MXPA04001115A

MXPA04001115A - Extractos de hojas de alcachofa.

Info

Publication number: MXPA04001115A
Application number: MXPA04001115A
Authority: MX
Inventors: Goerke Thomas
Original assignee: Lichtwer Pharma Ag
Priority date: 2001-08-08
Filing date: 2002-08-07
Publication date: 2005-02-17
Also published as: CA2455761A1; HRP20040225A2; HUP0600153A2; JP2004537578A; NO20040979L; WO2003013562A1; PL205013B1; IL160083A0; DE10164893B4; EP1416950A1; PL368184A1; HRPK20040225B3; HUP0600153A3; US20040234674A1; DE10138929A1; YU12404A; IL160083A

Abstract

La presente invencion se refiere a extractos de hojas de alcachofa (Cynarae folium), que estan caracterizados por porcentajes absolutos definidos y porcentajes relativos inherentes de constituyentes tipicos de hojas de alcachofa, tales como acidos cafeoilquinicos y flavonoides. El espectro de actividad de los extractos inventivos de hojas es substancialmente diferente de los extractos de hojas de alcachofa conocidos, dichos extractos inventivos de hojas tambien son diferentes entre si. La invencion tambien se refiere a metodos para producir los extractos y a los campos de aplicacion de los mismos.

