CZ299271B6 - Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro - Google Patents
Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299271B6 CZ299271B6 CZ20070197A CZ2007197A CZ299271B6 CZ 299271 B6 CZ299271 B6 CZ 299271B6 CZ 20070197 A CZ20070197 A CZ 20070197A CZ 2007197 A CZ2007197 A CZ 2007197A CZ 299271 B6 CZ299271 B6 CZ 299271B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- culture medium
- oocytes
- histone deacetylase
- deacetylase inhibitor
- vitro
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 73
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 title claims description 33
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 title claims description 33
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 18
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 2
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N Trichostatin A Natural products ONC(=O)C=CC(C)=CC(C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N trichostatin A Chemical compound ONC(=O)/C=C/C(/C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N 0.000 description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 4
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 3
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 3
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 102100021453 Histone deacetylase 5 Human genes 0.000 description 1
- 108050004676 Histone deacetylase 5 Proteins 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Rešení se týká použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodlouženíživotnosti savcích oocytu in vitro, kdy se odebrané savcí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivacním médiu s prídavkem specifického inhibitoru histon deacetylázy. Uchovávání odebraných savcích oocytu v podmínkách in vitro za soucasné inhibice histon deacetylázy zajištuje zvýšenou životaschopnost oocytu a má velký význam pri reprodukcníchbiotechnologiích u hospodárských zvírat i v asistované reprodukci v humánní medicíne.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro.
Dosavadní stav techniky
Je známo, že oocyty savců (samičí pohlavní buňky) mají po vyjmutí z těla samice omezenou životnost při následné kultivaci v podmínkách in vitro. Po dokončení zrání podléhají spontánně řadě procesů, jež je znehodnocují pro další využití v reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgenoze) i v humánní medicíně (asistovaná reprodukce). Nejvýznamnější z procesů je fragmentace oocytů, jež je projevem apoptózy, a lýza oocytů, jež je důsledkem nekrózy. Proto jsou hledána ošetření, která by těmto procesům zabránila. Možnosti potlačit apoptózu a nekrózu oocytů jsou zatím ale velmi omezené a tím stále dochází k velkým ztrátám při používání současných reprodukčních technik.
Podstata vynálezu
Výše uvedené nedostatky odstraňuje použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů in vitro podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, ze se odebrané savčí oocyty kultivují v podmínkách ín vitro v kultivačním médiu s přídavkem specifického inhibitoru histon deacetylázy.
Použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média, podle vynálezu se dále vyznačují tím, že se odebrané dozrálé savčí oocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem inhibitoru histon deacetylázy po dobu 3 až 5 dnů, přičemž koncentrace inhibitoru histon deacetylázy v kultivačním médiu je 10 nM až 1 mikroM. Poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem, případně jsou přeneseny do čerstvě připraveného kultivačního média s inhibitorem pro kultivaci dalších 1 až 3 dnů.
Použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro se též vyznačuje tím, že se odebrané dozrálé savčí oocyty kultivují in vitro po dobu až 5 dnů s inhibitory histon deacetylázy, přičemž výhodná koncentrace inhibitoru histon deacetylázy v kultivačním médiu je 10 nM až 1 mikroM. Poté se po případném opláchnutí kultivačním médiem oocyty přenesou do čerstvě připraveného kultivačního média pro další běžné zpracování, jako jsou reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro podle vynálezu se výhodně provádí tak, že se savčí oocyty dozrálé do stadia metafáze 11 zbaví kumulámích buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou. Poté se propláchnou v kultivačním médiu (např. médium Ml99 obohacené o 10% hmot. bovinního telecího séra) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem molekul inhibujících histon deacetylázu (např. trichostatin A) v koncentracích od 1 do 1000 nM. V tomto médiu se oocyty kultivují po dobu 3 dnů. Pro další kultivaci je výhodné, aby po 3 dnech kultivace byly oocyty opláchnuty v čerstvě připraveném médiu obohaceném o vybraný inhibitor histon deacetylázy a následně byly
- 1 CZ 299271 B6 kultivovány v čerstvě připraveném médiu obohaceném o inhibitor histon deacetylázy. Po ukončení kultivace s cílem prodloužit životaschopnost oocytů jsou oocyty před dalším použitím propláchnuty v médiu bez aktivátoru a kultivovány běžným laboratorním postupem.
Původci vynálezu ověřili, že použitím inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média podle vynálezu jsou u oocytů kultivovaných po dlouhou dobu v podmínkách in vitro potlačeny procesy fragmentace a lýzy. Například při kultivaci v médiu s 10 nM trichostatinu A po dobu tři dnů nedochází u oocytů prasete vůbec k fragmentaci ani lýze, zatímco při kultivaci standardním způsobem dosahuje za stejnou dobu podíl fragmentovaných oocytů zhruba 25 % a podíl lyžovaných oocytů zhruba 10%. Výsledkem kultivace oocytů v přítomnosti inhibitorů histon deacetyláz je tedy eliminace nežádoucích procesů fragmentace a lýzy oocytů. Podíl oocytů, které si uchovávají životaschopnost, je tak podstatně vyšší.
