CZ412797A3 - Vakciny živého viru PRRS s nízkou patogenitou a způsoby jejich přípravy - Google Patents
Vakciny živého viru PRRS s nízkou patogenitou a způsoby jejich přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ412797A3 CZ412797A3 CZ974127A CZ412797A CZ412797A3 CZ 412797 A3 CZ412797 A3 CZ 412797A3 CZ 974127 A CZ974127 A CZ 974127A CZ 412797 A CZ412797 A CZ 412797A CZ 412797 A3 CZ412797 A3 CZ 412797A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- aliquot
- strain
- vaccine
- virus
- eagle
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 107
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 40
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 claims description 14
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 claims description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 9
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 9
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 3
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 abstract description 14
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 abstract description 14
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 abstract 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 24
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 18
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 7
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 6
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 4
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035752 Live birth Diseases 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 244000144980 herd Species 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000001296 transplacental effect Effects 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241001050985 Disco Species 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000036830 Normal foetus Diseases 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000006399 Premature Obstetric Labor Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 230000027326 copulation Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001158 estrous effect Effects 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000010211 hemagglutination inhibition (HI) assay Methods 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 208000018773 low birth weight Diseases 0.000 description 1
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000005195 poor health Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vakciny živého viru PRRS s nízkou patogenitou a způsoby jejich přípravy
Oblast techniky
Předkládaný vynález je obecně zaměřen na živé virové vakciny s nízkou patogenitou pro podání prasatům pro navození účinné imunity u prasat proti infekci virem respiračního a reprodukčního syndromu prasat (PRRS). Přesněji, vynález se týká takových živých vakcin, spolu se způsoby imunizace prasat proti PRRS viru a metod pro přípravu takových vakcin. Nový, významně izolovaný a purifikovaný PRRS virus s nízkou patogenitou, ATCC přírůstkové č. VR2509, také tvoří část vynálezu.
Dosavadní stav techniky
PRRS se objevil v posledních několika letech jako významné virové onemocnění prasat. PRRS způsobuje vážnou poruchu reprodukce u březích sviní, která se projevuje ve formě předčasného porodu, zvýšeným počtem mrtvě narozených, mumifikovaných a selat s nízkou porodní hmotností, sníženým stupněm porodnosti a zpomaleným návratem k estru. Akutní reprodukční příznaky PRRS trvají asi 2-4 měsíce na postižených farmách, ale respirační problémy způsobené onemocněním mohou přetrvávat mnoho let, což způsobuje signifikantní ztrátu produkce. Bylo popsáno několik studií patogenese PRRS virové infekce v poslední části (75 - 95 den gestace) březích sviní/mladých prasnic. V každé studii byla demonstrována schopnost PRRS viru způsobovat transplacentární infekci a fetální patogenita. Nicméně, fetální patogenita nebyla pravidlem u sviní ve střední části gestace, a plody ve střední
části gestace infikované in utero zůstávaly většinou normální.
V polních podmínkách existují některé farmy, které nevykazují ani akutní reprodukční problémy, ani chronické respirační formy onemocnění, ale jsou serologicky pozitivní na PRRS. Příčina pro chybění klinických příznaků onemocnění v takových případech není dobře známa. Bylo naznačeno, že mohou existovat kmeny PRRS viru s nízkou patogenitou a že jsou odpovědné za infekci populace prasat, které nevykazují klinické příznaky PRRS. Různí výzkumníci popsali mnoho izolátů PRRS viru. U všech se ukázalo, že obsahují RNA a lipidy obsahující obaly, ale nemají hemaglutininovou schopnost k erytrocytům různých živočišných druhů.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález překonává problémy nastíněné výše a poskytuje zlepšenou živou nebo modifikovanou živou PRRS vakcinu pro podání prasatům. Vakciny podle předkládaného vynálezu obsahují dostatečné množství živého nebo modifikovaného živého viru pro navození účinné imunity u prasat proti virulentnímu přirozenému typu PRRS infekce. Jak se zde používá, znamená účinná imunita schopnost vakciny bránit PRRS infekci prasat, která by vedla k významným klinickým příznakům onemocnění. To znamená, že imunizovaná prasat mohou nebo nemusí být serologicky pozitivní na PRRS, ale nevykazují žádné klinické příznaky.
V preferovaných formách obsahují vakciny podle předkládaného vynálezu nový živý virus označený MN-Hs, který byl uložen v Američan Type Culture Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD, 20852, 26.7.1995, a byl označen ATCC přírůstkovým
Λ
číslem VR2509. u tohoto viru bylo ukázáno, že je v podstatě avirulentní a že navozuje účinnou imunitu. Jeho vakciny mohou být podány chovným samicím, mladým prasnicím, kancům nebo odstaveným selatům, a takové podání může být provedeno jakýmikoliv běžnými prostředky jako je intramuskulární injekce nebo orální-nasální podání. Obecně obsahují dávky vakciny od asi 104 do asi 108 plaky formujících jednotek viru.
Obecněji se vynález také týká způsobu přípravy PRRS vakcin pro prasata, který zahrnuje nejprve získání kmen nebo izolát PRRS viru, který má průměrný průměr plaku menší než asi 2 mm, plakovými klonovacími metodami v konfluentní vrstvě MARC-145 buněk, a přípravu živé vakciny z takového kmene. MASR-145 buněčná linie byla uložena v ATCC a byla označena přírůstkovým číslem ATCC_________. Výhodně se vakciny podle předkládaného vynálezu skládají v podstatě z takovéhoto viru s malým průměrem plaku, který je získán ve v podstatě čisté formě. Preferovaný virus ATCC přírůstkové č. VR2509 má takový malý průměr plaku a jak bylo ukázáno, je v postatě úplně avirulentní, a přitom navozuje imunitu.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 je fotografie ilustrující morfologii a velikost plaku izolátu PRRS viru MN-Hs (< 2 mm) na MARC-145 buněčné linii;
Obrázek 2 je fotografie ilustrující morfologii a velikost plaku izolátu PRRS viru MN-HL (3-5 mm) na MARC-145 buněčné linii; a
Obrázek 3 je fotografie ilustrující morfologii a velikost plaku izolátu PRRS viru MN-W (2-3 mm) na MARC-145 buněčné linii.