Description

EXTRACTOS DE HOJAS DE ALCACHOFA Campo de la Invención La invención se refiere a extractos de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , métodos para su producción y su uso en varios campos de aplicación. Antecedentes de la invención Las preparaciones hechas de hojas de alcachofa (Cynarae scolymus L.), son ampliamente usadas en la terapia de males dispépticos funcionales. Se usan los jugos exprimidos de las hojas frescas y extractos acuosos genuinos y acuosos/ alcohólicos (extractos primarios), de hojas frescas y secas. El efecto colerético (colagógico) , el principal modo de acción para el tratamiento de dispepsia funcional, se ha proporcionado inequívocamente para los extractos primarios acuosos o alcohólicos/acuosos por medio de experimentos in vitro e in vivo y es considerado por estar científicamente establecido (Brand N. Cynara Monograph. In: Hansel R, Keller K, Rimpler H, Schneider G. (ed) : Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, 5ta. Edición, Vol 4: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlín, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; BRAND N. Zeítschr. Phytother. 1999; 20: 292-302]. Estos extractos son oficialmente reconocidos para el tratamiento de síntomas dispépticos (preparación monográfica para Cynarae REF. : 153694 folium, Artischocken-bláttler, BAnz 122, Julio 6, 1988, en la versión corregida en BAnz 164, Septiembre 1, 1990). Con respecto a los efectos citados, se discuten las siguientes clases constituyentes de hojas de alcachofas y sus extractos, como substancias indicadoras específicas y substancias potenciales activas: 1. ácidos mono-, di-cafeoilquínicos (CQAs) y 2. flavonoides . Puede asumirse que otros compuestos aún no identificados, podrían participar en el espectro de actividad farmacológica y clínica de los extractos de alcachofa y fracciones de extractos. Un método de gradiente analítico por PI-CLAR puede ser usado para separar y cuantificar los mono y di -CQAs individuales y los f avonoides de las hojas de alcachofa y sus extractos (BRAND y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21) . Pueden ser identificados cuatro y hasta cinco isómeros di-CQA y al menos dos flavonoides, en el cromatogra a de impresión de huella por CIAR de extractos acuosos de hojas de alcachofa. En éste método analítico, el mono-CQAs más fuertemente hidrofílico eluye primero, seguido por cinarina (1 , 5-di-CQA) , y dos a tres glicósidos de flavona. Estos son seguidos por los restantes di-CQAs más lipofílicos y, bajo algunas circunstancias, cantidades más pequeñas de otros glicósidos de flavona y agliconas de flavona (Fig. 1) . La cuantificación de las clases constituyentes es realizada de manera usual por medio de sumas, en donde el contenido CQA es calculado como ácido clorogénico (=mono-CQA) y el contenido de flavonoide como luteolin-7-glucósido ( =cinarosido) . Además del principio primordial de acción de "coléresis incrementada" , existen indicaciones de que los extractos de hojas de alcachofa pueden tener efectos anti-colestáticos, anti-oxidativos, estimuladores celulares y protectores celulares, así como también una influencia favorable en el metabolismo lípido. Estos se obtienen de investigaciones in vitro, farmacológicas y clínicas animal y humana (BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302; BRAND N. Cynara Monograph. In: HANSEL R, KELLER K, RIMPLER H, SCHNEIDER G (ed) : Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, 5ta. Edición, Vol 4: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlín, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; EP-A-0958 828). Existen datos también de la eficacia de los extractos de hojas de alcachofa en la reducción de los niveles del suero de glucosa, creatinina y bilirrubina, para inmunoestimulación y la terapia de leucocitopenia, granulocitopenia , linfocitopenia y daño de médula ósea, para el tratamiento de diabetes y lesiones causadas por radiación o agentes citostáticos durante la terapia del tumor (documento DE-A-196 27 376; WO 98/01143; DE-A-198 50 543). Investigaciones in vitro de extractos acuosos de hojas primarias de alcachofa en hepatocitos de rata y células HepG2 humanas (hepatocitos) , han mostrado una biosíntesis de inhibición del colesterol moderada, dependiente de la concentración, causada por la inhibición directa de la reductasa HMG-CoA, la enzima clave en la biosíntesis del colesterol endogénico. Los extractos acuosos de hojas primarias de alcachofa han sido clínicamente comprobados por tener un efecto moderado en la reducción del colesterol y valores LDL y en la influencia positivamente de la relación HDL/LDL (FINTELMANN V. Z. Allg. Med. 1996; 72: 48-57; KRAFT K. et al. Phytomedicine 1997; 4: 369-378; ENGLISCH W. et al. Arzneim. -Forsch. /Drug Res. 2000; 50: 260-265; SIEDBK H. et al. Wierner klinische Wochenscrift 1963; 75: 460-463; SCHÓ HOLZER G. Sch eizerische Medizinische Wochenzeitschrif 1939; 69: 1288-1290) . Los constituyentes de las hojas de alcachofa que tienen una influencia inhibidora en la actividad de la reductasa HMG-CoA han sido identificados como glicósidos de luteolina y libres de luteolina y ácido 1,5-di-cafeoilquínico (cinarina) , de los extractos primarios por medio de experimentos in vi tro en hepatocitos. Sin embargo, el efecto de éstos compuestos cuando se usan para la terapia de humanos no se conoce (GEBHARDT R. J. Pharmacol . Exp . Therap. 1998; 286: 1122-1128; GEHARDT R. Phytotherap. Res. 2001; 15: 1-5; GEBHARDT R. Medwelt 1995; 46: 348-350; EP 0 807 435 A2; Mars G. et al. Med. elt 1974; 25: 1572-1574; PRISTAUTZ H. Wiener Med. Wochenzeitsch . 1975; 49: 705-709) . Los compuestos particulares antes mencionados y otros compuestos particulares aislados a partir de extractos de hojas de alcachofa, se han encontrado por tener efectos farmacológicos que justifican la conclusión de que pueden ser usados para aplicaciones terapéuticas con las indicaciones nombradas anteriormente y en las siguientes (BRAD N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302; BRAND N. Cynara Monograph. In: HÁNSEL R, KELLER K, RIMPLER H, SCHNEIDER g (ed) : Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, 5ta. Edición, Vol 4: Drogen A-D. Sprmger Verlag, Berlín, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; EP-A-0958 828). A la fecha, ninguna de las substancias aisladas ha sido usada para la terapia de humanos. Para resumir, puede declararse que ha sido descrita una pluralidad de campos de aplicación muy diferentes para extractos primarios de hojas de alcachofa, tales como por ejemplo, aplicaciones para enfermedades gastrointestinales (por ejemplo, dispepsia) , problemas con lipometabolismo , para incrementar la protección celular en diabéticos y pacientes con tumor y para inmunoestimulación . Sin embargo, la pluralidad de campos de aplicación significa que los extractos primarios de hojas de alcachofa también tienen la propiedad indeseable que la terapia dirigida de enfermedades definidas no puede tomar lugar sin efectos colaterales en otras áreas del organismo. Las preparaciones de hojas de alcachofa en el mercado, contienen exclusivamente extractos primarios de hojas de alcachofa con el perfil de acción farmacológico y clínico complejo descrito anteriormente, pero no "extractos especiales" con un efecto "restringido" para terapias libres de efectos colaterales dirigidos (BRAND N, Zeitschr. Phytohter. 1999; 20:292-302). La técnica anterior incluye jugos exprimidos, extractos acuosos primarios, metanólicos y etanólicos, de los cuales, los extractos acuosos esencialmente solos en la forma de extractos secos, son comercialmente usados principalmente en forma de fármacos sólidos (Tabla 1) . Además, los extractos etanólicos también son usados en las preparaciones líquidas (gotas, jugos) . Sin embargo, estas son mucho menos comunes. La producción de extractos primarios generalmente ocurre por extracción exhaustiva de hojas frescas y secas a una alta temperatura. En el caso de extracción con agua, una parte del extracto requiere generalmente 3 a 8 partes de fármaco o 20-40 partes de hojas frescas (contenido de agua de hojas frescas: 80 -90%) . El rendimiento del extracto depende de la calidad de las hojas, las condiciones de extracción y el agente de extracción usado. Los contenidos de CQA de menos de 6% para extractos primarios acuosos, pueden ser considerados por ser la técnica anterior. De esto, 55 a 69% puede ser mono-CQA y 31 a 45% di-CQA, respectivamente. Dependiendo de la calidad del fármaco, el contenido de flavonoide de los extractos acuosos primarios está entre 0.1% y 1% (Tabla 1). Tabla 1 : Contenidos Totales de CQA y Flavonoides y porcentajes de mono, di-CQA del contenido total de CQA en extractos acuosos de hoja seca de alcachofa de preparaciones * resultados propios usando método estándar ** preparaciones comerciales (de conformidad con BRAND