DD298411A5

DD298411A5 - Therapeutische peptide

Info

Publication number: DD298411A5
Application number: DD90343501A
Authority: DD
Inventors: David H Coy; Jacques-Pierre Moreau
Original assignee: ��@��@��@��@��@��@��k��
Priority date: 1989-08-16
Filing date: 1990-08-16
Publication date: 1992-02-20
Also published as: PT95016B; DE69028692D1; DK0438566T3; SK280796B6; JPH04502922A; IE77033B1; CZ285562B6; DE69028692T2; EP0438566B1; PT95016A; SK402890A3; CZ285319B6; IE902958A1; CA2039175A1; WO1991002745A1; ES2094160T3; CZ402890A3; EP0438566A4; EP0438566A1; HUT65465A

Abstract

Lineares Peptid, das ein Analoges der natuerlich vorkommenden, biologisch aktiven Substanz P ist, mit einer aktiven Stelle und einer Bindungsstelle, die fuer die Bindung des Peptids an einen Rezeptor auf einer Zielzelle verantwortlich ist. Das Analoge weist eine Nicht-Peptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen einem Aminosaeurerest der aktiven Stelle und einem benachbarten Aminosaeurerest oder einen synthetischen, b-Aminosaeure- oder g-Aminosaeurerest auf, der zwei Aminosaeurereste der aktiven Stelle ersetzt.

Description

Fig. 1: SP stimulierte Amylaefreisetzung (% Kontrolle) (a) Konzentration (log M) (b) Fig.2: Stimulierte Amylasefreisetzung (% Maximum) Substanz P (log M) (b) Fig.3: Gebundenes ¹²⁶I-BH-SP (% Kontrolle) (a) Konzentration (log M) (b) Fig.4: Gebundenes ¹²⁵l[Tyr⁴]Bombosin (% Kontrolle) (a) Konzentration (leg M) (b).

Hierzu 4 Seiten Zeichnungen

Darlegung des bisherigen Standes der Technik

Die Erfindung betrifft therapeutische Peptide, insbesondere Analoge der natürlichen Peptidsubstanz P. Die Substanz P (SP) hat vielfältige pharmakologischo Wirkungen, u.a. Vasodilatation und Hypotonie, Kontraktion der nichtvaskulären glatten Muskulatur, Stimulierung der Speichel- und Pankreasdrüsensekretion, Depolarisation verschiedener Neuronen und Histaminfreisetzung aus Mastzellen. Man nimmt an, daß SP verschiedene physiologische Aufgaben hat (von denen viele mit der Schmerzinduktion einhergehen). Dazu gehören die Regulierung der Peristaltik und der Tätigkeit der glatten Muskulatur im Magen-Darm-Trakt, die Regulierung der Speichel- und Pankreassaftsekretion, die Regulierung der entzündlichen Reaktion auf eine Verletzung peripherer Gewebe, die Neurotransmission ¹Jnd die Regulierung der nouroimmunologischen Modulation. Mantyh u.a. berichten in Proc. Natl. Acad. Sei. Usa 86 (1989), S. 5193 über das Vorhandensein von Rezeptoren für die Substanz P in Wunden im zentralen Nervensystem, und sie äußern die Vermutung, daß SP an der Regulierung der Reaktion auf Verletzungen des zentralen Nervensystems sowie peripherer Gewebe beteiligt ist. Die Substanz P ist ferner ein proliferates Agens, das die Vermehrung von Fibroblasten, T-Lymphocyten, Endothelzellen, glatten Muskelzellen und AGtrocyten anregt. SP gehört zur Familie der bioaktiven Peptide, die alsTachykine bekannt sind. Struktur, Aktivität und Funktion von SP und anderen Tachykininen werden in Payan, Ann. Rev. Med. 40 (1989), S.341 diskutiert. Wie Payan feststellte, hat SP die gleichen pharmakoiogischen Eigenschaften wie andere Tachykinine und besitzt eine beibehaltene terminale Carboxylsequenz (Phe-X-Gly-Leu-Met-NHj), wo X ein verzweigter aliphatischer oder aromatischer Aminosäurerest ist. Die wichtigsten biologischen Aktivitäten und die Fähigkeit, sich an einen Rezeptor zu binden, gehen von der terminalen Carboxylsequenz dieser Peptide aus. Die Selektivität für einen speziellen Tachykininrezeptor wird durch die terminale Aminosequenz der Peptide bestimmt, siehe Inverson u.a. (1989), The Tachykinin System, Kurzreferat auf dem 11. Amerikanischen Peptidsymposium. Neben SP und anderen Säugetiertachykininen erstreckt sich die Beibehaltung der Carboxylsequenz auch auf andere bioaktive Peptide, wia in Tabelle 1 gezeigt wird.

Es wurde mitgeteilt, daß zahlreiche SP-Derivate, die durch Seitenkettenmodifizierung und/oder D-Aminosäuresubstitution hergestellt werden, als Antagonisten der SPRezeptoren wirken. Folkers, US-PS 4481139 beschreibt Antagonisten für Substanz P, die durch Substitution der D- oder L-Aminosäure gewonnen wurden. Zu diesen Antagonisten zählt das Undecypeptidanaloge Spantid(D-Arg-Pro-l.ys-Pro-Gln-Gin-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Leu-NH₂) sowie verkürzte Analoge der Substanz P. Jensen u.a. (1988), Am. J. of Physiol. 254, S.G883 charakterisiert die Fähigkeit verschiedener SP-Antagonisten, die Wirkung von Bombesin zu hemmen. Jensen u.a. untersuchten vier SP-Analoge: Arg-D-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Phe-Phe-D-Trp-leu-Met-NH2; Arg-D-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Met-NH₂; D-Arg-D-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-LeU-NH₂; und D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Leu-NHj. Jensen u.a. untersuchten ferner zwei SP-Analoge, deren erste drei Aminosäurereste deletiert waren, nämlich D-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Met-NH₂ und D-Pro-Gln-Gln-D-Trp~Phe-D-Trp-D-Trp-Met-NH₂. Keines dieser Rezeptoren bindenden Peptide war jedoch für den SP-Rezeptor spezifisch. Es wurde festgestellt, daß alle die durch Bombesin stimulierte Amylasefreisetzung hemmten. Jensen u.a. kamen zu dem Schluß, daß „die Fähigkeit zur Hemmung der Bombesinwirkung eine allgemeine Fähigkeit von SP-Analogen ist, die auch als SP-Rezeptor-Antagonisten wirken und daß die SP-Rezeptor-Antagonisten die Wirkung von Bombesin hemmen, indem sie als Bomesinrezeptor-Antagonisten funktionieren".

WoII u.a., Proc. Nat. Acad. Sei. USA 85 (1988), S. 1857 fanden den Antagonisten der Substanz P, D-Arg-Pro-Lys-Pro-D-Phe-Gln-D-Trp~Phe-D-Trp-Leu-Leu-NH₂-einen wirksamen Bombesin-Antagonisten in Zellen des Schweizer Mäusestammes 3T3.

Agonisten und Antagonisten einer Vielzahl biologisch aktiver Peptidhormone, u.a. der Substanz P, wurden synthetisiert, nachdem die Modifizierung der Peptidbindungen des Peptidhormons möglich geworden war. Einen kurzen Überblick über dieses Gebiet findet man bei Spatola (1983) in: Chemistry and ciochemistry of Amino Acids, Peptides, und Proteins (herausg. B.Weinstein), M.Dekker, Now York und Basel, S.267-357. Abkürzungen (ungebräuchlich):

Cyclohexyl-Ala= (Cyclohexylalanin)

μ A Au kennzeichnende Gruppe

² Vf²

ä—t«

^H2

HH

Lys-c-NMR = Lysin, worin das c-N-Atom eine R-Gruppe trägt (wo R entweder H, C₁.₂-Alkyl, C₇_,₀-Phenylalkyl, COE [wo E Ci-20-Alkyl, Cs-M-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder C7-i_O-Phcnylalkyl ist) oder C|.i·, Acyl ist); Nie = Η,Ν-CH-COOH {Norleucin)

Nie = H₂N-CH-COOH (Norleucin

(CH₂)₃-CH₃ kennzeichnende Gruppe NaI = Naphthylalanin pGlu = HgC--CH-COOH (Pyroglutaminsäure)

Sar = Sarcosin Sta (Statin) =

(3S, 4S)-4-Amino-3-hydroxy-6-methylheptansäure und die folgende chemische Struktur aufweist

p* kennzeichnende Gruppe

b

NK₂-OH-CK-CH₂-CO₂Hi

6h

AHPPA =

(3S, 4S)-4-Amino-3-hydroxy-5-phenylpentansäure und die folgende Strukturformel aufweist

kennzeichnende Gruppe

ACHPA =

(3S,4S)-4-Amino-5-cyclot.exyl-3-hydroxypentansäure und die Strukturformel aufweist

kennzeichnende Gruppe

SP = Agr-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-Nl^ (Substanz P).

