DE10138929A1

DE10138929A1 - Artischockenblätterextrakte

Info

Publication number: DE10138929A1
Application number: DE10138929A
Authority: DE
Inventors: Juergen Eich; Thomas Haffner; Thomas Goerke; Werner Schneider
Original assignee: LICHTWER PHARMA AG
Current assignee: LICHTWER HEALTHCARE GMBH & CO.KG, 13435 BERLIN, DE
Priority date: 2001-08-08
Filing date: 2001-08-08
Publication date: 2003-02-27
Also published as: MXPA04001115A; IL160083A; HRP20040225A2; DE10164893B4; PL205013B1; YU12404A; HUP0600153A3; PL368184A1; CA2455761A1; WO2003013562A1; IL160083A0; JP2004537578A; HUP0600153A2; US20040234674A1; NO20040979L; EP1416950A1; HRPK20040225B3

Abstract

Artischockenblätterextrakte (Cynarae folium), die sich durch definierte absolute Gehalte und relative innere Gehalte typischer Inhaltsstoffe der Artischockenblätter wie Caffeoylchinasäuren und Flavonoide auzeichnen und sich in ihrem Wirkspektrum von bekannten Artischockenblätterextrakten und untereinander deutlich unterscheiden. Das Herstellungsverfahren und Anwendungsgebiete dieser Extrakte werden beschrieben.

Description

Die Erfindung betrifft Extrakte aus Artischockenblättern (Cynarae folium), Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung in verschiedenen Anwendungsgebieten.

