CZ412797A3 - Vakciny živého viru PRRS s nízkou patogenitou a způsoby jejich přípravy - Google Patents

Vakciny živého viru PRRS s nízkou patogenitou a způsoby jejich přípravy Download PDF

Info

Publication number
CZ412797A3
CZ412797A3 CZ974127A CZ412797A CZ412797A3 CZ 412797 A3 CZ412797 A3 CZ 412797A3 CZ 974127 A CZ974127 A CZ 974127A CZ 412797 A CZ412797 A CZ 412797A CZ 412797 A3 CZ412797 A3 CZ 412797A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
aliquot
strain
vaccine
virus
eagle
Prior art date
Application number
CZ974127A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ291611B6 (cs
Inventor
Han Soo Joo
Original Assignee
Regents Of The University Of Minnesota
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regents Of The University Of Minnesota filed Critical Regents Of The University Of Minnesota
Publication of CZ412797A3 publication Critical patent/CZ412797A3/cs
Publication of CZ291611B6 publication Critical patent/CZ291611B6/cs

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • A61K39/155Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525Virus
    • A61K2039/5254Virus avirulent or attenuated
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541Mucosal route
    • A61K2039/543Mucosal route intranasal
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552Veterinary vaccine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011Details
    • C12N2770/10011Arteriviridae
    • C12N2770/10034Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Vakciny živého viru PRRS s nízkou patogenitou a způsoby jejich přípravy
Oblast techniky
Předkládaný vynález je obecně zaměřen na živé virové vakciny s nízkou patogenitou pro podání prasatům pro navození účinné imunity u prasat proti infekci virem respiračního a reprodukčního syndromu prasat (PRRS). Přesněji, vynález se týká takových živých vakcin, spolu se způsoby imunizace prasat proti PRRS viru a metod pro přípravu takových vakcin. Nový, významně izolovaný a purifikovaný PRRS virus s nízkou patogenitou, ATCC přírůstkové č. VR2509, také tvoří část vynálezu.
Dosavadní stav techniky
PRRS se objevil v posledních několika letech jako významné virové onemocnění prasat. PRRS způsobuje vážnou poruchu reprodukce u březích sviní, která se projevuje ve formě předčasného porodu, zvýšeným počtem mrtvě narozených, mumifikovaných a selat s nízkou porodní hmotností, sníženým stupněm porodnosti a zpomaleným návratem k estru. Akutní reprodukční příznaky PRRS trvají asi 2-4 měsíce na postižených farmách, ale respirační problémy způsobené onemocněním mohou přetrvávat mnoho let, což způsobuje signifikantní ztrátu produkce. Bylo popsáno několik studií patogenese PRRS virové infekce v poslední části (75 - 95 den gestace) březích sviní/mladých prasnic. V každé studii byla demonstrována schopnost PRRS viru způsobovat transplacentární infekci a fetální patogenita. Nicméně, fetální patogenita nebyla pravidlem u sviní ve střední části gestace, a plody ve střední
části gestace infikované in utero zůstávaly většinou normální.
V polních podmínkách existují některé farmy, které nevykazují ani akutní reprodukční problémy, ani chronické respirační formy onemocnění, ale jsou serologicky pozitivní na PRRS. Příčina pro chybění klinických příznaků onemocnění v takových případech není dobře známa. Bylo naznačeno, že mohou existovat kmeny PRRS viru s nízkou patogenitou a že jsou odpovědné za infekci populace prasat, které nevykazují klinické příznaky PRRS. Různí výzkumníci popsali mnoho izolátů PRRS viru. U všech se ukázalo, že obsahují RNA a lipidy obsahující obaly, ale nemají hemaglutininovou schopnost k erytrocytům různých živočišných druhů.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález překonává problémy nastíněné výše a poskytuje zlepšenou živou nebo modifikovanou živou PRRS vakcinu pro podání prasatům. Vakciny podle předkládaného vynálezu obsahují dostatečné množství živého nebo modifikovaného živého viru pro navození účinné imunity u prasat proti virulentnímu přirozenému typu PRRS infekce. Jak se zde používá, znamená účinná imunita schopnost vakciny bránit PRRS infekci prasat, která by vedla k významným klinickým příznakům onemocnění. To znamená, že imunizovaná prasat mohou nebo nemusí být serologicky pozitivní na PRRS, ale nevykazují žádné klinické příznaky.
V preferovaných formách obsahují vakciny podle předkládaného vynálezu nový živý virus označený MN-Hs, který byl uložen v Američan Type Culture Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD, 20852, 26.7.1995, a byl označen ATCC přírůstkovým
Λ
číslem VR2509. u tohoto viru bylo ukázáno, že je v podstatě avirulentní a že navozuje účinnou imunitu. Jeho vakciny mohou být podány chovným samicím, mladým prasnicím, kancům nebo odstaveným selatům, a takové podání může být provedeno jakýmikoliv běžnými prostředky jako je intramuskulární injekce nebo orální-nasální podání. Obecně obsahují dávky vakciny od asi 104 do asi 108 plaky formujících jednotek viru.
Obecněji se vynález také týká způsobu přípravy PRRS vakcin pro prasata, který zahrnuje nejprve získání kmen nebo izolát PRRS viru, který má průměrný průměr plaku menší než asi 2 mm, plakovými klonovacími metodami v konfluentní vrstvě MARC-145 buněk, a přípravu živé vakciny z takového kmene. MASR-145 buněčná linie byla uložena v ATCC a byla označena přírůstkovým číslem ATCC_________. Výhodně se vakciny podle předkládaného vynálezu skládají v podstatě z takovéhoto viru s malým průměrem plaku, který je získán ve v podstatě čisté formě. Preferovaný virus ATCC přírůstkové č. VR2509 má takový malý průměr plaku a jak bylo ukázáno, je v postatě úplně avirulentní, a přitom navozuje imunitu.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 je fotografie ilustrující morfologii a velikost plaku izolátu PRRS viru MN-Hs (< 2 mm) na MARC-145 buněčné linii;
Obrázek 2 je fotografie ilustrující morfologii a velikost plaku izolátu PRRS viru MN-HL (3-5 mm) na MARC-145 buněčné linii; a
Obrázek 3 je fotografie ilustrující morfologii a velikost plaku izolátu PRRS viru MN-W (2-3 mm) na MARC-145 buněčné linii.