Zusammenfassung der Erfindung

Im allgemeinen betrifft die Erfindung ein lineares (d.h. nichtcyclisches) Peptid, das ein Analoges der natürlich vorkommenden, biologisch aktiven Substanz P ist, mit einer aktiven Stelle und einer Bindungsstelle, die für die Bindung des Peptids an einen Rezeptor der Zielzelle verantwortlich ist. Das Analoge weist eine der folgenden Modifizierungen auf: (a) Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen einem Aminosäurerest der aktiven Stelle und einem benachbarten Aminosäurerest; (b) Ersetzung von zwei Aminosäureresten innerhalb der aktiven Stelle durch einen synthetischen Aminosäurerest, z. B. Statin, AHPPA, ACHPA, einen ß-Aminosäurorest oder einen γ-Aminosäurerest; (c) Deletierung eines Aminosäurerestes innerhalb der aktiven Stelle und Modifizierung eines Aminusäurerestes außerahlb der aktiven Stelle oder (d) Gegenwart eines N-terminalen Aminosäurerestes, der nicht der natürlich vorkommende Aminosäurerest des natürlich vorkommenden, biologisch aktiven Peptids ist (wo die Aminosäure nicht als β oder γ bezeichnet ist, handelt es sich um eine α-Aminosäure.) In bevorzugten Ausführungsbeispielen wirkt das Analoge als kompetitiver Inhibitor der natürlich vorkommenden Substanz P, indem es sich an den Rezeptor bindet und aufgrund einer seiner Modifizierungen die in vivo auftretende biologische Aktivität des natürlich vorkommenden Peptids nicht entwickelt.

In bevorzugten Ausführungsboispielen befindet sich die aktive Stelle des linearen Peptids in der Carboxyl-terminalen Hälfte des linearen Peptids. Das lineare Peptid weist eine der folgenden Modifizierungen auf: (a) eine Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen einem Aminosäurerest der aktiven Stelle und einem benachbarten Aminosäurerest, (b) Ersetzung von zwei Aminosäureresten innerhalb der aktiven Stelle durch einen synthetischen Aminosäurerest, z. B. Statin-, AHPPA-, ACHPA-, einen ß-Aminosäurerest oder einen γ-Aminosäurerest, (c) Deletierung eines Aminosäurerestes innerhalb der aktiven Stelle und Modifizierung eines Aminosäurerestes außerhalb der aktiven Stelle oder (d) Vorhandensein eines N-terminalen Aminosäurerestes, der nicht der natürlich vorkommende Aminosäurerest des natürlich verkommenden, biologisch aktiven Peptids ist.

In bevorzugten Ausführungsbeispielen befindet sich die aktive Stelle des linearen Peptids in der Carboxyl-terminalen Hälfte des linearen Peptids. Das lineare Peptid weist eine der folgenden Modifizierungen auf: (a) Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen dem Carboxyl-terminalen Aminosäurerest und dem benachbarten Aminosäurerest oder (b) Statin- oder AHPPA- oder ACHPA-, ß-Aminosäure- oder γ-Aminosäurerest anstelle des natürlich vorkommenden Carboxylterminalen und des benachbarten Aminosäurerestes.

In bevorzugten Anwendungsbeispielen weist das Analoge der Substanz P eine der folgenden Modifizierungen auf: (a) Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen dem Carboxyl-terminajen Aminosäurerest und dem benachbarten Aminosäurerest oder (b) ein Statin- oder AHPPA- oder ACHPA- oder ß-Aminosäure- oder γ-Aminosäurorest anstelle des natürlich vorkommenden Carboxyl-terminalen und benachbarten Aminosäurerestes.

Die linearen Peptide, bei denen die Einführung einer Nichtpeptidbindung zwischen zwei Aminosäureresten oder die Ersetzung der zwei natürlichen Aminosäurereste durch einen synthetischen Aminosäurerest, einen ß-Aminosäurerest oder einen γ-Aminosäurerest oder die Deletierung („des") des C-terminalen Aminosäurerestes, der bei der Bildung oder Verstärkung der antagonistischen Aktivität von Nutzen ist, kennzeichnend sind, sind diejenigen, bei denen die Aktivität mit den zwei C-terminalen Aminosäureresten der Aminosäurekette einhergeht. Folglich schließt die aktive Stelle des natürlich vorkommenden Peptids, für das die erfindungsgemäßen Peptide Analoge darstellen, vorzugsweise mindestens einen Aminosäurerest in der Carboxylterminalen Hälfte des Peptids ein, und das erfindungsgemäße Peptid schließt diesen Aminosäurerest in seiner Carboxylterminalen Hälfte ein. Modifizierungen können in einer an der Rezeptorbindung beteiligten Region oder einer Region ohne Bindung vorgenommen werden.

Der Ausdruck Nichtpeptidbindung bedeutet, daß das an der Bindung zwischen oeiden Resten beteiligte Kohlenstoffatom von einem Carbonylkohlenstoff zu einem Methylenkohlenstoff, d. h. CH₇-NH oder - was weniger bevorzugt wird - CHj-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO oder CO-CH₂ reduziert wird. (Eine detaillierte Besprechung der Chemie der Nichtpeptidbindungen findet man im Artikel von Coy u. a„ Tetrahedron 44 [1988], 3, S.835-841, der hierin durch Bezugnahme eingeschlossen ist, in dem Artikel von Tourwe, Janssen Chim. Acta 3 (1985), 3, S. 3-15,17-18, der hierin durch Bezugnahme eingeschlossen ist sowie in dem Kapitel von Spatola [1983] in chemistry and biochemistry of Amino Acides, Peptides, and Proteins [Herausg. B. Weinstein], M. Dekker, New York und Basel, S.267-357, das hierin durch Bezugnahme eingeschlossen ist.)

Die erfindungsgemäßen Analog« sind vorzugsweise zu 25%, am besten zu 50% mit den natürlich vorkommenden Peptiden homolog. Eine Modifizierung des natürlich vorkommenden Peptids zur Bildung eines Antagonisten besteht in der Verwendung eines aromatischen D-Isomeren einer Aminosäure oder einer alkylierten Aminosäure als Amino-terminalei, Rest. (Wo „D" nicht als Konfiguration einer Aminosäure angegeben ist, ist L gemeint.)

Eine Klasse der erfindungsgemäßen Peptide umfaßt Analoge der Substanz P der Formel

R_{1 r} A⁸ A¹⁰ A¹¹

^¹-A²-A³-A⁴-A⁵-A⁶-A⁷-N-CH-CO-A⁹-NH-CH-R₍.-R_/.H-V¹ / \ ^{5 6}

^R2 ^R3

A¹ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Arg, Lys oder LyS-C-NH-R₂O (wo R-V₁H, C^₁₂-AUyI, C^o-Phenylalkyl, COE,₀ [wo

EtoCi-jo-Alkyl.Cs-jo-Alkenyl.Cs-jo-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder Cy-io-Phenylalkyl ist) oder C₁-C₁₂-ACyIiSt) oder deletiert ist; A² das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A³ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Lys oder Lys-c-NH-R₂₂ (wo R₂₂ H, C^^-Alkyl, C₇.₁₀-Phenylalkyl, COEi₂ (wo E₁₂

Ct.jo-Alkyl, Cj-jo-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder C₇_₁₀-Phenylalkyl ist] oder Ci-C₁₂-ACyI) oder deletiert ist; A⁴ das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A⁶ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Asp, Gin, ß-Nal, Trp, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Bt, NO₂, OH oder CH₃)

p-X-Pho (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder deletiert ist; A* das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Ale, Arg, Ser, Pro, GIn, pG!u, Asn, ß-Nal, Trp, Phe, o-X-Phe (wu X = F. Γ!, Br,

NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A⁷ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren VaI, Thr, Phe, Trp, ß-Nal, o-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder

p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A* die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren GIy, VaI, Trp, ß-Nal, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl,

Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO,, OH oder CH₃) ist; A⁹ das D- odsr L-Isomere einer der Aminosäuren Sar, His, GIy, Trp, ß-Nal, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder

p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A¹⁰ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Trp, ß-Nal, Leu, Nie, AIa, Cyclohexyl-Ala, VaI, He,

Met, GIy, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, DH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A^1< die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Trp, ß-Nal, Leu, Nie, Ala, VaI, He, Met, GIy, Phe,

o-X-Phe (wo X - F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder deletiert ist; wobei R₁ und R₂ unabhängig voneinander entweder H_; C₁^₂ Alkyl, C₇.₁₀-Phenylalkyl, COE₁₄ (wo E₁₄ C^o-Alkyl, C^^-Alkenyl, Ca-N-Alkinyl, Phenyl, Napthyl oder C₇.₁₀-Phenylalkyl ist), C₁-C₁₂-ACyI oder deldtiert ist, und R₁ und R₂ an das a-Aminostickstoffatom der N-terminalen Aminosäure des Peptids gebundon ist, vorausgesetzt, daß wenn eines von R₁ oder R₂ COE₁₄ ist, das andere H sein muß; R₃ H oder C^-Alkyl ist; R₆ einer von CHZ₁₀-(CH₂),, ,-V², CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO oder CO- CH₂ ist (wo V² entweder

oder

O -C-N

wo R₇, R₈ und R₉ jeweils unabhängig voneinander H, C_t.₁₂-Alkyl, C₇.₁₀-Phenylalkyl oder C,₂-2o-Naphthylalkyl ist); η 1 entweder 1 oder 0 ist; und Z₁₀ entweder H oder OH ist; R« C ist oder/ und V' ist eines von