Následující příklady uvádějí preferované techniky pro izolaci, identifikaci a klonování kmene PRRS viru s nízkou patogenitou, stejně jako preferované techniky pro produkci vakcin z něho vyrobených; mělo by být jasné, že tato informace je poskytnuta pouze jako ilustrace a nikoliv jako omezení celkového rozsahu vynálezu. Uvedené odkazy jsou zde uvedeny jako odkazy.
Příklad 1
Souhrn
V tomto příkladu byla zkoumána patogenese varianty s malými plaky (MN-Hs) viru reprodukčního a respiračního syndromu prašanu březích sviní. MN-Hs kmen byl nejprve klonován z MN-H viru, který byl směsí virů s malými a s velkými (MN-H) plaky. V prvním pokusu pro srovnání fetální patogenity byly 2 březí svině každá v den 86 gestace inokulovány intranasálně MN-Hs, MN-H1, polním izolátem (MN-W) a buněčným kultivačním mediem (kontrolou), v příslušném pořadí. Všem sviním bylo umožněno porodit v jejich termínech kromě kontrolních sviní. Infikované svině byly viremické v den 7 po inokulaci (PI) a serokonvertovaly v den 14 PI podle testu s nepřímou fluorescentní protilátkou (IFA). Dvě svině infikované MN-Hs virem porodily 14 živých a 5 mrtvých selat, zatímco 2 svině infikované MN-H1 virem porodily 0 živých a 25 mrtvých selat. Dvě svině inokulované MN-W porodily 10 živých a 20 mrtvých selat. Dvě kontrolní svině měly 16 normálních plodů při porážce v den 107 gestace. Virus byl «··· tH izolován od 16 (66,7 %) ze 24 mrtvě narozených, 9 (64,3 %) ze 14 mrtvě narozených a 3 (12,0%) ze 25 mumifikovaných selat od 6 infikovaných sviní. 6 ze 13 sér od mrtvě narozených selat od 4 MN-H1 nebo MN-W infikovaných sviní mělo titry protilátky proti PRRS viru v rozmezí od 1:16 do 1:1,024 podle IFA metody.
V dalším pokusu pro opakování výsledků s MN-Hs virem byly 2 březí svině každá v den 86 gestace inokulovány intranasálně MN-Hs, intramuskulárně MN-Hs, resp. intranasálně jiným polním izolátem (OVL-173), a bylo jim umožněno porodit v termínu. Dvě svině infikované intranasálně a intramuskulárně MN-Hs virem porodily 15 živých a 6 mrtvých selat, resp. 25 živých a 5 mrtvých selat, zatímco 2 svině infikované OVL-173 porodily 6 živých a 24 mrtvých selat. Tyto výsledky naznačují, že patogenita PRRS viru pro plody sviní se liší mezi izoláty viru, a MN-Hs kmen PRRS viru je málo patogení virus. Detekce PRRS virových protilátek v séru mrtvě narozených selat byla shledána jako užitečná metoda pro diagnostiku fetální infekce.
Materiály a metody
Virus a buněčná kultura - v této studii byly použity tři různé izoláty PRRS viru. Izolát MN-H byl odvozen od séra zdravých odchovných prasat na farmě se subklinickými příznaky PRRS. MN-H virus byl nejprve směsí virových populací s různou velikostí plaků. Viry s malými (MN-Hs) a velkými (MN-H1) plaky byly separátně klonovány z MN-H viru a každý virus byl plakově purifikován čtyřikrát pro první pokus a ještě šestkrát pro pro další pokus za použití metody klonování plaků podle Him et al., Am. J. Vet. Res., 52: 1649 - 1652 (1991). V každé takové plakové pasáži byly konfluentní MARC-145 (permisivní klon odvozený od ledvinné buněčné linie afrických zelených opic (MA-104)) buněčné
monovrstvy kultivovány v 60 mm x 15 mm Petriho miskách (buňky byly udržovány v Eaglově minimálním esenciálním mediu (MEM) doplněném 3 % fetálního telecího séra (FCS), 0,15 % uhličitanu sodného a antibiotiky (Kim et al., Arch. Virol. 133: 477 - 483 (1993)) a byly inokulovány příslušným virem. Kultury byly inkubovány při 37 °C po 60 minut, potom bylo inokulum odstraněno a kultury byly jedenkráte promyty MEM. Potom byl 5 ml alikvot kapalného kultivačního media přidán do každé z misek, skládajících se ze stejného objemu 2xMEM a 1,6% převařeného Noble agaru (Disco Laboratories) doplněného 50 μg diethylaminoethyl (DEAE)-dextranu/ml. Plotny byly dále inkubovány při 37 °C po 5 dní v CO2 inkubátoru. Na konci inkubace byly plakové kultury vizualizovány přidáním 3 ml PBS doplněného 1 % neutrální červeně. Selektované plaky byly klonovány seškrábnutím sterilní Pasteurovou pipetou a byly pasážovány inokulací na neinfikované MARC-145 buněčné monovrstvy. Pro permanentní barvení byl agar pečlivě odstraněn a buněčná monovrstva byla barvena 2 ml 1% krystalické violeti ve 20% ethanolu po 10 minut. Plotny byly potom opláchnuty vodou pro usnadnění vyšetření plaků.
PRRS virus MN-W byl izolován ze séra nemocných sviní z farmy s typickými příznaky PRRS a OVL-173 byl získán z Oxford Veterinary Laboratories, Worthington, MN.
