CZ99796A3

CZ99796A3 - The use of muramyl peptide compound

Info

Publication number: CZ99796A3
Application number: CZ96997A
Authority: CZ
Inventors: Boris Vladimirovich Pinegin
Original assignee: Peptech Uk Ltd
Priority date: 1993-10-08
Filing date: 1994-10-05
Publication date: 1996-09-11
Also published as: AU7789094A; GB9320820D0; CA2173322A1; HUT75530A; DE69420145T2; EP0722332B1; LV11595A; JP3954644B2; KR100337977B1; LV11595B; WO1995010293A1; ATE183397T1; DE69420145D1; BG100476A; SK42396A3; JPH09503776A; US5877147A; AU680302B2; EP0722332A1; HU9600887D0

Description

Předložený vynález se týká použití muramylpeptidových sloučenin v profylaxi rakoviny, zahrnující ošetřeni předrakovinových stavů.

Dosavadní stav techniky

Rakovina je výraz, který se používá pro popis vývoje abnormálních buněk, které rostou rychlým a nekontrolovatelným způsobem a které jsou často invazivní. Napadení vitálních orgánů často vede k úmrtí pacienta.

Rakovina je velice rozšířená a bylo zjištěno,že asi 30 % lidí během svého života onemocnělo rakovinou a že k úmrtí vedlo asi 20 %. Tradiční léčby rakoviny zahrnují chirurgii a radioterapii, ale v poslední době se pozornost obrací na vývoj chemoterapeutických nebo cytotoxických činidel, která mohou poškozovat nebo zabíjet rakovinové buňky.

V posledních letech byla pozornost obrácena na výskyt tkáňových změn, které indikují zvýšené riziko následného vývoje konkrétních rakovin v místě takové změny. Mnoho z nich bylo popsáno a zahrnují modifikace intestinální stěny (intestinální polypy), které jsou spojeny se zvýšeným výskytem rakovin kolonu a rekta, změny kůže (aktinická keratoza), které jsou spojeny s karcinomy kůže a kondyloma cervixu, které jsou spojeny s rakovinou děložního hrdla. Odborník v oboru zná tyto stavy nebo tkáňové změny, mající sklon přecházet na rakoviny, spojené s vývojem rakoviny, nebo nesoucí významné riziko rakoviny, jako prekancerozní stavy nebo 1 éze. V některých případech je příčina těchto prekancerozních stavů dobře známá jako v případě aktinických keratoz vzniklých z nadměrného vystavování slunečnímu záření, nebo infekce lidským Papilloma virem v případě komdyloma cervixu (Cancer in Practice, G.J.G. Rees, S.E.Goodman a J.A.Bul 1imore, pub.

Butterworth-Heinemann, Oxford, 1993). V jiných případech nebyla příčina prekancerozní léze identifikována.

Předložený vynález se týká použití určitých · muramylpeptidových sloučenin (MDP) v profylaxi rakoviny a zejména v léčbě prekancerozních lézí.

Dlouho je známo, že nespecifická stimulace imunitního systému může být způsobena patrně vystavením bakteriím nebo složkám extrahovaným z bakteriálních stěn. Specifické složky odpovědné za tuto aktivitu byly identifikovány jako peptidy buněčné stěny obsahující cukr, a další biochemická analýza identifikovala peptidy jako peptidoglykanovou složku buněčné stěny. Jako nejmenší syntetická účinná molekula byl nalezen N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin (Merser a spol., Biochem.Biophys.Pes.Comm.66 1316 (1975), který je často uváděn jako prototyp muramyldipeptidu nebo prototyp MDP.

Následně bylo syntetizováno mnoho analogů prototypu muramyldipeptidu, z nichž některé byly navrženy jako léčiva pro obnovu imunitní funkce nebo nespecifické stimulace imunitního systému. Tyto analogy a prototyp MDP samotný jsou známy jako muramyldipeptidové sloučeniny (MDP).

V minulosti byly provedeny práce, týkající se použití MDP v léčbě rakoviny a například Key a spol., J.Nat1.Cancer Inst., 69(5), 1189-1198 (1982) popisují léčbu plicních melanomových metastáz liposomy, obsahujícími MDP deriváty. Později stejná skupina pracovníků hodnotila optimální podmínky a omezení pro likvidaci melanomových metastáz použitím liposomem enkapsulováného MDP derivátu, MTP-PE (Fidler a spol., Cancer Immuno1.Immunother., 21(3)169-173(1986)). Dále bylo zjištěno, že orálně podávané ne-liposomem enkapsu1 ováný MTP-PE produkuje tumoricidní aktivitu jak v plícních tak per itoneá1nich makrofázích a je účinný v inhibici metastáz plicních a lymfatických žláz i když není účinný při likvidaci dobře známých melanomových metastáz (Fidler a spol., J.Immunol., 4509-4514 (1987)).

Phillips a spol., J.Biol.Response Modif., 6(6), 678-691 také popisují práci, týkající se léčby pulmonárních metastáz za použití liposomy obsahujících lipofilních MDP analogů. Opět byly sloučeniny použity pro léčení experimentálně vyvolaných pulmonárních B16 melanomovývh tumorů u myší. Avšak Kleinerman a spol. v J.Cl in.Onco1ogy, 9(2), 259-267 (1991) činí závěr, že není pravděpodobné, že by MDP derivát L-MTP-PE mohl sloužit jako jediná modalita v léčbě metastatické choroby.

Některé MDP byly použity pro klinické pokusy v lidské terapii. Například Kleinerman a spol. (Kleinerman, ES, Cancer Immunol.Immunother,34:211-220, 1992) použili lipofilní analog v liposomálním přípravku při léčbě plicních metastáz vyvinutých u pacientů s osteosarkomem.

Přes výše uvedené důkazy o použitelnosti MDP v léčbě rakoviny a přes skutečnost, že MDP byly objeveny před asi 20 lety, nebyl zaznamená žádný jednotlivý příklad příklad významného účinku MDP v léčbě rakoviny lidí.

Nyní však bylo autory tohoto vynálezu objeveno, že určité muramyldipeptidové deriváty jsou zvláště účinné ve způsobu \

\ i

léčby prekancerogenních lézí, kde tento způsob zahrnuje podání účinného množství muramylpeptidové sloučeniny pacientovi postiženému prekancerozní lézí. Tento způsob léčby tak představuje pro fy 1 akt ický přístup k léčbě rakovin.

Tento přístup je nejen nový, ale je zřejmým přínosem pro pacienta, protože je vždy výhodné předcházet výskytu rakoviny spíše než podstupovat dlouhou, nebezpečnou, nepříjemnou a často neúspěšnou léčbu existující rakoviny.