-C-O-⁸IC _N

oder deletiert (wo Rio, R₁₁ und R₁₂ jeweils unabhängig voneinander H, C^-Alkyl, C₇_₁₀-Phenylalkyl oder C₁₂.₂₀-Naphthylalkyl ist); vorausgesetzt, daß wo R₆ CHZ₁₀-(CH₂) _n1-V² ist, A", R₈H und V¹ deletiert werden müssen; ferner vorausgesetzt, daß wo A¹¹, R₈H und V¹ deletiert sind, R₈ CHZ₁₀-(CH₂)_n1-V² sein muß; ferner vorausgesetzt, daß wo A⁶ Asp ist, A* Ser, A⁷ Phe, A⁸ VaI, A⁹ GIy, A¹⁰ Leu, A" Leu, und R₈ CH₂NH ist, mindestens eines von A¹, A², A³ oder A⁴ gegenwärtig sein muß; oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz derselben

Eine weitere Klasse der erfindungsgemäßen Peptide schließt Analoge zur Substanz P der folgenden Formel ein:

^R52

A2S .2« _A27 _A28 _ft29 _A30

53 54 55 56

A²¹ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Arg, Lys oder LyS-C-NH-R₈₀ [wo R₈₀ H, C,-₁₂-Alkyl; C₇.,₀-Phenylalkyl, COE₂₀

(wo E₂₀ C,__w-Alkyl, C^o-Alkenyl, C^o-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder C₇.,₀-Phenylalkyl ist) oder C,-C₁₂-AcyI ist) oder delotiert

A²² das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A²³ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Lys oder Lys-c-NH-R₈₂ (wo R₈₂ H, Ci.,₂-Alkyl, C₇.,₀-Phenylalkyl, COE₂₂ [wo E_n

Ci-20-Alkyl, Cj-20-Alkenyl, Cj_₂₀-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder C₇_₁₀-Phenylalkyl ist) oder C₁-C₁₂-ACyI) oder deletiert ist; A²⁴ das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A²⁶ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Asp, Gin, ß-Nal, Trp, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl,

Br, NO₂, OH oder CH₃), p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH und CH₃) oder deletiert ist; A²⁹ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Arg, Sar, Pro, GIn, pGlu, Phe, Trp, Cyclohexyl-Ala

oder Asn ist; A²⁷ die kennzeichnende Gruppe dor Aminosäure D-Trp oder die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren von Leu, Phe

oder Cyclohexyl-Ala oder deletiert ist; A²" die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren jiner der Aminosäuren VaI, ß-Nal, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂,

OH oder CH₃) oder ist; A²⁹ die kennzeichnende Gruppe der Aminosäure D-Trp, oder die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren von Leu, Phe,

oder Cyclohexyl-Ala ist; A³⁰ die kennzeichnende Gruope des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Leu, Nie, AIa, Cyclohexyl-Ala, VaI, Me, Met,

GIy, Phe, Trp, ß-Nal, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder

deletiert ist; A³¹ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Trp, ß-Nal, Leu, Nie, Ala, VaI, Ils, Met, GIy, Phe,

o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder deletiert ist; R₆, und R₆₂ jeweils unabhängig voneinander H,- C,.,₂-Alkyl, C₇-₁₀-Phenylalkyl, COE₂₄ (wo E₂₄ C,.₂₀-Alkyl, C3-_2O-Alkenyl, Cj-₂₀-Alkinyl, Phenyl, Napthyl oder C₇_,₀-Phenylalkyl ist), C-C₁₂-ACyI oder deletiert ist, und R₆, und R₆₂ an das a-Aminostickstoffatom der N-terminalen Aminosäure des Peptids gebunden ist, vorausgesetzt, daß wenn eines von R₆₁ oder R₅₂ COE₁₄ ist, der andere H sein muß; R₆₃ C oder deletiert ist; R₆₆ und R₈₁ jeweils C sind; R₆₇, R₆₉, R₆₃ und R₆₆ jeweils entweder C oder deletiert sind; R₆₄ CC-NH, CO-NCH₃ oder delotiert ist; R₅₈ und R₆₂ jeweils CO-NH, CHZ₂₀-(CH₂),, ₁₀-CO-NH (wo η 10 entweder 1 oder O ist; und Z₃₀ entweder H oder OH ist), CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₁-CO oder CO-CH₂ sind; R₆₈ eines von CO-NR₆₉ (wo R₆₉ H oder C,.,₂-Alkyl ist), CHZjo-{CH₂)„,₀-CO-NH, CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO, CO-CH₂ oder deletiert ist; R₆₀ CO-NH oder deletiert ist; R₆₄ CO-NH, CHZ₂₀-(CHj)₁₁₁₀-V¹², CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO, CO-CH₂ oder deletiert ist (wo V¹² entweder

9 R₇₁

SO ] -O-R_?o oder -C-N.

wo R₇₀, R₇i und R₇₂ unabhängig voneinander entweder H, C,-₁₂-Alkyl, C₇-i₀-Phenylalkyl oder C|₂-_J0-Naphthylalkyl sind) und V¹⁰ eines von

oder deletiert ist (wo R₆₈, R₆₇ und R₆₈ jeweils unabhängig voneinander H, C,__t2-Alkyl, C₇_,₀-Phenylalkyl oder C_l2.₂₀-Naphthylalkyl sind); vorausgesetzt, daß mindestens eines von R₆₆, R₆₈, R₆₂ oder R₄₄ etwas anderes als CO-NH oder CO-NR₆₉ ist; ferner vorausgesetzt, daß wo R₆₈ CHZ₂₀-(CH₂I_{n )0}-CO-N H ist, A²⁷, R₆₇H und R₆₈ deletiert sein müssen; ferner vorausgesetzt, daß wo A²⁷, R₆₇H und R₆₈ deletiert sind, R₆₆ ΰΗΖ_Μ-(ϋΗ₂)_η10-ΰΟ-ΝΗ sein muß; ferner vorausgesetzt, daß wo R₅₈ CHZ₂₀-(CH₂),, ₁₀-CO-NH ist, A²⁸, R₅₉H und R₆₀ deletiert sein müssen; ferner vorausgesetzt, daß wo A²⁸, R₅₉H und R₆₀ deletiert sind, R₆₈ CHZ₂₀-(CH₂),, I₀-CO-NH ist; ferner vorausgesetzt, daß wo R₈₂ CHZ₂₀-(CH₂)_nKrCO-NH, A³⁰, R₆₃H und R₈₄ deletiert sein müssen; ferner vorausgesetzt, daß wo A³⁰, R₆₃H und R₆₄ deletiert sind, R₆₂ CHZ₂₀-(CH₂J_n ,(,-CO-NH sein muß; ferner vorausgesetzt, daß wo R₆₄ CHZ₂₀-(CH₂I₀₁₀-V¹² ist, A³¹, R₆₆H und V'⁰ deletiert sein müssen, ferner vorausgesetzt, daß wo A³¹, R₆₆H und V¹⁰ deletiert sind, R₈₄ CHZ₂₀-(CH₂Im₀-V¹² sein r-.'jß oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz derselben

Beispiel bevorzugter Peptide sind:

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gy^-Leu[CH₂-NHlLeu-NH₂;D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp[CH-NH)LeU-NIe-NH₂; oder D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-LeulCHj-NHlNleNHj. (Nichtpeptidbindungen, bei denen die Peptidbindung reduziert ist, sind hier durch /ICH₂-NH) oder „^L" gekennzeichnet. Ein weiterer Aspekt der Erfindung betrifft einen Agonisten der Substanz P der Formel Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly^l|CHr-NH)Leu-Leu-NH₂.

Erfindungsgemäße SP-Antagonisten sind zur Behandlung von Patienten geeignet, die an neurogenen Entzündungen leiden, wie z. B. Rheumatoid-Arthritis, Colitis ulceross, Ekzem und Crohns Krankheit. Die erfindungsgemäßen SP-Antagonisten sind als antiproliferative Agenzien, z. B. zur Behandlung von Bronchialkarzinom und Störungen, bei denen es zur Vermehrung von Fibroblasten kommt, geeignet. Die antiproiiferativen Eigenschaften der erfindungsgemäßen SP-Antagonisten ermöglichen ferner ihre Verwendung zur Verhinderung der Narbenbildung an Gliazellen (und erleichtern folglich die Nervenregeneration). Die Einwirkung der erfir, Jungsgemäßen Antagonisten auf die Neurotransmission ermöglicht ihre Nutzung als nicht zur Klasse der Opiate zählende Schmerzmittel. Ihre Verwendung als derartige Analgetika kann die Wiederherstellung der Reaktion auf Opiate ermöglichen. Die erfindungsgemäßen Antagonisten sind ferner als antisekretorische Agenzien geeignet, die z.B. die Speicheldrüsen oder die Bauchspeicheldrüse beeinflussen.

Wenn eine von R,, R₂, R;-Rn> R51, Reg-R« oder R70-R72 in den vorstehend gegebenen aligemeinen Formeln eine aromatische, lipophile Gruppe ist, kann die Aktivität in vivo lange anhalten und die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindung an das Zielgewebe folglich vereinfacht werden.

Bei der kennzeichnenden Gruppe einer α-Aminosäure (Pyroglutamat siehe unten) handelt es sich um das Atom oder die Atomgruppe, die nicht an das a-Carbonylkohlenstoffatom, das α-Aminostickstoffatom oder an das asymmetrische a-Kohlenstoffatom gebundene Η-Atom ist. Als Beispiel sei genannt, daß die kennzeichnende Gruppe von Alanin CH₃, die kennzeichnende Gruppe von Valin (CH₃I₂CH, die kennzeichnende Gruppe von I ysin H₃N⁺(CH₂I₄ und die kennzeichnende Gruppe von Phenylalanin (C₈He)CH₂ ist. Die kennzeichnende Gruppe einer ß- oder γ-Aminosäure ist das analoge Atom oder die analoge Atomgruppe, die an das ß- bzw. γ-Kohlonstoffatom gebunden ist. Wo die kennzeichnende Gruppe einer Aminosäure nicht näher bezeichnet ist, kann sie α, β oder γ sein. Im Falle des Pyroglutamats besteht die kennzeichnende Gruppe 8Us-NH-CO-CH₂-CH₂-. Weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung werden anhand der Beschreibung der bevorzugten Ausführungsbeispiele derselben und aus den Patentansprüchen deutlich werden.