Následující příklady uvádějí preferované techniky pro izolaci, identifikaci a klonování kmene PRRS viru s nízkou patogenitou, stejně jako preferované techniky pro produkci vakcin z něho vyrobených; mělo by být jasné, že tato informace je poskytnuta pouze jako ilustrace a nikoliv jako omezení celkového rozsahu vynálezu. Uvedené odkazy jsou zde uvedeny jako odkazy.
Příklad 1
Souhrn
V tomto příkladu byla zkoumána patogenese varianty s malými plaky (MN-Hs) viru reprodukčního a respiračního syndromu prašanu březích sviní. MN-Hs kmen byl nejprve klonován z MN-H viru, který byl směsí virů s malými a s velkými (MN-H) plaky. V prvním pokusu pro srovnání fetální patogenity byly 2 březí svině každá v den 86 gestace inokulovány intranasálně MN-Hs, MN-H1, polním izolátem (MN-W) a buněčným kultivačním mediem (kontrolou), v příslušném pořadí. Všem sviním bylo umožněno porodit v jejich termínech kromě kontrolních sviní. Infikované svině byly viremické v den 7 po inokulaci (PI) a serokonvertovaly v den 14 PI podle testu s nepřímou fluorescentní protilátkou (IFA). Dvě svině infikované MN-Hs virem porodily 14 živých a 5 mrtvých selat, zatímco 2 svině infikované MN-H1 virem porodily 0 živých a 25 mrtvých selat. Dvě svině inokulované MN-W porodily 10 živých a 20 mrtvých selat. Dvě kontrolní svině měly 16 normálních plodů při porážce v den 107 gestace. Virus byl «··· tH izolován od 16 (66,7 %) ze 24 mrtvě narozených, 9 (64,3 %) ze 14 mrtvě narozených a 3 (12,0%) ze 25 mumifikovaných selat od 6 infikovaných sviní. 6 ze 13 sér od mrtvě narozených selat od 4 MN-H1 nebo MN-W infikovaných sviní mělo titry protilátky proti PRRS viru v rozmezí od 1:16 do 1:1,024 podle IFA metody.
V dalším pokusu pro opakování výsledků s MN-Hs virem byly 2 březí svině každá v den 86 gestace inokulovány intranasálně MN-Hs, intramuskulárně MN-Hs, resp. intranasálně jiným polním izolátem (OVL-173), a bylo jim umožněno porodit v termínu. Dvě svině infikované intranasálně a intramuskulárně MN-Hs virem porodily 15 živých a 6 mrtvých selat, resp. 25 živých a 5 mrtvých selat, zatímco 2 svině infikované OVL-173 porodily 6 živých a 24 mrtvých selat. Tyto výsledky naznačují, že patogenita PRRS viru pro plody sviní se liší mezi izoláty viru, a MN-Hs kmen PRRS viru je málo patogení virus. Detekce PRRS virových protilátek v séru mrtvě narozených selat byla shledána jako užitečná metoda pro diagnostiku fetální infekce.
Materiály a metody
Virus a buněčná kultura - v této studii byly použity tři různé izoláty PRRS viru. Izolát MN-H byl odvozen od séra zdravých odchovných prasat na farmě se subklinickými příznaky PRRS. MN-H virus byl nejprve směsí virových populací s různou velikostí plaků. Viry s malými (MN-Hs) a velkými (MN-H1) plaky byly separátně klonovány z MN-H viru a každý virus byl plakově purifikován čtyřikrát pro první pokus a ještě šestkrát pro pro další pokus za použití metody klonování plaků podle Him et al., Am. J. Vet. Res., 52: 1649 - 1652 (1991). V každé takové plakové pasáži byly konfluentní MARC-145 (permisivní klon odvozený od ledvinné buněčné linie afrických zelených opic (MA-104)) buněčné
monovrstvy kultivovány v 60 mm x 15 mm Petriho miskách (buňky byly udržovány v Eaglově minimálním esenciálním mediu (MEM) doplněném 3 % fetálního telecího séra (FCS), 0,15 % uhličitanu sodného a antibiotiky (Kim et al., Arch. Virol. 133: 477 - 483 (1993)) a byly inokulovány příslušným virem. Kultury byly inkubovány při 37 °C po 60 minut, potom bylo inokulum odstraněno a kultury byly jedenkráte promyty MEM. Potom byl 5 ml alikvot kapalného kultivačního media přidán do každé z misek, skládajících se ze stejného objemu 2xMEM a 1,6% převařeného Noble agaru (Disco Laboratories) doplněného 50 μg diethylaminoethyl (DEAE)-dextranu/ml. Plotny byly dále inkubovány při 37 °C po 5 dní v CO2 inkubátoru. Na konci inkubace byly plakové kultury vizualizovány přidáním 3 ml PBS doplněného 1 % neutrální červeně. Selektované plaky byly klonovány seškrábnutím sterilní Pasteurovou pipetou a byly pasážovány inokulací na neinfikované MARC-145 buněčné monovrstvy. Pro permanentní barvení byl agar pečlivě odstraněn a buněčná monovrstva byla barvena 2 ml 1% krystalické violeti ve 20% ethanolu po 10 minut. Plotny byly potom opláchnuty vodou pro usnadnění vyšetření plaků.
PRRS virus MN-W byl izolován ze séra nemocných sviní z farmy s typickými příznaky PRRS a OVL-173 byl získán z Oxford Veterinary Laboratories, Worthington, MN.