Zvířata a vývoj pokusu. Březí svině okolo dne 80 gestace byly zakoupeny od farmy, která neměla v minulosti žádné známky infekce PRRS virem. Svině byly na farmě vakcinovány dvakrát ročně proti prasečímu parvoviru (PPV) a Leptospira spp. Byla získána přesná chovná data o každé svini. Po zakoupení byla každá svině umístěna odděleně v izolované místnosti na
University of Minnesota. V den 86 gestace byly dvě svině inokulovány intranasálně MN-Hs, MN-H1, resp.a MN-W virem (2 ml, 105·0 ” 5,5 TCID50/ml). Zbývající dvě svině byly inokulovány buněčným kultivačním mediem a sloužily jako kontroly. Vzorky séra od každé svině byly odebrány v intervalech pro izolaci viru a sérologii. Šesti infikovaným sviním byl umožněn přirozený porod, a dvě kontrolní svině byly poraženy v den 107 gestace pro vyšetření plodů. Při porodu byly od živých a mrtvě narozených selat odebrány vzorky krve a plic a od mumifikovaných plodů byla odebrána hrudní tekutina pro izolaci viru a pro sérologii. Ve druhém pokusu byl MN-Hs virus plakově purifikován ještě šestkrát před inokulací. Dvě březí svině každá v den 86 gestace byly inokulovány intranasálně MN-Hs, intramuskulárně MN-Hs a intranasálně jiným polním izolátem (OVL-173) a všem sviním byl umožněn porod v termínu. Při porodu byly měřeny délky temeno
- zadek mumifikovaných nebo mrtvě narozených plodů pro hodnocení doby úmrtí (Marrable et al., J. Agric. Sci., 69: 443 - 447 (1967)). Byly odebrány vzorky krve a plic a byly analyzovány, jak je popsáno v prvním pokusu.
Izolace viru a sérologie. Pro izolaci viru byl každý vzorek séra nebo supernatant plicního homegenátu umístěn na 24 jamkovou plotnu a byly přidány MARC-145 buňky (1 - 2 x 105 buněk/ml) suspendované v MEM doplněném 3 % FCS. Na kulturách byl po dobu 5 až 7 dní pozorován cytopatický účinek (CPE) typický pro PRRS virus. Plotny byly dvakrát zmraženy a rozmraženy a supernatant byl inokulován do jamek 96 jamkové mikroplotny s čerstvou suspensí MARC-145 buněk a byly inkubován po 3 až 4 dny. Virová infekce byla vyšetřována pozorováním jak CPE, tak specifické fluorescence za použití PRRS virus pozitivního referenčního séra.
..?♦< —Λ • ·· • «· » ·'·
Λ»*· ·
Λ—
Λ ··· • · · ·· » ·9
9»«9
Séra od sviní a prasat byla testována na protilátky za použití metody nepřímé fluorescentní protilátky (IFA) (Yoon et al., J. Vet. Diag. Invest., 4: 144 - 147 (1992)). 96 jamkové testovací plotny byly připraveny za použití MARC-145 buněčné linie. Některá séra byla testována na protilátky k PPv testem inhibice hemaglutinace (Hl) jak bylo popsáno dříve (Joo et al., Aust. Vet. J., 52: 422 - 424 (1976)).
Výsledky
Izoláty PRRS viru ukazovaly plaků při počáteční izolaci různou velikost. MN-H izolát byl klonován do dvou různých populací MN-Hs a MN-H1 podle velikosti jejich plaků. Po klonování měly plaky MN-Hs a MN-H1 průměr < 2 mm, resp. 3 až 5 mm, zatímco velikost plaků pro MN-W byla 2 až 3 mm (viz obrázky).
U sviní po infekci izoláty PRRS viru nebyly pozorovány žádné významné klinické příznaky kromě mírné anorexie detekované u sviní 112 a 153 5 dní po inokulaci (PI). Virus byl izolován ze vzorků séra od šesti ze šesti sviní sedm dní PI a od jedné ze šesti sviní 14 dní PI. Vysoké titry prtilátek byly detekovány u všech inokulovaných sviní 14 dní PI, jak je ukázáno v tabulce 1.
Tabulka 1: Viremie a protilátková odpověď u 86 denních březích sviní po pokusné infekci izoláty PRRS viru
i ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 | Dny po inokulaci | 1________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________:___________________:_______________________________________________________________________________________ _ . 1 | |||||
|svině 1 č. I | Infikovaný virus | 0 7 | 14 | 21 | 1 1 28 | i |
1 117 | MN-Hs | -/-a +/- | -/1,024 | -/1,024 | -/256 | |
|53 1 | MN-Hs | -/- +Λ | -/1,024 | -/1,024 | -/1,024 | 1 |
Tabulka 2: Výsledky porodů a izolace viru od sviní v 86 dnu gestace infikovaných různými izoláty PRRS viru
Svině Plody
«. Dny Virus/způsob Celkem LB SB M Cr rozsah Izolace vin.
délky
Experiment I
17 | 115 | MN-Hs/IN | 9 | 6 | 0 | 3 | 27-32 | 6/9 |
53 | 113 | MN-Hs/IN | 10 | 8 | 1 | 1 | 25-38 | 6/10 |
153 | 114 | MN-Hl/IN | 13 | 0 | 2 | 11 | 24-32 | 2/11 |
147 | 112 | MN-Hl/IN | 12 | 0 | 4 | 8 | 18-30 | 3/7 |
68 | 112 | MN-W/IN | 15 | 8 | 3 | 4 | 25-28 | 5/15 |
112 | 118 | MN-W/IN | 15 | 2 | 4· | 9 | 24-31 | 6/11 |
124 | 107d | Control | 14 | 14 | - | - | ND | 0/14 |
95 | 107d | Control | 12 | 12 | - | - | ND | 0/12 |
Experiment II. | ||||||||
155 | 115 | MN-Hs/IN | 11 | 7 | 3 | 1 | 28-35 | 8/11 |
49 | 114 | MN-Hs/IN | 10 | 8 | 2 | 0 | 34-37 | 9/10 |
176 | 112 | MN-Hs/IM | 15 | 12 | 2 | 1 | 15-36 | 3/15 |
110 | 113 | MN-Hs/IM | 15 | 13 | 2 | 0 | 32-34 | 2/1 5 y- |
800 | 108 | OVL-173/IN | 12 | 1 | 9 | 2 | 27-28 | 1/12 |
44 | 108 | OVL-173/IN | 18 | 5 | 10 | 3 | 26-29 | 10/18 |
a den gestace při porodu nebo porážce 30 délka týl-zadek (cm) mumif ikovaných nebo mrtvě narozených plodů c počet vzoků s izolovaným virem/počet testovaných vzorků
• · · svině byly poraženy v den 107 gestace pro vyšetření plodů LD = živě narozené, SB = mrtvě narozené, M = mumifikované, IM = intramuskulárně, ND = neurčeno.
