DE102010054767A1 - Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaprotein, Viren oder Virenbestandteilen - Google Patents
Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaprotein, Viren oder Virenbestandteilen Download PDFInfo
- Publication number
- DE102010054767A1 DE102010054767A1 DE102010054767A DE102010054767A DE102010054767A1 DE 102010054767 A1 DE102010054767 A1 DE 102010054767A1 DE 102010054767 A DE102010054767 A DE 102010054767A DE 102010054767 A DE102010054767 A DE 102010054767A DE 102010054767 A1 DE102010054767 A1 DE 102010054767A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- virus
- blood
- liquid
- sorbent
- plasma protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3268—Macromolecular compounds
- B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
- B01D15/18—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns
- B01D15/1864—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns using two or more columns
- B01D15/1871—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns using two or more columns placed in series
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
- B01J20/289—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers bonded via a spacer
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
- B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
- B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
- B01J20/321—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
- B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
- B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
- B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
- B01J20/3248—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such
- B01J20/3255—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure containing at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. heterocyclic or heteroaromatic structures
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3285—Coating or impregnation layers comprising different type of functional groups or interactions, e.g. different ligands in various parts of the sorbent, mixed mode, dual zone, bimodal, multimodal, ionic or hydrophobic, cationic or anionic, hydrophilic or hydrophobic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/34—Regenerating or reactivating
- B01J20/3425—Regenerating or reactivating of sorbents or filter aids comprising organic materials
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaproteinen, Viren oder Virenbestandteilen aus einer Mischung unter Verwendung von Sorbentien, deren Oberfläche mit mindestens zwei Rezeptormolekülen funktionalisiert sind, wobei die Sorbentien als Chromatographiematerial eingesetzt werden.
- Hintergrund der Erfindung
- In den bisher in kommerziellen Prozessen verwendeten Aufreinigungsverfahren für Blut(Blut)Plasmaproteine wie IgG wird in der Regel eine zweifache chromatographische Reinigung über Ionentauschersäulen durchgeführt, wobei Ausbeuten des IgG von 70 bis 80% erzielt werden. Der Anteil an Verunreinigung mit kritischem IgA liegt dabei unter 0,4%. So beschreibt beispielsweise die
DE 698 23 931 ein Chromatographieverfahren zur Aufreinigung von IgG unter Verwendung von zwei Anionenaustauschsäulen, von denen einer ein starker Anionentauscher und der zweite ein schwacher Anionentauscher ist, und wobei beide Säulen in Serie geschaltet werden können. Das in diesem Rahmen erhaltene IgG wurde in einer Ausbeute von 69% erhalten und weist eine Reinheit von etwa 99% auf. Hinsichtlich des Gehalts des in diesem Verfahren erhaltenen IgA's werden keine Angaben gemacht. - Ein weiteres Verfahren zur Herstellung von IgG, das sich zur intravenösen Anwendung eignet, wird in
CA 1 201 063 beschrieben. Dabei wird eine Plasma-Fraktion einem zweistufigen Trennverfahren mit zwei verschiedenen Anionenaustauschharzen unterzogen. In jeder Stufe wird der Puffer, der dazu verwendet wird, das Anionenaustauschharz in Gleichgewicht zu setzen, auch dazu verwendet, die IgG enthaltende Fraktion von dem Harz zu eluieren. - Schließlich ist ein Verfahren zur Isolierung einer Human-IgG und Albumin enthaltenden Zusammensetzung zur intravenösen Verabreichung in
US 4,476,190 beschrieben, das Fällungsstufen unter gesteuerten Bedingungen des pH, der Ethanolkonzentration, der Ionenstärke und der Temperatur beinhaltet. - Die bisher verfügbaren Methoden zur Aufreinigung von (Blut)Plasmaproteinen, insbesondere von Antikörpern, weisen den Nachteil auf, dass sie in der Regel aufwendig und langwierig sind, die Verwendung nicht regenerierbarer Reinigungsmaterialien einbeziehen, oder die funktionelle Integrität des (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils durch die Aufreinigungsschritte beeinträchtigt wird und somit das (Blut)Plasmaprotein nur in geringer Ausbeute oder Reinheit und Aktivität erhalten werden können.
- Beschreibung
- Das technische Problem, mit dem sich die vorliegende Erfindung befasst, ist das zur Verfügung stellen eines neuen Reinigungs-, Aufkonzentrations- und/oder Trennungsverfahrens für (Blut)Plasmaproteine, Viren oder Virenbestandteile, ohne dass Nachteile der bisher bekannten Verfahren wie sie im vorstehenden Abschnitt zusammengefasst wurden, in Kauf genommen werden müssen. Dies bedeutet, dass das Verfahren die Isolation des gewünschten (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils in hoher Reinheit erlauben soll. Darüber hinaus soll eine weitgehende Automation möglich sein und eine hohe Ausbeute erzielt werden. Gleichzeitig soll die funktionale Integrität der (Blut)Plasmaproteine, Viren oder Virenbestandteile nicht beeinträchtigt und die Verwendung von teuren Materialien großteilig vermieden werden. Ebenso soll das neue Verfahren die Verwendung von Standard-Reinigungs- und Sterilisierungsprotokollen des Equipments während der Verwendung erlauben und so die Zulassung des Verfahrens zur Herstellung von pharmazeutischen Produkten durch die entsprechenden Behörden gewährleisten. In anderen Worten ist Ziel der vorliegenden Erfindung das zur Verfügung stellen des gewünschten (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils in wirtschaftlich günstiger Weise und in einer für pharmazeutische Produkte geeigneten Qualität.