Zvířata a vývoj pokusu. Březí svině okolo dne 80 gestace byly zakoupeny od farmy, která neměla v minulosti žádné známky infekce PRRS virem. Svině byly na farmě vakcinovány dvakrát ročně proti prasečímu parvoviru (PPV) a Leptospira spp. Byla získána přesná chovná data o každé svini. Po zakoupení byla každá svině umístěna odděleně v izolované místnosti na
University of Minnesota. V den 86 gestace byly dvě svině inokulovány intranasálně MN-Hs, MN-H1, resp.a MN-W virem (2 ml, 105·05,5 TCID50/ml). Zbývající dvě svině byly inokulovány buněčným kultivačním mediem a sloužily jako kontroly. Vzorky séra od každé svině byly odebrány v intervalech pro izolaci viru a sérologii. Šesti infikovaným sviním byl umožněn přirozený porod, a dvě kontrolní svině byly poraženy v den 107 gestace pro vyšetření plodů. Při porodu byly od živých a mrtvě narozených selat odebrány vzorky krve a plic a od mumifikovaných plodů byla odebrána hrudní tekutina pro izolaci viru a pro sérologii. Ve druhém pokusu byl MN-Hs virus plakově purifikován ještě šestkrát před inokulací. Dvě březí svině každá v den 86 gestace byly inokulovány intranasálně MN-Hs, intramuskulárně MN-Hs a intranasálně jiným polním izolátem (OVL-173) a všem sviním byl umožněn porod v termínu. Při porodu byly měřeny délky temeno
- zadek mumifikovaných nebo mrtvě narozených plodů pro hodnocení doby úmrtí (Marrable et al., J. Agric. Sci., 69: 443 - 447 (1967)). Byly odebrány vzorky krve a plic a byly analyzovány, jak je popsáno v prvním pokusu.
Izolace viru a sérologie. Pro izolaci viru byl každý vzorek séra nebo supernatant plicního homegenátu umístěn na 24 jamkovou plotnu a byly přidány MARC-145 buňky (1 - 2 x 105 buněk/ml) suspendované v MEM doplněném 3 % FCS. Na kulturách byl po dobu 5 až 7 dní pozorován cytopatický účinek (CPE) typický pro PRRS virus. Plotny byly dvakrát zmraženy a rozmraženy a supernatant byl inokulován do jamek 96 jamkové mikroplotny s čerstvou suspensí MARC-145 buněk a byly inkubován po 3 až 4 dny. Virová infekce byla vyšetřována pozorováním jak CPE, tak specifické fluorescence za použití PRRS virus pozitivního referenčního séra.
..?♦< —Λ • ·· • «· » ·'·
Λ»*· ·
Λ—
Λ ··· • · · ·· » ·9
9»«9
Séra od sviní a prasat byla testována na protilátky za použití metody nepřímé fluorescentní protilátky (IFA) (Yoon et al., J. Vet. Diag. Invest., 4: 144 - 147 (1992)). 96 jamkové testovací plotny byly připraveny za použití MARC-145 buněčné linie. Některá séra byla testována na protilátky k PPv testem inhibice hemaglutinace (Hl) jak bylo popsáno dříve (Joo et al., Aust. Vet. J., 52: 422 - 424 (1976)).
Výsledky
Izoláty PRRS viru ukazovaly plaků při počáteční izolaci různou velikost. MN-H izolát byl klonován do dvou různých populací MN-Hs a MN-H1 podle velikosti jejich plaků. Po klonování měly plaky MN-Hs a MN-H1 průměr < 2 mm, resp. 3 až 5 mm, zatímco velikost plaků pro MN-W byla 2 až 3 mm (viz obrázky).
U sviní po infekci izoláty PRRS viru nebyly pozorovány žádné významné klinické příznaky kromě mírné anorexie detekované u sviní 112 a 153 5 dní po inokulaci (PI). Virus byl izolován ze vzorků séra od šesti ze šesti sviní sedm dní PI a od jedné ze šesti sviní 14 dní PI. Vysoké titry prtilátek byly detekovány u všech inokulovaných sviní 14 dní PI, jak je ukázáno v tabulce 1.
Tabulka 1: Viremie a protilátková odpověď u 86 denních březích sviní po pokusné infekci izoláty PRRS viru
i ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 | Dny po inokulaci | 1________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________:___________________:_______________________________________________________________________________________ _ . 1
|svině 1 č. I Infikovaný virus 0 7 14 21 1 1 28 | i
1 117 MN-Hs -/-a +/- -/1,024 -/1,024 -/256 |
|53 1 MN-Hs -/- +Λ -/1,024 -/1,024 -/1,024 | 1
Tabulka 2: Výsledky porodů a izolace viru od sviní v 86 dnu gestace infikovaných různými izoláty PRRS viru
Svině Plody
«. Dny Virus/způsob Celkem LB SB M Cr rozsah Izolace vin.
délky
Experiment I
17 115 MN-Hs/IN 9 6 0 3 27-32 6/9
53 113 MN-Hs/IN 10 8 1 1 25-38 6/10
153 114 MN-Hl/IN 13 0 2 11 24-32 2/11
147 112 MN-Hl/IN 12 0 4 8 18-30 3/7
68 112 MN-W/IN 15 8 3 4 25-28 5/15
112 118 MN-W/IN 15 2 9 24-31 6/11
124 107d Control 14 14 - - ND 0/14
95 107d Control 12 12 - - ND 0/12
Experiment II.
155 115 MN-Hs/IN 11 7 3 1 28-35 8/11
49 114 MN-Hs/IN 10 8 2 0 34-37 9/10
176 112 MN-Hs/IM 15 12 2 1 15-36 3/15
110 113 MN-Hs/IM 15 13 2 0 32-34 2/1 5 y-
800 108 OVL-173/IN 12 1 9 2 27-28 1/12
44 108 OVL-173/IN 18 5 10 3 26-29 10/18
a den gestace při porodu nebo porážce 30 délka týl-zadek (cm) mumif ikovaných nebo mrtvě narozených plodů c počet vzoků s izolovaným virem/počet testovaných vzorků
• · · svině byly poraženy v den 107 gestace pro vyšetření plodů LD = živě narozené, SB = mrtvě narozené, M = mumifikované, IM = intramuskulárně, ND = neurčeno.