Beschreibung der bevorzugten Ausführungsbeispiele Zuerst geben wir eine kurze Beschreibung der Zeichnungen.

Zeichnungen Fig. 1: umfaßt zwei Diagramme, die die Auswirkung der Pseudopeptide Spantid, D-Arg-Pro-Lys-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp- Leu-Leu-NHj, (linke Seite) und SP, Agr-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂, (rechte Seite) auf die durch

SP stimulierte Amylasefreisetzung aus den Acinuszelien des Pankreas darstellen. Fig. 2: ist eine schematische Darstellung der Auswirkung von Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Giy-Leu-ICHrNHlLeu-

NH₂ auf die durch SP stimulierte Amylasefreisetzung aus den Acinuszelien des Pankreas. Fig. 3: umfaßt zwei schematische Darstellungen der Fähigkeit der verschiedenen SP- und Spantidpseudopeptide, die Bindung

des ^1J5l-BH-Substanz P an die Acinuszelien des Pankreas zu hemmen

Fig.4: ist eine Darstellung der Fähigkeit von SP und Spantidpseudopeptiden, die Bindung von ¹²⁵l-[Tyr*]Bombesin an die

Acinuszelien des Pankreas zu hemmen.

Nachstehend werden die Struktur, die Synthese und die Verwendung der bevorzugten Anwendungsformen der Erfindung beschrieben.

Struktur

Die erfindungsgemäßen Peptide weisen alle Modifizierungen auf, z.B. eine Nichtpeptidbindung an mindestens einer der angegebenen Positionen, in der das an der Bindung zwischen zwei Resten beteiligte Kohlenstoffatom von einem Carbonylkohlenstoff zu einem Methylenkohlenstoff reduziert ist. nie Peptidbindungs-Reduktionsmethode, die diese Nichtpeptidbindung ergibt, wird in Coy u.a., US-PSA, Nr.879348, die dem gleichen Bevollmächtigten wie die vorliegende Anmeldung übertragen wurde, die hiermit durch Bezugnahme eingeschlossen isi, beschrieben. Die erfindungsgemäßen Peptide können in Form pharmazeutisch akzeptabler Salze zur Verfügung gestellt werden. Beispiel bevorzugter Salze sind die mit therapeutisch akzeptablen organischen Säuren, z. B. Ethan-, 2-Hydroxypropan-, Malein-, 2-Hydroxypropan-1,2,3-tricarbon-, hydroxybutan-, Ascorbin-, Butandi-, Benzoe-, Salicyl-, Methansulfon-, Toluensulfon- oder Pamosäure sowie aus polymeren Säuren, wie z. B. m-Digallussäure oder Celluloseglykolsäure, gebildeten Salze und Salze mit anorganischen Säuren, wie Halogenwasserstoffsäuren, z. B. Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure.

Synthese der Analogen der Substanz P Die Synthese des Antagonisten der Substanz P Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^L[CH₂NH]Leu-NH₂ wird

nachstehend beschrieben. Andere Analoge der Substanz P können durch entsprechende Abwandlungen des nachstehendbeschriebenen Syntheseverfahrens hergestellt werden.

Der erste Schritt ist die Herstellung des Zwischenproduktes Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Giy-Leu^l|CH₂-NH]Leu-

benzhydrylaminharz auf folgendem Wege.

Benzhydrylamin-Polystyrenharz (Vega Biochemicals, Inc.) (0,97 g, 0,5mmol) in Form von Chloridionen wird in den Reaktionsbehälter eines Beckman-990B-Peptidsynthesegerätes, das auf folgenden Reaktionszyklus programmiert ist,

eingebracht: (a) Methylenchlorid, (b) 33%igeTrifluoressigsäure (TFA) in Methylenchlorid (zweimal 1 bzw. 25min); (c)

Methylenchlorid, (d) Ethanol, (e) Methylenchlorid und (f) 10%iges Triethylamin in Chloroform. Das neutralisierte Harz wird mit Alpha-t-ButoxycarbonyKBocl-Leucin und Diisopropylcarbodiimid (jeweils 1,5mMol) in Methylenchlorid 1 Stunde lang gerührt, und das resultierende Aminosäureharz wird dann im vorstehend genannten Waschprogramm, Stufen (a) bis (f) behandelt. Boc-Ieucinaldehyd (1,25mMol), das nach der von Fehrentz und Castro, Synthesis, S.676 (1983), beschriebenen Methode hergestellt wurde, wird in 5ml trockenem Dimethylformamid (DMF) gelöst und zu der Harz-TFA-Salz-Suspension zugegeben. Danach werden 100mg (2 mMol) Natriumcyanoborohydrid (Sasaki und Coy, Peptides 8

[1987], S. 119-121; Coy u.a., a.ο. a.O.) zugegeben. Nach Istündigem Rühren reagiert das Harzgemisch negativ auf die

Ninhydrinreaktion (1 min), was die vollständige Derivatisierung der freien Aminogruppe anzeigt. Die folgenden Aminosäuren

(1,SmMoI) werden danach in Gegenwart von Diisopropylcarbodiimid (1,5mMol) erfolgreich angekoppelt und das so erhaltene

Aminosäurenharz durchläuft die Wasch-/Deb!ockierungsschritte (a) bis (f) wie vorstehend genannt: Boc-Gly (boc-Gly wird als

ein 6M Überschuß des p-Nitrophenylesters gekoppelt), Boc-Phe, Boc-Phe, Boc-Gln, Boc-Gln, (Boc-Gln ist als ein 6M

Überschuß des p-Nitrophenylesters gekoppelt), Boc-Pro, Boc-Lys, Boc-Pro und boc-Arg. Das fertige Harz wird danach mit Methanol gewaschen und an der Luft getrocknet.

Das vorstehend beschriebene Harz (1,6g, 0,5mMol) wird mit Anisol (5ml) und wasserfreiem Fluorwasserstoff (35ml) bei O⁰C gemischt und 45min lang gerührt. Überschüssiger Fluorwasserstoff wird unter einem trockenen Stickstoffatom schnell verdunstet, und freies Paptid wird ausgefällt und mit Ether gewaschen. Das Rohpeptid wird in einem Volumen von mindestens 2 M Essigsäure gelöst und in einer Sephadex-G-25-Säule 82,5 cm x 90cm), die mit 2 M Essigsäure elulert wird, gereinigt. Danech folgt eine präparative Mitteldruckchromatographie auf einer Säule (1,5cm χ 45cm), VydacC,₈ Siliziumdioxid (10-15 μρη), die mit linearen Gradienten von Acetonitril in 0,1%igerTrifluoressigsäure unter Verwendung eines Eldex-Chromatrol Gradientenkontrollgerätes (Durchflußrate 1 ml/min) eluiert wird. Gegebenenfalls werden die Analoge durch erneutes Chromatographieren auf der gleicher. Säule mit geringfügigen Modifizierungen der Gradienten weiter gereinigt. Die Homogenität der Peptide wurde mittels Dünnschichtchromatographie und analytischer Hochdruck-Umkehrphasen-Flüssig-Chromatographie bewertet; die Reinheit betrug 97% oder mehr. Die Analyse der Aminosäuren ergab die erwarteten Aminos'äurenverhältnisse. Die Gegenwart der reduzierten Peptidbindung wurde massenspektrometrisch durch Beschüß mit schnellen Atomen nachgewiesen. Jedes Analoge wies eine gute Ausbeute des Molekülions entsprechend der errechneten Molekülmasse auf.

Ein Statin-, AHPPA-, ACHPA-, ß-Aminosäure- oder γ-Aminosäurerest wird auf gleiche Weise wie ein natürlicher a-Aminosäurerest durch Kopplunp als Boc-Aminosäure angefügt. Statin oder Boc-Statin kann nach der von Rieh u. a. J. Org. Chem. 43 (1978), S.3624; Rieh u.a. J. Org. Chem. 53 (1988), S.869, und Rieh u.a. J. Med. Chem. 23 (1980), S.27 beschriebenen Methode synthetisiert werden. AHPPA kann nach der von Hui u. a., J. Med. Chem. 30 (1987), S. 1287 beschriebenen Methode synthetisiert werden. ACHPA kann nach der von Schuda u. a., Journal of Organic Chemistry 53 (1988), S. 873 beschriebenen Methode synthetisiert werden, boc-gekoppelte synthetische Aminosäuren können von Nova Biochemicals (Schweiz), Bachen (Torrance, Kalifornien) und CalBiochem (San Diego, Ka'.ornien) bezogen werden.

Andere Verbindungen können wie vorstehend beschrieben hergestellt und mit dem nachstehend beschriebenen Testprogramm auf ihre Wirksamkeit als Agonisten oder Antagonisten geprüft werden.