DAZ 1997; 137: 60-76) . Para resumir, puede declararse que la extracción con agua o alcoholes acuosos causa un enriquecimiento cuantitativo del CQA y flavonoides en el extracto. Sin embargo, las relaciones relativas de los compuestos con respecto a cada uno de los otros, son virtualmente sin cambio. Por lo tanto, la conclusión puede ser dirigida a que el perfil de acción farmacológico/clínico complejo conocido para tanto los fármacos originales como los extractos acuosos o acuosos/alcohólicos producidos a partir de éstos, debe ser cualitativamente idéntico. Solamente la actividad efectiva debe ser una función de la concentración de los compuestos analizados. El objeto de esta invención es distinguido entre los perfiles de acción algunas veces divergentes, diferentes, de extractos primarios acuosos o alcohólicos/acuosos para asegurar una aplicación terapéutica dirigida sin algún efecto colateral adverso (por ejemplo, una acción que disminuye los lípidos sin una acción dispéptica o vice versa) . Por esto, los extractos primarios son divididos usando el método de conformidad con la invención dentro de dos fracciones de extractos A y B, las cuales tienen espectro de actividad diferente. La fracción de extracto A tiene una acción de disminución de lípidos y protectora celular (anti-oxidativa) , pero no tiene prolongada la acción anti-dispéptica del extracto primario. La fracción del extracto B es claramente un agente anti-dispéptico más efectivo que el extracto primario, pero no tiene virtualmente propiedades de disminución de lípido/colesterol . Otro objeto es proporcionar métodos para la producción de estas fracciones de extractos . Sumario de la Invención Un primer aspecto de la invención se refiere a un extracto de hojas de alcachofa (Cynarae folium) que contiene: un contenido total CQA de mono-CQA y di-CQA de al menos 6%, preferiblemente 10 a 50%, con relación a la cantidad total del extracto y un contenido flavonoide de al menos 3%, por ejemplo, 4%, preferiblemente 7 a 30%, con relación a la cantidad total del extracto. De conformidad con una modalidad preferida, el extracto de conformidad con la invención, tiene un contenido mono-CQA de menos de 30%, por ejemplo, de 3 a 30%, más preferiblemente desde 10 a 30%, con relación al contenido CQA total, en una modalidad adicional preferida, la relación del contenido mono-CQA al contenido de flavonoide es menos de 1. Este extracto de conformidad con la invención, puede ser obtenido usando un método para la producción de un extracto mencionado anteriormente a partir de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , el cual comprende las siguientes etapas: extracción líquido-líquido de un extracto primario de hojas frescas o secas de alcachofa obtenidas por extracción con agua o por extracción con un solvente orgánico de la serie de alcoholes, cetonas, ésteres, éteres, preferiblemente metanol, etanol o mezclas de éstos compuestos con agua, con un solvente orgánico de la serie de alcoholes, cetonas, ésteres, éteres, aromáticos o una mezcla de éstos compuestos, y - obtener la fase orgánica. Se usa una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo en particular, de conformidad con la invención. En una modalidad preferida, el método de conformidad con la invención, está precedido por las siguientes etapas: - evaporación del volumen de extracto primario o adición de agua al extracto primario hasta que el extracto contiene más de 50% de agua. lavar el extracto con un solvente no polar, inmiscible en agua, preferiblemente uno de la serie de alcanos, alquenos, éteres, ésteres o hidrocarburos clorados; separación y eliminación de la fase orgánica. En un segundo aspecto de ésta invención, se prepara un extracto de hojas de alcachofas (Cynarae folium) , el cual comprende: un contenido CQA total de mono-CQA y di-CQA de al menos 1%, preferiblemente 2-15%, con relación a la cantidad total del extracto, un contenido de flavonoide de un máximo de 2%, preferiblemente 0.02-1.5%, con relación a la cantidad total del extracto y un contenido de mono-CQA de al menos, 70% por ejemplo, 75%, con relación al contenido CQA total. La relación del contenido mono-CQA al contenido de flavonoide está con ello, preferiblemente entre 4 y 35, por ejemplo, entre 5 y 35. Este extracto mencionado anteriormente, puede ser producido de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , usando el siguiente método que comprende las etapas de: la extracción líquido-líquido de un extracto primario de hojas frescas o secas de alcachofa obtenidas por extracción con agua o por extracción con un solvente orgánico de la serie de alcoholes, cetonas, ésteres, éteres, preferiblemente metanol , etanol o mezclas de éstos compuestos con agua, con un solvente orgánico de la serie de alcoholes, cetonas, ásteres, éteres, aromáticos o una mezcla de éstos compuestos, y obtener la fase acuosa. En modalidades preferidas, el solvente orgánico para la extracción del extracto primario es una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo, y el método puede ser adicionalmente precedido por las siguientes etapas: evaporación del volumen de extracto primario o adición de agua al extracto primario hasta que el extracto contiene más de 50% de agua. lavar el extracto con un solvente no polar, inmiscible en agua, preferiblemente uno de la serie de alcanos, alquenos, éteres, ásteres o hidrocarburos clorados, separación y eliminación de la fase orgánica. Los extractos anteriores pueden ser usados para la producción de productos medicinales, productos alimenticios, alimentos dietéticos y cosméticos. De conformidad con la invención, los extractos mencionados primero tienen una acción anti-oxidativa, protectora celular y de órganos, y pueden ser usados para el tratamiento y prevención de hipercolesterolemia e hiperlipidemia, para el tratamiento y profilaxis de enfermedades cardiovasculares y arterioesclerosis y demencia. Los extractos de conformidad con el segundo aspecto de la presente invención, tienen una acción anti-serotonérgica, espasmolítica, anti-colestática, colerética, anti -emética, procinética y pueden ser usados para incrementar la secreción vesicular y lipólisis, para el tratamiento de dispepsia y para el tratamiento de IBS (síndrome de intestino irritable) . Ambos extractos son caracterizados por el hecho de que pueden tener efectos relevantes sin algunos efectos colaterales indeseables. Breve Descripción de la Figura La figura 1 muestra un cromatograma PI-CLAR típico de un extracto acuoso de hoja primaria seca de alcachofa. Descripción Detallada de la Invención Esta invención se basa en el sorprendente hallazgo de que de conformidad con la invención, los extractos acuosos o acuosos/alcohólicos primarios pueden ser separados en dos fracciones diferentes por f accionamiento extractivo líquido-líquido sin agentes de extracción acuosos, tales como solventes orgánicos tal como alcoholes, cetonas, esteres, éteres, aromáticos por ejemplo, alcoholes alifáticos o ésteres de ácido carboxílico o mezclas de los mismos. Las dos fracciones claramente difieren entre sí, por ejemplo, con respecto al contenido absoluto y relativo de mono-CQA, di-CQA y flavonoides y en sus perfiles de actividad farmacológica. Los constituyentes de los extractos los cuales pueden ser obtenidos evaporando el agente de extracción cargado después de la extracción, serán referidos con ntamente como "fracción de extracto A" en lo siguiente. Los constituyentes los cuales permanecen en la fase acuosa, serán referidos conjuntamente como "fracción de extracto B" , La fracción de extracto A de conformidad con la invención, est caracterizada por el enriquecimiento de compuestos más lipofílicos o supresión de más hidrofílicos del extracto primario, respectivamente. Este enriquecimiento o supresión es expresado por un contenido mono-CQA claramente reducido y un cociente mono-CQA/flavonoide mayormente reducido (véase Fig. 1 y compare Tabla 3 con Tabla 7) . Un contenido CQA total de al menos 6%, usualmente desde 10 hasta 30%, puede usualmente encontrarse cuando se usan extractos primarios acuosos y de al menos, 6% preferiblemente al menos, 10%, particularmente pref riblemente 15-50%, cuando se usan extractos primarios alcohólicos/acuosos. Con respecto al tipo de agente de extracción primario, el contenido mono-CQA del CQA total de esta fracción es suprimido a menos de 30%, por ejemplo 3 a 30%, preferiblemente 10 a 30%, comparado con el extracto primario. El contenido de flavonoide de la fracción del extracto A es al menos 3%, por e emplo, al menos para extractos acuosos y para alcohólicos/acuosos primarios, preferiblemente 7 a 20% para extractos acuosos y alcohólicos/acuosos primarios. El cociente mono-CQA/flavonoide en la fracción A, se reduce de conformidad con la invención a valores de menos 1 comparado con extractos acuosos y alcohólicos/acuosos primarios.