Podstata vynálezu

Prvním aspektem předloženého vynálezu je poskytnutí použití muramylpeptidové sloučeniny při přípravě činidla pro léčbu prekancerozních lézí.

Činidlo může být použito při léčbě jakéhokoliv typu prekancerozní léze i když je zvláště výhodné pro léčbu prekancerozních lézí vedoucích k mukosálním nebo epitheliálním rakovinám.

Předložený vynález také poskytuje použití muramylpeptidové sloučeniny při přípravě činidla pro profylaxi rakoviny.

Opět může být činidlo použito pro profylaxi jakéhokoliv typu rakoviny, i když nejúspěšnější je použití pro profylaxi rakovin epitheliálního nebo mukosálního původu. Profylaktická aktivita činidla se v některých případech vzniká z jeho použití v léčbě prekancerozních lézí, ale mohou být také případy, kdy činidlo má profylaktický vliv na pacienty ohrožené rakovinou, ale ještě nemající prekancerozní léze.

Pyrogenicita je problém, který vyvolával potíže při využití určitých muramylpeptidových sloučenin. Pyrogenicita může být zeslabena vhodnými přípravky (například liposomální přípravky US-A-4522811 a US-A-4684625), ale obecně bude výhodné volit pro použití v předloženém vynálezu muramylpeptidovou sloučeninu s nízkou vlastní pyrogenici tou.

Mnoho muramylpeptidových sloučenin vhodných v předloženém vynález spadá do obecného vzorce I

kde

Ri představuje atom vodíku nebo C1-C22acylovou skupinu;

R2 představuje atom vodíku nebo C1-C22acylovou skupinu;

R³ představuje atom vodíku nebo Ci-Cealkylovou skupinu;

R4 představuje C11-C21 alky1ovou skupinu nebO Có nebo C10 arylovou skupinu;

R5 představuje atom vodíku a

R představuje zbytek aminokyseliny nebo lineárního peptidu složeného ze 2 až 6 aminokyselinových zbytků, s alespoň jedním ze zbytku substituovaným lipofilní skupinou.

Preferované acylové skupiny pro R¹ a R² jsou Ci-Csacylové skupiny jako je acetyl; je třeba uvést, že počet atomů acylové skupiny nezahrnuje karbonylovou skupinu. Preferované skupiny pro R³ jsou Ci-C4a 1ky1ové skupiny jako je methyl a ethyl. Preferované alkylové skupiny pro R⁴ jsou Ci-C6alkylové skupiny, výhodně Ci-C^alkylové skupiny jako je methyl nebo ethyl; fenyl je preferovanou arylovou skupinou.

R výhodně představuje mono-, di- nebo tripeptid. Proximálními peptidovými zbytky (nebo pouze peptidovým zbytkem, je-li pouze jeden) je výhodně L-aminokyselina. Příklady zahrnují;

L-alanyl L-valyl L-leucy1 L-isoleucyl L-a-aminobutyry1 L-sery1 L-threony1 L-methionyl L-cyste inyl L-f enylalanyl L-tyrosyl

L-tryptofanyl L-lysyl L-orni thyl L-arginy1 L-hi s t idy1 L-glutamyl L-glutaminyl L-asparty1 L-asparaginyl L-prolyl L-hydroxyproly1

Preferován je L-alanyl jako je L-threonyl.

Další aminokyselina z proximálního konce peptidu je výhodně v D-konfiguraci. Je výhodně kyselá a může to být D-glutamová nebo D-aspartová kyselina nebo její mono-, dinebo směsný C1-C22 (výhodně Ci-Có) alkylester, amid nebo C1-C4 alkylamid. (Výraz směsný znamená je-li jedna karboxylová skupina amidována a druhá esterifikována). Preferovány jsou D-isoglutamin a D-glutamát.

Třetí aminokyselinový zbytek od proximálního konce řetězce, je-li přítomen, je výhodně v L-konfiguraci, jak uvedeno výše ve vztahu k proximálnímu aminokyselinovému zbytku. Preferovány jsou L-alanyl a L-lysyl.

Aminokyselinovýzbytek nebo lineární peptid je popřípadě substituován alespoň jednou lipofilní skupinou. Lipofilní skupina může být C10-C20 acylová skupina jako je stearoyl nebo d i-(Ci0-C2 oacy1)-sn-glycero-3’-hydroxyfosfory1oxy-skup i na, kde například každá z C10-C20 acylových skupin může být palmitoylová skupina. Lipofilní skupinou může alternativně (nebo navíc, pokud může být přítomna více než jedna substituce) být Cii-Cio esterová skupina jako je C2-C6 esterová skupina: příkladem je butyiester.

Příklady muramyldipeptidů v rozsahu obecného vzorce I zahrnuj í:

muroctasin, jinak známý jako MDP-Lys (L18) (N²-(Nacetylmuramyl-L-alanyl-D-ί soglutaminy1)-N⁶-stearoylL-lys in);

MTP-PE (N-acety1-muramy1-L-alany1-D-i soglutaminy1-Επί any 1-2-( 1 *,2’-dipalmi toyl-sn-glycero-3'-hydroxyfosfory1oxy)ethyl amid, monosodný);

murabutid (N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamin-aN-butylester); a t-MDP (N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamin).

Příprava muroctasinu je popsána v EP-A-0021367 a US-A-4317771. Příprava MTP-PE je popsána v EP-A-0025495. Příprava murabutidu je popsána Lenfranč ierem a spol.,

J.Med.Chem., 25 87 (1982). Příprava t-MDP může být provedena metodami známými v oboru. Patentové publikace, které poskytují podrobnosti o přípravě muramylpeptidových sloučenin obecně zahrnují BE-A-0834753, BE-A-0834754, BE-A-0847103,

BE-A-0894214, DE-A-2710455, DE-A-2922533, DE-A-2747379,

DE-A-2912865, FR-A-2355505, FR-A-2358159, FR-A-2375249, EP-A-0004512, EP-A-0002677, JP-A-540630l6, JP-A-54073729, JP-A-55019236, US-A-4082735 a US-A-4082736. (Příprava prototypu muramyldipeptidu je popsána v DE-A-2450355 a US-A-4235771) . Všechny dokumenty uváděné v tomto popise jsou zahrnuty jako reference.