Stufe 1 - Freisetzung der Amylaso aus den Aclnuszellun des Pankreas

SP stimuliert die Freisetzung von Arnyi; se in den Acinuszelten des Pankreas. Die Stimulierung oder Hemmung der Amylasefreisetzung durch Acinuszellen des Pankreas ist ein Maß der agonistischen bzw. antagonistischen Aktivität eines Peptids. Aus der Bauchspeicheldrüse eines Tieres stammende feinzerteilte Acinuszellen werden in 150ml Standard-Inkubationslösung suspendiert. Die Amylasefreisetzung wird, wie vorstehend beschrieben, gemessen (Gardner u.a. J. Physiol. 270 (1977), S.439). Die Amy laseaktivita't wird nach den von Ceska u.a. (Ceska u.a. CMn. Chim. Act a 26 [1969], S. 437 und Ceska u. a. Clin. Chim. Acta 26 [1969], S.445) beschriebenen Methoden unter Verwendung von Phadebas-Reagens bestimmt. Die Amylasefreisetzung wird errechnet als prozentualer Anteil der Amylaseaktivität in den Acinuszellen zu Beginn der Inkubation, die während der Inkubation in das extrazelluläre Medium abgegeben wurde.

Stufe 2 - Kompetitive Hemmung der ^1J6l-Bolton-Hunter-SP-Bindung

Die Bindung von "^sl-Bo!ton-Hunter-SP (¹²⁶I-BH-SP) an feinzerteilte Acinuszellen der Bauchspeicheldrüse wird, wie zu einem früheren Zeitpunkt beschrieben, gemessen (Jensen u.a., bio'.hem. biophys. Acta, 804 [1984], S. 181 und Jensen u.a., Am. J. Physiol. 254 [1988], S.G.883). Die Inkubationen enthalten 0,125 nM ¹²⁶I-BH-SP und 0,1 % Bacitracin in einem Standardinkubationspuffer und worden 30min lang bei 37⁰C bebrütet. Die nichtsättigungsfähige Bindung des ¹²⁶I-BH-SP ist die Menge der mit den Acinuszellen assoziierten Radioaktivität, wenn did Inkubation 0,125nM ¹²⁶I-BH-SP plus 1 μΜ nichtmarkiertes SP enthält. Sämtliche gegebenen Werte betreffen die sättigungsfähige Bindung, d. h. die Bindung, die nur mit ¹²⁶I-BH-SP (Gesamtbindung) gemessen wird. In allen Versuchen machte die nicht sättigungsfähige Bindung <30% der Gesamtbindung aus.

Stufe 3 - Kompetitive Hemmung der ¹²⁵I-[Tyr*]Bombesinbindung

¹²⁶l-[Tyr⁴]Bombosin 82200 Ci/mMol) wird als Modifizierung der zu einem früheren Zeitpunkt (Jensen u.a., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 75 [1978], S.6139) beschriebenen Methode hergestellt. lodo-Gen (mg) wird in 5I Chloroform gelöst, und 5μΙ dieser Lösung (1 pg loden-Gen) werden unter einem Stickstoffstrom in eine Ampulle gegeben. 50 μΙ KH₂PO₄ (pH 7,4), 6μς [Tyr*]Bombesin in 5μΙ Wasser und 1 mCi na'²⁵l werden außerdem in diese Ampulle gegeben, gemischt und 6min bei 4°C bebrütet. Zu diesem Zeitpunkt wird das lodierungsgemisch in eine Ampulle mit 1M Dithiothreitol gegeben und 60min bei 8O⁰C bebrütet. Das lodierungsgemisch wird danach in eine Sep-Pak-Kammer gegeben und mit 0,25M Tetraethylammoniumphosphat (TEAP), gefolgt von 50%igem (Volumen/Volumen) Acetonitril 0,25 M TEAP eluiert. ¹²⁶-[Tyr⁴]Bombesin wurde durch Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigchromatographie gereinigt und eluiert.

Ergebnisse der Untersuchungen der Testpeptide

Eine Anzahl von Analogen der Substanz P oder des Antagonisten der Substanz P Spantid, die jeweils eine Nichtpeptidbindung enthalten, können in einer oder mehreren der in Stufe 1-3 beschriebenen Untersuchungen synthetisiert und geprüft werden. Die Struktur der Substanz P ist Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Meth-NHj. Spantid ist ein SP-Analoges. Die Spantidstruktur lautet D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Leu-NHj. Die Stimulierung oder Hemmung der Amylasefreisetzung aus feinzerteilten Acinuszellen des Pankreas wurde als Test der SP-agonistischen bzw. -antagonistischen Aktivität genutzt. In einer Konzentration von 10μΜ waren 9 von 10 von SP sowie Spanidderivierte Pseudopeptide nicht in der Lage, die Amylasefreisetzung allein zu stimulieren (Tabelle 2). Ein Peptid, Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-'-lCHr-NHlLeu-LeU-NH₂, (1 ΟμΜ), wies eine agonistische Aktivität auf, die die Amylasefreisetzung auf das Dreifache steigerte (Tabelle 2). Jedes der 9 Pseudopeptide ohne agonistische Aktivität wurde auf seine Aktivität als SP-Antagonist untersucht. In einer Konzentration von 10μΜ hemmte jedes der Spantid-derivierten Pseudopeptidanaloge die von 1 nM SP stimulierte Amylasefreisetzung (Tabelle 2). Drei Pseudopeptide, Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^l[CH₂-NH]Leu-NH₂, Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe^l[CHr-NH]Gly-Leu-Leu-NHj und Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GLn¹ CH₂-PlIe-GIy-LeU-LeU-NH₂ verursachten die Hemmung (Tabelle 2).

Die relative Fähigkeit jedes Peptide, die SP-stimulierte Amylasefrelsetzung zu hemmen, wurde durch dig Auswirkung der Peptiddosis auf die Hemmung bestimmt. Untersuchungen der Beziehungen zwischen Dosis und Hemmung wurden für jedes der 9 Pseudopeptide anhand einer SP Konzentration (1 nM), die eine halbmaximale Stimulierung verursacht, durchgeführt (Fig. 1). Die Ergebnisse für die 5 von Spatid abgeleiteten Pseudopeptide sind in Fig. 1 im linken Teil dargestellt. D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu^l[CHr-NH]Nle-NH₂ war ebenso wirksam wie Spantid und verursachte bei 0,03μΜ eine nachweisbare Hemmung und bei 1,8μΜ eine halbmaximale Hemmung (Tabelle 3). D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp^l(CHj-NHlLeu-Nle-NH₃ war zweimal weniger wirksam (IC_M, 3,5 μΜ, Tabelle 3) als Spantid. D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln^CHj-NH]D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Nle-NH₂ war 2,6mal weniger wirksam (IC₆₀ 4,7 μΜ) als Spantid. D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp^l[CH/-NH]Phe-D-Trp-Leu-NI-NHj war 3,5mal weniger wirksam (IC₆₀,6,4μΜ) und D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe^l'CH₂-NH]D-Trp-Leu-Nle-NH₂ war 17mal weniger wirksam (ILe₀,30 μΜ) als Spantid (Tabelle 3).

Die Ergebnisse für die SP-Pseudopep.idanalogen werden in Fig. 1, rechtes Feld dargestellt. Arg-Pro-Lys-Pro-Gin-Gln-Phe-Ph.v GIy-LeU¹ICH₂-NH)LeU-NH₂ war das wirksamste SP-Derivat, das bei 0,3μΜ eine nachweisbare Hemmung und bei 7,1 μΜ eine halbmaximale Hemmung verursachte (Tabelle 3, rechte Spalte). Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe^l[CH2-NHlGly-Leu-Leu-NH₂ und Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln^l|CHi-NH]Phe-Phe-Gly-Leu-Leu-NH2 waren weniger wirksam und verursachten bei 10μΜ eine nachweisbare Hemmung. Sie sind 7mal bzw. 46mal weniger wirksam als Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^l[CHj-NH)LeU-NH₂ (Tabelle 3, rechte Spalte). Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe^l[CHr-NH)Phe-Gly-Lou-Leu-NH₂ zeigte in Konzentrationen von bis zu 30μΜ keine Hemmwirkung (Fig. 1, rechte Spalte). Der wirksamste, von SP derivierte Pseudopeptidantagonist war ArgPro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^LlCHj-NH]Leu-NH2 (Fig. 1, Tabelle 2).

Die Hemmwirkungen des wirksamsten SP-derivierten Pseudopeptidantagonisten, Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-LeU¹ICH₂-NH)LeU-NH₂ sind in Fig. 2 dargestellt. Die Acinuszellen werden mit steigenden Konzentrationen von SP bebrütet. Die Amylasefreisetzung konnte mit 0,1 nM SP nachgewiesen werden, war halbmaximal bei 1 nM SP und maximal bei 10 nM (Fig.2). Die Zugabe von Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu'lCHj-NHlLeu-N^ verursachte eine parallele Rechtsverschiebung der Dosis-Reaktions-Kurve der SP-stimulierten Amylasefreisetzung. Die Verschiebung verhielt sich proportional zur Konzentration des zugegebenen Arg-Pro-l.ys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^L[CHr-NHlLeu-NH₂, es war jedoch keine Veränderung hinsichtlich der maximalen Reaktion zu verzeichnen (Fig. 2). D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu^l[CH_rNH)Nle-NH₂ zeigte ähnliche Ergebnisse (nicht dargestellt).

Die Wechselwirkung der SP- und Spantid-derivierten Analogen mit den SP-Rezoptoren der Acinuszellen des Pankreas wurde anhand der Fähigkeit eines Peptide, die Bindung von ¹²⁶I-BH-SP an die Acinuszellen zu hemmen, gemessen (siehe Tabelle 3 und Fig. 3).