Virus byl izolován od jednoho nebo od více plodů z každého vrhu infikovaných sviní.Výsledky izolace viru od jednotlivých prasat ze šesti infikovaných sviní v pokusu 1 ukazují, že přibližně polovina vyšetřených plodů (28 ze 63 prasat) byla pozitivní na izolaci viru. Mezi prasaty testovanými na přítomnost viru bylo 16 (66,7%) ze 24 živě narozených prasat, 9 (64,3%) ze 14 mrtvě narozených prasat a 3 (12,0%) ze 25 mumifikovaných prasat pozitivní na virus. Ze 28 prasat pozitivních na virus ve vzorku séra bylo 10 prasat negativních na virus ve vzorcích plic testovaných na izolaci viru.
Séra od mrtvě narozených prasat od sviní 153, 147, 68 a 112 byla testována na protilátky proti PRRS viru IFA a na PPV Hl a výsledky jsou ukázány v tabulce 3. Šest ze 13 sér od mrtvě narozených prasat a 2 ze 25 hrudních tekutin od mumifikovaných prasat mělo protilátky proti PRRS viru. IFA titry byly v rozsahu od 1:16 - 1:1,024, zatímco žádné sérum nemělo protilátky k PPV. Třináct ze 14 živě narozených prasat od sviní 17 a 53 mělo protilátky jak k PRRS viru (IFA titry 1:64 - 1:1,024) tak PPV (Hl titry 1:512 - 1:16384).
· · 9 · 0 * * φ Í+--++·-;·™ *<♦ φ ♦ Φ 9 9 99 • · · · 4 ♦ · Φ φ Φ Φ · «»*·»· ,·φφ
999 9 9 9 · * ·« · · * ··
Tabulka 3: Detekce protilátek proti PRRS viru a PPV v séru mrtvě narozených prasat od sviní infikovaných PRRS virem.
Svině č. Infikovaný virus Anamnesa vrhu Testované plody PRRSV IFA PPV hl
153 MN-H1 OLB, 2SB, SB (32)a <4b <8b
11 M
SB (27) 256 <8
147 MN-H1 OLB, 4SB, SB (30) <4 <8
8M
SB (30) '1,024 <8
SB (29) <4 <8
SB (28) <4 <8
68 MN-W 8LB, 3SB, SB (27) <4 <8
4M
SB (25) 16 <8
Sb (28) <4 <8
112 MN-W 2LB, 4SB, SB (31) <4 <8
9M
SB (29) 256 <8
SB (26) 256 <8
SB (24) 16 NT
a délka týl-zadek (cm) b Reciprocity IFA nebo HL titru cLB-živě narozené; SB-mrtvě narozené; M-mumifikace
Diskuse
Předkládaná studie potvrdila schopnost různých izolátů PRRS virů způsobovat transplacentární infekci a patogenní účinky na plody sviní v pozdní fázi gestace. Nicméně, byl zde závažný rozdíl v patogenitě mezi izoláty PRRS viru. Když byly vícekrát rodivší svině inokulovány transnasálně PRRS virem ATCC-VR 2332 v den 93 gestace (Christianson, W. T. et al., Can. J. Vet. Res., 57: 262 - 268 (1993)), potom porodily průměrně 5,8 živých selat a 6 mrtvých plodů na vrh. V předkládané studii bylo 6 sviní infikovaných MH-H1 nebo 2 polními viry porodilo 2,7 živých a 11,5 mrtvých selat na vrh, a proto jsou tyto viry považovány za vysoce virulentní. Patogenita mezi ATCC-VR 2332 a virulentními viry použitými v této studii byla odlišná. Toto může být způsobeno trváním gestace v době infekce, protože ATCC VR-2332 byl infikován o sedm dní později. 6 sviní infikovaných MN-Hs porodilo průměrně 9,0 živých a 2,7 mrtvých selat na vrh. Tyto výsledky jsou jasně odlišné od výsledků získaných pro virulentní virus což naznačuje, že MN-Hs virus je mírně patogenní kmen.
Je zajímavé, že vážné rozdíly byly pozorovány v porodech od sviní infikovaných MN-Hs a MN-H1 viry, které byly stejného původu. Za stejných podmínek způsobil virus MN.Hs, resp. MN.H1 5, resp. 25 mrtvě narozených selat (p<0,005). Podle presentovaných výsledků může být usouzeno, že patogenita MN-Hs a MN-H1 je signifikantně odlišná, kdy jeden je slabě a druhý vysoce patogenní virus.
Izolace viru z vrhů infikovaných PRRS virem byla relativně snadná a virus byl izolován v podobném poměru od živých a mrtvých selat. Protože virus nemohl být získán od všech selat v
infikovaném vrhu, měla by být izolace viru pro diagnostické účely provedena od alespoň 2 nebo více selat na vrh. Dále bylo zjištěno, že izolace viru se lépe provádí ze séra než ze vzorků plicní tkáně.
Ve vrzích od sviní infikovaných virulentním virem mělo jedno nebo více mrtvě narozených selat detekovatelné protilátky specifické pro PRRS virus. Tyto výsledky naznačují, že detekce protilátek od mrtvě narozených nebo selat před kojením může být užitečnou metodou pro diagnostiku PRRS infekce v abnormálních vrzích. Tato metoda bude výhodná v laboratořích, ve kterých nejsou prostředky a techniky pro izolaci viru dosupné. V předkládané studii, 6 ze 13 mrtvě narozených selat mělo pozitivní titry protilátek proti PRRS viru, ale ne proti PPV, což potvrzuje, že detekované protilátky jsou fetálního původu a že jsou způsobeny PRRS virem.