Všechny muramyldipeptidy vhodné pro použití v předloženém, vynálezu nespadají do obecného vzorce I. Mnoho jich spadá do obecného vzorce II, který představuje zvláště výhodnou skupinu sloučenin pro použití ve vynálezu:

kde

R představuje zbytek aminokyseliny nebo lineárního peptidu složeného ze 2 až 6 aminokyselinových zbytků, kde alespoň jeden ze zbytků je popřípadě substituován lipofilní skupinou; a n je 1 nebo 2.

Sloučenina může být také anomer obecného vzorce II. Preferované významy pro R jsou popsány výše u obecného vzorce

I. Zvláště je výhodné, když peptidové R koresponduje s peptidem v prototypu MDP (L-Ala-D-isoGln). Alternativně muže v dalším výhodném provedení R představovat L-Ala-D-Glu.

Preferovanou hodnotou pro n je 1.

Sloučeniny obecného vzorce II jsou popsány v US-A-4395399 a výhodná provedení uvedená v tomto dokumentu jsou rovněž výhodná provedení v předloženém vynálezu. Dále v tomto vynálezu může skupina R být lipofilně substituována jak je popsáno výše.

Jedna z nejpreferovanějších sloučenin pro použití v předloženém vynálezu spadá do obecného vzorce II a je to N-ace t y 1-D-g lukosaminyl-([31-4) -N-ace t y 1 mu rámy 1-L-a 1 any 1 D-isoglutamin (GMDP), jehož vzorec je:

GMDP

Tato sloučenina (sloučenina II v US-A-4395399), známá také jako glycopin, má za sebou testování preklické toxicity a farmakokinetická hodnocení vyžadovaná pro povolení klinického použití v SSSR (v době jeho existence). Akutní toxicitas na myši měřená LD50 testem je 7 g/kg. Toto ukazuje, že sloučenina je skoro řádově méně toxická než muroctasin, který má LD50 hodnotu u myši 625 mg/kg a u kterého je terapeutické použití spojeno s nepříjemnými vedlejštni účinky jako je horečka.

I když pyrogenicita GMDP je asi 50 % pyrogenicity MDP a nebrání jejímu klinickému zkoušení, mohlo by za určitých okolností být výhodné použití méně pyrogenního analogu. Takový analog je dostupný a je jím

N-acety1-D-glúkosaminy 1-(β1-4)-N-acetylmuramyl-L-alany1D-glutamová kyselina (GMDP-A), což je sloučenina III v US-A-4395399, jejíž struktura je následující:

gmdp-a

Jiné preferované sloučeniny v rozsahu obecného vzorce II zahrnují:

N-acetyl-D-glukosaminyl-(31-4)-N-acetylmuramy1-L-alany1L-isoglutamin (GMDP-LL), který má vzorec

I 1

HOCH- ⁰ p-o_s ^HOyL>/

HOCHZ~°QH

V

NHAc

CHCO-L-Alo-L-isoGIn

CH

NHAc

GMDP-LL

N-acetyl-D-glukosaminyl-(31-4)-N-acetylmuramyl-L-alanyl

D-glutamin-n-butylester (GMDP-OBu), který má vzorec:

HOCH7~° ω a

OH

HOCH, ⁰P-O ho°^h ./

NHAc

CHCO -L -Ala-0 -Gin-OBu C*3

NHAc

GMDP-OBu

N-acety1-D-glukosaminy1-(β1-4)-N-acetylmuramyl-L-alanyl D-isoglutaminy1-L-lysin (GMDP-Lys), který má vzorec:

NHAc

GMDP-Lys j

N- [N-acety1-D-glukosaminyl-(31-4)-N-acety 1muramy1-Lalany1-D-isoglutaminyl]-N -stearoyl-L-lysin (GMDPLys(St)), který má vzorec:

iaoGIn-L- i-ys-C0C_l7H

GMDP-Lys(St)

Jiné vhodné sloučeniny zahrnují:

N^ - [N-acety 1-D-g lukosami n-yl - (β l-4)-N-acetylmuramyl-Lalanyl-^-D-glutamyl]-N -stearoyl-L-lysin , který má vzorec _HCru

HOCH, 9 HO™/>

NHAc

NHAc ^CHCO-t-Ale-O-du-L-Lys-COC, ₇H-j₅ No CH₃

GMDPA-Lys(SC) dibenzyl ester kyseliny

N-acetyl-D-glukosaminyl-(P i —4)-N-acetylmuramy1-L-alany 1 D-glutamové, který má vzorec:

NHAc ®©ΡΑ(0Βζ1)₂

N-acetyl-D-glukosaminyl-(31—4)-N-acetylmuramy1-N-methy1 L-alanyl-D-isoglutamin, který má vzorec:

Me-GMDP

N-acety1-D-glukosaminy1—(β1—4) -N-ace ty lmuramy 1-(β 1—4) N-acety1-D-g1úkosaminy1-(β1—4)-N-acetylmuramy1-bi s-(Lalanyl—D-isoglutamin), který má vzorec:

HOCH,

Ar hoch, ^{υ x}>0H

CHCO—Ala—O-HoGIn I

CH,

NHAc vO

HOCH,

CHCO -1-Alo -0 - isoOln i

CHj

NHAc (GMDP)₂

N-ac e t y1-D-g1uko s am i ny1-(β1—4)-N-a c e t y 1muramy1-(β1 —4)N-acety1-D-glúkosaminy1-(β1—4)-N-acetylmuramyl-bis-(Lalanyl-D-glutamová kyselina), která má vzorec;

HOCH,

'CHCO-L-Ala-O-Glu i

CHj

CHCO-L-AO-O-G¹“

I ch₃

NHAc (GMDPA) ₂

N-acetyl-D-glukosaminyl-(31—4) -N-acetylmuramyl-^ 1—4)N-ace ty 1-D-gl uko saminyl-^l—4) -N-acetylmuramyl-bis-(L15 a 1any1-D-isoglutaminy1-L-1ysi η), který má vzorec:

•O-isoGIn-L-Lys

O \^NHAcHOCHj | \

JCHCO—L-Alo-O-isoCIn-L-Lye

HPOH CH,

NHAc (GMDP Lys)₂

N-ace ty1-D-glukosaminy1-(β1 —4)-N-acetylmurámy1-(β1 —4)N-acety1-D-g1 úkosaminy 1-(β1—4)-N-acetylmuramy1-bis-(Lalanyl-D-isoglutaminyl-N -stearoyl-L-lysin):

HOCH.,

OH

I \ NHAC

HOCH. 1 .Hie Νθ —o I \_HCO-_u-Ala-0-i»oGln-L-Lv’COC,

._lsoGln-U-LysCOC_l7M₃5’No (GMDP-Dys(St)b

1-adamanty1 ester N-ace ty1-D-glukosami nyl-(β1 —4) -Nacetylmuramyl-(31—4)-alanyl-D-isoglutaminu, který má vzorec:

AlO-Q-iaoGIn-OAd

GMDP-Ad £

L-threony1-N -[N-ace ty1-D-glukosami nyl-(β1—4)-N-acety1 muramy1-L-alany1-^ -D-isoglutaminy1]-L-lysy1-L-propy1-Larginin, který má vzorec:

HOCH..