Při in vitro oplození oocytů hospodářských zvířat (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplazmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla samice, nebo po kultivaci v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při zpoždění dodávky spermatu vybraného plemeníka, např. plemenného kance, býka, hřebce), odebrané oocyty rychle ztrácejí na své kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Následující nežádoucí škody v reprodukci savců jsou velké.
Rovněž při oplození oocytů člověka při léčbě neplodnosti metodami asistované reprodukce (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplazmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla budoucí matky, nebo jsou tyto oocyty získány po dozrání v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při potížích s odběrem spermatu potenciálního otce), oocyty rychle ztrácejí na kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození a tím i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Negativní následky jsou pak velmi citelné.
Z uvedeného jasně vyplývá, že použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média na prodloužení kultivace oocytů za současné inhibice histon deacetylázy podle vynálezu lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat (např. klonování, in vitro oplození, IVF, ICSI, transgenozi) i v asistované reprodukci v humánní medicíně, kdy při současném snižování porodnosti tato metoda zvláště nabývá na významu.
Při klonování savců obecně dochází ke vnášení jaderné dědičné informace somatické buňky do cytoplazmy oocytů, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Kvalita použitého oocytů významně ovlivňuje úspěšnost celého postupu klonování. Při náročném postupu přenosu jsou oocyty připravené pro klonování uchovávány v podmínkách in vitro. Přitom v nich ale samovolně probíhají procesy stárnutí, které poškozují odebraný oocyt. Pro následný vývoj embrya klonuje nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Pro takové dočasné uchovávání oocytů před enukleací nebo i pro uchovávání enukleovaných oocytů před vlastním přenosem jádra somatické buňky lze s výhodou použít média obohaceného o inhibitory histon deacetylázy. Původci vynálezu bylo zjištěno, že takto použité oocyty nebo cytoplasty (oocyty zbavené enukleací jaderné dědičné informace) jsou opět kvalitnější a embrya klonů, která jsou z nich vytvořena přenosem jader somatických buněk, jsou životaschopnější, než při dosud používaných postupech. To má pro budoucí vývoj v této oblasti dalekosáhlé možnosti využití.
Následující příklady provedení použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
. 7 .
Příklady provedení
Příklad 1
Dozrálé prasečí oocyty (400 oocytů) ve stadiu metafáze 11 byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o 10 nM inhibitoru histon deacetylázy trichostatinu A. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jej ich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez inhibitoru a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez inhibitoru histon deacetylázy, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru 70 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Při ověřování použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Příklad 2
Dozrálé lidské oocyty (17 oocytů) ve stadiu metafáze 11 byly kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o 10 nM inhibitoru histon deacetylázy trichostatinu A. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez inhibitoru a následně podrobeny obvyklým postupům potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty mají vyšší kvalitu a i vzniklá embrya jsou životaschopnější o cca 10% než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány bez inhibitoru histon deacetylázy trichostatinu A.
Příklad 3
Dozrálé prasecí oocyty (40 oocytů) ve stadiu metafáze 11 byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány v médiu obohaceném o 10 nM inhibitoru histon deacetylázy trichostatinu A. V tomto médiu byly drženy až do chvíle, kdy z nich byly enukleací připraveny cytoplasty pro následný přenos jader somatických buněk. Po přenosu jader do cytoplastů z takto ošetřených oocytů byl pozorován vývoj do stadia blastocyty v 18 % případů. Pokud byly oocyty nechány před přípra- | vou cytoplastů stejně dlouhou dobu bez inhibitoru histon deacetylázy trichostatinu A., jejich kvalita se zhoršila natolik, že je nebylo možné pro klonování použít v důsledku vysoké náchylnosti k fragmentaci (zániku programovanou smrtí - apoptózou).
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro za současné inhibice histon deacetylázy, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat i v asistované reprodukci v humánní medicíně.
Vysvětlení zkratek použitých v textu:
HDA histon deacetyláza 5 TSA trichostatin A
IVF in vitro oplodnění (in vitro fertization)
SCSI intracytoplazmatická injekce spermie (intra cytoplazmic sperm injection)
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY15 1. Použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, kdy se odebrané savčí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivačním médiu s přídavkem specifického inhibitoru histon deacetylázy.
- 2. Použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média, podle nároku 1, kdy20 se odebrané dozrálé savčí oocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem inhibitoru histon deacetylázy po dobu 3 až 5 dnů, přičemž koncentrace inhibitoru histon deacetylázy v kultivačním médiu je 10 nM až 1 mikroM, poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem, případně jsou přeneseny do čerstvě připraveného kultivačního média s inhibitorem pro kultivaci dalších 1 až 3 dnů.