La fracción del extracto B de conformidad con la invención, se caracteriza por la supresión de compuestos más lipofílieos o el enriquecimiento de más hidrofílieos , respectivamente. Esta supresión o enriquecimiento es expresado por un contenido mono-CQA claramente incrementado y un cociente mono-CQA/ lavonoide mayormente incrementado (véase Fig. 1 y compare Tabla 3 con Tabla 7) . Los contenidos CQA totales de al menos 1%, usualmente de 2 hasta 10%, se encuentran cuando se usan extractos primarios acuosos y usualmente 3 a 15%, cuando se usan extractos alcohólicos/acuosos primarios. Con respecto al agente de extracción primario, el contenido mono-CQA del contenido total CQA es al menos 70%, por ejemplo, al menos 75% y generalmente sobre 75% a 85%. El contenido de flavonoide de la fracción de extracto B es un máximo de 2%, preferiblemente 0.02 a 1.5%, para extractos acuosos y alcohólicos/acuosos primarios. Con respecto al agente de extracción primario, el cociente de mono-CQA/flavonoide en la fracción se incrementa a valores entre 4 y 35, por ejemplo, entre 5 y 35, comparado con el extracto primario. Ejemplos de resultados para cuatro fraccionamientos de extractos primarios de fármacos de alto grado llevado a cabo de conformidad con la invención (ejemplo 8 a 11) , se dan en la Tabl 7. El agente de extracción en el método de conformidad con la invención, es un agente de extracción no acuoso, tal como un solvente orgánico. Mencionados como ejemplos son alcoholes, cetonas, esteres, éteres, aromáticos, etc. Alcoholes alifáticos y esteres de ácido carboxílico son particularmente adecuados . Estos solventes pueden ser usados solos o como una mezcla de los compuestos anteriores. En una modalidad particularmente preferida, el agente de extracción usado es una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo. En una modalidad preferida del método, el fármaco triturado es extraído con agua. El volumen del extracto primario puede entonces ser reducido por aproximadamente la mitad bajo vacío, y es extraído a temperatura ambiente con una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo. La fracción soluble en la fase orgánica es separada y evaporada para llegar a sequedad (fracción A) . El extracto contiene las cantidades descritas anteriormente de los derivados CQA y flavonoides, así también como otras substancias no identificadas. La fracción acuosa restante es también secada (fracción B) . En otra modalidad preferida del método, el fármaco triturado es primero extraído con un agente de extracción alcohólico/acuoso (extracto primario) . Los alcoholes primarios o secundarios tienen una longitud de cadena de Cl a C4. Los constituyentes que alteran las plantas (por ejemplo, clorofilas, ceras) de extractos primarios alcohólicos- acuosos, son removidos de la fase acuosa evaporada con solventes orgánicos no polares, inmiscibles en agua, adecuados, tal como por ejemplo, hexano, éter de petróleo o diclorometano por extracción. La fase acuosa (extracto primario) se extrae a temperatura ambiente con una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo. La fracción soluble en la mezcla de solvente se separa y evapora para llegar a sequedad (fracción A) . El extracto contiene las cantidades descritas anteriormente de derivados CQA y flavonoides, así como también substancias adicionales no identificadas. La fracción acuosa restante es también secada (fracción B) . Las fracciones del extracto A y B difieren claramente en el contenido y composición del CQA y los flavonoides, de tanto los extractos primarios iniciales relevantes como en general, de extractos primarios de la técnica anterior. Las fracciones de extractos resultantes A y B, sorprendentemente tienen perfiles de acción farmacológicos muy diferentes. La fracción del extracto A es un inhibidor poderoso de la biosintesis del colesterol y tiene una capacidad anti-oxidativa muy alta para la supresión de la formación de radicales libres. Se encuentra que los efectos farmacológicos son claramente superiores que aquellos de los extractos primarios. Por otro lado, distinto del extracto primario o fracción de extracto B, la fracción A no tiene efecto o solamente muy poco efecto en un modelo de prueba para dispepsia (véase Tablas 4-6) .