Λ^Λ°ΟΗ

NHAc

I ch₃

GMDP-tuftsin E

N-acety1-D-glukosaminy1-(β1 —4)-N-acetylmuramy1-Lalany 1- ^1-D-i soglutaminy1-L-threony1-L-lysy1-L-propyl-larginin, který má vzorec:

HOCH°0H rW i \ NHAc HOCH- ^{0 V}

Λ^-0'

HQQ^h

NHAc

CHCO-L-Aia-O-isoGIn-Thr-Lys-Pro-Arg

CH,

GMDP-tuftsin A

N-acety1-D-glukosáminy1 — (β1 —4)-N-acetylmuramy1-L-alany1 α-D-glutamy1-L-lysyl-L-threony1-N -s tearoy1-L-lysyl-Lpropyl-L-arginin, který má vzorec:

HOCH/“°0H

HOCHhqOH

NHAc

CHCO-L-Alo-0-Glu-Thr-Lys(CQC_t7H₃₅)-Pro-Arg ch₃

NHAc

GMDPA-tuftsin lipofilní

N -[N-ace ty 1-D-glukosaminy1-(β1 —4)-N-acetylmuramyl-La 1 any 1 - 'ýj-D-i soglutaminyl] -L-1 ysy 1 -L-hi s t i dy 1 -L-g 1 yc i námi d , který má vzorec:

HOCHΛ%H \O Λ

NHAc

HOCH- ⁰

ΗΟθ^Η / NHAc

CHCO—L-Ala-D-isoGIn—Lys—His-Gly-N^ ch₃

GMDPA-bursin

N-acety 1-D-g1 úkosaminy1-(β1—4)-N-acetylmuramyl-L-alany1D-isoglutaminyl-L-glutamyl-L-tryptofan, který má vzorec:

ΑΙα-0-isoGln—Glu—Trp

GMDP-thymogen I

N-acety1-D-glukosaminy1-(β1—4)-N-acetyImuramy1-L-alany1D-i soglutaminy1-e-aminohexanoy1-L-glutamy1-L-tryptofan, který má vzorec:

HOCH,

OH

HOCH, ?

j-^0

ΗΟθΗ

NHAc

CHCO-l-Ala-D-ÍsoGIn-Ahx-Glu-Trp

ŇHAc

GMDP-thymogen II

N [N-acety1-D-glukosaminy1- (β1—4)-N-acetylmuramyl-La1any1-D-isoglutaminyl]-N -stearoyl-L-lysy1-L-glutamy1-L tryptofan, který má vzorec:

HOCH,

I \ ' CHC0-L-Ala-0-isoGln-Lys(C0C₁₇H₃₅)-Glu-rrp

NHAc

GMDP-thymogen III

N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamin, který má vzorec

HOCH.

w

OH \ NHAc

OH

CHCO-L—Thr-O-isoGIn CH₃

Thr-MDP n-butylester N-acetylmuramyl-L-alay1-D-glutaminu, který má vzorec:

HOCHΛ^1οοη w

OH \ NHAc

CHCO-L-Ala-O-Oln-OC^Hg ch₃ murabut id

Ve výše uvedených vzorcích byly použity následující zkratky:

Bzl - benzyl Me - methyl Ahx - e-aminohexanoy1.

Nejpreferovanéjší sloučeninou je GMDP následovaný GMDP-A a murabutidem.

1

Glukosaminy1-muramy1dipeptidy v rozsahu obecného vzorce II mohou být připraveny levně a v dostatečné velkých výtěžcích způsobem popsaným v US-A-4395399. Popsaná příprava je založena na extrakci a čištění disacharidové složky z bakterie

Micrococcus lysodecticus a jejím následujícím chemickým připojením k dipeptidu syntetizovanému například obvyklo peptidovou chemií. Nicméně mohou být disacharidy stejně dobře syntetizovány použitím standardní chemie cukrů.

Další výhodou preferovaných sloučenin obecného vzorce I a II uvedeného výše je, že jsou rozpustné ve vodě, což usnadňuje jejich podání pacientům.

Profylaktické použití MDP může převýšit účinnost sloučenin při léčbě prekancerogenních stavů.

Příkladem takového prekancerogenního stavu je rakovina děložního hrdla, kde rakovina má sklon být iniciována tvorbou papilomů, které mohou být spojeny s infekcí kmene lidského Papi 1 lotna viru. Papillomy mohou být snadno delegovány a obecně jsou léčeny leptáním nebo kapalným dusíkem s následujícím chirurgickým odstraněním. Pokud se však neléčí mají papillomy sklon přecházet do neoplasie a vytvářet rakovinu děložního hrdla, kterou je zvláště otížné léčit. Jelikož je mortalita žen s rakovinou děložního hrdla velmi vysoká, je obvykle žádoucí bránit neoplasii. Profylaktické léčba papillomú má určitou míru úspěšnosti, ale chirurgická léčba zcela nebrání recidivě. Je zde dobře zřejmé,že kolorektální rakovina, většinou adenokarcinomy, vzniksjící z povrchového epitelia, je jiný typ rakoviny, která může vzniknout z benigních prekancerozních lézí, v.tomto případě intestinálních polypú.

Příklady jiných prekancerozních lézí (a v závorkách,

2 potenciálního maligního stavu), které mohou být léčeny podle tohoto vynálezu jsou genitální bradavice (rakovina děložního hrdla); anální bradavice (rakovina rite); intestinání polypy (ko1orektá1 ηí rakovina); aktinická keratoza (karcinomy bazální a dlaždicobuněčné a melanomy); erythroplasie Queyrat (penisový dlaždicobuněčný karcinom); Bowensova choroba (dlaždicobuněčný karcinom); penisové bradavice (rakovina penisu); leukoplakie (rakovina vulvy); lišej plochý (rakovina orální mukozy); adenomatické gastrické polypy (rakovina žaludku); papillomy měchýřového epithelia (rakovina měchýře); a esofagální papillomy (esofagální dlaždicobuněčný karcinom).

Uvedený seznam uvádí pouze příklady a je třeba chápat, že předložený vynález představuje použití při léčbě jakýchkoliv prekancerogenních lézí, ze kterých by pravděpodobně vznikl mukosální nebo epitheliální karcinom).