Die Spantid-derivierten Pseudopeptide sind unterschiedlich wirksam. D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Pho-D-Trp-LeU¹ICH₂NH)NIe-NH₂ weist eine dem Spantid etwa gleichwertige Wirksamkeit auf, die bei 0,03 μΜ eine nachweisbare Hemmung und bei 2,2 μΜ eine halbmaximale Hemmung auslöst (Fig.3, linker Teil, Tabelle 3). D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp^l[CHr-NH)Leu-Nle-NH₂ und D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GlniCHrNHJD-Trp-Phe-D-Trp-Lou-Nle-NHj sind zweimal weniger wirksam als Spantid. D-ArQ-PrO-LyS-PrO-GIn-GIn-D-TrP¹ICH₂-NH)PhO-D-TrP-LeU-NIe-NH₂ war dreimal (K₍, 6,3μΜ) weniger wirksam als Spantid. D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe¹! CH₂-NH]D-TrP-LeU-NIe-NH₂ war siebenmal (Ki, 14,7 μΜ) weniger wirksam als Spantid (Fig.3, Tabelle 3).

Die SP-derivierten Psaudopeptide sind ebenfalls unterschiedlich wirksam. Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-LeuMCHr-NH]LeU-NH₂ bewirkt bei 0,1 μΜ eine nachweisbare Hemmung und bei 3μΜ eine halbmaximale Hemmung. Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GIn-PhO-PhO-GIy¹ICH₂-NH]LeU-LeU-NH₂ hat eine eineinhalbmal geringere Wirksamkeit, Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe¹ ICH₂-NH)GIy-LeU-LeU-NH₂ ist zwanzigmal weniger wirksam und ArQ-PrO-LyS-PrO-GIn-GIn-PhO¹ICH₂-NH]PhB-GIy-LeU-LeU-NH₂ und Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln^LICH₂-NH]Phe-Phe-Gly-Leu-Leu-NH₂ sind über 62mal weniger wirksam als Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GIn-PhO-PhO-GIy-LoU¹ICH₂-NH]LeU-NH₂.

Im Gegensatz zu in der Vergangenheit untersuchten SP-Analogen sind die erfindungsgemäßen Peptide für den SP-Rezeptor spezifisch. Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Pho-GIy-Leu^lICH₂-NH]Lou-NH₂ wurde auf seine Fähigkeit zur Hemmung der von verschiedenen, die Sekretion der Bauchspeicheldrüse anregenden Substanzen bewirkten Amylasefreisetzung geprüft (Tabelle 4). Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Pho-Gly-Leu^lICH₂-NHlLeu-NH₂ (20μΜ) hemmte die von SP stimulierten Amylasefreisetzung, jedoch nicht die von Bombesin, CCK-8, Carbachol, VIP, Sekretin, CGRF A23187 oder TPA stimulierte Amylasefi'eisetzung.

Die wirksamsten Rezeptorantagonisten wurden auf ihre Fähigkeit zur Hemmung der Bindung von ^U6l-|Tyr⁴)Bombesin an die Bombesinrezeptoren der Acinuszellen des pankreas geprüft. Wie bereits zu einem früherem Zeitpunkt mitgeteilt wurde (Jensen u.a., Am. J. Physiol. 204 (1988), S.G883), hemmte Spantid die Bindung von ^<2*l-(Tyr⁴] und bewirkte bei 3 ± 1 μΜ die halbmaximale und bei 100μΜ die vollständige Hemmung (Fig.4). D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-Leu'-ICHr-NH)NIe-NH₂ hemmte zwar die ¹²⁶l-[Tyr⁴)Bombesinbindung, war jedoch dreimal weniger wirksam als Spantid, da 10μΜ zur halbmaximalen Hemmung benötigt wurden (p < 0,05 im Vergleich zu Spantid) (Fig.4). Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-LeU¹ICH₂-NHlLeU-NH₂ verursachte erst in Konzentrationen über 30μΜ eine nachweisbare Hemmung und wies einen berechneten Κ,-Wert von 300 χ 20μΜ auf. Spantid und D-ArQ-PrO-LyS-PrO-GIn-GIn-D-TrP-PhO-D-TrP-LeU¹ICH₂-NH]NIe-NH₂ hatten eine drei- bis zehnmal geringere Affinität zur Hemmung voi· ^l26l-lTyr⁴]Bombasin als zu '²⁶I-BH-SP. Die Hemmung der Bindung von ¹²⁶l-(Tyr⁴]Bombesin durch Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^lICH₂-NH]Leu-NH₂ war siebzigmal geringer als die Hemmung der Bindung von '²⁵I-BH-SP.

Verwendung Die erfindungsgemäßen Peptide können einem Säugetier, insbesondere dem Menschen, auf einem der herkömmlichen Wege

(z. B. oral, parenteral, transdermal oder intramuskulär) in einer Form mit verzögerter Freisetzung unter Verwendung einesbiologisch abbaubaren, biologisch verträglichen Polymers oder durch lokale Anwendung mittels Mizellen, Gelen und Liposomenverabreicht werden.

Die Peptide können einem Patienten in einer Dosierung von O^g/kg/Tag bis 5mg/kg/Tag verabreicht werden. Tabelle 1

Die fünf Carboxyl-terminalen Reste einer Anzahl bioaktiver Peptide.

Peptid

Carboxyl-terminale Sequenz

Bombesin

Neuromedin-ß

Neuromedin-C

Litorin

Neurokinin-A

Neurokinin-8

Substanz P

Prototypische Tachykininsequenz

-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂ -Thr-Gly-His-Phe-Met-NHj -Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂ -Val-Gly-His-Phe-Met-NHj -Phe-Val-Gly-Leu-Leu-NH₂ -Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH₂ -Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NHj

-Phe-X-Gly-Leu-Met-NH₂ (wo X = ein verzweigter aliphatischer oder aromatischer Aminosäurerest ist)

Tabelle 2

Auswirkung der verschiedenen SP- und Spantid-derivierten Pseudopeptide

auf die basale und die SP-stimulierte Amylasefreisetzung

Zugegebenes Peptid

kein Peptid

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-PhO-GIy-LeU¹ICH₂-NHJLeU-NH₂ (10μΜ)

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly^l|CHr-NH]Leu-Leu-NH₂ (10μΜ)

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe^L[CH₂-NH]Gly-Leu-Leu-NH₂ (10μΜ)

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-••(CHj-NHlPhe-Gly-Leu-Leu-NHj (10μΜ)

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GlnMCHj-NH]Phe-Phe-Gly-Leu-Leu-NH₂ (10 μΜ)

D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D- frp-Phe-D-Trp-Leu^CHj-NH] NIe-NH, (10 μΜ)

D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-TrpHCHj-NHlLeu-NIe-NH₂ (10 μΜ)

D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe^l[CHr-NH]D-Trp-Leu- ΝΙθ-ΝΗ₂(10μΜ)

D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp^l(CH₂-NH]Phe-D-Trp-LeU-NIe-NH₂(^M) D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln^L (CHz-NHlD-Trp-Phe-D-Trp-Leu-ΝΙθ-ΝΗ₂(10μΜ)

Amylasefreisetzung (% gesamt) allein SP(InM)

3,4 ±0,5 6,6 ± 0,7

3,1 ±0,7	4,3 ±0,5·
10,4+1,0··	NT-Agonist
3,1 ± 1,0	5,4 ±0,7»
3,8 ± 0,7	6,4 ± 0,3
3,1 ±0,9	6,1 ±1,0»
3,8 ± 0,05	3,6 ±0,1·
3,9 ±0,8	4,2 ±0,2»
4,0 ± 0,5	5,6 ±0,8»
4,1 ± 0,5	4,8 ±1,2»
3,8 ± 0,3	4,5 ± 0,8*

* Signifikant weniger als SP allein ρ < 0,05 ·· Signifikant höher als ohne Zugaben ρ < 0,001

Die Adnuszellen wurden 30min mit 1 nM SP und 10μΜ Konzentrationen der verschiedenen SP- und Spantid-Pseudopeptidanalogen entweder allein oder in Kombination bei 37⁰C bebrütet. Die Amylasefreisetzung wurde als Prozent der in den Adnuszellen zu Beginn der Inkubation ermittelten Amylaseaktivität, die während der Inkubation in das extrazelluläre Medium abgegeben wurde, ausgedrückt. Die Werte sind Mittelwerte ± 1 mittlere Standardfehler aus mindestens 5 Versuchen. In jedem Versuch wurde jeder Wert zweimal bestimmt. Abkürzungen: NT-Agonist = nicht als Agonist geprüft, da es sich um einen Agonisten handelte.