Por otro lado, distinto del extracto primario, la fracción del extracto B tiene alta actividad en el modelo dispepsia y no muestra alguna inhibición significante de la biosíntesis del colesterol . Las propiedades anti-oxidativas de la fracción B son inferiores (cotéjese Tablas 4-6 abajo) . Los extractos descritos A y B pueden ser procesados y aplicados en formas farmacéuticas sólidas, semi-sólidas y líquidas y otras formas de administración tal como, por ejemplo, en polvos, soluciones, suspensiones, tabletas, tabletas revestidas de películas, tabletas revestidas, cápsulas, tabletas efervescentes, gránulos efervescentes, tabletas masticables y grageas, supositorios, cremas, ungüentos, geles. Los agentes auxiliares comunes pueden ser usados aquí para la forma respectiva de administración tal como, por ejemplo, celulosas, sílices, lactosa, polímeros sintéticos, sales, colorantes, aromáticos, grasas, aceites, tensioactivos , agua y alcoholes. Ejemplos La invención será descrita en más detalle en lo siguiente con referencia a ejemplos. Sin embargo, la invención no está restringida a estos ejemplos. Los porcentajes y contenidos de los constituyentes determinados en cada caso, se miden como se describe en BRAND y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Ejemplo la Se extrajeron 300 g de un fármaco de hoja de alcachofa (fármaco comercial A) , por medio de maceración en 2 etapas a 80-90°C (5 horas/3 horas), con un total de 4.5 1 de agua. Los dos eluatos se combinaron y se evaporaron a un volumen de 2.5 1. Los contenidos de CQA y de flavonoides se determinaron de conformidad con BRAD y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Los resultados se muestran en la Tabla 2 y 3. Ejemplos 2a y 3a Los fármacos comerciales B y C se trataron en la misma manera como en el ejemplo la, y por consiguiente se determinaron los contenidos . Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Ejemplo Ib Se extrajeron 300 g de un fármaco de hoja de alcachofa (fármaco comercial A) , por medio de cinco horas de percolación a 55-60°C con 5 1 de metano/agua (80/20 v/v) . Los eluatos se combinaron. El total de eluato se evaporó a aproximadamente 1/3 de su volumen, se diluyó con 1:1 (v/v) con agua y después se lavó 3x con 500 mi de diclorometano en cada caso. La fase orgánica se desecho. Los contenidos de CQA y flavonoides en la fase acuosa se determinaron de conformidad con BRAD y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Ejemplos 2b y 3b Se trataron los fármacos comerciales B y C en la misma forma como en el ejemplo Ib, y por consiguiente, se determinaron los contenidos. Los resultados se muestran en las tablas 2 y 3. Ejemplo 4 Se extrajeron 300 g de un fármaco de hoja de alcachofa por medio de maceración en 2 etapas a 80-90°C (5 horas/3 horas) con un total de 4.5 1 de agua. Los dos eluatos, los cuales juntos contienen aproximadamente 124 g de substancia seca, se combinaron y se evaporaron a un volumen de 2.5 1. Los contenidos de CQA y flavonoides se determinaron de conformidad con BRAD y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Ejemplo 5 Se extrajeron 300 g de un fármaco de hoja de alcachofa a partir de otro lote (lote 2) , por medio de maceración en 2 etapas a 80-90 °C (5 horas/3 horas) con un total de 4.5 1 de agua. Los dos eluatos, los cuales juntos contienen aproximadamente 121 g de extracto seco, se combinaron y se evaporaron a un volumen de 2.5 1. Los contenidos de CQA y flavonoides se determinaron de conformidad con BRAD y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Ejemplo 6 Se extrajeron 300 g de un fármaco de hoja de alcachofa por medio de cinco horas de percolación a 55-60°C con 5 1 de metanol/agua (80/20 v/v) . Los eluatos se combinaron. Juntos contienen 108 g de substancia seca. El total de eluato se evaporó a aproximadamente 1/3 de su volumen, se diluyó con 1:1 (v/v) con agua y después se lavó 3x con 500 mi de diclorometano en cada caso. La fase orgánica se desecho. La fase acuosa contiene 86 g de residuo seco. Los contenidos de CQA y flavonoides se determinaron de conformidad con BRAD y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Ejemplo 7 Se extrajeron 300 g de un fármaco de hoja de alcachofa (lote 2) por medio de cinco horas de percolación a 55-60°C con 5 1 de metanol/agua (80/20 v/v) . Los eluatos se combinaron. Juntos contienen 85 g de extracto seco. El total de eluato se evaporaron a aproximadamente 1/3 de su volumen, se diluyó con 1:1 (v/v) con agua y después se lavó 3x con 500 mi de diclorometano en cada caso. La fase orgánica se desecho. La fase acuosa contiene 71 g de residuo seco. Los contenidos de CQA y flavonoides se determinaron de conformidad con BRAD y WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3. Tabla 2 : Influencia de la calidad del fármaco y la selección del agente de extracción en contenidos de CQA y flavonoides en diferentes lotes de fármaco y los lotes de extracto producidos a partir de estos (ejemplos de fármacos comerciales A, B y C y de fármacos originales de alto grado) .