Není známo, proč se u některých stád infikovaných PRRS virem nevyvinou klinické příznaky. Bylo ukázáno, že stáda s dobrým zdravotním stavem před infekcí PRRS vykazují mírnější klinickou odpověď ve srovnání s těmi, která mají horší zdravotní stav. Panující zdravotní stav, spolu s rozdíly v kmenech demonstrovanými v této studii, jsou možným vysvětlením pro jasné rozdíly v klinické presentaci. Kromě toho je možno předpokládat, že u hostitele se mohou vyskytovat interakce mezi viry s malými a velkými plaky a že mohou modifikovat patogenitu. Tak tomu může být, pokud bereme v úvahu, že zde postrádáme reprodukční problémy na farmě, kde byl izolován MN-H izolát viru, i když byl vysoce patogení PRRS viru MN-H1 na farmě přítomen.
* · · • « ♦ · ♦ • · 9 • 9 9 · 9 9'
9 9 9
9 99 « · 9 9 9 9
9 9
99
Příklad 2
Preferované vakciny podle předkládaného vynálezu mohou být podány chovným mladým prasnicím, sviním, kancům nebo odstaveným selatům. Podání může být intramuskulární nebo orálně nasální a může být podáno v jakoukoliv dobu. Nicméně pro chovné samice jsou vakcinace preferovány před kopulací pro ochranu po celou dobu březosti a pro selata těsně před odstavením pro ochranu během pozdějšího odchovu a chovu až do finálního stadia.
Obecně jsou vakciny podle vynálezu podány ve 2 ml dávkách, které obsahují od asi 104 do 108 plaky formujících jednotek (PFU) a lépe okolo 106 PFU. Imunita bude v případě chovných samic přetrvávat alespoň jednu dobu březosti, zatímco vakcinace po odstavení selat bude zprostředkovávat imunitu až do porážky. Preferované vakciny podle předkládaného vynálezu mohou poskytovat široký rozsah zkřížené ochrany.
Vakciny podle předkládaného vynálezu mohou indukovat živé nebo modifikované živé (atenuované) viry, stejně jako konvenční nosiče, stabilizátory a/nebo adjuvans.
Příklad 3
Úvod
V tomto příkladu byla vyšetřována schopnost vakciny složené z MN-Hs kmene severoamerického PRRSV chránit 3-týdenní selata před viremií způsobenou infecí virulentním kmenem MN-H1 severoamerického PRRSV. Respirační onemocnění související s infekcí severoamerickým PRRSV je primárně způsobeno infekcí
φ e ·
sekundárními patogeny přítomnými na prasečích farmách. Nicméně, za pokusných podmínek, respirační klinické příznaky u prasat infikovaných severoamerickým PRRSV nejsou konsistentně reprodukovány vzhledem k absenci těchto sekundárních patogenů. Proto je detekce viremie nej lepším ukazatelem infekce severoamerickým PRRSV. Absence viremie po infekci MN-H1 kmenem ukazuje, že selata vakcinovaná MN-Hs kmenem jsou imunní k infekci MN-H1 kmenem.
Materiál a metody
Dvacet 3 týdeních selat bylo zakoupeno od farmy bez PRRS infekce. Dvanáct z těchto selat bylo vakcinováno intranasálně MN-Hs kmenem (2 ml, 104·Ξ TCIDso/ml) a zbylých 8 selat sloužilo jako kontroly. Vakcinovaná a kontrolní selata byla umístěna v oddělených místnostech izolační jednotky. Šest vakcinovaných selat (selata č. 81 - 86) a 4 kontrolní selata (selata č. 93 96) byla infikována intranasálně MN-H1 kmenem (2 ml, 104'5 TCIDso/ml) 2 týdny po vakcinaci (skupina 1). Zbylých 6 vakcinovaných selat (selata č. 87 - 92) a 4 kontrolní selata (selata č. 97 - 100) byla infikována stejně 6 týdnů po vakcinaci (skupina 2). U všech selat byly denně pozorovány klinické příznaky. Kromě toho, jednou týdně byly odebírány vzorky krve od každého selete na (1) izolaci viru za použití MARC-145 buněčné kultury (Yoon et al., J. Vet. Diag. Invest, 6: 289 - 292 (1994)) a (2) určení titrů sérových neutralizačních (SN) protilátek (Park et al., Am. J. Vet. Res., 57: 320 - 323 (1996)); detekce SN protilátek u vakcinovaných selat ukazovala protektivní imunitu proti virulentnímu severoamerickému PRRSV.
• · ♦ * ♦ φ · ♦ ···♦ ««
Φ 9 • Φ ΦΦ
Φ « ♦ Φ Φ Φ Φ- 9
Φ 9 9
• 9 ·· · ·· 9 9
Výsledky
Po vakcinaci byl vakcinační virus izolován od selat ve skupině 1 a 2 více než 3 týdny po vakcinaci. Po infekci nebyly klinické příznaky pozorovány u žádného z kontrolních a vakcinovaných selat ve skupině 1 a 2.
Skupina 1. SN protilátka nebyla detekována u žádného selete v době infekce. Po infekci byl infekční virus získán jak od vakcinovaných, tak od kontrolních selat. Dále, jak u vakcinovaných, tak u kontrolních selat se vyvinula viremie (tabulka 1).
Skupina 2. Vakcinovaná selata produkovala SN protilátky od 3 týdne po vakcinaci a titry byly mezi 1:2 a 1:8 v době infekce. Po infekci nebyl od vakcinovaných selat infekční virus izolován, zatímco u kontrolních selat se vyvinula viremie (Tabulka 4). Tyto výsledky ukazují, že vakcinovaná selata mají získanou ochrannou imunitu proti virulentnímu severoamerickému PRRSV.