- Dieses technische Problem wird gelöst durch ein Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils aus einer Mischung, die dieses (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil enthält, wobei die das (Blut)Plasmaprotein oder den Virenbestandteil enthaltende Mischung natürliches menschliches oder tierisches Blut oder ein Zwischen- oder fertiges Produkt von natürlichem menschlichen oder tierischen Blut ist, insbesondere Blutplasma oder ein proteinhaltiges Fällungsprodukt, das nach einem Fraktionierungsverfahren aus Blutplasma erhalten wurde, umfassend:
- (i) das in-Kontakt-Bringen der Mischung, die in einer Flüssigkeit 1 gelöst oder suspendiert ist mit einem Sorbens 1 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil an das Sorbens 1 zu binden;
- (ii) das in-Kontakt-Bringen des Sorbens 1 mit dem daran gebundenen (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil mit einer Flüssigkeit 2 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil von dem Sorbens 1 zu lösen;
- (iii) das in-Kontakt-Bringen des (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils aus (ii), das/der in einer Flüssigkeit 3 gelöst oder suspendiert ist mit einem Sorbens 2 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil an das Sorbens 2 zu binden;
- (iv) das in-Kontakt-Bringen des Sorbens 2 mit dem daran gebundenen (Blut)Plasmaprotein, Virus oder Virenbestandteil mit einer Flüssigkeit 4 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil von dem Sorbens 2 zu lösen,
- Weiterhin wird das Problem gelöst durch eine Vorrichtung zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils aus einer Mischung, wobei die das (Blut)Plasmaprotein oder den Virenbestandteil enthaltende Mischung natürliches menschliches oder tierisches Blut oder ein Zwischen- oder fertiges Produkt von natürlichem menschlichen oder tierischen Blut ist, insbesondere Blutplasma oder ein proteinhaltiges Fällungsprodukt, das nach einem Fraktionierungsverfahren aus Blutplasma erhalten wurde, die dieses (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil enthält umfassend:
- – eine erste stationäre Phase umfassend ein Sorbens 1 mit einem Einlass zum Aufbringen der das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil enthaltenden Mischung und einem Auslass zum Auffangen des vorgereinigten (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils, und
- – einer zweiten stätionären Phase umfassend ein Sorbens 2 mit einem Einlass zum Aufbringen der vorgereinigten (Blut)Plasmaprotein-, Viren- oder Virenbestandteilfraktionen und einem Auslass zum Auffangen des gereinigten (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils,
- Das vorstehend dargestellte Verfahren kann dadurch vorteilhaft weitergebildet werden, dass im Anschluss an das Binden des (Blut)Plasmaproteins, des Virus oder Virenbestandteils an das Sorbens in Schritt (i) und/oder (iii) das Sorbens mit einer weiteren Flüssigkeit gewaschen wird. Alternativ oder zusätzlich kann das oben beschriebene Verfahren verbessert werden, indem im Anschluss an das Lösen des (Blut)Plasmaproteins, des Virus oder Virenbestandteils vom Sorbens in Schritt (ii) und/oder (iv) das Sorbens mit einer weiteren Flüssigkeit gewaschen und/oder regeneriert wird.
- Schließlich kann das Verfahren auch der Gestalt weitergebildet werden, dass vor dem Binden des (Blut)Plasmaproteins, des Virus oder Virenbestandteils an das Sorbens in Schritt (i) und (iii) das Sorbens mit einer weiteren Flüssigkeit equilibriert wird.
- Bezüglich der Eigenschaften der zu reinigenden (Blut)Plasmaproteine, Viren oder Virenbestandteile bestehen keine besonderen Einschränkungen. Es hat sich jedoch als vorteilhaft erwiesen, wenn (Blut)Plasmaproteine, Viren oder Virenbestandteile aufgereinigt werden, deren isoelektrischer Punkt pI im Bereich von 5,5–8,5 liegt und die ein Molekulargewicht von dem Bereich von 100–500.000 Da aufweisen. Die (Blut)Plasmaproteine, Viren oder Virenbestandteile sind vorzugsweise Antikörper, und besonders bevorzugt Immunugloboline. Von diesen sind vor allem IgG, IgA und IgM für das beschriebene Verfahren besonders interessant. Neben Antikörpern können auch Fragmente oder Verbindungen von natürlichen Antikörpern, genetisch hergestellte Varianten von Virenbestandteilen mit dem beschriebenen Verfahren effektiv gereinigt werden.
- Die das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil enthaltene Mischung kann eine natürliche oder synthetische Mischung sein, insbesondere kann die Mischung aus Blutplasma oder einem Zwischen- oder Endprodukt aus Blutplasma bestehen. Besonders bevorzugt wird das Verfahren unter Verwendung von Blutplasma oder einem proteinhaltigem Fällungsprodukt, das nach einem Fraktionierungsverfahren von Blutplasma erhalten wurde, durchgeführt. Zum Beispiel sind Cohn-Fällungsprodukte als A + 1, II + III oder I + II + III Pasten kommerziell erhältlich. Das natürliche Blut kann menschlichen oder tierischen Ursprungs sein, allerdings ist die Verwendung von menschlichem Blut bevorzugt.