Los contenidos de CQA y flavonoides de los extractos de hoja primaria de alcachofa son dependientes del contenido de fármaco original y la selección del agente de extracción. Dependiendo del tipo, origen, tiempo de cosecha, cultivo, condiciones de secado y almacenaje, los fármacos de hoja de alcachofa de alto grado pueden contener de 1 hasta 7% de CQA y 0.2 hasta 1.2% de flavonoides, por lo cal, el mono CQA se cuenta para un contenido de 40 hasta 60% del contenido total de CQA. Las tablas 2 y 3 muestran los resultados de investigaciones en extractos primarios producidas de fármacos cualitativamente diferentes con diferentes agentes de extracción. El contenido máximo de CQA de extractos acuosos y metanólico-acuosos es 11% y 20%, respectivamente. El contenido de flavonoides de extractos acuosos pueden ser hasta de 2.5% y aquél de extractos alcohólico/acuosos hasta de 3%. Tabla 3: Proporción de mono-CQA en los contenidos de CQA totales y cociente mono-CQA/flavonoide en diferentes lotes de fármacos y los lotes de extractos asociados (ejemplos de fármacos comerciales A, B y C de fármacos originales de alto grado) .

Las proporciones mono-CQA del contenido total de CQA puede varia entre 49 y 65% con extractos acuosos, y entre 44 y 59% con extractos metabólicos/acuosos . En el caso de extracción con agua, el cociente mono-CQA/flavonoide en el extracto está en el intervalo de 2.0 hasta 3.2 y en el caso de extracción con metanol/agua, está entre 2.0 y 2.7. Los dos parámetros reflejan casi exactamente las relaciones en el fármaco original (Tabla 3) . Por lo tanto, puede establecerse que ambos extractos acuosos como acuosos/alcohólicos son casi cualitativamente idénticos, comparados entre sí y al fármaco original . Ejemplo 8 La extracción primaria de conformidad con el ejemplo 4, es seguida por extracción líquido-líquido 5X con 600 mi de acetato de etilo/2 -butanol (60/40 v/v) en cada caso, por 3 a 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron, se evaporaron a sequedad bajo vacío a 40 °C, después se secaron por 2 horas bajo vacío a 60 °C. Se obtuvieron 18.65 g de extracto seco (fracción de extracto A) . La fase inferior acuosa orgánicamente extraída se evaporó bajo vacío a 40 °C y se secó por 2 horas bajo vacío a 60 °C. Se obtuvieron 93.45 g del extracto seco (fracción de extracción B) . Ejemplo 9 La extracción primaria de conformidad con el ejemplo 5, se siguió por extracción líquido-líquido 5X con 600 mi de acetato de etilo/2 -butanol (60/40 v/v) en cada caso, por 3 a 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron, se evaporaron a sequedad bajo vacío a 40°C, después se secaron por 2 horas bajo vacío a 60 °C. Se obtuvieron 11 g de extracto seco (fracción de extracción A) . La fase inferior acuosa extraída orgánicamente se evaporó bajo vacío a 40 °C, y se secó por 2 horas bajo vacío a 60°C. Se obtuvieron 96 g del extracto seco (fracción de extracción B) . Ejemplo 10 La fase acuosa del ejemplo 6 se evaporó bajo vacío a aproximadamente 1/3 de su volumen, y se extrajo 5X con 500 mi de acetato de etilo/2-butanol (60/40 v/v) en cada caso, por 3 a 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron. El solvente se retiró bajo vacío a 40 °C. El residuo entonces se secó por 2 horas bajo vacío a 60 °C. Se obtuvieron 16 g del extracto seco (fracción de extracto A) . La fase inferior acuosa extraída orgánicamente se evaporó bajo vacío a 40°C, y después se secó por 2 horas bajo vacío a 60°C. Se obtuvieron 61 g de extracto seco (fracción de extracto B) . Ejemplo 11 La fase acuosa del ejemplo 7 se evaporó bajo vacío a aproximadamente 1/3 de su volumen, y se extrajo 5X con 500 mi de acetato de etilo/2-butanol (60/40 v/v) en cada caso, por 3 a 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron. El solvente se retiro bajo vacío a 40°C. El residuo entonces se secó por 2 horas bajo vacío a 60 °C. Se obtuvieron 11 g del extracto seco (fracción del extracto A) . La fase inferior acuosa extraída orgánicamente se evaporó bajo vacío a 40°C, y después se secó por 2 horas bajo vacío a 60°C. Se obtuvieron 57 g del extracto seco (fracción del extracto B) . Investigaciones farmacológicas : Inhibición de la biosíntesis del colesterol La determinación de la inhibición de biosíntesis de colesterol se realizó de conformidad con MERTENS K. et al., Toxic. In vitro 1993; 7: 439-441. Tabla 4 : Inhibición de la biosíntesis del colesterol en hepatocitos de rata con concentraciones aplicadas de 0.1 mg/ml y 1.0 mg/ml.