Tabelle 3

Fähigkeiten von SP, Spantid und Pseudopeptid, die Bindung von '²⁶I-BH-SP oder die SP-stimulierte Amylasefreisetzung zu hemmen

Peptid	"M-BH-Sp Bindung K₁ oder Κ,,(μΜ)	Hemmung der mit 1 nM SP stimulierten Amylasefreisetzung IC₆₀(MM)
D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln- D-Trp-Phe-D-Trp-Leu-Leu-NHj (Spantid)	2,1 ± 0,6	1,8 ±0,1
D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln- D-Trp-Phe-D-Trp-Leu^l\|CHr-NHl NIe-NH₂	2,2 ±0,4	1,8 ±0,25
O-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln- D-Trp-Phe-D-Trp^l[CHj-NH] LeU-NIe-NH₂	3.6 ± 0,7	3,5 ± 0,6
D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln- D-Trp-Phe^LICHj-NHlD-Trp-Leu- NIe-NH₂	14,7 ±2,0	30 ± 5,0

D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp^L (CHj-NHlPhe-D-Trp-Leu-Nle-NH₂

D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln¹ [CHj-NHlD-Trp-Phe-D-Trp-Leu-NIe-NH₂

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂(SP) Arg-FiO-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-PhO-GIy-LeU¹ICH₂-NH]LeU-NH₂

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-GlyMCHj-NHlLeu-Leu-NHj

Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-PhO¹ICH₂-NH]GIy-LeU-LeU-NH₂ Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe¹ (CHr-NHlPhe-Gly-Leu-Leu-NHj Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln^lICH₂-NH]Phe-Phe-Gly-Leu-Leu-NH₂

6,3 ±3,3

6,4 ±1,4

4,3 ±1,1	4,7 ±1,3
0,0025 ±0,005	Kein Agonist
4,3 ± 0,3	7,1 ±0,9·
5,6 + 2,2	Kein Agonist
41,3 ±16,7	>30
265,0 + 89,0	>30
310,0 ±88,0	>30

Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte ±1 Standardfehler des Mittelwertes. Die Kd-Werte für P wurden aus der Scatchard-Analyse für '"!-markierten SP-Bindung gewonnen, die KrWerte für die Agonisten oder Antagonisten aus Untersuchungen der Bindung von ¹²⁶I-BH-SP wurden nach der Gleichung Ki = (R/1 - R) (SB/S + A) ermittelt, wo R die beobachtete sättigungsfähige Bindung von '²⁶I-BH-SP in Gegenwart des Antagonisten (B) als Bruchteil der Bindung ausgedrückt wird, die man erhält, wenn B nicht gegenwärtig ist. A ist die Konzentration von '²⁹I-BH-SP (0,125 nM). B ist die Konzentration des Antagonisten, S ist der Kd von SP, der mit Hilfe der Scatchard-Analyse bestimmt wird. Kein Agonist = Peptid nicht auf inhibitorische Aktivität gep JTt, weil agonistische Aktivität zu beobachten ist, wenn es allein vorhanden ist.

Fähigkeit von Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^L(CH₂-NH)Leu-NH₂, die von verschiedenen die Sekretion anregenden Substanzen stimulierte Amylasefreisetzung zu beeinflussen

Sekretion anregende Substanz	Amylasefrei	(% gesamt)
	setzung allein	Leu¹¹,^L10-11-SP^M)
keine	2,7 ±0,4	2,3 ±0,3
Substanz P (1nM)	8,7 ±1,8	4,3 ±0,5»
CCK-8(0,1nM)	19,7 ±4,2	21,6 ±4,9
Bombesin	'14,8 ±4,1	14,3 ±3,1
Carbachol(IOpM)	22,7 ±4,1	20,7 ± 3,1
VIP (0,3 nM)	20,5 ± 3,5	18,9 ±4,2
Sekretin (0,1 μΜ)	18,9 ±3,6	18,8 ±4,1
CGRP (0,1 μΜ)	12,1 ±3,3	12,0 ±3,9
Α23187(0,1μΜ)	9,9 ±1,5	11,6 ±1,6
TPA (0,1 μΜ)	32,2 ± 5,7	30,2 ± 5,6

* Signifikant weniger als das die Sekretion anregende Mittel allein, ρ < 0,001.

Die Acinuszellen wurden mit verschiedenen, die Pankreasekretioh anregenden Substanzen allein oder mit Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GIn-PhO-PhO-GIy-LeU¹ICH₂-NH)LeU-NH₂ 30min lang bei 37°C bebrütet. In jedem Experiment wurde jeder Wert doppelt bestimmt und die Ergebnisse sind Mittelwerte ± 1 Standardfehler des Mittelwertes aus mindestens 4 getrennten Experimenten

Abkürzungen: CCK-8: COOH-terminales Octapeptid von Choler.ystokinin; VIP: vasoaktives Darmpeptid; CGRP: mit Calcitoningen verwandtes Peptid; A23187 von TPA: 1,2-o-Tetradecanoylphorbol-i,3-acetat.

Weitere Ausführungsbeispiele

Weitere Ausführungsbeispiele werden von den Patentansprüchen erfaßt.

Claims

1. Lineares Peptid, das ein Analoges der natürlich vorkommenden, biologisch aktiven Substanz P ist, das eine aktive Stelle und eine Bindungsstelle besitzt, die für die Bindung des Peptids an einen Rezeptor an der Zielzelle verantwortlich ist, dadurch gekennzeichnet, daß das Analoge eine der folgenden Modifizierungen aufweist: (a) eine Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen einem Aminosäurerest der aktiven Stelle und einem benachbarten Aminosäurerest, (b) Statin- oder AHPPA- oder ACHPA- oder ß-Aminosäure- oder γ-Aminosäurerest anstelle der zwei natürlich vorkommenden Aminosäurereste der aktiven Stelle, (c) Deletierung eines Aminosäurerestes außerhalb der aktiven Stelle oder (d) Gegenwart eines N-terminalen Aminosäurerestes, der nicht der N-terminale Aminosäurerest des natürlich vorkommenden, biologisch aktiven Peptids ist.

2. Lineares Peptid, das ein Analoges der Substanz P nach Anspruch 1 ist, dadurch gekennzeichnet, daß das Analoge in der Lage ist, sich an den Rezeptor zu binden, so daß das Analoge durch Bindung an den Rezeptor als kompetitiver Inhibitor des natürlich vorkommenden Peptids wirken kann und aufgrund der Modifizierungen die In-vivo-Aktivität des natürlich vorkommenden Peptids nicht aufweist.

3. Lineares Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die aktive Stelle des linearen Peptids sich in der Carboxyl-terminalen Hälfte des linearen Peptids befindet, wobei das lineare Peptid eine der folgenden Modifizierungen aufweist: (a) Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen einem Aminosäurerest der aktiven Stelle und einem benachbarten Aminosäurerest, (b) Statin- oder AHPPA- oder ACHPA- oder ß-Aminosäure- oder 8-Aminosäurerest anstelle von zwei natürlich vorkommenden Aminosäureresten der aktiven Stelle, (c) Deletierung eines Aminosäurerestes innerhalb der aktiven Stelle und Modifizierung eines Aminosäurerestes außerhalb der aktiven Stelle oder (d) Gegenwart eines N-terminalen Aminosäurerestes, der nicht der natürliche N-terminale Aminosäurerest des natürlich vorkommenden, biologisch aktiven Peptids ist.

4. Lineares Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die aktive Stelle des linearen Peptids sich in der Carboxyl-terminalen Hälfte des linearen Peptids befindet, wobei das lineare Peptid eine der folgenden Modifizierungen aufweist: (a) Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen dem Carboxyl-terminalen Aminosäurerest und dem benachbarten Aminosäurerest oder (b) Statin- oder AHPPA- oder ACHPA- oder ß-Aminosäure- oder 8-Aminosäurerest anstelle des natürlich vorkommenden Carboxyl-terminalen und des benachbarten Aminosäurerestes.

5. Lineares Peptid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das lineare Peptid ein Analoges der natürlich vorkommenden, biclogisch aktiven Substanz P ist, wobei das Analoge eine der folgenden Modifizierungen aufweist: (a) Nichtpeptidbindung anstelle einer Peptidbindung zwischen einem Aminosäurerest der aktiven Stelle und einem benachbarten Aminosäurerest oder (b) Statin- oder AHPPA- oder ACHPA- oder ß-Aminosäure- oder 8-Aminosäurerest anstelle von zwei natürlich vorkommenden Aminosäureresten der aktiven Stelle.

6. Das Analoge der Substanz P nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Analoge zu mindestens 25% homolog mit der natürlich vorkommenden Substanz P ist.

7. Das Analoge der Substanz P nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Analoge zu mindestens 50% homolog mit der natürlich vorkommenden Substanz P ist.

8. Das Analoge der Substanz P nach Anspruch 5 der Formel

1 *v ι ΛΑ

^R2 3

A¹ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Arg-Lys oder Lys-c-NH-R₂o H, C_: 12-Alkyl, C₇-₁₀-Phenylalkyl, COE10, (wo E₁₀ Ci_2o-Alkyl, C^o-Alkenyl, C3_2o-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder

C₇_io-Phenylalkyl ist) oder C^^-Acyl oder deletiert ist;
A² das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oderdeletiert ist;

A³ das D- oder L-lsomere einer der Aminosäuren Lys oder Lys-c-NH-R₂2 (wo R22 H, Ci_₂2-Alkyl, C₇_₁₀-Phenylalkyl, COE₁₂ [wo E12 C^o-Alkyl, C₃_₂₀-Alkenyl, C3_2o-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder

C7_io-Phenylalkyl] oder C,-C₁₂-Acyl ist) oder deletiert ist; A⁴ das D- oder L-lsomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A⁶ dasD-oderL-lsomereeinerderAminosäurenAsp,Gln,ß-Nal,Trp,Phe,o-X-Phe(woX = F,Cl,

Br, NO₂); p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₂) OH oder CH₃ oder deletiert ist; A⁶ das D-oder L-lsomere einer derAminosäuren AIa, Arg, Ser, Pro, GIn, pGlu,Asn, ß-Nal,Trp,

Phe, o-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder ' CH₃JiSt;
A⁷ das D- oder L-lsomere einer der Aminosäuren VaI, Thr, Phe, Trp, ß-Nal, o-X-Phe (wo X=F, Cl,

Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A⁸ die kennzeichnende Gruppe des D-oder L-isomeren einer der Aminosäuren GIy, VaI, Trp, ß-Nal, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂,

OH oder CH₃) ist;
A⁹ das D- oder L-lsomere einer derAminosäuren Sar, His, GIy, Trp, ß-Nal, Phe, o-X-Phe (wo X = F,

Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A¹⁰ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer derAminosäuren Trp,.ß-Nal, Leu-Nle, AIa, Cyclohexyl-Ala, VaI, He, Met, GIy, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder

CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) ist; A¹¹ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Trp, ß-Nal, Leu, Nie, Ala, VaI, He, Met, GIy, Phe, o-X-Phe (wo X=F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder deletiert ist;

Ri und R₂ unabhängig voneinander H, C₁^₂-AIkYl, C₇_₁₀-Phenylalkyl, COE₁₄ (wo E₁₄ C^o-Alkyl, Qj-20-Alkenyl, C3_₂o-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder C₇_₂₀-Phenylalkyl ist), C₁-C₁₂-ACyI oder deletiert ist und R₁ und R₂ an das α-Aminostickstoffatom der N-terminalen Aminosäure des Peptids, vorausgesetzt, daß wenn eines von R₁ oder R₂ COE₁₄ ist, das andere H sein muß; R₃ ist H oder C₁^₂-AIkYl; R₅ ist CHZ₁₀-(CH₂)_n1-V², CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO oder CO-CH₂ (wo V² entweder

-0-R₇ oder

wo R₇, R₈ und R₉ jeweils unabhängig voneinander H, C₁^₂-AIkYl, CMo-Phenylalkyl oder C₁₂_₂₀-Naphthylalkyl sind); η 1 entweder 1 oder O ist und Z₁₀ entweder H oder OH ist); R₆ C oder/und V¹ eines von

11

oder deletiert ist (wo R₁O, R₁₁ und R₁₂, unabhängig voneinander H, C₁^₁₂-AIkYl, C₇_₁₀-Phenylalkyl oder C₁₂-_2O-Naphthylalkyl sind); vorausgesetzt, daß wo R₅ CHZ₁₀-(CH₂)_n1-V² ist, A¹¹, R₆H und V¹ deletiert sein müssen; ferner vorausgesetzt, daß wo A¹¹, R₆H und V¹ deletiert sind, R₅ CHZ₁O-(CH₂)ni-V² sein muß; ferner vorausgesetzt, daß wo A⁵ Asp, A⁶ Ser, A⁷ Phe, Α^ε VaI, A⁹ GIy, A¹⁰ Leu, A¹¹ Leu und R₆ CH₂NH ist, mindestens eines von A¹, A², A³ oder A⁴ gegenwärtig sein muß, oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz desselben.
9. Das Analoge der Substanz P nach Anspruch 5 der Formel

A²⁶ A²⁷ A²⁸ A²⁹ A³⁰

A²¹ das D- oder L-lsomere einer der Aminosäuren Arg, Lys oder LyS-C-NH-R₈₀ (wo Reo H, C₁^₂-AIkYl, C₇_₁₀-Phenylalkyl, COE₂₀) wo E₂o C^o-Alkyl, Qj-^-Alkenyl, C3_₂o-Alkinyl, Phenyl,

Naphthyl oder C₇_₁₀-Phenylalkyl oder C₁^₂-ACyI ist oder deletiert ist; A²² das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A²³ das D- oder L-Isomere einer der Aminosäuren Lys oder LyS-C-NH-Re₂ (wo Re₂, Ci_i₂-Alkyl, C₇_₁₀-Phenylalkyl, COE₂₂ [wo E₂₂C₁^₀-AIkYl, C₃_₂₀-Alkenyl, C₃.₂₀-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder

C₇_₁₀-Phenylalkyl ist] oder C₁-C₁₂-ACyI) oder deletiert ist; A²⁴ das D- oder L-Isomere der Aminosäure Pro oder deletiert ist; A²⁵ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Ap, GIn, ß-Nal, Trp, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃), p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder

CH₃) oder deletiert ist;
A²⁶ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Arg, Sar, Pro, GIn,

pGlu, Phe, Trp, Cyclohexyl-Ala oder Asn;
A²⁷ die kennzeichnende Gruppe der Aminosäure D-Trp oder die kennzeichnende Gruppe des D-

oder L-Isomeren von Leu, Phe oder Cyclohexyl-Ala oder deletiert ist; A²⁸ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren VaI, ß-Nal, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃)

oder deletiert ist;
A²⁹ die kennzeichnende Gruppe der Aminosäure D-Trp oder die kennzeichnende Gruppe des D-

oder L-Isomeren von Leu, Phe oder Cyclohexyl-Ala ist;
A³⁰ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Leu, Nie, AIa, Cyclohexyl, Ala, VaI, Me, Met, GIy, Phe, Tm, ß-Nal, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃)

oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder deletiert ist; A³¹ die kennzeichnende Gruppe des D- oder L-Isomeren einer der Aminosäuren Trp, ß-Nal, Leu, Nie, Ala, VaI, He, Met, GIy, Phe, o-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder p-X-Phe (wo X = F, Cl, Br, NO₂, OH oder CH₃) oder deletiert ist;

R₅₁ und R₅₂ unabhängig voneinander H, C^^-Alkyl, C₇_₁₂-Phenylalkyl, COE₂₄ (wo E₂₄ C^₂₀-AIkYl, C₃_₂₀-Alkenyl, O^o-Alkinyl, Phenyl, Naphthyl oder C₇_₁₀-Phenylalkyl), C₁-C₁₂-ACyI oder deletiert sind und R₅₁ und R₅₂ an das α-Aminostickstoffatom der N-terminalen Aminosäure des Peptids gebunden sind, vorausgesetzt, daß wenn eines von R₅₁ oder R₅₂ COE₂₄ ist, das andere H sein muß; R₅₃ C oder deletiert ist; R₅₅ und Rei unabhängig voneinander C sind; R₅₇, R₅g, Ro₃ und R₆₅ unabhängig voneinander entweder C oder deletiert sind; R₅₄ CO-NH, CO-NCH₃ oder deletiert ist; R₅₆ und R₆₂ unabhängig voneinander CO-NH, CHZ₂₀-(CH₂)_n10-CO-NH (wo η 10 entweder 1 oder O ist; und Z₂₀ entweder H oder OH ist), CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO oder CO-CH₂ ist; R₅₈ CO-NR₆₉ (wo R₆₉ H oder C^-Alkyl ist), CHZ^CH^mo-CO-NH-CHj-NH CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO, CO-CH₂ oder deletiert ist; R₆₀ CO-NH oder deletiert ist; R₆₄ CO-NH, CHZ₂₀-(CH₂)_nl0-V¹², CH₂-NH, CH₂-S, CH₂-CH₂, CH₂-CO, CO-CH₂ oder deletiert ist (wo V¹² entweder

O O R₇ _χ

-C-O-R₇₀ oder -C-Nf t

^R72

wo R₇₀, R₇₁ und R₇₂ unabhängig voneinander H, C^-Alkyl, C₇_₁₀-Phenylalkyl oder C₁₂__2O-Naphthylalkyl sind) und V¹⁰ eines von

oder deletiert ist (wo R₆₆, R₆₇ und R₆₈ unabhängig voneinander H, C₁^₂-AIkYl, C₇_₁₀-Phenylalkyl oder C₁₂_₂₀-Naphthylalkyl sind); vorausgesetzt, daß mindestens eines von R₅₆, R₅₈, R62 oder Re4 etwas anderes als entweder CO-NH oder CO-NR₆₉ ist; ferner vorausgesetzt, daß wo R₅₆ CHZ₂₀-(CH₂)_n10-CO-NH ist, A²⁷, R₅₇H und R₅₈ deletiert sein müssen, ferner vorausgesetzt, daß wo A²⁷, R₆₇H und R₅₈ deletiert sind, R₅₆ CHZ₂₀-(CH₂)_n10-CO-NH sein muß; ferner vorausgesetzt, daß wo R₅₈ CHZ₂₀-(CH₂)_niö-CO-NH ist, A²⁸, R₅₉H und R₆₀ deletiert sein müssen; ferner vorausgesetzt, daß wo A²⁸, R₅₉H und R₆₀ deletiert sind, R₅₈CHZ₂₀-(CH₂)_n10-CO-NH sein muß, ferner vorausgesetzt, daß

wo R₆2 CHZ2o-(CH₂)_n1ö-CO-NH ist, A³⁰, R₆₃H und R⁶⁴ deletiert sein müssen, ferner vorausgesetzt, daß wo A³⁰, R63H und R_M deletiert sind, R₆2 CHZ₂O-(CH₂)PIo-CO-NH sein muß; ferner vorausgesetzt, daß wo R_M CHZ₂<r-(CH₂)_n10-V¹² sein muß oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz desselben.

10. Das Analoge der Substanz P nach Anspruch 9, gekennzeichnet dadurch, daß die Formel Arg-Pro-Lys-pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu^L[CH₂-NH]Leu-NH2 lautet.

11. Das Analoge der Substanz P nach Anspruch 10, gekennzeichnet dadurch, daß daß die Formel D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp'-ICHi-NHlLeu-Nle-NHzoder D-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-D-Trp-Phe-D-Trp-LeuHCHz-NHlNle-NHj lautet.