U všech takových typů rakoviny je obecně účinnější léčit prekancerogenní stav před neoplasií než snaha o léčbu rakoviny po objevení neoplasie.

Je třeba uvést, že příklady uvedené výše jsou všechno rakoviny epitheliální nebo mukozní tkáně. Skutečně se předpokládá, že účinnosti MDP při léčbě rakovin mukosálníbo a epitheliálního původu mohou převyšovat, alespoň částečně, jejich aktivitu jako stimulátorú mukosální imunity. Zejména bylo zjištěno, že hladiny IgA jsou zvláště vysoké u pacientů léčených pomocí GMDP a GMDP-A, i když není nutné považovat předložený vynález za závislý na správnosti této teorie.

Očekává se, že MDP budou zvláště vhodné při přípravě činidel pro léčbu papilomu cervixu, oblasti řiti nebo kolorektální oblasti, nebo prekancerozních stavů kůže nebo orální mukozy. Tato činidla budou proto vhodná pro profylaxi rakovin právě zmíněných.

V některých případech léčba prekancerozního stavu pomocí MDP povede k vymizení prekancerozního stavu, ale je možné, že léčba jednoduše bude chránit před neoplasií.

V některých případech bude možná léčba prekancerozn!ho stavu se samotným MDP analogem. Nicméně jindy bude léčba s MDP analogem pomocná nebo přídavná terapie prováděná navíc k chirurgické, kryochirurgické, laserové odpařovací, chemické terapii, imunoterapii nebo radiační terapii.

Zjištění, že MDP jsou účinné při léčbě prekancerozn!ch stavů je zvláště překvapující vzhledem k velkému množství prací, které byly provedeny na použití MDP v rakovině, aniž by toto bylo zji štěno.

Typy rakoviny, ke kterým se zvláště vztahuje tento aspekt vynálezu jsou uvedeny výše.

Za určitých okolností mohou být rakoviny spojeny s detegovatelnými prekancerozními lézemi jako takovými. V medicíně je však uznáváno, že existují různé endogenní znaky, z nichž většina jsou znaky genetické, které indikují predispozici jejich nositelů k určitým typům rakoviny.

MDP proto mohou být podávány nositelům takových znaků a také jiným pacientům, o kterých je známo,že jsou vysoce rizikoví pro rakovinu, jako profylaktickou léčbu pro prevenci vývoje rakoviny. Příklady pacientů s vysokým rizikem ohrožení rakovinou zahrnují pacienty nesoucí genetický znak, pacienty, kteří mají výskyt rakoviny v rodině nebo lidé, kteří pracují ve vysoce rizikovém prostředí, například prostředí, které má vysoké hladiny radiace.

Proto je dalším aspektem vynálezu poskytnutí použití muramy1peptidu při přípravě činidla pro profylaxi rakoviny u pacienta, nesoucího endogenní znak pro rakovinu nebo jinak identifikovaného jako vysoce rizikového pro ohrožení rakovi nou.

Tento typ profylaktického použití nemusí být v souladu s běžnými rakovinovými terapiemi. Jak radiační terapie tak chemoterapie mají vedlejší účinky, které jsou příliš nebezpečné, aby byly tolerovány zdravou osobou, která spíše' při ohrožení onemocní.

náhradni list

Způsob podání sloučenin bude samozřejmě záviset na typu prekancerozní 1éze nebo rakoviny, které jsou léčeny. Nicméně typické způsoby podání budou orální (vhodné pro prekancerozní léze a rakoviny úst a GI traktu): vaginální (pro rakovinu děložního hrdla a spojených prekancerozních lézí) ; rektální (pro rakoviny a prekancerozní léze spodního GI traktu, zejména kolorektální rakoviny a řitě); a topické nebo transdermální (pro rakoviny a prekancerozní léze kůže a orální mukozy). I když výše jsou uvedeny preferované způsoby podání, je také možné podávat sloučeniny parenterálně, například intravenozní nebo intramuskulární injekcí. Navíc mohou být sloučeniny podávány katetrem nebo jiným zařízením do místa tumoru jako například papillomu měchýře, nebo do vagíny a dělohy u rakoviny děložního hrdla.

Orální přípravky mohou být ve formě tablet, kapslí nebo emulzí v závislosti na místě, kde je rakovina léčena. V některých případech může být nutné poskytnout přípravek se zpožděným uvolňováním pro dosažení toho, že účinná složka není uvolňována dokud přípravek nedosáhne místa, kde je to žádoucí. Přípravky mohou dále obsahovat další složky a v tabletách obvykle bude přítomen jeden nebo více vhodných nosičů. Typické nosiče zahrnují laktozu, sacharozu, bramborový škrob, stearát vápenatý a methylcelulozu.

Injektovatelné přípravky mohou obsahovat roztok GMDP nebo GMDP-A nebo, alternativně liposomy pro tvorbu injektovatelného přípravku.

Vaginální a rektální přípravky mohou být formulovány jako pesary a čípky. Tyto přípravky budou pravděpodobně obsahovat další přísady a vhodné nosiče a přísady jsou dobře známé odborníkům v oboru formulace přípravků.

náhradu í list

Transdermální a jiné topické přípravky mohou být ve formě mastí, krémů nebo roztoků a opět jsou vhodné nosiče a přísady dobře známé v oboru.

Pro zlepšení permeace sloučeniny do kůže může být navíc výhodné použít určité lipofilní analogy. Alternativně mohou být v přípravcích přítomny sloučeniny, modifikující kožní permeabilitu nebo může být využit elektrický potenciál pro postup nabitých analogů do kůže. U transdermálních přípravků může být přípravek inkorporován do transdermální náplasti nebo podobného zařízení.

Vaginální, rektální, topické a transdermální přípravky jsou všechny nové a samy tvoří další aspekt vynálezu. V tomto aspektu vynálezu je poskytnuta kompozice, obsahující muramy1peptidovou sloučeninu a farmaceuticky přijatelnou přísadu nebo nosič, vyznačující se tím, že kompozice je upravena pro podání topickým, transdermálním, rektálním nebo vaginálním způsobem.

Topické a transdermální přípravky jsou, jak uvedeno výše, zvláště výhodné v profylaxi rakoviny kůže a muramylpeptidy mohou být obsaženy v topických slunečních clonách jako další ochrana před rakovinou kůže.