Capacidad Anti-oxidativa La determinación de la capacidad anti-oxidativa se realizó de conformidad con GUGELER . , Peroxidationsreaktionen bei der Artherogenese : Modulatoren der LDL-Oxidation und der Radikalbildung von Makrophagen, Dissertation 1997, Faculty of Biology at the University of Tübingen, Germany. Tabla 5 : Inhibición de peroxidasa de rábano picante y oxidasa de xantina en una concentración aplicada de 0.3 µq/lote Acción anti-dispépt Las determinaciones para la acción anti-dispéptica se realizaron de conformidad con BONISCH H. et al., Brit. J. Pharmacol. 1993; 108: 436-442.

Tabla 6: Captación de 1 C-guanidina en células de neuroblastoma siguiendo la aplicación de diferentes substancias de prueba.

Ejemplo Substancia Control de captación de "C-guanidina (=100%) Extracto primario 22 4 y 8 Fracción A 110 Fracción B 21 Extracto primario 37 5 y 9 Fracción A 123 Fracción B 38 Extracto primario 74 6 y 10 Fracción A 130 Fracción B 38 Extracto primario 28 7 y 11 Fracción A 101 Fracción B 25 Tabla 7 : Contenidos totales de mono-, di-, y CQA y flavonoides de los extractos primarios y fracciones de extractos asociadas con los ejemplos 4 a 11.

Ejemplo Substancia Total Mono- Di-CQA Flavonoides Proporción de Relación de CQA CQA (%) (%) mono en mono- (%) (%) CQA(%)total CQA/flavonoides Extracto 9.74 5.39 4.35 2.20 55.3 2.45 4 primario y Fracción A 25.99 4.41 21.58 13.29 16.9 0.33 8 Fracción B 6.32 4.83 1.49 0.76 76.4 6.36 Extracto 10.44 6.31 4.13 2 00 60.4 3.16 5 primario y Fracción A 25.77 6.26 19.51 17.50 24.3 0.36 9 Fracción B 7.67 6.07 1.60 0.24 79.1 25.29 Extracto 18.84 8.32 10 52 2.79 44.2 2.40 6 primario y Fracción A 47.62 6.38 41.24 10.90 13.4 0.59 Fracción B 10.38 2.26 10 8.12 1.47 78 2 5.76 Extracto 19.14 9.37 9.77 2.89 48-9 2.65 7 primario y Fracción A 42.48 6.33 36.15 17.52 14.9 0.36 11 Fracción B 11.26 9.00 2.26 0.34 79.9 26.47