Virus byl izolován od jednoho nebo od více plodů z každého vrhu infikovaných sviní.Výsledky izolace viru od jednotlivých prasat ze šesti infikovaných sviní v pokusu 1 ukazují, že přibližně polovina vyšetřených plodů (28 ze 63 prasat) byla pozitivní na izolaci viru. Mezi prasaty testovanými na přítomnost viru bylo 16 (66,7%) ze 24 živě narozených prasat, 9 (64,3%) ze 14 mrtvě narozených prasat a 3 (12,0%) ze 25 mumifikovaných prasat pozitivní na virus. Ze 28 prasat pozitivních na virus ve vzorku séra bylo 10 prasat negativních na virus ve vzorcích plic testovaných na izolaci viru.
Séra od mrtvě narozených prasat od sviní 153, 147, 68 a 112 byla testována na protilátky proti PRRS viru IFA a na PPV Hl a výsledky jsou ukázány v tabulce 3. Šest ze 13 sér od mrtvě narozených prasat a 2 ze 25 hrudních tekutin od mumifikovaných prasat mělo protilátky proti PRRS viru. IFA titry byly v rozsahu od 1:16 - 1:1,024, zatímco žádné sérum nemělo protilátky k PPV. Třináct ze 14 živě narozených prasat od sviní 17 a 53 mělo protilátky jak k PRRS viru (IFA titry 1:64 - 1:1,024) tak PPV (Hl titry 1:512 - 1:16384).
· · 9 · 0 * * φ Í+--++·-;·™ *<♦ φ ♦ Φ 9 9 99 • · · · 4 ♦ · Φ φ Φ Φ · «»*·»· ,·φφ
999 9 9 9 · * ·« · · * ··
Tabulka 3: Detekce protilátek proti PRRS viru a PPV v séru mrtvě narozených prasat od sviní infikovaných PRRS virem.
Svině č. | Infikovaný virus | Anamnesa vrhu | Testované plody | PRRSV IFA | PPV hl |
153 | MN-H1 | OLB, 2SB, | SB (32)a | <4b | <8b |
11 M | |||||
SB (27) | 256 | <8 | |||
147 | MN-H1 | OLB, 4SB, | SB (30) | <4 | <8 |
8M | |||||
SB (30) | '1,024 | <8 | |||
SB (29) | <4 | <8 | |||
SB (28) | <4 | <8 | |||
68 | MN-W | 8LB, 3SB, | SB (27) | <4 | <8 |
4M | |||||
SB (25) | 16 | <8 | |||
Sb (28) | <4 | <8 | |||
112 | MN-W | 2LB, 4SB, | SB (31) | <4 | <8 |
9M | |||||
SB (29) | 256 | <8 | |||
SB (26) | 256 | <8 | |||
SB (24) | 16 | NT |
a délka týl-zadek (cm) b Reciprocity IFA nebo HL titru cLB-živě narozené; SB-mrtvě narozené; M-mumifikace
Diskuse
Předkládaná studie potvrdila schopnost různých izolátů PRRS virů způsobovat transplacentární infekci a patogenní účinky na plody sviní v pozdní fázi gestace. Nicméně, byl zde závažný rozdíl v patogenitě mezi izoláty PRRS viru. Když byly vícekrát rodivší svině inokulovány transnasálně PRRS virem ATCC-VR 2332 v den 93 gestace (Christianson, W. T. et al., Can. J. Vet. Res., 57: 262 - 268 (1993)), potom porodily průměrně 5,8 živých selat a 6 mrtvých plodů na vrh. V předkládané studii bylo 6 sviní infikovaných MH-H1 nebo 2 polními viry porodilo 2,7 živých a 11,5 mrtvých selat na vrh, a proto jsou tyto viry považovány za vysoce virulentní. Patogenita mezi ATCC-VR 2332 a virulentními viry použitými v této studii byla odlišná. Toto může být způsobeno trváním gestace v době infekce, protože ATCC VR-2332 byl infikován o sedm dní později. 6 sviní infikovaných MN-Hs porodilo průměrně 9,0 živých a 2,7 mrtvých selat na vrh. Tyto výsledky jsou jasně odlišné od výsledků získaných pro virulentní virus což naznačuje, že MN-Hs virus je mírně patogenní kmen.
Je zajímavé, že vážné rozdíly byly pozorovány v porodech od sviní infikovaných MN-Hs a MN-H1 viry, které byly stejného původu. Za stejných podmínek způsobil virus MN.Hs, resp. MN.H1 5, resp. 25 mrtvě narozených selat (p<0,005). Podle presentovaných výsledků může být usouzeno, že patogenita MN-Hs a MN-H1 je signifikantně odlišná, kdy jeden je slabě a druhý vysoce patogenní virus.
Izolace viru z vrhů infikovaných PRRS virem byla relativně snadná a virus byl izolován v podobném poměru od živých a mrtvých selat. Protože virus nemohl být získán od všech selat v
infikovaném vrhu, měla by být izolace viru pro diagnostické účely provedena od alespoň 2 nebo více selat na vrh. Dále bylo zjištěno, že izolace viru se lépe provádí ze séra než ze vzorků plicní tkáně.