- Bei der Aufreinigung von (Blut)Plasmaproteinen kann vor dem eigentlichen Reinigungsverfahren oder innerhalb des Verfahrens nach den Schritten (ii) oder (iv) eine zusätzliche virale Inaktivierung durchgeführt werden. Typischerweise wird für eine solche Inaktivierung das Solvent-Detergent-Verfahren verwendet, bei dem vorhandene Viren durch Zugabe von nicht-ionischen Seifen und organischen Phosphaten zerstört werden, indem die Lipidschicht um die Virushülle aufgelöst wird. Die Durchführung eines solchen Schrittes ist beispielsweise durch B. Horowitz et al in blood, 79, 826–831 (1992) beschrieben. Alternativ können vorhandene Viren auch mit anderen Verfahren, beispielsweise durch die in der
US 4,939,176 beschriebenen Behandlung mit Caprylsäure inaktiviert werden. - Bei dem im Verfahren verwendeten Sorbentien 1 und 2 handelt es sich jeweils um ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit mindestens zwei Rezeptormolekülen funktionalisiert ist. Besonders bevorzugt besteht das Trägermaterial aus einem porösen Grundmaterial, das zur Einlagerung und Vernetzung einer Polyaminverbindung zunächst mit dieser Aminverbidung überzogen wird und anschließend unter Anknüpfung von funktionalisierten Rezeptormolekülen unter Ausbildung kovalenter Bindungen zwischen den Rezeptormolekülen und dem Polyamin funktionalisiert wird. Bei dem porösen Grundmaterial handelt es sich zweckmäßig um ein poröses Polystrol Als Polyaminverbindung hat sich die Verwendung von Polyvinylamin als besonders zweckmäßig erwiesen. Das Trägermaterial wird durch die Zugabe eines Vernetzungsmittels, beispielsweise Diepoxid, vernetzt. Die Herstellung von Trägermaterialien die mit Polyvinylamin überzogen sind, ist bereits im Stand der Technik, zum Beispiel in
EP 1 141 038 undEP 1 232 018 beschrieben worden. - Anschließend wird das so erhaltene Polyamin beschichtete Sorbens mit zwei organischen Resten funktionalisiert. Dabei hat sich insbesondere die Verwendung von Säure-funktionalisierten Rezeptormolekülen oder Derivaten davon, bei denen nach Umsetzung mit dem Polyvinylamin Amid-Verknüpfungen ausgebildet werden, als besonders zweckmäßig erwiesen.
- Es ist möglich, die im Sorbens vorhandenen Amingruppen vollständig mit organischen Resten zu funktionalisieren. In der Praxis der vorliegenden Erfindung ist es aber erwünscht, dass nur etwa 25 bis 98% der freien Amingruppen des Polyamins mit Rezeptormolekülen umgesetzt werden.
- Für das Sorbens 1 hat es sich gezeigt, dass zum einen Rezeptormoleküle einem Pyridinring (-C5H4N) deren Wasserstoffatome substituiert sein können und Carboxylgruppen (-COOH) zu besonders selektiven Sorbenzien führen. Dabei können sowohl der Pyridinring als auch die Carboxylgruppe über einen kovalent gebundenen Linker mit dem Polyaminmaterial verbunden sein. Falls ein Linker vorhanden ist, ist dieser vorzugsweise konformationell flexibel, damit sich das Rezeptormolekül in die für die Bindung des Peptids oder Proteins günstigste Stellung drehen kann.
- Für das Sorbens 2 führt hingegen die Verwendung von Benzopyrrolresten in Kombination mit Pyrrolresten zu besonders effizienten Trennungs- und Reinigungsergebnissen. Der Pyrrolrest kann insbesondere ein 3-Azapyrrolrest und besonders bevorzugt ein 4-Imidazolacryliamidrest sein. Der Benzopyrrolrest ist vorzugsweise ein 3-Indolpropionamidrest, wobei sich die Kombination der genannten speziellen Reste als besonders effektiv herausgestellt hat. Auch die Benzolpyrrol- und Pyrrolreste können über einen Linker, wie er vorstehend für das Sorbenz 1 beschrieben ist, mit der Polyaminverbindung im festen Trägermaterial verbunden sein.
- Für die Verknüpfung der Rezeptormoleküle mit dem festen Trägermaterial kommen alle bekannten Verfahren zur Verknüpfung von Aminen mit anderen funktionellen Gruppen in Betracht, insbesondere Verfahren zur Bildung von Amidbindungen, Sulfonamidbindungen oder die Umsetzung der Amine mit Aldehyden unter reduktiven Bedingungen. Wird eine Säurefunktionalität zur Verknüpfung mit den Aminresten des Trägermaterials verwendet, wird nach der Umsetzung in der Regel eine Amidfunktionalität erhalten mit der das Rezeptormolekül an das Trägermaterial gebunden ist. Zur Bildung solcher Amidverknüpfungen kommen alle im Stand der Technik beschriebenen Reaktionsarten in Betracht, die dem Fachmann geläufig sind.
- Auch die Bindung von Rezeptormolekülen an Trägermaterialien wie sie vorstehend beschrieben sind, wurde bereits im Stand der Technik, insbesondere in
WO 2004/085046 - Das Verfahren kann im Weiteren dadurch vorteilhaft ausgestaltet werden, dass die Flüssigkeiten 1 im Schritt (i) ein Puffer ist. Der Puffer hat bevorzugt eine Konzentration im Bereich von 1 bis 100 mM, insbesondere von 2 bis 20 mM. Der pH-Wert der Flüssigkeit liegt unabhängig von der Konzentration zweckmäßigerweise in der Nähe des isoelektrischen Punktes pI des gebundenen (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils, insbesondere in einem pH-Bereich von etwa 4.0 bis 6.0.
