
CH616913A5 (de)
CH626328A5 (en) Process for the preparation of somatostatin analogues
DE1212981B (de) Verfahren zur Herstellung eines Dekapeptides
CH570972A5 (en) Decapeptide
CH615904A5 (en) Process for the preparation of L-leucine-13-motilin
DE1543872C3 (de) D Ser hoch 1 Nie hoch 4 Pentacosapeptid sowie Verfahren zu dessen Herstellung
DE1295565B (de) Verfahren zur Herstellung von einen Histidinrest enthaltenden Peptiden
DE1958383C3 (de) Leupeptine, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel
DE1643416A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Phenylalaninderivaten
DE1518343A1 (de) Verfahren zur Herstellung eledoisinwirksamer Undekapeptide
DE2037697A1 (de) Biologisch aktive Polypeptide
DE1943207B2 (de) Tetrapeptidamide und Verfahren zu ihrer Herstellung
CH653038A5 (de) Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide.
AT203154B (de) Verfahren zur Herstellung eines neuen polypeptidartigen Oxytocicums
DE2727048C2 (de) 8-Norleucyl-ceruletide
DE1518340C (de) Eledoisinwirksame Hexa und Hepta peptide und Verfahren zu deren Her stellung
DE2022623A1 (de) Peptidverbindungen mit Tyrosin-O-sulfatresten
DE1065424B (de) Verfahren zur Herstellung von Pepfiden
DE1643504C (de) Dekapeptid L-Pyroglutamyl-Lglutaminyl-L-aspartyl-L-tyrosyl-L-threonylglycyl-L-tryptophanyl-L-rnethionyl-Laspartyl-L-phenylalanylamid, und seine Salze sowie Verfahren zu deren Herstellung
DE1800129C3 (de) Biologisch aktive Polypeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung
DE1030835B (de) Verfahren zur Herstellung eines neuen polypeptidartigen Oxytocicums
DE2016970A1 (de) Neue Dipeptid amide