Ve vrzích od sviní infikovaných virulentním virem mělo jedno nebo více mrtvě narozených selat detekovatelné protilátky specifické pro PRRS virus. Tyto výsledky naznačují, že detekce protilátek od mrtvě narozených nebo selat před kojením může být užitečnou metodou pro diagnostiku PRRS infekce v abnormálních vrzích. Tato metoda bude výhodná v laboratořích, ve kterých nejsou prostředky a techniky pro izolaci viru dosupné. V předkládané studii, 6 ze 13 mrtvě narozených selat mělo pozitivní titry protilátek proti PRRS viru, ale ne proti PPV, což potvrzuje, že detekované protilátky jsou fetálního původu a že jsou způsobeny PRRS virem.
Není známo, proč se u některých stád infikovaných PRRS virem nevyvinou klinické příznaky. Bylo ukázáno, že stáda s dobrým zdravotním stavem před infekcí PRRS vykazují mírnější klinickou odpověď ve srovnání s těmi, která mají horší zdravotní stav. Panující zdravotní stav, spolu s rozdíly v kmenech demonstrovanými v této studii, jsou možným vysvětlením pro jasné rozdíly v klinické presentaci. Kromě toho je možno předpokládat, že u hostitele se mohou vyskytovat interakce mezi viry s malými a velkými plaky a že mohou modifikovat patogenitu. Tak tomu může být, pokud bereme v úvahu, že zde postrádáme reprodukční problémy na farmě, kde byl izolován MN-H izolát viru, i když byl vysoce patogení PRRS viru MN-H1 na farmě přítomen.
* · · • « ♦ · ♦ • · 9 • 9 9 · 9 9'
9 9 9
9 99 « · 9 9 9 9
9 9
99
Příklad 2
Preferované vakciny podle předkládaného vynálezu mohou být podány chovným mladým prasnicím, sviním, kancům nebo odstaveným selatům. Podání může být intramuskulární nebo orálně nasální a může být podáno v jakoukoliv dobu. Nicméně pro chovné samice jsou vakcinace preferovány před kopulací pro ochranu po celou dobu březosti a pro selata těsně před odstavením pro ochranu během pozdějšího odchovu a chovu až do finálního stadia.
Obecně jsou vakciny podle vynálezu podány ve 2 ml dávkách, které obsahují od asi 104 do 108 plaky formujících jednotek (PFU) a lépe okolo 106 PFU. Imunita bude v případě chovných samic přetrvávat alespoň jednu dobu březosti, zatímco vakcinace po odstavení selat bude zprostředkovávat imunitu až do porážky. Preferované vakciny podle předkládaného vynálezu mohou poskytovat široký rozsah zkřížené ochrany.
Vakciny podle předkládaného vynálezu mohou indukovat živé nebo modifikované živé (atenuované) viry, stejně jako konvenční nosiče, stabilizátory a/nebo adjuvans.
Příklad 3
Úvod
V tomto příkladu byla vyšetřována schopnost vakciny složené z MN-Hs kmene severoamerického PRRSV chránit 3-týdenní selata před viremií způsobenou infecí virulentním kmenem MN-H1 severoamerického PRRSV. Respirační onemocnění související s infekcí severoamerickým PRRSV je primárně způsobeno infekcí
φ e ·
sekundárními patogeny přítomnými na prasečích farmách. Nicméně, za pokusných podmínek, respirační klinické příznaky u prasat infikovaných severoamerickým PRRSV nejsou konsistentně reprodukovány vzhledem k absenci těchto sekundárních patogenů. Proto je detekce viremie nej lepším ukazatelem infekce severoamerickým PRRSV. Absence viremie po infekci MN-H1 kmenem ukazuje, že selata vakcinovaná MN-Hs kmenem jsou imunní k infekci MN-H1 kmenem.
Materiál a metody
Dvacet 3 týdeních selat bylo zakoupeno od farmy bez PRRS infekce. Dvanáct z těchto selat bylo vakcinováno intranasálně MN-Hs kmenem (2 ml, 104·Ξ TCIDso/ml) a zbylých 8 selat sloužilo jako kontroly. Vakcinovaná a kontrolní selata byla umístěna v oddělených místnostech izolační jednotky. Šest vakcinovaných selat (selata č. 81 - 86) a 4 kontrolní selata (selata č. 93 96) byla infikována intranasálně MN-H1 kmenem (2 ml, 104'5 TCIDso/ml) 2 týdny po vakcinaci (skupina 1). Zbylých 6 vakcinovaných selat (selata č. 87 - 92) a 4 kontrolní selata (selata č. 97 - 100) byla infikována stejně 6 týdnů po vakcinaci (skupina 2). U všech selat byly denně pozorovány klinické příznaky. Kromě toho, jednou týdně byly odebírány vzorky krve od každého selete na (1) izolaci viru za použití MARC-145 buněčné kultury (Yoon et al., J. Vet. Diag. Invest, 6: 289 - 292 (1994)) a (2) určení titrů sérových neutralizačních (SN) protilátek (Park et al., Am. J. Vet. Res., 57: 320 - 323 (1996)); detekce SN protilátek u vakcinovaných selat ukazovala protektivní imunitu proti virulentnímu severoamerickému PRRSV.
• · ♦ * ♦ φ · ♦ ···♦ ««
• | Φ | 9 | • Φ | ΦΦ |
Φ | « | • | ♦ Φ Φ Φ | Φ- 9 |
• | • | Φ | • | 9 9 |
• 9 | ·· · | ·· | 9 9 |
Výsledky
Po vakcinaci byl vakcinační virus izolován od selat ve skupině 1 a 2 více než 3 týdny po vakcinaci. Po infekci nebyly klinické příznaky pozorovány u žádného z kontrolních a vakcinovaných selat ve skupině 1 a 2.