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Extracto de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , caracterizado porque contiene: un contenido CQA total de mono-CQA y di-CQA de al menos, 6%, preferiblemente 10 a 50%, con relación a la cantidad total del extracto, un contenido de flavonoide de al menos, 3%, preferido 4%, preferiblemente 7 a 30%, con relación a la cantidad total del extracto.
2. Extracto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene un contenido de mono-CQA de menos de 30%, preferiblemente 3 a 30%, particularmente preferido 10 a 30%, con relación al contenido CQA total.
3. Extracto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque tiene una relación de contenido mono-CQA a contenido de flavonoides de menos de 1.
4. Método para producción de un extracto de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque comprende las etapas de : extracción líquido-líquido de un extracto primario de hojas frescas o secas de alcachofa obtenidas por extracción con agua o por extracción con un solvente orgánico de la serie de alcoholes, cetonas, esteres, éteres, preferiblemente metanol, etanol o mezclas de éstos compuestos con agua, con un solvente orgánico no acuoso de la serie de alcoholes, cetonas, ésteres, éteres, aromáticos o una mezcla de éstos compuestos, y obtener la fase orgánica.
5. Método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el solvente orgánico para la extracción del extracto primario es una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo .
6. Método de conformidad con la reivindicación 4 ó 5, caracterizado porque comprende las etapas precedentes de: concentrar el volumen de extracto primario o agregar agua al extracto primario hasta que el extracto contiene más de 50% de agua. lavar el extracto con un solvente no polar, inmiscible en agua, preferiblemente uno de la serie de alcanos, alquenos, éteres, ésteres o hidrocarburos clorados, separación y eliminación de la fase orgánica.
7. Extracto de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , caracterizado porque comprende: un contenido CQA total de mono-CQA y di-CQA de al menos 1%, preferiblemente 2 a 15%, con relación a la cantidad total del extracto, un contenido de flavonoide de un máximo de 2%, Dreferiblemente 0.02 a 1.5%, con relación a la cantidad total del extracto, un contenido de mono-CQA de al menos 70%, preferiblemente al menos 75%, con relación al contenido CQA total .
8. Extracto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque tiene una relación de contenido mono-CQA a contenido de flavonoide de entre 4 y 35, preferiblemente 5 a 35.
9. Método para la producción de un extracto de hojas de alcachofa (Cynarae folium) , de conformidad con la reivindicación 7 u 8, caracterizado porque comprende las etapas de: la extracción líquido-líquido de un extracto primario de hojas frescas o secas de alcachofa obtenidas por extracción con agua o por extracción con un solvente orgánico de la serie de alcoholes, cetonas, ésteres, éteres, preferiblemente metanol, etanol o mezclas de éstos compuestos con agua, con un solvente orgánico no acuoso de la serie de alcoholes, cetonas, ésteres, éteres, aromáticos o una mezcla de éstos compuestos, y obtener la fase acuosa.
10. Método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el solvente orgánico para la extracción del extracto primario es una mezcla de 2-butanol y acetato de etilo .
11. Método de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, caracterizado porque comprende las etapas precedentes de: concentrar el volumen de extracto primario o agregar agua al extracto primario hasta que el extracto contiene más de 50% de agua. - lavar el extracto con un solvente no polar, inmiscible en agua, preferiblemente uno de la serie de alcanos, alquenos, éteres, esteres o hidrocarburos clorados, separación y eliminación de la fase orgánica.
12. Uso de los extractos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7 a 8, para la producción de productos medicinales.
13. Uso de los extractos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7 a 8, para la producción de productos alimenticios.
14. Uso de los extractos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7 a 8, para la producción de alimentos dietéticos.
15. Uso de los extractos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7 a 8, para la producción de cosméticos.
16. Uso de los extractos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la producción de una preparación de conformidad con las reivindicaciones 12 a 15, que tienen una acción anti-oxidativa, protectora celular y de órganos.
17. Uso del extracto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 , para la producción de una preparación de conformidad con las reivindicaciones 12 a 15, para el tratamiento y profilaxis de hipercolesterolemia e hiperlipidemia .
18. Uso del extracto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la producción de una preparación de conformidad con las reivindicaciones 12 a 15, para el tratamiento y profilaxis de enfermedades cardiovasculares y arterieesclerosis.
19. Uso del extracto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para la producción de una preparación de conformidad con las reivindicaciones 12 a 15, para el tratamiento y profilaxis de demencia.
20. Uso del extracto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8, para la producción de una preparación de conformidad con las reivindicaciones 12 a 15, que tiene una acción anti-serotonérgica, espasmolítica, anticolestática, colerética, antimimética y procinética.
21. Uso del extracto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8, para la producción de una preparación de conformidad con las reivindicaciones 12 a 15, para incrementar la secreción vesicular y lipólisis, para el tratamiento de dispepsia y para el tratamiento de IBS (síndrome de intestino irritable) .