Přesná podávaná dávka bude stanovena ošetřujícím lékařem. Nicméně, obecně by měla průměrná denní dávka být v rozsahu od 0,1 do 100 mg na den (nebo na tabletu nebo jinou dávkovou jednotku). Je zřejmé, že dávka v rozsahu 0,5 mg až 50 mg na den (nebo na tabletu nebo jinou dávkovou jednotku) bude výhodná a denní dávka kolem 1,0 mg až 10 mg je považována za optimální.

náhradní list

Vynález bude dále popsán následujícími neomezujícími příklady a obrázky.

Popis obrázků na připojených výkresech

Obr. 1 je histogram, představující vliv GMDP na obsah Ig cervikální sliznice u pacientek s HPV infekcí děložního hrdla;

obr.2 je histogram, představující vliv GMDP na hladiny Ig v seru u pacientek s HPV infekcí děložního hrdla;

obr.3 je histogram, představující vliv GMDP na lymfocytové subpopulace u pacientek s HPV infekcí děložního hrdla.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Použití GMDP při léčbě prekancerozních infekcí lidským Papilloma virem (HPV) děložního hrdla

Metoda;

Studovaná skupina obsahovala 50 žen ve stáří mezi 20 a 30 roky (průměr 26,7) s HPV děložního hrdla. Trvání choroby se mění od 1 do 3,5 roku. Třicet žen dostávalo GMDP jeko část kombinované léčby, dalších 20 dostávalo ve své kombinované terapii placebo. Pro kontrolu změn v obsahu Ig cervikálních sekrecí během menstruačního cyklu byla léčba započata 8-10 dnů po začátku periody.

Před začátkem léčby bylo sledováno mnoho imunologických parametrů; imunoglobulin (Ig) v seru (radiální imunodifuze) , náhradní list

Ig ve slinách a sekreci genitálního traktu (ELISA), subpopulace imunních buněk (imunocytofluorimetrie).

Subjekty pak byly léčeny konvenční léčbou antibiotiky pro související bakteriální infekci; destrukci HPV infikovaného cervikálního epitelu (kondyloma) laserem a kryoterapií a iminoterapii, zahrnující 1 mg GMDP orálně každýden po deset dnů. Kontrolní subjekty dostávaly placebo místo GMDP.

Tři dny po posledním podání GMDP (nebo placeba) byly subjekty podrobeny stejným imunologickým hodnocením. Potom byly provedeny studie klinické progrese HPV infekce.

Kontrolní hodnoty pro imunologické parametry byly také získány ze skupiny žen bez HPV infekce. Tyto byly v romezí 20 až 30 let - průměr 25,5.

Výs1edky:

Klinické nálezyy:

Výsledky léčby byly hodnoceny kolposkopií a cytologickým hodnocením. Jak je uvedeno v tabulce 1 bylo zvýšení ve vyléčení zřejmé u skupiny subjektů, které dostávaly GMDP ve spojení s laserovou terapií a kryoterapií.

náhradní list

9

Tabulka 1

Vliv GMDP na vyléčení a recidivu HPV infekce děložního hrdla u ošetřované skupiny

Ošetřovaná skupina

	GMDP	p1acebo
počet ve skupině	30	20
klinická hodnocení
plné vyléčení	27 (90 %)	13 (65 %)
recidiva HPV	3 (10 %)	7 (35 %)

Imunologické závěry:

Normální kontroly ukazují mnoho rozdílů u pacientů před periodou léčení (tabulka 2). Léčba placebem (laser nebo kryoterapie ale ne imunoterapie) neposkytuje jakékoliv rozdíly před a po léčbě. Nicméně v GMDP skupině bylo identifikováno mnoho významných změn spojených s léčbou. Konkrétně byla nižší hladina IgA a slgA v cervikální sliznici zvýšena a v posledně uvedeném případě došlo k přestoupení hladiny u normálních kontrol.

Mnoho změn, týkajících se GMDP podání bylo také pozorováno u mnoha krevních buněk a distribuce subtypu. Infikované pacientky měly výrazně nižší počet leukocytů ve srovnání s neinfikovanými kontrolami. Tento byl zvýšen léčbou GMDP, ne ve skupině s placebem. Celkový počet lymfocytů byl také zvýšen léčbou GMDP, toto bylo hlavně diky zvýšení T-buněk (CD3+ve), zejména CD4+ve podskupiny.

náhradní list

3G

Závěry:

Podání GMDP pacientkám s HPV infekcí děložního hrdla vyvolává významné změny v mnoha imunologických parametrech. Tyto jsou pravděpodobně spojeny se sklonem ke zvýšení poměru vyléčení spojeného s přídavnou GMDP terapií.

náhradní list

Tabulka 2

Imunoglobulinové hladiny (mg/dl) u pacientek s HPV infekcí děložního hrdla neinf. GMDP placebo

	kontroly	před	po	před	po
sérový
IgA	169,3	216,0*	228,7	221,0*	217,0
	+ 11,0	±16,8	±18,2	±15,3	±20,0
IgM	112,7	123,8	160,8**	133,2	129,8
	±16,2	±10,411	,2	±12,1	±10,2
IgG	1375	1424	1258**	1442	1386
	±88	±48	±51	±52	±45
S1 i zni ce	děložního	hrdla
IgA	6,08	3,15*	5,96**	3,28*	3,08
	±0,86	±1,08	±1,05	±0,68	±1,23
IgM	0	3,18	1,8	3,25	3,31
		±2,21	±1 ,65	±2,01	±2,34
IgG	15.42	9,57*	12,01	10,01*	8,4
	±1,32	±2,1%	±3,01	±2,30	±3,05
slgA	7,19	3,80*	19,4**	4,01*	3,75
	±0,62	±0,84	±3,11	±0,76	±0,81
IgD	0,26	0,326	0,315	0,341	0,29
	±0,11	±0, 16	±0,17	±0,19	±0,21