Skupina 1. SN protilátka nebyla detekována u žádného selete v době infekce. Po infekci byl infekční virus získán jak od vakcinovaných, tak od kontrolních selat. Dále, jak u vakcinovaných, tak u kontrolních selat se vyvinula viremie (tabulka 1).
Skupina 2. Vakcinovaná selata produkovala SN protilátky od 3 týdne po vakcinaci a titry byly mezi 1:2 a 1:8 v době infekce. Po infekci nebyl od vakcinovaných selat infekční virus izolován, zatímco u kontrolních selat se vyvinula viremie (Tabulka 4). Tyto výsledky ukazují, že vakcinovaná selata mají získanou ochrannou imunitu proti virulentnímu severoamerickému PRRSV.
Tabulka 4. Detekce viremie a SN protilátky u 3 týčeních selat vakcinovaných a infikovaných 2 nebo 6 týdnů po vakcinaci
Prase č. | Týden 0 | po 1 | vakcinaci | 4 | 5 | 6a | 7 | 8 | |
2a | 3 | ||||||||
skupina 1 | |||||||||
81V | -/-b | -/- | -/- | -/- | -/2 | ||||
82V | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- | ||||
83V | -/- | -/- | +/- | +/- | +/2 | ||||
84V | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | ||||
85V | -/- | -/- | +/- | +/- | +/4 | ||||
86V | -/- | -/- | +/- | +/- | -/4 | ||||
93C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- | ||||
94C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/8 | ||||
95C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/4 | ||||
96C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- | ||||
Skupina 2 | |||||||||
87V | -/- | -/- | -/- | . +/ + | -/- | -/2 | -/2 | -/8 | -/8 |
88V | -/- | -/- | +/- | -/- | -/- | -/4 | -/4 | -/64 | -/128 |
89V | -/- | -/- | +/- | -/- | -/2 | -/8 | -/8 | -/8 | -/32 |
90V | -/- | -/- | +/ - | +/- | -/4 | -/8 | -/8 | -/128 | -/64 |
91V | -/- | -/- | +/- | -/2 | -/2 | -/8 | -/4 | -/32 | -/64 |
92V | -/- | -/- | -/- | -/4 | -/2 | -/4 | -/4 | -/128 | |
97C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- |
98C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | + /- | +/- |
99C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- |
100C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | -/2 |
V = vakcinované; C = kontrola a = infikované MN-H1 virem b = izolace viru/titr SN protilátek
Selata ve skupině 1, resp. 2 byla usmrcena 4, resp. 8 týdnů po vakcinaci.
Claims (19)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Vakcina zahrnující virus mající označení ATCC VR2509.
- 2. Vakcina podle nároku 1, kde virus je živý.
- 3. Vakcina podle nároku 1, do 108 PFU.kde dávka vakciny obsahuje od 104
- 4. Způsob imunizace prasat proti severoamerickému reprodukčnímu a respiračnímu syndromu tv y z podle načující se nároku 1 prasatům.m, že prasat zahrnuje podání vakciny
- 5.žeZpůsob podle nároku 4 virus je živý.m, že v prasetem je dospělá chovná
- 6. Způsob podle nároku 4 y svině.m, že
- 7. Způsob podle nároku 4 v prasetem je sele.m, že
- 8. Způsob podle nároku 4 v vakcina je podána intramuskulárně, cintranasálně s nebo m, t orálně.
- 9. Způsob přípravy vakciny vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:(A) získání kmene severoamerického PRRSV klonováním plaku; a φφ φφ (Β) přípravu vakciny ze kmene získaného v kroku (A), kde kmen dává plaky mající průměrný průměr menší než 2 mm, pokud jsou plaky získány způsobem zahrnujícím kroky:(a) inokulace alikvotu buněk s kmenem, kde buňky mají označení CRL 12219, kde alikvot je získán z konfluentní monovrstvy buněk kultivovaných v Eaglově minimálním esenciálním mediu doplněném3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného, přičemž alikvot obsahuje 1 až 2 x 105 buněk na ml Eaglova minimálního esenciálního media doplněného 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného;(b) inkubace alikvotu při 37 °C po 60 minut;(c) odstranění inokula z alikvotu;(d) promytí alikvotu Eaglovým minimálním esenciálním mediem;(e) resuspendování alikvotu v 5 ml 2x Eaglova minimálního esenciálního media a 1,6% převařeného Noble agaru doplněného 250 μg diethylaminoethyl(DEAE)-dextranu;(f) plotnování alikvotu; a (g) další inkubování alikvotu při 37 θϋ po 5 dní v CO2 inkubátoru pro vznik plaků.
- 10. Způsob podle nároku 9vyznačující se tím, že vakcina zahrnuje živý kmen severoamerického PRRSV.
- 11. Způsob podle nároku 9vyznačujicí se tím, i« « • * ♦ · · ··«· ·· • · ·· ··* · • · ·· ·· že způsob přípravy vakciny zahrnuje purifikované formě.krok získání kmene v
- 12. Způsob podle nároku 9 v y z n že kmen má označení ATCC VR2509.ačující se t í m,
- 13. Vakcina zahrnující kmen severoamerického PRRSV, kde dává plaky mající průměrný průměr menší než 2 mm, pokud jsou plaky získány způsobem zahrnujícím kroky:kmen (a) inokulace alikvotu buněk s kmenem, kde buňky mají označení CRL 12219, kde alikvot je získán z konfluentní monovrstvy buněk kultivovaných v Eaglově minimálním esenciálním mediu doplněném 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného, přičemž alikvot obsahuje 1 až 2 x 105 buněk na ml Eaglova minimálního esenciálního media doplněného 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného;(b) inkubace alikvotu při 37 °C po 60 minut;(c) odstranění inokula z alikvotu;(d) promytí alikvotu Eaglovým minimálním esenciálním mediem;(e) esenciálního media a 1,6% převařeného Noble agaru doplněného 250 μg diethylaminoethyl(DEAE)-dextranu;resuspendování alikvotu v 5 ml 2x Eaglova minimálního (f) plotnování alikvotu; a (g) další inkubování alikvotu při 37 °C po 5 dní v C02 inkubátoru pro vznik plaků.