Stand der Technik

Zubereitungen aus Blättern der Artischocke (Cynara scolymus L.) finden eine weit verbreitete Anwendung in der Therapie funktioneller dyspeptischer Beschwerden. Verwendet werden Preßsäfte aus frischen Blättern sowie genuine wässrige und wässrig/alkoholische Extrakte (Primärextrakte) aus frischen und getrockneten Blättern.
Die choleretische (gallenflußfördernde) Wirkung, das Hauptwirkprinzip zur Behandlung der funktionellen Dyspepsie, konnte für wässrige, bzw. alkoholisch/wässrige Primärextrakte mit Hilfe von in vitro und in vivo Experimenten eindeutig nachgewiesen werden und gilt als wissenschaftlich gesichert (Brand N. Monographie Cynara. In: Hänsel R, Keller K, Rimpler H, Schneider G (Hrsg.): Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis. 5. Aufl., Band 4: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122 und den dort zitierten Arbeiten; BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302 und den dort zitierten Arbeiten]. Diese Extrakte werden offiziell zur Behandlung bei dyspeptischen Beschwerden anerkannt (Aufbereitungsmonographie für Cynarae folium, Artischockenblätter, BAnz 122, 6.7.1988, in der korrigierten Fassung des BAnz 164, 1.9.1990).
Bezüglich der genannten Wirkungen werden folgende Inhaltsstoffklassen von Artischockenblättern und deren Extrakten als spezifische Leitsubstanzen und potentielle Wirksubstanzen diskutiert: 1. Mono-, Di-Caffeoylchinasäuren (CCS) und 2. Flavonoide. Es ist davon auszugehen, daß weitere, bisher noch nicht identifizierte Verbindungen, Anteile am pharmakologischen und klinischen Wirkspektrum von Artischockenextrakten und Extraktfraktionen haben können. Über eine analytische RP-HPLC-Gradientenmethode können die einzelnen Mono- und Di-CCS sowie die Flavonoide aus Artischockenblättern und deren Extrakte getrennt und quantifiziert werden (BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21). Im HPLC-Fingerprintchromatogramm von wässrigen Artischockenblätterextrakten können vier Mono- und bis zu fünf Di-CCS-Isomere sowie mindestens zwei Flavonoide identifiziert werden. Bei dieser analytischen Methode eluieren zuerst die stärker hydrophilen Mono-CCS, gefolgt von Cynarin (1,5-Di-CCS) und zwei bis drei Flavonglykosiden. Danach schließen sich die verbleibenden mehr lipophileren Di-CCS sowie unter Umständen in kleineren Mengen weitere Flavonglykoside und Flavon-Aglykone an (Abb. 1). Die Quantifizierung der Inhaltsstoffklassen erfolgt üblicherweise durch Summenbildung, wobei der CCS- Gehalt als Chlorogensäure (= Mono-CCS) und der Flavonoid- Gehalt als Luteolin-7-glucosid (= Cynarosid) berechnet wird.
Neben dem Hauptwirkprinzip "gesteigerte Cholerese" gibt es für Artischockenblätterextrakte Hinweise auf anticholestatische, antioxidative und zellstimulierende und zellprotektive Wirkungen sowie die günstige Beeinflussung des Lipidstoffwechsels. Diese wurden durch in vitro-, tier- und humanpharmakologische und klinische Untersuchungen erhalten (BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302 sowie in den darin zitierten Arbeiten; BRAND N. Monographie Cynara. In: HANSEL R, KELLER K, RIMPLER H, SCHNEIDER G (Hrsg.): Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis. 5. Aufl., Band 4: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; EP-A-0 958 828).
Weiterhin gibt es Daten zur Wirksamkeit von Artischockenblätterextrakten bei der Senkung von Blutserumwerten von Glucose, Kreatinin und Bilirubin, zur Immunstimulation und Therapie von Leukozytopenie, Granulozytopenie, Lymphozytopenie und Knochenmarksschädigungen zur Behandlung von Diabetes und Strahlen-, bzw. Cytostatika-Schäden der Tumortherapie (DE-A- 196 27 376; WO 98/01143; DE-A-198 50 543).
In vitro Untersuchungen von wässrigen Artischockenblätter- Primärextrakten an Rattenhepatozyten und humanen HepG2-Zellen (Hepatozyten) zeigen eine moderate, konzentrationsabhängige Hemmung der Cholesterinbiosynthese, verursacht durch eine indirekte Hemmung der HMG-CoA-Reduktase, dem Schlüsselenzym des endogenen Cholesterinbiosynthese. Für wässrige Artischockenblätter-Primärextrakte wurde eine moderate Wirksamkeit zur Senkung der Cholesterin- und LDL-Werte sowie eine günstige Beeinflussung des HDL/LDL-Verhältnisses klinisch nachgewiesen (FINTELMANN V. Z. Allg. Med. 1996; 72: 48-57; KRAFT K. et al. Phytomedicine 1997; 4: 369-378; ENGLISCH W. et al. Arzneim.-Forsch./Drug Res. 2000; 50: 260-265; SIEDEK H. et al. Wiener klinische Wochenschrift 1963; 75: 460-463; SCHÖNHOLZER G. Schweizerische Medizinische Wochenzeitschrift 1939; 69: 1288-1290). Als Artischockenblätter-Inhaltsstoffe mit hemmenden Einfluß auf die Aktivität der HMG-CoA-Reduktase konnten Luteolinglykoside sowie freies Luteolin und 1,5-Dicaffeoylchinasäure (Cynarin) aus den Primärextrakten mit Hilfe von in vitro Experimenten an Hepatozyten identifiziert werden. Die Wirkung dieser Verbindungen bei humantherapeutischer Anwendung ist jedoch ungeklärt (GEBHARDT R. J. Pharmacol. Exp. Therap. 1998; 286: 1122-1128; GEHARDT R. Phytotherap. Res. 2001; 15: 1-5; GEBHARDT R. Medwelt 1995; 46: 348-350; EP 0 807 435 A2; Mars G. et al. Med. Welt 1974; 25: 1572-1574; PRISTAUTZ H. Wiener Med. Wochenzeitschr. 1975; 49: 705-709).
Für oben genannte und weitere isolierte Einzelverbindungen aus Artischockenblätterextrakten wurden pharmakologische Wirkungen nachgewiesen, die begründete Hinweise auf therapeutische Anwendungen in den oben und nachfolgend genannten Indikationen schließen lassen (BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302 sowie in den darin zitierten Arbeiten; BRAND N. Monographie Cynara. In: HÄNSEL R, KELLER K, RIMPLER H, SCHNEIDER G (Hrsg.): Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis. 5. Aufl., Band 4: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; EP-A-0958 828). Zur humantherapeutischen Anwendung ist bis heute keine der isolierten Substanzen gelangt.
Zusammenfassend kann festgehalten werden, daß für primäre Artischockenblätterextrakte eine Vielzahl sehr unterschiedlicher Anwendungsgebiete, wie z. B. Anwendungen bei Magen-Darmerkrankungen (z. B. Dyspepsie), gestörtem Fettstoffwechsel, zur Erhöhung des Zellschutzes bei Diabetikern und Tumorpatienten sowie zur Immunstimulation beschrieben worden sind. Aus der Vielzahl der Anwendungsgebiete ergibt sich jedoch auch eine unerwünschte Eigenschaft von primären Artischockenblätterextrakten, da eine gezielte Therapie definierter Erkrankungen nicht ohne Nebenwirkungen in anderen Bereichen des Organismus erfolgen kann.
Im Markt befindliche Artischockenblätter-Präparate enthalten ausschließlich primäre Artischockenblätterextrakte mit dem oben beschriebenen komplexen pharmakologischen und klinischen Wirkprofil, aber keine "Spezialextrakte" mit "eingeschränkter" Wirkung für gezielte nebenwirkungsfreie Therapien (BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302). Zum Stand der Technik gehören Preßsäfte, primäre wässrige, methanolische und ethanolische Auszüge, von denen die im wesentlichen nur wässrigen Auszüge in Form von Trockenextrakten vorrangig in festen Arzneiformen kommerziell genutzt werden (Tabelle 1). Daneben werden ethanolische Auszüge in flüssigen Zubereitungen (Tropfen, Säfte) verwendet. Sie spielen jedoch in ihrer Verbreitung eine untergeordnete Rolle.
Die Herstellung von Primärextrakten erfolgt in der Regel durch erschöpfende Extraktion der frischen oder getrockneten Blätter bei erhöhter Temperatur. Bei der Extraktion mit Wasser werden für ein Teil Extrakt in der Regel 3-8 Teile Droge, bzw. 20-40 Teile frische Blätter (Wassergehalt der frischen Blätter: 80-90%) benötigt. Die Extraktausbeute ist abhängig von der Qualität der Blätter, den Extraktionsbedingungen und dem verwendeten Auszugsmittel.
CCS-Gehalte bis zu 6% für primäre wässrige Extrakte können als Stand der Technik angesehen werden. Davon entfallen 55 bis 69% auf Mono-CCS, bzw. 31 bis 45% auf Di-CCS. Der Flavonoid-Gehalt wässriger Primärextrakte liegt in Abhängigkeit der Drogenqualität zwischen 0,1% und 1% (Tabelle 1). Tabelle 1 Gesamt-CCS- und Flavonoidgehalte sowie Anteile von Mono-, Di-CCS- am Gesamt-CCS-Gehalt in wässrigen Artischockenblätter-Trockenextrakten aus Handelspräparate (BRAND DAZ 1997; 137: 60-76) und eigene Ergebnisse gemäß Standardverfahren
Zusammenfassend kann festgestellt werden, daß eine Extraktion mit Wasser oder wässrigen Alkoholen eine quantitative Anreicherung der CCS und Flavonoide im Extrakt bewirkt. Die relativen Verhältnisse der Verbindungen zueinander bleiben jedoch praktisch unverändert. Daraus darf geschlossen werden, daß das bekannte komplexe pharmakologisch/klinische Wirkprofil sowohl für die Ausgangsdrogen und der daraus hergestellten wässrigen oder wässrig/alkoholischen Extrakte qualitativ identisch sein sollte. Lediglich die Wirkstärke sollte eine Funktion der Konzentration der analysierten Verbindungen sein.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, die unterschiedlichen, zum Teil divergierenden Wirkprofile wässriger, bzw. alkoholisch/wässriger Primärextrakte voneinander zu trennen, um eine gezielte therapeutische Verwendung ohne unerwünschte Nebenwirkungen sicherzustellen (z. B. eine lipidsenkende Wirkung ohne antidyspeptische Wirkung oder umgekehrt). Dazu werden Primärextrakte durch das erfindungsgemäße Verfahren in zwei Extraktfraktionen A und B getrennt, welche ein unterschiedliches Wirkungsspektrum besitzen. Extraktfraktion A besitzt eine lipidsenkende und zellprotektive (antioxidative) Wirkung und eine, zum Primärextrakt nicht mehr vorhandene antidyspeptische Wirkung. Extraktfraktion B ist ein deutlich wirksameres Antidyspeptikum als der Primärextrakt, weist jedoch nahezu keine lipid-/cholesterinsenkenden Eigenschaften mehr auf. Eine weitere Aufgabe ist es, Verfahren zur Herstellung dieser Extraktfraktionen bereitzustellen.