- Hinsichtlich des Verhältnisses des aufzureinigenden (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils in der Mischung zum Volumen des Sorbenses ergeben sich keine besonderen Beschränkungen. Es hat sich jedoch als zweckmäßig erwiesen, ein Verhältnis von 2–20, insbesondere 8–16 mg/ml zu wählen. Das Verhältnis von Flüssigkeit 1 zur Mischung enthaltend das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil im Schritt (i) unterliegt ebenfalls keinen besonderen Einschränkungen. Für dieses hat sich ein Verhältnisbereich von 5:1 bis 15:1, insbesondere 8:1 bis 10:1 bezogen auf das Gewicht Flüssigkeit zu Protein als besonders geeignet herausgestellt.
- Der in Schritt (i) als Flüssigkeit 1 verwendete Puffer ist vorzugsweise eine Substanz, die einen pKa-Wert im Bereich von 4.0 bis 6.0 aufweist, da dadurch eine möglichst hohe Pufferkapazität gewährleistet werden kann. Vorzugsweise ist der Puffer der Flüssigkeit 1 aus Kohlensäure-Silikatpuffern, Essigsäurepuffern, Citrat-Puffern, Phosphatpuffern und/oder 2-(N-Morpholino)ethansulfonsäure (MES) Puffern ausgewählt.
- Die im Schritt (ii) verwendete Flüssigkeit 2 kann ebenfalls ein Puffer sein, der eine höhere Konzentration als der in Schritt (i) verwendete Puffer aufweist, insbesondere eine Konzentration im Bereich von 50–200 und bevorzugt 80–120 mM. Der pH-Wert der Flüssigkeit 2 liegt zweckmäßig im Bereich des isoelektrischen Punktes pI des (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils, oder im Bereich von 6.5–8.5. Bevorzugt liegt der isoelektrische Punkt des (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils innerhalb dieses Bereichs. Dabei werden ebenfalls Puffer verwendet, deren pKa innerhalb dieses pH-Intervalls liegt wie zum Beispiel Carbonatpuffer, Ammoniakpuffer, TRIS-Puffer, HEPES, HEPPS oder Phosphatpuffer.
- Es hat sich gezeigt, dass das Verfahren hervorragende Trennleitungen liefert, wenn der pH-Wert der Flüssigkeit 1 im Bereich von 4.0 bis 6.0 und der pH-Wert der Flüssigkeit 2 im Bereich von 6.5 bis 8.5 liegt.
- Für die im Schritt (iii) als Flüssigkeit 3 verwendete Flüssigkeit gelten die speziellen Ausführungsformeln als vorteilhaft, die vorstehend für Flüssigkeit 2 als vorteilhaft beschrieben worden sind. Dabei ist es besonders zweckmäßig wenn die Flüssigkeiten 2 und 3 im beschriebenen Verfahren identisch sind, da so ein Austausch der Flüssigkeiten vor dem Aufbringen auf das Sorbens 2 entfallen kann.
- Bei der Flüssigkeit 4, die im Schritt (iv) verwendet wird, handelt es sich bevorzugt ebenfalls um eine Flüssigkeit auf Wasserbasis, insbesondere einen Puffer. Dieser weist zweckmäßigerweise einen pH-Wert im Bereich von 3.0 bis 6.5 auf. Der Puffer sollte weiterhin eine Konzentration (des Puffers) im Bereich von 50 bis 300 mM, insbesondere von 100 bis 200 mM aufweisen. Darüber hinaus hat es sich als vorteilhaft herausgestellt, wenn die Flüssigkeit neben dem Puffer noch ein neutrales Salz, insbesondere Natriumchlorid in einer Konzentration im Bereich von 50 bis 200 mM enthält. Auch der als Flüssigkeit 4 verwendete Puffer basiert zweckmäßigerweise auf einer Säure, deren pKa im Bereich des bevorzugten pH-Werts des Puffers, also im Bereich von 3.0 bis 6.5 liegt. So können wie bei der Flüssigkeit 1 Kohlensäure/Silikat, Essigsäure, Citrat, Phosphat und/oder 2-(N-Morpholino)ethansulfonsäure (MES) als Pufferbasis gewählt werden.
- Für die Schritte (iii) und (iv) hat es sich als besonders vorteilhaft herausgestellt, wenn der pH-Wert der Flüssigkeit 3 im Bereich von 5.5 bis 8.5 und der pH-Wert der Flüssigkeit im Bereich von 3.0 bis 6.5 liegt.
- Während des optional vorgeschalteten Equilibrierens der Sorbenzien 1 und/oder 2, das den Schritten (i) und/oder (iii) vorgeschaltet sein kann, wird vorzugsweise ein Puffer verwendet, der eine höher Konzentration aufweist als die Flüssigkeiten 1 und/oder 3. Für das dem Schritt (i) vorgeschaltete Equilibrieren des Sorbenzes 1 hat es sich als zweckmäßig herausgestellt, wenn der Puffer eine Konzentration im Bereich von 250 bis 3000 mM aufweist. Weiterhin ist es zweckmäßig einen Puffer auf demselben Säure/Salzsystem zu wählen, wie er als Flüssigkeit 1 verwendet wird und der denselben pH-Wert aufweist wie die danach verwendete Flüssigkeit 1. Anschließend kann das Sorbens 1 vor dem Aufbringen der Mischung im Schritt (i) zusätzlich noch mit der Flüssigkeit 1 gespült werden.
- Für den Schritt (iii) wird als zum Equilibrieren verwendete Flüssigkeit vorzugsweise eine Säurelösung verwendet, insbesondere Essigsäurelösung. Diese sollte eine Konzentration im Bereich von 200–600 mM aufweisen. Anschließend kann auch vor dem Schritt (iii) das Sorbens 2 mit der Flüssigkeit 3 gespült werden, um den pH-Wert des Sorbenzes auf die zum Auftragen des vorgereinigten Peptids verwendete Flüssigkeit 3 einzustellen.