- 14. Vakcina podle nároku 13, kde vakcina obsahuje živý kmen severoamerického PRRSV.
- 15. Vakcina podle nároku 13, kde kmen má označení ATCC VR2509.
- 16. Izolovaný a purifikovaný kmen severoamerického PRRSV, kde kmen má označení ATCC VR 2509.
- 17. Kmen podle nároku 16, kde kmen je živý.
- 18. Izolovaný a purifikovaný kmen severoamerického PRRSV, kde kmen dává plaky mající průměrný průměr menší než 2 mm, pokud jsou plaky získány způsobem zahrnujícím kroky:(a) inokulace alikvotu buněk s kmenem, kde buňky mají označení CRL 12219, kde alikvot je získán z konfluentní monovrstvy buněk kultivovaných v Eaglově minimálním esenciálním mediu doplněném3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného, přičemž alikvot obsahuje 1 až 2 x 105 buněk na ml Eaglova minimálního esenciálního media doplněného 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného;(b) inkubace alikvotu při 37 °C po 60 minut;(c) odstranění inokula z alikvotu;(d) promytí alikvotu Eaglovým minimálním esenciálním mediem;(e) resuspendování alikvotu v 5 ml 2x Eaglova minimálního . 4-4.....-4-441-4-----------··♦----· 4 '4 ’ 4'· • 4 444»4444 4 4 44 »444 4444---4-----------44’4» «· —4- »444 4 44»4 4 »4» 4·4 · 4·444 44»4 esenciálního media a 1/6% převařeného Noble agaru doplněného 250 μg diethylaminoethy1(DEAE)-dextranu;(f) plotnování alikvotu; a (g) další inkubování alikvotu při 37 °C po 5 dní v C02 inkubátoru pro vznik plaků.
- 19. Kmen podle nároku 18, kde kmen je živý.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/493,265 US5690940A (en) | 1995-06-21 | 1995-06-21 | Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ412797A3 true CZ412797A3 (cs) | 1998-05-13 |
CZ291611B6 CZ291611B6 (cs) | 2003-04-16 |
Family
ID=23959539
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19974127A CZ291611B6 (cs) | 1995-06-21 | 1996-06-19 | Vakcína pro léčení severoamerického reprodukčního a respiračního syndromu prasat, způsob její přípravy a nový kmen viru |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5690940A (cs) |
EP (1) | EP0833661B1 (cs) |
JP (1) | JP4709094B2 (cs) |
KR (1) | KR100444809B1 (cs) |
CN (1) | CN1126569C (cs) |
AT (1) | ATE215384T1 (cs) |
AU (1) | AU703084B2 (cs) |
BR (1) | BR9608648A (cs) |
CA (1) | CA2225388C (cs) |
CZ (1) | CZ291611B6 (cs) |
DE (1) | DE69620402T2 (cs) |
DK (1) | DK0833661T3 (cs) |
ES (1) | ES2173300T3 (cs) |
HK (1) | HK1016870A1 (cs) |
HU (1) | HU227754B1 (cs) |
PL (1) | PL184231B1 (cs) |
PT (1) | PT833661E (cs) |
RU (1) | RU2192887C2 (cs) |
SK (1) | SK281024B6 (cs) |
UA (1) | UA47433C2 (cs) |
WO (1) | WO1997000696A1 (cs) |
Families Citing this family (54)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0587780B2 (en) * | 1991-06-06 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
SK119498A3 (en) * | 1996-03-01 | 1999-07-12 | Schering Corp | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
EP0839912A1 (en) * | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
US20040224327A1 (en) * | 1996-10-30 | 2004-11-11 | Meulenberg Johanna Jacoba Maria | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
WO2000053787A1 (en) * | 1999-03-08 | 2000-09-14 | Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Dierg Ezondheid B.V. | Prrsv vaccines |
AU754938B2 (en) | 1997-05-06 | 2002-11-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRSV antigenic sites identifying peptide sequences of PRRS virus for use in vaccines or diagnostic assays |
DK1183332T3 (da) * | 1999-04-22 | 2010-09-06 | Us Agriculture | Porcint Reproduktions- og Respirations Syndrom-vaccine baseret på isolere JA-142 |
SG83740A1 (en) * | 1999-08-10 | 2001-10-16 | Inst Of Molecular Agrobiology | An attenuated porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain and methods of use |
BRPI0510928A (pt) * | 2004-06-18 | 2007-11-13 | Univ Minnesota | identificação de organismos viralmente infectados e vacinados |
US7632636B2 (en) * | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
UA95778C2 (ru) | 2005-06-24 | 2011-09-12 | Риджентс Оф Зе Юниверсити Оф Миннесота | Вирусы репродуктивно-респираторного синдрома свиней, их инфекционные клоны и мутанты и способы применения |
US7241582B2 (en) * | 2005-07-05 | 2007-07-10 | Mj Biologics, Inc. | Diagnostic test kits |
CN101848995A (zh) * | 2007-06-25 | 2010-09-29 | 南达科他州立大学 | 重组的北美1型猪繁殖与呼吸综合征病毒及使用方法 |
UA106475C2 (uk) * | 2008-08-25 | 2014-09-10 | Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Спосіб вакцинації свині проти високопатогенного репродуктивно-респіраторного синдрому свиней (hp prrs) |
US8725420B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-13 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US8545855B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-01 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US8603495B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-12-10 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for biological remodeling with frozen particle compositions |
US8793075B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-07-29 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US8545857B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-01 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for administering compartmentalized frozen particles |
US9060926B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-23 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US8762067B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-06-24 | The Invention Science Fund I, Llc | Methods and systems for ablation or abrasion with frozen particles and comparing tissue surface ablation or abrasion data to clinical outcome data |
US9072799B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-07-07 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US9050070B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US20100111835A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US8731841B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-20 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US8551505B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-08 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US8731840B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-20 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US8409376B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-04-02 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US8721583B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-13 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US9060934B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-23 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US9072688B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-07-07 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US20100111857A1 (en) | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Boyden Edward S | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