Zusammenfassung der Erfindung

Ein erster Aspekt der Erfindung betrifft ein Extrakt von Artischockenblättern (Cynarae folium), enthaltend:
Einen Gesamt-CCS-Gehalt von Mono-CCS und Di-CCS von mindestens 6%, vorzugsweise 10 bis 50% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts und einen Flavonoid-Gehalt von mindestens 4%, vorzugsweise 7 bis 30% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts. Gemäß einer bevorzugten Form weist der erfindungsgemäße Extrakt einen Anteil von Mono-CCS von 10 bis 30% bezogen auf den Gesamt-CCS-Gehalt auf, in einer weiteren bevorzugten Form ist das Verhältnis an Mono-CCS- Gehalt zu Flavonoid-Gehalt kleiner 1.
Dieser erfindungsgemäße Extrakt kann durch ein Verfahren zur Herstellung eines obigen Extrakts aus Artischockenblättern (Cynarae folium) erhalten werden, umfassend die Schritte:

- Flüssig-Flüssig-Extraktion eines Primärextraktes aus frischen oder getrockneten Artischockenblättern, erhalten durch Extraktion mit Wasser oder durch Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel aus der Reihe der Alkohole, Ketone, Ester, Ether, bevorzugt Methanol, Ethanol oder Gemischen dieser Verbindungen mit Wasser, mit einem organischen Lösungsmittel aus der Reihe der Alkohole, Ketone, Ester, Ether, Aromaten oder Mischung dieser Verbindungen, und
- Gewinnen der organischen Phase.

Insbesondere wird erfindungsgemäß ein Gemisch aus 2-Butanol und Ethylacetat verwendet.
In einer bevorzugten Ausführungsform wird dem erfindungsgemäßen Verfahren die folgenden Schritte vorgeschaltet:

- Einengen des Primärextraktvolumens, bzw. Versetzen des Primärextraktes mit Wasser bis der Extrakt über 50% Wasser enthält.
- Waschen des Extraktes mit einem unpolaren, nicht mit Wasser mischbarem Lösungsmittel, bevorzugt einem aus der Reihe der Alkane, Alkene, Ether, Ester oder chlorierten Kohlenwasserstoffe;
- Abtrennung und Verwerfen der organischen Phase.

In einem zweiten Aspekt dieser Erfindung wird ein Extrakt von Artischockenblättern (Cynarae folium) bereitgestellt, enthaltend:
Einen Gesamt-CCS-Gehalt von Mono-CCS und Di-CCS von mindestens 1%, vorzugsweise 2-15% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts, einen Flavonoid-Gehalt von höchstens 2%, vorzugsweise 0,02-1,5% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts und einen Anteil von Mono-CCS von mindestens 75% bezogen auf den Gesamt-CCS-Gehalt. Bevorzugt ist das Verhältnis an Mono-CCS-Gehalt zu Flavonoid-Gehalt dabei zwischen 5 und 35.
Dieser oben genannte Extrakt kann durch das folgende Verfahren aus Artischockenblättern (Cynarae folium) umfassend die Schritte:

- Flüssig-Flüssig-Extraktion eines Primärextraktes aus frischen oder getrockneten Artischockenblättern, erhalten durch Extraktion mit Wasser oder durch Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel aus der Reihe der Alkohole, Ketone, Ester, Ether, bevorzugt Methanol, Ethanol oder Gemischen dieser Verbindungen mit Wasser, mit einem organischen Lösungsmittel aus der Reihe der Alkohole, Ketone, Ester, Ether, Aromaten oder Mischung dieser Verbindungen, und
- Gewinnen der wässrigen Phase, hergestellt werden.