- Bei den optionalen den Schritten (i) und (iii) nachgeschalteten Waschschritten der Sorbenzien 1 oder 2 wird zweckmäßigerweise die im jeweiligen Schritt (i) oder (iii) verwendete Flüssigkeit verwendet. Dabei hat sich herausgestellt, dass ein an den Schritt (iii) angeschlossenes Waschen zu keinen besseren Ergebnissen führt, so dass nur das Waschen nach dem Schritt (i) mit Flüssigkeit 1 angewandt werden sollte.
- Beide Sorbentien 1 und 2 können durch Spülen mit stark basischer Lösung regeneriert und von auf den Sorbentien verbliebenem Protein oder Peptid gereinigt werden. Dabei beträgt der pH-Wert der basischen Lösung vorteilhaft mindestens 9, besonders bevorzugt wird ein pH-Wert von etwa 10 verwendet. Als Base kann jede kommerziell erhältliche Base verwendet werden, aus Kostengründen empfiehlt es sich aber, Natriumhydroxyid oder Kaliumhydroxid zu verwenden. Vor der Regenerierung insbesondere des Sorbenzes 2 kann das Sorbens zusätzlich noch mit einer Säurelösung gespült werden, insbesondere mit einer Konzentration von zwischen 250 und 1000 mM.
- Die Vorrichtung zur Trennung und Aufkonzentration und/oder Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils aus einer Mischung, die dieses Protein oder Peptid enthält, kann durch die Verwendung der Sorbenzen 1 und 2, deren Aufbau vorstehend beschrieben ist, vorteilhaft ausgestaltet werden. Insbesondere werden in der Vorrichtung ein Sorbens 1 dessen Oberfläche mit Pyridin-4-carboxyamidresten und 3-Carboxamidopropionsäureresten funktionalisiert ist. Besonders gute Trennleistungen lassen sich daneben durch ein Sorbens 2 erzielen, dessen Oberfläche mit Benzopyrrolresten und 3-Azapyrrolresten funktionalisiert ist, insbesondere mit 3-Indolpropionamidresten und 4-Imidazolacrylamidresten.
- Mit dem vorstehend beschriebenen Verfahren und der Vorrichtung lassen sich Antikörper, insbesondere Immunglobuline wie IgG, IgM und IgA in wenigen Schritten und kostengünstig reinigen. Das folgende Beispiel soll aber nur zur Illustration der beschriebenen Erfindung dienen und deren Umfang nicht in irgendeiner Weise beschränken.
- Beispiel 1
- Das Sorbenz 1 wird mit 500 mM Citrat-Puffer (pH 5.0) gespült und anschließend mit der gleichen Menge 10 mM Citrat-Puffer (pH 5.0) equilibriert. Anschließend wird eine kommerzielle A + 1 Paste als 10%ige Lösung in 10 mM Citrat-Puffer bei pH 5 auf das Sorbens aufgebracht und mit demselben Puffer gespült. In den zuerst gewonnenen Fraktionen wird Albumin und Transferrin (Ausbeute quantitativ dazu, Reinheit rund 90%) erhalten, die in weiteren Reinigungsstufen (Ionentauscher) gereinigt werden können. Nach dem Auffangen der Albumin/Transferinfraktionen wurde die Säule mit weiterem 10 mM Citrat-Puffer bei pH (5.0) gespült. Anschließend wurde vorgereinigtes IgG durch Spülen mit 100 mM Phosphatpuffer bei pH 7,4 von der Säure eluiert. Das dabei erhaltene IgG hatte Reinheit von ≥ 80% und wurde in einer Ausbeute von ≥ 98% erhalten. Das Produkt war Albumin- und Transferrinfrei.
- Vor dem Auftragen dieses Zwischenprodukts auf das Sorbenz 2 wurde dieses ebenfalls zunächst durch Spülen mit 400 mM Essigsäurelösung und anschließendem Spülen mit 100 mM Phosphatpuffer (pH 7,4) equilibriert. Anschließend wurde das vom Sorbenz 1 eluierte, in Phosphatpuffer gelöste Zwischenprodukt auf das Sorbens aufgebracht. Die Beladung betrug bezogen auf IgG 12 mg/ml Sorbensvolumen. Anschließend wurde durch Spülen mit 150 mM Acetatpuffer (pH 4,3)/100 mM Natriumchlorid reines IgG von der Säure eluiert. Das so erhaltene IgG kann auf 10–20% Gehalt aufkonzentriert werden. Schließlich wurde das Sorbens mit 500 mM Essigsäure gespült und IgA und IgM mit einer Ausbeute von ≥ 90% in hoher Reinheit gewonnen. Das gewonnene IgG als Lösungen mit einem Gehalt von 10% weist die folgenden Eigenschaften auf:
Reinheit: > 99,5 Ausbeute: 93% (über zwei Säulen) IgG-Aktivität: 95–105% IgA: 10–20 μm/ml (≤ 0.01%) IgM: 0.25 bis 0.50 μm/ml (0.00%) Albonin: 50–100 μm/ml (≤ 0.05%) Transferrin: 5–10 μm/ml (0.00%) Restproteine: Fibrinogen, Haptoglobolin, 2-Macroglobolin, Apolipoprotein A und B und IgD (alle unter dem Dedektionslimit ≤ 0.01%) - Als Sorbens 1 wurde ein mit Pyridin-4-carboxyamidresten und 3-Carboxamidopropionsäureresten funktionalisiertes Trägermaterial, als Sorbens 2 ein mit 3-Indolpropionamidresten und 4-Imidazolacrylamidresten funktionalisiertes Trägermaterial verwendet. Die kommerzielle A + 1 Paste hatte die folgende Zusammensetzung: IgG: 77%; IgA: 7%; IgM: 3%; Albumin 12%; Transferrin 1%; Gesamtproteingehalt: 75%.
- ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
- Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
- Zitierte Patentliteratur
-
- DE 69823931 [0002]
- CA 1201063 [0003]
- US 4476190 [0004]
- US 4939176 [0013]
- EP 1141038 [0014]
- EP 1232018 [0014]
- WO 2004/085046 [0020]
- Zitierte Nicht-Patentliteratur
-
- B. Horowitz et al in blood, 79, 826–831 (1992) [0013]
Claims (26)
- Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils aus einer Mischung, die dieses enthält, wobei die das (Blut)Plasmaprotein oder den Virenbestandteil enthaltende Mischung natürliches menschliches oder tierisches Blut oder ein Zwischen- oder fertiges Produkt von natürlichem menschlichen oder tierischen Blut ist, insbesondere Blutplasma oder ein proteinhaltiges Fällungsprodukt, das nach einem Fraktionierungsverfahren aus Blutplasma erhalten wurde, umfassend: (i) das in-Kontakt-Bringen der Mischung, die in einer Flüssigkeit 1 gelöst oder suspendiert ist mit einem Sorbens 1 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil an das Sorbens 1 zu binden; (ii) das in-Kontakt-Bringen des Sorbens 1 mit dem daran gebundenen (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil mit einer Flüssigkeit 2 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil von dem Sorbens 1 zu lösen; (iii) das in-Kontakt-Bringen des (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils aus (ii), das/der in einer Flüssigkeit 3 gelöst oder suspendiert ist mit einem Sorbens 2 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil an das Sorbens 2 zu binden; (iv) das in-Kontakt-Bringen des Sorbens 2 mit dem daran gebundenen (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil mit einer Flüssigkeit 4 für einen ausreichenden Zeitraum, um das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil von dem Sorbens 2 zu lösen, wobei die Sorbenzien 1 und 2 jeweils ein festes Trägermaterial darstellen, dessen Oberfläche mit mindestens zwei Rezeptormolekülen funktionalisiert ist, wobei die Oberfläche des Sorbenzes 1 mit Pyridin-4-carboxyamido-Resten und 3-Carboxamidopropionsäure-Resten und die Oberfläche des Sorbens 2 mit Benzopyrrol-Resten und 3-Azapyrrolresten funktionalisiert ist.
- Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass im Anschluss an das Binden des (Blut)Plasmaproteins, des Virus oder Virenbestandteils an das Sorbens im Schritt (i) und/oder (iii) das Sorbens mit einer weiteren Flüssigkeit gewaschen wird.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass im Anschluss an das Lösen des (Blut)Plasmaproteins, des Virus oder Virenbestandteils vom Sorbenz im Schritt (ii) und/oder (iv) das Sorbens mit einer weiteren Flüssigkeit gewaschen und/oder regeneriert wird.
- Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass vor dem Binden des (Blut)Plasmaproteins, des Virus oder Virenbestandteils an das Sorbens in Schritt (i) und/oder (iii) das Sorbens mit einer weiteren Flüssigkeit equilibriert wird.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert der Flüssigkeiten 2 oder 3 in der Nähe des isoelektrischen Punktes pI des gebundenen (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils liegt.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert der Flüssigkeit 1 im Bereich von 4.0 bis 6.0 und der pH-Wert der Flüssigkeit 2 im Bereich von 6.5 bis 8.5. liegt.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert der Flüssigkeit 3 im Bereich von 5.5 bis 8.5 und der pH-Wert der Flüssigkeit 4 im Bereich von 3.0 bis 6.5. liegt.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das (Blut)Plasmaprotein, der Virus oder Virenbestandteil einen isoelektrischen Punkt pI im Bereich von 5,5 bis 8,5 und ein Molekulargewicht von 100 bis 500.000 Da aufweist.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das (Blut)Plasmaprotein, der Virus oder Virenbestandteil Immunoglobulin-G oder ein natürlicher Antikörper ist.
- Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Benzopyrrolreste 3-indolpropionamidreste und die 3-Azapyrrolreste 4-Imidazolacrylamidoreste darstellen.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeit 1 in Schritt (i) ein Puffer mit einer Konzentration im Bereich von 1 bis 100, insbesondere 2 bis 20 mM ist.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Verhältnis von Gewicht des aufzureinigenden (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils in der Mischung zum Volumen des Sorbenzes im Bereich von 2 bis 20, insbesondere 8 bis 16 mg/mL liegt.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeit 2 in Schritt (ii) ein Puffer mit einer Konzentration im Bereich von 50 bis 200, insbesondere 80 bis 120 mM ist.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeit 3 in Schritt (iii) ein Puffer mit einer Konzentration im Bereich von 50 bis 200, insbesondere 80 bis 120 mM ist.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeiten 2 und 3 identisch sind.
- Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeit 4 in Schritt (iv) ein Puffer mit einer Konzentration im Bereich von 50 bis 300, insbesondere 100 bis 200 mM ist.
- Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeit 4 weiterhin Natriumchlorid in einer Konzentration im Bereich von 50 bis 200 mM enthält.
- Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die zum Equilibrieren vor Schritt (i) verwendete Flüssigkeit ein Puffer mit einer Konzentration im Bereich von 250 bis 2000 mM aufweist.
- Verfahren nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass der Puffer ein pH-Wert von zwischen 4.0 und 6.0 aufweist.