Tabulka 4. Detekce viremie a SN protilátky u 3 týčeních selat vakcinovaných a infikovaných 2 nebo 6 týdnů po vakcinaci
Prase č. Týden 0 po 1 vakcinaci 4 5 6a 7 8
2a 3
skupina 1
81V -/-b -/- -/- -/- -/2
82V -/- -/- -/- +/- +/-
83V -/- -/- +/- +/- +/2
84V -/- -/- -/- -/- +/-
85V -/- -/- +/- +/- +/4
86V -/- -/- +/- +/- -/4
93C -/- -/- -/- +/- +/-
94C -/- -/- -/- +/- +/8
95C -/- -/- -/- +/- +/4
96C -/- -/- -/- +/- +/-
Skupina 2
87V -/- -/- -/- . +/ + -/- -/2 -/2 -/8 -/8
88V -/- -/- +/- -/- -/- -/4 -/4 -/64 -/128
89V -/- -/- +/- -/- -/2 -/8 -/8 -/8 -/32
90V -/- -/- +/ - +/- -/4 -/8 -/8 -/128 -/64
91V -/- -/- +/- -/2 -/2 -/8 -/4 -/32 -/64
92V -/- -/- -/- -/4 -/2 -/4 -/4 -/128
97C -/- -/- -/- -/- -/- -/- -/- +/- +/-
98C -/- -/- -/- -/- -/- -/- -/- + /- +/-
99C -/- -/- -/- -/- -/- -/- -/- +/- +/-
100C -/- -/- -/- -/- -/- -/- -/- +/- -/2
V = vakcinované; C = kontrola a = infikované MN-H1 virem b = izolace viru/titr SN protilátek
Selata ve skupině 1, resp. 2 byla usmrcena 4, resp. 8 týdnů po vakcinaci.

Claims (19)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Vakcina zahrnující virus mající označení ATCC VR2509.
  2. 2. Vakcina podle nároku 1, kde virus je živý.
  3. 3. Vakcina podle nároku 1, do 108 PFU.
    kde dávka vakciny obsahuje od 104
  4. 4. Způsob imunizace prasat proti severoamerickému reprodukčnímu a respiračnímu syndromu t
    v y z podle načující se nároku 1 prasatům.
    m, že prasat zahrnuje podání vakciny
  5. 5.
    že
    Způsob podle nároku 4 virus je živý.
    m, že v prasetem je dospělá chovná
  6. 6. Způsob podle nároku 4 y svině.
    m, že
  7. 7. Způsob podle nároku 4 v prasetem je sele.
    m, že
  8. 8. Způsob podle nároku 4 v vakcina je podána intramuskulárně, c
    intranasálně s nebo m, t orálně.
  9. 9. Způsob přípravy vakciny vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:
    (A) získání kmene severoamerického PRRSV klonováním plaku; a φφ φφ (Β) přípravu vakciny ze kmene získaného v kroku (A), kde kmen dává plaky mající průměrný průměr menší než 2 mm, pokud jsou plaky získány způsobem zahrnujícím kroky:
    (a) inokulace alikvotu buněk s kmenem, kde buňky mají označení CRL 12219, kde alikvot je získán z konfluentní monovrstvy buněk kultivovaných v Eaglově minimálním esenciálním mediu doplněném
    3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného, přičemž alikvot obsahuje 1 až 2 x 105 buněk na ml Eaglova minimálního esenciálního media doplněného 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného;
    (b) inkubace alikvotu při 37 °C po 60 minut;
    (c) odstranění inokula z alikvotu;
    (d) promytí alikvotu Eaglovým minimálním esenciálním mediem;
    (e) resuspendování alikvotu v 5 ml 2x Eaglova minimálního esenciálního media a 1,6% převařeného Noble agaru doplněného 250 μg diethylaminoethyl(DEAE)-dextranu;
    (f) plotnování alikvotu; a (g) další inkubování alikvotu při 37 θϋ po 5 dní v CO2 inkubátoru pro vznik plaků.
  10. 10. Způsob podle nároku 9vyznačující se tím, že vakcina zahrnuje živý kmen severoamerického PRRSV.
  11. 11. Způsob podle nároku 9vyznačujicí se tím, i
    « « • * ♦ · · ··«· ·· • · ·· ··* · • · ·· ·· že způsob přípravy vakciny zahrnuje purifikované formě.
    krok získání kmene v
  12. 12. Způsob podle nároku 9 v y z n že kmen má označení ATCC VR2509.
    ačující se t í m,
  13. 13. Vakcina zahrnující kmen severoamerického PRRSV, kde dává plaky mající průměrný průměr menší než 2 mm, pokud jsou plaky získány způsobem zahrnujícím kroky:
    kmen (a) inokulace alikvotu buněk s kmenem, kde buňky mají označení CRL 12219, kde alikvot je získán z konfluentní monovrstvy buněk kultivovaných v Eaglově minimálním esenciálním mediu doplněném 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného, přičemž alikvot obsahuje 1 až 2 x 105 buněk na ml Eaglova minimálního esenciálního media doplněného 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného;
    (b) inkubace alikvotu při 37 °C po 60 minut;
    (c) odstranění inokula z alikvotu;
    (d) promytí alikvotu Eaglovým minimálním esenciálním mediem;
    (e) esenciálního media a 1,6% převařeného Noble agaru doplněného 250 μg diethylaminoethyl(DEAE)-dextranu;
    resuspendování alikvotu v 5 ml 2x Eaglova minimálního (f) plotnování alikvotu; a (g) další inkubování alikvotu při 37 °C po 5 dní v C02 inkubátoru pro vznik plaků.
  14. 14. Vakcina podle nároku 13, kde vakcina obsahuje živý kmen severoamerického PRRSV.
  15. 15. Vakcina podle nároku 13, kde kmen má označení ATCC VR2509.
  16. 16. Izolovaný a purifikovaný kmen severoamerického PRRSV, kde kmen má označení ATCC VR 2509.
  17. 17. Kmen podle nároku 16, kde kmen je živý.