náhradní list

Tabulka 1	(pokračování)
sliny
IgA	3,07	11,45*	13,16	10,89*	10,1
	±0,62	±3,48	±2,98	±3,91	±3,71
IgM	0	3,17	1,65	2,89	3,07
		±1,05	±1,11	±1,49	±2,01
IgG	6,07	16,19*	15,05	15,45	13,02
	±0,79	±4,01	±4,88	±4,3	±4, 13
s IgA	12,4	26,53*	25,46*	24,3*	27,05
	±1,46	±5,23	±4,96	±5,11	±6, 12
*- Srovnání neinfikované kontrolní skupiny se skupinou
pacientek,	pre-terapie (p<0,01)
**- Srovnání skupiny	pacientek	: před a po	léčbě	(p<0,01)
Tabulka 3
Buněčné populace v krvi pacientek s HPV	inf ekc í	děložního
hrdla
	ne inf.	GMDP	placebo
	kontro ly	před	po	před	po
1eukocyty	5615	4432*	5723**	4513*	4374
	±200	±310	±304	±270	±265
lymf ocyty
%	35,4	34,11	35,77	35,01	34,8(
	±2,86	±3,16	±2,68	±2,73	±2,8
absolutní	1988	1511*	2046**	1579*	1521
	±161	±140	±153	±123	±122
CD3+ve
%	60,4	55,8	59,12	54,9	55 , 1
	±3,4	±4,1	±3,6	±3,81	±3,71
absolutní	1201	843,1*	1210**	886,8*	837,9
	±67,6	±61,9	±73,7	±60,2	±56,4
CD4+ve
%	40,3	34,6	41,8	33,7	32,0
	±3,2	±3,1	±3,8	±3,17	±2,97
absolutní	801,2	522,8*	855,2**	532,1*	486,6
	±63,6	±46,8	±75,7	±50,1	±45,2

náhradní list

CD8+ve

%	21,8 ±4,1	24.2 ±2^87	20,3 ±3,17	25,1 ±3,08	23,8 ±3,2
absolutní	433,4	365,7	415,3	402,8	361,9
	±81,6	±43,4	±64,9	±49,4	±48,7
B-buňky %	102,6	80,1	103,8	82,26	82,12
	±20,8	±12, 1	±21,7	±15,0	±16,7
CD16+ve %	12,4	16,3	13,1	15,6	16, 1
	±2,2	±2,1	±2,3	±3,1	±2,87
absolutní	246,5	246,3	268,1	246,3	244,8
	±43,4	±31,7	±47,1	±48,9	±43,6

*- Srovnání neinfikované kontrolní skupiny se skupinou pacientek, pre-terapie (p<0,01) **- Srovnání skupiny pacientek před a po léčbě (p<0,01) náhradní list

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití muramylpeptidové sloučeniny pro přípravu činidla pro léčbu prekancerozních lézí.

«'
3. Použití podle nároku 1 nebo nároku 2, kde rakovinou je rakovina epitheliáního nebo mukosálního původu.
4. Použití podle nároku 3, kde rakovinou je rakovina děložního hrdla, kolorektálnx rakovina, rakovina řiti, karcinom bazálních buněk nebo dláždicovobuněčný, melanom, d1aždicovobuněčný karcinom penisu, rakovina penisu, rakovina vulvy, rakovina orální mukozy, žaludeční rakovina, rakovina měchýře nebo esofágový d1aždicovobuněčný karcinom.
5. Použití muramylpeptidové sloučeniny pro přípravu činidla pro profylaxi rakovin kůže.
6. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde se muramylpeptidová sloučenina podává v kombinaci s chirurgií, « chemoterapií, imunoterapií nebo radiační terapií.

-
7. Použití muramylpeptidové sloučeniny pro přípravu činidla pro profylaxi rakoviny u pacientů, nesoucích endogenní markér rakoviny nebo jinak identifikovaných jako ohrožených náhradu í list rakov i nou.
8. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde muramy1peptidovou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce I kde

R¹ představuje atom vodíku nebo C1-C22acylovou skupinu;

R² představuje atom vodíku nebo C1-C2zacylovou skupinu;

R³ představuje atom vodíku nebo Ci~C6alkylovou skupinu;

R⁴ představuje Ci1-C2íalkylovou skupinu nebo Cď nebo C10 arylovou skupinu;

R⁵ představuje atom vodíku a

R představuje zbytek aminokyseliny nebo lineárního peptidu složeného ze 2 až 6 aminokyselinových zbytků, s alespoň jedním ze zbytků substituovaným lipofilní skupinou.
9. Použití podle nároku 8, kde sloučenina obecného vzorce I má jakékoliv nebo všechny nebo jakoukoliv kompatibilní kombinaci následujících substituentů

R¹ a R² jsou nezávisle Ci-Csacylové skupiny jako je acetyl;

R³ je Ci-C4alkylové skupiny jako je methyl a ethyl;

R⁴ jsou Ci-Cealkylové skupiny, výhodně Ci-C4alkylové skupiny jako je methyl nebo ethyl nebo fenylová skupina;

R představuje mono-, di- nebo tri-peptid.

náhrada í list
10. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde muramylpeptidová sloučenina je muroctasin, jinak známý jako MDP-Lys (L18) (N²-(Nacety 1 murámy1-L-alany1—D— isoglutaminyl)-N⁶-stearoylL-lys in);

MTP-PE (N-acety1-muramy1-L-alany1-D-isoglutaminy1-Lalany 1-2-(1¹ ,2'-dipalmi toyl-sn-glycero-3'-hydroxyfosfory1oxy)ethylamid, monosodný);

MDP-OBu (N-acetylmuramy1-L-alany1-D-isoglutamin-n-butyl ester);

murabut id (N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamin-aN-butyl ester); a t-MDP (N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamin).
11. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde muramylpeptidová sloučenina je sloučenina obecného vzorce II

OH

II kde

R představuje zbytek aminokyseliny nebo lineárního peptidu složeného ze 2 až 6 aminokyselinových zbytků, kde náhradni list alespoň jeden ze zbytků je popřípadě substituován lipofilní 'skupinou; a n j e 1 nebo 2 nebo její anotner.
12. Použití podle nároku 11, kde n je 1.
13. Použití podle nároku 11 nebo nároku 12, kde proximální aminokyselinový zbytek je zbytek L-aminokyseliny.
14. Použití podle nároku 13, kde proximální aminokyselinový * zbytek, nebo pouze aminokyselinový zbytek, je-li pouze jeden, je zbytek L-alaninu.
15. Použití podle kteréhokoliv z nároků 11 až 14, kde druhým aminokyselinovým zbytkem od proximálního konce peptidu, je-li přítomen, je v D-konfiguraci.
16. Použití podle nároku 15, kde uvedeným druhým aminokyselinovým zbytkem je D-glutamová nebo D-aspartová kyselina nebo její mono-, di- nebo směsný Ci2-C22(výhodně Ci-C)6alkylester, amid nebo Ci-Caalkylamid.
17. Použití podle kteréhokoliv z nároků 14 až 15, kde uvedeným druhým aminokyselinovým zbytkem je D-isoglutaminy1 nebo D-glutamyl.
18. Použití podle kteréhokoliv z nároků 11 až 17, kde třetí i aminokyselinový zbytek z proximálního konce peptidu, je-li přítomen, je v L-konfiguraci.
19. Použití podle nároku 18, kde třetím aminokyselinovým zbytkem je L-alanyl nebo L-lysyl.

náhradní list
20. Použití podle kteréhokoliv z nároku 11 až 19, kde aminokyselinový zbytk nebo lineární peptid je popřípadě subs tituován alespoň jednou lipofilní skupinou.
21. Použití podle nároku 11, kde sloučeniinou je N-acety1-glukosaminyl-N-acetyl-muramyl-L-alany1-Disoglutamin (GMDP).