In bevorzugten Ausführungsformen ist dabei das organische Lösungsmittel zur Extraktion des Primärextraktes ein Gemisch aus 2-Butanol und Ethylacetat, weiterhin können dem Verfahren die folgenden Schritte vorgeschaltet sein:

- Einengen des Primärextraktvolumens, bzw. Versetzen des Primärextraktes mit Wasser bis der Extrakt über 50% Wasser enthält.
- Waschen des Extraktes mit einem unpolaren, nicht mit Wasser mischbarem Lösungsmittel, bevorzugt einem aus der Reihe der Alkane, Alkene, Ether, Ester oder chlorierten Kohlenwasserstoffe; Abtrennung und Verwerfen der organischen Phase.

Die obigen Extrakte können zur Herstellung von Arzneimitteln, Nahrungsmitteln, diätetischen Lebensmitteln und Kosmetika verwendet werden.
Die erstgenannten Extrakte weisen dabei erfindungsgemäß eine antioxidative, zell- und organprotektive Wirkung auf und können zur Behandlung und Prophylaxe von Hypercholesterinämie und Hyperlipidämie, zur Behandlung und Prophylaxe von Herz/Kreislauferkrankungen und Artheriosklerose und Demenzerkrankungen verwendet werden.
Die Extrakte gemäß dem zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung weisen eine antiserotonerge, spasmolytische, anticholestatische, choleretische, antiemetische, prokinetische Wirkung auf und können zur Steigerung der vesikulären Sekretion und der Fettverdauung, zur Behandlung von Dyspepsie und zur Behandlung von IBS (Irretable Bowl Syndrom) verwendet werden.
Beide Extrakte zeichnen sich dadurch aus, das sie die entsprechenden Wirkungen ohne die hierbei unerwünschten Nebenwirkungen aufzeigen.

Kurze Beschreibung der Abbildung

Fig. 1 zeigt ein typisches RP-HPLC-Chromatogramm eines wässrigen, primären Artischockenblätter-Trockenextrakts