- Verfahren nach Anspruch 18 oder 19, dadurch gekennzeichnet, dass vor dem Schritt (i) das Sorbens 1 mit Flüssigkeit 1 gespült wird.
- Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die zum Equilibrieren vor Schritt (iii) verwendete Flüssigkeit eine Säurelösung ist, die eine Konzentration im Bereich von 200 bis 600 mM aufweist.
- Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, dass vor dem Schritt (iii) das Sorbens 2 mit Flüssigkeit 3 gespült wird.
- Verfahren nach Anspruch 2 oder einem davon abhängigen Anspruch, dadurch gekennzeichnet dass die zum Spülen nach dem Schritt (i) verwendete Flüssigkeit die Flüssigkeit 1 ist.
- Verfahren nach Anspruch 3 oder einem davon abhängigen Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Sorbens durch Spülen mit basischer Lösung und einem pH von mindestens 9 regeneriert wird.
- Verfahren nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, dass Natriumhydroxidlösung mit einem pH-Wert von etwa 10 verwendet wird.
- Vorrichtung zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins, eines Virus oder Virenbestandteils aus einer Mischung, die dieses (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil enthält, wobei die das (Blut)Plasmaprotein oder den Virenbestandteil enthaltende Mischung natürliches menschliches oder tierisches Blut oder ein Zwischen- oder fertiges Produkt von natürlichem menschlichen oder tierischen Blut ist, insbesondere Blutplasma oder ein proteinhaltiges Fällungsprodukt, das nach einem Fraktionierungsverfahren aus Blutplasma erhalten wurde, umfassend: – eine erste stationäre Phase umfassend ein Sorbens 1 mit einem Einlass zum Aufbringen der das (Blut)Plasmaprotein, den Virus oder Virenbestandteil enthaltenden Mischung und einem Auslass zum Auffangen des vorgereinigten (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils, und – einer zweiten stätionären Phase umfassend ein Sorbens 2 mit einem Einlass zum Aufbringen der vorgereinigten (Blut)Plasmaprotein, Virus oder Virenbestandteils und einem Auslass zum Auffangen des gereinigten (Blut)Plasmaproteins, Virus oder Virenbestandteils, wobei die Sorbenzien 1 und 2 jeweils ein festes Trägermaterial sind, dessen Oberfläche mit mindestens zwei Rezeptormolekülen funktionalisiert ist, wobei die Oberfläche des Sorbenzes 1 mit Pyridin-4-carboxyamido-Resten und 3-Carboxamidopropionsäure-Resten und die Oberfläche des Sorbens 2 mit Benzopyrrol-Resten und 3-Azapyrrolresten funktionalisiert ist.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE102010054767A DE102010054767B4 (de) | 2010-12-16 | 2010-12-16 | Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaprotein, Viren oder Virenbestandteilen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE102010054767A DE102010054767B4 (de) | 2010-12-16 | 2010-12-16 | Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaprotein, Viren oder Virenbestandteilen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE102010054767A1 true DE102010054767A1 (de) | 2012-06-21 |
DE102010054767B4 DE102010054767B4 (de) | 2013-02-21 |
Family
ID=46512039
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE102010054767A Expired - Fee Related DE102010054767B4 (de) | 2010-12-16 | 2010-12-16 | Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaprotein, Viren oder Virenbestandteilen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE102010054767B4 (de) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102012022233A1 (de) * | 2012-11-14 | 2014-05-15 | Instraction Gmbh | Verfahren zur Reinigung eines (Blut)plasmaproteins |
DE102012022234A1 (de) * | 2012-11-14 | 2014-05-15 | Instraction Gmbh | Einstufiges Verfahren zur Reinigung von (Blut)Plasmaproteinen wie Albumin aus Gemischen |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4476190A (en) | 1981-10-15 | 1984-10-09 | Allied Colloids Limited | Adhesives for prepasted wallcoverings |
CA1201063A (en) | 1982-07-20 | 1986-02-25 | Winnipeg Rh Institute Inc., (The) | Process for preparing purified immune globulin (igg) |
US4939176A (en) | 1988-12-20 | 1990-07-03 | Miles Inc. | Viral inactivation process |
EP1141038A1 (de) | 1998-11-30 | 2001-10-10 | instrAction GmbH | Verfahren zur herstellung eines polymeren netzwerkes |
EP1232018A2 (de) | 1999-11-26 | 2002-08-21 | instrAction GmbH | Verfahren zum aufbringen eines polymers auf einen träger |
US20020155509A1 (en) * | 1997-06-20 | 2002-10-24 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Retentate chromatography and protein chip arrays with applications in biology |
WO2004085046A2 (de) | 2003-03-25 | 2004-10-07 | Instraction Gmbh | Verfahren zur selektiven bindung eines substrats an sorbentien durch mindestens bivalente bindung |
DE69823931T2 (de) | 1997-06-20 | 2005-06-16 | Bayer Corp. | Chromatographieverfahren für Reinigung von IgG mit hoher Ausbeute und Virusinaktivierung |
-
2010
- 2010-12-16 DE DE102010054767A patent/DE102010054767B4/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4476190A (en) | 1981-10-15 | 1984-10-09 | Allied Colloids Limited | Adhesives for prepasted wallcoverings |
CA1201063A (en) | 1982-07-20 | 1986-02-25 | Winnipeg Rh Institute Inc., (The) | Process for preparing purified immune globulin (igg) |
US4939176A (en) | 1988-12-20 | 1990-07-03 | Miles Inc. | Viral inactivation process |