- 3. Použití inhibitoru histon deacetylázy pro přípravu kultivačního média, podle nároku 1, kdy se odebrané dozrálé savčí oocyty kultivují in vitro po dobu až 5 dnů s inhibitory histon deacetylázy, přičemž výhodná koncentrace inhibitoru histon deacetylázy v kultivačním médiu je 10 nM až 1 mikroM, poté se po případném opláchnutí kultivačním médiem oocyty přenesou do čerstvě30 připraveného kultivačního média pro další běžné zpracování.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070197A CZ299271B6 (cs) | 2007-03-14 | 2007-03-14 | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070197A CZ299271B6 (cs) | 2007-03-14 | 2007-03-14 | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2007197A3 CZ2007197A3 (cs) | 2008-06-04 |
| CZ299271B6 true CZ299271B6 (cs) | 2008-06-04 |
Family
ID=39456548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20070197A CZ299271B6 (cs) | 2007-03-14 | 2007-03-14 | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ299271B6 (cs) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ302912B6 (cs) * | 2009-08-10 | 2012-01-18 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
| CZ302925B6 (cs) * | 2009-08-10 | 2012-01-18 | Výzkumný ústav živocišné výroby, v. v. i. | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6376508B1 (en) * | 2000-12-13 | 2002-04-23 | Academia Sinica | Treatments for spinal muscular atrophy |
| WO2005121321A2 (en) * | 2004-05-17 | 2005-12-22 | The General Hospital Corporation | Compositions comprising female germline stem cells and methods of use thereof |
-
2007
- 2007-03-14 CZ CZ20070197A patent/CZ299271B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6376508B1 (en) * | 2000-12-13 | 2002-04-23 | Academia Sinica | Treatments for spinal muscular atrophy |
| WO2005121321A2 (en) * | 2004-05-17 | 2005-12-22 | The General Hospital Corporation | Compositions comprising female germline stem cells and methods of use thereof |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Fenic I. et al.: "In vivo effects of histone-deacetylase inhibitor trichostatin-A on murine spermatogenesis", J. Androl., Vol. 25(5), 811-818, 2004 * |
| Mizukami . et al.: "Effects of Trichostatin A, a Histone Deacetylase Inhibitor, on Mouse Gonadal Development in vitro", Journal of Reproduction and Development, Vol. 50(2), 227-235, 2004 * |
| Quiang Wang et al.: "Histone Deacetylation is Required for Orderly Meiosis), Cell Cycle, Vol. 5(7), 766-774, 2006 * |
| Rybouchkin A. et al.: "Role of Histone Acetylation in Reprogramming of Somatic Nuclei Following Nuclear Transfer", Biology of Reproduction, Vol. 74, 1083-1089, 2006 * |
| Xu J. et al.: "96 Trichostatin A improved the quality of rabbit nuclear transfer embryos", Reproduction, Fertility and Development, Vol. 19(1), 165, 2006 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ302912B6 (cs) * | 2009-08-10 | 2012-01-18 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
| CZ302925B6 (cs) * | 2009-08-10 | 2012-01-18 | Výzkumný ústav živocišné výroby, v. v. i. | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2007197A3 (cs) | 2008-06-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018109958A (ru) | Культуральная среда | |
| JP5439677B2 (ja) | 透明帯が菲薄化又は除去された哺乳動物卵又は胚を調製するための方法及び培地、該方法により調製された哺乳動物卵を用いた受精方法 | |
| Al-Ghadi et al. | The in vitro development of cloned sheep embryos treated with scriptaid and trichostatin (A) | |
| CZ299271B6 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| Parmar et al. | Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and its applications in veterinary sciences: An overview | |
| CZ297528B6 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2010579A3 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| CN117925511A (zh) | 提高经体细胞复制的卵子的胚胎发育或胚胎形成的效率的方法 | |
| CZ2007763A3 (cs) | Použití inhibitoru proteasomu pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ302912B6 (cs) | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ302925B6 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2014230A3 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ299219B6 (cs) | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro | |
| CZ26979U1 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Mohshina et al. | Effects of Different Co-Culture on Bovine In Vitro Embryo Production: An Overview | |
| KR102027561B1 (ko) | 실라짓 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 체외수정용 배지 조성물 및 이를 이용한 체외수정 방법 | |
| CZ2018351A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| KR101169762B1 (ko) | 신규한 난모세포 매개된 유전자 이식 방법 및 그를 통한 형질전환 배아 생산방법 | |
| CZ2018344A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| Parnpai | Production of cloned embryos in buffalo | |
| CZ2018320A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem B | |
| US20180353209A1 (en) | Novel supplement for cultivation of mammalian embryos | |
| CZ308182B6 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S | |
| Lalaji | Cell Cycle Synchronization of Buffalo Fibroblasts and Effect of Reprogramming Times on Developmental Competence of Intra and Inter Species Hand Made Cloned Embryos |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20140314 |