Ausführliche Beschreibung der Erfindung

Die Erfindung beruht auf dem überraschenden Befund, daß wässrige oder wässrig/alkoholische Primärextrakte erfindungsgemäß durch extraktive Flüssig-Flüssig- Fraktionierung mit nicht-wässrigen Auszugsmitteln, wie organischen Lösungsmitteln, wie Alkohole, Ketone, Ester, Ether, Aromaten z. B. aliphatischen Alkoholen oder Carbonsäureestern oder Gemischen daraus, in zwei unterschiedliche Fraktionen getrennt werden können. Beide Fraktionen unterscheiden sich zum Beispiel hinsichtlich des absoluten und relativen Gehalts an Mono-CCS, Di-CCS und Flavonoiden sowie aufgrund ihres pharmakologischen Wirkprofils deutlich voneinander. Die Extraktbestandteile, welche durch Eindampfen des nach der Extraktion beladenen Auszugsmittels gewonnen werden können, werden im folgenden zusammenfassend als "Extraktfraktion A" bezeichnet. Die in der wasserhaltigen Phase verbleibenden Bestandteile werden zusammen als "Extraktfraktion B" bezeichnet.
Die erfindungsgemäße Extraktfraktion A zeichnet durch die Anreicherung lipophilerer, bzw. eine Abreicherung hydrophilerer Verbindungen des Primärextraktes aus. Diese An- bzw. Abreicherung kommt durch einen deutlich reduzierten Mono-CCS-Anteil sowie einen stark verringerten Mono- CCS/Flavonoid-Quotienten zum Ausdruck (siehe Abb. 1 sowie Vergleich Tabelle 3 mit 7). Man kann einen Gesamt-CCS- Gehalt von mindestens 6%, üblicherweise von 10 bis zu 30% bei Verwendung von wässrigen Primärextrakten und von mindestens 6%, bevorzugt mindestens 10%, besonders bevorzugt 15-50% bei Verwendung von alkoholisch/wässrigen Primärextrakten finden. Der Mono-CCS-Anteil an den Gesamt-CCS dieser Fraktion ist unabhängig von der Art des primären Extraktionsmittels auf 10 bis 30% gegenüber dem Primärextrakt abgereichert. Der Flavonoid-Gehalt der Extraktfraktion A beträgt mindestens 4% für wässrige und für alkoholisch/wässrige Primärextrakte, bevorzugt 7 bis 20% für wässrige und alkoholisch/wässrige Primärextrakte. Der Mono- CCS/Flavonoid-Quotient der Fraktion A ist erfindungsgemäß gegenüber wässrigen und alkoholisch/wässrigen Primärextrakten auf Werte kleiner 1 abgesenkt.
Die erfindungsgemäße Extraktfraktion B zeichnet sich durch die Abreicherung lipophilerer, bzw. die Anreicherung hydrophilerer Verbindungen aus. Diese Ab-, bzw. Anreicherung kommt durch einen deutlich erhöhten Mono-CCS-Anteil sowie einen stark erhöhten Mono-CCS/Flavonoid-Quotienten zum Ausdruck (siehe Abb. 1 sowie Vergleich Tabelle 3 mit 7).
Man findet Gesamt-CCS-Gehalte von mindestens 1%, üblicherweise von 2 bis zu 10% bei Verwendung von wässrigen Primärextrakten und üblicherweise 3 bis 15% bei Verwendung von alkoholisch/wässrigen Primärextrakten. Der Mono-CCS- Anteil an den Gesamt-CCS-Anteil ist unabhängig vom Primärauszugsmittel mindestens 75% und meist über 75% bis 85 % erhöht. Der Flavonoid-Gehalt der Extraktfraktion B beträgt höchstens 2%, bevorzugt 0,02 bis 1,5% für wässrige und alkoholisch/wässrige Primärextrakte. Der Mono-CCS/Flavonoid- Quotient der Fraktion B wird gegenüber dem Primärextrakt unabhängig vom Primärauszugsmittel auf Werte zwischen 5 bis 35 erhöht.
Beispielhafte Ergebnisse von vier erfindungsgemäßen Fraktionierungen von Primärextrakten aus hochwertiger Droge (Beispiele 8 bis 11) sind in Tabelle 7 aufgeführt.
Das Auszugsmittel bei den erfindungsgemäßen Verfahren ist ein nicht-wässriges Auszugsmittel, wie ein organisches Lösungsmittel. Beispielhaft seien Alkohole, Ketone, Ester, Ether, Aromate usw. genannt. Insbesondere sind aliphatische Alkohole und Carbonsäureester geeignet. Diese Lösungsmittel können alleine oder als Mischung der obigen Verbindungen verwendet werden. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform wird als Auszugsmittel ein Gemisch aus 2- Butanol und Ethylacetat verwendet.
In einer bevorzugten Ausführung des Verfahrens wird die zerkleinerten Droge mit Wasser extrahiert. Das Volumen des Primärextraktes kann anschließend im Vakuum auf ca. die Hälfte verringert werden und wird bei Raumtemperatur mit einer Mischung aus 2-Butanol und Ethylacetat extrahiert. Die in der organischen Phase lösliche Fraktion wird abgetrennt und zur Trockene eingeengt (Fraktion A). Der Extrakt enthält die oben beschriebenen Mengen an CCS-Derivaten und Flavonoiden sowie weitere, nicht identifizierte Substanzen. Die verbleibende wasserhaltige Fraktion wird ebenfalls getrocknet (Fraktion B).
In einer anderen bevorzugten Ausführung des Verfahrens wird die zerkleinerte Droge zunächst mit einem alkoholisch/wässrigen Auszugsmittel extrahiert (Primärextrakt). Die primären oder sekundären Alkohole besitzen die Kettenlänge von C1 bis C4. Störende Pflanzenbestandteile (z. B. Chlorophylle, Wachse) der alkoholisch-wässrigen Primärextrakte werden aus der eingeengten wasserhaltigen Phase mit geeigneten, nicht wassermischbaren unpolaren organischen Lösemitteln wie z. B. Hexan, Petrolether oder Dichlormethan durch Extraktion entfernt. Die wässrige Phase (Primärextrakt) wird bei Raumtemperatur mit einer Mischung aus 2-Butanol und Ethylacetat extrahiert. Die in der Lösemittelmischung lösliche Fraktion wird abgetrennt und zur Trockene eingeengt (Fraktion A). Der Extrakt enthält die oben beschriebenen Mengen an CCS-Derivaten und Flavonoiden sowie weiteren, nicht identifizierten Substanzen. Die verbleibende wasserhaltige Fraktion wird ebenfalls getrocknet (Fraktion B).
Die Extraktfraktionen A und B unterscheiden sich in Gehalt und Zusammensetzung der CCS und der Flavonoide deutlich sowohl von den entsprechenden Ausgangs-Primärextrakten als auch allgemein von Primärextrakten des Stands der Technik.
Die resultierenden Extraktfraktionen A und B weisen überraschenderweise sehr unterschiedliche pharmakologische Wirkprofile auf. Extraktfraktion A ist ein starker Inhibitor der Cholesterinbiosynthese und besitzt eine sehr hohe antioxidative Kapazität zur Unterdrückung der Bildung freier Radikale. Es wurde gefunden, daß die pharmakologischen Wirkungen deutlich über denen der Primärextrakte liegt. Dagegen zeigt Fraktion A im Gegensatz zum Primärextrakt oder der Extraktfraktion B keine oder nur sehr geringe Wirksamkeit in einem Testmodell zur Dyspepsie (s. Tabellen 4-6).
Extraktfraktion B dagegen besitzt im Gegensatz zum Primärextrakt eine hohe Aktivität im Dyspepsie-Modell und zeigt keine signifikante Hemmung der Cholesterinbiosynthese. Die antioxidativen Eigenschaften der Fraktion B sind geringer (s. Tabellen 4-6 unten).
Die beschriebenen Extrakte A und B können in üblichen festen, halbfesten und flüssigen pharmazeutischen und sonstigen Darreichungsformen verarbeitet und appliziert werden, wie z. B. in Pulvern, Lösungen, Suspensionen, Tabletten, Filmtabletten, Dragees, Kapseln, Brausetabletten, Brausegranulat, Kau-, Lutschtabletten, Suspositorien, Cremes, Salben, Gelen. Dabei können für die jeweilige Darreichungsform übliche Hilfstoffe verwendet werden, wie z. B. Cellulosen, Siliciumdioxide, Lactose, synthetische Polymere, Salze, Farbstoffe, Aromastoffe, Fette, Öle, Tenside, Wasser und Alkohole.