  18. 18. Izolovaný a purifikovaný kmen severoamerického PRRSV, kde kmen dává plaky mající průměrný průměr menší než 2 mm, pokud jsou plaky získány způsobem zahrnujícím kroky:
    (a) inokulace alikvotu buněk s kmenem, kde buňky mají označení CRL 12219, kde alikvot je získán z konfluentní monovrstvy buněk kultivovaných v Eaglově minimálním esenciálním mediu doplněném
    3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného, přičemž alikvot obsahuje 1 až 2 x 105 buněk na ml Eaglova minimálního esenciálního media doplněného 3 % fetálního telecího séra a 0,15 % uhličitanu sodného;
    (b) inkubace alikvotu při 37 °C po 60 minut;
    (c) odstranění inokula z alikvotu;
    (d) promytí alikvotu Eaglovým minimálním esenciálním mediem;
    (e) resuspendování alikvotu v 5 ml 2x Eaglova minimálního . 4-4.....-4-441-4-----------··♦----· 4 '4 ’ 4'· • 4 44
    4»444
    4 4 4 44 »444 4444
    ---4-----------44’4» «· —4- »44
    4 4 44»
    4 4 »4» 4·
    4 · 4·
    444 44»4 esenciálního media a 1/6% převařeného Noble agaru doplněného 250 μg diethylaminoethy1(DEAE)-dextranu;
    (f) plotnování alikvotu; a (g) další inkubování alikvotu při 37 °C po 5 dní v C02 inkubátoru pro vznik plaků.
  19. 19. Kmen podle nároku 18, kde kmen je živý.
CZ19974127A 1995-06-21 1996-06-19 Vakcína pro léčení severoamerického reprodukčního a respiračního syndromu prasat, způsob její přípravy a nový kmen viru CZ291611B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/493,265 US5690940A (en) 1995-06-21 1995-06-21 Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ412797A3 true CZ412797A3 (cs) 1998-05-13
CZ291611B6 CZ291611B6 (cs) 2003-04-16

Family

ID=23959539

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19974127A CZ291611B6 (cs) 1995-06-21 1996-06-19 Vakcína pro léčení severoamerického reprodukčního a respiračního syndromu prasat, způsob její přípravy a nový kmen viru

Country Status (21)

Country Link
US (1) US5690940A (cs)
EP (1) EP0833661B1 (cs)
JP (1) JP4709094B2 (cs)
KR (1) KR100444809B1 (cs)
CN (1) CN1126569C (cs)
AT (1) ATE215384T1 (cs)
AU (1) AU703084B2 (cs)
BR (1) BR9608648A (cs)
CA (1) CA2225388C (cs)
CZ (1) CZ291611B6 (cs)
DE (1) DE69620402T2 (cs)
DK (1) DK0833661T3 (cs)
ES (1) ES2173300T3 (cs)
HK (1) HK1016870A1 (cs)
HU (1) HU227754B1 (cs)
PL (1) PL184231B1 (cs)
PT (1) PT833661E (cs)
RU (1) RU2192887C2 (cs)
SK (1) SK281024B6 (cs)
UA (1) UA47433C2 (cs)
WO (1) WO1997000696A1 (cs)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0587780B2 (en) * 1991-06-06 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits
SK119498A3 (en) * 1996-03-01 1999-07-12 Schering Corp Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US5866401A (en) * 1996-03-01 1999-02-02 Schering Corporation Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
EP0839912A1 (en) * 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
US20040224327A1 (en) * 1996-10-30 2004-11-11 Meulenberg Johanna Jacoba Maria Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
WO2000053787A1 (en) * 1999-03-08 2000-09-14 Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Dierg Ezondheid B.V. Prrsv vaccines
AU754938B2 (en) 1997-05-06 2002-11-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRSV antigenic sites identifying peptide sequences of PRRS virus for use in vaccines or diagnostic assays
DK1183332T3 (da) * 1999-04-22 2010-09-06 Us Agriculture Porcint Reproduktions- og Respirations Syndrom-vaccine baseret på isolere JA-142
SG83740A1 (en) * 1999-08-10 2001-10-16 Inst Of Molecular Agrobiology An attenuated porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain and methods of use
BRPI0510928A (pt) * 2004-06-18 2007-11-13 Univ Minnesota identificação de organismos viralmente infectados e vacinados
US7632636B2 (en) * 2004-09-21 2009-12-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use
UA95778C2 (ru) 2005-06-24 2011-09-12 Риджентс Оф Зе Юниверсити Оф Миннесота Вирусы репродуктивно-респираторного синдрома свиней, их инфекционные клоны и мутанты и способы применения
US7241582B2 (en) * 2005-07-05 2007-07-10 Mj Biologics, Inc. Diagnostic test kits
CN101848995A (zh) * 2007-06-25 2010-09-29 南达科他州立大学 重组的北美1型猪繁殖与呼吸综合征病毒及使用方法
UA106475C2 (uk) * 2008-08-25 2014-09-10 Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. Спосіб вакцинації свині проти високопатогенного репродуктивно-респіраторного синдрому свиней (hp prrs)
US8725420B2 (en) 2008-10-31 2014-05-13 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US8545855B2 (en) 2008-10-31 2013-10-01 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US8603495B2 (en) 2008-10-31 2013-12-10 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for biological remodeling with frozen particle compositions
US8793075B2 (en) 2008-10-31 2014-07-29 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US8545857B2 (en) 2008-10-31 2013-10-01 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for administering compartmentalized frozen particles
US9060926B2 (en) 2008-10-31 2015-06-23 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US8762067B2 (en) 2008-10-31 2014-06-24 The Invention Science Fund I, Llc Methods and systems for ablation or abrasion with frozen particles and comparing tissue surface ablation or abrasion data to clinical outcome data
US9072799B2 (en) 2008-10-31 2015-07-07 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US9050070B2 (en) 2008-10-31 2015-06-09 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US20100111835A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-06 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US8731841B2 (en) 2008-10-31 2014-05-20 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US8551505B2 (en) 2008-10-31 2013-10-08 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US8731840B2 (en) 2008-10-31 2014-05-20 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US8409376B2 (en) 2008-10-31 2013-04-02 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US8721583B2 (en) 2008-10-31 2014-05-13 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US9060934B2 (en) 2008-10-31 2015-06-23 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US9072688B2 (en) 2008-10-31 2015-07-07 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US20100111857A1 (en) 2008-10-31 2010-05-06 Boyden Edward S Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles
US9060931B2 (en) 2008-10-31 2015-06-23 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for delivery of frozen particle adhesives
US8256233B2 (en) * 2008-10-31 2012-09-04 The Invention Science Fund I, Llc Systems, devices, and methods for making or administering frozen particles
US8788212B2 (en) 2008-10-31 2014-07-22 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for biological remodeling with frozen particle compositions
US8784385B2 (en) 2008-10-31 2014-07-22 The Invention Science Fund I, Llc Frozen piercing implements and methods for piercing a substrate
US9050317B2 (en) 2008-10-31 2015-06-09 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles
US9050251B2 (en) 2008-10-31 2015-06-09 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for delivery of frozen particle adhesives
US8788211B2 (en) 2008-10-31 2014-07-22 The Invention Science Fund I, Llc Method and system for comparing tissue ablation or abrasion data to data related to administration of a frozen particle composition
US8551506B2 (en) 2008-10-31 2013-10-08 The Invention Science Fund I, Llc Compositions and methods for administering compartmentalized frozen particles
TWI627281B (zh) * 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低pcv-2組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之pcv-2組合物
US8492454B2 (en) * 2009-10-05 2013-07-23 Creative Nail Design, Inc. Removable color layer for artificial nail coatings and methods therefore
US8541482B2 (en) * 2009-10-05 2013-09-24 Creative Nail Design, Inc. Removable multilayer nail coating system and methods therefore
US8263677B2 (en) 2009-09-08 2012-09-11 Creative Nail Design, Inc. Removable color gel basecoat for artificial nail coatings and methods therefore
WO2012110490A1 (en) 2011-02-17 2012-08-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Commercial scale process for production of prrsv
MY186535A (en) 2011-02-17 2021-07-26 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Novel european prrsv strain
WO2012121704A1 (en) 2011-03-07 2012-09-13 Creative Nail Design, Inc. Compositions and methods for uv-curable cosmetic nail coatings
KR101281361B1 (ko) 2011-07-18 2013-07-02 서울대학교산학협력단 북미형 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 예방 백신 조성물 및 이를 포함하는 혼합백신 조성물
US9187731B2 (en) 2011-07-29 2015-11-17 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells
US9315781B2 (en) 2011-07-29 2016-04-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Infectious CDNA clone of european PRRS virus and uses thereof
MX366051B (es) 2012-12-07 2019-06-26 Univ Illinois Composiciones del virus del síndrome reproductor y respiratorio de porcino y sus usos.
EP2968513A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use
US10279031B2 (en) 2016-05-11 2019-05-07 Phibro Animal Health Corporation Composition comprising antigens and a mucosal adjuvant and a method for using

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07501049A (ja) * 1991-10-14 1995-02-02 アクゾ・ノベル・エヌ・ベー ブタ生殖・呼吸系症候群ワクチン及び診断方法
US5695766A (en) * 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
ES2152304T3 (es) * 1993-02-08 2001-02-01 Bayer Ag Procedimiento para el crecimiento del virus del sindrome reproductivo y respiratorio porcino y su uso en vacunas.

Also Published As

Publication number Publication date
KR100444809B1 (ko) 2004-11-06
CN1188417A (zh) 1998-07-22
WO1997000696A1 (en) 1997-01-09
DK0833661T3 (da) 2002-05-06
JPH11509087A (ja) 1999-08-17
AU6336196A (en) 1997-01-22
PL184231B1 (pl) 2002-09-30
KR19990022848A (ko) 1999-03-25
EP0833661A4 (en) 1998-10-21
BR9608648A (pt) 1999-12-07
CN1126569C (zh) 2003-11-05
CA2225388C (en) 2010-03-23
CA2225388A1 (en) 1997-01-09
JP2006306894A (ja) 2006-11-09
JP4709094B2 (ja) 2011-06-22
RU2192887C2 (ru) 2002-11-20
HU227754B1 (en) 2012-02-28
PL324204A1 (en) 1998-05-11
MX9710149A (es) 1998-07-31
CZ291611B6 (cs) 2003-04-16
JP3954101B2 (ja) 2007-08-08
AU703084B2 (en) 1999-03-18
SK165797A3 (en) 1998-05-06
HUP9903169A3 (en) 2001-06-28
ES2173300T3 (es) 2002-10-16
HK1016870A1 (en) 1999-11-12
ATE215384T1 (de) 2002-04-15
EP0833661A1 (en) 1998-04-08
SK281024B6 (sk) 2000-11-07
UA47433C2 (uk) 2002-07-15
HUP9903169A2 (hu) 2000-01-28
DE69620402T2 (de) 2002-11-07
EP0833661B1 (en) 2002-04-03
DE69620402D1 (de) 2002-05-08
PT833661E (pt) 2002-08-30
US5690940A (en) 1997-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0833661B1 (en) Low pathogenicity prrs live virus vaccines and methods of preparation thereof
KR100241221B1 (ko) 돼지 불임 및 호흡기계 중후백신 및 그의 진단법
JP4300252B2 (ja) 豚ミステリー病に関与するウイルス物質
FI117513B (fi) Menetelmä PRRS-viruksen viljelemiseksi ja sen käyttö rokotteissa
EP0835929A1 (en) New attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (prrs), vaccines and diagnostic means obtainable with said strain, and production process
KR101152012B1 (ko) 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스 균주 및 조성물
WO1985000014A1 (en) Canine coronavirus vaccine
EP0975360B1 (en) Bovine respiratory and enteric coronovirus as a vaccine
WO1998040097A9 (en) Bovine respiratory and enteric coronavirus as a vaccine
US11135285B2 (en) Swine vaccine
JP3954101B6 (ja) 病原性の低いprrs生ウイルスワクチン、ならびにその製造方法
MXPA97010149A (en) Live pathogenicity live virus vaccines and methods of preparation of mis
JP2004532601A (ja) ウマヘルペスウイルスの温度感受性変異株及びその生ワクチン
JPH0463862B2 (cs)

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20120619