US20020155509A1 (en) * | 1997-06-20 | 2002-10-24 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Retentate chromatography and protein chip arrays with applications in biology |
DE69823931T2 (de) | 1997-06-20 | 2005-06-16 | Bayer Corp. | Chromatographieverfahren für Reinigung von IgG mit hoher Ausbeute und Virusinaktivierung |
EP1141038A1 (de) | 1998-11-30 | 2001-10-10 | instrAction GmbH | Verfahren zur herstellung eines polymeren netzwerkes |
EP1232018A2 (de) | 1999-11-26 | 2002-08-21 | instrAction GmbH | Verfahren zum aufbringen eines polymers auf einen träger |
WO2004085046A2 (de) | 2003-03-25 | 2004-10-07 | Instraction Gmbh | Verfahren zur selektiven bindung eines substrats an sorbentien durch mindestens bivalente bindung |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
B. Horowitz et al in blood, 79, 826-831 (1992) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102012022233A1 (de) * | 2012-11-14 | 2014-05-15 | Instraction Gmbh | Verfahren zur Reinigung eines (Blut)plasmaproteins |
DE102012022234A1 (de) * | 2012-11-14 | 2014-05-15 | Instraction Gmbh | Einstufiges Verfahren zur Reinigung von (Blut)Plasmaproteinen wie Albumin aus Gemischen |
WO2014076202A2 (de) * | 2012-11-14 | 2014-05-22 | Previpharma Ag | Einstufiges verfahren zur reinigung von (blut)plasmaproteinen wie albumin aus gemischen |
WO2014076199A3 (de) * | 2012-11-14 | 2014-10-23 | Previpharma Ag | Verfahren zur reinigung eines (blut)plasmaproteins |
WO2014076202A3 (de) * | 2012-11-14 | 2014-10-23 | Previpharma Ag | Einstufiges verfahren zur reinigung von (blut)plasmaproteinen wie albumin aus gemischen |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE102010054767B4 (de) | 2013-02-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2322552C2 (de) | Verfahren zum Abtrennen von Protein A aus Staphylococcus aureus aus einer Flüssigkeit | |
DE2322533C2 (de) | Verfahren zum Binden von Immunoglobulin und Hilfsmittel zur Durchführung des Verfahrens | |
DE3280469T2 (de) | Ultrareinigung des Faktors VIII. | |
DE69127384T3 (de) | Verfahren zur Reinigung von Immunserumglobulinen | |
DE60207848T2 (de) | Verfahren zur herstellung von konzentrierten menschlichen immunoglobulinen für die therapeutische verwendung | |
DE2645466C2 (de) | Verfahren zum Isolieren von Albumin aus Plasmaprodukten | |
EP0447585B1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates | |
DE60102144T2 (de) | EINE METHODE ZUR HERSTELLUNG VON IgG | |
DE69637509T2 (de) | Verfahren zur reinigung von faktor-ix | |
DE3521679A1 (de) | Verfahren zum binden von igg an protein a | |
DE69002427T2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Konzentrats des Faktor VIII-von Willebrand-Faktor-Komplexes der Blutgerinnung aus Vollplasma. | |
DE2430356A1 (de) | Verfahren zur markierung von immunoglobulin oder dessen fc-fragment und mittel zur durchfuehrung des verfahrens | |
CH647158A5 (de) | Verfahren zur reinigung von interferon. | |
WO1998038219A1 (de) | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie | |
DE3786832T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Immunoglobulinzubereitungen für intravenöse Injektion. | |
DE60213248T2 (de) | Verfahren zur reinigung hochanionischer proteine | |
DE102010054767B4 (de) | Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration und/oder Reinigung von (Blut)Plasmaprotein, Viren oder Virenbestandteilen | |
DE102010054766B4 (de) | Verfahren zur Trennung, Aufkonzentration oder Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins oder Virenbestandteils aus einer Mischung | |
DE2616984C3 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung eines plazentenspezifischen Glycoproteins | |
DE69330458T3 (de) | Verfahren zur gewinnung eines hochreinen factor viii/von willebrand faktor komplexes durch anionenaustauschchromatographie | |
DE69434001T2 (de) | Reinigung von vitamin-k abhaengigen proteinen durch membrane chromatographie | |
DE69303941T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von hochreinem Fibrinogen | |
CH639394A5 (de) | Verfahren zur herstellung von immunglobulinpraeparationen mit verminderter komplementaktivitaet. | |
EP0975671B1 (de) | VERFAHREN ZUR CHROMATOGRAPHISCHEN REINIGUNG BZW. FRAKTIONIERUNG VON VON WILLEBRAND-FAKTOR AUS EINEM vWF-HÄLTIGEN AUSGANGSMATERIAL | |
WO2014076199A2 (de) | Verfahren zur reinigung eines (blut)plasmaproteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R016 | Response to examination communication | ||
R018 | Grant decision by examination section/examining division | ||
R020 | Patent grant now final |
Effective date: 20130522 |
|
R082 | Change of representative |
Representative=s name: PATENTANWAELTE STOLMAR & PARTNER, DE |
|
R081 | Change of applicant/patentee |
Owner name: INSTRACTION GMBH, DE Free format text: FORMER OWNER: PREVIPHARMA AG, 6300 ZUG, CH Effective date: 20140120 |
|
R082 | Change of representative |
Representative=s name: WETZEL, FRITZ THOMAS, DIPL.-CHEM. UNIV. DR. RE, DE Effective date: 20140120 Representative=s name: PATENTANWAELTE STOLMAR & PARTNER, DE Effective date: 20140120 |
|
R082 | Change of representative |
Representative=s name: WETZEL, FRITZ THOMAS, DIPL.-CHEM. UNIV. DR. RE, DE |
|
R119 | Application deemed withdrawn, or ip right lapsed, due to non-payment of renewal fee |