Beispiele

Im folgenden wird die Erfindung mit Hilfe von Beispielen näher erläutert. Die Erfindung ist aber nicht hierauf begrenzt.
Die Gehalte und Anteile der jeweils bestimmten Inhaltsstoffe wurden wie in BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 beschreiben, gemessen.

Beispiel 1a

300 g Artischockenblatt-Droge (Handelsdroge A) werden in einer 2-stufige Mazeration bei 80-90°C (5 Std./3 Std.) mit zusammen 4,5 l Wasser ausgezogen. Beide Eluate werden vereinigt und auf ein Volumen von 2,5 l eingeengt. Die CCS- und Flavonoid-Gehalte wurden gemäß BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiele 2a und 3a

Die Handelsdrogen B und C werden analog zu Beispiel 1a behandelt und die Gehalte entsprechend bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiel 1b

300 g Artischockenblatt-Droge (Handelsdroge A) werden in einer fünfstündige Perkulation bei 55-60°C mit 5 l Methanol/Wasser (80/20 V/V) extrahiert. Die Eluate werden vereinigt. Das Gesamteluat wird auf ca. 1/3 seines Volumens eingeengt, 1 : 1 (V/V) mit Wasser verdünnt und anschließend 3 × je 500 ml Dichlormethan gewaschen. Die organische Phase wird verworfen. Die CCS- und Flavonoid-Gehalte der wääsrigen Phase wurden gemäß BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiele 2b und 3b

Die Handelsdrogen B und C werden analog zu Beispiel 1b behandelt und die Gehalte entsprechend bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiel 4

300 g Artischockenblatt-Droge werden in einer 2-stufigen Mazeration bei 80-90°C (5 Std./3 Std.) mit zusammen 4,5 l Wasser ausgezogen. Beide Eluate, welche zusammen ca. 124 g Trockensubtanz enthalten, werden vereinigt und auf ein Volumen von 2,5 l eingeengt. Die CCS- und Flavonoid-Gehalte wurden gemäß BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiel 5

300 g Artischockenblatt-Droge einer anderen Charge (Charge 2) werden in einer 2-stufige Mazeration bei 80-90°C (5 Std./3 Std.) mit zusammen 4,5 l Wasser ausgezogen. Beide Eluate, welche zusammen ca. 121 g Trockenextrakt enthalten, werden vereinigt und auf ein Volumen von 2,5 l eingeengt. Die CCS- und Flavonoid-Gehalte wurden gemäß BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiel 6

300 g Artischockenblatt-Droge werden in einer fünfstündige Perkulation bei 55-60°C mit 5 l Methanol/Wasser (80/20 V/V) extrahiert. Die Eluate werden vereinigt. Sie enthalten zusammen 108 g Trockensubstanz. Das Gesamteluat wird auf ca. 1/3 seines Volumens eingeengt, 1 : 1 (V/V) mit Wasser verdünnt und anschließend 3 × je 500 ml Dichlormethan gewaschen. Die organische Phase wird verworfen. Die wässrige Phase enthält 86 g Trockenrückstand. Die CCS- und Flavonoid-Gehalte wurden gemäß BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt.

Beispiel 7

300 g Artischockenblatt-Droge (Charge 2) werden in einer fünfstündige Perkulation bei 55-60°C mit 5 l Methanol/Wasser (80/20 V/V) extrahiert. Die Eluate werden vereinigt. Sie enthalten zusammen 85 g Trockenextrakt. Das Gesamteluat wird auf ca. 1/3 seines Volumens eingeengt, 1 : 1 (V/V) mit Wasser verdünnt und anschließend 3 × mit je 500 ml Dichlormethan gewaschen. Die organische Phase wird verworfen. Die wässrige Phase enthält 71 g Trockenrückstand. Die CCS- und Flavonoid- Gehalte wurden gemäß BRAND und WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21 bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 und 3 dargestellt. Tabelle 2 Einfluß der Drogenqualität und der Wahl des Auszugsmittels auf CCS- und Flavonoidgehalte in verschiedenen Drogen- und der daraus erzeugten Extraktchargen (Beispiele kommerzieller Handelsdrogen A, B und C sowie aus hochwertigen Ausgangsdrogen)
Die CCS- und Flavonoid-Gehalte von primären Artischockenblätterextrakten sind von den Gehalten der Ausgangsdroge und von der Wahl des Auszugsmittels abhängig. Hochwertige Artischockenblattdroge kann je nach Sorte, Herkunft, Erntezeit, Anbau-, Trocknungs- und Lagerbedingungen 1 bis 7% CCS und 0,2 bis 1,2% Flavonoide enthalten, wobei die Mono-CCS einen Anteil von 40 bis 60% am Gesamt-CCS-Gehalt ausmachen. In Tabelle 2 und 3 sind Ergebnisse von Untersuchungen an primären Extrakten, hergestellt aus qualitativ unterschiedlicher Droge mit unterschiedlichen Auszugsmitteln, aufgeführt. Der CCS-Gehalt von wässrigen Extrakten beträgt maximal 11% und der von methanolisch- wässrigen maximal 20%. Der Flavonoid-Gehalt von wässrigen Extrakten kann bis zu 2,5% und für alkoholisch/wässrige Extrakte bis zu 4% betragen. Tabelle 3 Anteil Mono-CCS an Gesamt-CCS-Gehalten und Mono- CCS/Flavonoid-Quotient in verschiedenen Drogen- und dazugehörigen Extraktchargen (Beispiele kommerzieller Handelsdrogen A, B und C sowie von hochwertigen Ausgangsdrogen)
Der Mono-CCS-Anteil am Gesamt-CCS-Gehalt kann zwischen 49 und 72% bei wässrigen und zwischen 44 und 59% bei methanolisch/wässrigen Extrakten variieren. Der Mono- CCS/Flavonoid-Quotient im Extrakt liegt bei Extraktion mit Wasser in der Spanne von 2,0 bis 3,2 und bei Extraktion mit Methanol/Wasser zwischen 2,0 und 2,7. Beide Parameter spiegeln nahezu exakt die Verhältnisse der Ausgangsdroge wieder (Tabelle 3). Es ist somit festzustellen, daß sowohl wässrige wie auch wässrig/alkoholische Extrakte im Vergleich untereinander und zur Ausgangsdroge qualitativ etwa identisch zusammengesetzt sind.