►
22. Použití podle nároku 11, kde sloučeninou je * kyselina N-acetyl-glukosaminyl-N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D glutamová (GMDP-A);

N-acety1-D-glukosaminy1-(β1-4)-N-acety1muramy1-L-alanylD-glutamin-n-butylester (GMDP-OBu);

N-[Να-ace ty1-D-glukosaminy1-(β1-4)-N-acetyImuramy1-Lal any 1-D-i soglutaminyl ]-N -stearoyl-L-lysin (GMDPLys(St));

N -[N-acety1-D-glukosaminy1-(β1-4)-N-acetylmuramy1-Lalanyl- -D-glutamy1]-N -stearoyl-L-lysin (GMDPA-Lys(St));

dibenzyl ester kyseliny

N-acety1-D-glukosaminy 1-(β1 —4)-N-acety1muramy1-L-alany1D-glutamové (GMDPA(OBzl)2);

í N-acety1-D-glukosaminy1-(β1—4)-N-acety1muramy1-N-methy1L-alanyl-D-isoglutamin (Me-GMDP);

«

N-acety1-D-glukosaminy1-(β1—4)-N-acetyImuramy1-(β1—4) N-acetyl-D-glukosaminyl-(β1—4)-N-acety1muramy1—b is-(Lnáhradn í list

3 9 alanyl—D-isoglutamin) ((GMDP)2);

N-acetyl-D-glukosaminy1-(β1—4)-N-acetylmuramyl-(β1—4)N-acety1-D-g1 ukosami nyl-(β1 —4)-N-acetylmuramy1-bi s-(Lalanyl-D-glutamová kyselina) (((GMDPA)2);

N-acety1-D-glukosaminy1-(β1—4)-N-acetylmuramy1-(β1—4)N-acety1-D-glúkosaminy 1-(β1—4)-N-acetylmuramy1-bi s-(Lalanyl-D-isoglutaminyl-L-lysIn) ((GMDP Lys)2);

N-acety1-D-glúkosaminyl-(β1—4)-N-acetylmuramy1-(β1—4)N-a c e t y1-D-g1uko sam i ny1-(β1—4)-N-a c e t y1muramy1-b i s-(Lalanyl-D-isoglutaminyl-N -stearoyl-L-lysin ([GMDP-Lys(St)]2)

1-adamantylester N-acety1-D-glúkosaminyl-(β1—4)-Nacetylmuramyl-^l—4)-alany1-D-isoglutaminu (GMDP-Ad) ;

L-threonyl-N -[N-acetyl-D-glukosaminyl-(β1 — 4)-N-acetylmuramy1-L-alanyl- -D-isoglutaminyl]-L-lysyl-L-propyl-Larginin (GMDP-tuftsin E);

N-ace ty1-D-g1úkosaminyl-(β1 —4)-N-acetylmuramy1-Lalany1- -D-i soglutaminy1-L-threonyl-L-lysyl-L-propy1-1arginin (GMDP-tuftsin A);

N-acety1-D-g1ukosaminyl-(βΐ—4)-N-acetylmuramyl-L-alanylα-D-glutamy1-L-lysyl-L-threony1-N -stearoy1-L-lysyl-Lpropy 1-L-arginin (GMDPA-tuftsin lipofilní);

N -[N-acety1-D-glukosaminyl-(β1 —4)-N-acetylmuramy1-Lalanyl- -D-isoglutaminyl]-L-lysy1-L-histidyl-L-glycinamid (GMDPA-burs in);

o

OO i »£».

JUV<. Viiioá vš£) €αΜΛ Advokát ť5& 'tí “«AHA ?·, Méfccwa 2

T3

73<.

Ί>

CO

-□ o3

C3>

c·

Λ >

σ co σ>

o o

ty*

ΖΩ zn σ:

~sj

N-acetyl-D-glukosaminyl-(β1--4)-N-acetylmuramyl-L-alanylD-isoglutaminyl-L-glutamyl-L-tryptofan (GMDP-thymogen I) ;

N-acetyl-D-glukosaminyl-(β1--4)-N-acetylmuramyl-L-alanylD-isoglutaminyl-e-aminohexanoyl-L-glutamyl-L-tryptofan (GMDP-thymogen II);

N [N-acetyl-D-glukosaminyl-(β1--4)-N-acetylmuramyl-Lalanyl-D-isoglutaminyl]-N -stearoyl-L-lysyl-L-glutamyl-Ltryptofan (GMDP-thymogen III);

N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamin (Thr-MDP) nebo n-butylester N-acetylmuramyl-L-alayl-D-glutaminu (murabutid).
23. Použití podle libovolného z nároků 1 až 22, při kterém je činidlo je upraveno pro podání orálním, vaginálním, rektálním, topickým, transdermálním nebo parenterálním způsobem.
24. Kompozice, obsahující muramylpeptidovou sloučeninu a farmaceuticky přijatelnou přísadu nebo nosič, vyznačující se tím, že kompozice je upravena pro podání topickým, transdermálním, rektálním nebo vaginálním způsobem.

Λ 'Z

Zastupuje :

Dr. Miloš Všetečka

Obr. i □ IgA El IgM U IgG 9 slgA IgD normální kontroly

GMDP před

GMDP po placebo před placebo po

0 10 20 30 40 mukosální Ig koncentrace (mg/dl) * srovnání neinfikované kontrolní skupiny, pre-terapie (p<0,01) “srovnání skupiny pacientů před a po ošetření (p<0,01) ϋ

Obr. 2 □ IgA O IgM EH normální kontroly

GMDP před

GMDP po placebo před placebo po

0 500 1000 1500 2000 obsah Ig y seru (mg/dl) * srovnání neinfikované kontrolní skupiny, pre-terapie (p<0,01) “srovnání skupiny pacientů před a po ošetření (p<0,01)

Obr .3 normální kontroly j- GMDP před ' GMDP po placebo před placebo po □ CO4+ve □ CO8+ve 0 CD 16+ve Β B- buňky

0 0.5 1 1.5 2 absolutní počet buněk (buňky/1 x 10 ^-9) * srovnání neinfikované kontrolní skupiny, pre-terapie (p<0,01) “‘srovnání skupiny pacientů před a po ošetření (p<0,01)