US9060931B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-23 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for delivery of frozen particle adhesives |
US8256233B2 (en) * | 2008-10-31 | 2012-09-04 | The Invention Science Fund I, Llc | Systems, devices, and methods for making or administering frozen particles |
US8788212B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-07-22 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for biological remodeling with frozen particle compositions |
US8784385B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-07-22 | The Invention Science Fund I, Llc | Frozen piercing implements and methods for piercing a substrate |
US9050317B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
US9050251B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for delivery of frozen particle adhesives |
US8788211B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-07-22 | The Invention Science Fund I, Llc | Method and system for comparing tissue ablation or abrasion data to data related to administration of a frozen particle composition |
US8551506B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-08 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for administering compartmentalized frozen particles |
TWI627281B (zh) * | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低pcv-2組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之pcv-2組合物 |
US8492454B2 (en) * | 2009-10-05 | 2013-07-23 | Creative Nail Design, Inc. | Removable color layer for artificial nail coatings and methods therefore |
US8541482B2 (en) * | 2009-10-05 | 2013-09-24 | Creative Nail Design, Inc. | Removable multilayer nail coating system and methods therefore |
US8263677B2 (en) | 2009-09-08 | 2012-09-11 | Creative Nail Design, Inc. | Removable color gel basecoat for artificial nail coatings and methods therefore |
WO2012110490A1 (en) | 2011-02-17 | 2012-08-23 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Commercial scale process for production of prrsv |
MY186535A (en) | 2011-02-17 | 2021-07-26 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Novel european prrsv strain |
WO2012121704A1 (en) | 2011-03-07 | 2012-09-13 | Creative Nail Design, Inc. | Compositions and methods for uv-curable cosmetic nail coatings |
KR101281361B1 (ko) | 2011-07-18 | 2013-07-02 | 서울대학교산학협력단 | 북미형 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 예방 백신 조성물 및 이를 포함하는 혼합백신 조성물 |
US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
US9315781B2 (en) | 2011-07-29 | 2016-04-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Infectious CDNA clone of european PRRS virus and uses thereof |
MX366051B (es) | 2012-12-07 | 2019-06-26 | Univ Illinois | Composiciones del virus del síndrome reproductor y respiratorio de porcino y sus usos. |
EP2968513A2 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
US10279031B2 (en) | 2016-05-11 | 2019-05-07 | Phibro Animal Health Corporation | Composition comprising antigens and a mucosal adjuvant and a method for using |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07501049A (ja) * | 1991-10-14 | 1995-02-02 | アクゾ・ノベル・エヌ・ベー | ブタ生殖・呼吸系症候群ワクチン及び診断方法 |
US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
ES2152304T3 (es) * | 1993-02-08 | 2001-02-01 | Bayer Ag | Procedimiento para el crecimiento del virus del sindrome reproductivo y respiratorio porcino y su uso en vacunas. |
-
1995
- 1995-06-21 US US08/493,265 patent/US5690940A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-06-19 BR BR9608648-3A patent/BR9608648A/pt active Search and Examination
- 1996-06-19 KR KR1019970709317A patent/KR100444809B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 UA UA98010280A patent/UA47433C2/uk unknown
- 1996-06-19 ES ES96922508T patent/ES2173300T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-19 DK DK96922508T patent/DK0833661T3/da active
- 1996-06-19 EP EP96922508A patent/EP0833661B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-19 PT PT96922508T patent/PT833661E/pt unknown
- 1996-06-19 HU HU9903169A patent/HU227754B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 DE DE69620402T patent/DE69620402T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-19 CN CN96194954A patent/CN1126569C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-19 AU AU63361/96A patent/AU703084B2/en not_active Ceased
- 1996-06-19 CZ CZ19974127A patent/CZ291611B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 RU RU98101129/13A patent/RU2192887C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 WO PCT/US1996/010595 patent/WO1997000696A1/en active IP Right Grant
- 1996-06-19 SK SK1657-97A patent/SK281024B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 PL PL96324204A patent/PL184231B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 AT AT96922508T patent/ATE215384T1/de active
- 1996-06-19 CA CA2225388A patent/CA2225388C/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-12-30 HK HK98119233A patent/HK1016870A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-08-02 JP JP2006211493A patent/JP4709094B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0833661B1 (en) | Low pathogenicity prrs live virus vaccines and methods of preparation thereof | |
KR100241221B1 (ko) | 돼지 불임 및 호흡기계 중후백신 및 그의 진단법 | |
JP4300252B2 (ja) | 豚ミステリー病に関与するウイルス物質 | |
FI117513B (fi) | Menetelmä PRRS-viruksen viljelemiseksi ja sen käyttö rokotteissa | |
EP0835929A1 (en) | New attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (prrs), vaccines and diagnostic means obtainable with said strain, and production process | |
KR101152012B1 (ko) | 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물 | |
WO1985000014A1 (en) | Canine coronavirus vaccine | |
EP0975360B1 (en) | Bovine respiratory and enteric coronovirus as a vaccine | |
WO1998040097A9 (en) | Bovine respiratory and enteric coronavirus as a vaccine | |
US11135285B2 (en) | Swine vaccine | |
JP3954101B6 (ja) | 病原性の低いprrs生ウイルスワクチン、ならびにその製造方法 | |
MXPA97010149A (en) | Live pathogenicity live virus vaccines and methods of preparation of mis | |
JP2004532601A (ja) | ウマヘルペスウイルスの温度感受性変異株及びその生ワクチン | |
JPH0463862B2 (cs) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20120619 |