Beispiel 8

Anschließend an die Primärextraktion gemäß Beispiel 4 erfolgt eine fünfmalige Flüssig-Flüssig-Extraktion mit je 600 ml Ethylacetat/2-Butanol (60/40 V/V) jeweils für 3 bis 5 min bei Raumtemperatur. Die organischen Phasen werden vereinigt, im Vakuum bei 40°C zur Trockene eingeengt, anschließend 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 18,65 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion A).
Die organisch extrahierte wässrige Unterphase wird im Vakuum bei 40°C eingeengt und für 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 93,45 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion B).

Beispiel 9

Anschließend an die Primärextraktion gemäß Beispiel 5 erfolgt eine fünfmalige Flüssig-Flüssig-Extraktion mit jeweils 600 ml Ethylacetat/2-Butanol (60/40 V/V) jeweils für 3 bis 5 min bei Raumtemperatur. Die organische Phasen werden vereinigt, im Vakuum bei 40°C zur Trockene eingeengt, anschließend 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 11 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion A) Die organisch extrahierte wässrige Unterphase wird im Vakuum bei 40°C eingeengt und für 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 96 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion B).

Beispiel 10

Die wässrige Phase des Beispiels 6 wird im Vakuum auf ca. ein 1/3 ihres Volumens eingeengt und fünfmal mit je 500 ml Ethylacetat/2-Butanol (60/40 V/V) jeweils für 3 bis 5 min bei Raumtemperatur extrahiert. Die organische Phasen werden vereinigt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum bei 40°C abgezogen. Anschließend wird der Rückstand für 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 16 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion A).
Die organisch extrahierte wässrige Unterphase wird im Vakuum bei 40°C eingeengt und anschließend für 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 61 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion B)

Beispiel 11

Die wässrige Phase des Beispiels 7 wird im Vakuum auf ca. 1/3 ihres Volumens eingeengt und fünfmal mit je 500 ml Ethylacetat/2-Butanol (60/40 V/V) jeweils für 3 bis 5 min bei Raumtemperatur extrahiert. Die organische Phasen werden vereinigt. Das Lösungsmittel im Vakuum bei 40°C abgezogen. Anschließend wird der Rückstand für 2 h im Vakuum bei 60°C nachgetrocknet. Es werden 11 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion A)
Die organisch extrahierte wässrige Unterphase wird im Vakuum bei 40°C eingeengt und anschließend für 2 h im Vakuum bei 60 °C nachgetrocknet. Es werden 57 g Trockenextrakt erhalten (Extraktfraktion B).

Pharmakologische Untersuchungen

Hemmung Cholesterin-Biosynthese

Die Bestimmung der Hemmung der Cholesterin-Biosynthese wurde nach MERTENS K. et al., Toxic. in vitro 1993; 7: 439-441 durchgeführt. Tabelle 4 Hemmung der Cholesterinbiosynthese in Ratten- Hepatozyten bei applizierten Konzentration von 0,1 mg/ml und 1,0 mg/ml

Antioxidative Kapazität

Die Bestimmungen zur antioxidativen Kapazität wurden gemäß GUGELER N., Peroxidationsreaktionen bei der Artherogenese: Modulatoren der LDL-Oxidation und der Radikalbildung von Makrophagen, Dissertation 1997, Fakultät Biologie der Universität Tübingen, Deutschland durchgeführt. Tabelle 5 Hemmung der Meerettich-Peroxidase und Xanthin- Oxidase bei applizierten Konzentration von 0,3 µg/Ansatz

Anti-Dyspepsie-Wirkung

Die Bestimmungen zur antidyspeptischen Wirkung wurden nach BONISCH H. et al., Brit. J. Pharmacol. 1993; 108: 436-442 durchgeführt. Tabelle 6 ¹⁴C-Guanidinium-Aufnahme in Neuroblastomzellen nach Applikation verschiedener Testsubstanzen

Tabelle 7 Mono-, Di- und Gesamt-CCS- sowie Flavonoidgehalte der Primärextrakte und der dazugehörigen Extraktfraktionen aus den Beispielen 4 bis 11

Claims

1. Extrakt von Artischockenblättern (Cynarae folium), enthaltend:
Einen Gesamt-CCS-Gehalt von Mono-CCS und Di-CCS von mindestens 6%, vorzugsweise 10 bis 50% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts,
einen Flavonoid-Gehalt von mindestens 4%, vorzugsweise 7 bis 30% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts

2. Extrakt gemäß Anspruch 1, mit einem Anteil von Mono-CCS von 10 bis 30% bezogen auf den Gesamt-CCS-Gehalt

3. Extrakt gemäß Anspruch 1 oder 2, mit einem Verhältnis an Mono-CCS-Gehalt zu Flavonoid-Gehalt von kleiner 1

4. Verfahren zur Herstellung eines Extrakts aus Artischockenblättern (Cynarae folium) gemäß Anspruch 1 bis 3, umfassend die Schrittet

- Flüssig-Flüssig-Extraktion eines Primärextraktes aus frischen oder getrockneten Artischockenblättern, erhalten durch Extraktion mit Wasser oder durch Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel aus der Reihe der Alkohole, Ketone, Ester, Ether, bevorzugt Methanol, Ethanol oder Gemischen dieser Verbindungen mit Wasser, mit einem nicht-wässrigen, organischen Lösungsmittel aus der Reihe der Alkohole, Ketone, Ester, Ether, Aromaten oder Mischung dieser Verbindungen, und

- Gewinnen der organischen Phase

5. Verfahren gemäß Anspruch 4, wobei das organische Lösungsmittel zur Extraktion des Primärextraktes ein Gemisch aus 2-Butanol und Ethylacetat ist.

6. Verfahren gemäß Anspruch 4 oder 5, umfassend die vorgeschalteten Schritte:

- Einengen des Primärextraktvolumens, bzw. Versetzen des Primärextraktes mit Wasser bis der Extrakt über 50% Wasser enthält.

- Waschen des Extraktes mit einem unpolaren, nicht mit Wasser mischbarem Lösungsmittel, bevorzugt einem aus der Reihe der Alkane, Alkene, Ether, Ester oder chlorierten Kohlenwasserstoffe; Abtrennung und Verwerfen der organischen Phase.

7. Extrakt von Artischockenblättern (Cynarae folium), enthaltend:
Einen Gesamt-CCS-Gehalt von Mono-CCS und Di-CCS von mindestens 1%, vorzugsweise 2 bis 15% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts,
einen Flavonoid-Gehalt von höchstens 2%, vorzugsweise 0,02 bis 1, 5% bezogen auf die Gesamtmenge des Extrakts,
einen Anteil von Mono-CCS von mindestens 75% bezogen auf den Gesamt-CCS-Gehalt.

8. Extrakt gemäß Anspruch 7, mit einem Verhältnis an Mono- CCS-Gehalt zu Flavonoid-Gehalt zwischen 5 und 35.

9. Verfahren zur Herstellung eines Extrakts aus Artischockenblättern (Cynarae folium) gemäß Anspruch 7 oder 8, umfassend die Schritte:

- Gewinnen der wässrigen Phase

10. Verfahren gemäß Anspruch 9, wobei das organische Lösungsmittel zur Extraktion des Primärextraktes ein Gemisch aus 2-Butanol und Ethylacetat ist.

11. Verfahren gemäß Anspruch 9 oder 10, umfassend die vorgeschalteten Schritte:

- Einengen des Primärextraktvolumens, bzw. Versetzen des Primärextraktes mit Wasser bis der Extrakt über 50% Wasser enthält,

12. Verwendung der Extrakte gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 und 7 bis 8, zur Herstellung von Arzneimitteln.

13. Verwendung der Extrakte gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 und 7 bis 8, zur Herstellung von Nahrungsmitteln.

14. Verwendung der Extrakte gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 und 7 bis 8, zur Herstellung von diätetischen Lebensmitteln.

15. Verwendung der Extrakte gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 und 7 bis 8, zur Herstellung von Kosmetika.

16. Verwendung der Extrakte nach einem der Ansprüche 1 bis 3, zur Herstellung einer Zubereitung gemäß Ansprüchen 12 bis 15 mit antioxidativer, zell- und organprotektiver Wirkung.

17. Verwendung des Extraktes nach einem der Ansprüche 1 bis 3, zur Herstellung einer Zubereitung gemäß den Ansprüchen 12 bis 15 zur Behandlung und Prophylaxe von Hypercholesterinämie und Hyperlipidämie

18. Verwendung des Extraktes nach einem der Ansprüche 1 bis 3, zur Herstellung einer Zubereitung gemäß den Ansprüchen 12 bis 15 zur Behandlung und Prophylaxe von Herz/Kreislauferkrankungen und Artheriosklerose.

19. Verwendung des Extraktes nach einem der Ansprüche 1 bis 3, zur Herstellung einer Zubereitung gemäß den Ansprüchen 12 bis 15 zur Behandlung und Prophylaxe von Demenzerkrankungen.

20. Verwendung des Extraktes nach einem der Ansprüche 7 bis 8, zur Herstellung einer Zubereitung gemäß den Ansprüchen 12 bis 15 mit antiserotonerger, spasmolytischer, anticholestatischer, choleretischer, antiemetischer, prokinetischer Wirkung.

21. Verwendung des Extraktes nach einem der Ansprüche 7 bis 8, zur Herstellung einer Zubereitung gemäß den Ansprüchen 12 bis 15 zur Steigerung der vesikulären Sekretion und der Fettverdauung, zur Behandlung von Dyspepsie und zur Behandlung von IBS (Irretable Bowl Syndrom).